JP2014522417A - 新規脂質模倣化合物及びその使用 - Google Patents

新規脂質模倣化合物及びその使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2014522417A
JP2014522417A JP2014515312A JP2014515312A JP2014522417A JP 2014522417 A JP2014522417 A JP 2014522417A JP 2014515312 A JP2014515312 A JP 2014515312A JP 2014515312 A JP2014515312 A JP 2014515312A JP 2014522417 A JP2014522417 A JP 2014522417A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
carrier
drug
temperature sensitive
agents
paramagnetic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2014515312A
Other languages
English (en)
Other versions
JP6085296B2 (ja
JP2014522417A5 (ja
Inventor
グリュル,ホルガー
ランヘレイス,サンデル
ルブ,ヨハン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Koninklijke Philips NV
Original Assignee
Koninklijke Philips NV
Koninklijke Philips Electronics NV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Koninklijke Philips NV, Koninklijke Philips Electronics NV filed Critical Koninklijke Philips NV
Publication of JP2014522417A publication Critical patent/JP2014522417A/ja
Publication of JP2014522417A5 publication Critical patent/JP2014522417A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6085296B2 publication Critical patent/JP6085296B2/ja
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/02Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
    • C07C69/22Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen having three or more carbon atoms in the acid moiety
    • C07C69/28Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen having three or more carbon atoms in the acid moiety esterified with dihydroxylic compounds
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0028Disruption, e.g. by heat or ultrasounds, sonophysical or sonochemical activation, e.g. thermosensitive or heat-sensitive liposomes, disruption of calculi with a medicinal preparation and ultrasounds
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/085Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier conjugated systems
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10Organic compounds
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10Organic compounds
    • A61K49/101Organic compounds the carrier being a complex-forming compound able to form MRI-active complexes with paramagnetic metals
    • A61K49/103Organic compounds the carrier being a complex-forming compound able to form MRI-active complexes with paramagnetic metals the complex-forming compound being acyclic, e.g. DTPA
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10Organic compounds
    • A61K49/101Organic compounds the carrier being a complex-forming compound able to form MRI-active complexes with paramagnetic metals
    • A61K49/106Organic compounds the carrier being a complex-forming compound able to form MRI-active complexes with paramagnetic metals the complex-forming compound being cyclic, e.g. DOTA
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/18Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
    • A61K49/1806Suspensions, emulsions, colloids, dispersions
    • A61K49/1812Suspensions, emulsions, colloids, dispersions liposomes, polymersomes, e.g. immunoliposomes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1271Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1272Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127Liposomes
    • A61K9/1271Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A61K9/1273Polymersomes; Liposomes with polymerisable or polymerised bilayer-forming substances
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/02Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
    • C07C69/22Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen having three or more carbon atoms in the acid moiety
    • C07C69/33Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen having three or more carbon atoms in the acid moiety esterified with hydroxy compounds having more than three hydroxy groups
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07CACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/66Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety
    • C07C69/67Esters of carboxylic acids having esterified carboxylic groups bound to acyclic carbon atoms and having any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, acyloxy, groups, groups, or in the acid moiety of saturated acids
    • C07C69/708Ethers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本発明は、構造式Iを満たす化合物。
【化13】
Figure 2014522417

[ここで、Gは、式IIを満たし、
HO−CH−{CH(OH)−CH−O}−CH−{C(=O)−O−CHq―
式II
それぞれのnは独立して1から30の整数であり;mは1から10の整数であり;qは0又は1である。]を開示する。これらの化合物は、温度感受性リポソームの脂質二重層に添加され得るものであり、37℃でリポソーム含有物の漏れを防止し、循環からのクリアランスを抑制する。

Description

本発明は、薬物又は診断試薬の標的化局在送達のための温度感受性キャリア(担体)の分野に属する。本発明は脂質模倣化合物に関し、特に、含まれる温度感受性材料放出のために好適なリポソームなどのキャリアを含み、及び温度応答性放出キャリアの手段による薬物及び/又は造影剤の局在化送達に関する。
ほとんど1つの組織に局在化する多くの疾患は、全身投与された薬物で治療され得る。標準的癌治療のよく知られた例は、全身投与化学療法であり、これは望ましくない生体内分布及び毒性により前記患者へ大きな副作用を生じる結果となる。これらの薬剤の治療窓(可能範囲)は通常は、一方では前記疾患組織での治療濃度を必要と、他方では、標的とされていない肝臓、脾臓などの器官には毒性効果を最小化することが求められる。
例えば、ナノキャリアからの細胞増殖抑制剤の局所放出は、標準治療と比較してより効果的治療及びより広い治療窓を約束するものである。局所的薬物送達はまた、肝臓癌などの場合にしばしばおこる外科的治療などの他の治療選択肢が危険すぎる場合に重要となる。局所的薬物送達はまた、冠状動脈のアテローム性動脈硬化などの心血管疾患(CVD)の多くの適応症のための好ましい治療となってきている。
磁気共鳴(MRI)や超音波造影などの医学用造影技術は、治療計画で使用されるだけでなく、画像による案内の下で局所的薬物送達を制御するために使用され得る。収束超音波は、いくつかの利点を持つということから、局所的薬物送達を誘導するための好ましい方法である。この技術は、非侵襲性であり、疾患組織に収束させることができ、回りの組織に及ぼす悪影響は非常に限定的なものである。超音波は薬物送達のために2つの種類のトリガーを与え得る。第1は、前記標的化された組織が、体温から100℃までの温度範囲で、約1/2度の精度で制御されて加熱され得る、ということである。第2は、前記超音波は強い圧力振動であり、これにより機械力に基く薬物送達を促進する、ことである。
当業者は、薬物又は造影化合物などの材料放出のためのキャリアシステムを提供する際にいくつかの困難に直面している。従って、例えば前記キャリアシステムは、前記材料が十分な量で負荷され得るように設計される必要がある。特に、前記放出されるべき材料が薬物を含む場合、前記キャリアシステムは外部刺激に感受性であることが必要であり、前記刺激は例えば温度や圧力の(局所的)変化であり、これにより薬物の迅速かつ局所的放出を可能にするものである。さらに、前記薬物送達プロセスは完全に制御される必要があり、即ち治療サイトでの前記薬物放出はインビボで測定可能であり、薬物放出の量及び速度は続く刺激適用の決定のための入力パラメータとして利用される必要があり、それにより薬物送達が造影案内フィードバックループで制御され得るものとなる。
リポソーム薬物治療の効果の大きな改善は、外部刺激の手段により薬物の放出を引き起こす(トリガー)ことで得られ得る。包埋(カプセル化)分子の放出を引き起こすための1つの方法は温度感受性リポソームを使用することである。この場合、前記薬物放出は前記リポソーム膜の溶融相転移温度(Tm)を超える温度で生じる。Tmで、前記脂質膜の変化は、ゲル状態から液体状相へ変移することで生じる。この変移は、溶質及び水の前記膜への透過性を大きく増加させる。lyso−PC、アセチル化MPPC及び血小板活性化因子(PAF)などのリポソーム二重層内のホスファチジルコリンの導入は、前記リポソームの性質に大きな効果を与える。1988年、Brattonらは、これらの脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)系リポソームのTmを下げるために使用され得る、ということを示した。Needhamらは、lyso−PC/DPPC/DPPE−PEG2000からなる低温度感受性リポソーム(LTSL)を設計し、これは温和な温熱条件(39から42℃)に応じて秒の時間で包埋されたドキソルビシン(ThermoDox(登録商標))を放出するものである。前記Tmに近い温度で温度感受性システムの内部から水溶液を迅速に放出させることは、過渡的孔形成によるとされた。これらの孔は、lyso−PC及びPEG化リン脂質などのミセル形成リン脂質の存在下安定である。さらに、前記過渡的孔形成は、前記脂質二重層内の横方向拡散によりリゾ脂質の蓄積によるとされた。ドキソルビシンを負荷したlyso−PC(R=C15H31、図1)系LTSLと外部から適用された領域温度増加と組み合わせることは、温度誘導薬物送達の効果改善を示した。前記腫瘍でリポソーム蓄積に依存する代わりに、ドキソルビシンの温度感受性リポソーム製剤(処方物)を注入後1時間の間で温熱療法が適用された。この細胞増殖抑制剤は、前記腫瘍の微小血管に放出され、続いて腫瘍細胞に取り込まれた。ドキソルビシン負荷lyso−PC系LTSLは、針系RF切除と組み合わせて薬物送達に適用することに成功したが、37℃での血漿中でのリポソーム製剤の安定性は最適ではなく、1時間で40%までのドキソルビシン放出を示す。
被験者に、治療的及び/又は診断薬物を局所的に送達するための温度感受性キャリアの分野において、より長い循環時間、ヒトの正常温度(37℃)で活性物質のより少ない漏れ、及び前記システムからのより遅い除去(クリアランス)を可能とするキャリアを提供する必要性が存在する。
この要求に対処する参考文献として、Lars H.Lindnerらの、Clinical Cancer Research、2004、Volume 10、Issue 6、2168−2178が参照できる。ここで、リポソームは、DPPC(1、2−ジパルミトイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン)及びDSPC(1、2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン)に加えて第3の成分に基き製造される。かかる第3の成分は、DPPGOG(1、2−ジパルミトイル−sn−グリセロ−3−ホスホグリセログリセロール)である。得られる3成分リポソームは、37℃でより漏れが少なく、循環系からのクリアランスが少ないことを示す。
Lindnerらによる前記方法は構造的により複雑であり、リン脂質に限定されるものである。
Lars H. Lindner et al.、Clinical Cancer Research、2004、Volume 10、Issue 6、2168−2178.
従って望ましいことは、少なくとも同じ程度の37℃での漏れを防止し、少なくとも同じ程度のゆっくりとしたクリアランスを持ち、かつ複雑でないリポソーム構造に基づく、温度感受性リポソームを得るための合成ツールが与えられることである。さらに、望ましいことは、Lindnerらにより開示されるリポソームよりもより遅いクリアランスを示す温度感受性リポソームを与える合成ツールを提供することである。
前記要求を満たすために、1つの側面で本発明は式Iの化合物を提供する。
Figure 2014522417
ここで、Gは式IIを満たす基を表す。
HO−CH−{CH(OH)−CH−O}−CH−{C(=O)−O−CHq―
式II
ここでそれぞれのnは独立して1から30の整数であり;mは1から10の整数であり;qは0又は1である。
他の側面では本発明は温度感受性キャリアに関し、これはキャビティを囲む脂質二重層シェルを含み、前記脂質二重層が上で定めた1又は複数の化合物を含む。
さらなる側面で本発明は、上で定めた式Iの化合物の、温度感受性キャリアの脂質二重層シェルへの添加物としての使用である。
さらなる側面で、前記温度感受性キャリアは、治療又は診断薬物の局所的投与のために提供され、前記キャリアはキャビティを囲む脂質二重層シェル及び/又は前記薬物を含むキャビティを含み、前記脂質二重層が上で定めた式Iの化合物を含む。
他の側面では本発明は、治療及び造影方法それぞれへの、含まれる物質のインビボ放出での使用のための前記いずれかのキャリアに関し、動物、好ましくはヒトへの投与、及びそれに含まれる物質のインビボ放出に影響を与えることを含む。
図1は、前記脂質二重層に115、3(以下説明)を含み、水性内腔にドキソルビシンと[Gd(HPDO3A)(HO)]を含む、温度感受性リポソームのクライオ透過型電子顕微鏡(TEM)画像を示す。 図2は、115、3を含むTSLの内腔のドキソルビシンの包埋化(カプセル化)の時間経過を示すグラフである。 図3は、50%ウシ胎児血清(FBS)中に、115、3を含むTSLについて、37℃及び42℃でのドキソルビシンの高温での放出を示すグラフである。 図4は、50%ウシ胎児血清(FBS)中に、115、3を含むTSLの、25℃から55℃(加熱勾配は0.5℃/分)への直線的温度増加の間の蛍光を示す。
理解されるべきことは、本発明はここで記載された実施態様及び式には限定されないということである。さらに理解されるべきことは、特許請求の範囲で用語「含む」は、他の要素又はステップを除外するものではないということである。不定冠詞又は定冠詞が使用される場合、「1つの」、「前記」などの単数表現は、特に断りがない限り複数を含むものである。
本発明は、脂質二重層を含むキャリアに関する。具体的にはかかるシェルはキャビティを囲み、半透過性であり、通常リン脂質を含む。前記キャリアは、粒子サイズが数ミクロンから数十ミクロンであるミクロキャリア、及び粒子サイズが数十から数百ナノメートルであるナノキャリアを含む。本発明において、前記キャリアは以後リポソームとして参照される。
リポソームは一般的に、球状ベシクルであり、キャビティ又は内腔を囲む二重膜を含む。前記二重層は少なくとも1つのリン脂質からなり、コレステロールを含んでいても含まなくてもよい。リポソームは、天然由来のリン脂質と、混合脂質鎖(卵ホスファチジルエタノールアミンなど)とからなるか、又はジオレオイルホスファチジルコリンエタノールアミン(DOPE)などの純粋な界面活性成分からなり得る。用語リポソームは、本発明の説明で使用されるように、通常ミセルと記載される脂質球状物を含む。
半透過性シェルの典型的例はまた、リン脂質二重層を含む半透過性膜で見いだされる。リン脂質二重層は、小さい無電荷溶質に対して最も透過性である。リポソームは、リン脂質二重奏に基き製造され得る。
広い意味で、本発明は、さらなるリン脂質成分をリポソームの脂質二重層の構成部分とするよりはむしろ、前記脂質二重層内に別に取り込まれ得る脂質模倣化合物を提供するものである。前記化合物は、特に温度感受性リポソームなどの温度感受性キャリアの脂質二重層に混合されて前記キャリアの循環時間を延長させる効果を持つものである。
脂質模倣化合物
本発明は、1つの側面で、脂質模倣物自体を含む。この化合物は前記式(I)を満たす。好ましくは、前記化合物は、以下の式III、式IVの化合物、及びそれらの組み合わせ化合物からなる群から選択される。
Figure 2014522417
Figure 2014522417
ここで、前記整数m及びnは前記の意味を持つ。好ましくは、mは2から6、より好ましくは2から4及び最も好ましくは2又は3である。好ましくはそれぞれのnは独立して8から24、より好ましくはそれぞれ独立して12から18及び最も好ましくはそれぞれ独立して13、15又は17である。
Figure 2014522417
好ましい実施態様では、前記化合物は下式Vを満たすものであり、ここでGは前記の意味であり、r及びsはそれぞれ独立して1から30の整数を表し、差(r−s)は相対的に小さく、即ち10を下回り、好ましくは0から5であり、より好ましくは1から3である。
本発明の化合物は、温度感受性キャリアの脂質二重層に導入され得るものである。これらは一般的には、キャリアが製造される脂質内に混合することで導入される。これらは好ましくは、前記脂質二重層の5%から50%、好ましくは10%から30%で存在する。
温度感受性リポソームのリン脂質二重層内の本発明の脂質模倣化合物の導入は、既定温度で薬物の迅速かつ定量的放出を可能にする。この温度誘導転移はまた、導入された造影プローブの加熱による放出のために利用され得る(例えば、T、T、CEST MRI造影剤)。さらには、脂質模倣物の導入は、MR造影案内薬物送達の分野で重要な、体温と温熱療法間でMR造影強化を最大化するために膜間水交換速度を調節するために利用され得る。さらに、前記脂質模倣物は電荷を持たず、これによりゼータ電位はLindnerらのリン酸基を含む脂質の場合に比較してより負とはならず、前記リポソームのゼータ電位に正の効果を与える。
得られたリポソームは、DPPGOG系の前記リポソームと同じ程度又はより長い循環挙動を示すことが可能となる。
リン脂質
好ましい脂質二重層(一般的に脂質から作製され得る)はリン脂質に基づくものである。
リン脂質は、一般的に、ホスファチジルコリン、ホスファチジル−エタノールアミン、ホスファチジルセリン及びホスファチジル−イノシトールとして参照される。本発明では、好ましくはホスファチジルコリンを使用する。
温度感受性キャリア
本発明は、温度感受性であるキャリアに関する。これは、前記キャリアの物理的又は化学的状態がその温度に依存することを意味する。
興味対象分子を包み込み、体温(即ち37℃)では変化せず、被験者が耐えることができる他の非体温で破壊される全ての温度感受性キャリアが使用され得る。本発明のキャリアは、限定されるものではないが、温度感受性ミクロ粒子及びナノ粒子、温度感受性ポリマーソーム、温度感受性リポソーム、温度感受性ナノベシクル及び温度感受性ナノ球体を含む。
前記温度感受性ナノベシクルは一般的に、100nmまでの直径を持つ。この発明において、100nmを超え、通常5000nmまでのベシクルはミクロベシクルと考えられる。用語ベシクルとは全てのタイプのミクロ又はナノベシクルを記載する。リポソームベシクルなどのベシクルは、一般的に、任意興味対象物質を含むキャビティを含む。これは本発明では、前記のように好ましい。
温度感受性ポリマーソームは、限定されるものではないが、全てのポリマーベシクルを含み、これはミクロベシクル及びナノベシクルを含む。温度感受性リポソームは、限定されるものではないが、全てのリポソームを含み、これは例えばPEG化リポソームなどの長い半減期を持つものを含む。
本発明で使用する温度感受性リポソームは、理想的にはその構造を37℃、即ちヒト体温で保持されるが、高温、好ましくは前記ヒト体温よりもわずかに高い温度、好ましくは発熱体温を超える温度で破壊されるものである。通常は約42℃が、熱案内薬物送達のための非常に有用な温度である。
前記温度感受性キャリア破壊を促進するように温度感受性薬物キャリアの温度を上げるために必要な熱が使用され得る。熱は、全ての生理的に許容され得る方法により適用できるが、好ましくは、高い局所発熱を誘導することが可能な収束エネルギー源の使用による。前記エネルギーは、例えばマイクロ波、超音波、磁気誘導、赤外線又は光エネルギーにより与えられる。
温度感受性リポソームは、当技術分野で知られている。本発明によるリポソームは当技術分野で知られる種々の技術で製造され得る。例えば、米国特許第4、235、871号;国際公開第96/14057号;New RRC、Liposomes:A practical approach、IRL Press、Oxford(1990)、33−104;Lasic、D.D.、Liposomes from physics to applications、Elsevier Science Publishers、Amsterdam、1993;Liposomes、Marcel Dekker、Inc.、New York(1983)などである。
本発明のリポソーム内に薬物又は他の物質を取り込むことは、また、全ての従来方法を用いて実施され得る。本発明のリポソーム組成物を製造する際に、酸化防止剤などの安定化剤及び他の添加物が、本発明の目的を実質的に阻害しない限り使用され得る。
薬物キャリア
1つの側面で、本発明は、薬物などの生物的活性成分(生物活性剤)の局所的送達のために好適なキャリアに関する。以下用語「生物的活性成分」とは、短く「薬物」とし、前記キャリアを「薬物キャリア」とする。本発明において薬物キャリアとは、被験者の体内で放出され得るように生物活性成分がその上に又はその中に含まれる材料を意味する。
前記薬物キャリアはMRIの対象とされるヒトの体内に導入される。これは、例えば血液中への注射、又は体液中へ前記キャリアを導入する他の方法でなされ得る。
薬物は、治療、介護、予防、又は疾患又は障害の診断のために使用され、又は生理的又は精神的健康のために使用される化学物質である。本発明に含まれる案内送達は、ほとんどの場合治療剤(即ち厳密な意味で薬物であり、疾患又は障害の治療又は予防のためのものである)であるが、また、診断目的で投与される試薬のためでもある。他の生物活性成分(即ち機能性食品成分などの治療又診断剤ではない)は、一般的には、案内及び/又はモニターされた送達の対象ではないが、望まれる場合には本発明を用いて行える。
本発明の最適な使用は、標的化治療即ち、標的化送達のための薬物の場合に達成されるものであり、というのはかかる送達は本発明により利用可能となるモニターすることから最も利益を得るからである。これには、例えばそこに送達されるべき腫瘍治療における成分、冠状動脈のアテローム性動脈硬化症などの心血管障害の治療又は予防での成分、又は抗血栓剤又は、てんかん、アルツハイマー病、パーキンソン病又は脳卒中などの治療で使用され得るような神経修飾物質などの血液脳関門を通過する必要がある剤を含む。
標的化薬物送達の案内及びモニターから得られる利点はまた、標的化診断剤にも応用可能である。標的化治療と同様に、ここではまた癌が位置特異的送達が重要となる分野である。
本発明の使用に好適な生物活性剤は、生物学的に活性な成分(剤)を含み、治療薬物、内因性分子、及び抗体を含む薬学的に活性な剤;栄養分子;化粧剤;診断剤;及びイメージングのための追加の造影剤を含む。ここで使用されるように、活性剤は活性剤の薬学的に許容される塩を含む。
本発明の薬物キャリアは、親水性又は疎水性生物活性剤のいずれも含み得る。親水性生物活性剤は、前記キャリア内の水性区画に包埋され、一方疎水性生物活性剤は前記キャリアの疎水性領域、例えばリポソームの脂質二重層に導入され得る。核酸、炭水化物及び、一般的にタンパク質及びペプチドは水溶性であるか親水性である。例えば、小分子、脂質、リポ多糖類、ポリヌクレオチド及びアンチセンスヌクレオチド(遺伝子治療剤)がまた含まれる。導入され得る、かかる生物活性剤は、従って非ペプチド、非タンパク質薬物を含む。本発明において、ポリマー性の薬物を導入することが可能であり、また、分子量が1500g/molの比較的小さい分子、又は500g/molよりも小さい分子も導入され得る。
従って本発明において生物活性剤としての使用に含まれる化合物は、治療又は予防効果のある全ての化合物を含む。これは、組織成長、細胞成長、細胞分化に影響する化合物、免疫応答などの生体作用を起こす化合物又は1又は複数の生物過程でいずれかの役割を果たす化合物である。非限定的例示は、抗菌剤(抗菌、抗ウイルス剤および抗真菌剤を含む)、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤、トロンビン阻害剤、抗血栓薬、血栓解剤、線維素溶解薬、攣縮インヒビター、カルシウムチャネル遮断薬、血管拡張薬、降圧剤、抗菌剤、抗生物質、表面糖タンパク質受容体の阻害剤、抗血小板薬、抗有糸分裂、微小管阻害剤、抗分泌剤、アクチン阻害剤、リモデリングの阻害、抗代謝産物、抗増殖剤(抗血管新生剤を含む)、抗癌化学療法剤、ステロイド抗炎症または非ステロイド性抗炎症剤、免疫抑制剤、成長ホルモン拮抗薬、成長因子、ドーパミンアゴニスト、放射線治療の薬剤、細胞外マトリックス成分、ACE阻害薬、フリーラジカルスカベンジャー、キレート剤、酸化防止剤、抗ポリメラーゼ、と光線力学療法剤である。
比較的小さいペプチドはアミノ酸の数(例えば、ジ、トリ、テトラペプチドなど)で参照される。アミノ結合に比較的少ない数のペプチドはまた、オリゴペプチドと呼ばれ(50アミノ酸まで)、一方比較的多い数(50アミノ酸を超える)のペプチドはポリペプチド又はタンパク質と呼ばれる。アミノ酸残基ポリマーであることに加えて、あるタンパク質はさらに、いわゆる四次構造で特徴付けられ、これはいくつかのポリペプチドの集合体であり、アミド結合で化学的に結合することは必ずしも必要ではなく、一般的に当業者に知られる、静電力やファンデルワールス力などので結合されたものである。用語、ペプチド、タンパク質又はこれらの混合物とは、ここでは全ての前記説明した可能性を含む。
通常は、タンパク質及び/又はペプチドはその生物活性に基き選択される。選択されるポリマーに依存して、本発明の製造方法で得られる生成物は、タンパク質及びペプチドの制御放出のために非常に適するものである。具体的な実施態様では、タンパク質及びペプチドは成長因子である。
負荷されたポリマー中に有利に含まれ得る、ペプチド又はタンパク質を含むペプチド又はタンパク質又は物質の他の例は、限定されるものではないが、免疫ペプチド又は免疫タンパク質であり、これには限定されるものではないが、次のものが含まれる。
ジフテリア毒素と破傷風毒素などの毒素。
アデノウイルス、エプスタイン−バールウイリス、肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、ヘルペスウイルス、HIV−1、HIV−2、HTLV−III、インフルエンザウイルス、日本脳炎ウイルス、麻疹ウイルス、パピローマウイルス、パラミクソウイルス、ポリオウイルス、狂犬病ウイルス、風疹ウイルス、ワクシニア(天然痘)ウイルス及び黄熱病ウイルスなどのウイルス表面抗原またはウイルス断片。
百日咳菌、ヘリコバクターピロリ、破傷風菌、コリネバクテリウム・ジフテリア、大腸菌、インフルエンザ菌、クレブシエラ属、レジオネラニューモフィラ、ウシ型結核菌、結核らい、ミコバクテリウム結核、淋菌、髄膜炎菌、プロテウス属、緑膿菌、サルモネラ属、シゲラ属、黄色ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、ビブリオコレラやエルシニアペスト菌などの最興味領域表面抗原又はその断片。
三日熱マラリア原虫(マラリア)、熱帯熱マラリア原虫(マラリア)、卵形マラリア原虫(マラリア)、四日熱マラリア原虫(マラリア)、熱帯リーシュマニア(リーシュマニア症)、ドノバンリーシュマニア(リーシュマニア症)、リーシュマニアブランジリエンシス(リーシュマニア症)、トリパノソーマロードセンス(睡眠病)、トリパノソーマガンビア(睡眠病)、クルーズトリパノソーマ(シャーガス病)、マンソン住血吸虫(住血吸虫症)、ビルハルツ住血吸虫(住血吸虫症)、日本住血吸虫(住血吸虫症)、旋毛(旋毛虫症)、ストロンギロイデス十二指腸(鉤虫)、アンシクロストマ十二指腸(鉤虫)、アメリカ鉤虫(鉤虫)、ブケリアバンクロフト(フィラリア)、マレーマラヤ(フィラリア)、ロアロア(フィラリア)、ジペタロネマペルスタリス(フィラリア)、ドラクンクラメジメンシス(フィラリア)、および回旋糸状虫(フィラリア)などの疾患原因帰省中の表面抗原又はその断片。
IgG、IgA、IgMなどの免疫グロブリン、抗狂犬病免疫グロブリン及び抗牛痘免疫グロブリン。
ボツリヌス抗毒素、ジフテリア抗毒素、ガス壊疽抗毒素、破傷風抗毒素などの抗毒素。
口蹄疫に対する免疫応答を引き起こす抗原。
卵胞刺激ホルモン、プロラクチン、アンギオゲニン、上皮成長因子、カルシトニン、エリスロポエチン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、インスリン、成長ホルモン、成長因子、インスリン様1、2骨格成長因子、ヒト絨毛性性腺刺激ホルモン、黄体形成ホルモン、神経成長因子、副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)、ホルモン放出ホルモン(LHRH)黄体、副甲状腺ホルモン(PTH)、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン(TRH)、バソプレシン、コレシストキニン、および副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモンなどのホルモン及び成長因子;インターフェロン、インターロイキン、コロニー刺激因子、及び腫瘍壊死因子などのサイトカイン:ウロキナーゼ、腎臓プラスミノーゲン活性化因子などの線維素溶解酵素;及びプロテインC、第VIII因子、第IX因子、VII因子とアンチトロンビンIIIなど凝固因子。
他のタンパク質又はペプチドの例は、アルブミン、心房性ナトリウム利尿因子、レニン、スーパーオキシドジスムターゼ、α1−アンチトリプシン、肺表面活性タンパク質、バシトラシン、ベスタチン、シドスポリン、デルタ睡眠誘発ペプチド(DSIP)、エンドルフィン、グルカゴン、グラミシジン、メラニン阻害要因、ニューロテンシン、オキシトシン、ソマスタチン、テルプロチド、血清チミド因子、サイモシン、DDAVP、デルモルフィン、のMet−エンケファリン、ペプチドグリカン、サチエチン、チモペンチン、フィブリン分解産物、DES−エンケファリン−α−エンドルフィン、性腺刺激ホルモン放出ホルモン、ロイプロリド、α−MSH及びメトケファミドである。
アルトレタミン、フルオロウラシル、アムサクリン、ヒドロキシカルバミド、アスパラギナーゼ、イフォスファミド、ブレオマイシン、ロムスチン、ブスルファン、メルファラン、クロラムブシル、メルカプトプリン、クロマチン、メトトレキサート、シスプラチン、マイトマイシン、シクロホスファミド、プロカルバジン、シタラビン、テニポシド、ダカルバジン、チオテパ、抗腫瘍剤ダクチノマイシン、チオグアニン、ダウノルビシン、トレオスルファン、ドキソルビシン、チオフォスファミド、エストラムシン、ビンブラスチン、エトグルシド、ビンクリスチン、エトポシド、ビンデシン及びとパクリタキセルなどの抗腫瘍剤。
抗菌剤には以下が含まれる:アンピシリン、ナフシリン、アモキシシリン、オキサシリン、アズロシリン、ペニシリンG、カルベニシリン、ペニシリンV、ジクロキサシリン、フェネチシリン、フロキサシリン、ピペラシリン、メシリナム、スルベニシリン、メチシリン、チカルシリン、メズロシリン、セファロスポリン:セファクロル、セファロチン、セファドロキシル、セファピリン、セファマンドール、セフラジン、セファトリジン、セルスルフォジン、セファゾリン、セフタジム、セフォラニド、セフトリアキソン、セフォキシチン、セフロキシム、セファセトリル、ラタモキセフ、及びセファレキシンなどの抗生物質。アミカシン、ネオマイシン、ジベカシン、カナマイシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシンなどのアミノグリコシド。アムホテリシンB、ノボビオシン、バシトラシン、ナイスタチン、クリンダマイシン、ポリミキシン、コリスチン、ロバマイシン、エリスロマイシン、スペクチノマイシン、リンコマイシン、バンコマイシン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、デメクロサイクリン、ロリテトラサイクリン、ドキシサイクリン、テトラサイクリン及びミノサイクリンなどのテトラサイクリンなどのマクロライド。クロロアンフェニコール、リファマイシン、リファムピシン及びチアンフェノコールなどの他の抗生物質。
スルホンアミド、スウファジアジン、スルファメチゾール、スルファジメトキシン、スルファメトキサゾール、スルファジミジン、スルファメトキシピリダジン、スウファフラゾール、スルファフェナゾール、スルファレン、スルフィソミジン、スルファメラジン、スルフィソキサゾール及びトリメトプリムをスルファメトキサゾール又はスルファメトロールと組み合わせる化学療法剤。
メタンアミン、キノロン(ノルフロキサシン、シノキサシン)、ナリディキシン酸、ニトロ−化合物(ニトロフラントイン、ニフロトイノール)及びオキソリン酸などの尿路消毒剤。
メトロニダゾールなどの嫌気性感染用薬物。
アミノサリチル酸、イソニアジド、シクロセリン、リファンピシン、エタムブトール、チオカルリド、エチオンアミド及びバイオマイシンなどの結核薬剤。
アミチオゾン、リファムピシン、クロファジミン、ナトリウムスルホキソン及びジアミノジフェニルスルホン(DDS、ダプソン)などのハンセン病薬剤。
アムホテリシンB、ケトコナゾール、クロトリマゾール、ミコナゾール、エコナゾール、ナタマイシン、フルシトシン、nナイスタチン及びグリセオフルビンなどの抗真菌剤。
アシクロビル、イドクスウリジン、アマンチジン、メチサゾン、シタラビン、ビダラビン及びガンシクロビルなどの抗ウイルス剤。
クロロキン、イオードキノール、クリオキノール、メトロニダゾール、ジヒドロエメチン、パロモマイシン、ジロキサニド、フロアセチニダゾール及びエメチンなどのアメーバ症の化学療法。
クロロキン、ピリメタミン、ヒドロキシクロロキン、キニーネ、メフロキン、スルファドキシン/ピリメタミン、ペンタミジン、ナトリウムスラミン、プリマキン、トリメトプリム及びプログアニルなどの抗マラリア薬。
アンチモンカリウム酒石酸、ニリダゾール、アンチモンナトリウムジメルカプトスクシネート、オキサムニキン、ベフェニウム、ピペラジン、ジクロロフェン、プラジカンテル、ジエチルカルバマジン、ピランテルパルモエート、ヒカントン、ピリビウムパモエート、レバミゾール、スチボフェン、メベンダゾール、テトラミゾール、メトリフォネート、チオベンダゾール及びニクロサミドなどの抗蠕虫病薬剤。
アセチルサリチル酸、メフェナム酸、アクロフェナク、ナプロキセン、アゾプロパノン、ニフルム酸、ベンジダミン、オキシフェンブタゾン、ジクロフェナク、ピロキシカム、フェノプロフェン、ピルプロフェン、フルルビプロフェン、ナトリウムサリチレート、イブプロフェンサリンダク、インドメタシン、チアプロフェン酸、ケトプロフェン及びトルメチンなどの抗炎症剤。
コルヒチン及びアロプリノールなどの抗痛風薬。
アルフェンタニル、メタドン、ベジトラミド、モルヒネ、ブプレノルフィン、ニコモルヒネ、ブトルファノール、ペンタゾシン、コデイン、ペチジン、デキストロモラミド、ピリトアラニド、デキストロプロポキシフェン、スフェンタニル及びフェンタニルなど中枢作用(オピオイド)鎮痛薬。
アルチカイン、メピバカイン、ブピバカイン、プリロカイン、エチドカイン、リドカイン及びテトラカインなどの局所麻酔薬。
アマンチジン、ジフェンヒドラミン、アポモルヒネ、エトプロパジン、ベンズトロピンメシル酸、レルゴトリル、ビペリデン、レボドパ、ブロモクリプチン、リスリド、カルビドパ、メチキセン、クロロフェノキサミン、オルフェナドリン、サイクリミン、プロシクリジン、デキセチミド及びトリヘキシルフェニジルなどのパーキンソン病薬剤。
バクロフェン、カリソプロドール、クロルメザノン、クロルゾキサゾン、シクロベンザ、ダントロレン、ジアゼパム、フェバルバメート、メフェノキサロン、メフェネシン、メトキサロン、メトカルバモール及びトルペリゾンなどの中枢作用筋弛緩剤。
コルチコステロイドは次を含む。
コルチソール、デソキシコルチコステロン及びフルオロヒドロコルチゾンなどのミネラロコルチコステロイド。
ベクロメタゾン、ベタメタゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フレプレドニソロン、フルランドレノリド、ハルシノニド、ヒドロコルチゾン、メドリゾン、メチルプレドニゾロン、パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン及びトリアムシノロン(アセトニド)などのグルココルチコステロイド。
アンドロゲンは次を含む。
ダナゾール、フルオキシメステロン、メステトロン、メチルテストステロン、テストステロン及びその塩などの治療に用いるアンドロゲンステロイド。
カルステロン、ナンドロロンとその塩、ドロモスタノロン、オキサンドロロン、エチルエステレノール、オキシメトロン、メタンドリオール、スタノゾロールメタンドロステノロン及びテストラクトンなどの治療に使用される同化ステロイド。
シプロテロンアセテートなどの抗アンドロゲン。
ジエチルスチルベストロール、エストラジオール、エストリオール、エチニルエストラジオール、メストラノール及びキネストロールなどの治療に用いるエストロゲンステロイドを含有するエストロゲン。
クロロトリアニセン、クロミフェン、エタモキシトリフェトール、ナフォキシジン及びタモキシフェンなどの抗エストロゲン。
アリルエストレノール、デソゲストレル、ジメチステロン、ジドロゲステロン、エチニルエステレノール、エチステロン、エチナジオールアセテート、エチノジオール、ヒドロキシプロゲステロン、レボノルゲストレル、リネストレノール、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ノルエチンドロン、ノルエチステロン、ノルエチノドレル、ノルゲストレル、及びプロゲステロンなどのプロゲスチン。
甲状腺薬は次を含む。
レボチロニン及びリオチロジンなどの治療で使用される抗甲状腺剤、カルビマゾール、メチマゾール、メチルチオウラシル及びプロピルチオウラシルなどの治療に用いられる抗甲状腺薬。
水溶性である生物活性剤のほか、抗酸化剤、イオン、キレート剤、染料、造影化合物などの他の水溶性化合物が導入され得る。
好ましい治療剤は、癌(例えば抗腫瘍)及び心血管疾患の分野である。
ナノ粒子又はリポソーム製剤に好適はリポソーム薬物誘導体を製造する方法は当技術分野で知られている(米国特許第5534499号には、治療薬のリン脂質の脂肪酸鎖への共有結合が記載されている)。
本発明の薬物はまたプロドラッグであり得る。
前記薬物は、前記キャリアの分画、例えばリポソームの前記キャビティ及び/又は前記シェルの、内側、外側又は両方に存在し得る。前記薬物の分配は、常磁性化学シフト試薬又は常磁性試薬などの、前記薬物キャリア中に含まれる他の試薬の分配とは独立する。薬物の組み合わせを使用することができ、これらの薬物のいずれかは、例えばリポソームのキャビティ及び/又はシェル内の、薬物キャリアの内部、外部又は両方の画分内に存在し得る。
造影剤
他の側面では、本発明は、好ましくはMRIのための造影剤として好適なキャリアに関する。この目的で、前記キャリアは、(前記キャビティ内、前記シェル内又はそれらの表面)に造影を強調し得る物質を含む。これらの物質は、CEST MRI造影強調剤と同様にT及び/又はT造影強調剤を含む。
ほとんど全てのMRIスキャンは、全ての組織の全身にわたり非常に高濃度に存在するバルク水分子の画像に基づくものである。異なる組織間の造影は臨床情報を得るには十分ではなく、ガドリニウムの低分子量錯体などのMRI造影強調剤(CA)が投与される。これらの常磁性錯体は、水分子のプロトンの縦緩和(T)及び横緩和時間(T)を減少させる。又はマンガンはT造影剤として作用する。前記キャリアは、H−NMR、19F−NMR又はその両方のための造影強調剤を含み得る。本発明においてまた、T、Tと組み合わせた19F−NMRで、及び好ましくはH−NMRでのCEST造影を含む全てを1つとする考え方として実現され得る。
CEST MRI
好ましい実施態様では、本発明はまた、CEST MRI造影強調に関する。この方法は、MRIで決定される、選択された磁気的前飽和プロトンからバルクの水分子へ化学的交換依存飽和移動(CEST)を利用することで画像造影を生成するために供される。
CEST MRIで使用される場合、キャビティを囲む半透過性シェルを持つ本発明の好ましいキャリア、即ち温度感受性キャビティは、最適化CEST造影強調に寄与するものである。
これらのキャリアの利点は、前記CEST造影強化は、プロトンプールと相互作用する前記キャビティに含まれる常磁性化学シフト試薬又は前記キャビティ内にまた存在する他のMRI分析物に基き行われる、ということである。
本発明は、好ましい実施態様で、全てのCESTタイプの造影強化への温度感受性薬物放出に関し、好ましくはこれまで利用されてきた以上の進歩したCEST方法の利用を可能にする。
常磁性化学シフト試薬と組み合わせたCEST(パラ(常磁性)CEST)の方法は、CEST造影試薬の常磁性シフトしたプロトンのプールの磁化が選択的に、高周波(RF)照射適用により飽和されるものである。この飽和がバルク分子にプロトン交換により移動することで、前記CEST造影試薬の環境の励起可能な水プロトンの量を低減させる。そこで、バルク水強度の減少が観測され、これによりMRI画像での(負の)造影強化を生成するために使用され得ることとなる。
高CEST効果を得るための試みは、常磁性シフト試薬(例えば、Na[Tm(dotma)(HO)])を含む溶液の水分子の大部分を利用することに基づくものであり、ここで、「Hdotma」は、α、α’、α’’、α’’’−テトラメチル−1、4、7、10−四酢酸を表し、domaは前記リガンドのそれぞれ4つの脱プロトンした四アニオン形を表し、これは化学的にシフトされるプロトンのプロフィールを与え、それにより選択的にRFパルスで飽和され得る。このシステムがキャリア、例えばリポソーム中に包埋される場合、前記磁気飽和は前記キャリアの外のバルク水分子(これは化学シフトを受けない)に移動する(LipoCEST)。磁気移動の程度及び造影強化の程度は、前記キャリアのシェル、例えばリン脂質膜を通過する水の拡散の速度、同じく前記キャリアの内部の水の量により決定される。
最適な水交換速度は、前記キャリア内のプロトンプールと前記キャリア外のバルク水の間の化学シフトに関連される。リポソーム内部の水分子に誘導される常磁性シフトは2つの主な寄与からなる:前記水分子とシフト試薬間の直接双極子相互作用により化学シフト(δdip)、及びバルク磁化率効果により生じる化学シフト(δbms)である。全体の常磁性シフトはこれらの寄与の和である。
δ=δdip+δbms (1)
δbmsは球状粒子では0であるが、異方性粒子では重要となる。非球状粒子は磁場で力を受けて、それらが磁力線に沿って配列させる。リポソームの場合には、前記リン脂質膜に伴って常磁性分子を持つ場合にはこの効果はさらに増加する。
非球状リポソームを用いるCESTについての参考文献は、Terreno、E.らのAngew.Chem.Int.Ed.46、966−968(2007)である。
本発明では、常磁性シフト試薬は前記キャリア内又はキャリア上に任意の方法で含まれることが可能である。前記キャビティ内の試薬とプールの両方を含むことでプロトンプールとの十分な相互作用を持つシフト試薬を持つことが好ましい。
前記常磁性化学シフト試薬は基本的には任意の常磁性試薬であって、溶液又は分散液中の比較的多数の水分子を、回りのバルク水分子のプロトンに対してそれらのMR共鳴周波数により化学的にシフトされるプロトンプールとするものである。前記リポソームはシェルを含み、これは基本的にプロトンがその直接環境と交換されることを可能にするものであることから、選択的RFパルスにより生じる飽和が、負荷された温度感受性薬物キャリアの環境へ移動されることとなる。そこで、磁気共鳴イメージングの実施において、前記温度感受性薬物キャリアの直接環境は、他のバルク水分子と比較してシグナル強度が減少し、減少シグナル強度により前記造影剤の直接環境を検出することを可能にする。前記常磁性化学シフト試薬は常磁性化合物、即ち常磁性を持つ任意の化合物を含む。好ましくは前記上記常磁性化合物は、常磁性イオン、例えばキレートリガンドで錯体化された金属イオンを含む。常磁性イオンは当業者に知られておりここで説明しない。例えば、第1及び第2遷移金属であり、明示的にはクロム、マンガン、鉄であり、同じくガドリニウム、ユーロピウム、ディスプロシウム、ホルミウム、エルビウム、ツリウム、イットリビウムなどのランタニドである。
常磁性化学シフト試薬は、常磁性イオンへの強い結合が可能であり、金属イオンが水と相互作用し、又は他の好適なプロトン源と相互作用し得る好適なキレート構造を持つ。好ましいキレート構造については参考文献として、P.Caravanらの、Chem.Rev.、99、2293−2352(1999)が挙げられる。好ましくは、水は少なくとも前記常磁性試薬の金属に一時的であっても配位される。常磁性性シフト機構に関しては、参考文献として、J.A.Petersらの、Prog.Nucl.Magn.Reson.Spectr.、28、283−350(1999)が挙げられる。ひとつの実施態様では、前記キレート構造自体がまた、交換可能なプロトン、例えばヒドロキシル、アミン又はアミドプロトンを含む。
好ましくは、常磁性性化学シフト試薬は、例えば、1、4、7、10−テトラアザシクロドデカン−1、4、7、10−四酢酸(Hdota)、1、4、7、10−テトラアザシクロドデカン−α、α’、α’’、α’’’−テトラメチル−1、4、7、10−四酢酸(Hdotma)及び常磁性試薬内で軸配位水分子を可能にする関連するリガンドから誘導される大環状ランタニド(III)キレートなどのキレート構造で配位されたランタニドイオンを含む。この参考文献はAimeらの、Angew.Chem.Int.Ed.、44、5513−5515(2005)である。多くの同様の類似する又は異なるキレート基が、デンドリマー又はポリマー構造と組み合わされデンドリマー又はポリマー化学シフト試薬を与える。デンドリマー又はポリマー常磁性化合物を用いる一般的利点は、非常に効果的な常磁性錯体濃度が達成されることであり、しかも単核常磁性化合物を用いる場合と同様の溶液の浸透圧を増加させることがない、ということである。この参考文献は、E.Terreno、A.Barge、L.Beltrami、G.Cravotto、D.D.Castelli、F.Fedeli、B.Jebasingh、S.Aimeの、Chemical Communications、2008、600−602である。
好ましくは常磁性化学シフト試薬は水溶性である。好適な化学シフト試薬は当業者に知られている。前記CEST造影剤は、前記シフト試薬とプロトンプールとが十分な相互作用をして化学的にシフトされたプロトンのプールを与える限り、なんら特別な化学シフト試薬を必要とするものではない。
好ましくは、常磁性シフト試薬は、金属イオンと、多座配位子リガンドのリガンドを含む金属錯体である。より好ましくは、前記化学シフト試薬とプロトンプールとの相互作用が配位の形で提供されるものである。従って、金属錯体が、少なくとも1つの水分子の配位のために残される金属の少なくとも1つの配位サイトを持つことが好ましい。
好適な脂溶性化学シフト試薬の例は、[Ln(hpdo3a)(HO)](1)、[Ln(dota)(HO)](2)、[Ln(dotma)(HO)](3)、[Ln(dotam)(HO)]3+(4)、及び[Ln(dtpa)(HO)]2−(5)及びこれらの誘導体及び関連する化合物である(ここでLnはランタニドイオンである)。
好ましくは、常磁性化学シフト試薬は、以下の式1から5に示されるランタニド錯体である。
Figure 2014522417
ここで、ランタニドは、Eu3+、Dy3+、Ho3+、Er3+、Tm3+、Yb3+、であり、好ましくはTm3+又はDy3+である。
常磁性化学シフト試薬は通常は、1mMから2000mM、好ましくは10mMから1000mM及びより好ましくは50mMから200mMの量で前記試薬中に含まれる。
前記金属含有化合物は、前記キャビティ内、即ちリポソームの内部区画内に、溶解、乳化、懸濁させるか又はその他の均一又は不均一に分布させる。又は、少なくとも1つの共有結合又は非共有結合又はこれらの組み合わせで前記リポソームの外側区画に結合され得る。さらに、同じか又は少なくとも1つ異なる金属含有化合物が前記区画内に同時に存在し得る。
常磁性試薬と前記薬物は、前記薬物自体が適切な金属を含む場合、1つであり同じであってよい。
さらなる造影強化剤
本発明の造影強化剤は、T、T又はT 減少試薬を含み得る。この参考文献は、Aimeらの、Journal of the American Chemical Society、2007、129、2430−2431である。また、全てを1つにする概念は、T、T又はT とCESTコントラス剤から実現され得る。
前記温度感受性薬物キャリアの内部及びバルク水プロトン間の化学シフトの差は、前記温度感受性薬物キャリア膜に、化学シフト試薬である必要はないさらなる常磁性試薬を与えることで強化され得る。従って、前記磁場での非球状キャリアの方向が影響を受け、前記のバルク磁化率効果が強化される。前記さらなる常磁性試薬は、好ましくは、両親媒性化合物であり、ランタニド錯体を含み(前記両親媒性化合物のより極性側に)、かつ疎水性分子相互作用に基づく前記温度感受性薬物キャリアでの前記脂質二重層に統合されるか配列される傾向を持つ非極性尾(tail)部分を持つ。これらの両親媒性常磁性錯体は例えば以下の化合物である。
Figure 2014522417
19 F及び H−NMR組み合わせ造影強化
本発明発明において、19F及びH−NMRの好適な組み合わせは種々の方法で実現され得る。
従って、二重又は多重ラベル化MR造影が、CEST機構及び/又は19FMRを用いて生成され得る。又は、多重MR造影は、前記キャリアに存在する金属含有化合物によりイメージングされる被分析物(通常は水のプロトン)の縦緩和時間(T)又は横緩和時間(T)の変更を通じて生成され得る。これらの造影強化機構のいずれもがさらに任意の組み合わせで使用され得る。
前記二重/多重ラベル化MRI造影は、前記キャリアの物理的状態に依存して、従来のMR装填を連続的又は交互に用いてモニターされるか、又はH及び19FMRなどのデュアルチューニングスペクトルメーターシステムで組み合わせシーケンスを用いて同時にモニターされる。
この側面で、本発明はまた、薬物送達をモニター及び/又は案内する際の、同時二重核MRイメージングの使用に関する。
温度感受性リポソーム中のCEST及び19F造影試薬の組み合わせは、CEST及び19FMRIの手段で、独立してかつ同時に薬物送達方法過程をモニターする機会を提供する。2つの異なるMRシグナルをモニターすることは、対応する二重ラベル化MR技術により実行される。この方法はいくつかの可能な利点を導く。従って、前記薬物負荷粒子の空間分布をCEST MRIにより薬物放出の前に評価できること;HCEST及び19FMRシグナルは、放出薬物量に比例し、フィードバックループを用いてインビボで投与された送達薬物の定量的制御を可能にすること;離れた位置サイトで前記キャリアからの薬物放出が、例えば温度感受性リポソームの場合には例えばRFや超音波などを用いた加熱などの局所的刺激により誘導され得る;前記CESTMR造影強化は自由に切り替えることができること、である。
19 F造影剤
MR検出可能な19Fは、天然には身体に存在せず、即ち19FMRIは本質的に添加された19F造影剤の使用に基づくものである。
19FMR造影のための造影強化剤は、好ましくは多数の磁気的に等価なフッ素基を持つ(感度は分子あたりの磁気的に等価なF原子の数に比例する)。CEST MRIとの組み合わせの観点から、使用される前記19FMR造影剤は好ましくは水溶性であり、かつ特に好ましくは高水溶性が可能となるように電荷を持つものである。リン脂質シェルでの応用の観点から、好ましい19F造影剤は、リン脂質に強く結合するものではなく、又はリン脂質に強く付随するものではない。ヒト又は動物身体内へのそれらの放出の観点から、前記19F造影剤は好ましくは低毒性でありかつ高生体適合性である。
好ましい19F造影剤は、脂肪族炭化水素の全F置換類似体が利用され得る。
本発明は、以下の非限定的例示及び添付された非限定的図面に基きさらに説明される。
実施例1:
(2S)−9、13、17、18−テトラヒドロキシ−5−オキソ−4、7、11、15−テトラオキサオクタデカン−1、2−ジイルジパルミテート1 15、3 の合成:スキーム1参照
Figure 2014522417
スキーム1:(2S)−9、13、17、18−テトラヒドロキシ−5−オキソ−4、7、11、15−テトラオキサオクタデカン−1、2−ジイルジパルミテート1 15、3 の合成
トリエステル115、3は、(R)−3−ヒドロキシプロパン−1、2−ジイルジパルミテート(108)を酸誘導体107でエステル化し、次に中間体トリエステル109を酸性脱保護基化して製造した。酸誘導体107は、トリグリセリドの誘導体であり、これはグリセリドユニット鎖がゾルケタール(101)の2−((アリルオキシ)メチル)オキシラン(102)への付加により導入された。ここで得られた生成物103を酸化してエポキシド104とし、前記エポキシドをベンジルアルコールで開環させて105を形成した。10中のテトラヒドロピラニルエーテルとして前記残るヒドロキシル基の保護及びベンジル基の除去後、アルコール106が得られ、これはブロモ酢酸と反応させて酸誘導体107に変換した。
実施例2:
3−(3−(2、3−ジヒドロキシプロポキシ)−2ヒドロキシプロポキシ)プロパン−1、2−ジイルジステアレート(2 17、2 )の合成:スキーム2参照
Figure 2014522417
スキーム2:3−(3−(2、3−ジヒドロキシプロポキシ)−2ヒドロキシプロポキシ)プロパン−1、2−ジイルジステアレート(2 17、2 )の合成
トリグリセリド誘導体を形成する主鎖を含む生成物103はスキーム1に示されるように合成された。テトラヒドロピラニルエーテルとして前記ヒドロキシ基の保護して前記アリル基のエポキシ化後、化合物110が得られ、これはエポキシ環がセシウムステアレートで開環されてモノエステル111を形成した。111の残るヒオロキシル基をステアリン酸でエステル化した後、酸で脱保護して生成物217、2を得た。
実施例3
[Gd(hpdo3a)(HO)]などのMRI造影剤、及びドキソルビシンなどの薬物の放出を引き起こすために、脂質模倣物(1n、R)を含む温度感受性リポソームを作製した。温度感受性リポソーム剤は、DPPC:DSPC:115、3=50:20:30(モル比)として調製した。前記脂質をクロロホルム/メタノール(4:1体積/体積)に溶解し、前記溶媒を減圧下蒸発させて薄い均一な脂質膜を形成させ、これをさらに一晩窒素気流下で乾燥させた。前記膜の水和は、60℃で、250mMの[Gd(HPDO3A)(HO)]を含む、120mMの120mMの(NHSO緩衝液(pH=5.4)を用いて60℃で行った。懸濁物を60℃で、400nmフィルター(2回)、200nmフィルター(2回)及び100nmフィルター(5回)を通過させて押し出した。押出後、前記リポソーム外部の緩衝液([Gd(HPDO3A)(HO)]を含む)を、PD−10カラム(GE Healthcare)を通してゲルろ過することで、HEPES緩衝生理食塩水(HBS)(pH7.4、70mMのHEPES、137mMのNaCl)に交換した。DOXのHBS溶液(5mg/mL)を前記リポソームに添加し(20:1リン脂質対DOX重量比)、37℃でインキュベーションした。インキュベーション後、前記リポソーム外部DOXを前記リポソームを他のPD−10カラムに通すことで除去した。リポソームのTm及び流体力学直径は、示差走査熱量計(DSC)及び動的光散乱(DLS)によりそれぞれ決定された。脂質二重層内のリポソーム内の115、3を含むリポソームは、流体力学直径が111nm(200nmPCフィルターを通して押し出した後)であり、Tmが41.9℃であった。

Claims (12)

  1. 構造式Iを満たす化合物。
    Figure 2014522417
    [ここで、Gは、式IIを満たし、
    HO−CH−{CH(OH)−CH−O}−CH−{C(=O)−O−CHq―
    式II
    それぞれのnは独立して1から30の整数であり;mは1から10の整数であり;qは0又は1である。]
  2. 請求項1に記載の化合物であり、次の式III、式IV及びこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物。
    Figure 2014522417
    Figure 2014522417
  3. 請求項1又は2のいずれか一項に記載の化合物であり、mが2から6、好ましくは2又は3である、化合物。
  4. 請求項1乃至3のいずれか一項に記載の化合物であり、それぞれのnが12から18、好ましくは13、15又は17である、化合物。
  5. 請求項1に記載の化合物であり、式Vを満たす化合物。
    Figure 2014522417
    [ここで、rはそれぞれ独立して1から30の整数、及び差(r−s)は0から5、より好ましくは1から3である。]
  6. 温度感受性キャリアであり、キャビティを囲む脂質二重層シェルを含み、前記脂質二重層が、請求項1乃至5のいずれか一項に記載の、1又複数の化合物を含む、温度感受性キャリア。
  7. 請求項6に記載の温度感受性キャリアであり、治療薬物、造影剤及びこれらの組み合わせからなる群から選択される活性成分を含む、温度感受性キャリア。
  8. 請求項1乃至5のいずれか一項に記載の化合物の、温度感受性キャリアの脂質二重層シェルへの添加物としての使用。
  9. 治療及び造影方法それぞれに、含まれる物質のインビボ放出で使用するための請求項6又は7のいずれか一項に記載の温度感受性キャリアであり、前記方法が前記キャリアのいずれかを動物、好ましくはヒトに投与すること、及びそこに含まれる物質のインビボ放出に影響を与えることを含む、温度感受性キャリア。
  10. 請求項6又は7のいずれか一項に記載のキャリアと、少なくとも1つの薬物を含む、薬物送達システム。
  11. 請求項6又は7のいずれか一項に記載のキャリアと、少なくとも1つのMRI造影強化物質を含む、イメージングシステム。
  12. 請求項6又は7のいずれか一項に記載のキャリア、少なくとも1つの薬物、及び少なくとも1つのMRI造影強化物質を含む、造影化薬物送達システム。
JP2014515312A 2011-06-16 2012-06-06 新規脂質模倣化合物及びその使用 Expired - Fee Related JP6085296B2 (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11170139A EP2535326A1 (en) 2011-06-16 2011-06-16 Novel lipidomimetic compounds and uses thereof
EP11170139.7 2011-06-16
PCT/IB2012/052829 WO2012172457A1 (en) 2011-06-16 2012-06-06 Novel lipidomimetic compounds and uses thereof

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2014522417A true JP2014522417A (ja) 2014-09-04
JP2014522417A5 JP2014522417A5 (ja) 2015-09-24
JP6085296B2 JP6085296B2 (ja) 2017-02-22

Family

ID=46321195

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2014515312A Expired - Fee Related JP6085296B2 (ja) 2011-06-16 2012-06-06 新規脂質模倣化合物及びその使用

Country Status (7)

Country Link
US (1) US9061062B2 (ja)
EP (2) EP2535326A1 (ja)
JP (1) JP6085296B2 (ja)
CN (2) CN103619802B (ja)
BR (1) BR112013031871A2 (ja)
RU (1) RU2014101173A (ja)
WO (1) WO2012172457A1 (ja)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2535326A1 (en) * 2011-06-16 2012-12-19 Koninklijke Philips Electronics N.V. Novel lipidomimetic compounds and uses thereof
WO2014037498A2 (en) * 2012-09-07 2014-03-13 Bracco Imaging Spa Paramagnetic solid lipid nanoparticles (pslns) containing metal amphiphilic complexes for mri.
US9663432B2 (en) 2012-12-28 2017-05-30 Dow Corning Toray Co., Ltd. High-purity monoalkenyl-containing glycerin derivative and method of manufacturing same
CN103304445B (zh) * 2013-05-27 2014-10-22 南京大学 阳离子聚甘油酯类脂质及其合成方法和应用
EP3592728A1 (en) 2017-03-07 2020-01-15 Translate Bio, Inc. Polyanionic delivery of nucleic acids

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07228550A (ja) * 1993-12-22 1995-08-29 Kao Corp ジグリセリンジ脂肪酸エステル組成物、蛋白質含有食品の改質剤及び改質剤組成物、並びに改質剤で処理した小麦粉製品
US20030031704A1 (en) * 1999-04-23 2003-02-13 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
US5534499A (en) 1994-05-19 1996-07-09 The University Of British Columbia Lipophilic drug derivatives for use in liposomes
IL115849A0 (en) 1994-11-03 1996-01-31 Merz & Co Gmbh & Co Tangential filtration preparation of liposomal drugs and liposome product thereof
CN100379404C (zh) * 2003-02-28 2008-04-09 阿尔扎公司 用于减少脂质体诱导的补体激活的脂质体组合物
WO2010029469A1 (en) * 2008-09-10 2010-03-18 Koninklijke Philips Electronics N.V. Drug carrier providing mri contrast enhancement
EP2535326A1 (en) * 2011-06-16 2012-12-19 Koninklijke Philips Electronics N.V. Novel lipidomimetic compounds and uses thereof

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH07228550A (ja) * 1993-12-22 1995-08-29 Kao Corp ジグリセリンジ脂肪酸エステル組成物、蛋白質含有食品の改質剤及び改質剤組成物、並びに改質剤で処理した小麦粉製品
US20030031704A1 (en) * 1999-04-23 2003-02-13 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN6015045588; Hossann, Martin; Wiggenhorn, Michael; Schwerdt, Alenka; Wachholz, Kirsten; Teichert, Nicole; Eibl, H: 'In vitro stability and content release properties of phosphatidylglyceroglycerol containing thermose' Biochimica et Biophysica Acta, Biomembranes 1768(1&#xFF10 *
JPN6015045590; Lars H. Lindner; Martin E. Eichhorn; Hansjoerg Eibl; Nicole Techert; Marcus Schmitt-Sody; Rolf D. Is: 'Novel Temperature-Sensitive Liposomes with Prolonged Circulation Time' Clinical Cancer Research 10(6), 2004, 2168-2178 *
JPN6015045592; Wang, Tungte; Hossann, Martin; Reinl, Herbert M.; Peller, Michael; Eibl, Hansjoerg; Reiser, Maximili: 'In vitro characterization of phosphatidylglyceroglycerol-based thermosensitive liposomes with encaps' Contrast Media & Molecular Imaging 3(1), 2008, 19-26 *
JPN6015045594; Shrestha, Lok Kumar; Shrestha, Rekha Goswami; Oyama, Keiichi; Matsuzawa, Makoto; Aramaki, Kenji: 'Structural Investigation of Diglycerol Polyisostearate Reverse Micelles in Organic Solvents' Journal of Physical Chemistry B 113(38), 2009, 12669-12679 *
JPN6015045596; Kanaoka, E.; Nagata, S.; Hirano, K.: 'Stabilization of aerosolized IFN-gamma by liposomes' International Journal of Pharmaceutics 188(2), 1999, 165-172 *

Also Published As

Publication number Publication date
BR112013031871A2 (pt) 2016-12-13
JP6085296B2 (ja) 2017-02-22
US9061062B2 (en) 2015-06-23
CN108276285A (zh) 2018-07-13
EP2535326A1 (en) 2012-12-19
US20140127135A1 (en) 2014-05-08
RU2014101173A (ru) 2015-07-27
WO2012172457A1 (en) 2012-12-20
CN103619802B (zh) 2016-01-20
EP2720999A1 (en) 2014-04-23
EP2720999B1 (en) 2017-08-23
CN103619802A (zh) 2014-03-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9642802B2 (en) Lipid bilayer carrier for drugs or imaging agents
JP5604432B2 (ja) Mriコントラスト強化薬物キャリア
JP5802555B2 (ja) キレート化両親媒性ポリマー
Awad et al. Effect of pegylation and targeting moieties on the ultrasound-mediated drug release from liposomes
RU2477146C2 (ru) Полимерный носитель лекарственных средств для доставки под визуальным контролем
Kim et al. MRI monitoring of tumor-selective anticancer drug delivery with stable thermosensitive liposomes triggered by high-intensity focused ultrasound
JP2007515470A (ja) 造影イメージング用の気体封入マイクロベシクル・アセンブリー
JP6085296B2 (ja) 新規脂質模倣化合物及びその使用
JP2005505532A (ja) 気体微粒子リポソーム複合体
EP2067485A1 (en) Drug carrier providing MRI contrast enhancement
JP2014522417A5 (ja)
Cressey et al. Design of nanoparticles for focused ultrasound drug delivery
JP2018197208A (ja) 一酸化窒素内包バブルリポソーム及びその利用
Langereis et al. Lipid bilayer carrier for drugs or imaging agents
WO2021116712A1 (en) Functionalised microbubble mediated cell tagging
Javadi et al. Letters in Applied NanoBioScience

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20150605

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20150804

A977 Report on retrieval

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007

Effective date: 20151029

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20151117

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20160127

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20160621

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20160805

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20170104

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20170127

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6085296

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees