JP2015024968A - Selection method of cosmetics - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、化粧料の選択方法に関する。 The present invention relates to a method for selecting a cosmetic.
ヒトの皮膚は常に外界と接触しており、さまざまな刺激を受けている。その刺激の代表的なものは紫外線である。紫外線は、外見上は大きな変化を肌に与えていない場合であっても、皮膚細胞のＤＮＡの切断やコラーゲンの変性などを誘発し、皮膚老化の原因となっている。紫外線は常に肌にストレスを与え続けている。また女性にとっては、洗顔や化粧といった日常的な行為も皮膚に刺激を与えており、これらの刺激が肌には潜在的なストレスとして蓄積される。そしてこれらの刺激（ストレス）に対する抵抗性がなんらかの原因で減少すると潜在的な荒れ肌や敏感肌として認識されることとなる。このような皮膚の外的刺激が蓄積されると肌荒れとして認識される肌状態となる。肌荒れは一時的な状態をさすが、これが持続した状態を「荒れ肌」という。 Human skin is always in contact with the outside world and is subject to various stimuli. A typical example of the stimulus is ultraviolet rays. Ultraviolet rays cause skin aging by inducing DNA breakage and collagen degeneration in skin cells, even when the skin is not significantly changed. Ultraviolet rays are constantly stressing the skin. For women, daily acts such as face washing and makeup also stimulate the skin, and these stimuli accumulate as potential stress on the skin. And if resistance to these stimuli (stress) decreases for some reason, it will be recognized as potential rough skin or sensitive skin. When such external stimulation of the skin is accumulated, the skin state is recognized as rough skin. Although rough skin refers to a temporary state, the state in which this persists is called “rough skin”.
「荒れ肌」とは、乾燥しカサカサした皮膚の状態の総称であり、その最も顕著な臨床所見は鱗屑である。このような荒れ肌状態と皮膚のバリア機能との間には密接な関係があり、荒れ肌が大きいほどバリア機能の客観的な指標である経表皮水分蒸散量（以下、ＴＥＷＬという）が高いことが知られ、物理的・化学的要因によって生じた肌荒れ状態の指標としてＴＥＷＬが測定されている（非特許文献１：日皮会誌、第92巻、第1001頁−1003頁、1982年）。
この荒れ肌は、前述のとおり紫外線、化学物質やその他様々な刺激が、皮膚内部環境に影響を及ぼし、表皮のバリア機能が阻害された結果生じるものと考えられている。このような状況を皮膚が呈するようになると、皮膚内部では細胞の増殖・分化に影響を及ぼすプロスタグランジンやサイトカイン濃度の上昇（非特許文献２：ジャーナル・オブ・インベスティゲイティブ・ダーマトロジー、第81巻、第 519-523頁、1983）、核酸（ＤＮＡ）合成能の亢進（非特許文献３：ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲイション、第87巻、第1668−1673頁、1991）、バリアー機能と密接な関係があるＴＥＷＬの上昇（非特許文献４：ジャーナル・オブ・リピッド・リサーチ、第26巻、第418頁-427頁、1985年及び同第30巻、第323頁-333頁、1989年）等の変化が生じる。しかしながら、これらの現象の関連性についての報告は少なく、その詳細なメカニズムは不明である。このため、荒れ肌の指標はこれまで、本人の申告や肉眼的な所見にたよっており、明確な指標がなかった。
また潜在的な荒れ肌の者も存在するが、このような潜在的な荒れ肌を肉眼で検出することは困難である。また潜在的な荒れ肌を含む肌質を敏感肌と呼ぶ場合もある。
“Rough skin” is a general term for the condition of dry and crusty skin, the most prominent clinical finding being scales. There is a close relationship between such a rough skin state and the barrier function of the skin, and it is known that the larger the rough skin, the higher the transepidermal water transpiration (hereinafter referred to as TEWL), which is an objective index of the barrier function. In addition, TEWL has been measured as an indicator of rough skin caused by physical and chemical factors (Non-patent Document 1: Hichikai, Vol. 92, pages 1001 to 1003, 1982).
As described above, this rough skin is considered to be caused by ultraviolet rays, chemical substances, and various other stimuli affecting the internal environment of the skin and inhibiting the barrier function of the epidermis. When the skin exhibits such a situation, an increase in prostaglandin or cytokine concentration that affects cell proliferation / differentiation inside the skin (Non-Patent Document 2: Journal of Investigative Dermatology, 81, 519-523, 1983), enhancement of nucleic acid (DNA) synthesis ability (Non-patent Document 3: Journal of Clinical Investigation, Vol. 87, pp. 168-1673, 1991) The rise of TEWL, which is closely related to the barrier function (Non-Patent Document 4: Journal of Lipid Research, 26, 418-427, 1985 and 30, 323-333) Page, 1989). However, there are few reports on the relevance of these phenomena, and the detailed mechanism is unknown. For this reason, the rough skin index has so far depended on the person's declaration and macroscopic findings, and there was no clear index.
There are also people with potential rough skin, but it is difficult to detect such rough rough skin with the naked eye. In addition, skin quality including potential rough skin may be called sensitive skin.
荒れ肌、あるいは潜在的な荒れ肌を呈する者が化粧料を選択する場合には細心の注意が必要である。なぜならば、荒れ肌の皮膚は化粧料によってさらにその状態が悪化することがしばしば発生する。このため可能な限り低刺激性の化粧料を選択し、低刺激の化粧料の使用によって肌荒れの進行や、潜在的な荒れ肌を荒れ肌にまで憎悪させない注意が必要であった。
しかしこれまでは、荒れ肌の者や潜在的な荒れ肌または敏感肌であると意識している者が化粧品を選択する基準は、前記の通り、使用したときの刺激の少ない化粧料を選択するしか対策がないのが現実であった。このため化粧品の選択にあたっては、化粧品の購入者が販売者と対面し、肌状態を愁訴し、それに対して販売者又はカウンセラーが自己の経験と蓄積した化粧品情報に基づいて、肌に適すると考えられる化粧料を選択する方法が一般的であった。
Careful attention is required when a person with rough skin or potential rough skin chooses cosmetics. This is because it often occurs that rough skin is further deteriorated by cosmetics. For this reason, it is necessary to select as low-stimulating cosmetics as possible, and to use the low-stimulating cosmetics so that the rough skin progresses and the potential rough skin is not made hateful.
However, until now, the standard for selecting cosmetics for those with rough skin or those who are aware of potential rough skin or sensitive skin is to select cosmetics with less irritation when used as described above. There was no reality. For this reason, in selecting cosmetics, the purchaser of cosmetics faces the seller and complains of the skin condition, and the seller or counselor thinks that it is suitable for the skin based on his own experience and accumulated cosmetic information. The method of selecting the cosmetics to be used has been common.
近年に肌に及ぼすストレスの研究が進み、ストレスの指標となるタンパク質や遺伝子が特定されている。そのようなタンパク質としてガレクチンが注目されている。
ガレクチンとは、ガラクトース（β‐ガラクトシド構造）を認識し、結合あるいは糖鎖同士を架橋するタンパク質の総称である。発生、分化、形態形成、腫瘍転移、アポトーシス（細胞死）といった生命現象に関与することが明らかになっている。現在、哺乳類のガレクチンとしてガレクチン-１から-１５まで１５種類が知られている。ヒトの場合、-５，-６，-１４，-１５に相当するものがなく、現在のところ１０種類であるが、今後さらに増える可能性がある。特にガレクチン-７が皮膚のストレスの指標として注目されている。
In recent years, research on stress on the skin has progressed, and proteins and genes that are indicators of stress have been identified. Galectins are attracting attention as such proteins.
Galectin is a general term for proteins that recognize galactose (β-galactoside structure) and bond or crosslink sugar chains. It has been shown to be involved in life phenomena such as development, differentiation, morphogenesis, tumor metastasis, and apoptosis (cell death). Currently, 15 types of galectin-1 to -15 are known as mammalian galectins. In the case of humans, there is no equivalent to -5, -6, -14, and -15, and there are currently 10 types, but there is a possibility that it will increase further in the future. In particular, galectin-7 has attracted attention as an index of skin stress.
ガレクチン-７は哺乳動物の重層上皮で検出され、ケラチノサイトでは基底層から角質層まで検出される。特許文献５（特開２００６-１８２７４４号公報）にはガレクチン-７発現促進物質のスクリーニング方法及びガレクチン-７成分配合の組成物を塗ることで保湿作用や皮膚症状改善作用が開示されている。さらに特許文献６（特開平９−２１６８３３号公報）にはガレクチンの１種又は２種以上を含む外用剤が皮膚のしわ、弾力低下といった老化症状の予防、改善および創傷治癒効果を有することが開示されている。
本発明者はガレクチン-７が荒れ肌の客観的な指標になりうることを見出し、特許出願している。
Galectin-7 is detected in the stratified epithelium of mammals and in keratinocytes from the basal layer to the stratum corneum. Patent Document 5 (Japanese Patent Laid-Open No. 2006-182744) discloses a screening method for a galectin-7 expression promoting substance and a moisturizing effect and a skin symptom improving effect by applying a composition containing a galectin-7 component. Furthermore, Patent Document 6 (Japanese Patent Laid-Open No. 9-216833) discloses that an external preparation containing one or more galectins has the effect of preventing and improving aging symptoms such as skin wrinkles and reduced elasticity, and wound healing. Has been.
The present inventor has found that galectin-7 can be an objective indicator of rough skin and has applied for a patent.
本発明は、荒れ肌又は潜在的な荒れ肌あるいは敏感肌の者のために、適切な化粧料を選択する方法を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide a method for selecting an appropriate cosmetic material for a person having rough skin, potential rough skin, or sensitive skin.
本発明は以下の構成である。
（１）荒れ肌のための化粧料を選択するにあたり、皮膚角層のガレクチン-７の発現量を測定してガレクチン−７発現量の高い場合は、ガレクチン-７を低減する効果を有する成分を配合した化粧料を選択することを特徴とする化粧料を選択する方法。
（２）皮膚角層のガレクチン-７の発現量を測定する方法が、エンザイムイムノアッセイ法によるものである（１）記載の化粧料を選択する方法。
（３）ガレクチン-７を低減する効果を有する成分が、ヒト３次元培養表皮モデルに被験物質を接触させ、前記モデルの細胞中のガレクチン−７の量が、被験物質を接触させない前記モデルの細胞中のガレクチン−７の量よりも少ない場合に、被験物質がガレクチン−７を低減する効果を有すると判定することで選択される成分であることを特徴とする（１）または（２）に記載の化粧料の選択方法。
（４）ガレクチン-７を低減する効果を有する成分がセイヨウシロヤナギエキス、カニナバラエキス、ガラクトース、セラミド２とセラミド５の混合物のいずれかであることを特徴とする（１）または（２）に記載の化粧料の選択方法。
（５）顧客の皮膚ガレクチン−７量測定情報と、化粧料中のガレクチン抑制成分の含有情報を対比し、顧客のガレクチン−７濃度に適したガレクチン抑制成分を含有する化粧料を選択する方法。
The present invention has the following configuration.
(1) When selecting cosmetics for rough skin, measure the expression level of galectin-7 in the stratum corneum, and if the expression level of galectin-7 is high, add a component that has the effect of reducing galectin-7 A method for selecting a cosmetic, characterized in that the selected cosmetic is selected.
(2) The method for selecting a cosmetic according to (1), wherein the method for measuring the expression level of galectin-7 in the stratum corneum is based on an enzyme immunoassay method.
(3) A component having an effect of reducing galectin-7 contacts a test substance with a human three-dimensional cultured epidermis model, and the amount of galectin-7 in the cell of the model does not contact the test substance. (1) or (2), wherein the test substance is a component selected by determining that the test substance has an effect of reducing galectin-7 when the amount is less than the amount of galectin-7 How to choose cosmetics.
(4) The component having the effect of reducing galectin-7 is any one of the following: Willow extract, canina rose extract, galactose, a mixture of ceramide 2 and ceramide 5 How to choose cosmetics.
(5) A method for selecting a cosmetic containing a galectin-inhibiting component suitable for the customer's galectin-7 concentration by comparing the measurement information of the customer's skin galectin-7 and the content information of the galectin-inhibiting component in the cosmetic.
本発明によれば、荒れ肌の愁訴を有する者のために皮膚のガレクチン−７量を指標として適切な化粧料を選択することが可能となる。ガレクチン-７の測定は、テープストリッピング法など簡便な操作方法で評価試料を採取するため、負担が少なく、誰が測定しても同一の結果が得られるので、従来のような専門家の面談方式によるカウンセリングが必要なくなる。
さらにまた、あらかじめ顧客の皮膚ガレクチン−７濃度をデータベースとして作成し、保有すれば、別途作成する化粧料中のガレクチン−７抑制成分の種類、含量、抑制効果データと対比することで、化粧品販売員は瞬時に、顧客に適した荒れ肌用化粧料の選択が可能となる。
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, it becomes possible for those who have a complaint of rough skin to select an appropriate cosmetic using the amount of galectin-7 in the skin as an index. Galectin-7 is measured using a simple operation method such as tape stripping, so the burden is small and the same result can be obtained by anyone. No need for counseling.
Furthermore, if the customer's skin galectin-7 concentration is prepared and stored in advance as a database, it can be compared with the type, content, and inhibitory effect data of the galectin-7 inhibitory component in cosmetics that are separately prepared, and the cosmetic salesperson Makes it possible to instantly select cosmetics for rough skin suitable for customers.
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明の化粧料の選択方法は、皮膚の角層におけるガレクチン-７の発現量を指標としている。
本発明におけるガレクチン測定部位は、角層が入手できる部分であれば、いかなる部位であっても良い。なお化粧料の選択という目的から、主な部位としては顔面、頚部、上腕部など日常外界に露出する機会の多い部位を測定対象とすることが好ましい。また角層の採取はテープストリッピング、擦過等の簡便に角層を得られる方法が好ましい。
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The method for selecting a cosmetic of the present invention uses the expression level of galectin-7 in the stratum corneum of the skin as an index.
The galectin measurement site in the present invention may be any site as long as the stratum corneum is available. In addition, for the purpose of selecting cosmetics, it is preferable that a measurement target is a main part such as the face, neck, upper arm, etc., which is frequently exposed to the outside world. In addition, the stratum corneum is preferably collected by a method that can easily obtain the stratum corneum, such as tape stripping or abrasion.
採取した各試料のガレクチン-７の発現量は、従来から知られている方法で測定することができる。例えば、ガレクチン-７に対する抗体との反応に基づくエンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロッティング等の方法を用いることができる。このような測定手段はすでに市販されており、代表的なガレクチン-７のエンザイムイムノアッセイキットとしてアブカム社（Abcam）製のGaleectin 7 Human ELISA KitやR&D systems社製のELISA Kitを例示することができる。
各試料からガレクチン-７をそれ自体既知の生化学的方法、たとえば凍結融解法、超音波破砕法、ホモジネート法等を介して可溶性画分を調製する。抽出後、速やかに測定する。
The expression level of galectin-7 in each collected sample can be measured by a conventionally known method. For example, methods such as enzyme immunoassay, radioimmunoassay, and Western blotting based on a reaction with an antibody against galectin-7 can be used. Such measuring means are already commercially available, and examples of typical enzyme immunoassay kits for galectin-7 include Galectin 7 Human ELISA Kit manufactured by Abcam and ELISA Kit manufactured by R & D systems.
A soluble fraction of galectin-7 is prepared from each sample through biochemical methods known per se, such as freeze-thaw method, ultrasonic disruption method, homogenate method and the like. Measure immediately after extraction.
外界からのストレスが蓄積された肌である荒れ肌や敏感肌は、健常肌にくらべて角層のガレクチン-７発現量が有意に高い。従って、角層におけるガレクチン-７の発現量の多寡を指標として、簡便に荒れ肌の度合い、または潜在的な荒れ肌、あるいは敏感肌であるかどうかを判断することができる。本発明に用いる角層は、テープストリッピングといった角層の表層部分のみを角質テープで採取する簡単な方法で採取することができる。また、本発明は、皮膚に紫外線や化学物質等の刺激を与えることなくガレクチン-７の発現量を測定できるので、ユーザーに負担を与えることなく、ユーザーの荒れ肌の程度を評価することができ、この結果に基づいて適切な化粧料を選択することができる。 Rough skin and sensitive skin, which are skin in which stress from the outside world is accumulated, have significantly higher expression level of galectin-7 in the stratum corneum than healthy skin. Therefore, it is possible to easily determine the degree of rough skin, potential rough skin, or sensitive skin by using the expression level of galectin-7 in the stratum corneum as an index. The stratum corneum used in the present invention can be collected by a simple method such as tape stripping in which only the surface layer portion of the stratum corneum is collected with a keratin tape. In addition, since the present invention can measure the expression level of galectin-7 without giving a stimulus such as ultraviolet rays or chemical substances to the skin, it is possible to evaluate the degree of rough skin of the user without giving a burden to the user, An appropriate cosmetic can be selected based on the result.
本発明の方法は、角層を採取する採取工程と、前記採取工程で採取された角層におけるガレクチン-７の発現量を測定する測定工程と、前記測定工程で測定されたガレクチン-７の発現量に基づいて化粧料を選択する選択工程から構成される。 The method of the present invention comprises a sampling step of sampling the stratum corneum, a measuring step of measuring the expression level of galectin-7 in the stratum corneum sampled in the sampling step, and the expression of galectin-7 measured in the measuring step It is comprised from the selection process which selects cosmetics based on quantity.
まず、測定されたガレクチン-７の発現量を健常肌の角層におけるガレクチン-７の発現量と比較する。また、被験者のある評価対象部位の角層におけるガレクチン-７の発現量を測定し、測定されたガレクチン-７の発現量を、健常肌を有する者の同一評価対象部位の角層におけるガレクチン-７の発現量と比較してもよい。健常肌を有する者の角層のガレクチン-７の発現量は、複数人の健常肌を有する者からのデータの平均値を使用することによって、より客観的な評価ができる。具体的には、無作為に抽出した被験者のガレクチン-７の発現量分布から、健常肌の分布を設定できる。 First, the measured expression level of galectin-7 is compared with the expression level of galectin-7 in the horny layer of healthy skin. In addition, the expression level of galectin-7 in the stratum corneum of a part of the subject to be evaluated is measured, and the measured expression level of galectin-7 is used as the galectin-7 in the stratum corneum of the same part of the subject to be evaluated. You may compare with the expression level. The expression level of galectin-7 in the stratum corneum of a person with healthy skin can be evaluated more objectively by using the average value of data from a plurality of persons with healthy skin. Specifically, the distribution of healthy skin can be set from the expression distribution of galectin-7 of the subjects extracted at random.
このように比較した結果、測定されたガレクチン-７の発現量が、健常肌のガレクチン-７の発現量より有意に大きい場合には、ストレスの蓄積が大きいと評価し、荒れ肌、または潜在的荒れ肌、あるいは敏感肌である可能性が高いと評価することができる。 As a result of the comparison, when the measured expression level of galectin-7 is significantly larger than the expression level of galectin-7 in healthy skin, it is evaluated that the accumulation of stress is large, and rough skin or potential rough skin. Or, it can be evaluated that there is a high possibility of sensitive skin.
また、被験者のある評価対象部位の角層におけるガレクチン-７の発現量が、健常肌を有する者の同一評価対象部位の角層におけるガレクチン-７の発現量より有意に大きい場合にも、ストレスの蓄積が大きいと評価する。またこの数値が顕著に高い場合に荒れ肌、または潜在的荒れ肌、あるいは敏感肌であると判断する。 In addition, when the expression level of galectin-7 in the stratum corneum of a subject's evaluation target site is significantly larger than the expression level of galectin-7 in the stratum corneum of the same evaluation target portion of a person with healthy skin, Assess the accumulation is large. When this value is remarkably high, it is determined that the skin is rough skin, potential rough skin, or sensitive skin.
荒れ肌であると評価した場合には、化粧料としては、肌荒れを改善させ、ガレクチン-７の産生が低減する成分を含有するものを、皮膚のガレクチン−７量に対応して選択する。しかしガレクチン−７の産生を低減する成分を含有することが明らかになっている化粧料は不明である。このためにあらかじめ、化粧料に使用される成分が皮膚のガレクチン-７の産生を低減するか否かを明らかにする必要がある。このような成分は、ヒト３次元培養表皮モデルを用いたスクリーニングを行い、選別することができる。 When it is evaluated that the skin is rough, a cosmetic is selected that contains a component that improves rough skin and reduces the production of galectin-7 according to the amount of galectin-7 in the skin. However, cosmetics that have been shown to contain ingredients that reduce galectin-7 production are unknown. For this purpose, it is necessary to clarify in advance whether the ingredients used in the cosmetics reduce the production of galectin-7 in the skin. Such components can be selected by screening using a human three-dimensional cultured epidermis model.
ガレクチン-７の産生を低減する成分を選択する際のスクリーニング方法において用いるヒト３次元培養表皮モデルとは、「培養下で維持される表皮組織」であって、ヒトの皮膚から採取した皮膚組織か、胚性幹細胞又は成体幹細胞を試験管内で分化させて得られた皮膚組織かを重層構造を維持しながら試験管内で培養した組織をいう。特にヒト由来については、ＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ−ＭＯＤＥＬ（株式会社ジャパン・ティッシュ・エンジニアリング）、あるいはエピ・モデル２４のような商業的に入手可能なヒト３次元培養表皮モデル製品を用いることができる。
ヒト３次元培養表皮モデルに被験物質を接触させる場合には、ヒト３次元培養表皮モデルが搭載された培養カップにＰＢＳ等の緩衝液等に任意の濃度で溶解した被験物質を添加した後インキュベートして、次いでガレクチン-７を測定しその作用を評価する。
The human three-dimensional cultured epidermis model used in the screening method for selecting a component that reduces the production of galectin-7 is an “epidermal tissue maintained in culture”, which is a skin tissue collected from human skin. The term refers to a tissue obtained by culturing an embryonic stem cell or an adult stem cell in a test tube while maintaining a multi-layer structure. For human origin, commercially available human three-dimensional cultured epidermis model products such as LabCyte EPI-MODEL (Japan Tissue Engineering Co., Ltd.) or Epi Model 24 can be used.
When the test substance is brought into contact with the human three-dimensional cultured epidermis model, the test substance dissolved at an arbitrary concentration in a buffer solution such as PBS is added to the culture cup on which the human three-dimensional cultured epidermis model is mounted and then incubated. Then, galectin-7 is measured and its action is evaluated.
ヒト3次元培養表皮モデルを用いた試験を実施するにあたっては、ヒト細胞のガレクチン−７を増加させることが確認されている成分をあらかじめ添加しておくと、目的とする被験物質のガレクチン−７の産生低減効果を検出しやすくなる。このような物質として、界面活性剤を例示することができる。とくに、ドデシル硫酸ナトリウム（以下、ＳＤＳと記載する）が好ましい。
ＳＤＳなどのガレクチン−７を増加させる成分をヒト３次元培養表皮モデルに添加する場合、ヒト３次元培養表皮モデルに被験物質とＳＤＳなどのガレクチン−７を増加させる成分を同時に添加して培養し、細胞中のガレクチン−７の量を測定する。
In conducting a test using a human three-dimensional cultured epidermis model, if a component that has been confirmed to increase galectin-7 in human cells is added in advance, the target test substance galectin-7 It becomes easy to detect the production reduction effect. An example of such a substance is a surfactant. In particular, sodium dodecyl sulfate (hereinafter referred to as SDS) is preferable.
When a component that increases galectin-7 such as SDS is added to a human three-dimensional cultured epidermis model, a test substance and a component that increases galectin-7 such as SDS are simultaneously added to the human three-dimensional cultured epidermis model and cultured. The amount of galectin-7 in the cells is measured.
３次元培養表皮モデル細胞中のガレクチン−７の量は、従来から知られている方法で測定することができる。例えば、ガレクチン-７に対する抗体との反応に基づくエンザイムイムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、ウエスタンブロッティング等の方法を用いることができる。このような測定手段はすでに市販されている。代表的なガレクチン-７のエンザイムイムノアッセイキットとしてHuman Galectin-7 DuoSet Economy Pack（R&D Systems Inc.）、アブカム社製のGaleectin 7 Human ELISA Kitを例示することができる。３次元培養表皮モデル細胞からガレクチン-７を抽出する場合は、それ自体既知の生化学的方法、たとえば凍結融解法、超音波破砕法、ホモジネート法等を介して可溶性画分を調製する。抽出後、速やかにガレクチン-７を測定する。
かくしてガレクチン-７を低減することが確認できた成分を含有する化粧料は、荒れ肌を愁訴する者に適した化粧料として選択される。
The amount of galectin-7 in the three-dimensional cultured epidermis model cell can be measured by a conventionally known method. For example, methods such as enzyme immunoassay, radioimmunoassay, and Western blotting based on a reaction with an antibody against galectin-7 can be used. Such measuring means are already commercially available. Examples of typical enzyme immunoassay kits for galectin-7 include Human Galectin-7 DuoSet Economy Pack (R & D Systems Inc.) and Galeectin 7 Human ELISA Kit manufactured by Abcam. When galectin-7 is extracted from a three-dimensional cultured epidermis model cell, a soluble fraction is prepared through a biochemical method known per se, for example, a freeze-thaw method, an ultrasonic disruption method, a homogenate method, or the like. Immediately after extraction, galectin-7 is measured.
Thus, a cosmetic containing a component that has been confirmed to reduce galectin-7 is selected as a cosmetic suitable for those who complain of rough skin.
下記実施例には、化粧料に配合される成分で、上記スクリーニングによってガレクチンの産生を低減することが確認できた物質としてガラクトース、セイヨウシロヤナギエキス、カニナバラエキスを例示している。
この試験を化粧料に配合する成分について実施し、得られた情報を蓄積しておけば、荒れ肌を愁訴する者の化粧料を選択するにあたり、皮膚のガレクチン−７量と対比することで適切な化粧料を選択することができる。
以下、具体的な実施例について説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
In the following examples, galactose, white willow extract, and canina rose extract are exemplified as substances that are blended in cosmetics and have been confirmed to reduce galectin production by the above screening.
If this test is carried out for ingredients to be blended in cosmetics and the information obtained is accumulated, it is appropriate to select the cosmetics for those complaining of rough skin by comparing with the amount of galectin-7 in the skin. Cosmetics can be selected.
Hereinafter, specific examples will be described, but the present invention is not limited to the following examples.
１．ヒトの部位別のガレクチン-７の発現量の測定
＜被験者＞
健常肌を有する男女３５名（アトピー性皮膚炎（ＡＤ）既往者含む）の頬、前腕内側部、臀部からサンプルを採取した。
＜角層サンプル抽出方法、タンパク定量＞
被験者の頬、腕、臀部に角層チェッカー(アサヒバイオメッド社)を貼り付け、角層を採取した。角層チェッカーからビーズ法（容器に検体と直径約2mmのガラスビーズと抽出液を入れて振盪抽出する方法）にてT-PER抽出バッファー（Tissue Protein Extraction Reagent Thermo Scientific製（product# 78510)500μlを用いて角層タンパク質の抽出を行った。各サンプルのタンパク質量はPierce BCA protein Assay Kit (Thermo Scientific #23225)で測定した。測定には前記角層タンパク質抽出液10μlにPierce BCA protein Assay Kitの反応試薬液200μlを加え、60℃で30分間インキュベーションしたのち、562nmの吸光度を測定した。同時にBSAで検量線をひき、吸光度の値からタンパク質量を算出した。
1. Measurement of the expression level of galectin-7 by human site <subject>
Samples were taken from the cheeks, inner forearm, and buttocks of 35 men and women with healthy skin (including those with a history of atopic dermatitis (AD)).
<Corn layer sample extraction method, protein determination>
A stratum corneum checker (Asahi Biomed) was attached to the subject's cheek, arm, and buttocks, and the stratum corneum was collected. From the stratum corneum checker, add 500 μl of T-PER extraction buffer (Tissue Protein Extraction Reagent Thermo Scientific (product # 78510) by the method of shaking and extracting the sample, glass beads with a diameter of about 2 mm and the extract into a container) The stratum corneum protein was extracted using the Pierce BCA protein Assay Kit (Thermo Scientific # 23225), which was measured using the Pierce BCA protein Assay Kit reaction in 10 μl of the stratum corneum protein extract. After adding 200 μl of the reagent solution and incubating for 30 minutes at 60 ° C., the absorbance at 562 nm was measured, and at the same time, a calibration curve was drawn with BSA, and the protein amount was calculated from the absorbance value.
＜角層中のガレクチン-7の測定＞
同様にテープから抽出した角層タンパク質抽出液をR&D systemsのELISAキット(galectin-7：DY1339E)を用いてガレクチン-7の発現量を測定した。まず、costar製の96wellプレート#3590に1次抗体となる固相化抗体をキット指定の濃度で20℃、overnightで固相化した。次に1%BSA、37℃で1時間プレートをブロッキングし、0.01% Tween-PBSでプレートを洗浄したのち、検量線となるスタンダードおよびサンプルを100μlずつアプライし、25℃で2時間インキュベーションした。0.01% Tween-PBSでプレートを洗浄したのち、2次抗体をキット指定濃度で25℃で2時間インキュベーションした。さらに、0.01% Tween-PBSでプレートを洗浄したのち、Streptavidin-HRPをキット指定濃度で25℃で30分間インキュベーションした。最後に、0.01% Tween-PBSでプレートを洗浄したのち、発色基質であるTMB solution (Promega, G7431))を100μl/wellで加え、キット指定の時間を経過した後、stop solution (0.5M 硫酸)を100μl加え、450nmの吸光度を測定し、発現量を算出した。
<Measurement of galectin-7 in stratum corneum>
Similarly, the expression level of galectin-7 was measured using an R & D systems ELISA kit (galectin-7: DY1339E) from the stratum corneum protein extract extracted from the tape. First, a solid phased antibody as a primary antibody was immobilized on a costar 96 well plate # 3590 at 20 ° C. and overnight at a concentration specified by the kit. Next, the plate was blocked with 1% BSA at 37 ° C. for 1 hour, and the plate was washed with 0.01% Tween-PBS. Then, 100 μl of a standard and a sample to be a calibration curve were applied and incubated at 25 ° C. for 2 hours. After washing the plate with 0.01% Tween-PBS, the secondary antibody was incubated at 25 ° C. for 2 hours at the kit-specified concentration. Furthermore, after washing the plate with 0.01% Tween-PBS, Streptavidin-HRP was incubated at 25 ° C. for 30 minutes at the kit-specified concentration. Finally, after washing the plate with 0.01% Tween-PBS, add chromogenic substrate TMB solution (Promega, G7431)) at 100 μl / well, and after a specified time, stop solution (0.5 M sulfuric acid) 100 μl was added, the absorbance at 450 nm was measured, and the expression level was calculated.
＜結果＞
測定結果を図１に示す。
図１から明らかなように、日常的に外界刺激に晒されている頬は、いわゆる荒れ肌の通常出現しない腕や臀部（お尻）に比して顕著にガレクチン-７の発現量が高まっていることが確認できた。この試験結果から、荒れ肌の指標としてガレクチン-７が有用であることが明らかとなった。
<Result>
The measurement results are shown in FIG.
As is apparent from FIG. 1, the expression level of galectin-7 is markedly increased in cheeks that are exposed to external stimuli on a daily basis, compared to arms and buttocks (buttocks) that do not normally have so-called rough skin. I was able to confirm. From this test result, it was revealed that galectin-7 is useful as an index of rough skin.
２．人工的荒れ肌モデルにおけるガレクチン-７の発現量の変化
健常肌の女性１４名を被験者として試験を実施した。
＜SDSによる荒れ肌モデル作成＞
左前腕内側部に界面活性剤（ドデシル硫酸ナトリウム、以下SDS）10%溶液を2プッシュとり、100回往復する。お湯（35℃、1L）をかけ流し、界面活性剤を洗い流した。また対照として右前腕内側部にもお湯（35℃、1L）をかけ流した。この操作を1日4回、1回の操作に1時間以上空けた状態で繰り返した。これを2日間続け荒れ肌モデルを人工的に作成した。
＜角質採取＞
ＳＤＳ洗浄なし、洗浄ありのそれぞれの部分の角層を4枚ずつ深さ方向に採取した。角層を採取した日は洗浄前と洗浄後4、8、12日目に採取した。
＜角層サンプル抽出、タンパク定量、ガレクチン-7の測定＞
上記１．の方法と同様に測定した。
2. Changes in the expression level of galectin-7 in an artificial rough skin model A test was conducted with 14 women with normal skin as subjects.
<Create rough skin model by SDS>
Take 2 pushes of a 10% surfactant (sodium dodecyl sulfate, hereinafter SDS) solution to the inner side of the left forearm and reciprocate 100 times. Hot water (35 ° C, 1 L) was poured to wash away the surfactant. As a control, hot water (35 ° C, 1 L) was also applied to the inner side of the right forearm. This operation was repeated 4 times a day, with one operation more than an hour away. This was continued for 2 days, and a rough skin model was artificially created.
<Extracting keratin>
Four stratum corneum samples were collected in the depth direction without SDS cleaning and with cleaning. The days when the stratum corneum was collected were collected before washing and on days 4, 8, and 12 after washing.
<Extraction of stratum corneum sample, protein quantification, measurement of galectin-7>
Above 1. Measurement was performed in the same manner as in the above method.
＜結果＞
被験者の個別測定結果を図２に示した。荒れ肌作成処理後8〜12日目にガレクチン-７の測定結果が顕著に上昇することが確認された。
<Result>
The individual measurement results of the subjects are shown in FIG. It was confirmed that the measurement result of galectin-7 markedly increased 8 to 12 days after the rough skin preparation treatment.
＜アセトンによる荒れ肌モデル作成＞
健常肌の女性３名を被験者として試験を実施した。
上下があいたガラス製ロート(径3cm)をゴムバンドで固定し、アセトン(WAKO特級）/ジエチルエーテル (WAKO特級）等量混液をロート内にピペットマンで2ml注入し、シェーカーの上に両腕を置いて20分間処置した。
次にロート内のアセトン/ジエチルエーテル混液をスポイトで除いた後、水道水を注入し、シェーカーの上に両腕を置き5分間処置した（脱脂処置）。翌日、同一部分に同様に操作して再度脱脂処置を行い、乾燥皮膚を作成した。また水道水のみで処理した部位を対照とした。
＜角質採取＞
アセトン無処理、処理部位の角層を4枚ずつ深さ方向に採取した。採取した日はアセトン処理前日、アセトン処理後1、5、8、12、16、20日目に採取した。
＜角層サンプル抽出、タンパク定量、ガレクチン-7の測定＞
上記１の試験方法と同様に操作した。
<Creating rough skin model with acetone>
The test was conducted using three women with normal skin as subjects.
Fix the glass funnel (diameter 3cm) with the top and bottom with a rubber band, inject 2ml of acetone (WAKO special grade) / diethyl ether (WAKO special grade) equal volume into the funnel with a pipetman, and place both arms on the shaker. Treated for 20 minutes.
Next, after the acetone / diethyl ether mixture in the funnel was removed with a dropper, tap water was injected, and both arms were placed on a shaker and treated for 5 minutes (degreasing treatment). On the next day, the same part was operated in the same manner to degrease again, and dry skin was created. Moreover, the site | part treated only with tap water was set as the control.
<Extracting keratin>
Four layers of stratum corneum were collected in the depth direction without treatment with acetone. The samples were collected on the day before the acetone treatment and on the first, fifth, eighth, twelfth, sixteenth and twentieth days after the acetone treatment.
<Extraction of stratum corneum sample, protein quantification, measurement of galectin-7>
The same operation as in the above test method 1 was performed.
＜結果＞
被験者の個別測定結果を図３に示した。荒れ肌作成処理後８〜１２日目にガレクチン-７の測定結果が顕著に上昇することが確認された。
以上の荒れ肌モデル作製試験の結果から荒れ肌の発生に伴ってガレクチン-７が上昇することが確認された。
<Result>
The individual measurement results of the subjects are shown in FIG. It was confirmed that the measurement result of galectin-7 markedly increased 8 to 12 days after the rough skin preparation treatment.
From the results of the rough skin model preparation test described above, it was confirmed that galectin-7 increased with the occurrence of rough skin.
３．健常肌の者のガレクチン-７の測定
＜被験者＞
健常肌の男女６０８名（アトピー性皮膚炎既往者を含む）の頬サンプルを採取しガレクチン-７の分布を確認した。またうち３５名の被験者については、従来の荒れ肌の評価指標である経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を測定し、ガレクチン-７の測定結果との相関関係の有無を確認した。
＜角層サンプル抽出方法、タンパク定量＞
上記１．と同様に被験者の頬に角層チェッカー(アサヒバイオメッド社)を貼り付け、角層を採取した。
＜角層中のガレクチン-７の測定測定＞
上記１．と同様にテープから抽出した角層タンパク質抽出液をR&D systemsのELISAキット(galectin-7：DY1339E,)を用いてgalectin-7の発現量を測定した。
＜経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ（transepidermal water loss）値＞
ＴＥＷＬはキーストン社のDelfinを用いて2回ずつ測定した平均値を解析に用いた。
3. Measurement of galectin-7 in healthy skin <subject>
Cheek samples of 608 men and women with healthy skin (including those with a history of atopic dermatitis) were collected to confirm the distribution of galectin-7. Of these 35 subjects, transepidermal water transpiration (TEWL), which is a conventional evaluation index for rough skin, was measured, and the presence or absence of a correlation with the measurement result of galectin-7 was confirmed.
<Corn layer sample extraction method, protein determination>
Above 1. In the same manner as above, a stratum corneum checker (Asahi Biomed) was applied to the subject's cheek, and the stratum corneum was collected.
<Measurement measurement of galectin-7 in stratum corneum>
Above 1. In the same manner as above, the expression level of galectin-7 was measured using the R & D systems ELISA kit (galectin-7: DY1339E) from the stratum corneum protein extract extracted from the tape.
<Transepidermal water loss (TEWL) value>
TEWL used for analysis the average value measured twice using Delston from Keystone.
＜結果＞
６０８名のガレクチン-７測定結果を表１及び図４に示す。
<Result>
The measurement results of 608 galectins-7 are shown in Table 1 and FIG.
表１、図４によると、健常肌の者の頬の皮膚のガレクチン-７は、435pg/μg以内に80%が属することがあきらかとなった。また被験者の聞き取り調査から、アトピー性皮膚炎の既往者や肌荒れしやすいなどの自覚を持つ者は、大半が500pg/μg以上のガレクチン-７を示すことが確認された。したがって、例えばガレクチン-７の測定値500pg/μgを荒れ肌の指標とすることができる。 According to Table 1 and FIG. 4, it was revealed that 80% of galectin-7 on the cheek skin of healthy skin belongs to within 435 pg / μg. In addition, according to interviews with the subjects, it was confirmed that the majority of those with a history of atopic dermatitis and those with a tendency to rough skin show galectin-7 of 500 pg / μg or more. Therefore, for example, a measured value of 500 pg / μg of galectin-7 can be used as an index of rough skin.
またＴＥＷＬとの相関を図５に示す。
ガレクチン-７とＴＥＷＬには一定の相関関係が存在することが確認できた。
以上の試験結果からガレクチン-７の測定は、荒れ肌の指標として有用であった。さらにＴＥＷＬでは検出できない潜在的な荒れ肌の検出が可能であるものと判断した。
The correlation with TEWL is shown in FIG.
It was confirmed that there was a certain correlation between galectin-7 and TEWL.
From the above test results, measurement of galectin-7 was useful as an index of rough skin. Furthermore, it was determined that potential rough skin that cannot be detected by TEWL can be detected.
４．ヒト３次元培養表皮モデルを用いたガレクチン-７の産生低減剤の試験及びヒト３次元培養表皮モデルの経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）測定
１．皮膚バリア機能を改善または経表皮水分蒸散量を抑制する剤の選択
（１）細胞
ヒト３次元培養表皮モデルを用いた。
ヒト３次元培養表皮モデルとして、LabCyte EPI-MODEL24ウェルタイプ（エピ・モデル２４、株式会社ジャパンティッシュエンジニアリング製）を用いて、ヒト３次元培養表皮モデルの細胞中のガレクチン−７の抑制能を評価した。
ヒト３次元培養表皮モデルについて、ゲル培養から液体培地へ培地交換し、一晩37℃5%CO2インキュベータにて前培養した。なおヒト３次元培養表皮モデルはヒト表皮の状態を生理的、機能的に再現したインビトロモデルとして利用されている。
4). 1. Test of galectin-7 production reducing agent using human three-dimensional cultured epidermis model and measurement of transepidermal water transpiration (TEWL) of human three-dimensional cultured epidermis model Selection of agents that improve skin barrier function or suppress transepidermal water transpiration (1) Cells A human three-dimensional cultured epidermis model was used.
LabCyte EPI-MODEL24 well type (Epi Model 24, manufactured by Japan Tissue Engineering Co., Ltd.) was used as a human three-dimensional cultured epidermis model to evaluate the inhibitory ability of galectin-7 in cells of the human three-dimensional cultured epidermis model. .
For the human three-dimensional cultured epidermis model, the medium was changed from gel culture to liquid medium, and precultured overnight in a 37 ° C. 5% CO 2 incubator. The human three-dimensional cultured epidermis model is used as an in vitro model that physiologically and functionally reproduces the state of the human epidermis.
（２）試験サンプル
セイヨウシロヤナギエキス、カニナバラエキス、ガラクトース、ラクトフェリン、セラミド２とセラミド５混合物の５成分を選択した。
(2) Test sample Five components of white willow extract, canina rose extract, galactose, lactoferrin, ceramide 2 and ceramide 5 mixture were selected.
（３）ガレクチン-７産生低減試験及びＴＥＷＬ測定１（セイヨウシロヤナギエキス、カニナバラエキス）
ヒト３次元培養表皮モデルが搭載された培養カップに被験物質を表２に示す濃度で添加し、24時間37℃5%CO2インキュベータ中で培養した。
(3) Galectin-7 production reduction test and TEWL measurement 1 (Apiaceae extract, Canina rose extract)
A test substance was added to a culture cup equipped with a human three-dimensional cultured epidermis model at the concentration shown in Table 2, and cultured in a 37 ° C. 5% CO 2 incubator for 24 hours.
培養終了後、３次元培養表皮モデルをＰＢＳ(−)で洗浄した。ついで、ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム、Wako）を0.03%の濃度で添加し、4時間後、ＰＢＳ(−)で洗浄した。
ＰＢＳ(−)で洗浄後、培養カップ上の経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）をフランツセル型アダプター付属のポータブル水分蒸散計（VapoMeter、Delfin製）で同一検体を2回測定し、平均値をＴＥＷＬ値として算出した。ＴＥＷＬ測定結果は図７に示す。測定回数は３回とし、グラフ中に標準偏差を示した。
ヒト３次元培養表皮モデルのヒト表皮組織をサンプルチューブ（TM-626 2.0ml容）に移し、ZB-50（ジルコニア5.0φ）1個とcell lysis buffer350μL加えて、ビーズ式細胞破砕装置を用いて2,800rpm120秒間ホモジナイズして、ホモジネート溶液を得た。このホモジネート溶液を、４，４００Ｇで遠心分離しして混入するポリカーボネート膜や不溶性タンパク質を沈殿物させて分離した。
上澄液をDeep plateに移し、ガレクチン−７濃度およびタンパク量を測定した。
なお、ガレクチン-７の測定は、Human Galectin-7 DuoSet Economy Pack（R&D Systems Inc.）を用い、３回測定し、結果を平均値±標準偏差で表した（図８）。
セイヨウシロヤナギエキス、カニナバラエキスはいずれもヒト３次元培養表皮モデルの荒れ肌を改善してＴＥＷＬを低減するとともに、ガレクチン-７産生を低減した。
After completion of the culture, the three-dimensional cultured epidermis model was washed with PBS (−). Subsequently, SDS (sodium dodecyl sulfate, Wako) was added at a concentration of 0.03%, and after 4 hours, washed with PBS (−).
After washing with PBS (-), the transepidermal moisture transpiration (TEWL) on the culture cup was measured twice with the portable moisture transpiration meter (VapoMeter, manufactured by Delfin) attached to the Franz cell adapter, and the average value was measured with TEWL. Calculated as value. The TEWL measurement results are shown in FIG. The number of measurements was 3, and the standard deviation was shown in the graph.
Transfer human epidermis tissue of human three-dimensional cultured epidermis model to sample tube (TM-626 2.0ml), add 1 ZB-50 (zirconia 5.0φ) and cell lysis buffer 350μL, and use bead type cell crusher 2,800 Homogenization was performed at rpm for 120 seconds to obtain a homogenate solution. This homogenate solution was centrifuged at 4,400 G to separate and separate the contaminated polycarbonate membrane and insoluble protein.
The supernatant was transferred to a deep plate, and galectin-7 concentration and protein amount were measured.
Galectin-7 was measured three times using Human Galectin-7 DuoSet Economy Pack (R & D Systems Inc.), and the results were expressed as mean ± standard deviation (FIG. 8).
Both the white willow extract and canina rose extract improved the rough skin of the human three-dimensional cultured epidermis model, reduced TEWL, and reduced galectin-7 production.
（４）ガレクチン産生低減試験及びＴＥＷＬ測定２（ガラクトース）
上記と同様にしてガラクトースをヒト３次元培養表皮モデルに添加しガレクチン-７を測定した。試験に用いたガラクトース試料は培養液中で表３に示す濃度になるように調整し、添加した。
(4) Galectin production reduction test and TEWL measurement 2 (galactose)
In the same manner as described above, galactose was added to a human three-dimensional cultured epidermis model, and galectin-7 was measured. The galactose sample used for the test was adjusted to the concentration shown in Table 3 in the culture solution and added.
ＴＥＷＬ測定は、フランツセル型アダプター付属のポータブル水分蒸散計（VapoMeter、Delfin製）を用いて同様に行った。結果を図９に示す。
ガレクチン-７の測定は、同様にHuman Galectin-7 DuoSet Economy Pack（R&D Systems Inc.）を用い、３回測定し、結果を平均値±標準偏差で表した（図１０）。
ガラクトースはヒト３次元培養表皮モデルのガレクチン-７産生を抑制した。
The TEWL measurement was similarly performed using a portable moisture transpiration meter (VapoMeter, manufactured by Delfin) attached to a Franz cell type adapter. The results are shown in FIG.
Galectin-7 was similarly measured using Human Galectin-7 DuoSet Economy Pack (R & D Systems Inc.) three times, and the results were expressed as mean ± standard deviation (FIG. 10).
Galactose suppressed galectin-7 production in a human three-dimensional cultured epidermis model.
（５）ガレクチン−７産生低減試験３（ラクトフェリン）
市販の化粧品原料であるラクトフェリンＳ（一丸ファルコス株式会社製）をＰＢＳで20倍または100倍に希釈して上記と同様にヒト３次元培養表皮モデルに添加しガレクチン-７を測定した。
なお20倍希釈物をラクトフェリン１、100倍希釈物をラクトフェリン２として以下の結果に表示している。
(5) Galectin-7 production reduction test 3 (lactoferrin)
Lactoferrin S (manufactured by Ichimaru Falcos Co., Ltd.), a commercially available cosmetic raw material, was diluted 20-fold or 100-fold with PBS and added to a human three-dimensional cultured epidermis model as described above, and galectin-7 was measured.
In the following results, 20-fold dilution is lactoferrin 1 and 100-fold dilution is lactoferrin 2.
ガレクチン-７の測定は、前記（３）の試験と同様にHuman Galectin-7 DuoSet Economy Pack（R&D Systems Inc.）を用い、３回測定し、結果を平均値±標準偏差で表した（図１１）。
図１１に示すように、ラクトフェリンはヒト３次元培養表皮モデルのガレクチン-７産生を抑制しなかった。
Galectin-7 was measured three times using Human Galectin-7 DuoSet Economy Pack (R & D Systems Inc.) in the same manner as in the test of (3) above, and the result was expressed as an average value ± standard deviation (FIG. 11). ).
As shown in FIG. 11, lactoferrin did not suppress galectin-7 production in the human three-dimensional cultured epidermis model.
(6) ガレクチン産生低減試験及びＴＥＷＬ測定４（セラミド２とセラミド５混合物）
市販の化粧品原料であるセラミド２およびセラミド５等量混合し、０．５％水添レシチンで４０００倍に希釈してセラミド２とセラミド５の混合溶液を調整した。この混合溶液にはセラミド２とセラミド５が合わせて250μｇ／ｍｌ含有されている。この混合溶液を、上記と同様にヒト３次元培養表皮モデルにセラミド２とセラミド５がそれぞれ12.5μｇ/ｍｌになるように添加した。またＳＤＳ負荷後のヒト３次元培養表皮モデルに同様に添加し、培養した。培養終了後にＴＥＷＬ測定し、次いでヒト３次元培養表皮モデル中のガレクチン-７量を測定した。
ＴＥＷＬ測定は、フランツセル型アダプター付属のポータブル水分蒸散計（VapoMeter、Delfin製）を用いて同様に行った。結果を図１１に示す。
ガレクチン-７の測定は、同様にHuman Galectin-7 DuoSet Economy Pack（R&D Systems Inc.）を用い、２回測定し、結果を平均値で表した（図１２）。
(6) Galectin production reduction test and TEWL measurement 4 (ceramide 2 and ceramide 5 mixture)
An equal amount of ceramide 2 and ceramide 5 which are commercially available cosmetic ingredients were mixed and diluted 4000 times with 0.5% hydrogenated lecithin to prepare a mixed solution of ceramide 2 and ceramide 5. This mixed solution contains ceramide 2 and ceramide 5 in total of 250 μg / ml. In the same manner as above, this mixed solution was added to a human three-dimensional cultured epidermis model so that ceramide 2 and ceramide 5 were 12.5 μg / ml, respectively. Moreover, it added similarly to the human three-dimensional cultured epidermis model after SDS loading, and cultured. After completion of the culture, TEWL measurement was performed, and then the amount of galectin-7 in the human three-dimensional cultured epidermis model was measured.
The TEWL measurement was similarly performed using a portable moisture transpiration meter (VapoMeter, manufactured by Delfin) attached to a Franz cell type adapter. The results are shown in FIG.
Galectin-7 was similarly measured twice using Human Galectin-7 DuoSet Economy Pack (R & D Systems Inc.), and the results were expressed as average values (FIG. 12).
セラミド２およびセラミド５を12.5μｇ／ｍｌずつ含有する混合物はヒト３次元培養表皮モデルのＴＥＷＬ上昇を抑制し、ガレクチン-７産生を抑制した。 The mixture containing 12.5 μg / ml of ceramide 2 and ceramide 5 suppressed the increase in TEWL and the production of galectin-7 in the human three-dimensional cultured epidermis model.
以上の試験結果から、カニナバラ、セイヨウシロヤナギ、ガラクトース、セラミド２およびセミラド５混合物は皮膚のガレクチン-７産生を低減することが判明した。したがってこれらの成分を含有する化粧料は荒れ肌用の化粧料として選択される。 From the above test results, it was found that canina rose, white willow, galactose, ceramide 2 and semi-rad 5 mixture reduce skin galectin-7 production. Therefore, a cosmetic containing these components is selected as a cosmetic for rough skin.
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104345146A (en) | 2015-02-11 |
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