JP2014058497A - Benzoquinone-type compound for inflammation suppression, and pharmaceutical composition and supplement using the same - Google Patents
Benzoquinone-type compound for inflammation suppression, and pharmaceutical composition and supplement using the same Download PDFInfo
- Publication number
- JP2014058497A JP2014058497A JP2013044458A JP2013044458A JP2014058497A JP 2014058497 A JP2014058497 A JP 2014058497A JP 2013044458 A JP2013044458 A JP 2013044458A JP 2013044458 A JP2013044458 A JP 2013044458A JP 2014058497 A JP2014058497 A JP 2014058497A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- compound
- benzoquinone
- inflammation
- expression
- suppressing inflammation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
Description
本発明は、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物に関し、特に、抗酸化酵素の発現を上昇させるのに用いられる炎症抑制用ベンゾキノン系化合物、ならびにそれを用いた医薬組成物およびサプリメントに関する。 The present invention relates to a benzoquinone compound for suppressing inflammation, and particularly to a benzoquinone compound for suppressing inflammation used for increasing the expression of an antioxidant enzyme, and a pharmaceutical composition and supplement using the same.
炎症は、体の防御反応である。慢性炎症反応は、多くの疾患に関わり、例えば、粥状動脈硬化症、敗血症、糖尿病、関節炎、自己免疫疾患、神経性疾患、肺疾患、更には癌等の病気の進行と緊密な関係があり、長引く炎症反応は、ヒトの体に対して有害であり、疾患を引き起こす可能性があり、炎症関連の疾患の死亡率も逐年増加していく傾向にある。 Inflammation is the body's protective response. Chronic inflammatory reactions are associated with many diseases, such as atherosclerosis, sepsis, diabetes, arthritis, autoimmune diseases, neurological diseases, lung diseases, and even the progression of diseases such as cancer. Prolonged inflammatory reactions are detrimental to the human body and can cause disease, and inflammation-related disease mortality tends to increase year by year.
例えば、粥状動脈硬化症は、慢性炎症反応に関する病理学的現象であり、動脈管壁の内皮細胞又は平滑筋細胞の炎症が重篤化し、線維性の病変によって引き起こされ、血管壁の肥厚を引き起こす可能性があり、心血管疾患の要因の一つである。 For example, atherosclerosis is a pathological phenomenon associated with a chronic inflammatory response, where the inflammation of endothelial cells or smooth muscle cells of the arterial vessel wall becomes severe and caused by fibrotic lesions, resulting in thickening of the vessel wall. It can cause and is one of the causes of cardiovascular disease.
多くの研究において、酸化防止物質が良好な抗炎症作用を有することが指摘されている。体内には、酸化防止防御システムがあり、ヘムオキシゲナーゼ（ｈｅｍｅ ｏｘｙｇｅｎａｓｅ‐１；ＨＯ‐１）、キノンアクセプターオキシドレダクターゼ（ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ：ｑｕｉｎｏｎｅ ａｃｃｅｐｔｏｒ ｏｘｉｄｏｒｅｄｕｃｔａｓｅ １；ＮＱＯ‐１）、グルタチオン（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ；ＧＳＨ）等のような体内の酸化防止物質を増加すれば、ラジカルを効果的に除去し、炎症反応による影響を下げ、心血管疾患を予防し、癌血管の新生、遊走、および侵入を抑制することができる。 Many studies have pointed out that antioxidants have good anti-inflammatory effects. There is an antioxidant defense system in the body, such as heme oxygenase-1 (HO-1), quinone acceptor oxidoreductase (NAD (P) H: quinone acceptor oxidoreductase 1; NQO-1), glutathione (Glutathione) Increasing antioxidants in the body such as GSH) effectively removes radicals, lowers the effects of inflammatory reactions, prevents cardiovascular disease, and suppresses neovascularization, migration, and invasion of cancer blood vessels be able to.
そのため、どのように体内の酸化防止防御能力を強め、炎症反応を下げることは、予防医学における大切な課題となる。市販の抗炎症薬物は数多くあるが、副作用を有する。現在、天然の抗炎症物質を探し、天然の抗炎症物質で抗炎症薬物を取り換え、又は抗炎症薬物の投薬量を下げることを重要視している。
本発明は、上記問題に鑑みてなされたものであり、その目的は副作用を低減する天然の炎症抑制用ベンゾキノン系化合物、ならびに、それを用いた医薬組成物およびサプリメントを提供することにある。
Therefore, how to strengthen the body's antioxidant defense ability and lower the inflammatory response is an important issue in preventive medicine. Many commercially available anti-inflammatory drugs have side effects. At present, it is important to search for natural anti-inflammatory substances, replace anti-inflammatory drugs with natural anti-inflammatory substances, or reduce the dosage of anti-inflammatory drugs.
This invention is made | formed in view of the said problem, The objective is to provide the natural benzoquinone type compound for inflammation suppression which reduces a side effect, and a pharmaceutical composition and supplement using the same.
請求項１に係る発明によると、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は、抗酸化酵素の発現を上昇させるのに用いられ、一般式（１）で表される構造を有する。
請求項２に係る発明によると、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は、一般式（１）で表される化合物の位置異性体であり、一般式（２）で表される構造を有する。
請求項３に係る発明によると、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は、２，３‐ジメトキシ‐５‐メチル‐１，４‐ベンゾキノン、２‐メトキシ‐６‐メチル‐１，４‐ベンゾキノン、又は５‐メチル‐１‐ベンゾ［１，３］ジオキソール‐４，７‐ジオンである。 According to the invention of claim 3, the benzoquinone compound for suppressing inflammation is 2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquinone, 2-methoxy-6-methyl-1,4-benzoquinone, or 5- Methyl-1-benzo [1,3] dioxol-4,7-dione.
請求項４に係る発明によると、抗酸化酵素は、ヘムオキシゲナーゼ、キノンアクセプターオキシドレダクターゼ、又はグルタチオンである。 According to the invention of claim 4, the antioxidant enzyme is heme oxygenase, quinone acceptor oxidoreductase, or glutathione.
請求項５に係る発明によると、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は薬物の調製に用いられる。
請求項６に係る発明によると、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は、ＬＰＳに誘導される炎症反応、慢性炎症、粥状動脈硬化症、敗血症、冠動脈疾患、糖尿病又は関節炎等の炎症を抑制するのに用いられる。
According to the invention of claim 5, the benzoquinone compound for suppressing inflammation is used for the preparation of a drug.
According to the invention according to claim 6, the benzoquinone compound for suppressing inflammation suppresses inflammation such as LPS-induced inflammatory reaction, chronic inflammation, atherosclerosis, sepsis, coronary artery disease, diabetes or arthritis. Used.
請求項７に係る発明によると、医薬組成物は、抗酸化酵素の発現を上昇させるのに用いられ、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物を有効成分とする加工物又は天然物からの抽出物、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物の薬学的に許容される塩類、および、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物の薬学的に許容される溶媒和物のうち少なくとも一つを含む。 According to the invention of claim 7, the pharmaceutical composition is used to increase the expression of an antioxidant enzyme, and the processed product or natural product containing the anti-inflammatory benzoquinone compound, the anti-inflammatory benzoquinone compound as an active ingredient And at least one of pharmaceutically acceptable salts of benzoquinone compounds for suppressing inflammation and pharmaceutically acceptable solvates of benzoquinone compounds for suppressing inflammation.
請求項８に係る発明によると、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物を有効成分とする加工物は、樟芝（ベニクスノキタケ）発酵液又は樟芝の発酵液の乾燥粉末である。 According to the invention which concerns on Claim 8, the processed material which uses the benzoquinone type compound for inflammation suppression as an active ingredient is a dried powder of the fermentation liquid of a turfgrass (Benix nokita) fermentation liquid or the fermentation liquid of a turf.
請求項９に係る発明によると、サプリメントは、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物を有効成分とする。そのうち、炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は、人工合成、または、樟芝の発酵液由来である。請求項１０に係る発明によると、サプリメントは、液状、粉末、錠剤、カプセル又は注射剤である。 According to the invention which concerns on Claim 9, a supplement uses the benzoquinone type compound for inflammation suppression as an active ingredient. Among them, the benzoquinone compound for suppressing inflammation is derived from artificial synthesis or a fermentation solution of Antrodia camphorata. According to the invention of claim 10, the supplement is a liquid, powder, tablet, capsule or injection.
本発明の炎症抑制用ベンゾキノン系化合物は、抗酸化酵素の発現を上昇させることができ、ＬＰＳに誘導される炎症反応、慢性炎症、粥状動脈硬化症、敗血症、冠動脈疾患、糖尿病又は関節炎等の炎症を抑制する医薬組成物又はサプリメントの調製に用いられることができる。 The benzoquinone compound for suppressing inflammation according to the present invention can increase the expression of an antioxidant enzyme, such as inflammatory reaction induced by LPS, chronic inflammation, atherosclerosis, sepsis, coronary artery disease, diabetes or arthritis. It can be used for the preparation of pharmaceutical compositions or supplements that suppress inflammation.
（一実施形態）
本発明の一実施形態によると、抗酸化酵素の発現を上昇させるのに用いられる炎症抑制用ベンゾキノン系化合物（以下、単に化合物（Ｉ）という）は、一般式（１）で表される構造を有し、還元型又は異性体が、化学合成、天然物、加工物由来である。
According to one embodiment of the present invention, an anti-inflammatory benzoquinone compound (hereinafter simply referred to as compound (I)) used to increase the expression of an antioxidant enzyme has a structure represented by the general formula (1). The reduced form or isomer is derived from chemical synthesis, natural products, or processed products.
天然物または加工物由来の化合物（Ｉ）は、酸化型もしくは還元型、異なる構造異性体（ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ）又は、位置異性体（ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎａｌ ｉｓｏｍｅｒｓ）で天然に存在する。また、合成された化合物（Ｉ）、又は樟芝の発酵液由来の化合物（Ｉ）は、何れも抗酸化酵素の発現を上昇させる効果を有する。化合物（Ｉ）の具体的な構造において、Ｒ１は水素基であり、Ｒ２はメトキシ基である。純粋な化合物（Ｉ）による効果は、化合物（Ｉ）を主な有効成分とする混合物の効果と同様である。 The compound (I) derived from a natural product or a processed product is naturally present in an oxidized or reduced form, different constitutive isomers, or positional isomers. In addition, the synthesized compound (I) or the compound (I) derived from the fermentation solution of Antrodia camphor has an effect of increasing the expression of antioxidant enzymes. In the specific structure of compound (I), R1 is a hydrogen group and R2 is a methoxy group. The effect of pure compound (I) is the same as that of the mixture containing compound (I) as the main active ingredient.
下記実施例は、本発明の内容の特定の態様を明らかにし、当業者に本発明の内容に対する理解に寄与するためのものである。ただし、本発明の内容の範囲は、これらの実施例に限定されない。 The following examples are intended to clarify specific aspects of the subject matter of the present invention and to contribute to those skilled in the art to understand the subject matter of the present invention. However, the scope of the content of the present invention is not limited to these examples.
（第一実施例：抗酸化酵素の発現を上昇させる化合物（Ｉ）の作用）
（実験例１：哺乳動物のマクロファージ及び表皮細胞に対する化合物（Ｉ）の安全性解析）
本実施例では、哺乳動物細胞に対する化合物（Ｉ）の安全性及び安全量を確定するために、異なる投与量の化合物（Ｉ）でマウスの単核細胞マクロファージ白血病細胞株（ＲＡＷ ２６４．７）及びヒト血管内皮細胞株（Ｅａ ｈｙ９２６）に対して、細胞生存検出を行う。
(First Example: Action of Compound (I) that Increases Expression of Antioxidant Enzyme)
(Experimental example 1: Safety analysis of compound (I) against mammalian macrophages and epidermal cells)
In this example, to determine the safety and safe dose of compound (I) against mammalian cells, different doses of compound (I) were used in the mouse mononuclear cell macrophage leukemia cell line (RAW 264.7) and Cell survival detection is performed on a human vascular endothelial cell line (Ea hy926).
実験細胞の培養条件を５％ＣＯ２、３７℃恒温に維持する。細胞を一定数まで培養した場合、遠心して培養液を除去し、実験の２４時間前に、培養液を交換し、細胞の数を細胞計数器によって算出する。 The culture conditions of the experimental cells are maintained at 5% CO 2 and a constant temperature of 37 ° C. When cells are cultured to a certain number, the culture solution is removed by centrifugation, the culture solution is replaced 24 hours before the experiment, and the number of cells is calculated by a cell counter.
細胞の生存率（ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）の測定は、細胞賦活評価実験（Ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｎｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ａｓｓａｙ；ＭＴＴ ａｓｓａｙ）によって行う。細胞生存検出の実方法については、Ｐａｒａｄａ‐Ｔｕｒｓｋａ等により提案されたステップを参照する。 The cell viability is measured by a cell activation evaluation experiment (Method of translational assay; MTT assay). For the actual method of detecting cell survival, refer to the steps proposed by Parada-Turska et al.
図１は、異なる濃度の化合物（Ｉ）を与える場合、マウス２６４．７細胞株の生存率に対する化合物（Ｉ）の影響を定量化した図である。結果を、ｍｅａｎ±ＳＤ値で表し、ｎ＝３、ｐ＜０．０５である。 FIG. 1 is a quantification of the effect of compound (I) on the survival rate of the mouse 264.7 cell line when different concentrations of compound (I) are given. The results are expressed as mean ± SD values, n = 3, p <0.05.
図１の結果が示すように、実験濃度２．５〜２０μＭの化合物（Ｉ）がマウス２６４．７細胞に２４時間作用した後、濃度が２．５〜１０μＭである場合実験細胞は依然として約９０％の生存率を維持し、濃度が１５μＭである場合生存率が約６０％にやや下がったが、濃度が２０μＭである場合依然として約６０％の生存率に維持する。上記結果から、化合物（Ｉ）の哺乳動物の細胞に対する安全性がかなり高いことが明らかである。下記で、マウス２６４．７細胞株を例として、化合物（Ｉ）のマクロファージにおける酸化防止遺伝子に対する調節パターンを分析する。 As the results in FIG. 1 show, after the experimental concentration of 2.5-20 μM of Compound (I) acts on mouse 264.7 cells for 24 hours, when the concentration is 2.5-10 μM, the experimental cells are still about 90 % Viability was maintained, with viability dropped slightly to about 60% when the concentration was 15 μM, but still about 60% viability when the concentration was 20 μM. From the above results, it is clear that the safety of the compound (I) against mammalian cells is quite high. In the following, taking the mouse 264.7 cell line as an example, the regulatory pattern of compound (I) for the antioxidant gene in macrophages is analyzed.
図２は、異なる濃度の化合物（Ｉ）を与える場合、ヒト内皮細胞株の生存率に対する化合物（Ｉ）の影響を定量化した図である。結果を、ｍｅａｎ±ＳＤ値で表し、ｎ＝３、ｐ＜０．０５である。 FIG. 2 is a diagram quantifying the effect of compound (I) on the survival rate of human endothelial cell lines when different concentrations of compound (I) are given. The results are expressed as mean ± SD values, n = 3, p <0.05.
図２の結果が示すように、実験濃度５〜２０μＭの化合物（Ｉ）がヒト内皮細胞に２４時間作用した後、濃度が５〜１０μＭである場合、実験細胞は依然として約９０％の生存率に維持し、濃度が２０μＭである場合生存率が依然として８０％に維持する。上記結果から、化合物（Ｉ）の哺乳動物の細胞に対する安全性がかなり高いことが明らかである。下記で、ヒト内皮細胞株Ｅａ ｈｙ９２６を例として、化合物（Ｉ）の内皮細胞の炎症遺伝子に対する調節パターン、及び粥状動脈硬化症に対する効果を分析する。 As the results in FIG. 2 show, after 5 to 20 μM of the experimental concentration of Compound (I) acts on human endothelial cells for 24 hours, when the concentration is 5 to 10 μM, the experimental cells still have a survival rate of about 90%. And when the concentration is 20 μM, viability is still maintained at 80%. From the above results, it is clear that the safety of the compound (I) against mammalian cells is quite high. In the following, taking the human endothelial cell line Ea hy926 as an example, the regulatory pattern of the compound (I) on the inflammatory gene of endothelial cells and the effect on atherosclerosis are analyzed.
（実験例２：炎症タンパク質の発現及びサイトカインの分泌に対する化合物（Ｉ）の抑制作用）
炎症酵素（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｅｎｚｙｍｅｓ）、炎症性サイトカイン（ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ）、ケモカイン（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ）、及び接着分子（ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ）は、慢性炎症反応において、重要な役割を果たしていることが既に実証されており、これらの炎症因子を、細胞炎症反応の指標とみなすことができる。
(Experimental example 2: Inhibitory effect of compound (I) on expression of inflammatory protein and secretion of cytokine)
Inflammatory enzymes, proinflammatory cytokines, chemokines, and adhesion molecules have already been demonstrated to play an important role in chronic inflammatory reactions, and these Inflammatory factors can be considered as indicators of cellular inflammatory responses.
例えば、シクロオキシゲナーゼ‐２（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ‐２；ＣＯＸ‐２）と誘導型一酸化窒素合成酵素II（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ＮＯＳ；ｉＮＯＳ）は、マクロファージにおける炎症因子である。そのうち、ＣＯＸ‐２は、細胞が刺激されると、大量に発現され、プロスタグランジン（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ；ＰＧｓ）を大量に生成し、炎症促進、血管新生、細胞アポトーシス抑制、及び癌細胞成長促進の作用を有する。ｉＮＯＳは、マクロファージ、内皮細胞、肝細胞、及び平滑筋細胞において、シグナル伝達分子としての一酸化窒素（Ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ；ＮＯ）を合成する酵素である。ｉＮＯＳの発現と、炎症反応、敗血症及び卒中の発生とは正依存性関係を有する。 For example, cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase II (inducible NOS; iNOS) are inflammatory factors in macrophages. Among them, COX-2 is expressed in a large amount when cells are stimulated, and produces a large amount of prostaglandins (PGs), and promotes inflammation, angiogenesis, cell apoptosis inhibition, and cancer cell growth promotion. Have iNOS is an enzyme that synthesizes nitric oxide (NO) as a signaling molecule in macrophages, endothelial cells, hepatocytes, and smooth muscle cells. There is a positive dependence relationship between iNOS expression and the occurrence of inflammatory response, sepsis and stroke.
よって、以下、化合物（Ｉ）のマクロファージ抗炎症反応に対する効果を観察するために、前記標的細胞タンパク質について、ウエスタンブロット解析（Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ）を行い、調節した炎症の前駆物質の分泌量をそれぞれ観察する。 Therefore, hereinafter, in order to observe the effect of the compound (I) on the anti-inflammatory reaction of macrophages, Western blot analysis (Western blotting) is performed on the target cell protein, and the secretion amount of the regulated precursor of inflammation is observed. .
図３Ａ〜図３Ｂを参照する。図３Ａは、刺激剤の存在下で、異なる量の化合物（Ｉ）を与える場合、ウエスタンブロット解析法によって検出された、マウス２６４．７細胞における炎症前駆物質ＣＯＸ‐２の含有量に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。β‐ａｃｔｉｎは、内部標準（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ）である。図３Ｂは、異なる量の化合物（Ｉ）を与える場合、マウス２６４．７細胞におけるＣＯＸ‐２下流の炎症性サイトカインプロスタグランジン‐Ｅ２（ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２；ＰＧＥ２）の含有量に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。実験において、リポ多糖類（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ＬＰＳ）を刺激剤として、細胞を刺激して炎症前駆物質ＣＯＸ‐２を生じさせ、異なる量の化合物（Ｉ）が存在する場合、ＬＰＳによる細胞刺激の抑制効果を観察する。 Please refer to FIG. 3A to FIG. 3B. FIG. 3A shows that compound (I) relative to the content of inflammatory progenitor COX-2 in mouse 264.7 cells detected by Western blot analysis when different amounts of compound (I) were given in the presence of stimulant. It is a figure which shows the influence of (). β-actin is an internal control. FIG. 3B shows the effect of compound (I) on the content of inflammatory cytokine prostaglandin E2 (PGE2) downstream of COX-2 in mouse 264.7 cells when given different amounts of compound (I). FIG. In experiments, when lipopolysaccharide (LPS) is used as a stimulant, cells are stimulated to produce inflammatory precursor COX-2, and when different amounts of compound (I) are present, the inhibitory effect of LPS on cell stimulation Observe.
図３Ａの結果が示すように、刺激剤ＬＰＳが存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、マウス２６４．７細胞における炎症タンパクＣＯＸ‐２の発現量が減少する。 As shown in the results of FIG. 3A, when the stimulating agent LPS is present, the expression level of the inflammatory protein COX-2 in mouse 264.7 cells decreases with an increase in the dose of compound (I).
また、図３Ｂの結果が示すように、ＬＰＳが存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、細胞におけるＰＧＥ２の濃度が減少する。 Moreover, as the result of FIG. 3B shows, when LPS exists, the density | concentration of PGE2 in a cell reduces with the increase in the dosage of a compound (I).
また、図４Ａ及び図４Ｂを参照する。図４Ａは、刺激剤ＬＰＳが存在する場合、異なる量の化合物（Ｉ）を与える場合、ウエスタンブロット解析法によって検出された、マウス２６４．７細胞におけるｉＮＯＳの発現状況に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。β‐ａｃｔｉｎは、内部標準である。図４Ｂは、異なる量の化合物（Ｉ）を与える場合、ｉＮＯＳ下流のサイトカインＮＯの含有量割合（％）に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。 Reference is also made to FIGS. 4A and 4B. FIG. 4A shows the effect of compound (I) on the iNOS expression status in mouse 264.7 cells detected by Western blot analysis when different amounts of compound (I) are given in the presence of stimulant LPS. FIG. β-actin is an internal standard. FIG. 4B is a graph showing the effect of compound (I) on the content ratio (%) of cytokine NO downstream of iNOS when different amounts of compound (I) are given.
図４Ａの結果が示すように、刺激剤ＬＰＳが存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、マウス２６４．７細胞における炎症タンパクｉＮＯＳの発現量が減少する。 As shown in the results of FIG. 4A, when the stimulating agent LPS is present, the expression level of the inflammatory protein iNOS in mouse 264.7 cells decreases with an increase in the dose of compound (I).
また、図４Ｂの結果が示すように、ＬＰＳが存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、細胞におけるＮＯの割合が減少する。 Moreover, as the result of FIG. 4B shows, when LPS is present, the proportion of NO in the cells decreases as the dose of compound (I) increases.
従って、図３Ａ〜図４Ｂの結果から、化合物（Ｉ）は、細胞炎症タンパクＣＯＸ‐２、ｉＮＯＳの発現量に対して著しい抑制効果を有し、細胞における炎症性サイトカインＰＧＥ２及びＮＯの分泌を抑制し、炎症反応の発生を抑制することが明らかである。 Therefore, from the results of FIG. 3A to FIG. 4B, compound (I) has a remarkable inhibitory effect on the expression levels of cell inflammatory proteins COX-2 and iNOS, and suppresses secretion of inflammatory cytokines PGE2 and NO in the cells. It is clear that it suppresses the occurrence of an inflammatory reaction.
（実験例３‐１：細胞炎症のシグナル伝達分子の発現に対する化合物（Ｉ）の抑制作用）
現在、酸化ストレスは、炎症サイトカインと炎症物質の発現を促進する可能性がある。炎症物質は、細胞核転写因子ＮＦ‐κＢ（Ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ‐Ｋａｐｐａ Ｂ）とＡＰ‐１のような細胞内のシグナル伝達分子を活性化させ、炎症関連の遺伝子を発現させるように促し、更に、サイトカイン（ＴＮＦ‐α、ＩＬ‐Ｉβ等）、細胞接着分子（ＶＣＡＭ‐１、ＩＣＡＭ‐１、Ｅ‐ｓｅｌｅｃｔｉｎ等）、走化性物質（ＭＣＰ‐１）、及び炎症関連のタンパク等の発生を引き起こすことが知られている。
(Experimental Example 3-1: Inhibitory Effect of Compound (I) on Expression of Signaling Molecule of Cell Inflammation)
Currently, oxidative stress may promote the expression of inflammatory cytokines and inflammatory substances. Inflammatory substances activate intracellular signaling molecules such as the nuclear transcription factor NF-κB (Nuclear factor-Kappa B) and AP-1, promote the expression of inflammation-related genes, and further promote cytokines ( TNF-α, IL-Iβ, etc.), cell adhesion molecules (VCAM-1, ICAM-1, E-selectin, etc.), chemotactic substances (MCP-1), and inflammation-related proteins Are known.
細胞核転写因子ＮＦ‐κＢは、ｐ５０とｐ６５からなるヘテロ二量体タンパク質であり、体の炎症を引き起こす主な調節物質である。ＮＦ‐κＢが活性化されると、細胞核及びミトコンドリアに進入し、免疫関連の遺伝子が発現される。アクチベータータンパク質‐１（ＡＰ‐１）も、炎症物質の発生を調節する。ＡＰ‐１は、ｃ‐Ｊｕｎとｃ‐Ｆｏｓからなるヘテロ二量体タンパク質であり、その発現が、分裂促進因子活性化タンパク質キナーゼ（Ｍｉｔｏｇｅｎ‐ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ；ＭＡＰＫｓ）により調節される。 The nuclear transcription factor NF-κB is a heterodimeric protein consisting of p50 and p65, and is the main regulator that causes inflammation of the body. When NF-κB is activated, it enters the cell nucleus and mitochondria, and immune-related genes are expressed. Activator protein-1 (AP-1) also regulates the development of inflammatory substances. AP-1 is a heterodimeric protein consisting of c-Jun and c-Fos, and its expression is regulated by mitogen-activated protein kinases (MAPKs).
以下、刺激剤と化合物（Ｉ）が存在する場合、細胞核と細胞質において、細胞核転写因子ＮＦ‐κＢ及びアクチベータータンパク質‐１の活性に対する化合物（Ｉ）の影響について、分析する。 Hereinafter, when the stimulant and the compound (I) are present, the influence of the compound (I) on the activities of the nuclear transcription factor NF-κB and the activator protein-1 is analyzed in the cell nucleus and cytoplasm.
図５Ａは、異なる投与量の刺激剤ＬＰＳと化合物（Ｉ）を用いて、マウス２６４．７細胞株を処理する場合、ＮＦ‐κＢルシフェラーゼ活性（Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ）の免疫細胞化学的解析（Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ；ＩＣＣ）による結果を定量化した図である。そのうち、空ベクトルのみを含有する形質転換体を陰性対照群（ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ）とし、化合物（Ｉ）とＬＰＳを添加しなかったものを背景値対照群とし、その転写活性を１００％とする。 FIG. 5A shows an immunocytochemical analysis of NF-κB luciferase activity (Immunocytochemical analysis) when the murine 264.7 cell line is treated with different doses of stimulant LPS and Compound (I); It is the figure which quantified the result by ICC). Among them, a transformant containing only an empty vector is defined as a negative control group, a compound to which compound (I) and LPS are not added is defined as a background value control group, and its transcription activity is defined as 100%.
結果が示すように、ＬＰＳは、ＮＦ‐κＢの活性（背景値対照群）を誘発するが、化合物（Ｉ）の存在下で、化合物（Ｉ）の濃度の向上に伴い、ＮＦ‐κＢの発現活性が下がる。また、化合物（Ｉ）の処理濃度が５〜１０μＭに達すると、ＮＦ‐κＢの活性が背景値以下に下がる。 As the results show, LPS induces the activity of NF-κB (background value control group), but in the presence of compound (I), the expression of NF-κB increases with increasing concentration of compound (I). The activity decreases. In addition, when the treatment concentration of compound (I) reaches 5 to 10 μM, the activity of NF-κB falls below the background value.
図５Ｂは、異なる投与量の刺激剤ＬＰＳと化合物（Ｉ）を用いて、マウス２６４．７細胞株を処理する場合、そのＡＰ‐１ルシフェラーゼ活性の免疫細胞化学的解析による結果を定量化した図である。そのうち、空ベクトルのみを含有する形質転換体を陰性対照群とし、化合物（Ｉ）とＬＰＳを添加しなかったものを背景値対照群とし、その転写活性を１００％とする。 FIG. 5B quantifies the results of immunocytochemical analysis of AP-1 luciferase activity when the murine 264.7 cell line is treated with different doses of stimulant LPS and compound (I). It is. Among them, a transformant containing only an empty vector is defined as a negative control group, a compound to which compound (I) and LPS are not added is defined as a background value control group, and the transcription activity is defined as 100%.
結果が示すように、ＬＰＳは、ＡＰ‐１の活性（背景値対照群）を誘発するが、化合物（Ｉ）の存在下で、化合物（Ｉ）濃度の向上に伴い、ＡＰ‐１の発現活性が下がる。また、化合物（Ｉ）の処理濃度が２．５μＭに達すると、ＡＰ‐１の活性が背景値以下に下がる。 As the results show, LPS induces the activity of AP-1 (background value control group), but in the presence of Compound (I), the expression activity of AP-1 increases with the increase of Compound (I) concentration. Go down. In addition, when the treatment concentration of compound (I) reaches 2.5 μM, the activity of AP-1 falls below the background value.
（実験例３‐２：ＲＯＳ‐ＪＮＫ経路を調節しＮｒｆ２を活性化する化合物（Ｉ）の作用）
細胞において、ＮＦ‐κＢ及びＡＰ‐１は、ＲＯＳ‐ＪＮＫシグナル伝達経路に関与する。ＮＦ‐κＢ及びＡＰ‐１が活性化されると、引き続きｐ５０／ｐ６５（ＮＦ‐κＢ）とｃ‐Ｆｏｓ／ｃ‐Ｊｕｎ（ＡＰ１）を含むその下流の転写因子が活性化されるようになり、これらの転写因子同士が互いに協調する。
Experimental Example 3-2: Action of Compound (I) that Regulates ROS-JNK Pathway and Activates Nrf2
In cells, NF-κB and AP-1 are involved in the ROS-JNK signaling pathway. When NF-κB and AP-1 are activated, subsequent transcription factors including p50 / p65 (NF-κB) and c-Fos / c-Jun (AP1) are activated, These transcription factors cooperate with each other.
図５Ｃは、刺激剤が存在する場合、異なる量の化合物（Ｉ）を与える場合、ウエスタンブロット解析法によって検出された、マウス２６４．７細胞核におけるＲＯＳ‐ＪＮＫ経路関連転写因子の含有量に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。Ｈｉｓｔｏｎｅは、内部標準である。 FIG. 5C shows compounds against the content of ROS-JNK pathway-related transcription factors in mouse 264.7 cell nuclei detected by Western blot analysis when different amounts of compound (I) are given in the presence of stimulants ( It is a figure which shows the influence of I). Histone is an internal standard.
結果が示すように、ＬＰＳは細胞核内のｐ６５、ｐ‐ｃ‐ｆｏｓ、ｐ‐ｃ‐Ｊｕｎ５の活性化（リン酸化）を促進することができるが、化合物（Ｉ）が存在する場合、化合物（Ｉ）の濃度の向上に伴い、ｐ６５、ｐ‐ｃ‐ｆｏｓ、ｐ‐ｃ‐Ｊｕｎ５の発現活性が下がる。化合物（Ｉ）が存在する場合、Ｎｒｆ２は細胞核に転位することができ、その含有量は化合物（Ｉ）の濃度の向上に伴い増加する。 As the results show, LPS can promote the activation (phosphorylation) of p65, pc-fos and pc-Jun5 in the cell nucleus, but when compound (I) is present, As the concentration of I) increases, the expression activities of p65, pc-fos, and pc-Jun5 decrease. When compound (I) is present, Nrf2 can be translocated to the cell nucleus, and its content increases with increasing concentration of compound (I).
図５Ｄは、化合物（Ｉ）で０〜４時間処理する間の、細胞核内のＮｒｆ２の発現結果を示す図である。結果が示すように、化合物（Ｉ）の存在下で、Ｎｒｆ２を細胞核内に移行させ、高発現量を維持させることができる。 FIG. 5D is a diagram showing the expression results of Nrf2 in cell nuclei during treatment with compound (I) for 0 to 4 hours. As the results show, Nrf2 can be transferred into the cell nucleus in the presence of compound (I), and a high expression level can be maintained.
上記結果によると、化合物（Ｉ）は、マクロファージにおいて、ＲＯＳ‐ＪＮＫ経路を経てＮｒｆ２を活性化し、ＮＦ‐κＢによるＮｒｆ２の抑制を低減し、Ｎｒｆ２を活性化して核内に移行させて発現させることができる。 According to the above results, compound (I) activates Nrf2 through the ROS-JNK pathway, reduces the suppression of Nrf2 by NF-κB, activates Nrf2 and translocates it into the nucleus for expression in macrophages Can do.
（実験例３‐３：化合物（Ｉ）による抗酸化酵素の発現量の増加）
上述したように、化合物（Ｉ）は、Ｎｒｆ２を活性化して核内に移行させることを促進する。従って、以下はウエスタンブロット法によって、細胞核内のＮｒｆ２結合部位のＡＲＥプロモーター配列の下流の関連抗酸化酵素の発現量を分析する。
(Experimental Example 3-3: Increase in the expression level of antioxidant enzyme by compound (I))
As described above, compound (I) promotes Nrf2 to be activated and transferred into the nucleus. Therefore, in the following, the expression level of the related antioxidant enzyme downstream of the ARE promoter sequence at the Nrf2 binding site in the cell nucleus is analyzed by Western blotting.
図６は、化合物（Ｉ）で０〜２４時間処理する間、細胞内のＮｒｆ２及び抗酸化酵素ＨＯ‐１、ＮＱＯ‐１の発現結果を示す図である。 FIG. 6 is a graph showing the expression results of intracellular Nrf2, antioxidant enzymes HO-1, and NQO-1 during treatment with compound (I) for 0 to 24 hours.
結果が示すように、細胞内のＮｒｆ２の含有量は処理時間の増加に伴い減少するが、抗酸化酵素ＨＯ‐１、ＮＱＯ‐１の発現量は処理時間の増加に伴い増加するので、ＬＰＳのＲＯＳに対する誘導能力を抑制することができる。 As the results show, the intracellular Nrf2 content decreases with increasing treatment time, but the expression levels of the antioxidant enzymes HO-1 and NQO-1 increase with increasing treatment time. The ability to induce ROS can be suppressed.
（実験例４：炎症性サイトカインの発現に対する化合物（Ｉ）の抑制作用）
腫瘍壊死因子（Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ‐α；ＴＮＦ‐α）は、炎症性サイトカインであり、ＩＣＡＭ‐１、ＩＬ‐６、ＩＬ‐１等の炎症物質の分泌を調節して、一連の炎症プロセスを始動することができ、炎症関連の病理学的現象において、イニシエータの役割を果たしている。
(Experimental Example 4: Inhibitory action of compound (I) on expression of inflammatory cytokine)
Tumor Necrosis Factor-α (TNF-α) is an inflammatory cytokine that regulates the secretion of inflammatory substances such as ICAM-1, IL-6, IL-1 and initiates a series of inflammatory processes Can play an initiator role in inflammation-related pathological phenomena.
以下、ＬＰＳを利用して、ＴＮＦ‐α及びＩＬ‐１βの発生を誘導し、マウス血清及び細胞における発現量を分析することによって、炎症性サイトカインの発現に対する化合物（Ｉ）の影響を説明する。 Hereinafter, the influence of Compound (I) on the expression of inflammatory cytokines will be described by inducing the development of TNF-α and IL-1β using LPS and analyzing the expression levels in mouse serum and cells.
図７Ａは、異なる投与量の化合物（Ｉ）で処理する場合、マウス血清におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ‐α発現の能力に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。結果が示すように、血清におけるＴＮＦ‐αの含有量は、化合物（Ｉ）の処理投与量の増加に伴い減少し、化合物（Ｉ）の投与量が５ｍｇ／ｋｇに達すると、ＴＮＦ‐αの発現量の減少程度は、統計的意義を持つ。 FIG. 7A shows the effect of compound (I) on the ability of LPS-induced TNF-α expression in mouse serum when treated with different doses of compound (I). As the results show, the content of TNF-α in serum decreases with increasing treatment dose of Compound (I), and when the dose of Compound (I) reaches 5 mg / kg, The degree of expression reduction is statistically significant.
図７Ｂは、異なる投与量の化合物（Ｉ）で処理する場合、マウス２６４．７細胞株におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ‐αの発現能力に対する化合物（Ｉ）の影響を示す果である。結果が示すように、血清におけるＴＮＦ‐αの含有量は、化合物（Ｉ）の処理投与量の増加に伴い減少し、化合物（Ｉ）の投与量が２．５〜１０ｍｇ／ｋｇに達すると、ＴＮＦ‐αの発現量の減少程度は、統計的意義を持つ。 FIG. 7B shows the effect of compound (I) on the ability to express LPS-induced TNF-α in the mouse 264.7 cell line when treated with different doses of compound (I). As the results show, the content of TNF-α in serum decreases with increasing treatment dose of compound (I), and when the dose of compound (I) reaches 2.5-10 mg / kg, The degree of decrease in the expression level of TNF-α has statistical significance.
図７Ａ及び図７Ｂの結果によると、細胞実験又は動物実験の何れにおいても、化合物（Ｉ）は、ＬＰＳ誘導性ＴＮＦ‐αの発現を抑制する能力を有することが明らかである。 According to the results of FIGS. 7A and 7B, it is clear that compound (I) has the ability to suppress the expression of LPS-induced TNF-α in both cell experiments and animal experiments.
図８Ａは、異なる投与量の化合物（Ｉ）で処理する場合、マウス血清におけるＬＰＳ誘導性ＩＬ‐１βの発現能力に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。図８Ａに示すように、血清におけるＩＬ‐１βの含有量は、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い減少し、減少程度が統計的意義を持つ。 FIG. 8A is a graph showing the effect of compound (I) on the ability to express LPS-induced IL-1β in mouse serum when treated with different doses of compound (I). As shown in FIG. 8A, the content of IL-1β in serum decreases as the dose of compound (I) increases, and the degree of decrease has statistical significance.
図８Ｂは、異なる投与量の化合物（Ｉ）で処理する場合、マウス２６４．７細胞株におけるＬＰＳ誘導性ＩＬ‐１βの発現能力に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。図８Ｂに示すように、血清におけるＩＬ‐１βの含有量が化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い減少するので、化合物（Ｉ）は、ＬＰＳ誘導性ＩＬ‐１βの発現を抑制する能力を有することが明らかである。 FIG. 8B shows the effect of Compound (I) on the ability to express LPS-induced IL-1β in the mouse 264.7 cell line when treated with different doses of Compound (I). As shown in FIG. 8B, since the content of IL-1β in the serum decreases with increasing dose of Compound (I), Compound (I) has the ability to suppress LPS-induced IL-1β expression. It is clear to have.
図８Ａ及び図８Ｂの結果によると、細胞実験又は動物実験の何れにおいても、化合物（Ｉ）は、ＬＰＳ誘導性ＩＬ‐１βの発現を抑制する能力を有することを証明することができる。 8A and 8B, it can be proved that Compound (I) has the ability to suppress the expression of LPS-induced IL-1β in both cell experiments and animal experiments.
化合物（Ｉ）は、マクロファージにおいて、ＲＯＳ‐ＪＮＫ経路を経てＮｒｆ２を活性化し、ＮＦ‐κＢによるＮｒｆ２への抑制を低減し、Ｎｒｆ２を活性化して核内移行させることを促進し、相対的にＡＲＥプロモーターの活性を増加し、下流の抗酸化酵素ＨＯ‐１、ＮＱＯ‐１の発現を増加させることができる。抗酸化酵素の発現の増加は、ＬＰＳによるＲＯＳを大量に誘導する能力を取り除く作用を有し、ＮＦ‐κＢとＡＰ‐１の核内移行・発現及びそのプロモーター活性を抑制し、更に、炎症タンパク質ＣＯＸ‐２とｉＮＯＳの発現及びサイトカインＮＯ、ＰＧＥ２、ＴＮＦ‐αとＩＬ‐１βの分泌を抑制することができ、抗炎症の効果を有する。 Compound (I) activates Nrf2 in macrophages via the ROS-JNK pathway, reduces the inhibition of Nrf2 by NF-κB, promotes Nrf2 activation and translocation into the nucleus, and relatively AREs Promoter activity can be increased and expression of downstream antioxidant enzymes HO-1 and NQO-1 can be increased. Increased expression of antioxidant enzymes has the effect of removing the ability to induce a large amount of ROS by LPS, suppresses nuclear translocation and expression of NF-κB and AP-1 and their promoter activity, and further promotes inflammatory proteins It can suppress the expression of COX-2 and iNOS and secretion of cytokines NO, PGE2, TNF-α and IL-1β, and has an anti-inflammatory effect.
（第二実施例：化合物（Ｉ）の抗動脈硬化効果）
（実験例５：ＴＮＦ‐αに刺激されたヒト大動脈内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６細胞におけるＮＦ‐κＢに関連するタンパクの発現に対する化合物（Ｉ）の抑制）
前記実験結果によると、化合物（Ｉ）は、抗酸化酵素の発現を促進し、細胞の酸化防止能力を向上させ、更に、炎症タンパク質の発現及びサイトカインの分泌を抑制し、抗炎症の効果を有することが知られている。
(Second Example: Anti-atherogenic effect of Compound (I))
(Experimental Example 5: Inhibition of Compound (I) on Expression of Protein Related to NF-κB in Human Aortic Endothelial Cells EA. Hy926 Cells Stimulated by TNF-α)
According to the experimental results, compound (I) has an anti-inflammatory effect by promoting the expression of antioxidant enzymes, improving the antioxidant capacity of cells, and further suppressing the expression of inflammatory proteins and the secretion of cytokines. It is known.
粥状動脈硬化症は、慢性炎症による病理学的現象であり、血管内皮で発現する接着分子が粥状動脈硬化症の形成において重要な役割を果たしている。このため、以下、粥状動脈硬化症が発生した関連過程における標的タンパク質によって、ＴＮＦ‐αに刺激されたヒト大動脈内皮細胞の炎症関連タンパクの発現に対する化合物（Ｉ）の影響を確認する。 Atherosclerosis is a pathological phenomenon caused by chronic inflammation, and adhesion molecules expressed on the vascular endothelium play an important role in the formation of atherosclerosis. Therefore, hereinafter, the influence of the compound (I) on the expression of inflammation-related protein in human aortic endothelial cells stimulated by TNF-α by the target protein in the related process in which atherosclerosis occurs is confirmed.
図９は、異なる投与量の化合物（Ｉ）で処理する場合、ＴＮＦ‐αに刺激されたヒト大動脈内皮細胞株のＩκＢαと核内ＮＦ‐κＢ ｐ６５の発現に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。そのうち、ＩκＢαは、ＮＦκＢの活性化を抑制することができる。 FIG. 9 shows the effect of compound (I) on the expression of IκBα and nuclear NF-κB p65 in human aortic endothelial cell lines stimulated by TNF-α when treated with different doses of compound (I). It is. Among them, IκBα can suppress the activation of NFκB.
結果が示すように、ＴＮＦ‐αは、ヒト大動脈内皮細胞質のＩκＢαの発現を抑制するが、化合物（Ｉ）が存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、ＩκＢαの発現も増加する。 As shown by the results, TNF-α suppresses the expression of IκBα in human aortic endothelial cytoplasm, but when compound (I) is present, the expression of IκBα increases as the dose of compound (I) increases. To do.
なお、ＴＮＦ‐α刺激によってヒト大動脈内皮細胞核のＮＦ‐κＢ ｐ６５が発現されるが、化合物（Ｉ）が存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、ＮＦ‐κＢ ｐ６５の発現量が低下する。 In addition, NF-κB p65 of human aortic endothelial cell nuclei is expressed by TNF-α stimulation. When compound (I) is present, the amount of NF-κB p65 expressed increases as the dose of compound (I) increases. Decreases.
（実験例６：白血球接着作用、並びに接着分子ＩＣＡＭ‐１及びＶＣＡＭ‐１のタンパク発現に対する化合物（Ｉ）の抑制）
動脈硬化症の初期発生の特徴は、白血球が血管内皮細胞に接着し、更に白血球が内皮細胞を通して内皮細胞の下の空間で集まり、変換し、低密度リポタンパクを貪食し、泡沫細胞を形成する。この過程は、内皮細胞上に発現される接着分子と緊密な関係がある。
(Experimental Example 6: Inhibition of Compound (I) on Leukocyte Adhesion Action and Protein Expression of Adhesion Molecules ICAM-1 and VCAM-1)
Characteristic of early development of arteriosclerosis is that leukocytes adhere to vascular endothelial cells, and further leukocytes gather through the endothelial cells in the space under the endothelial cells, transform, phagocytose low density lipoprotein, and form foam cells . This process is closely related to adhesion molecules expressed on endothelial cells.
以下、ＴＮＦ‐αを刺激剤として、ＴＮＦ‐αに刺激されたヒト大動脈内皮細胞が発現する血管接着分子（ＶＣＡＭ‐１）と細胞間接着分子（ＩＣＡＭ‐１）に対する化合物（Ｉ）の影響を確認する。 Hereinafter, the effect of compound (I) on vascular adhesion molecule (VCAM-1) and intercellular adhesion molecule (ICAM-1) expressed by human aortic endothelial cells stimulated by TNF-α using TNF-α as a stimulant Check.
図１０は、異なる投与量の化合物（Ｉ）で処理する場合、ＴＮＦ‐αに刺激されたヒト大動脈内皮細胞株のＶＣＡＭ‐１とＩＣＡＭ‐１の発現に対する影響を示す図である。結果が示すように、ＴＮＦ‐α刺激によってＶＣＡＭ‐１とＩＣＡＭ‐１が発現されるが、化合物（Ｉ）が存在する場合、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、ＶＣＡＭ‐１とＩＣＡＭ‐１の発現量が減少する。 FIG. 10 shows the effect on expression of VCAM-1 and ICAM-1 in human aortic endothelial cell lines stimulated by TNF-α when treated with different doses of Compound (I). As shown in the results, VCAM-1 and ICAM-1 are expressed by TNF-α stimulation, but when compound (I) is present, VCAM-1 and ICAM increase with increasing dose of compound (I). -1 expression decreases.
従って、化合物（Ｉ）は、細胞接着分子発現を抑制する能力、更に粥状動脈硬化症の発生を抑制する作用を有する。 Therefore, the compound (I) has an ability to suppress the expression of cell adhesion molecules and further an action to suppress the occurrence of atherosclerosis.
（実験例７‐１：血管内皮細胞の遊走（Ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）・侵入（Ｉｎｖａｓｉｏｎ）作用に対する化合物（Ｉ）の抑制作用）
動脈硬化病状の発展過程において、血管平滑筋細胞は、中膜から内膜に遊走し、内膜で増殖して積み重ねて、初期の動脈硬化の発生及び後の動脈硬化性プラークの形成に、重要な役割を果たしている。以下、細胞遊走（Ｗｏｕｎｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）の状況を観察することで、血管内皮細胞遊走に対する化合物（Ｉ）の影響を分析する。
(Experimental Example 7-1: Inhibitory Action of Compound (I) on Migration and Invasion Action of Vascular Endothelial Cells)
In the course of the development of arteriosclerotic pathology, vascular smooth muscle cells migrate from the media to the intima, proliferate and accumulate in the intima, and are important for the development of early arteriosclerosis and later formation of atherosclerotic plaque Plays an important role. Hereinafter, the influence of compound (I) on vascular endothelial cell migration is analyzed by observing the situation of cell migration (Wound migration).
図１１は、異なる投与量の化合物（Ｉ）で血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６を処理する場合、スクラッチアッセイ解析による結果を示す顕微鏡写真によって、血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６の移行能力に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。 FIG. 11 shows that vascular endothelial cells EA. When treating Hy926, microscopic photographs showing results from scratch assay analysis showed that vascular endothelial cells EA. It is a figure which shows the influence of the compound (I) with respect to the transfer ability of Hy926.
細胞遊走の状況を、スクラッチアッセイ（Ｗｏｕｎｄ ｓｃｒａｔｃｈｉｎｇ ａｓｓａｙ）によって解析し、化合物（Ｉ）を添加しなかったものを対照群として、刺激剤ＴＮＦ‐αを添加したものを比較例として、５、１０μＭの化合物（Ｉ）を添加したものを実験群とする。 The state of cell migration was analyzed by a scratch assay (Wound scratching assay). The control group was not added with Compound (I), and the control group was added with stimulant TNF-α. A group to which compound (I) is added is regarded as an experimental group.
図１１に示すように、遊走の細胞量を計数するところ、低濃度（５μＭ）化合物（Ｉ）が存在する場合、ＴＮＦ‐αに刺激された血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６の遊走が著しく抑制されるが、化合物（Ｉ）の濃度が１０μＭ以上となる場合、血管内皮細胞の遊走能力がさらに著しく抑制される。 As shown in FIG. 11, when the amount of migrating cells was counted, when a low concentration (5 μM) of compound (I) was present, vascular endothelial cells EA. Although the migration of Hy926 is remarkably suppressed, the migration ability of vascular endothelial cells is further remarkably suppressed when the concentration of compound (I) is 10 μM or more.
図１２は、異なる投与量の化合物（Ｉ）で、血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６を処理した後、トランスウェル移動アッセイ（ｔｒａｎｓｗｅｌｌ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）で染色された顕微鏡写真によって、血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６の侵入能力に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。 FIG. 12 shows different doses of Compound (I) with vascular endothelial cells EA. After treatment of Hy926, microscopic photographs stained with transwell migration assay indicated that vascular endothelial cells EA. It is a figure which shows the influence of compound (I) with respect to the penetration | invasion capability of Hy926.
トランスウェル移動アッセイは、細胞外マトリックスの成分としてＭａｔｒｉｇｅｌを用い、細胞間環境を模擬する。ＢＤ Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標） Ｉｎｖａｓｉｏｎ Ｃｈａｍｂｅｒにおける細胞がＭａｔｒｉｇｅｌ ｍａｔｒｉｘにおける成長因子に刺激されると、細胞は、若干のマトリックス分解酵素を分泌し、Ｍａｔｒｉｇｅｌを分解し、細胞の移行を吸引することができる。細胞の移動能力が強い場合、染色した後、濾過膜上で細胞を観察することができる。 The transwell migration assay uses Matrigel as a component of the extracellular matrix and mimics the intercellular environment. When cells in the BD Matrigel® Invasion Chamber are stimulated by growth factors in Matrigel matrix, the cells can secrete some matrix degrading enzymes, degrade Matrigel, and aspirate the cell migration. If the cell migration ability is strong, the cells can be observed on the filtration membrane after staining.
図１２の顕微鏡写真に示すように、細胞移行の状況を観察し、化合物（Ｉ）の濃度の増加に伴い、血管内皮細胞の移行が著しく下がることが明らかである。低濃度（５μＭ）化合物（Ｉ）が存在する場合、ＴＮＦ‐αに刺激された血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６の遊走が著しく抑制されるが、化合物（Ｉ）の濃度が１０μＭ以上となる場合、血管内皮細胞の侵入能力がさらに抑制される。また、刺激剤が存在しない場合、１０μＭの化合物（Ｉ）は、血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６の遊走を抑制することができる。 As shown in the micrograph of FIG. 12, the state of cell migration is observed, and it is clear that the migration of vascular endothelial cells is remarkably lowered with the increase in the concentration of compound (I). In the presence of low concentrations (5 μM) of compound (I), vascular endothelial cells EA. Hy926 migration is remarkably suppressed, but when the concentration of compound (I) is 10 μM or more, the invasion ability of vascular endothelial cells is further suppressed. Also, in the absence of stimulant, 10 μM of compound (I) is added to vascular endothelial cells EA. Hy926 migration can be suppressed.
（実験例７‐２：内皮細胞血管の形成に対する化合物（Ｉ）の抑制作用）
動脈硬化症において、局所貧血で酸欠になると共に、新血管を形成することがよくある。従って、図１３は、チューブ形成アッセイ（Ｔｕｂｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ）によって、ＴＮＦ‐αに刺激された血管内皮細胞ＥＡ． Ｈｙ９２６が、化合物（Ｉ）の存在下での血管形成状况を示す図である。
(Experimental example 2-2: Inhibitory effect of compound (I) on formation of endothelial cell blood vessel)
In arteriosclerosis, local anemia results in oxygen deficiency and often forms new blood vessels. Therefore, FIG. 13 shows that vascular endothelial cells EA.stimulated by TNF-α by a tube formation assay. It is a figure in which Hy926 is an angiogenic fistula in presence of compound (I).
図１３は、顕微鏡下で観察した内皮細胞の分化結果を示す。図１３に示すように、ＴＮＦ‐αの刺激によって、血管内皮細胞の形態が変わってチューブ状となるが、化合物（Ｉ）の存在下で、チューブ状となる細胞は、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い減少する。従って、化合物（Ｉ）は、内皮細胞血管の形成を抑制することができる。 FIG. 13 shows the differentiation results of endothelial cells observed under a microscope. As shown in FIG. 13, the morphology of vascular endothelial cells changes due to stimulation with TNF-α to form a tube. In the presence of compound (I), the tube-shaped cell is administered with compound (I). Decreases with increasing quantity. Therefore, Compound (I) can suppress the formation of endothelial cell blood vessels.
（実験例８‐１：化合物（Ｉ）による抗酸化酵素発現量の向上）
炎症反応及び酸化ストレスは、動脈硬化の過程中、重要な役割を果たしている。以下、化合物（Ｉ）を用いて異なる時間で内皮細胞を処理し、細胞におけるヘムオキシゲナーゼ‐１（ＨＯ‐１）及びグルタミン酸システインリガーゼ触媒サブユニット（γ‐ｇｌｕｔａｍｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ ｌｉｇａｓｅ ｃａｔａｌｙｔｉｃ ｓｕｂｕｎｉｔ；γ‐ＧＣＬＣ）の含有量を検出する。
(Experimental Example 8-1: Improvement of antioxidant enzyme expression level by compound (I))
Inflammatory responses and oxidative stress play an important role during the process of arteriosclerosis. Hereinafter, endothelial cells are treated with compound (I) at different times, and the cells contain heme oxygenase-1 (HO-1) and glutamate cysteine ligase catalytic subunit (γ-GCLC) Detect the amount.
図１４は、１０μＭの化合物（Ｉ）を用いて細胞をそれぞれ１、３、６、１２時間処理する場合、細胞におけるＨＯ‐１及びγ‐ＧＣＬＣに対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。結果が示すように、化合物（Ｉ）の処理時間の増加に伴い、内皮細胞におけるＨＯ‐１及びγ‐ＧＣＬＣの何れの発現量も増加する。 FIG. 14 shows the effect of compound (I) on HO-1 and γ-GCLC in cells when cells are treated with 10 μM compound (I) for 1, 3, 6, and 12 hours, respectively. As the results show, the expression levels of both HO-1 and γ-GCLC in the endothelial cells increase with an increase in the treatment time of Compound (I).
従って、化合物（Ｉ）は、細胞におけるＨＯ‐１及びγ‐ＧＣＬＣの発現量を促進する能力を有し、細胞の酸化ストレスに対する抵抗に寄与し、粥状動脈硬化症の発生を下げる。 Therefore, compound (I) has the ability to promote the expression level of HO-1 and γ-GCLC in cells, contributes to the resistance of cells to oxidative stress, and reduces the occurrence of atherosclerosis.
図１５は、化合物（Ｉ）を用いて細胞を１、３、６、９時間処理する場合、内皮細胞におけるＧＳＨ濃度に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。図１５の結果が示すように、化合物（Ｉ）の処理時間の増加に伴い、細胞におけるＧＳＨ濃度が持続して増加し、特に、６〜９時間処理された実験群の濃度の増加程度は、統計的差異を有する。 FIG. 15 is a graph showing the effect of compound (I) on GSH concentration in endothelial cells when cells are treated with compound (I) for 1, 3, 6, 9 hours. As the result of FIG. 15 shows, as the treatment time of compound (I) increases, the GSH concentration in the cells continuously increases, and in particular, the increase in concentration of the experimental group treated for 6 to 9 hours is Has statistical differences.
（実験例８‐２：化合物（Ｉ）による細胞におけるＭＭＰ‐９、ＭＭＰ２の酵素の発現の向上）
図１６は、Ｚｙｍｏｇｒａｐｈｙ酵素活性解析法によって検出され、１ｎｇ／ｍＬのＴＮＦ‐αに刺激された細胞の誘導で発生したＭＭＰ‐９、ＭＭＰ２、ＭＭＰ‐９の酵素活性に対する化合物（Ｉ）の影響を示す図である。
(Experimental Example 2-2: Improvement of expression of MMP-9 and MMP2 enzymes in cells by compound (I))
FIG. 16 shows the effect of Compound (I) on the enzyme activities of MMP-9, MMP2, and MMP-9 generated by induction of cells stimulated by 1 ng / mL TNF-α detected by Zymography enzyme activity analysis. FIG.
対照群は、化合物（Ｉ）及びＴＮＦ‐αを添加しなかったものであり、その細胞がＭＭＰ２酵素活性を有する。その他の実験群としては、化合物（Ｉ）を添加しなかったものを用い、５、１０、２０μＭの化合物（Ｉ）で処理して、ＴＮＦ‐α誘導ＭＭＰｓの効果に対する化合物（Ｉ）の影響を観察する。 In the control group, compound (I) and TNF-α were not added, and the cells had MMP2 enzyme activity. As another experimental group, the compound (I) was not added and treated with 5, 10, 20 μM of the compound (I), and the effect of the compound (I) on the effect of TNF-α-induced MMPs was observed. Observe.
図１６に示すように、化合物（Ｉ）を添加しなかった実験群が、ＭＭＰ‐９、ＭＭＰ２の酵素活性を発現することができ、化合物（Ｉ）の投与量の増加に伴い、そのＭＭＰ‐９、ＭＭＰ２の酵素活性が、抑制されることが明らかである。化合物（Ｉ）は、ＴＮＦ‐α誘導のＭＭＰｓを抑制する効果がある。 As shown in FIG. 16, the experimental group to which compound (I) was not added can express the enzyme activities of MMP-9 and MMP2, and as the dose of compound (I) increases, the MMP- 9. It is clear that the enzyme activity of MMP2 is suppressed. Compound (I) has an effect of suppressing TNF-α-induced MMPs.
本発明の実施例の化合物（Ｉ）及びその医薬組成物は、ＲＯＳ‐ＪＮＫ経路シグナル経路のシグナル伝達を調節することで、関連の病理学的現象の改善に応用され、関連病理学的症状を治療する薬物の調製に応用されることができる。 The compound (I) and the pharmaceutical composition thereof according to the examples of the present invention are applied to the improvement of related pathological phenomena by regulating the signal transduction of the ROS-JNK pathway signaling pathway, It can be applied to the preparation of drugs to be treated.
従って、化合物（Ｉ）又は化合物（Ｉ）を有効成分とする混合物は、ＲＯＳ‐ＪＮＫ経路シグナル経路のシグナル伝達を調節し、更に、細胞の慢性炎症反応及び粥状動脈硬化症の発生を下げることができるので、医薬組成物の形式で、慢性炎症及び粥状動脈硬化症を治療する薬物として提供することができる。また、サプリメントの形式で、保健製品として提供されることもできる。 Therefore, Compound (I) or a mixture containing Compound (I) as an active ingredient regulates the signal transduction of the ROS-JNK pathway signaling pathway, and further reduces the occurrence of chronic inflammatory reaction of cells and atherosclerosis. Therefore, it can be provided as a drug for treating chronic inflammation and atherosclerosis in the form of a pharmaceutical composition. It can also be provided as a health product in the form of a supplement.
例えば、化合物（Ｉ）含有の医薬組成物において、化合物（Ｉ）は、遊離状態の形式又は薬学的に許容される塩の形式で存在している。また、化合物（Ｉ）含有の医薬組成物は、例えば、賦形剤、溶媒、乳化剤、懸濁化剤、分解剤、結合剤、安定化剤、防腐剤、潤滑剤、吸収遅延剤及びリポソームのような、１つまたは複数の薬学的に許容される担体を更に備えてよい。化合物（Ｉ）含有の医薬組成物は、実際の要求によって、経口投与、注射剤又は外用剤の形式のような、投薬形式に製造され、慢性炎症及び粥状動脈硬化症の予防、又は慢性炎症及び粥状動脈硬化症の改善に用いることができる。 For example, in a pharmaceutical composition containing compound (I), compound (I) exists in a free form or in the form of a pharmaceutically acceptable salt. In addition, the pharmaceutical composition containing Compound (I) includes, for example, excipients, solvents, emulsifiers, suspending agents, degradation agents, binders, stabilizers, preservatives, lubricants, absorption delaying agents, and liposomes. Such one or more pharmaceutically acceptable carriers may further be provided. The pharmaceutical composition containing Compound (I) is produced in a dosage form such as oral administration, injection or topical form depending on actual requirements, and prevention of chronic inflammation and atherosclerosis, or chronic inflammation. And can be used to improve atherosclerosis.
本発明の実施例の化合物（Ｉ）を有効成分として製作された医薬組成物又はサプリメントは、その化合物として、人工合成、または樟芝の発酵液由来である。サプリメントは、液状、粉末、錠剤、カプセル又は注射剤の形式であってもよい。 The pharmaceutical composition or supplement produced using the compound (I) of the example of the present invention as an active ingredient is derived from artificial synthesis or a fermentation solution of Antrodia camphor as the compound. The supplement may be in the form of a liquid, powder, tablet, capsule or injection.
本発明では実施形態を前述の通りに説明したが、これは本発明を限定するものではなく、当業者であれば、本発明の精神と領域から逸脱しない限り、多様の変更や修正を加えることができる。従って本発明の保護範囲は、特許請求の範囲に記載された内容を基準とする。 Although the embodiments of the present invention have been described as described above, this does not limit the present invention, and various changes and modifications can be made by those skilled in the art without departing from the spirit and scope of the present invention. Can do. Therefore, the protection scope of the present invention is based on the contents described in the claims.
Claims (10)
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| TW101134140A TWI489982B (en) | 2012-09-18 | 2012-09-18 | Use of a para-quinone for inhibiting atherosclerosis |
| TW101134140 | 2012-09-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2014058497A true JP2014058497A (en) | 2014-04-03 |
Family
ID=50295092
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2013044458A Pending JP2014058497A (en) | 2012-09-18 | 2013-03-06 | Benzoquinone-type compound for inflammation suppression, and pharmaceutical composition and supplement using the same |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2014058497A (en) |
| CN (1) | CN103655528A (en) |
| TW (1) | TWI489982B (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3257497B1 (en) * | 2015-01-08 | 2024-04-24 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Antioxidant agent, antioxidant cosmetic and uv care cosmetic based on enzymatically synthesized glycogen or an alpha-amylase digest thereof |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09176038A (en) * | 1995-09-18 | 1997-07-08 | Hisamitsu Pharmaceut Co Inc | Antiinflammatory antisense medicine |
| US20060035981A1 (en) * | 2003-08-02 | 2006-02-16 | Mazzio Elizabeth A | Inhibition of anaerobic glucose metabolism and corresponding composition as a natural non-toxic approach to cancer treatment |
| JP2008534619A (en) * | 2005-04-01 | 2008-08-28 | ザイムス， エルエルシー | Skin enhancement using CoQ10 as a delivery system |
| CN101627983A (en) * | 2008-07-15 | 2010-01-20 | 葡萄王生技股份有限公司 | Medicinal composition for inhibiting angiogenesis and application thereof |
| US20100209388A1 (en) * | 2003-08-02 | 2010-08-19 | Elizabeth Anne Mazzio | Nutraceutical composition and method of use for treatment / prevention of cancer |
| JP2010248230A (en) * | 2000-11-29 | 2010-11-04 | Magral Ltd | Treatment of statin side effect |
| JP2013170168A (en) * | 2012-02-20 | 2013-09-02 | China Medical Univ | Compound and pharmaceutical composition thereof |
-
2012
- 2012-09-18 TW TW101134140A patent/TWI489982B/en not_active IP Right Cessation
- 2012-10-31 CN CN201210428515.2A patent/CN103655528A/en active Pending
-
2013
- 2013-03-06 JP JP2013044458A patent/JP2014058497A/en active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09176038A (en) * | 1995-09-18 | 1997-07-08 | Hisamitsu Pharmaceut Co Inc | Antiinflammatory antisense medicine |
| JP2010248230A (en) * | 2000-11-29 | 2010-11-04 | Magral Ltd | Treatment of statin side effect |
| US20060035981A1 (en) * | 2003-08-02 | 2006-02-16 | Mazzio Elizabeth A | Inhibition of anaerobic glucose metabolism and corresponding composition as a natural non-toxic approach to cancer treatment |
| US20100209388A1 (en) * | 2003-08-02 | 2010-08-19 | Elizabeth Anne Mazzio | Nutraceutical composition and method of use for treatment / prevention of cancer |
| JP2008534619A (en) * | 2005-04-01 | 2008-08-28 | ザイムス， エルエルシー | Skin enhancement using CoQ10 as a delivery system |
| CN101627983A (en) * | 2008-07-15 | 2010-01-20 | 葡萄王生技股份有限公司 | Medicinal composition for inhibiting angiogenesis and application thereof |
| JP2013170168A (en) * | 2012-02-20 | 2013-09-02 | China Medical Univ | Compound and pharmaceutical composition thereof |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| JPN6014018878; Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｖｏｌ．６７, 20110616, ｐｐ．５９９０-６０００ * |
| JPN6014018879; Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｈｉｌｅａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｖｏｌ．５２， Ｎｏ．４, 2007, ｐｐ．１３３８-１３４０ * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103655528A (en) | 2014-03-26 |
| TWI489982B (en) | 2015-07-01 |
| TW201412303A (en) | 2014-04-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vannini et al. | The NAD-booster nicotinamide riboside potently stimulates hematopoiesis through increased mitochondrial clearance | |
| Cao et al. | Curcumin ameliorates oxidative stress-induced intestinal barrier injury and mitochondrial damage by promoting Parkin dependent mitophagy through AMPK-TFEB signal pathway | |
| Min et al. | Pyruvate dehydrogenase kinase is a metabolic checkpoint for polarization of macrophages to the M1 phenotype | |
| Moutouh-de Parseval et al. | Pomalidomide and lenalidomide regulate erythropoiesis and fetal hemoglobin production in human CD34+ cells | |
| Bai et al. | Novel anti-inflammatory action of 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside with protective effect in dextran sulfate sodium-induced acute and chronic colitis | |
| Vanella et al. | Crosstalk between EET and HO-1 downregulates Bach1 and adipogenic marker expression in mesenchymal stem cell derived adipocytes | |
| Dong et al. | Juglanin suppresses fibrosis and inflammation response caused by LPS in acute lung injury | |
| Zhao et al. | The effects of emodin on cell viability, respiratory burst and gene expression of Nrf2-Keap1 signaling molecules in the peripheral blood leukocytes of blunt snout bream (Megalobrama amblycephala) | |
| EP3146978B1 (en) | Inhibition of cancer stem cell proliferation | |
| Luo et al. | The effects of dimethyl fumarate on atherosclerosis in the apolipoprotein E-deficient mouse model with streptozotocin-induced hyperglycemia mediated by the nuclear factor erythroid 2-related factor 2/antioxidant response element (Nrf2/ARE) signaling pathway | |
| Zhao et al. | NLRX1 knockout aggravates lipopolysaccharide (LPS)-induced heart injury and attenuates the anti-LPS cardioprotective effect of CYP2J2/11, 12-EET by enhancing activation of NF-κB and NLRP3 inflammasome | |
| JP2006008720A (en) | Renal function-improving agent | |
| Park et al. | Enantiomers of higenamine inhibit LPS-induced iNOS in a macrophage cell line and improve the survival of mice with experimental endotoxemia | |
| US20160184389A1 (en) | Use of immunomodulatory protein from ganoderma in inhibiting cancer stem cells | |
| Pedrosa et al. | Effects of hydroxyurea on cytotoxicity, inflammation and oxidative stress markers in neutrophils of patients with sickle cell anemia: dose-effect relationship | |
| Dang et al. | Heme induces intestinal epithelial cell ferroptosis via mitochondrial dysfunction in transfusion‐associated necrotizing enterocolitis | |
| Yan et al. | Reversal effect of vitamin D on different multidrug-resistant cells | |
| JP2014058497A (en) | Benzoquinone-type compound for inflammation suppression, and pharmaceutical composition and supplement using the same | |
| Shen et al. | Nicotinamide cooperates with retinoic acid and 1, 25-dihydroxyvitamin D3 to regulate cell differentiation and cell cycle arrest of human myeloblastic leukemia cells | |
| CN103784465B (en) | Aldehyde dehydrogenase 2 is as the application of drug targets during anthracyclines process tumor cell | |
| Lv et al. | Mannose inhibits Plasmodium parasite growth and cerebral malaria development via regulation of host immune responses | |
| Hsu et al. | Butyrate modulates adipose-derived stem cells isolated from polygenic obese and diabetic mice to drive enhanced immunosuppression | |
| US11358933B2 (en) | Compounds and methods for inhibiting CYP26 enzymes | |
| CN115177618A (en) | Application of FLT3 inhibitor in preparation of medicine for treating acute myeloid leukemia | |
| JP5352459B2 (en) | Drug with hepatocyte growth-promoting action |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140513 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140812 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140902 |