JP2015096488A - Method for inhibiting production of advanced glycation endproducts - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、クリルオイルの新たな有効な利用法としての終末糖化物質生成抑制方法に関する。 The present invention relates to a method for inhibiting the production of a saccharified terminal substance as a new effective use of krill oil.
クリルオイル（Ｋｒｉｌｌ−Ｏｉｌ）は、海中に生息するプランクトンの一種である南極オキアミから得られる有益な油脂である。このクリルオイルは、ω−３系脂肪酸であるＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）やＥＰＡ（アイコサペンタエン酸）を含むリン脂質、アスタキサンチンなどを含むため、高い健康増進機能が期待される。実際のところ、その有益性に関し、世界中で動脈硬化、女性の更年期障害、月経前症候群、抗炎症作用などについての報告がなされている。 Krill-Oil is a beneficial oil obtained from Antarctic krill, a type of plankton that inhabits the sea. Since this krill oil contains phospholipids and astaxanthin containing omega-3 fatty acids such as DHA (docosahexaenoic acid) and EPA (eicosapentaenoic acid), a high health promotion function is expected. As a matter of fact, there are reports on arteriosclerosis, women's menopause, premenstrual syndrome, anti-inflammatory effects, etc. around the world regarding its benefits.
なお、現在の食生活では、ω−６系脂肪酸（トウモロコシ油、ごま油など）が過剰になり、ω−３系脂肪酸（魚油、しそ油、亜麻仁油など）が不足していることが指摘されている。また、青魚の魚油に含まれているＥＰＡやＤＨＡは通常、トリグリセリドと結合しているので流動性があるものの、高度不飽和脂肪酸となるので酸化されやすい、という弱点がある。 In addition, it has been pointed out that in the current diet, omega-6 fatty acids (corn oil, sesame oil, etc.) are excessive and omega-3 fatty acids (fish oil, perilla oil, flaxseed oil, etc.) are insufficient. Yes. In addition, EPA and DHA contained in fish oil of blue fish usually have fluidity because they are combined with triglycerides, but they have a weak point that they are easily oxidized because they are highly unsaturated fatty acids.
これに対し、クリルオイルは、従来のトリグリセリド結合型に加え、リン脂質結合型のω−３系脂肪酸を含むため、ω−３系脂肪酸（ＥＰＡ、ＤＨＡ）の吸収が魚油と比較して２倍以上であるという報告があり、より多くの可能性が期待されている。 In contrast, krill oil contains phospholipid-linked omega-3 fatty acids in addition to the conventional triglyceride-linked type, so absorption of omega-3 fatty acids (EPA, DHA) is twice that of fish oil. There are reports that this is the case, and more possibilities are expected.
特許文献１や特許文献２には、オキアミ油を含む薬品がコレステロールやＬＤＬ（低密度リポたんぱく質）を低下させることが記載されている。また、特許文献１や特許文献２、特許文献３には、オキアミ油がサイトカインと呼ばれる生理活性物質の一種であるＩＬ（インターロイキン、ＩｎｔｅｒＬｅｕｋｉｎ）−１やＩＬ−８を抑制することによって、関節炎の緩和に寄与することが報告されている。特許文献４には、抗酸化作用のあるポリフェノール類との組み合わせおよびカロティノイド、トコフェロール類との組み合わせでのＩＬ−１の抑制が報告されている。 Patent Documents 1 and 2 describe that chemicals containing krill oil lower cholesterol and LDL (low density lipoprotein). In Patent Document 1, Patent Document 2, and Patent Document 3, krill oil suppresses IL (Interleukin) -1 and IL-8, which are types of physiologically active substances called cytokines, thereby preventing arthritis. It has been reported to contribute to mitigation. Patent Document 4 reports suppression of IL-1 in combination with polyphenols having an antioxidative action and in combination with carotenoids and tocopherols.
前述のようにクリルオイルには、サイトカインの一つであるＩＬ−１の抑制が知られている。しかしながら、このＩＬ−１の抑制だけであれば、前述の特許文献４に示されるように抗酸化作用のあるポリフェノール類との組み合わせ、カロティノイド、トコフェロール類との組み合わせでも達成されるので、必ずしもクリルオイルを使用する必要はない。 As described above, krill oil is known to suppress IL-1 which is one of cytokines. However, if only suppression of IL-1 is achieved, as shown in the aforementioned Patent Document 4, it is also achieved by a combination with an antioxidant polyphenol, a carotenoid, and a tocopherol, so that it is not always krill oil. There is no need to use.
本発明者らは、クリルオイルの新たな有効な利用法として、終末糖化物質生成抑制方法を提供することを目的とする。クリルオイルの供給によって、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンの生成が抑制されることが分かったからである。 The present inventors have aimed to provide a method for inhibiting the production of advanced glycation substances as a new effective method for using krill oil. The supply of krill oil suppresses the formation of carboxymethyllysine in the blood with a decrease in the concentration of PAF-AH, LDL-cholesterol, total cholesterol and malondealdehyde in the blood and an increase in the concentration of HDL-cholesterol. Because it was understood.
上記目的を達成するため、本発明は、高脂肪、高ショ糖摂取によって生じる終末糖化物質の生成を抑制する終末糖化物質生成抑制方法であって、５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制することを特徴とする。特に、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することが好ましい。 In order to achieve the above object, the present invention is a method for inhibiting the production of a terminal glycated substance that suppresses the production of a terminal glycated substance caused by intake of high fat and high sucrose, and comprises a predetermined amount of 5.0% by weight of krill oil, A terminal glycated substance that is supplied continuously for 14 weeks and contains carboxymethyllysine in the blood with decreased concentrations of PAF-AH, LDL-cholesterol, total cholesterol and malondealdehyde in blood and increased concentrations of HDL-cholesterol It is characterized by suppressing the generation of. In particular, it is preferable to supply a 0.5 mass% lingonberry aqueous solution simultaneously with the supply of krill oil.
なお、「高脂肪、高ショ糖摂取」とは、現代人の食事状況を表し、現代人の食生活で陥りやすい甘いものや炭水化物、脂肪の過剰摂取の状態を表す。通常、メタボリックシンドロームなどと称される。また、ジャンクフードの摂取や過栄養状態を表す。 Note that “high fat, high sucrose intake” represents a dietary state of modern people, and represents a state of excessive intake of sweets, carbohydrates, and fats that easily fall into the modern human diet. Usually referred to as metabolic syndrome. It also represents junk food intake and overnutrition.
本発明に係る終末糖化物質生成抑制方法では、５．０重量％のクリルオイルを所定量供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制する。終末糖化物質（ＡＧＥｓ：非酵素的にたんぱく質と糖質が反応してできる老化物質）であるカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）の生成を抑制することで、生体の老化抑制効果が期待できる。具体的には、老人班、老化性のシミ、そばかすなどの発現抑制、肝臓や血液中のマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）濃度の抑制効果により、生体内の過酸化を抑制し、老化抑制効果が期待できる。 In the method for inhibiting the production of glycated end product according to the present invention, a predetermined amount of 5.0% by weight of krill oil is supplied, the concentration of PAF-AH, LDL-cholesterol, total cholesterol and malondealdehyde in blood is decreased, and HDL- Along with the increase in cholesterol concentration, the production of terminal glycated substances including carboxymethyllysine in blood is suppressed. By suppressing the production of carboxymethyllysine (CML), which is a terminal glycation substance (AGEs: an aging substance formed by a non-enzymatic reaction between a protein and a sugar), an antiaging effect of the living body can be expected. Specifically, it is expected to suppress peroxidation in the body and suppress aging by suppressing the expression of geriatric groups, aging spots, freckles, etc., and suppressing the concentration of malondealdehyde (MDA) in the liver and blood. it can.
なお、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することが好ましい。後述する実施例にて示すように、クリルオイルのみに比べてクリルオイルとリンゴンベリーとの併用であっても同様な効果が期待できるからである。なお、このリンゴンベリー水溶液は、リンゴンベリーのエキス抽出液であって、有効成分としてのレスベラトロールを３５重量％含んでいる。 In addition, it is preferable to supply 0.5 mass% lingonberry aqueous solution simultaneously with the supply of krill oil. This is because, as shown in the examples described later, the same effect can be expected even with the combined use of krill oil and lingonberry compared to krill oil alone. In addition, this lingonberry aqueous solution is an extract extract of lingonberry and contains 35% by weight of resveratrol as an active ingredient.
クリルオイルは、前述のように主に南氷洋で取れる南極オキアミから得られ、不飽和脂肪酸の多くがリン脂質と結合している油脂（リン脂質結合型）である。クリルオイルは、青魚の油として知られるＥＰＡとＤＨＡ、抗酸化物質であるアスタキサンチンを豊富に含む。生活習慣病の予防や脳の活性化、月経前症候群（ＰＭＳ）女性の更年期障害、月経前症候群、抗炎症作用の改善に効果があると報告されている。なお、南極オキアミは、動物プランクトンの一種で、最も大型な種において体長が５〜６ｃｍ、体重が１〜２ｇにまで成長する。南極オキアミは、クジラをはじめとする様々な生物に捕食され、南極海の生態系を支える重要な役割を担っている。 As described above, krill oil is an oil (phospholipid-binding type) obtained from Antarctic krill, which can be obtained mainly in the Southern Ocean, and in which many unsaturated fatty acids are bound to phospholipids. Kuril oil is rich in EPA and DHA, known as blue fish oil, and astaxanthin, an antioxidant. It has been reported to be effective in preventing lifestyle-related diseases, activating the brain, and improving menopause, premenstrual syndrome and anti-inflammatory effects in women with premenstrual syndrome (PMS). Antarctic krill is a kind of zooplankton and grows up to 5 to 6 cm in body length and 1 to 2 g in the largest species. Antarctic krill is preyed on by various organisms including whales and plays an important role in supporting the Antarctic ecosystem.
このクリルオイルに多量に含まれるω−３系脂肪酸と結合しているリン脂質は、細胞を構成する主要成分であり、細胞膜の機能で重要な役割を果たす。また、細胞膜や細胞内膜を経由する物質の輸送にリン脂質が必須であるため、身体の細胞・組織・器官の機能は様々なリン脂質や脂肪酸の働きにより成り立っていると認められる。そして、このクリルオイルは、ＩＬ−１β関連のみならず、ＴＮＦ−αといったサイトカイン及びＰＡＦ−ＡＨといったサイトカイン様作用をもつ物質の抑制効果を有し、合計３種類のサイトカインを抑制することで慢性炎症の抑制効果を得ることができる。 The phospholipid combined with the omega-3 fatty acid contained in a large amount in the krill oil is a main component constituting the cell and plays an important role in the function of the cell membrane. In addition, since phospholipids are essential for the transport of substances through cell membranes and intracellular membranes, it is recognized that the functions of the body's cells, tissues, and organs are composed of various phospholipids and fatty acids. This krill oil has an inhibitory effect on not only IL-1β-related substances but also cytokines such as TNF-α and cytokine-like substances such as PAF-AH, and chronic inflammation is suppressed by suppressing a total of three types of cytokines. Can be suppressed.
なお、サイトカインとは、細胞から放出され、種々の細胞間情報伝達分子となる微量生理活性タンパク質であり、通常低分子量（分子量は８万以下、３万以下が多数）で、糖鎖を持つものが多い。体液を通って細胞表面の高親和性受容体などに結合し、多面的な生物活性を発現する。 Cytokines are small amounts of physiologically active proteins that are released from cells and become various intercellular signal transduction molecules, and usually have low molecular weights (molecular weights of 80,000 or less, 30,000 or less) and sugar chains. There are many. It binds to high affinity receptors on the cell surface through body fluids and expresses multifaceted biological activities.
これらのサイトカインの作用は、免疫、炎症に関係したものが多く知られ、細胞の増殖、分化、細胞死、あるいは創傷治癒など作用は多様（多面的生物活性）であり、異なる構造のサイトカインにおいて共通の活性を示すことがある（重複性作用）。様々な細胞内シグナル伝達経路をへて、細胞のＤＮＡやＲＮＡ、タンパク質合成のパターンを変化させ、細胞の働きを変えることが知られるが、解明されていない部分も非常に多い。 Many of the actions of these cytokines are related to immunity and inflammation, and the actions such as cell proliferation, differentiation, cell death, or wound healing are diverse (multifaceted biological activity), and are common among cytokines with different structures. May show activity (redundant effect). It is known to change the cell's DNA, RNA, and protein synthesis patterns through various intracellular signal transduction pathways and change the cell's function, but there are many unexplained parts.
これらのサイトカインのうち、後述する実施例（実験例１〜実験例５）で抑制作用を測定したサイトカインについて説明する。 Among these cytokines, the cytokines whose inhibitory action was measured in Examples (Experimental Examples 1 to 5) described later will be described.
＜ＩＬ−１（インターロイキン−１、ＩｎｔｅｒＬｅｕｋｉｎ−１）＞
ＩＬ−１は、サイトカインとして一番先に同定され、後述する実験例では、その一つであるＩＬ−１βを用いた。
<IL-1 (Interleukin-1, InterLeukin-1)>
IL-1 was identified first as a cytokine, and in the experimental examples described later, one of them, IL-1β, was used.
＜ＴＮＦ−α（癌懐死因子または腫瘍壊死因子、Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ）＞
ＴＮＦ−αは、主にマクロファージにより産生され、固形がんに対して出血性の壊死を生じさせるサイトカインとして発見された。癌懐死因子または腫瘍壊死因子といえば一般にＴＮＦ−αを指していることが多い。
<TNF-α (cancer necrosis factor or tumor necrosis factor, Tumor Necrosis Factor)>
TNF-α is mainly produced by macrophages and was discovered as a cytokine that causes hemorrhagic necrosis for solid cancers. Speaking of cancer necrosis factor or tumor necrosis factor generally refers to TNF-α.
＜ＰＡＦ−ＡＨ（血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ、Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ−Ａｃｅｔｙｌｈｙｄｒｏｌａｓｅ＞
ＰＡＦ−ＡＨは、ヒト血漿由来の血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼである。サイトカインであるＰＡＦ（血小板凝集素活性化因子）を失活させる酵素として知られてきた。アテローム性動脈硬化症のほか、炎症性血管内皮細胞障害、ＣＶＤｓ（心血管障害）、慢性腎臓障害などに深く関与し、ＰＡＦ−ＡＨの上昇抑制により、これらの障害に対する抑制や改善に相関があると認められている。
<PAF-AH (platelet agglutinin activator acetylhydrolase, Platelet Activating Factor-Acetylhydrolase>
PAF-AH is a platelet agglutinin activator acetylhydrolase derived from human plasma. It has been known as an enzyme that inactivates the cytokine PAF (platelet agglutinin activator). In addition to atherosclerosis, it is deeply involved in inflammatory endothelial cell disorders, CVDs (cardiovascular disorders), chronic kidney disorders, etc., and there is a correlation between suppression and improvement of these disorders by suppressing the increase in PAF-AH It is recognized.
＜ＣＭＬ（カルボキシメチルリジン、Ｃａｒｂｏｘｙ（Ｍｅｔｈｙｌ）Ｌｙｓｉｎｅ）＞
ＣＭＬは、ＡＧＥ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、タンパク質への糖の非酵素的付加反応によって形成される終末糖化物質の総称）の主要な構造体の一つで、加齢とともに体内に蓄積され、この反応（ＡＧＥ化）がタンパク質を変性させ、機能を低下させるため、老化の一因子と考えられている。老化に伴う蓄積は、血管などの組織の硬化の一因とされ、皮膚の老化にも関与すると考えられている。
<CML (Carboxymethyllysine, Carboxy (Methyl) Lysine)>
CML is one of the main structures of AGE (Advanced Glycation End Products, a generic term for advanced glycation substances formed by non-enzymatic addition reaction of sugars to proteins). (AGE) is considered to be a factor of aging because it denatures proteins and lowers function. Accumulation associated with aging is considered to contribute to hardening of tissues such as blood vessels, and is also considered to be involved in skin aging.
終末糖化物質（ＡＧＥｓ（蛍光終末糖化物質））は、タンパク質の糖化反応（メイラード反応）によってつくられる。ＡＧＥｓが人類の身体のさまざまな老化に共通の物質（より正確に言えば、生体化学反応による生成物）として関わっていることがわかってきた。現在、数十種類もの化合物がＡＧＥｓとして知られている。 Terminal saccharification substances (AGEs (fluorescent terminal saccharification substances)) are produced by protein saccharification reaction (Maillard reaction). It has been found that AGEs are involved as substances common to various aging of the human body (more precisely, products from biochemical reactions). At present, dozens of kinds of compounds are known as AGEs.
クリルオイルは、ω−３系脂肪酸の一種であるＤＨＡやＥＰＡ、抗酸化物質であるアスタキサンチンが豊富に含まれているため、生活習慣病の予防・改善効果、女性特有の悩みを改善する効果、心疾患を予防する効果等の働きが期待され、既に研究されている。ＤＨＡやＥＰＡは、海中のような低温の環境でも固まることがなく、例えば、魚油は−４０℃でも液体のままである。ＥＰＡには、血管壁の細胞膜を柔らかくする働きがあり、血流を改善する効果がある。また、勢いよく血液が流れても血圧が高くなるのを防ぐ働きがある。同時に赤血球の細胞膜も柔らかくするため、血流が改善され血液がサラサラの状態になる。このようなＤＨＡやＥＰＡは、血流や血管の健康を守る力を持っている。 Kuril oil is rich in DHA and EPA, which are a kind of omega-3 fatty acids, and astaxanthin, an antioxidant, so it can prevent and improve lifestyle-related diseases, improve women's specific concerns, Expected to be effective in preventing heart disease, etc., and has already been studied. DHA and EPA do not harden even in a low temperature environment such as in the sea. For example, fish oil remains liquid even at −40 ° C. EPA has the effect of softening the cell membrane of the blood vessel wall, and has the effect of improving blood flow. In addition, even if blood flows vigorously, it works to prevent blood pressure from increasing. At the same time, the cell membrane of red blood cells is softened, improving blood flow and making the blood smooth. Such DHA and EPA have the power to protect blood flow and blood vessel health.
本発明では、クリルオイルの単体使用ばかりでなく、リンゴンベリー（Ｌｉｎｇｏｎ ｂｅｒｒｙ、ＬＢ）等の抗酸化物質を併用してもよい。抗酸化物質としてリンゴンベリー（ＬＢ）に限らず、ポリフェノール類としてブルーベリー類、アロニア、アサイ、黒豆皮、カシス、ブドウ種子、ブドウ皮、椿の花などの抽出物、フラボノイド類としてフランス海岸松などの松類の木皮や樹液抽出物、カテキン類として茶葉、柿類の抽出物、カロティノイド類としてアスタキサンチン、フコキサンチン、ゼアキサンチン、ルテインなどの動植物抽出カロティノイド類、ビタミンＡ、ＣおよびビタミンＥに代表されるトコフェロール類、ビタミンＢ２、葉酸、クロロフィルなどの抗酸化物質等を用いてもよい。また、クリルオイルと抗酸化物質との混合割合としては、クリルオイルに対して０．００１％〜５０％の配合であって、より好ましくは０．０１％〜１０％の配合が好ましい。 In the present invention, not only krill oil alone but also an antioxidant such as lingon berry (LB) may be used in combination. Antioxidants are not limited to Lingonberry (LB), polyphenols such as blueberries, aronia, acai, black bean hulls, cassis, grape seeds, grape skins, camellia flowers, and flavonoids such as French coastal pine Tomatopherols represented by pine bark and sap extract, tea leaves as catechins, extracts of moss, carotenoids such as astaxanthin, fucoxanthin, zeaxanthin, lutein, carotenoids such as vitamin A, C and vitamin E , Antioxidants such as vitamin B2, folic acid, chlorophyll and the like may be used. The mixing ratio of krill oil and antioxidant is 0.001% to 50%, more preferably 0.01% to 10%, based on krill oil.
以下に示す実験例１〜５は、大連医科大学（中国）中日合作医薬科学研究所に依頼して行ったものであり、試験報告書及び同訳文を上申書に添付した。 Experimental Examples 1 to 5 shown below were carried out by requesting the China-Japan Collaborative Research Institute for Pharmaceutical Sciences, Dalian University of Medicine (China), and a test report and a translation were attached to the written application.
［実験例１］
標準コントロール、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）、ＨＦＨＳ＋クリルオイル（ＫＯ）又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ（リンゴンベリー）を１４週間に亘って与えた各群のラット（Ｒａｔ）の体重（ｇ）、給餌量（ｇ）、飲水量（ｍｌ）、体重１００ｇ当たりの肝臓重量（ｇ）、体重１００ｇ当たりの後腹壁脂肪重量（ｇ）について群間比較した。詳細な実験条件については、後述する。その結果を表１に示した。
[Experimental Example 1]
Body weight (g) and food consumption (g) ), Drinking water (ml), liver weight (g) per 100 g body weight, and retroabdominal wall fat weight (g) per 100 g body weight. Detailed experimental conditions will be described later. The results are shown in Table 1.
なお、表１中のａ、ｂ、ｃは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロール群に対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
ｃ：ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に対して有意差が認められる。
In Table 1, a, b, and c mean the following matters. Moreover, it is the statistical significance difference p <0.05 of each experimental group (n = 10).
a: Significant difference is recognized with respect to the standard control group.
b: A significant difference is recognized with respect to the HFHS group.
c: Significant difference is observed with respect to the HFHS + KO group.
上記表１より明らかなように、実験終了（１４週間後）時の体重は、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群（ＨＦＨＳのみの群、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群）で増加していた。また、ＨＦＨＳのみの群に対し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で体重が増加していた。 As is clear from Table 1 above, the body weight at the end of the experiment (after 14 weeks) was increased in all HFHS groups (HFHS only group, HFHS + KO group and HFHS + KO + LB group) as compared with the standard control group. In addition, the body weight was increased in the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group as compared with the HFHS only group.
給餌量（１日当たり）は、すべての群で有意な差がなかった。 Feeding amount (per day) was not significantly different in all groups.
飲水量（１日当たり）は、ＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が他群と比較して有意に少なかった。これは、ＬＢ抽出物の０．５％水溶液を飲水としたことによるものと考えられる。 Water consumption (per day) was significantly less in the HFHS + KO + LB group than in the other groups. This is considered due to the fact that 0.5% aqueous solution of LB extract was used as drinking water.
体重に対する肝臓重量は、すべての群で有意な差がなかった。ただし、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で他の群より少ない傾向があった。 Liver weight relative to body weight was not significantly different in all groups. However, the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group tended to be less than the other groups.
体重に対する後腹壁蓄積脂肪は、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群で有意に増加していた。ただし、ＨＦＨＳのみの群と比較し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で有意に低い値を示した。 The abdominal wall accumulated fat relative to body weight was significantly increased in all HFHS groups compared to the standard control group. However, the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly lower values compared to the HFHS only group.
これらの結果より、ＨＦＨＳ群に対し、クリルオイル（ＫＯ）を供給したことにより、内臓脂肪の付着が抑制されていると考えられる。 From these results, it is considered that the adhesion of visceral fat is suppressed by supplying krill oil (KO) to the HFHS group.
［実験例２］
標準コントロール、ＨＦＨＳ、ＨＦＨＳ＋ＫＯ又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢを１４週間与えたＲａｔの各群において、血液生化学性状に与える影響を群間比較した。
[Experiment 2]
In each group of Rats given standard control, HFHS, HFHS + KO or HFHS + KO + LB for 14 weeks, the effects on blood biochemical properties were compared between groups.
測定項目は、尿酸（ＵＡ）、グルコース（ＧＬＵ）、インスリン（ＩＮＳ）、中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、ＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）、ＬＤＬコレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）、マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）、インターロイキン−１ベーター（ＩＬ−１β）、癌懐死因子−α（ＴＮＦ−α）、血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）、蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）であり、その結果を表２及び図１，２に示した。 Measurement items are uric acid (UA), glucose (GLU), insulin (INS), neutral fat (TG), total cholesterol (T-CHO), HDL-cholesterol (HDL-CHO), LDL cholesterol (LDL-CHO) , Malondealdehyde (MDA), interleukin-1 beta (IL-1β), cancer necrosis factor-α (TNF-α), platelet agglutinin activator acetylhydrolase (PAF-AH), carboxymethyllysine (CML) ), Fluorescent terminal glycated substances (AGEs), and the results are shown in Table 2 and FIGS.
なお、表２中のａ、ｂ、ｃは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロール群に対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
ｃ：ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に対して有意差が認められる。
In Table 2, a, b, and c mean the following matters. Moreover, it is the statistical significance difference p <0.05 of each experimental group (n = 10).
a: Significant difference is recognized with respect to the standard control group.
b: A significant difference is recognized with respect to the HFHS group.
c: Significant difference is observed with respect to the HFHS + KO group.
上記表２、図１、２より各測定項目について、以下のことが明らかになった。 From Table 2 and FIGS. 1 and 2, the following became clear for each measurement item.
ＵＡ（尿酸）、ＧＬＵ（グルコース）、ＩＮＳ（インスリン）については、すべての群で有意な差を認めなかった。 For UA (uric acid), GLU (glucose), and INS (insulin), no significant difference was observed in all groups.
中性脂肪（ＴＧ）については、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群はすべて有意に上昇していた。しかし、ＨＦＨＳのみの群と比較し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群で低い傾向があった。 For triglyceride (TG), all HFHS groups were significantly elevated compared to the standard control group. However, compared with the HFHS-only group, there was a low tendency in the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group.
総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）については、標準コントロール群との比較でＨＦＨＳのみの群が有意に上昇した。標準コントロール群と比較し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢは有意な差がなく、むしろ減少傾向が認められた。 As for total cholesterol (T-CHO), the HFHS-only group significantly increased compared to the standard control group. Compared with the standard control group, the HFHS + KO group and HFHS + KO + LB were not significantly different, but rather decreased.
ＨＤＬ−コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）については、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に高い値を示した。標準コントロール群との比較では有意差がなかった。しかし、標準コントロール群より多少、高い傾向を示した。 Regarding HDL-cholesterol (HDL-CHO), the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly higher values compared to the HFHS-only group. There was no significant difference in comparison with the standard control group. However, it was slightly higher than the standard control group.
ＬＤＬ−コレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）については、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。標準コントロール群との比較では有意差が認められず、仮に認められてもわずかであった。 Regarding LDL-cholesterol (LDL-CHO), the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly lower values compared to the HFHS-only group. In comparison with the standard control group, no significant difference was observed, and even if it was recognized, it was slight.
マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）については、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。 As for malondealdehyde (MDA), the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly lower values compared to the HFHS only group. However, in comparison with the standard control group, the value was significantly higher.
また、サイトカイン（炎症起因物質）に対する抑制効果は、以下の通りである。 Moreover, the inhibitory effect with respect to cytokine (inflammatory substance) is as follows.
インターロイキン−１ベーター（ＩＬ−１β）については、ＭＤＡと同じ傾向であった。すなわち、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。 About interleukin-1 beta (IL-1β), it was the same tendency as MDA. That is, the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly lower values compared to the HFHS only group. However, in comparison with the standard control group, the value was significantly higher.
癌懐死因子−α（ＴＮＦ−α）については、ＭＤＡおよびＩＬ−１βと同様な傾向であった。すなわち、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。 Cancer necrosis factor-α (TNF-α) was similar to MDA and IL-1β. That is, the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly lower values compared to the HFHS only group. However, in comparison with the standard control group, the value was significantly higher.
血小板凝集素活性化因子アセチルヒドロラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）については、他のサイトカインと同様な傾向であった。すなわち、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。さらに、ＨＦＨＳ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ群よりＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が有意に低い値を示した。しかし、標準コントロール群との比較では、有意に高い値を示した。 The platelet agglutinin activator acetylhydrolase (PAF-AH) had the same tendency as other cytokines. That is, the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group showed significantly lower values compared to the HFHS only group. Furthermore, the HFHS + KO + LB group showed a significantly lower value than the HFHS group and the HFHS + KO group. However, in comparison with the standard control group, the value was significantly higher.
これら得られたサイトカインの値から、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）によって生じる全身的な炎症は、クリルオイル（ＫＯ）が供給されることにより、ＩＬ−１βばかりでなく、炎症に関与するあらゆるサイトカインが抑制されることを通じて抑えられる、と考えることができる。 From these obtained cytokine values, systemic inflammation caused by a high-fat, high-sucrose diet (HFHS) is not limited to IL-1β, but is associated with inflammation due to the supply of krill oil (KO). It can be considered that cytokines are suppressed through suppression.
さらに、カルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）の血中における変化は、ＨＦＨＳ群のすべてで標準コントロール群よりも有意に高い値を示し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群が、ＨＦＨＳのみの群との比較で有意に低い値を示した。一方、蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）においては、すべての群で有意な変化がなかった。すなわち、本実験例２においては、ＣＭＬが生体内で産生される程度の障害が生じたが、蛍光ＡＧＥｓが生体内で産生されるまでの重度の障害は生じていなかったと推察される。 Furthermore, changes in the blood of carboxymethyllysine (CML) were significantly higher in all HFHS groups than in the standard control group, and the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group were significantly lower compared to the HFHS only group. The value is shown. On the other hand, there was no significant change in the fluorescent end glycated substances (AGEs) in all groups. That is, in this Experimental Example 2, it is inferred that although there was a failure to the extent that CML was produced in vivo, there was no severe failure until fluorescent AGEs were produced in vivo.
ＣＭＬ及び蛍光終末糖化物質（ＡＧＥｓ）の生成は、一概にはいえないものの、蛍光ＡＧＥｓが産生される前にＣＭＬが産生されると考えられている。これは、生体内防御作用により、まず、無毒化されたＡＧＥｓであると考えられるＣＭＬが優先的に作られ、次に処理できない過剰分が蛍光ＡＧＥｓとして産生されると考えられるからである。しかし、最近の研究において、透析患者の悪性化した患者の血液中に多量のＣＭＬが存在し、悪化と正の相関が認められていることから、血中のＣＭＬ上昇がＩＩ型糖尿病患者や慢性腎臓炎の障害のバロメーターとして利用することができる可能性がある。
また、ＣＭＬは非酵素的タンパク質と結合した終末糖化物質に含まれる。蛍光ＡＧＥｓも生化学的にＣＭＬと同様な部類に分類されるが、蛍光ＡＧＥｓが反応性の高いＧｌｙｃｅｒ−ＡＧＥｓである点でＣＭＬと相違する。ただし、ＣＭＬは、蛍光ＡＧＥｓが安定化することで産生される可能性も示唆されている。
Although generation of CML and fluorescent terminal glycation substances (AGEs) cannot be generally described, it is considered that CML is produced before fluorescent AGEs are produced. This is because CML, which is considered to be detoxified AGEs, is first produced preferentially by the in vivo defense action, and then the excess that cannot be processed is considered to be produced as fluorescent AGEs. However, in recent studies, a large amount of CML is present in the blood of dialysis patients who have become malignant, and a positive correlation with deterioration has been observed. It may be used as a barometer for nephritis disorders.
Moreover, CML is contained in the terminal glycation substance couple | bonded with the nonenzymatic protein. Fluorescent AGEs are also biochemically classified into the same class as CML, but differ from CML in that fluorescent AGEs are highly reactive Glycer-AGEs. However, it is suggested that CML may be produced by stabilizing fluorescent AGEs.
［実験例３］
標準コントロール、ＨＦＨＳ、ＨＦＨＳ＋ＫＯ又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢを１４週間与えたＲａｔの各群において、肝臓と脳に与える影響を群間比較した。測定項目は、ＴＧ（中性脂肪）、Ｔ−ＣＨＯ（総コレステロ−ル）、およびＭＤＡ（マロンデアルデヒド）である。その結果を表３及び図３に示した。
[Experiment 3]
In each group of Rats given standard control, HFHS, HFHS + KO or HFHS + KO + LB for 14 weeks, the effects on the liver and brain were compared between the groups. Measurement items are TG (neutral fat), T-CHO (total cholesterol), and MDA (malondealdehyde). The results are shown in Table 3 and FIG.
なお、表３中のａ、ｂは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロールに対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
In Table 3, a and b mean the following matters. Moreover, it is the statistical significance difference p <0.05 of each experimental group (n = 10).
a: Significant difference is recognized with respect to the standard control.
b: A significant difference is recognized with respect to the HFHS group.
上記表３及び図３より明らかなように、肝臓中の中性脂肪（ＴＧ）は、標準コントロール群と比較し、すべてのＨＦＨＳ群はすべて有意に上昇していた。しかし、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）は、ＨＦＨＳのみの群が他の群と比較し、有意に高い値を示した。 As apparent from Table 3 and FIG. 3, the neutral fat (TG) in the liver was significantly increased in all HFHS groups as compared with the standard control group. However, total cholesterol (T-CHO) was significantly higher in the HFHS-only group than in the other groups.
マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）においては、肝臓における群間比較において、ＨＦＨＳのみの群が他の群と比較し、有意に高い値を示した。一方、脳における群間比較においては、有意差が認められなかった。 In the case of malondealdehyde (MDA), in the comparison between groups in the liver, the group containing only HFHS showed a significantly higher value than the other groups. On the other hand, no significant difference was found in comparison between groups in the brain.
したがって、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）に対し、クリルオイル（ＫＯ）が供給されることにより、肝臓中のＴ−ＣＨＯの上昇を抑制するとともに、肝臓の過酸化を抑制していると考えることができる。なお、脳内の過酸化に対する影響は認められない。 Therefore, it is considered that the supply of krill oil (KO) to the high fat high sucrose diet (HFHS) suppresses the increase of T-CHO in the liver and suppresses the peroxidation of the liver. be able to. There is no effect on peroxidation in the brain.
［実験例４］
標準コントロール、ＨＦＨＳ又はＨＦＨＳ＋ＫＯを１４週間与えたＲａｔの各群において、脳の構成脂肪酸に与える影響を群間比較し、その結果を表４に示した。
[Experimental Example 4]
In each group of Rats given standard control, HFHS or HFHS + KO for 14 weeks, the effects on brain constituent fatty acids were compared between groups, and the results are shown in Table 4.
なお、表４中のａ、ｂは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロールに対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
In Table 4, a and b mean the following matters. Moreover, it is the statistical significance difference p <0.05 of each experimental group (n = 10).
a: Significant difference is recognized with respect to the standard control.
b: A significant difference is recognized with respect to the HFHS group.
上記表４より、脳の構成脂肪酸は、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群で、標準コントロール群又はＨＦＨＳのみの群に対して有意差が認められることが分かる。特徴的なのは、パルミトオレイン酸（Ｃ１６：１）が有意に上昇し、アラキドン酸（Ｃ２２：６）が有意に低下していたことである。したがって、摂取する油脂の違いによって、脳内の構成脂肪酸が変化することが認められた。 From Table 4 above, it can be seen that the fatty acids constituting the brain are significantly different in the HFHS + KO group from the standard control group or the group containing only HFHS. Characteristically, palmitooleic acid (C16: 1) was significantly increased and arachidonic acid (C22: 6) was significantly decreased. Therefore, it was recognized that the constituent fatty acids in the brain change depending on the fats and oils to be taken.
［実験例５］
標準コントロール、ＨＦＨＳ、ＨＦＨＳ＋ＫＯ又はＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢを１４週間与えたＲａｔの各群において、肝臓組織の組織学的所見を表５及び図４に示した。
[Experimental Example 5]
The histological findings of liver tissue in each group of Rats given standard control, HFHS, HFHS + KO or HFHS + KO + LB for 14 weeks are shown in Table 5 and FIG.
なお、表４中のａ、ｂは以下の事項を意味している。また、各実験群（ｎ＝１０）の統計的有意差ｐ＜０．０５である。
ａ：標準コントロールに対して有意差が認められる。
ｂ：ＨＦＨＳ群に対して有意差が認められる。
In Table 4, a and b mean the following matters. Moreover, it is the statistical significance difference p <0.05 of each experimental group (n = 10).
a: Significant difference is recognized with respect to the standard control.
b: A significant difference is recognized with respect to the HFHS group.
上記表５から明らかなように、ＨＦＨＳ群は他の群と比較し、脂肪変性、炎症および全体的な組織学的な違いにおいて有意差が認められた。ＨＦＨＳ群の肝臓が形態学的に異なった所見が認められることは、図４からも判断可能である。 As apparent from Table 5 above, the HFHS group showed significant differences in steatosis, inflammation, and overall histological differences compared to the other groups. It can also be determined from FIG. 4 that morphologically different findings are observed in the liver of the HFHS group.
また、図４より明らかなように、標準コントロール群は一般的な肝臓組織であった一方、ＨＦＨＳ群において、明らかな脂肪変性と炎症所見が認められた。 As is clear from FIG. 4, the standard control group was a general liver tissue, while clear fatty degeneration and inflammatory findings were observed in the HFHS group.
ＨＦＨＳ＋ＫＯ群及びＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群では組織学的にマイルドな脂肪変性と炎症が認められた。 In the HFHS + KO group and the HFHS + KO + LB group, histologically mild steatosis and inflammation were observed.
したがって、高脂肪高ショ糖食（ＨＦＨＳ）に対し、クリルオイル（ＫＯ）が供給されることにより、肝臓中に生じる組織学的な脂肪変性や炎症が抑制されると考えることができる。 Therefore, it can be considered that supply of krill oil (KO) to a high-fat high-sucrose diet (HFHS) suppresses histological fatty degeneration and inflammation that occur in the liver.
以下、上記実験例１〜５における実験条件などについて説明する。 Hereinafter, experimental conditions and the like in Experimental Examples 1 to 5 will be described.
〔実験条件〕
実験に用いた動物は、スプラギュ−ダウレイ（ＳＤ）系特定病原体除去（ＳＰＦ）ラット（Ｒａｔ）、体重２４０〜２９０ｇ（Ｄａｌｉａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ動物センターから購入）である。１週間予備飼育してから実験に使用した。プラスチックケージにおいて、オガ屑チップの床敷き上で飼育した。
[Experimental conditions]
The animals used in the experiment were Sprague-Dawley (SD) system specific pathogen-removed (SPF) rats (Rat), body weight 240-290 g (purchased from Dalian Medical University Animal Center). Pre-bred for 1 week before use in the experiment. In plastic cages, they were raised on the floor of sawdust chips.
実験環境は、温度２３〜２５℃、湿度５０〜６０％で明暗を各１２時間とし、室内換気回数１２回／時間で飼育した。飲水は、水道水を煮沸冷却したものを自由摂取で与えた。 The experimental environment was raised at a temperature of 23 to 25 ° C., a humidity of 50 to 60% and a light and darkness of 12 hours each, and the room was ventilated 12 times / hour. Drinking water was given by boiling and cooling tap water.
〔実験群分〕
実験群は４群として、各群を１０匹とした。
[Experiment group]
The experimental group was 4 groups, and each group was 10 animals.
１．標準コントロール群に対し、標準的なラットの食餌（既定食、Ｎｏｒｍａｌ Ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｄｉｅｔ）を与えた。 1. A standard rat diet (default diet, Normal Control (Standard Diet)) was given to the standard control group.
２．高脂肪、高ショ糖食（ＨＦＨＳ）群に対し、ＨＦＨＳ食 （１０％（Ｗ／Ｗ）ラード及び５％（Ｗ／Ｗ）トウモロコシ油を含む１５.０％（Ｗ／Ｗ）の脂肪及び３０％（Ｗ／Ｗ））を与えた(１５.０％(W/W)Fat ,１０.０％Lard ＆ corn oil, ３０％(W/W) Sucrose)。 2. HFHS diet (15.0% (W / W) fat containing 10% (W / W) lard and 5% (W / W) corn oil) and 30% of high fat, high sucrose diet (HFHS) group % (W / W)) (15.0% (W / W) Fat, 10.0% Lard & corn oil, 30% (W / W) Sucrose).
３．ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に対し、ＨＦＨＳ食に含まれるラードの全量をクリルオイル（ＫＯ）に置き換えた食餌を与えた（ＨＦＨＳdiet containing ＫＯ, in which ５.０％ (W/W) corn oil was replace to ＫＯ）。 3. The HFHS + KO group was given a diet in which the entire amount of lard contained in the HFHS diet was replaced with krill oil (KO) (HFHS diet containing KO, in which 5.0% (W / W) corn oil was replace to KO).
４．ＨＦＨＳ＋ＫＯ＋ＬＢ群に対し、ＨＦＨＳ＋ＫＯ群に与えた食餌に加え、リンゴンベリー抽出物を０.５％（Ｗ／Ｗ）含む、リンゴンベリー水溶液を飲水として与えた。リンゴンベリー水溶液は、褐色の遮光給水瓶から自由摂取させた。なお、このリンゴンベリー水溶液は、リンゴンベリーのエキス抽出液であって、有効成分としてのレスベラトロールを３５重量％含んでいる。また、内容液を毎日交換した（ＨＦＨＳ containing ＫＯ diet and consuming drinking fluid containing ０.５％ ＬＢ extract (W/V) group (The drinking fluids containing ＬＢ extract were freshly prepared, changed daily and protected from light to prevent the decomposition of ＬＢ extract by using a brown glass drinking bottle.ＬＢ：Lingonberry Extract(Resveratrol:３５％ contacted )。 4). For the HFHS + KO + LB group, in addition to the diet given to the HFHS + KO group, a lingonberry aqueous solution containing 0.5% (W / W) lingonberry extract was given as drinking water. The Lingonberry aqueous solution was ingested freely from a brown shaded water bottle. In addition, this lingonberry aqueous solution is an extract extract of lingonberry and contains 35% by weight of resveratrol as an active ingredient. In addition, HFHS containing KO diet and consuming drinking fluid containing 0.5% LB extract (W / V) group (The drinking fluids containing LB extract were freshly prepared, changed daily and protected from light to prevent the LB: Lingonberry Extract (Resveratrol: 35% contacted).
〔飼育期間〕
飼育期間は１４週間である。ＨＦＨＳ食餌は、−２０℃で凍結保管し、毎日必要に適した量を与えた。
[Breeding period]
The breeding period is 14 weeks. The HFHS diet was stored frozen at −20 ° C. and given the appropriate amount daily.
〔動物の観察〕
一般的な健康状況（目視的観察）観察は、毎日（朝９時と夕方４時）行った。動物の体重は、１週間に１度測定し、飼料摂取量及び飲水摂取量は毎日１回測定した。
[Animal observation]
The general health condition (visual observation) was observed every day (9:00 am and 4 pm). Animal weight was measured once a week, and feed intake and drinking water intake were measured once daily.
〔採血および組織サンプルの収集〕
実験期間終了時に１６時間絶食させた後、エーテル麻酔で処理した。採血は、後腹壁動脈から行った。血清は、採血後１５００ＲＰＭの遠心分離によって分離収集し、分析まで−８０℃で保管した。
Blood collection and tissue sample collection
After the experiment period, the animals were fasted for 16 hours and then treated with ether anesthesia. Blood collection was performed from the retroabdominal wall artery. Serum was separated and collected by centrifugation at 1500 RPM after blood collection and stored at −80 ° C. until analysis.
脳、肝臓、後腹壁脂肪組織（サイトカイン測定用組織）は、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。脳組織試料は−８０℃で貯蔵した。肝臓、後腹壁脂肪組織は重量を測定した。一対の肝臓試料は、各々のラットから採取した。一対の肝臓の一方は−８０℃で貯蔵し、もう一方は中性のホルマリン緩衝液（ｐＨ７．４）で固定した。 The brain, liver, and abdominal wall adipose tissue (cytokine measurement tissue) were washed with phosphate buffered saline (PBS). Brain tissue samples were stored at -80 ° C. Liver and retroabdominal wall adipose tissue were weighed. A pair of liver samples were collected from each rat. One of the pair of livers was stored at −80 ° C., and the other was fixed with a neutral formalin buffer (pH 7.4).
〔生化学分析〕
血清生化学分析として、中性脂肪（ＴＧ）、総コレステロール（Ｔ−ＣＨＯ）、高比重コレステロール（ＨＤＬ−ＣＨＯ）、低比重コレステロール（ＬＤＬ−ＣＨＯ）は酵素法で分析した。グルコース（ＧＬＵ）は、グルコースオキシダーゼ法で、尿酸（ＵＡ）は、ウリケース法で分析した。測定機器は自動生化学分析計（７０６０型、日立）を使用した。インスリン（ＩＮＳ）レベルはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定した。
[Biochemical analysis]
As serum biochemical analysis, neutral fat (TG), total cholesterol (T-CHO), high density cholesterol (HDL-CHO), and low density cholesterol (LDL-CHO) were analyzed by an enzymatic method. Glucose (GLU) was analyzed by the glucose oxidase method, and uric acid (UA) was analyzed by the uricase method. An automatic biochemical analyzer (7060 type, Hitachi) was used as a measuring instrument. Insulin (INS) levels were measured by radioimmunoassay (RIA).
マロンデアルデヒド（ＭＤＡ）、インターロイキン１β（ＩＬ−１β）、癌壊死因子（ＴＮＦ−α）、血小板凝集素活性化因子アセチルハイドラーゼ（ＰＡＦ−ＡＨ）とカルボキシメチルリジン（ＣＭＬ）は酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ）で分析した。蛍光ＡＧＥｓは、蛍光分析計で測定した。 Malondealdehyde (MDA), interleukin 1β (IL-1β), cancer necrosis factor (TNF-α), platelet agglutinin activator acetyl hydrase (PAF-AH) and carboxymethyllysine (CML) are enzyme immunization methods (ELISA). Fluorescence AGEs were measured with a fluorescence analyzer.
測定条件は、血清試料をＰＢＳで５００倍に希釈し、Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶフィルター（０.２２μｍ、ミリポア）でフィルトレーション（濾過）した。バックグラウンド蛍光スペクトルは、スリット幅１ｎｍ、Ｅｘ：３７０ｎｍ、Ｅｍ：４４５ｎｍで３回測定した。ついで、血清試料についての蛍光極大吸収を測定した。 The measurement conditions were that a serum sample was diluted 500 times with PBS and filtered (filtered) with a Millex-GV filter (0.22 μm, Millipore). The background fluorescence spectrum was measured three times with a slit width of 1 nm, Ex: 370 nm, and Em: 445 nm. Subsequently, the fluorescence maximum absorption about a serum sample was measured.
〔まとめと考察〕
以上の実験結果から、クリルオイル（ＫＯ）単体使用又はクリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（リンゴンベリー）の併用により、高脂肪高ショ糖食によって血液中や肝臓中で起こるコレステロ−ル上昇が抑制され、なおかつ過酸化が抑制されることが理解できる。
[Summary and discussion]
From the above experimental results, by using krill oil (KO) alone or in combination with krill oil (KO) + LB (lingonberry), the increase in cholesterol caused by high fat and high sucrose diet in the blood and liver is suppressed, It can also be understood that peroxidation is suppressed.
上記実験例１〜実験例５から、一般的にクリルオイル（ＫＯ）の効果として考えられていたサイトカインによる炎症抑制メカニズムが、ＩＬ−１β抑制による抗炎症作用のみではなく、ＴＮＦ−αおよびＰＡＦ−ＡＨのような様々なサイトカインの抑制を通じていることが判明した。したがって、クリルオイル（ＫＯ）の供給により全身的に、あらゆる炎症に対して抑制できる可能性が理解される。 From Experimental Example 1 to Experimental Example 5 above, the inflammation suppression mechanism by cytokines generally considered as the effect of krill oil (KO) is not only the anti-inflammatory action by IL-1β suppression but also TNF-α and PAF- It has been found through the suppression of various cytokines such as AH. Therefore, it is understood that the supply of krill oil (KO) can suppress all inflammations systemically.
動脈硬化の原因として知られる血管内皮細胞や血液そのものの炎症の抑制に対し、ＰＡＦ−ＡＨが関与することが知られるが、上記実験例１〜実験例５から、クリルオイル（ＫＯ）の供給により、ＰＡＦ−ＡＨの生成が抑制されることが初めて分かった。したがって、クリルオイル（ＫＯ）の供給により、ＰＡＦ−ＡＨの生成抑制を通じて動脈硬化の緩和、予防等することができる可能性が理解される。 It is known that PAF-AH is involved in the suppression of inflammation of vascular endothelial cells and blood itself, which is known as a cause of arteriosclerosis. From Experimental Examples 1 to 5, the supply of krill oil (KO) It was found for the first time that the production of PAF-AH was suppressed. Therefore, it is understood that the supply of krill oil (KO) can alleviate or prevent arteriosclerosis through the suppression of PAF-AH production.
また、最近、老化の最大の問題であると指摘されている終末糖化物質の一つであるＣＭＬ（カルボキシメチルリジン）の生成を、上記実験例１〜実験例５から、クリルオイル（ＫＯ）の供給により、抑制することができることが初めて分かった。したがってクリルオイル（ＫＯ）単体使用又はクリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（リンゴンベリー）の併用により、血管内皮細胞および血液そのものの炎症を抑制し、さらに生体内過酸化の抑制やコレステロ−ル上昇抑制、および終末糖化物質の生体内合成を抑制することによって、生体への有益な効果をもたらす可能性を示すことができた。 Moreover, the production | generation of CML (carboxymethyl lysine) which is one of the terminal saccharification substances pointed out to be the biggest problem of aging recently, from the said Experimental example 1-Experimental example 5 of a krill oil (KO). It has been found for the first time that it can be suppressed by supply. Therefore, by using krill oil (KO) alone or in combination with krill oil (KO) + LB (Lingonberry), it suppresses inflammation of vascular endothelial cells and blood itself, and further suppresses in vivo peroxidation and cholesterol elevation, and It was possible to show the possibility of producing beneficial effects on the living body by suppressing the in vivo synthesis of terminal glycated substances.
したがって、本発明は、高脂肪、高ショ糖摂取によって生じる終末糖化物質の生成を抑制する終末糖化物質生成抑制方法であって、５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制することを通じ、生体の老化抑制効果が期待できる。具体的には、老人班、老化性のシミ、そばかすなどの発現抑制のほか、肝臓や血液中のマロンデアルデヒド（ＭＤＡ）濃度の抑制効果を通じて生体内の過酸化を抑制し、老化抑制効果が期待できる。なお、クリルオイルの供給と同時に、０．５質量％のリンゴンベリー水溶液を供給することでも同様な効果が期待できる。 Therefore, the present invention is a method for inhibiting the production of a terminal glycated substance that suppresses the production of a terminal glycated substance caused by intake of high fat and high sucrose, and supplies 5.0% by weight of krill oil continuously for 14 weeks. And suppresses the production of terminal glycated substances including carboxymethyllysine in blood with a decrease in the concentration of PAF-AH, LDL-cholesterol, total cholesterol and malondealdehyde in the blood and an increase in the concentration of HDL-cholesterol. Through this, it can be expected to have an effect of suppressing aging of the living body. Specifically, in addition to suppressing the expression of senile plaques, aging spots, freckles, etc., it also suppresses peroxidation in the body through the effect of suppressing malondealdehyde (MDA) concentration in the liver and blood. I can expect. The same effect can be expected by supplying a 0.5% by mass lingonberry aqueous solution simultaneously with the supply of krill oil.
ここで、終末糖化物質には蛍光性を有するＡＧＥｓ群とＣＭＬのように非蛍光性のものがある。蛍光性のものは、不安定で反応性が高いが、ＣＭＬは安定した最終生成物質で不可逆的であると考えられる。したがって、クリルオイル（ＫＯ）を供給することにより、蛍光性を有するＡＧＥｓ群の段階で生成抑制できれば、ＣＭＬ等の不可逆的な最終糖化物質の蓄積が生じず、生体への有益な効果をもたらす可能性がある。 Here, the terminal saccharified substances include fluorescent AGEs and non-fluorescent substances such as CML. Fluorescent ones are unstable and highly reactive, but CML is considered a stable final product and irreversible. Therefore, if the production can be suppressed at the stage of the fluorescent AGEs group by supplying krill oil (KO), accumulation of irreversible final glycated substances such as CML does not occur, and it may have a beneficial effect on the living body. There is sex.
さらに、蛍光性を有するＡＧＥｓ群は、Ｔｏｘｉｃ−ＡＧＥｓ、Ｒｅｃｅｐｔｅｒ−ＡＧＥｓなどと称され、毒性を有する可能性が示唆されている。したがって、クリルオイル（ＫＯ）を供給することにより、蛍光性を有するＡＧＥｓ群の段階で生成抑制できれば、ＡＧＥｓ群の毒性に対する危険性が低減されて生体への有益な効果をもたらす可能性がある。なお、ＣＭＬはｎｏｎ−Ｔｏｘｉｃ ＡＧＥｓと呼ばれ、生体内で無毒化経路をたどって無毒化されているが、その無毒化経路が飽和することにより Ｔｏｘｉｃ−ＡＧＥｓが増加する可能性があるので、クリルオイル（ＫＯ）を供給することによりＣＭＬ等の最終糖化物質の生成抑制によっても、生体への有益な効果をもたらす可能性がある。 Furthermore, the fluorescent AGEs group is referred to as Toxic-AGEs, Receptor-AGEs, and the like, and it is suggested that they may be toxic. Therefore, if generation can be suppressed at the stage of the fluorescent AGEs group by supplying krill oil (KO), the risk of toxicity of the AGEs group may be reduced, and there may be a beneficial effect on the living body. CML is called non-Toxic AGEs and is detoxified by following the detoxification pathway in the living body. However, since the detoxification pathway is saturated, Toxic-AGEs may increase. Supplying oil (KO) may also have a beneficial effect on the living body by suppressing the production of final glycated substances such as CML.
上記実験例２では、クリルオイル（ＫＯ）を供給することにより、ＣＭＬの生成抑制効果が認められることで、終末糖化物質の生成抑制効果が認められた。この効果は、実験例２から、サイトカインであるＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＰＡＦ−ＡＨの生成抑制、ＭＤＡの生成抑制のほか、総コレステロールの生成抑制、ＬＤＬ−コレステロールの生成抑制、ＨＤＬ−コレステロール値の上昇等により、血管内皮細胞に対してカルボニル化やグリケーションといった酸化ストレスが抑制された結果であると考えられる。 In Experimental Example 2, the effect of inhibiting the production of terminal glycated substances was confirmed by the effect of inhibiting the production of CML by supplying krill oil (KO). This effect is shown in Experimental Example 2 from the suppression of the production of cytokines TNF-α, IL-1β and PAF-AH, the suppression of MDA generation, the suppression of total cholesterol production, the suppression of LDL-cholesterol production, and HDL-cholesterol. This is considered to be a result of suppressing oxidative stress such as carbonylation and glycation on vascular endothelial cells due to an increase in the value.
本発明では、クリルオイル（ＫＯ）単体使用又はクリルオイル（ＫＯ）＋ＬＢ（リンゴンベリー）の併用により、ＨＦＨＳ食の連続的な摂取で生じるメタボリックシンドロームを介して発症する肥満、動脈硬化、糖尿病、全身炎症などの患者の血液中や肝臓中における脂質変性によって生じたアテロ−ム性動脈硬化、又は老化に伴う指標であるＰＡＦ−ＡＨの抑制と終末糖化物質類に含まれるＣＭＬの抑制効果を確認した。このことから、ＨＦＨＳ食の継続によるメタボリックシンドロームの進行具合を、血中のＣＭＬおよびＰＡＦ−ＡＨの値を測定することで確認することができる可能性がある。 In the present invention, obesity, arteriosclerosis, diabetes, whole body caused by metabolic syndrome caused by continuous ingestion of HFHS diet by using krill oil (KO) alone or in combination with krill oil (KO) + LB (Lingonberry) Inhibition of PAF-AH, which is an index associated with atherosclerosis caused by lipid degeneration in patients' blood and liver such as inflammation, and CML contained in terminal glycated substances . From this, there is a possibility that the progress of metabolic syndrome due to the continuation of the HFHS diet can be confirmed by measuring the values of CML and PAF-AH in the blood.
また、クリルオイル（ＫＯ）は、Ｆｉｓｈ−ＯＩＬとは別の経路で生体に吸収され、生体内で有効利用されている点においても注目されている。 In addition, krill oil (KO) is attracting attention because it is absorbed into the living body through a different route from Fish-OIL and is effectively used in the living body.
Claims (2)
５．０重量％のクリルオイルを所定量、１４週間連続で供給し、
血中のＰＡＦ−ＡＨ、ＬＤＬ−コレステロール、総コレステロール及びマロンデアルデヒドの濃度減少及び、ＨＤＬ−コレステロールの濃度増加を伴って、血中のカルボキシメチルリジンを含む終末糖化物質の生成を抑制する、
ことを特徴とする終末糖化物質生成抑制方法。 A method for inhibiting the production of advanced glycated substances that suppresses the production of advanced glycated substances caused by intake of high fat and high sucrose,
A predetermined amount of 5.0% by weight of krill oil is supplied continuously for 14 weeks,
Suppressing the production of terminal glycated substances including carboxymethyllysine in the blood, accompanied by a decrease in the concentration of PAF-AH, LDL-cholesterol, total cholesterol and malondealdehyde in the blood and an increase in the concentration of HDL-cholesterol,
A method for inhibiting the production of a terminal glycated substance.
ことを特徴とする請求項１に記載の終末糖化物質生成抑制方法。 Simultaneously with the supply of the krill oil, a 0.5% by mass lingonberry aqueous solution is supplied.
The method for inhibiting the production of a terminal glycated substance according to claim 1.
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