JP2014500707A5

JP2014500707A5 -

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Publication number: JP2014500707A5
Application number: JP2013531711A
Authority: JP
Filing date: 2011-09-27
Publication date: 2016-06-30

Description

本発明では、ヒト被験者が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を発症するリスクの上昇またはヒト被験者にＩＢＤが存在する可能性の上昇を決定する方法が提供される。典型的な方法では、
（ｉ）図１に提供され、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８種類、またはそれ以上、またはすべての差次的に発現されたｍｉＲＮＡ濃度を被験者のサンプルで測定する工程と、
（ｉｉ）工程（ｉ）の前記サンプル中の前記ｍｉＲＮＡ濃度を対照サンプルの濃度および／または少なくとも１種類の内部標準ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉＲ−１５０および／またはｍｉＲ−３４２−３ｐ）と比較する工程において、工程（ｉｉ）の対照濃度と比較した前記サンプルのｍｉＲＮＡ濃度の上昇が、前記被験者のＩＢＤ発症リスクの上昇、またはＩＢＤが存在する可能性の上昇を示している工程と
が必要である。特定の実施形態では、前記ｍｉＲＮＡ発現濃度の上昇がクローン病の存在と関連している。特定の実施形態では、前記差次的に発現されたｍｉＲＮＡが図１で発現量の差が最も大きいｍｉＲＮＡである。

患者のＩＢＤ治療に対する反応性を測定する方法も提供される。典型的な方法では、
（ｉ）図１に提供され、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８種類、またはそれ以上、またはすべての差次的に発現されたｍｉＲＮＡ濃度を被験者の血清サンプルで測定し、前記被験者にＩＢＤの治療に有用な治療薬を投与する工程と、
（ｉｉ）工程（ｉ）の前記サンプル中の前記ｍｉＲＮＡ濃度を治療前および／または治療後の濃度と比較する工程において、工程（ｉｉ）の投与前濃度と比較した前記サンプル中の少なくとも１種類のｍｉＲＮＡ遺伝子産物濃度の減少が、前記治療薬がＩＢＤの治療に有用であることを示している工程と
が必要である。特定の実施形態では、前記差次的に発現されたｍｉＲＮＡが図１で発現量の差が最も大きいｍｉＲＮＡである。

最後に、ＩＢＤ、特にクローン病の診断および治療上の検査で有用な、一連の差次的に発現されたｍｉＲＮＡが提供される。

ＩＢＤの発症傾向を診断する方法
特定のマイクロＲＮＡ分子がＩＢＤを有する患者では差次的に発現されるという発見は、そのような疾患の発症傾向を診断または検出する方法を提供する。図１に示した、他の差次的に発現されたｍｉＲＮＡの発現レベルは、対象の生体サンプルで評価することができる。１つの実施形態では、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれ以上のｍｉＲＮＡの発現レベルが測定される。特定の実施形態では、発現量の差が最も大きく異なるｍｉＲＮＡの発現が測定される。特定の実施形態では、前記患者から単離されたｍｉＲＮＡの発現レベルを、事前にＣＤの存在を示すと判断されたレベルと比較している。特定の実施形態では、前記ＩＢＤ関連ｍｉＲＮＡ濃度を患者自身のｍｉＲ−１５０および／またはｍｉＲ−３４２−３ｐ（内部標準ｍｉＲＮＡ）濃度と比較し、それによって対照サンプルと比較する必要がなくなる。これに限定されるものではないが、体液（血清、胃腸液、および痰など）、すべての細胞タイプ（腸細胞、白血球、単核細胞など）、または体組織を含むあらゆるタイプの生体サンプルで、ｍｉＲＮＡ発現レベルを検出するアッセイを行うことができる。好ましい実施形態では、ｍｉＲＮＡ濃度が血清サンプルで評価される。

治療薬を開発するため、ｍｉＲＮＡの調節を利用する方法
本発明者は、数種類のｍｉＲＮＡ分子がＩＢＤ患者で差次的に発現され、これは血清サンプルで検出可能であることを発見した。特に、これらのｍｉＲＮＡ分子は炎症の調節および制御に関与する様々なタンパク質と相同性を示すため、様々な異なる医学的疾患で観察される異常炎症経路を抑制または軽減する治療薬として利用することができる。そのような試薬は、ＩＢＤなどの炎症性疾患を含む様々な疾患の治療に有用である。

分子モデリングは、本明細書で開示されるｍＲＮＡおよび本明細書で開示される他の差次的に発現されたｍｉＲＮＡの作用を模倣した特異的有機分子を同定しやすくするはずである。コンビナトリアルケミストリーのアプローチを利用し、活性が最も高い分子を同定し、次にこれらの分子を複製してさらにスクリーニングサイクルを行う。特定の実施形態では、候補薬物を合成または天然化合物の大きなライブラリーからスクリーニングすることができる。１つの例は、ヒトに使用することのできる化合物のＦＤＡ承認ライブラリーである。さらに、化合物ライブラリーは、これに限定されるものではないが、ＭａｙｂｒｉｄｇｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．（英国コーンウォール州Ｔｒｅｖｉｌｌｅｔ）、Ｃｏｍｇｅｎｅｘ（米国ニュージャージー州Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ）、Ｍｉｃｒｏｓｏｕｒｃｅ（米国コネティカット州ＮｅｗＭｉｌｆｏｒｄ）、Ａｌｄｒｉｃｈ（米国ウィスコンシン州ＭｉｌｗａｕｋｅｅＩ）、ＡＫｏｓＣｏｎｓｕｌｔｉｎｇａｎｄＳｏｌｕｔｉｏｎｓＧｍｂＨ（スイス、Ｂａｓｅｌ）、Ａｍｂｉｎｔｅｒ（フランス、Ｐａｒｉｓ）、Ａｓｉｎｅｘ（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、Ａｕｒｏｒａ（オーストリア、Ｇｒａｚ）、ＢｉｏＦｏｃｕｓＤＰＩ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｂｉｏｎｅｔ（英国、Ｃａｍｅｌｆｏｒｄ）、ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ（米国カリフォルニア州ＳａｎＤｉｅｇｏ）、ＣｈｅｍＤｉｖ（米国カリフォルニア州ＳａｎＤｉｅｇｏ）、ＣｈｅｍｉｃａｌＢｌｏｃｋＬｔ（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、ＣｈｅｍＳｔａｒ（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、ＥｘｃｌｕｓｉｖｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｌｔｄ（ロシア、Ｏｂｎｉｎｓｋ）、Ｅｎａｍｉｎｅ（ウクライナ、Ｋｉｅｖ）、Ｅｖｏｔｅｃ（ドイツ、Ｈａｍｂｕｒｇ）、Ｉｎｄｏｆｉｎｅ（米国ニュージャージー州Ｈｉｌｌｓｂｏｒｏｕｇｈ），Ｉｎｔｅｒｂｉｏｓｃｒｅｅｎ（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ（フランス、Ｍｏｎｔｌｕｃｏｎ）、ＬｉｆｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（米国コネティカット州Ｏｒａｎｇｅ）、ＭｉｃｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙＬｔｄ．（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、Ｏｔａｖａ（カナダ、オンタリオ州Ｔｏｒｏｎｔｏ）、ＰｈａｒｍＥｘＬｔｄ．（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、ＰｒｉｎｃｅｔｏｎＢｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ（米国ニュージャージー州ＭｏｎｍｏｕｔｈＪｕｎｃｔｉｏｎ）、ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＥｘｃｈａｎｇｅ（米国ニューハンプシャー州ＣｅｎｔｅｒＯｓｓｉｐｅｅ）、Ｓｐｅｃｓ（オランダ、Ｄｅｌｆｔ）、ＴｉｍＴｅｃ（米国デラウェア州Ｎｅｗａｒｋ）、ＴｏｒｏｎｔｏＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｒｐ．（カナダ、オンタリオ州ＮｏｒｔｈＹｏｒｋ）、ＵｋｒＯｒｇＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（ウクライナ、Ｋｉｅｖ）、Ｖｉｔａｓ−Ｍ（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、ＺｅｌｉｎｓｋｙＩｎｓｔｉｔｕｔｅ（ロシア、Ｍｏｓｃｏｗ）、およびＢｉｃｏｌｌ（中国、上海）を含む多数の企業から市販されている。

別の実施形態では、前記差次的に発現されたｍｉＲＮＡが腸の炎症プロセスに関与していることを特定すれば、そのようなｍｉＲＮＡの発現濃度が変化した実験マウス系を作成することができる。これらのｍｉＲＮＡ分子を発現したトランスジェニックマウスは、ＩＢＤの発症およびＩＢＤへの進行における前記ｍｉＲＮＡの役割を検討するためのモデル系を提供する。実験マウスにトランス遺伝子を導入する方法は当業者に周知である。一般的な方法は３つあり、１．初期胚に対象の外来遺伝子をコードするレトロウイルスベクターを組み込む、２．新たに受精した卵の前核にＤＮＡを注入する、および３．初期胚に遺伝子操作した胚幹細胞を組み込むなどである。上述のトランスジェニックマウスの作成は、標的タンパク質が様々な細胞炎症プロセスに果たしている役割の分子的解明を促す。そのようなマウスは、動物モデル全体で想定される治療薬を研究するｉｎｖｉｖｏスクリーニングツールを提供し、本発明に含まれる。

差次的に発現されたｍｉＲＮＡまたはその模倣体を有する医薬品を、例えば、経口または静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内、皮下、眼窩内、鼻腔内、関節包内、腹腔内（ｉ．ｐ．）、大槽内、気管内（ｉ．ｔ．）、または関節内などの非経口、または受動または促進吸収を含む様々な経路で被験者に投与することができることは、当業者の理解するところである。同じ投与経路を、例えば、上述の小さな分子、核酸分子、ペプチド、抗体、およびポリペプチドなどの他の薬学的に有用な化合物に利用することができる。

望ましい場合は、そのような差次的に発現されたｍｉＲＮＡまたは模倣体を有する医薬組成物もリポソーム、ミクロスフェア、微小気泡、または他のポリマー基質に組み込むことができる（Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ，ＬｉｐｏｓｏｍｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．ＩｔｏＩＩＩ，２ｎｄｅｄ．，ＣＲＣＰｒｅｓｓ，ＢｏｃａＲａｔｏｎＦｌａ．（１９９３））。例えば、リン脂質または他の脂質から成るリポソームは、作成および投与が比較的簡単な、薬学的に許容でき、代謝可能な非毒性担体である。