JP2014065735A - 最適化抗体を用いた、免疫応答を逃れる病態の治療法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】a)抗体のFc断片のグリコシル化の性質によって選択された細胞株で生産される、またはb)Fcγのグリカン構造が、エクスビボで修飾されている、および/またはc)Fc受容体との反応性を上昇させるように、一次配列が修飾されているキメラモノクローナル抗体。
【選択図】なし
Description
したがって本発明は、抗原部位の数または抗原密度が低い病態、または抗体が抗原に比較的にアクセスしにくい病態、または活性化されたもしくはリクルートされたエフェクター細胞の数が少ない病態の治療を意図した薬用の製品の調製のための、最適化されたヒトまたはヒト化キメラのモノクローナル抗体の使用に関するが、以下のような特徴を持つ:
a) 抗体のFc断片のグリコシル化の性質によって選択された細胞株中で生産される、または
b) Fcγ断片のグリカン構造は、エクスビボで修飾されている、および/または
c) 一次構造はFc受容体との反応性を上昇させるように修飾されている;
該抗体は、i) CHO株で産生した同じ抗体と比較して、5/1未満、好ましくは2/1未満のE/T(エフェクター細胞/標的細胞)比で、FcγRIII (CD16)を介したADCC活性の割合が50%超、好ましくは100%超;およびii) 免疫系のCD16受容体発現エフェクター細胞による少なくとも1つのサイトカインの産生率が、CHO細胞株で産生される同じ抗体と比較して、50%超、または100%超、または好ましくは200%超である。
したがって、本発明は、特に新生児溶血性疾患、セザリー症候群、慢性骨髄性白血病、抗原標的が弱く発現される癌、特に乳癌、特にポリ塩化ビフェニルに暴露した個体を標的とする、環境に関連した病態、感染症、特に結核、慢性疲労症候群(CFS)、および例えば幼住血吸虫のような寄生虫感染からなる群より選択される、免疫応答を逃れる病態の治療を意図した薬用の製品の調製のための、上述の抗体の使用に関する。
Rh D抗原に特異的なIgG1をコードする同じ配列が、CHOおよびYB2/0にトランスフェクトされた。表面に種々の量のRh抗原を発現するRh陽性赤血球細胞に関して、抗体の細胞障害性活性が比較された。すなわち、正常O+赤血球(10-20,000部位)およびRh抗原を過剰発現する赤血球細胞(> 60,000部位)。
正常赤血球細胞(N、白)またはRh抗原を過剰発現する赤血球細胞(GR6, 黒)に対する、CHO(三角)またはYB2/0(四角)中で発現された抗体のADCC活性が比較された。
HLA-DR抗原に特異的なIgG1をコードする同じ配列が、CHOおよびYB2/0にトランスフェクトされた。種々の量のエフェクター/標的比(図2を参照されたい)の存在下で、Raji細胞に対する抗体の細胞障害性活性が比較された。
HLA-DR抗原に特異的なIgG1をコードする同じ配列が、CHOおよびYB2/0にトランスフェクトされた。種々の量のエフェクター/標的比(E/T比)の存在下で、Raji細胞に対する抗体の細胞障害性活性が比較された。
HLA-DR抗原に特異的なIgG1をコードする同じ配列が、CHOおよびYB2/0にトランスフェクトされた。抗体によって誘導されるエフェクター細胞の活性化(JurkatCD16によるIL2の分泌)は、あらかじめ抗原部位をマウス抗HLA-DR抗体の量を徐々に増やしてブロックし、評価される抗体が利用できるHLA-DR抗原の数が徐々に低下するようにしたRaji細胞に関して、比較された(図4を参照されたい)。
抗CD20により得られたADCCの結果は、抗HLADRにより得られた結果を確認するものであり、すなわち、標的細胞の表面に発現され、利用できる抗原部位の数が少なければ少ないほど、YB20/によって産生される最適化抗体と、CHOで産生される抗体の間のエフェクター細胞の活性化の差は大きくなる。
この実験では、3つの抗Dモノクローナル抗体が比較された。
セットアップモデル:CD16受容体をコードする遺伝子でトランスフェクトされたJurkat細胞株。用途:抗腫瘍反応の増強。抗原・抗体免疫複合体によって活性化されたエフェクター細胞によって生産されるIL2は、Tリンパ球およびNK細胞の活性化を誘導し、さらにこれは細胞増殖の刺激にまでつながり得る。IFNγはCTLの活性を刺激し、マクロファージの活性を増強し得る。
用途:貪食作用の増強および抗炎症性の性質の誘導。抗原-抗体免疫複合体によって活性化されたエフェクター細胞によって生産されるTNFは、腫瘍浸潤性リンパ球およびマクロファージの増殖を刺激する。IL-1Raは受容体に対してIL1と競合するサイトカインであり、それにより抗炎症効果を発揮する。
用途:特定の抗原に特異的な免疫寛容の誘導。IL10は様々なエフェクター細胞の活性化およびサイトカインの生産を阻害する分子である。したがって、抗原-抗体免疫複合体によって活性化されたエフェクター細胞によって生産されるIL10は、正常でありながら意図される標的細胞と共通する抗原を発現する細胞に関して、抗体の細胞障害性活性を調節する役割を果たす可能性があり、TNFαの効果を変化させる可能性もある。
3つの細胞群が研究された:多形核細胞、単核細胞、およびNK細胞である。抗体に誘導されるサイトカイン合成は、標的の存在に依存する。抗D抗体R297およびポリクローナル抗体が種々のサイトカインの生産を誘導する能力には、ほとんど差がない。一方、AD1はサイトカイン分泌を非常に一般的には誘導しない。
11.1 モノクローナル抗体R297およびポリクローナル抗体WinRhoは、単核細胞の存在下で、かなりのIL8の分泌を誘導する。この分泌は、抗体濃度および抗原性の標的、すなわちRh陽性赤血球細胞の存在に依存する。抗体AD1はIL8生産を誘導する能力がはるかに低い(図7)。
序論
本発明者らの最初の結果は、YB2/0において産生された抗D抗体、および臨床的に使用されているポリクローナル抗体は、精製されたNK細胞または単核細胞から、サイトカイン、特にTNFαおよびインターフェロンγ(IFNγ)の生産を誘導することを示した。一方で、他の細胞株で産生された抗D抗体は、ADCCが陰性であり、サイトカイン分泌を誘導する能力を持たないことが分かった。
抗体
抗CD20:YB2/0にトランスフェクトされた抗CD20キメラ抗体は、CHOにおいて産生された市販の抗CD20抗体(リタキサン)と比較された。
抗HLA-DR:抗HLA-DRキメラ抗体をコードする同じ配列が、CHO (B11)またはYB2/0 (4B7)にトランスフェクトされた。
標的細胞:表面にCD20およびHLA-DR抗原を発現しているRaji細胞。
エフェクター細胞:ヒト血液バッグから負の選択によって精製されたヒトNK細胞。
様々な濃度の抗CD20抗体または抗HLA-DR抗体が、Raji細胞およびNK細胞とインキュベートされた。16時間インキュベーションした後、細胞は遠心された。上清のTNFαおよびIFNγが測定された。
1) TNFα:結果は、上清中で測定されたTNFαのレベルとして、pg/mlで表示されている。反応液に添加された抗体の様々な濃度が、X軸に示されている(図11)。
Claims (18)
- 抗原部位の数が1標的細胞あたり250,000未満である癌の治療を意図した医薬用の生産物の調製のための、抗原に対する、最適化されたキメラ、ヒトまたはヒト化モノクローナル抗体の使用:
ここで、該抗体は、短い鎖のバイアンテナ型、低レベルのシアル化、インターカレーションのない末端付加部位のマンノースとGlcNAc、および低レベルのフコシル化という一般的なグリカン構造を有する。 - 最適化された抗体が、
i) CHO株で産生した同じ抗体と比較して、5/1未満のE/T(エフェクター細胞/標的細胞)比で、FcγRIII (CD16)依存性ADCC活性の割合が50%超であり、および
ii) Jurkat CD16エフェクター細胞または免疫系のCD16受容体発現エフェクター細胞による少なくとも1つのサイトカインの産生率が、CHO細胞株で産生される同じ抗体と比較して、50%超である
という特徴を有する、請求項1記載の使用。 - 最適化された抗体が、CHO株で産生した同じ抗体と比較して、5/1未満のE/T(エフェクター細胞/標的細胞)比で、FcγRIII (CD16)依存性ADCC活性の割合が100%超であることを特徴とする、請求項2記載の使用。
- E/T(エフェクター細胞/標的細胞)比が、2/1未満であることを特徴とする、請求項1乃至3のいずれか一項記載の使用。
- 最適化された抗体が、Jurkat CD16エフェクター細胞または免疫系のCD16受容体発現エフェクター細胞による少なくとも1つのサイトカインの産生率が、CHO細胞株で産生される同じ抗体と比較して、100%超であることを特徴とする、請求項2乃至4のいずれか一項記載の使用。
- 最適化された抗体が、Jurkat CD16エフェクター細胞または免疫系のCD16受容体発現エフェクター細胞による少なくとも1つのサイトカインの産生率が、CHO細胞株で産生される同じ抗体と比較して、200%超であることを特徴とする、請求項5記載の使用。
- 抗原部位の数が、1標的細胞あたり100,000未満であることを特徴とする、請求項1記載の使用。
- 抗原部位の数が、1標的細胞あたり50,000未満であることを特徴とする、請求項7記載の使用。
- 最適化された抗体によって放出されるサイトカインが、インターロイキン、インターフェロン、および組織壊死因子(TNF)からなる群より選択されることを特徴とする、請求項1乃至8のいずれか一項記載の使用。
- 最適化された抗体が、CD16受容体を発現する免疫系のエフェクター細胞による、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、TNFα、TGFβ、IP10、およびIFNγからなる群より選択される少なくとも1つのサイトカインの分泌を誘導することを特徴とする、請求項1乃至8のいずれか一項記載の使用。
- エフェクター細胞が、白血球細胞または単球-マクロファージグループの細胞であることを特徴とする、請求項1乃至10のいずれか一項記載の使用。
- 白血球細胞が、NK(ナチュラルキラー)ファミリーの細胞であることを特徴とする、請求項11記載の使用。
- エフェクター細胞が、CD16受容体をコードする発現ベクターでトランスフェクトされたJurkat細胞であることを特徴とする、請求項1乃至10のいずれか一項記載の使用。
- 最適化された抗体が、精製後および/またはエクスビボの修飾後に、Fc断片のグリカン構造を修飾することによって、調製されることを特徴とする、請求項1乃至13のいずれか一項記載の使用。
- 最適化された抗体が、ラットミエローマ細胞株によって生産されることを特徴とする、請求項1乃至13のいずれか一項記載の使用。
- ラットミエローマ細胞株が、YB2/0およびそれに由来する株から選択されることを特徴とする、請求項15記載の使用。
- 最適化された抗体が、ゼロではない中間のGlcNac含量を持つことを特徴とする、請求項1乃至16のいずれか一項記載の使用。
- 抗体が、抗-HLA-DR抗体であることを特徴とする、請求項1乃至17のいずれか一項記載の使用。
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