JP2014003922A

JP2014003922A - Positioning appliance

Info

Publication number: JP2014003922A
Application number: JP2012140361A
Authority: JP
Inventors: Ryohei Tsukada; 亮平塚田
Original assignee: Sumitomo Bakelite Co Ltd
Current assignee: Sumitomo Bakelite Co Ltd
Priority date: 2012-06-22
Filing date: 2012-06-22
Publication date: 2014-01-16

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a positioning appliance capable of easily exchanging media without sucking up cell aggregates and further securely recovering cell aggregates without being collapsed.SOLUTION: The positioning appliance is used by being mounted on a substrate having a well opened to either face, and decides the position to the well of a capillary feeding a liquid to the well or sucking-up the same. The positioning appliance has: a top board; and a fixing part provided at the top board and fixing the positioning appliance to the substrate. The top board is formed with first holes and second holes for inserting the capillary at the positions corresponding to the well when the positioning appliance is mounted on the substrate. In this way, the tip position of the capillary to the well can be controlled, the exchange of media is easily performed without sucking up cell aggregates, and further, cell aggregates can be securely recovered without being collapsed.

Description

本発明は、位置決め器具に関する。 The present invention relates to a positioning device.

近年、薬効評価のスクリーニングや分化誘導因子の研究が盛んに行われている。このような研究では、種々の細胞凝集塊が評価に用いられる。そのため、細胞凝集塊を効率的に形成する培養方法が求められている。 In recent years, screening for drug efficacy evaluation and research on differentiation-inducing factors have been actively conducted. In such studies, various cell aggregates are used for evaluation. Therefore, a culture method for efficiently forming cell aggregates is required.

細胞凝集塊の形成方法としては、例えば懸垂培養（ハンギングドロップ法）による方法（非特許文献１、２）、超親水性処理ディッシュを用いた培養による方法（特許文献１）、ポリプロピレン製円錐チューブを用いた培養による方法（特許文献２）が挙げられる。 Examples of the method for forming a cell aggregate include a suspension culture (hanging drop method) (Non-Patent Documents 1 and 2), a culture method using a superhydrophilic treated dish (Patent Document 1), and a polypropylene conical tube. The culture method used (Patent Document 2) may be mentioned.

しかしながらこれらの方法にはそれぞれ以下のような問題点がある。懸垂培養による方法では、培養操作が煩雑であり細胞凝集塊を形成させるのに技術を要する。また、培地の交換ができないため形成できる細胞凝集塊の大きさが制限される。さらに、顕微鏡観察ができないため、研究に最適な大きさの細胞凝集塊を得にくい。 However, these methods have the following problems. In the suspension culture method, the culture operation is complicated and a technique is required to form a cell aggregate. In addition, since the medium cannot be exchanged, the size of the cell aggregate that can be formed is limited. Furthermore, since microscopic observation is not possible, it is difficult to obtain cell aggregates of the optimal size for research.

一方、超親水性処理ディッシュを用いた培養による方法では、操作の容易さ、培地交換、顕鏡性といった点は改善できる。しかし、形成される細胞凝集塊の大きさがバラバラであったり、凝集塊同士の癒着が発生したりすることから、細胞凝集塊の大きさが制御できずスクリーニングにおいて安定したデータが得られない。
また、ポリプロピレン製円錐チューブを用いた培養による方法では、単一の細胞凝集塊を形成することが可能であるが、材質が不透明であるため顕鏡性が得られない。 On the other hand, in the method using culture using a superhydrophilic treatment dish, the ease of operation, medium exchange, and microscopic properties can be improved. However, since the size of the formed cell aggregates varies or adhesion between the aggregates occurs, the size of the cell aggregates cannot be controlled, and stable data cannot be obtained in screening.
Further, in the method using culture using a polypropylene conical tube, a single cell aggregate can be formed, but the microscopic property cannot be obtained because the material is opaque.

これらの課題を解決するべく細胞非接着処理が施されたマルチウェルプレートが開発されている。このマルチウェルプレートは、顕鏡性に優れ、スクリーニング等の研究に適した単一の細胞凝集塊を多数得ることができる。 In order to solve these problems, multi-well plates that have undergone cell non-adhesion treatment have been developed. This multiwell plate is excellent in microscopic properties, and can obtain a large number of single cell aggregates suitable for research such as screening.

特表２００１−５０２９５９号公報JP 2001-502959 A 特開２００４−２５４６２２号公報JP 2004-254622 A

ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＡＬＣＥＬＬＲＥＳＥＡＲＣＨ、２００、３２６−３３２、１９９２EXPERIMENTAL CELL RESEARCH, 200, 326-332, 1992 Ｋｅｌｌｅｒ、Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（Ｌｏｎｄ）１６８、１３１−１３９、１９９８Keller, J .; Physiol. (Lond) 168, 131-139, 1998

しかしながらマルチウェルプレートを用いた培養においても、操作者の感覚や経験に依存し、なお操作に技術を要するところがある。第一に、培地交換では細胞凝集塊を吸い取らないように培地のみを交換する必要がある。このため慎重な操作を要するが、それでも細胞凝集塊を吸い取ってしまうことがあり培地の交換が困難である。第二に、細胞凝集塊の回収では凝集塊を崩さないように慎重な操作が求められる。特にマルチウェルプレートではこのような操作を多数のウェルについて連続して行うため、全てのウェルを均一な条件で扱うことは難しい。 However, even in culture using a multiwell plate, depending on the operator's senses and experience, there are places where operation is still required. First, in medium exchange, it is necessary to exchange only the medium so as not to suck up cell clumps. For this reason, careful operation is required, but the cell aggregates may still be sucked up and it is difficult to change the medium. Secondly, the collection of cell aggregates requires careful operation so as not to break up the aggregates. In particular, in a multi-well plate, since such an operation is continuously performed for a large number of wells, it is difficult to handle all the wells under uniform conditions.

本発明は上記の課題に鑑みてなされたものであり、細胞凝集塊を吸い取ることなく簡便に培地の交換が可能であり、また、細胞凝集塊を崩すことなく確実に回収する位置決め器具を提供するものである。 The present invention has been made in view of the above-described problems, and provides a positioning device that can easily replace a medium without sucking up cell aggregates and reliably recover without destroying the cell aggregates. Is.

このような目的は、下記（１）〜（１０）に記載の本発明により達成される。
（１）一方の面に開放するウェルを有する基板の前記面側に装着して使用され、液体を前記ウェルに供給し又は吸引する細管の前記ウェルに対する位置を決める位置決め器具であって、
天板と、前記天板に設けられ前記基板に対して前記位置決め器具を固定する固定部とを有し、
前記天板には、前記位置決め器具を前記基板に装着したときの前記ウェルに対応する位置に、前記細管を挿入する第１の孔と第２の孔が形成されていることを特徴とする位置決め器具。
（２）前記第１の孔は、前記第１の孔に挿入された前記細管の先端が前記ウェルの最深部付近に到達するように細管を係合する形状及び大きさに形成されている（１）に記載の位置決め器具。
（３）前記第２の孔は、前記第２の孔に挿入された前記細管の先端が、前記第１の孔に挿入された前記細管の先端よりも浅い位置で固定されるように細管を係合する形状及び大きさに形成されている（２）に記載の位置決め器具。
（４）前記第１の孔及び前記第２の孔はそれぞれ円形をなしており、前記第１の孔の直径は、前記第２の孔の直径よりも大きい（１）ないし（３）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（５）前記第１の孔は、前記ウェルの最深部の直上に形成されている（１）ないし（４）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（６）前記第２の孔は、前記ウェルの最深部の直上からずれた位置に形成されている（１）ないし（５）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（７）前記細管は先端に向かって外径が漸減するテーパー状をなしており、前記第１の孔及び前記第２の孔はそれぞれ前記ウェルの方向に向かって直径が漸減するように形成されている（４）ないし（６）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（８）前記基板には前記ウェルが複数形成されており、前記天板は、前記複数のウェルの少なくとも１つに対応する位置に前記第１の孔及び前記第２の孔が形成されている（１）ないし（７）のいずれか一項に記載の位置決め器具。
（９）前記天板は、前記複数のウェルの全てに対応する位置に前記第１の孔及び前記第２の孔が形成されている（８）に記載の位置決め器具。
（１０）複数の前記ウェルは前記基板上に複数行複数列に配置されており、複数の前記ウェルの各々に対する前記第１の孔及び前記第２の孔の形成位置が、複数の前記ウェルの全てにおいて同一の位置関係にある（９）に記載の位置決め器具。 Such an object is achieved by the present invention described in the following (1) to (10).
(1) A positioning device that is used by being mounted on the surface side of a substrate having a well that is open on one surface, and that determines the position of a capillary tube that supplies or sucks liquid to the well, relative to the well,
A top plate, and a fixing portion provided on the top plate for fixing the positioning device to the substrate;
The top plate has a first hole and a second hole into which the thin tube is inserted at a position corresponding to the well when the positioning device is mounted on the substrate. Instruments.
(2) The first hole is formed in a shape and size to engage the capillary so that the tip of the capillary inserted into the first hole reaches near the deepest part of the well ( The positioning instrument according to 1).
(3) The second hole is formed so that the tip of the capillary inserted into the second hole is fixed at a position shallower than the tip of the capillary inserted into the first hole. The positioning device according to (2), which is formed in a shape and size to be engaged.
(4) Each of the first hole and the second hole has a circular shape, and the diameter of the first hole is larger than the diameter of the second hole. A positioning device according to claim 1.
(5) The positioning device according to any one of (1) to (4), wherein the first hole is formed immediately above the deepest portion of the well.
(6) The positioning device according to any one of (1) to (5), wherein the second hole is formed at a position shifted from immediately above the deepest portion of the well.
(7) The thin tube has a tapered shape with an outer diameter gradually decreasing toward the tip, and the first hole and the second hole are formed so that the diameter gradually decreases toward the well, respectively. The positioning device according to any one of (4) to (6).
(8) A plurality of the wells are formed in the substrate, and the top plate has the first hole and the second hole formed at a position corresponding to at least one of the plurality of wells. The positioning device according to any one of (1) to (7).
(9) The positioning device according to (8), wherein the top plate has the first hole and the second hole formed at positions corresponding to all of the plurality of wells.
(10) The plurality of wells are arranged in a plurality of rows and a plurality of columns on the substrate, and the formation positions of the first holes and the second holes with respect to each of the plurality of wells are the positions of the plurality of wells. The positioning device according to (9), which is in the same positional relationship in all.

本発明によれば、ウェルに対する細管の先端部の位置を適正化することができる。このため、例えば、培地交換時や細胞凝集塊回収時においてピペットの挿入位置および挿入長さを規定することができ、細胞凝集塊を吸い取ることなく培地を簡便に交換でき、また、細胞凝集塊を崩すことなく確実に回収することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, the position of the front-end | tip part of a thin tube with respect to a well can be optimized. For this reason, for example, the pipette insertion position and insertion length can be defined when exchanging the medium or collecting the cell aggregate, and the medium can be easily replaced without sucking the cell aggregate. It can be reliably recovered without breaking down.

本発明の実施形態に係る位置決め器具を装着したマルチウェルプレートの上面図である。It is a top view of a multiwell plate equipped with a positioning device according to an embodiment of the present invention. 図１のＩＩ−ＩＩ断面における側断面図である。It is a sectional side view in the II-II cross section of FIG. 図１のＩＩＩ部の拡大図である。It is an enlarged view of the III section of FIG. 図２のＩＶ部の拡大図である。It is an enlarged view of the IV section of FIG. 本発明の実施形態に係る位置決め器具の使用方法を説明した図である。It is a figure explaining the usage method of the positioning instrument which concerns on embodiment of this invention.

以下、本発明の位置決め器具の好適な実施形態について、図面を参照しつつ詳細に説明する。
図１は、本発明の実施形態に係る位置決め器具１を装着したマルチウェルプレート２の上面図である。図２は、図１のＩＩ−ＩＩ断面における側断面図である。図３は、図１のＩＩＩ部の拡大図、図４は、図２のＩＶ部の拡大図である。なお、以下の説明では図２、図４中、図面の上方を上側、下方を下側と呼ぶことがある。 Hereinafter, preferred embodiments of the positioning device of the present invention will be described in detail with reference to the drawings.
FIG. 1 is a top view of a multiwell plate 2 equipped with a positioning device 1 according to an embodiment of the present invention. FIG. 2 is a side sectional view taken along the line II-II in FIG. 3 is an enlarged view of a portion III in FIG. 1, and FIG. 4 is an enlarged view of a portion IV in FIG. In the following description, in FIGS. 2 and 4, the upper side of the drawing may be referred to as the upper side and the lower side may be referred to as the lower side.

まず、図１、図２を用いて、本実施形態に係る位置決め器具１を装着する基板について説明する。本実施形態では基板は複数のウェル２１を有するマルチウェルプレート２である。マルチウェルプレート２は、通常小スケールの細胞培養や生化学実験等に用いられる。なお、本実施形態の基板はウェルの深さ以上の厚さを有する平板にウェルを形成したものであるが、本発明はこれに限らず、ウェルの深さ未満の厚さを有する平板の一部を凹没させてウェルを形成するようにしてもよい。 First, the board | substrate which mounts the positioning instrument 1 which concerns on this embodiment is demonstrated using FIG. 1, FIG. In this embodiment, the substrate is a multi-well plate 2 having a plurality of wells 21. The multiwell plate 2 is usually used for small-scale cell culture, biochemical experiments, and the like. The substrate of the present embodiment is a plate in which a well is formed on a flat plate having a thickness equal to or greater than the depth of the well. However, the present invention is not limited to this, and a single plate having a thickness less than the depth of the well is used. The well may be formed by recessing the part.

マルチウェルプレート２は、図２に示すように、樹脂製の平板の一方の面（上側の面）に開放するウェル２１が形成されている。ウェル２１の開口部は円形をなしている。ウェルは一般にｎ行ｍ列に配置されており、その数は６、１２、２４、４８、９６、３８４等のものが用いられている。以下では９６ウェル（８行１２列）のマルチウェルプレート２を例として説明する。なお、本実施形態に係るマルチウェルプレート２はこれに限られず様々な形状、寸法、ウェル数のものを用いてもよい。 As shown in FIG. 2, the multi-well plate 2 has a well 21 that is opened on one surface (upper surface) of a resin flat plate. The opening of the well 21 is circular. Wells are generally arranged in n rows and m columns, and the number of wells is 6, 12, 24, 48, 96, 384, or the like. Hereinafter, a 96-well (8 rows and 12 columns) multi-well plate 2 will be described as an example. The multi-well plate 2 according to this embodiment is not limited to this, and various shapes, dimensions, and numbers of wells may be used.

本実施形態のマルチウェルプレート２は、図１に示すように縦１２５ｍｍ程度、横８３ｍｍ程度、厚さ１４ｍｍ程度の平板状である。
マルチウェルプレート２の材料としては、例えば、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン-プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂または環状ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。これらの中でも、培養容器に求められる成形性、放射線滅菌耐性の点においてポリスチレン樹脂が好ましい。 As shown in FIG. 1, the multiwell plate 2 of the present embodiment is a flat plate having a length of about 125 mm, a width of about 83 mm, and a thickness of about 14 mm.
Examples of the material for the multiwell plate 2 include polyolefin resins such as polypropylene resin, polyethylene resin, and ethylene-propylene copolymer, or cyclic polyolefin resins, polystyrene resins such as polystyrene and acrylonitrile-butadiene-styrene resins, and polycarbonate. Methacrylic resins such as resin, polyethylene terephthalate resin, polymethyl methacrylate resin, vinyl chloride resin, polybutylene terephthalate resin, polyarylate resin, polysulfone resin, polyethersulfone resin, polyetheretherketone resin, polyetherimide resin, poly Fluorine resins such as tetrafluoroethylene, acrylic resins such as polymethylpentene resin and polyacrylonitrile, and fiber-based resins such as propionate resin Can be mentioned. Among these, polystyrene resin is preferable in terms of moldability required for the culture container and radiation sterilization resistance.

本実施形態では、各ウェル２１の形状は同一である。本実施形態ではウェル２１は縦断面形状がＵ字状（Ｕ底タイプ）である。なお、ウェルの縦断面形状はこれに限られず、底面が平坦の平底タイプや、底面がＶ字状のＶ底タイプを用いてもよい。さらに、底面に複数の凹部を形成するようにしてもよい。
また、ウェル２１の大きさは、開口部の直径が７ｍｍ程度、最深部の深さが１０ｍｍ程度である。また、底面の曲率半径は３．２ｍｍ程度である。 In this embodiment, the shape of each well 21 is the same. In this embodiment, the well 21 has a U-shaped vertical section (U bottom type). The vertical cross-sectional shape of the well is not limited to this, and a flat bottom type with a flat bottom surface or a V bottom type with a V-shaped bottom surface may be used. Furthermore, you may make it form a some recessed part in a bottom face.
The size of the well 21 is such that the diameter of the opening is about 7 mm and the depth of the deepest part is about 10 mm. The curvature radius of the bottom surface is about 3.2 mm.

図４に示すように、各ウェル２１の開口縁部には環状のリブ２２が形成されている。リブ２２はマルチウェルプレート２の表面より０．４ｍｍ程度膨出して形成されている。リブ２２によってウェル２１間のコンタミネーションが効果的に防止できる。なお、図１及び図２ではリブ２２の図示を省略している。 As shown in FIG. 4, an annular rib 22 is formed at the opening edge of each well 21. The ribs 22 are formed to bulge about 0.4 mm from the surface of the multiwell plate 2. The ribs 22 can effectively prevent contamination between the wells 21. In FIG. 1 and FIG. 2, the rib 22 is not shown.

マルチウェルプレート２の側面下側の周囲には支持部２３が形成されている。支持部２３は、図２に示すように、マルチウェルプレート２の半分程度の高さであり、マルチウェルプレート２の側面から外方に１．３ｍｍ程度突出している。支持部２３は後に説明するように脚部１２が当接し、マルチウェルプレート２に対する位置決め器具１の装着高さを規定する。 A support portion 23 is formed around the lower side of the side surface of the multiwell plate 2. As shown in FIG. 2, the support portion 23 is about half the height of the multiwell plate 2 and protrudes about 1.3 mm outward from the side surface of the multiwell plate 2. As will be described later, the support portion 23 comes into contact with the leg portion 12 and defines the mounting height of the positioning device 1 with respect to the multiwell plate 2.

次いで図１から図４を用いて本実施形態の位置決め器具１について説明する。位置決め器具１は、天板１１と、天板１１に設けられマルチウェルプレート２に対して位置決め器具１を固定する固定部とを有する。天板１１には位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の各々に対応する位置に第１の孔１１１と第２の孔１１２が形成されている。 Next, the positioning device 1 according to this embodiment will be described with reference to FIGS. 1 to 4. The positioning device 1 includes a top plate 11 and a fixing portion that is provided on the top plate 11 and fixes the positioning device 1 to the multiwell plate 2. The top plate 11 is formed with a first hole 111 and a second hole 112 at positions corresponding to the respective wells 21 when the positioning device 1 is mounted on the multiwell plate 2.

位置決め器具１は、例えば、各ウェル２１で細胞凝集塊６を培養する場合において、ピペット４による培地５の交換や細胞凝集塊６の回収の際に用いられる。培地５の交換では細胞凝集塊６を吸い取ることなく培地のみを回収する必要がある。また、細胞凝集塊６の回収では細胞凝集塊６を容易かつ円滑に回収する必要がある。このため、これらの操作ではピペット４の先端がウェル２１の適正な位置に確実に挿入されることが望ましい。第１の孔１１１及び第２の孔１１２はこのようにピペット４による吸引の目的が異なる場合に、目的に適した位置にピペット４を挿入することを補助するものである。 For example, when the cell aggregate 6 is cultured in each well 21, the positioning device 1 is used for exchanging the medium 5 with the pipette 4 or collecting the cell aggregate 6. In exchanging the medium 5, it is necessary to collect only the medium without sucking the cell aggregate 6. Further, in collecting the cell aggregate 6, it is necessary to collect the cell aggregate 6 easily and smoothly. Therefore, in these operations, it is desirable that the tip of the pipette 4 is reliably inserted into an appropriate position of the well 21. The first hole 111 and the second hole 112 assist in inserting the pipette 4 at a position suitable for the purpose when the purpose of suction by the pipette 4 is different as described above.

ピペット４のウェル２１に対する適正な位置について説明する。培地５の交換では細胞凝集塊６から離れた位置かつ可能な限り底面近傍にピペット４の先端を挿入することが好ましい。また、細胞凝集塊６の回収では細胞凝集塊６の直上にピペット４の先端を位置させることが好ましい。このようにウェル２１の適正な位置にピペット４の先端を位置させるためには、ピペット４の横方向及び深さ方向の位置を規制するとよい。以下では本実施形態における横方向及び深さ方向の位置の規制について具体的に説明する。 The proper position of the pipette 4 with respect to the well 21 will be described. In exchanging the medium 5, it is preferable to insert the tip of the pipette 4 at a position away from the cell aggregate 6 and as close to the bottom surface as possible. In collecting the cell aggregate 6, it is preferable that the tip of the pipette 4 is positioned immediately above the cell aggregate 6. Thus, in order to position the tip of the pipette 4 at an appropriate position of the well 21, the position of the pipette 4 in the lateral direction and the depth direction may be regulated. Hereinafter, the regulation of the position in the lateral direction and the depth direction in the present embodiment will be specifically described.

本実施形態の位置決め器具１はマルチウェルプレート２の蓋を兼用する。図２に示すように天板１１はマルチウェルプレート２とほぼ同等の縦横寸法の平板である。また、固定部は、天板１１の周囲の縁部から天板１１と直交する方向に延出した脚部１２である。脚部１２は、マルチウェルプレート２に装着したときにマルチウェルプレート２の外周に内面が当接して位置決め器具１の横方向の位置を規定するとともに、先端が支持部２３に当接して位置決め器具１の深さ方向の位置を規定する。このようにマルチウェルプレート２（ウェル２１）に対する位置決め器具１の横方向及び深さ方向の位置が規定されることにより、後に説明するように位置決め器具１にピペット４を挿入したときのウェル２１に対するピペット４の横方向及び深さ方向の位置を規定することができる。 The positioning device 1 of this embodiment also serves as a lid for the multiwell plate 2. As shown in FIG. 2, the top plate 11 is a flat plate having vertical and horizontal dimensions substantially the same as the multiwell plate 2. The fixed portion is a leg portion 12 that extends from an edge around the top plate 11 in a direction orthogonal to the top plate 11. When the leg portion 12 is mounted on the multiwell plate 2, the inner surface abuts on the outer periphery of the multiwell plate 2 to define the lateral position of the positioning device 1, and the tip abuts against the support portion 23 to position the positioning device. The position in the depth direction of 1 is defined. Thus, by defining the positions of the positioning device 1 in the lateral direction and the depth direction with respect to the multiwell plate 2 (well 21), the pipe 21 is inserted into the positioning device 1 as will be described later. The lateral and depth positions of the pipette 4 can be defined.

本実施形態の位置決め器具１の天板１１は、図１に示すように縦１２８ｍｍ程度、横８５ｍｍ程度、厚さ２ｍｍ程度の平板状である。脚部１２の高さは５ｍｍ程度である。位置決め器具１の材料としては、前述したマルチウェルプレート２と同様の材料が挙げられる。 As shown in FIG. 1, the top plate 11 of the positioning device 1 of the present embodiment is a flat plate having a length of about 128 mm, a width of about 85 mm, and a thickness of about 2 mm. The height of the leg 12 is about 5 mm. Examples of the material for the positioning device 1 include the same materials as those for the multiwell plate 2 described above.

脚部１２は、前述のように位置決め器具１のマルチウェルプレート２に対する横方向及び深さ方向の位置を規定する。本実施形態では、図２に示すように、位置決め器具１とマルチウェルプレート２との間には一定の間隙３が存在する。間隙３の大きさは、マルチウェルプレート２の全面にわたり一定である。すなわち、天板１１はマルチウェルプレート２と略平行に固定される。また、間隙３により複数のウェル２１の開口が分断されているため液滴が位置決め器具１の天板１１を伝ってコンタミネーションが生じることを良好に防止することができる。 As described above, the leg portion 12 defines the position of the positioning device 1 in the lateral direction and the depth direction with respect to the multiwell plate 2. In the present embodiment, as shown in FIG. 2, there is a certain gap 3 between the positioning device 1 and the multiwell plate 2. The size of the gap 3 is constant over the entire surface of the multiwell plate 2. That is, the top plate 11 is fixed substantially parallel to the multiwell plate 2. Further, since the openings of the plurality of wells 21 are divided by the gaps 3, it is possible to satisfactorily prevent the droplets from traveling along the top plate 11 of the positioning device 1 and causing contamination.

図３は位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の一つについての拡大上面図である。図３に示すように、天板１１には、位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の各々に対応する位置に第１の孔１１１と第２の孔１１２が形成されている。第１の孔１１１および第２の孔１１２はそれぞれ液体を供給又は吸引する細管の挿入口として用いられる。以下では細管として先端に向かって外径が漸減するピペット４を例に説明をするが、細管はこれに限られずガラス管などでもよい。 FIG. 3 is an enlarged top view of one of the wells 21 when the positioning device 1 is mounted on the multi-well plate 2. As shown in FIG. 3, the top plate 11 is formed with a first hole 111 and a second hole 112 at positions corresponding to the wells 21 when the positioning device 1 is mounted on the multiwell plate 2. Yes. Each of the first hole 111 and the second hole 112 is used as an insertion port for a thin tube for supplying or sucking a liquid. In the following, the pipette 4 whose outer diameter gradually decreases toward the tip will be described as an example of a thin tube, but the thin tube is not limited to this and may be a glass tube or the like.

本実施形態では、第１の孔１１１はウェル２１の最深部の直上に形成されている。本実施形態のウェル２１は縦断面がＵ字形状であるのでウェル２１の最深部はウェル２１の中央にある。このため、第１の孔１１１はウェル２１の中心軸上に形成される。したがって、第１の孔１１１からピペット４を挿入すると、ピペット４の先端もウェル２１の中央（中心軸上）に位置することとなる。ここで細胞凝集塊６は自重によりウェル２１の最深部（中央）に集積するため、第１の孔１１１は細胞凝集塊６の直上に位置する。したがって、細胞凝集塊６を回収する場合には第１の孔１１１からピペット４を挿入すれば、ピペット４の先端は細胞凝集塊６の直上に到達し、細胞凝集塊６を効率的に回収できる。 In the present embodiment, the first hole 111 is formed immediately above the deepest part of the well 21. Since the well 21 of this embodiment has a U-shaped longitudinal section, the deepest part of the well 21 is at the center of the well 21. For this reason, the first hole 111 is formed on the central axis of the well 21. Therefore, when the pipette 4 is inserted from the first hole 111, the tip of the pipette 4 is also positioned at the center (on the central axis) of the well 21. Here, since the cell aggregate 6 accumulates in the deepest part (center) of the well 21 by its own weight, the first hole 111 is located immediately above the cell aggregate 6. Therefore, when collecting the cell aggregate 6, if the pipette 4 is inserted from the first hole 111, the tip of the pipette 4 reaches just above the cell aggregate 6, and the cell aggregate 6 can be efficiently recovered. .

また、第２の孔１１２はウェル２１の最深部の直上からずれた位置に形成されている。さらに後述するように第２の孔１１２は、挿入された細管の先端が、第１の孔１１１に挿入された細管の先端よりも浅い位置で固定されるように細管を係合する形状及び大きさに形成されている。このため、第２の孔１１２からピペット４を挿入すると、ピペット４の先端もウェル２１の中央から横方向及び高さ方向のいずれもずれた位置に挿入される。したがって、培地５を交換する場合に、第２の孔１１２からピペット４を挿入すると、ピペット４の先端は細胞凝集塊６から離れた位置に挿入されるので、細胞凝集塊６を吸い取ることなく培地５のみを回収することができる。 Further, the second hole 112 is formed at a position shifted from directly above the deepest part of the well 21. Further, as will be described later, the second hole 112 has a shape and a size for engaging the thin tube so that the tip of the inserted thin tube is fixed at a position shallower than the tip of the thin tube inserted into the first hole 111. Is formed. For this reason, when the pipette 4 is inserted from the second hole 112, the tip of the pipette 4 is also inserted at a position shifted from the center of the well 21 in both the horizontal direction and the height direction. Accordingly, when the pipette 4 is inserted from the second hole 112 when the medium 5 is exchanged, the tip of the pipette 4 is inserted at a position away from the cell aggregate 6, so that the medium is not sucked up. Only 5 can be recovered.

本実施形態では第１の孔１１１は円形をなしており、第１の孔１１１にピペット４を挿入したときに、第１の孔１１１の上面側の縁部にピペット４の外周が当接する。このため、第１の孔１１１に挿入されたピペット４は横方向の動きが規制される。第２の孔１１２も同様に円形をなしており、ピペット４の横方向の動きを規制することができる。なお、第１の孔１１１、第２の孔１１２の形状は円形に限らず、楕円形や多角形など挿入された細管の横方向の動きを規制できる形状であればいかなる形状としてもよい。 In the present embodiment, the first hole 111 has a circular shape, and when the pipette 4 is inserted into the first hole 111, the outer periphery of the pipette 4 abuts on the edge on the upper surface side of the first hole 111. For this reason, the movement of the pipette 4 inserted into the first hole 111 is restricted in the lateral direction. Similarly, the second hole 112 has a circular shape, and the lateral movement of the pipette 4 can be restricted. Note that the shapes of the first hole 111 and the second hole 112 are not limited to a circular shape, and may be any shape as long as the shape of the inserted thin tube such as an ellipse or a polygon can be regulated.

図４は位置決め器具１をマルチウェルプレート２に装着したときのウェル２１の一つについての拡大縦断面図である。第１の孔１１１は天板１１を貫通し、開口面積が図４の下側に向かって漸減するテーパー状に形成されている。これによりピペット４を第１の孔１１１に挿入したときに、第１の孔１１１の上面側の縁部にピペット４の外周が当接することに加えて、第１の孔１１１の下面側の縁部にもピペット４の外周が当接する。このようにピペット４が第１の孔１１１の上端及び下端で固定されているため、第１の孔１１１に挿入されたピペット４の軸ブレが抑制され、ピペット４が安定して保持される。なお、第１の孔１１１のテーパー角度は挿入するピペット４のテーパー角度とほぼ同じであることが好ましい。 FIG. 4 is an enlarged longitudinal sectional view of one of the wells 21 when the positioning device 1 is mounted on the multi-well plate 2. The first hole 111 penetrates the top plate 11 and is formed in a tapered shape whose opening area gradually decreases toward the lower side of FIG. As a result, when the pipette 4 is inserted into the first hole 111, the outer periphery of the pipette 4 abuts on the upper surface side edge of the first hole 111, and the lower surface side edge of the first hole 111. The outer periphery of the pipette 4 also contacts the part. Since the pipette 4 is fixed at the upper end and the lower end of the first hole 111 in this way, the shaft shake of the pipette 4 inserted into the first hole 111 is suppressed, and the pipette 4 is stably held. The taper angle of the first hole 111 is preferably substantially the same as the taper angle of the pipette 4 to be inserted.

第２の孔１１２も同様に天板１１を貫通し、開口面積が図４の下側に向かって漸減するテーパー状に形成されている。これにより第１の孔１１１と同様に、ピペット４を第２の孔１１２に挿入したときに、第２の孔１１２の上面側の縁部にピペット４の外周が当接することに加えて、第２の孔１１２の下面側の縁部にもピペット４の外周が当接する。このようにピペット４が第２の孔１１２の上端及び下端で固定されているため、第２の孔１１２に挿入されたピペット４の軸ブレが抑制され、ピペット４が安定して保持される。なお、第２の孔１１２のテーパー角度は挿入するピペット４のテーパー角度とほぼ同じであることが好ましい。 Similarly, the second hole 112 penetrates the top plate 11 and is formed in a tapered shape whose opening area gradually decreases toward the lower side of FIG. As a result, in the same manner as the first hole 111, when the pipette 4 is inserted into the second hole 112, the outer periphery of the pipette 4 abuts on the edge on the upper surface side of the second hole 112. The outer periphery of the pipette 4 also contacts the edge of the lower surface side of the second hole 112. Since the pipette 4 is fixed at the upper end and the lower end of the second hole 112 in this way, the shaft shake of the pipette 4 inserted into the second hole 112 is suppressed, and the pipette 4 is stably held. The taper angle of the second hole 112 is preferably substantially the same as the taper angle of the pipette 4 to be inserted.

なお、第１の孔１１１のテーパー角度は第２の孔１１２のテーパー角度よりも緩やかに形成してもよい。細胞凝集塊６の回収に用いるピペットと培地５の交換に用いるピペットは同種のものを用いてもよいが、異種のものを用いることもできる。細胞凝集塊６の回収では、細胞凝集塊６を崩さないように先端の開口径の大きいピペットを使用することが好ましい。このような開口径の大きいピペットは通常のピペットよりもテーパー角度が緩やかとなっている。そこでピペットのテーパー角度に合せて、第１の孔１１１のテーパー角度を第２の孔１１２のテーパー角度よりも緩やかに形成すれば、それぞれのピペットを良好に固定することができる。 Note that the taper angle of the first hole 111 may be formed more gently than the taper angle of the second hole 112. The pipette used for collecting the cell aggregate 6 and the pipette used for exchanging the medium 5 may be the same type, but different types can also be used. In collecting the cell aggregate 6, it is preferable to use a pipette having a large opening diameter at the tip so that the cell aggregate 6 is not broken. Such a pipette with a large opening diameter has a gentler taper angle than a normal pipette. Therefore, if the taper angle of the first hole 111 is formed more gently than the taper angle of the second hole 112 in accordance with the taper angle of the pipette, each pipette can be fixed well.

また、本実施形態では第１の孔１１１はウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置を規定する。前述のようにピペット４の先端部は先端に向かって外径が漸減している。したがって、ピペット４を第１の孔１１１に挿入すると、ピペット４の外径が第１の孔１１１の上面側の直径と等しくなるところまで挿入され、それ以上は挿入されない。このため、ピペット４の外径に合わせて第１の孔１１１の直径を調整すれば、ピペット４の挿入長さを調整することができる。よって、ウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置を規定することができる。本実施形態では、第１の孔１１１から挿入したピペット４の先端は細胞凝集塊６にできる限り接近することが望ましい。したがって、第１の孔１１１の直径はピペット４の先端がウェル２１の最深部付近に到達する大きさに形成されている。 In the present embodiment, the first hole 111 defines the depth position of the tip of the pipette 4 with respect to the well 21. As described above, the outer diameter of the tip of the pipette 4 gradually decreases toward the tip. Therefore, when the pipette 4 is inserted into the first hole 111, the pipette 4 is inserted until the outer diameter of the pipette 4 becomes equal to the diameter on the upper surface side of the first hole 111, and no more is inserted. For this reason, if the diameter of the 1st hole 111 is adjusted according to the outer diameter of the pipette 4, the insertion length of the pipette 4 can be adjusted. Therefore, the depth position of the tip of the pipette 4 with respect to the well 21 can be defined. In the present embodiment, it is desirable that the tip of the pipette 4 inserted from the first hole 111 is as close as possible to the cell aggregate 6. Accordingly, the diameter of the first hole 111 is formed such that the tip of the pipette 4 reaches the vicinity of the deepest portion of the well 21.

第２の孔１１２についても同様に直径の調整によりウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置を規定することができる。本実施形態では、第２の孔１１２から挿入したピペット４の先端は細胞凝集塊６からできる限り離れていることが望ましい。したがって、第２の孔１１２の直径はピペット４の先端が第１の孔１１１に挿入した場合の先端位置よりも浅いところまでしか挿入されない大きさに形成されている。 Similarly, with respect to the second hole 112, the depth position of the tip of the pipette 4 with respect to the well 21 can be defined by adjusting the diameter. In the present embodiment, it is desirable that the tip of the pipette 4 inserted from the second hole 112 is as far as possible from the cell aggregate 6. Therefore, the diameter of the second hole 112 is formed such that the tip of the pipette 4 can be inserted only to a position shallower than the tip position when the pipette 4 is inserted into the first hole 111.

上述のように、ウェル２１に対するピペット４の先端の深さ位置は第１の孔１１１及び第２の孔１１２の直径により調整できる。本実施形態では第１の孔１１１にピペット４を挿入したときの先端の深さ位置は第２の孔１１２に挿入したときの深さ位置よりも深くなっている。図３、図４に示すように本実施形態では、第１の孔１１１の直径は第２の孔１１２の直径よりも大きい。本実施形態では第１の孔１１１は上側の直径が２．７ｍｍ程度、下側の直径が２．６ｍｍ程度、第２の孔１１２は上側の直径が２．０ｍｍ程度、下側の直径が１．９ｍｍ程度である。このように第１の孔１１１の直径を第２の孔１１２の直径よりも大きく形成すると、第１の孔１１１にピペット４を挿入した場合に第２の孔１１２に挿入した場合よりも深く挿入することができる。なお、本実施形態では第１の孔１１１及び第２の孔１１２が共に円形の場合について説明したが、非円形の場合には各々の孔の内接円をもとに孔の大きさを調整すればよい。 As described above, the depth position of the tip of the pipette 4 with respect to the well 21 can be adjusted by the diameters of the first hole 111 and the second hole 112. In the present embodiment, the depth position of the tip when the pipette 4 is inserted into the first hole 111 is deeper than the depth position when the pipette 4 is inserted into the second hole 112. As shown in FIGS. 3 and 4, in the present embodiment, the diameter of the first hole 111 is larger than the diameter of the second hole 112. In the present embodiment, the first hole 111 has an upper diameter of about 2.7 mm and a lower diameter of about 2.6 mm, and the second hole 112 has an upper diameter of about 2.0 mm and a lower diameter of 1. .About 9 mm. When the diameter of the first hole 111 is made larger than the diameter of the second hole 112 in this way, when the pipette 4 is inserted into the first hole 111, the diameter is inserted deeper than when inserted into the second hole 112. can do. In the present embodiment, the case where both the first hole 111 and the second hole 112 are circular has been described. However, in the case of a non-circular shape, the size of the hole is adjusted based on the inscribed circle of each hole. do it.

なお、上記では第１の孔１１１と第２の孔１１２は独立して形成されているが、それぞれの孔はその一部同士が重なり合っていてもよい。このときピペット４を固定するためには、重なりは円周の５０％未満であることが必要であり、特に３０％〜４０％未満であればピペット４を良好に位置決めすることができ好ましい。 In addition, although the 1st hole 111 and the 2nd hole 112 are formed independently in the above, each part may overlap each hole. At this time, in order to fix the pipette 4, it is necessary that the overlap is less than 50% of the circumference, and in particular, if it is less than 30% to 40%, the pipette 4 can be positioned favorably.

なお、本実施形態では第１の孔１１１および第２の孔１１２は複数のウェル２１の全てに対応する位置に形成されている。また、各ウェル２１に対する第１の孔１１１及び第２の孔１１２の形成位置は、複数のウェル２１の全てにおいて同一である。これにより、複数の第１の孔１１１や複数の第２の孔１１２がそれぞれ８行１２列に整列するため、マルチチャンネルピペットなどを用いて効率的に操作をすることができる。
なお、第１の孔１１１および第２の孔１１２は複数のウェル２１の一部に対応する位置にのみ形成されていてもよい。 In the present embodiment, the first hole 111 and the second hole 112 are formed at positions corresponding to all of the plurality of wells 21. The formation positions of the first hole 111 and the second hole 112 for each well 21 are the same in all of the plurality of wells 21. Thereby, since the plurality of first holes 111 and the plurality of second holes 112 are aligned in 8 rows and 12 columns, respectively, it is possible to efficiently operate using a multi-channel pipette or the like.
The first hole 111 and the second hole 112 may be formed only at positions corresponding to a part of the plurality of wells 21.

本実施形態では、位置決め器具１はマルチウェルプレート２の蓋を兼用する。このため、培養時には天板１１の上側の面にフィルム（図示せず）を貼る等により第１の孔１１１および第２の孔１１２を塞ぐとよい。これによりウェル２１が直接外気にさらされないためコンタミネーションが効果的に防止できる。 In the present embodiment, the positioning device 1 also serves as a lid of the multiwell plate 2. For this reason, at the time of culture | cultivation, it is good to block | close the 1st hole 111 and the 2nd hole 112 by sticking a film (not shown) on the upper surface of the top plate 11 or the like. Thereby, since the well 21 is not directly exposed to the outside air, contamination can be effectively prevented.

また、本実施形態では位置決め器具１はマルチウェルプレート２の蓋を兼用したが、蓋は別に用意してもよい。この場合、培地の交換や細胞凝集塊の回収の際には蓋を外して位置決め器具１を装着して操作を行う。 In the present embodiment, the positioning device 1 also serves as the lid of the multiwell plate 2, but the lid may be prepared separately. In this case, when exchanging the medium or collecting the cell agglomerates, the lid is removed and the positioning device 1 is attached for the operation.

また、本実施形態では固定部は天板１１の周囲から天板１１と直交する方向に延出する脚部１２として形成したが、固定部の形状はこれに限られない。例えば天板１１の下側にリブ２２と係合する環状溝部（図示せず）を形成してもよい。この場合、位置決め器具１をマルチウェルプレート２に載せると複数のリブ２２と複数の環状溝部の係合により、位置決め器具１とマルチウェルプレート２が固定される。 Moreover, in this embodiment, although the fixing | fixed part was formed as the leg part 12 extended in the direction orthogonal to the top plate 11 from the circumference | surroundings of the top plate 11, the shape of a fixing | fixed part is not restricted to this. For example, an annular groove (not shown) that engages with the rib 22 may be formed on the lower side of the top plate 11. In this case, when the positioning device 1 is placed on the multiwell plate 2, the positioning device 1 and the multiwell plate 2 are fixed by the engagement of the plurality of ribs 22 and the plurality of annular grooves.

また、位置決め器具１をフィルム状に形成してもよい。この場合、位置決め器具１の下側に固定部として粘着層（図示せず）を設け、貼り合わせにより位置決め器具１とマルチウェルプレート２を固定するとよい。なお、位置決め器具１をフィルム状に形成する場合は、ピペット４を挿入したときにこれを固定できる程度の強度を有していることが必要である。このような材料として、例えば、環状ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。 Moreover, you may form the positioning instrument 1 in a film form. In this case, an adhesive layer (not shown) may be provided as a fixing portion on the lower side of the positioning device 1, and the positioning device 1 and the multiwell plate 2 may be fixed by bonding. In addition, when forming the positioning instrument 1 in a film form, it is necessary to have the intensity | strength which can fix this when the pipette 4 is inserted. Examples of such materials include cyclic polyolefin resins, polystyrene resins, polystyrene resins such as acrylonitrile-butadiene-styrene resins, polycarbonate resins, polyethylene terephthalate resins, methacrylic resins such as polymethyl methacrylate resins, vinyl chloride resins, poly Butylene terephthalate resin, polyarylate resin, polysulfone resin, polyethersulfone resin, polyetheretherketone resin, polyetherimide resin, fluorine resin such as polytetrafluoroethylene, acrylic resin such as polymethylpentene resin, polyacrylonitrile, etc. And fiber based resins such as propionate resins.

次に、図５を用いて本実施形態の位置決め器具１の使用方法を説明する。 Next, the usage method of the positioning device 1 of this embodiment is demonstrated using FIG.

本実施形態の位置決め器具１は目的により第１の孔１１１と第２の孔１１２を使い分けることを特徴とする。以下では細胞凝集塊６の培養について説明する。 The positioning device 1 of the present embodiment is characterized in that the first hole 111 and the second hole 112 are selectively used depending on the purpose. Below, culture | cultivation of the cell aggregate 6 is demonstrated.

まず、使用する細胞の懸濁液を用意する。懸濁液の細胞濃度を計測し、１ｃｌｏｎｅ／ｗｅｌｌとなるように９６ウェルのマルチウェルプレート２に播種し、３７℃、５％ＣＯ_２濃度で培養を開始する。播種した細胞は非接着の状態で増殖し、ウェル２１の最深部で細胞凝集塊６を形成する。培養中は２、３日間隔で培地５を交換し、細胞凝集塊６が所望の大きさになったところで細胞凝集塊６を回収する。このときに位置決め器具１を使用する。 First, a cell suspension to be used is prepared. The cell concentration of the suspension is measured, seeded in a 96-well multiwell plate 2 so as to be 1 clone / well, and culture is started at 37 ° C. and 5% CO ₂ concentration. The seeded cells grow in a non-adherent state, and form a cell aggregate 6 in the deepest part of the well 21. During the culture, the medium 5 is exchanged at intervals of a few days, and the cell aggregate 6 is collected when the cell aggregate 6 reaches a desired size. At this time, the positioning device 1 is used.

次に位置決め器具１を用いた細胞凝集塊６の回収の手順について説明する。細胞凝集塊６を回収する際には位置決め器具１の第１の孔１１１にピペット４を挿入する。前述のように第１の孔１１１はウェル２１の最深部の直上に形成されている。したがって、第１の孔１１１から挿入したピペット４の先端は、図５に示すように細胞凝集塊６の直上まで接近する。この状態でピペット４により吸引すると細胞凝集塊６を確実に回収することができる。 Next, a procedure for collecting the cell aggregate 6 using the positioning device 1 will be described. When collecting the cell aggregate 6, the pipette 4 is inserted into the first hole 111 of the positioning device 1. As described above, the first hole 111 is formed immediately above the deepest portion of the well 21. Therefore, the tip of the pipette 4 inserted from the first hole 111 approaches to just above the cell aggregate 6 as shown in FIG. In this state, the cell aggregate 6 can be reliably recovered by sucking with the pipette 4.

ここで前述のように第１の孔１１１がテーパー状に形成されているため、挿入したピペット４は第１の孔１１１の上端及び下端において固定されている。このためピペット４の軸ブレが効果的に防止でき、ピペット４は確実に固定される。さらに、第１の孔１１１の直径は第２の孔１１２の直径よりも大きく形成されている。このため、ピペット４をより奥まで挿入することができ、ピペット４の先端を細胞凝集塊６に接近させることができる。したがって、細胞凝集塊６を回収し損なうことがなく、ピペッティングを繰り返すことにより細胞凝集塊６を崩すといったことが防止される。 Here, since the first hole 111 is formed in a tapered shape as described above, the inserted pipette 4 is fixed at the upper end and the lower end of the first hole 111. For this reason, the shaft shake of the pipette 4 can be effectively prevented, and the pipette 4 is securely fixed. Further, the diameter of the first hole 111 is larger than the diameter of the second hole 112. For this reason, the pipette 4 can be inserted deeper, and the tip of the pipette 4 can be brought close to the cell aggregate 6. Therefore, without recovering the cell aggregate 6, it is possible to prevent the cell aggregate 6 from being broken by repeated pipetting.

次いで位置決め器具１を用いた培地５の交換の手順について説明する。培地５の交換は細胞凝集塊６が所望の大きさに成長するまで定期的に行う。このとき細胞凝集塊６に不要な振動・衝撃を与えないよう培地５の交換を行うことが好ましい。一方で、培地５は可能な限り全量を交換することが望ましい。したがって、培地５の交換では細胞凝集塊６に接近せず、できる限り深い位置にピペット４の先端を挿入するよう、ピペット４の先端の位置を制御することが望まれる。 Next, the procedure for exchanging the medium 5 using the positioning device 1 will be described. The medium 5 is exchanged periodically until the cell aggregate 6 grows to a desired size. At this time, it is preferable to replace the culture medium 5 so as not to give unnecessary vibration and shock to the cell aggregate 6. On the other hand, it is desirable to exchange the entire amount of the medium 5 as much as possible. Therefore, it is desirable to control the position of the tip of the pipette 4 so that the tip of the pipette 4 is inserted as deep as possible without changing to the cell aggregate 6 when the medium 5 is replaced.

具体的には、培地５を交換する際には位置決め器具１の第２の孔１１２にピペット４を挿入する。この状態でピペット４により吸引すると培地５を全量回収することができる。このとき、ピペット４の先端はウェル２１の最深部から横方向及び深さ方向がともに離れた位置に挿入される。したがって、細胞凝集塊６を誤って吸引することが防止できる。 Specifically, when replacing the culture medium 5, the pipette 4 is inserted into the second hole 112 of the positioning device 1. If the pipette 4 sucks in this state, the entire medium 5 can be collected. At this time, the tip of the pipette 4 is inserted at a position away from the deepest part of the well 21 in both the lateral direction and the depth direction. Therefore, it is possible to prevent the cell aggregate 6 from being sucked by mistake.

ここで前述のように第２の孔１１２がテーパー状に形成されているため、挿入したピペット４は第２の孔１１２の上端及び下端において固定されている。このためピペット４の軸ブレが効果的に防止でき、誤って細胞凝集塊６を吸引することがない。さらに、第２の孔１１２の直径は第１の孔１１１の直径よりも小さく形成されている。このため、ピペット４を培地５の回収に十分な深さまで挿入でき、ピペット４の先端を不要に細胞凝集塊６に接近させることが防止できる。したがって、細胞凝集塊６を誤って吸引することなく培地５のみを全量回収・交換することができる。 Since the second hole 112 is tapered as described above, the inserted pipette 4 is fixed at the upper and lower ends of the second hole 112. For this reason, axial blurring of the pipette 4 can be effectively prevented, and the cell aggregate 6 is not accidentally sucked. Further, the diameter of the second hole 112 is smaller than the diameter of the first hole 111. For this reason, the pipette 4 can be inserted to a depth sufficient for the recovery of the culture medium 5, and the tip of the pipette 4 can be prevented from approaching the cell aggregate 6 unnecessarily. Therefore, the entire amount of the medium 5 can be collected and exchanged without accidentally sucking the cell aggregate 6.

１位置決め器具
１１天板
１１１第１の孔
１１２第２の孔
１２脚部
２マルチウェルプレート
２１ウェル
２２リブ
２３支持部
３間隙
４ピペット
５培地
６細胞凝集塊 1 Positioning tool 11 Top plate
111 1st hole 112 2nd hole 12 Leg 2 Multiwell plate 21 Well 22 Rib 23 Support part 3 Gap 4 Pipette 5 Medium 6 Cell aggregate

Claims

A positioning device that is used by being mounted on the surface side of a substrate having a well that is open on one surface, and determines a position of a capillary tube that supplies or sucks liquid to the well, with respect to the well,
A top plate, and a fixing portion provided on the top plate for fixing the positioning device to the substrate;
The top plate has a first hole and a second hole into which the thin tube is inserted at a position corresponding to the well when the positioning device is mounted on the substrate. Instruments.

The said 1st hole is formed in the shape and magnitude | size which engage with a thin tube so that the front-end | tip of the said thin tube inserted in the said 1st hole may reach the deepest part vicinity of the said well. The positioning device as described.

The second hole engages the capillary so that the tip of the capillary inserted into the second hole is fixed at a position shallower than the tip of the capillary inserted into the first hole. The positioning device according to claim 2, wherein the positioning device is formed in a shape and a size.

The first hole and the second hole each have a circular shape, and the diameter of the first hole is larger than the diameter of the second hole. Positioning equipment.

The positioning device according to any one of claims 1 to 4, wherein the first hole is formed immediately above the deepest portion of the well.

The positioning device according to any one of claims 1 to 5, wherein the second hole is formed at a position shifted from immediately above the deepest portion of the well.

The thin tube has a tapered shape with an outer diameter gradually decreasing toward a tip, and each of the first hole and the second hole is formed so as to gradually decrease in diameter toward the well. Item 7. A positioning device according to any one of Items 4 to 6.

2. The plurality of wells are formed in the substrate, and the top plate has the first hole and the second hole formed at a position corresponding to at least one of the plurality of wells. The positioning device as described in any one of thru | or 7.

The positioning device according to claim 8, wherein the top plate has the first hole and the second hole formed at positions corresponding to all of the plurality of wells.

The plurality of wells are arranged in a plurality of rows and a plurality of columns on the substrate, and the formation positions of the first hole and the second hole for each of the plurality of wells are the same in all of the plurality of wells. The positioning device according to claim 9, which has a positional relationship of