JP2013227309A - Ghrelin secretion promotor - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、悪液質や食欲不振などのグレリン分泌が関与する症状の予防および治療の分野に関する。 The present invention relates to the field of prevention and treatment of symptoms involving ghrelin secretion such as cachexia and anorexia.
グレリンは、成長ホルモン分泌促進因子の受容体（growth hormone secretagogue receptor；GHSR）に対する内因性リガンドとしてヒトの胃から発見された28残基のペプチドホルモンであり、成長ホルモン分泌促進活性を有する。グレリンは、3番目のセリンがオクタン酸によりアシル化されており、この修飾が生理活性に必須のものと考えられている。グレリンは唯一の内因性摂食促進因子であり、近年の非臨床・臨床研究により、成長ホルモン分泌促進活性以外にも多様な作用をもたらすことが見出されてきた。すなわち、グレリンは、摂食・エネルギー代謝調節機能に関しては摂食亢進、脂肪蓄積促進、インスリン分泌抑制、褐色脂肪組織の機能抑制等の作用を、消化器系に関しては消化管運動促進、胃酸分泌亢進、膵外分泌亢進等の作用を、循環器系に関しては交感神経系抑制、血管拡張、心収縮力増大、心筋細胞の保護作用等の作用を示す。これらの多彩な生理作用を臨床応用する試みも既に始まっており、人工関節置換術後、消化器癌術後、摂食障害、機能性ディスペプシア、癌カヘキシア、慢性心不全カヘキシア、慢性腎不全カヘキシア、慢性閉塞性肺疾患（COPD）の患者にグレリンを投与する臨床試験が行われている。ただし、現在のところグレリンの投与は静脈内投与によるものであり、その半減期が非常に短いことからも、実用には困難が伴う。また、グレリンのオクタン酸修飾を補う目的でオクタン酸を豊富に含む経口栄養剤の摂取試験も行われており、血漿中グレリンレベルの上昇、食欲や栄養状態の改善が認められているが、経口栄養剤の摂取が困難な病態であることも多く、解決策が求められている。 Ghrelin is a 28-residue peptide hormone discovered from the human stomach as an endogenous ligand for the growth hormone secretagogue receptor (GHSR), and has growth hormone secretion promoting activity. In ghrelin, the third serine is acylated with octanoic acid, and this modification is considered essential for bioactivity. Ghrelin is the only endogenous feeding-promoting factor, and recent nonclinical and clinical studies have found that it has various effects other than growth hormone secretion-promoting activity. In other words, ghrelin has effects such as increased feeding, fat accumulation promotion, insulin secretion inhibition, brown adipose tissue function inhibition, etc. with respect to feeding and energy metabolism regulation functions, gastrointestinal motility promotion, gastric acid secretion enhancement with respect to the digestive system In the circulatory system, it exhibits actions such as sympathetic nervous system suppression, vasodilation, increased cardiac contraction force, and cardiomyocyte protective action. Attempts to clinically apply these various physiological effects have already begun, including artificial joint replacement, post-gastrointestinal cancer surgery, eating disorders, functional dyspepsia, cancer cachexia, chronic heart failure cachexia, chronic renal failure cachexia, chronic Clinical trials are underway to administer ghrelin to patients with obstructive pulmonary disease (COPD). However, at present, administration of ghrelin is intravenous, and its half-life is very short, which makes it difficult to put it into practical use. In addition, ingestion studies of oral nutrients rich in octanoic acid have been conducted to supplement ghrelin with octanoic acid modification, and elevated plasma ghrelin levels and improved appetite and nutritional status have been observed. In many cases, it is difficult to take nutrients, and there is a need for a solution.
グレリンは、胃のA-like細胞といわれる貯蔵顆粒含有内分泌細胞から分泌され、循環血中に入り全身をめぐるが、その作用は多くが神経経由で発揮される。たとえば、成長ホルモン分泌促進作用や摂食亢進作用は、胃に分布する迷走神経終末に局在するGHSRにグレリンが結合し、迷走神経求心路の電気活動を抑制することにより、中枢神経へシグナルが伝達された結果もたらされると考えられている。 Ghrelin is secreted from storage granule-containing endocrine cells called A-like cells of the stomach, enters the circulating blood and goes around the whole body, but most of its actions are exerted via nerves. For example, the growth hormone secretion-promoting action and the feeding-enhancing action are achieved by binding to GHSR localized at the vagus nerve endings distributed in the stomach and suppressing electrical activity of the vagus nerve afferent, thereby causing a signal to the central nerve. It is thought to result from the communication.
グレリン分泌の制御因子については明らかではないが、例えば動物実験においては、神経伝達物質であるβアゴニスト、セクレチンなどのペプチドホルモンによるグレリンの分泌促進が認められている。もし、低分子化合物によって分泌が促進されれば、低栄養、消化器機能障害、術後回復などに有用である。 Although the regulator of ghrelin secretion is not clear, for example, in animal experiments, ghrelin secretion is promoted by peptide hormones such as β-agonist and secretin which are neurotransmitters. If secretion is promoted by low molecular weight compounds, it is useful for malnutrition, digestive dysfunction, postoperative recovery, etc.
一方、ステロイドサポニン類には種々の構造を有する類縁体が知られており（非特許文献１）、中でも、植物に由来するステロイドサポニン類の１つであるジオスシンは成長ホルモン分泌の促進作用を有することが知られている（非特許文献２）。しかしながら、ジオスシン等のステロイドサポニン類とグレリン分泌との関係は知られていない。 On the other hand, analogs having various structures are known for steroid saponins (Non-patent Document 1). Among them, dioscin, which is one of plant-derived steroid saponins, has an action of promoting growth hormone secretion. It is known (Non-Patent Document 2). However, the relationship between steroid saponins such as dioscin and ghrelin secretion is not known.
本発明は、グレリン分泌を促進する手段を提供することを課題とする。 An object of the present invention is to provide means for promoting ghrelin secretion.
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ジオスシン等の特定のステロイドサポニン類が、ラット胃より単離されたグレリン分泌細胞においてグレリン分泌を促進することを見出し、本発明を完成させた。 As a result of intensive studies to solve the above problems, the present inventors have found that specific steroid saponins such as dioscin promote ghrelin secretion in ghrelin-secreting cells isolated from the rat stomach, The present invention has been completed.
すなわち、本発明は以下の内容を含む。
[１]
下記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物を含有する、グレリン分泌促進剤：
That is, the present invention includes the following contents.
[1]
A ghrelin secretion promoter comprising a compound represented by the following formula (I) or (II) and one or more compounds selected from salts thereof:
（式中、Ｒ１は、水素原子、α−Ｌ−ラムノピラノシル基、またはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。）； (In the formula, R1 represents a hydrogen atom, an α-L-rhamnopyranosyl group, or an α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl group. In the formula, a black circle represents a hydrogen atom at the corresponding site. Represents upwards));
（式中、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。）。
[２]
前記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（Ｉ）において、Ｒ１が
α−Ｌ−ラムノピラノシル基である、前記グレリン分泌促進剤。
[３]
前記式（Ｉ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（Ｉ）において、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基である、前記グレリン分泌促進剤。
[４]
前記式（ＩＩ）で表される化合物またはその塩を含有し、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３の少なくともいずれかがα−Ｌ−ラムノピラノシル基である、請求項１に記載のグレリン分泌促進剤。
[５]
さらに、賦形剤、嬌味剤、および香料から選択される１またはそれ以上の成分を含有する、前記グレリン分泌促進剤。
[６]
前記グレリン分泌促進剤からなる医薬組成物。
[７]
グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用である、前記医薬組成物。
[８]
前記症状が、悪液質および食欲不振から選択される、前記医薬組成物。
(In the formula, R 2 and R 3 each independently represent a hydrogen atom or an α-L-rhamnopyranosyl group. In the formula, a black circle indicates that the hydrogen atom at the corresponding site is upward).
[2]
The ghrelin secretion promoter comprising a compound represented by the formula (I) or a salt thereof, wherein R1 is an α-L-rhamnopyranosyl group in the formula (I).
[3]
The above-mentioned ghrelin secretion-promoting comprising the compound represented by the formula (I) or a salt thereof, wherein, in the formula (I), R1 is α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl group Agent.
[4]
The ghrelin secretion-promoting according to claim 1, comprising a compound represented by the formula (II) or a salt thereof, wherein in the formula (II), at least one of R2 and R3 is an α-L-rhamnopyranosyl group. Agent.
[5]
Furthermore, the said ghrelin secretion promoter containing the 1 or more component selected from an excipient | filler, a flavoring agent, and a fragrance | flavor.
[6]
A pharmaceutical composition comprising the ghrelin secretion promoter.
[7]
The pharmaceutical composition, which is for prevention, amelioration, and / or treatment of a symptom involving ghrelin secretion.
[8]
Said pharmaceutical composition wherein said symptom is selected from cachexia and anorexia.
本発明によって、優れたグレリン分泌促進剤が提供され、グレリン分泌を促進することができる。よって、本発明は、グレリン分泌が関与する症状の予防および／または治療に有用である。 According to the present invention, an excellent ghrelin secretion promoter is provided, and ghrelin secretion can be promoted. Thus, the present invention is useful for the prevention and / or treatment of conditions involving ghrelin secretion.
以下、本発明を詳細に説明する。なお、本発明において、濃度は、特記しない限り質量を基準とする濃度である。すなわち、例えば、「％」は特記しない限り「質量％」を、「ｐｐｍ」は特記しない限り「質量ｐｐｍ」を示す。 Hereinafter, the present invention will be described in detail. In the present invention, the concentration is a concentration based on mass unless otherwise specified. That is, for example, “%” indicates “mass%” unless otherwise specified, and “ppm” indicates “mass ppm” unless otherwise specified.
本発明は、下記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物を含有する、グレリン分泌促進剤を提供する。以下、「式（Ｉ）または（ＩＩ）で表される化合物、およびその塩から選択される１またはそれ以上の化合物」を総称して「有効成分」ともいう。 The present invention provides a ghrelin secretion promoter comprising a compound represented by the following formula (I) or (II) and one or more compounds selected from salts thereof. Hereinafter, “one or more compounds selected from the compounds represented by the formula (I) or (II) and salts thereof” are collectively referred to as “active ingredients”.
式（Ｉ）は以下の通りである。 Formula (I) is as follows.
式（Ｉ）中、Ｒ１は、水素原子、α−Ｌ−ラムノピラノシル基、またはα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式（Ｉ）中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。 In formula (I), R1 represents a hydrogen atom, an α-L-rhamnopyranosyl group, or an α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl group. In the formula (I), a black circle represents that the hydrogen atom at the corresponding site is upward.
前記式（Ｉ）において、アグリコン骨格中のスピロ環のメチル基が上向き、すなわちスピロ環部分が下記構造（ＩＩＩ）である場合、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン配糖体に相当する。 In the above formula (I), when the spiro ring methyl group in the aglycone skeleton is upward, that is, the spiro ring portion has the following structure (III), the compound of the formula (I) corresponds to a yamogenin glycoside.
この場合、Ｒ１が水素原子であれば、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（yamogenin 3-O-α-L-rhamn
opyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）である。
In this case, if R1 is a hydrogen atom, the compound of formula (I) is yamogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside (yamogenin 3-O-α-L- rhamn
opyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside).
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（yamogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）である。 When R1 is an α-L-rhamnopyranosyl group, the compound of formula (I) is yamogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β. -D-glucopyranoside (yamogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside).
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はヤモゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−[α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）]−β−Ｄ−グルコピラノシド（yamogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside）である。 When R1 is α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl group, the compound of formula (I) is yamogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α. -L-rhamnopyranosyl (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2)]-β-D-glucopyranoside (yamogenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2)]-β-D-glucopyranoside).
また、前記式（Ｉ）において、アグリコン骨格中のスピロ環のメチル基が下向き、すなわちスピロ環部分が下記構造（ＩＶ）である場合、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン配糖体に相当する。 In the formula (I), when the methyl group of the spiro ring in the aglycon skeleton is downward, that is, the spiro ring portion has the following structure (IV), the compound of the formula (I) corresponds to a diosgenin glycoside.
この場合、Ｒ１が水素原子であれば、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）である。 In this case, if R1 is a hydrogen atom, the compound of formula (I) is diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside (diosgenin 3-O-α-L- rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside).
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド（diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-β-D-glucopyranoside）であり、ジオスシン（dioscin）とも呼ばれ
る。ジオスシンの構造式を、後述する図３に示す。
When R1 is an α-L-rhamnopyranosyl group, the compound of formula (I) is diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β. -D-glucopyranoside (diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside), also called dioscin. The structural formula of dioscin is shown in FIG.
また、Ｒ１がα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基であれば、式（Ｉ）の化合物はジオスゲニン−３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−[α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）]−β−Ｄ−グルコピラノシド（diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-β-D-glucopyranoside）であり、フォルマサニンＣ（formasanin C）やパリサポニンＢ（parisaponin B）とも呼ばれる。パリサポ
ニンＢの構造式を、後述する図３に示す。
When R1 is α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl group, the compound of formula (I) is diosgenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α. -L-rhamnopyranosyl (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2)]-β-D-glucopyranoside (diosgenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4)-[α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2)]-β-D-glucopyranoside), also called formasanin C or parisaponin B. The structural formula of paris saponin B is shown in FIG.
式（ＩＩ）は以下の通りである。 Formula (II) is as follows.
式（ＩＩ）中、Ｒ２およびＲ３は、それぞれ独立に、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基を表す。また、式（ＩＩ）中、黒丸は該当部位の水素原子が上向きであることを表す。 In formula (II), R2 and R3 each independently represent a hydrogen atom or an α-L-rhamnopyranosyl group. Further, in the formula (II), a black circle represents that the hydrogen atom at the corresponding site is upward.
前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３が水素原子である場合、式（ＩＩ）の化合物はボラソサイドＤ（borassoside D）である。 In the formula (II), when R2 and R3 are hydrogen atoms, the compound of the formula (II) is borassoside D.
また、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２が水素原子でＲ３がα−Ｌ−ラムノピラノシル基である場合、式（ＩＩ）の化合物はボラソサイドＥ（borassoside E）である。 In the formula (II), when R2 is a hydrogen atom and R3 is an α-L-rhamnopyranosyl group, the compound of the formula (II) is borassoside E.
また、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３がα−Ｌ−ラムノピラノシル基である場合、式（ＩＩ）の化合物はボラソサイドＦ（borassoside F）である。 In the formula (II), when R2 and R3 are α-L-rhamnopyranosyl groups, the compound of the formula (II) is borassoside F.
本発明における有効成分としては、前記いずれのステロイドサポニン類であってもよいが、式（Ｉ）で表されるステロイドサポニン類であることも好ましい。また、別の観点からは、式（ＩＩ）で表されるステロイドサポニン類であることも好ましい。 The active ingredient in the present invention may be any of the steroid saponins described above, but is preferably a steroid saponin represented by the formula (I). From another viewpoint, steroid saponins represented by the formula (II) are also preferable.
また、前記式（Ｉ）において、Ｒ１は、水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基であることが好ましく、特に、原料入手の観点からはα−Ｌ−ラムノピラノシル基であることが好ましい。 In the formula (I), R1 is preferably a hydrogen atom or an α-L-rhamnopyranosyl group, and particularly preferably an α-L-rhamnopyranosyl group from the viewpoint of obtaining raw materials.
また、一方で、前記式（Ｉ）において、Ｒ１は、α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル基であることも好ましい。 On the other hand, in the formula (I), R1 is preferably an α-L-rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyranosyl group.
また、前記式（Ｉ）の化合物は、アグリコン骨格中のスピロ環のメチル基が下向き、すなわちスピロ環部分が下記構造（ＩＶ）である化合物、すなわちジオスゲニン配糖体であることも好ましい。 The compound of formula (I) is also preferably a compound in which the methyl group of the spiro ring in the aglycon skeleton is downward, that is, the spiro ring portion is the following structure (IV), that is, a diosgenin glycoside.
特に、前記式（Ｉ）で表される化合物としては、ジオスシンまたはパリサポニンＢが好ましい。 In particular, as the compound represented by the formula (I), dioscin or parisaponin B is preferable.
また、前記式（ＩＩ）において、Ｒ２およびＲ３の少なくともいずれかは、α−Ｌ−ラムノピラノシル基であることも好ましい。 In the formula (II), at least one of R2 and R3 is preferably an α-L-rhamnopyranosyl group.
本発明において、有効成分は、フリー体もしくはその塩、またはそれらの混合物であってよい。 In the present invention, the active ingredient may be a free form or a salt thereof, or a mixture thereof.
塩としては、薬理学的に許容される塩または可食性の塩であれば特に制限されない。例えば、酸性基に対する塩としては、具体的には、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、ジシクロへキシルアミン等の有機アミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩が挙げられる。また、例えば、塩基性基に対する塩としては、具体的には、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸等の無機酸との塩、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸、タンニン酸、酪酸、ヒベンズ酸、パモ酸、エナント酸、デカン酸、テオクル酸、サリチル酸、乳酸、シュウ酸、マンデル酸、リンゴ酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩が挙げられる。なお、本発明において、アミノ酸は、特記しない限りＬ−体である。なお、塩としては、１種の塩を用いてもよく、２種またはそれ以上の塩を組み合わせて用いてもよい。 The salt is not particularly limited as long as it is a pharmacologically acceptable salt or an edible salt. For example, specific examples of salts for acidic groups include ammonium salts, salts with alkali metals such as sodium and potassium, salts with alkaline earth metals such as calcium and magnesium, aluminum salts, zinc salts, triethylamine, ethanol. Examples thereof include salts with organic amines such as amine, morpholine, pyrrolidine, piperidine, piperazine and dicyclohexylamine, and salts with basic amino acids such as arginine and lysine. Further, for example, as salts for basic groups, specifically, salts with inorganic acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, hydrobromic acid, acetic acid, citric acid, benzoic acid, maleic acid, fumaric acid Acid, tartaric acid, succinic acid, tannic acid, butyric acid, hibenzic acid, pamoic acid, enanthic acid, decanoic acid, teocric acid, salicylic acid, lactic acid, oxalic acid, mandelic acid, salt with organic carboxylic acid such as malic acid, methanesulfone Examples thereof include salts with acids, organic sulfonic acids such as benzenesulfonic acid and p-toluenesulfonic acid. In the present invention, amino acids are L-forms unless otherwise specified. In addition, as a salt, 1 type of salt may be used and 2 or more types of salts may be used in combination.
有効成分としては、１種の化合物を用いてもよく、２種またはそれ以上の化合物を組み合わせて用いてもよい。 As an active ingredient, one type of compound may be used, or two or more types of compounds may be used in combination.
有効成分としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。 As an active ingredient, a commercial item may be used and what was manufactured and acquired suitably may be used.
有効成分の製造方法は特に制限されず、例えば公知の方法を利用できる。有効成分は、例えば、化学合成により製造することができる。有効成分を化学合成により製造する方法としては、例えば、European Journal of Medicineal Chemistry 45 (2010) 4827-37 に
記載の方法を用いることができる。
The production method of the active ingredient is not particularly limited, and for example, a known method can be used. The active ingredient can be produced, for example, by chemical synthesis. As a method for producing an active ingredient by chemical synthesis, for example, the method described in European Journal of Medicineal Chemistry 45 (2010) 4827-37 can be used.
また、有効成分は、例えば、有効成分を含有する素材から抽出等することにより製造することができる。有効成分を含有する素材としては、例えば、アサツキ（チャイブ）、ヤムイモ、サトウヤシ（Borassus flabellifer）の雄花が挙げられる。有効成分を含有する素材からの有効成分の抽出は、例えば、公知の方法により行うことができる。具体的には、例えば、実施例に記載した手法により、チャイブからパリサポニンＢやジオスシンを抽出することができる。 Moreover, an active ingredient can be manufactured by extracting from the raw material containing an active ingredient, for example. Examples of the material containing the active ingredient include male flowers such as chives, yams and sugar palms (Borassus flabellifer). Extraction of the active ingredient from the material containing the active ingredient can be performed by, for example, a known method. Specifically, for example, palisaponin B and dioscin can be extracted from chives by the method described in the examples.
有効成分が製造されたことは、例えば、合成または抽出された有効成分を検出または同定することにより確認できる。有効成分の検出または同定は、例えば、公知の手法により行うことができる。そのような手法としては、例えば、ＨＰＬＣ、ＬＣ／ＭＳ、ＧＣ／ＭＳ、およびＮＭＲが挙げられる。 The production of the active ingredient can be confirmed, for example, by detecting or identifying the synthesized or extracted active ingredient. The active ingredient can be detected or identified by, for example, a known method. Such techniques include, for example, HPLC, LC / MS, GC / MS, and NMR.
有効成分は、精製されたものであってもよく、そうでなくてもよい。例えば、合成または抽出された有効成分は、必要により所望の純度まで精製して用いることができる。有効成分の純度は、例えば、30％以上、50％以上、70％以上、90％以上、または95％以上であってよい。精製は、例えば、公知の方法により行うことができる。具体的には、例えば、イオン交換クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーにより精製を行うことができる。また、例えば、有効成分としては、上記例示したような当該有効成分を含有する素材を用いてもよい。 The active ingredient may or may not be purified. For example, the synthesized or extracted active ingredient can be used after being purified to a desired purity if necessary. The purity of the active ingredient may be, for example, 30% or more, 50% or more, 70% or more, 90% or more, or 95% or more. Purification can be performed, for example, by a known method. Specifically, for example, purification can be performed by ion exchange chromatography, reverse phase chromatography, or affinity chromatography. For example, as an active ingredient, you may use the raw material containing the said active ingredient which was illustrated above.
本発明のグレリン分泌促進剤は、上記有効成分を含む。本発明のグレリン分泌促進剤は、上記有効成分のみからなるものであってもよく、その他の成分を含むものであってもよい。「その他の成分」としては、薬理学的に許容されるものまたは可食性のものであれば特に制限されず、例えば、医薬や飲食品に配合して利用されるものを利用できる。 The ghrelin secretion promoter of this invention contains the said active ingredient. The ghrelin secretion promoter of the present invention may be composed of only the above-mentioned active ingredient or may contain other ingredients. The “other components” are not particularly limited as long as they are pharmacologically acceptable or edible, and for example, those used by blending in medicines and foods and drinks can be used.
例えば、本発明のグレリン分泌促進剤は、任意の剤形で製剤化されていてよい。剤形としては、例えば、液剤、懸濁剤、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤が挙げられる。製剤化にあたっては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定化剤、矯味剤、矯臭剤、香料、希釈剤、界面活性剤等の薬理学的に許容される添加剤を使用することができる。 For example, the ghrelin secretion promoter of the present invention may be formulated in any dosage form. Examples of the dosage form include solutions, suspensions, powders, tablets, pills, and capsules. In formulation, for example, excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents, flavoring agents, fragrances, diluents, surfactants and other pharmacologically acceptable additives. Can be used.
また、例えば、本発明のグレリン分泌促進剤は、他の公知のグレリン分泌促進成分を含んでいてもよい。そのような成分としては、例えば、神経伝達物質であるβアゴニスト、セクレチンなどのペプチドホルモンが挙げられる。 For example, the ghrelin secretion promoter of the present invention may contain other known ghrelin secretion promoting components. Examples of such components include peptide hormones such as β-agonists and secretins that are neurotransmitters.
本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度は、本発明のグレリン分泌促進剤によりグレリン分泌を促進できる限り特に制限されず、有効成分の種類、本発明のグレリン分泌促進剤の剤型、本発明のグレリン分泌促進剤の投与量等の諸条件に応じて適宜設定することができる。本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度は、特に制限されないが、例えば、１００％以下、１０％以下、または１％以下であってよい。また、本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度は、特に制限されないが、例えば、０．０１％以上、０．１％以上、または１％以上であってよい。 The concentration of the active ingredient in the ghrelin secretion promoter of the present invention is not particularly limited as long as ghrelin secretion can be promoted by the ghrelin secretion promoter of the present invention, and the type of active ingredient, the dosage form of the ghrelin secretion promoter of the present invention, the present It can set suitably according to various conditions, such as a dosage of the ghrelin secretion promoter of invention. The concentration of the active ingredient in the ghrelin secretion promoter of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, 100% or less, 10% or less, or 1% or less. The concentration of the active ingredient in the ghrelin secretion promoter of the present invention is not particularly limited, and may be, for example, 0.01% or more, 0.1% or more, or 1% or more.
本発明のグレリン分泌促進剤は、そのまま、あるいは水、生理食塩水、または緩衝液等の薬理学的に許容されるあるいは経口摂取可能な溶媒を用いて希釈又は溶解し、対象に投与することができる。なお、このように希釈あるいは溶解等した場合にも、本発明のグレリン分泌促進剤の範囲に含まれることは言うまでもない。投与態様としては、特に制限されないが、例えば、経口投与、注射等の侵襲的投与、経皮投与が挙げられる。投与態様は、例えば、本発明のグレリン分泌促進剤に含まれる成分の種類等の諸条件に応じて設定すればよい。本発明のグレリン分泌促進剤は、経口投与されるのが好ましい。 The ghrelin secretion promoter of the present invention can be administered to a subject as it is, or diluted or dissolved with a pharmacologically acceptable or orally ingestible solvent such as water, physiological saline, or a buffer solution. it can. Needless to say, such dilution or dissolution is also included in the scope of the ghrelin secretion promoter of the present invention. The mode of administration is not particularly limited, and examples thereof include oral administration, invasive administration such as injection, and transdermal administration. What is necessary is just to set an administration aspect according to various conditions, such as the kind of component contained in the ghrelin secretion promoter of this invention, for example. The ghrelin secretion promoter of the present invention is preferably administered orally.
本発明のグレリン分泌促進剤を対象に投与することにより、対象のグレリン分泌を促進することができる。グレリン分泌の促進により、グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療を行うことができると考えられる。よって、本発明のグレリン分泌促進剤は、医薬組成物、具体的には、グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の医薬組成物として利用できる。本発明のグレリン分泌促進剤をグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の医薬組成物として利用する場合、本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度等は、本発明のグレリン分泌促進剤によりグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療効果が得られるように適宜設定すればよい。 By administering the ghrelin secretion promoter of the present invention to a subject, the subject's ghrelin secretion can be promoted. It is believed that promotion of ghrelin secretion can prevent, ameliorate, and / or treat symptoms involving ghrelin secretion. Therefore, the ghrelin secretion promoter of the present invention can be used as a pharmaceutical composition, specifically, a pharmaceutical composition for prevention, amelioration, and / or treatment of a symptom associated with ghrelin secretion. When the ghrelin secretion promoter of the present invention is used as a pharmaceutical composition for prevention, amelioration, and / or treatment of symptoms involving ghrelin secretion, the concentration of the active ingredient in the ghrelin secretion promoter of the present invention is What is necessary is just to set suitably so that the prevention, improvement, and / or treatment effect of the symptom in which ghrelin secretion is concerned may be acquired with this ghrelin secretion promoter.
「グレリン分泌が関与する症状」としては、グレリン分泌が不足することにより現れる症状やグレリン分泌の促進により改善される症状が挙げられる。「グレリン分泌が関与する症状」として、具体的には、例えば、悪液質や食欲不振が挙げられる。悪液質としては、例えば、癌カヘキシア、慢性心不全カヘキシア、慢性腎不全カヘキシアが挙げられる。 “Symptoms involving ghrelin secretion” include symptoms that appear due to insufficient ghrelin secretion and symptoms that are improved by promotion of ghrelin secretion. Specific examples of “symptoms involving ghrelin secretion” include cachexia and anorexia. Examples of cachexia include cancer cachexia, chronic heart failure cachexia, and chronic renal failure cachexia.
本発明のグレリン分泌促進剤の投与量は、有効成分の含有量、用法、年齢、性別、症状
の程度等の諸条件に応じて適宜設定することができる。本発明のグレリン分泌促進剤の投与量は、有効成分の投与量に換算して、例えば、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜５００ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重／日〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日であってよい。本発明のグレリン分泌促進剤は、１日１回又は複数回に分けて投与することができる。また、本発明のグレリン分泌促進剤は、数日又は数週間に１回の投与としてもよい。各回の投与時の投与量は、有効成分の投与量に換算して一定でもよく、差があってもよい。
The dosage of the ghrelin secretion promoter of the present invention can be appropriately set according to various conditions such as the content of the active ingredient, usage, age, sex, and the degree of symptoms. The dose of the ghrelin secretion promoter of the present invention is, for example, preferably 0.1 mg / kg body weight / day to 500 mg / kg body weight / day, more preferably 1 mg / kg body weight / day in terms of the dose of the active ingredient. It may be from day to 100 mg / kg body weight / day. The ghrelin secretion promoter of the present invention can be administered once a day or divided into multiple times. The ghrelin secretion promoter of the present invention may be administered once every several days or weeks. The dose at each administration may be constant in terms of the dose of the active ingredient or may be different.
また、本発明のグレリン分泌促進剤は、グレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の飲食品の成分として利用することができる。すなわち、本発明は、本発明のグレリン分泌促進剤を含有するグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療用の飲食品（「本発明の飲食品」ともいう）を提供する。本発明の飲食品は、例えば、容器や包装に上記例示したようなグレリン分泌が関与する症状の予防、改善、および／または治療に有効である旨を表示した飲食品として提供されてよい。 Moreover, the ghrelin secretion promoter of this invention can be utilized as a component of the food-drinks for prevention, improvement, and / or treatment of the symptom in which ghrelin secretion is involved. That is, the present invention provides a food / beverage product (also referred to as “the food / beverage product of the present invention”) for prevention, amelioration, and / or treatment of a symptom associated with ghrelin secretion, containing the ghrelin secretion promoter of the present invention. The food / beverage products of the present invention may be provided as a food / beverage product displaying that it is effective for prevention, amelioration, and / or treatment of symptoms involving ghrelin secretion as exemplified above in containers and packaging.
飲食品としては、特に制限されず、あらゆる飲食品が包含される。飲食品としては、例えば、水、果汁、牛乳、茶、アルコール飲料、スープなどの飲料；ハム、ソーセージなどの食肉加工食品；かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品；バター、発酵乳、粉乳などの乳製品；パン、麺類、菓子等が挙げられる。 It does not restrict | limit especially as food / beverage products, All food / beverage products are included. Examples of foods and beverages include beverages such as water, fruit juice, milk, tea, alcoholic beverages, soups; processed meat products such as ham and sausage; processed fishery products such as kamaboko and chikuwa; milk such as butter, fermented milk, and powdered milk Products; bread, noodles, confectionery, etc.
本発明の飲食品は、本発明のグレリン分泌促進剤を添加すること以外は、通常の飲食品と同様の原料を用い、同様の方法によって製造することができる。本発明のグレリン分泌促進剤の添加は、飲食品の製造工程のいずれの段階で行われてもよい。すなわち、本発明のグレリン分泌促進剤は、飲食品の原料に添加されてもよく、製造途中の飲食品に添加されてもよく、製造された飲食品に添加されてもよい。本発明の調味料または有効成分は、１回添加されてもよく、２またはそれ以上の回数に分けて添加されてもよい。本発明のグレリン分泌促進剤の添加量は、有効成分の種類、本発明のグレリン分泌促進剤における有効成分の濃度、飲食品の摂取態様等の諸条件に応じて適宜設定することができる。 The food / beverage products of this invention can be manufactured by the same method using the raw material similar to a normal food / beverage products except adding the ghrelin secretion promoter of this invention. The addition of the ghrelin secretion promoter of the present invention may be performed at any stage of the production process of the food or drink. That is, the ghrelin secretion promoter of this invention may be added to the raw material of food / beverage products, may be added to the food / beverage products in the middle of manufacture, and may be added to the manufactured food / beverage products. The seasoning or active ingredient of the present invention may be added once, or may be added in two or more times. The addition amount of the ghrelin secretion promoter of the present invention can be appropriately set according to various conditions such as the type of active ingredient, the concentration of the active ingredient in the ghrelin secretion promoter of the present invention, the intake mode of food and drink.
本発明の飲食品の摂取量は、有効成分の含有量、用法、年齢、性別、症状の程度等の諸条件に応じて適宜設定することができる。上述の本発明のグレリン分泌促進剤の投与量についての記載は、本発明の飲食品の摂取量にも準用できる。 The intake of the food / beverage products of the present invention can be appropriately set according to various conditions such as the content of active ingredients, usage, age, sex, and symptom level. The above description of the dosage of the ghrelin secretion promoter of the present invention can be applied mutatis mutandis to the intake of food and drink of the present invention.
本発明は以下の実施例によって、更に具体的に説明されるが、これらはいかなる意味でも本発明を限定する意図と解してはならない。 The invention is further illustrated by the following examples, which should not be construed as limiting the invention in any way.
実施例１．アサツキからのグレリン分泌促進成分の抽出
フリーズドライあさつき(2880g)（GABAN株式会社）にメタノールを加えて一晩抽出した。抽出液を減圧留去し得られたメタノール抽出液(1110g)にノルマルヘキサン(6L×5)を加えヘキサン画分、メタノール画分、残渣を得た。得られたメタノール画分(908.75g)のうち、500gをダイヤイオンHP20充填ガラスカラムに通して固相抽出した。蒸留水で脱塩した後、含水メタノール（60％メタノール、100％メタノール、100％エタノール）で順次溶出させた。続いて100％メタノール画分をSep-Pak C18 plusカートリッジカラムに通し、含水アセトニトリル（40%アセトニトリル、60%アセトニトリル、100%アセトニトリル）で順次溶出させた。60%アセトニトリル溶出画分を、HPLC(Inertsil ODS-3, 50×250mm)を用いてアセトニトリル-H2O (60：40→10：0)の濃度勾配の混液で溶出した。ラット胃内分泌細胞を用いた評価系（後述）でグレリン分泌促進活性の見られた画分を回収し、リサイクルループ付きHPLC(Inertsil ODS-3, 20×250mm, 55%アセトニトリル)で分離精製し、化合物１(140mg)および化合物２(90mg)を得た。抽出スキームを図１に示す。
Example 1. Extraction of ghrelin secretion-promoting component from Asatsuki Freeze-dried Asatsuki (2880 g) (GABAN Corporation) was added overnight with methanol. Normal hexane (6 L × 5) was added to the methanol extract (1110 g) obtained by evaporating the extract under reduced pressure to obtain a hexane fraction, a methanol fraction, and a residue. Of the obtained methanol fraction (908.75 g), 500 g was passed through a Diaion HP20-packed glass column for solid phase extraction. After desalting with distilled water, elution was sequentially performed with hydrous methanol (60% methanol, 100% methanol, 100% ethanol). Subsequently, the 100% methanol fraction was passed through a Sep-Pak C18 plus cartridge column and eluted sequentially with hydrous acetonitrile (40% acetonitrile, 60% acetonitrile, 100% acetonitrile). The 60% acetonitrile elution fraction was eluted with a mixed solution having a concentration gradient of acetonitrile-H 2 O (60: 40 → 10: 0) using HPLC (Inertsil ODS-3, 50 × 250 mm). Fractions with ghrelin secretion promoting activity were collected in an evaluation system using rat gastric endocrine cells (described later), separated and purified by HPLC with a recycling loop (Inertsil ODS-3, 20 × 250mm, 55% acetonitrile), Compound 1 (140 mg) and compound 2 (90 mg) were obtained. The extraction scheme is shown in FIG.
化合物１は、MS、NMRなどの物理学的データの解析によりパリサポニンｂ（Parisaponin
b；Pb）と同定した。化合物２は、MS、NMRなどの物理学的データの解析および標準品と
の比較によりジオスシン（Dioscin）と同定した。ジオスシン標品および化合物２のＨＰ
ＣＬでの溶出クロマトグラムを図２に示す。化合物１（Ｐｂ）および化合物２（ジオスシン）の構造式を図３に示す。
Compound 1 is obtained by analyzing saponin b (Parisaponin b) by analyzing physical data such as MS and NMR.
b; identified as Pb). Compound 2 was identified as dioscin by analysis of physical data such as MS and NMR and comparison with a standard product. Dioscin preparation and Compound 2 HP
The elution chromatogram at CL is shown in FIG. The structural formulas of Compound 1 (Pb) and Compound 2 (dioscin) are shown in FIG.
化合物１のMSデータおよびNMRデータは以下の通りである。
（１）MSデータ
m/z 1015.5139(calculated for C51H83O20)[M+H]+
（２）NMRデータ１
1H NMR(600MHz, pyridine-d5)
0.66(3H,d,J=5.6Hz,H-27), 0.80(3H,s,H-18), 0.86(1H,dt,J=5.1,11.4Hz,H-9), 0.94(1H,dt,J=3.6,13.6Hz,H-1), 1.02(3H,s,H-19), 1.04(1H,m,H-14), 1.06(1H,m,H-12), 1.10(3H,d, J=7.0Hz,H-21), 1.40(1H,m,H-11), 1.41(2H,m,H-11,15), 1.48(1H,m,H-7), 1.56(2H,m,H-8,23), 1.57(3H,Rha-II-6), 1.58(3H,m,H-24,25), 1.59(3H, Rha-III-6), 1.63(1H,m,H-23), 1.65(1H,m,H-12), 1.68(1H,m,H-1), 1.74(3H,d,J=6.3Hz,Rha-I-6), 1.76(1H,m,H-17), 1.83(1H,m,H-2), 1.84(1H,m,H-7), 1.92(1H,m,H-20), 2.01(1H,m,H-15), 2.07(1H,m,H-2), 2.71(1H,dq,J=2.2,12.2Hz,H-4), 2.77(1H,dd,J=3.6,12.8Hz,H-4), 3.47(1H,t,J=10.5Hz,H-26), 3.55(1H,m,H-26), 3.57(1H,m,Glu-I-5), 3.85(1H,m,H-3), 4.01(1H,dd,J=2.9,12.3Hz,Glu-I-6), 4.17(1H,m,Glu-I-6), 4.18(1H,m,Glu-I-2), 4.19(1H,m,Glu-I-3), 4.27(1H,t,J=9.1Hz,Rha-III-4), 4.33(1H,m,Rha-III-5), 4.34(1H,t,J=9.1Hz,Rha-I-4), 4.38(1H,m,Glu-I-4), 4.41(1H,m,Rha-II-4), 4.47(1H,dd,J=3.3,9.0Hz,Rha-III-3), 4.51(1H,m,H-16), 4.52(2H,m,Rha-II-2,Rha-II-3), 4.61(1H,dd,J=3.4,9.3Hz,Rha-I-3), 4.82(1H,dd,J=1.4,3.3Hz,Rha-I-2), 4.87(1H,t,J=1.6Hz,Rha-III-2), 4.91(1H,m,Glu-I-1), 4.92(1H,m,Rha-II-5), 4.93(1H,m,Rha-I-5), 5.29(1H,d,J=4.7Hz,H-6), 5.81(1H,s,Rha-II-1), 6.25(1H,s,Rha-III-1), 6.37(1H,s,Rha-I-1)
（３）NMRデータ２
13C NMR(150MHz, pyridine-d5)
15.0(C-21), 16.3(C-18), 17.2(C-27), 18.3(Rha-III-6), 18.6(Rha-I-6), 18.8(Rha-II-6), 19.3(C-19), 21.0(C-11), 29.2(C-24), 30.1(C-2), 30.5(C-25), 31.6(C-8), 31.7(C-23), 32.1(C-15), 32.2(C-7), 37.0(C-10), 37.4(C-1), 38.9(C-4), 39.8(C-12), 40.4(C-13), 41.9(C-20), 50.2(C-9), 56.5(C-14), 61.1(Glu-I-6), 62.8(C-17), 66.8(C-26), 68.2(Rha-II-5), 69.5(Rha-I-5), 70.3(Rha-III-5), 72.4(Rha-I-2), 72.5(Rha-III-2), 72.8(Rha-II-2), 72.8(Rha-I-3), 72.8(Rha-III-3), 73.2(Rha-II-3), 73.9(Rha-III-4), 74.0(Rha-I-4), 76.9(Glu-I-5), 77.6(Glu-I-4), 77.6(Glu-I-3), 77.9(Glu-I-2), 78.0(C-3), 80.3(Rha-II-4), 81.0(C-16), 100.2(Glu-I-1), 102.1(Rha-I-1), 102.1(Rha-II-1), 103.2(Rha-III-1), 109.2(C-22), 121.7(C-6), 140.7(C-5)
The MS data and NMR data of Compound 1 are as follows.
(1) MS data
m / z 1015.5139 (calculated for C 51 H 83 O 20 ) [M + H] +
(2) NMR data 1
1 H NMR (600MHz, pyridine-d5)
0.66 (3H, d, J = 5.6Hz, H-27), 0.80 (3H, s, H-18), 0.86 (1H, dt, J = 5.1,11.4Hz, H-9), 0.94 (1H, dt , J = 3.6,13.6Hz, H-1), 1.02 (3H, s, H-19), 1.04 (1H, m, H-14), 1.06 (1H, m, H-12), 1.10 (3H, d, J = 7.0Hz, H-21), 1.40 (1H, m, H-11), 1.41 (2H, m, H-11,15), 1.48 (1H, m, H-7), 1.56 (2H , m, H-8,23), 1.57 (3H, Rha-II-6), 1.58 (3H, m, H-24,25), 1.59 (3H, Rha-III-6), 1.63 (1H, m , H-23), 1.65 (1H, m, H-12), 1.68 (1H, m, H-1), 1.74 (3H, d, J = 6.3Hz, Rha-I-6), 1.76 (1H, m, H-17), 1.83 (1H, m, H-2), 1.84 (1H, m, H-7), 1.92 (1H, m, H-20), 2.01 (1H, m, H-15) , 2.07 (1H, m, H-2), 2.71 (1H, dq, J = 2.2,12.2Hz, H-4), 2.77 (1H, dd, J = 3.6,12.8Hz, H-4), 3.47 ( 1H, t, J = 10.5Hz, H-26), 3.55 (1H, m, H-26), 3.57 (1H, m, Glu-I-5), 3.85 (1H, m, H-3), 4.01 (1H, dd, J = 2.9,12.3Hz, Glu-I-6), 4.17 (1H, m, Glu-I-6), 4.18 (1H, m, Glu-I-2), 4.19 (1H, m , Glu-I-3), 4.27 (1H, t, J = 9.1Hz, Rha-III-4), 4.33 (1H, m, Rha-III-5), 4.34 (1H, t, J = 9.1Hz, Rha-I-4), 4.38 (1H, m, Glu-I-4), 4.41 (1H, m, Rha-II-4), 4.47 (1H, dd, J = 3.3,9.0Hz, Rha-III- 3), 4.51 (1H, m, H-16), 4.52 (2H, m, Rha-II-2, Rha-II-3), 4.61 (1H, dd, J = 3.4,9.3Hz, Rha-I- 3), 4.82 (1H, dd, J = 1.4,3.3Hz, Rha-I-2), 4.87 (1H, t, J = 1.6Hz, Rha-III-2), 4.91 (1H, m, Glu-I-1), 4.92 (1H, m, Rha-II-5), 4.93 (1H, m, Rha-I-5) , 5.29 (1H, d, J = 4.7Hz, H-6), 5.81 (1H, s, Rha-II-1), 6.25 (1H, s, Rha-III-1), 6.37 (1H, s, Rha -I-1)
(3) NMR data 2
13 C NMR (150MHz, pyridine-d5)
15.0 (C-21), 16.3 (C-18), 17.2 (C-27), 18.3 (Rha-III-6), 18.6 (Rha-I-6), 18.8 (Rha-II-6), 19.3 ( C-19), 21.0 (C-11), 29.2 (C-24), 30.1 (C-2), 30.5 (C-25), 31.6 (C-8), 31.7 (C-23), 32.1 (C -15), 32.2 (C-7), 37.0 (C-10), 37.4 (C-1), 38.9 (C-4), 39.8 (C-12), 40.4 (C-13), 41.9 (C- 20), 50.2 (C-9), 56.5 (C-14), 61.1 (Glu-I-6), 62.8 (C-17), 66.8 (C-26), 68.2 (Rha-II-5), 69.5 (Rha-I-5), 70.3 (Rha-III-5), 72.4 (Rha-I-2), 72.5 (Rha-III-2), 72.8 (Rha-II-2), 72.8 (Rha-I- 3), 72.8 (Rha-III-3), 73.2 (Rha-II-3), 73.9 (Rha-III-4), 74.0 (Rha-I-4), 76.9 (Glu-I-5), 77.6 ( Glu-I-4), 77.6 (Glu-I-3), 77.9 (Glu-I-2), 78.0 (C-3), 80.3 (Rha-II-4), 81.0 (C-16), 100.2 ( Glu-I-1), 102.1 (Rha-I-1), 102.1 (Rha-II-1), 103.2 (Rha-III-1), 109.2 (C-22), 121.7 (C-6), 140.7 ( C-5)
化合物２のMSデータおよびNMRデータは以下の通りである。
（１）MSデータ
m/z 869.4542(calculated for C45H73O16)[M+H]+
（２）NMRデータ１
1H NMR(600MHz, pyridine-d5)
0.67(3H,d,H=5.6Hz,H-27), 0.81(3H,s,H-18), 0.86(1H,m,H-9), 0.98(1H,dq,J=3.6,12.5Hz,H-1), 1.03(3H,s,H-19), 1.04(1H,m,H-14), 1.06(1H,m,H-12), 1.11(3H,d,J=6.9Hz,H-21), 1.36(1H,m,H-11), 1.42(1H,m,H-11), 1.43(1H,m,H-15), 1.49(2H,m,H-7,H-8), 1.56(3H,m,H-24,H-25), 1.61(3H,d,J=6.2Hz,Rha-II-6), 1.64(2H,m,H-23), 1.66(1H,m,H-12), 1.71(1H,m,H-1), 1.75(3H,d,J=6.3Hz,Rha-I-6), 1.78(1H,m,H-17), 1.83(1H,m,H-7), 1.85(1H,m,H-2), 1.93(1H,t,J=6.8Hz,H-20), 2.02(1H,m,H-15), 2.05(1H,m,H-2), 2.72(1H,br q,J=11.9Hz,H-4), 2.78(1H,dd,J=3.9,13.2Hz,H-4), 3.48(1H,t,J=10.6Hz,H-26), 3.56(1H,dd,J=2.8,8.9Hz,H-26), 3.62(1H,br d,J=8.9Hz,Glu-I-5), 3.86(1H,m,H-3), 4.07(1H,dd,J=3.3,12.2Hz,Glu-I-6), 4.19(1H,m,Glu-I-6), 4.21(2H,m,Glu-I-2, Glu-I-3), 4.32(1H,t,J=9.4Hz,Rha-II-4), 4.35(1H,t,J=9.4Hz,Rha-I-4), 4.38(1H,m,Glu-I-4), 4.52(1H,m,H-16), 4.53(1H,m,Rha-II-3), 4.61(1H,dd,J=3.4,9.3Hz,Rha-I-3), 4.67(1H,dd,J=1.5,3.2Hz,Rha-II-2), 4.82(1H,dd,J=1.4,3.3Hz,Rha-I-2), 4.92(1H,m,Rha-II-5), 4.94(1H,m,Glu-I-1), 4.95(1H,m,Rha-I-5), 5.29(1H,d,J=5.0Hz,H-6), 5.85(1H,s,Rha-II-1), 6.39(1H,s,Rha-I-1)
（３）NMRデータ２
13C NMR(150MHz, pyridine-d5)
15.0(C-21), 16.3(C-18), 17.3(C-27), 18.5(Rha-II-6), 18.6(Rha-I-6), 19.4(C-19), 21.1(C-11), 29.2(C-24), 30.1(C-2), 30.6(C-25), 31.7(C-8), 31.8(C-23), 32.2(C-15), 32.3(C-7), 37.1(C-10), 37.5(C-1), 38.9(C-4), 39.8(C-12), 40.4(C-13), 41.9(C-20), 50.3(C-9), 56.6(C-14), 61.2(Glu-I-6), 62.9(C-17), 66.8(C-26), 69.5(Rha-II-5), 70.4(Rha-I-5), 72.5(Rha-I-2), 72.5(Rha-II-2), 72.7(Rha-II-3), 72.8(Rha-I-3), 73.9(Rha-II-4), 74.1(Rha-I-4), 76.9(Glu-I-5), 77.7(Glu-I-3), 77.9(Glu-I-2), 78.0(C-3), 78.5(Glu-I-4), 81.1(C-16), 100.2(Glu-I-1), 102.0(Rha-I-1), 102.9(Rha-II-1), 109.2(C-22), 121.8(C-6), 140.8(C-5)
The MS data and NMR data of Compound 2 are as follows.
(1) MS data
m / z 869.4542 (calculated for C 45 H 73 O 16 ) [M + H] +
(2) NMR data 1
1 H NMR (600MHz, pyridine-d5)
0.67 (3H, d, H = 5.6Hz, H-27), 0.81 (3H, s, H-18), 0.86 (1H, m, H-9), 0.98 (1H, dq, J = 3.6,12.5Hz , H-1), 1.03 (3H, s, H-19), 1.04 (1H, m, H-14), 1.06 (1H, m, H-12), 1.11 (3H, d, J = 6.9Hz, H-21), 1.36 (1H, m, H-11), 1.42 (1H, m, H-11), 1.43 (1H, m, H-15), 1.49 (2H, m, H-7, H- 8), 1.56 (3H, m, H-24, H-25), 1.61 (3H, d, J = 6.2Hz, Rha-II-6), 1.64 (2H, m, H-23), 1.66 (1H , m, H-12), 1.71 (1H, m, H-1), 1.75 (3H, d, J = 6.3Hz, Rha-I-6), 1.78 (1H, m, H-17), 1.83 ( 1H, m, H-7), 1.85 (1H, m, H-2), 1.93 (1H, t, J = 6.8Hz, H-20), 2.02 (1H, m, H-15), 2.05 (1H , m, H-2), 2.72 (1H, br q, J = 11.9Hz, H-4), 2.78 (1H, dd, J = 3.9,13.2Hz, H-4), 3.48 (1H, t, J = 10.6Hz, H-26), 3.56 (1H, dd, J = 2.8,8.9Hz, H-26), 3.62 (1H, br d, J = 8.9Hz, Glu-I-5), 3.86 (1H, m, H-3), 4.07 (1H, dd, J = 3.3,12.2Hz, Glu-I-6), 4.19 (1H, m, Glu-I-6), 4.21 (2H, m, Glu-I- 2, Glu-I-3), 4.32 (1H, t, J = 9.4Hz, Rha-II-4), 4.35 (1H, t, J = 9.4Hz, Rha-I-4), 4.38 (1H, m , Glu-I-4), 4.52 (1H, m, H-16), 4.53 (1H, m, Rha-II-3), 4.61 (1H, dd, J = 3.4,9.3Hz, Rha-I-3 ), 4.67 (1H, dd, J = 1.5,3.2Hz, Rha-II-2), 4.82 (1H, dd, J = 1.4,3.3Hz, Rha-I-2), 4.92 (1H, m, Rha- II-5), 4.94 (1H, m, Glu-I-1), 4.95 (1H, m, Rha-I-5), 5.29 (1H, d , J = 5.0Hz, H-6), 5.85 (1H, s, Rha-II-1), 6.39 (1H, s, Rha-I-1)
(3) NMR data 2
13 C NMR (150MHz, pyridine-d5)
15.0 (C-21), 16.3 (C-18), 17.3 (C-27), 18.5 (Rha-II-6), 18.6 (Rha-I-6), 19.4 (C-19), 21.1 (C- 11), 29.2 (C-24), 30.1 (C-2), 30.6 (C-25), 31.7 (C-8), 31.8 (C-23), 32.2 (C-15), 32.3 (C-7 ), 37.1 (C-10), 37.5 (C-1), 38.9 (C-4), 39.8 (C-12), 40.4 (C-13), 41.9 (C-20), 50.3 (C-9) , 56.6 (C-14), 61.2 (Glu-I-6), 62.9 (C-17), 66.8 (C-26), 69.5 (Rha-II-5), 70.4 (Rha-I-5), 72.5 (Rha-I-2), 72.5 (Rha-II-2), 72.7 (Rha-II-3), 72.8 (Rha-I-3), 73.9 (Rha-II-4), 74.1 (Rha-I- 4), 76.9 (Glu-I-5), 77.7 (Glu-I-3), 77.9 (Glu-I-2), 78.0 (C-3), 78.5 (Glu-I-4), 81.1 (C- 16), 100.2 (Glu-I-1), 102.0 (Rha-I-1), 102.9 (Rha-II-1), 109.2 (C-22), 121.8 (C-6), 140.8 (C-5)
グレリン分泌促進成分の抽出に用いた各種溶媒、クロマトグラフィー用担体、およびHPLC用カラムの詳細は以下の通りである。
メタノール(MeOH)：関東化学社製、一級
ノルマルヘキサン(Hexane)：関東化学社製、一級
エタノール(EtOH)：関東化学社製、特級
アセトニトリル(CH3CN)：関東化学社製、高速液体クロマトグラフィー用
ダイヤイオンHP-20：三菱化学社製
Sep-Pak C18 plus：waters社製
HPLC用カラム：GLサイエンス社製、Inertsil ODS-3 (50×250mm)
HPLC用カラム：GLサイエンス社製、Inertsil ODS-3 (20×250mm)
Corona （登録商標） CAD （登録商標）用カラム：GLサイエンス社製、Inertsil ODS-3 (4.6×250mm)
Details of the various solvents, chromatographic carriers, and HPLC columns used for extraction of the ghrelin secretion promoting component are as follows.
Methanol (MeOH): manufactured by Kanto Chemical Co., Inc., primary normal hexane (Hexane): manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd., primary ethanol (EtOH): manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd., special grade acetonitrile (CH 3 CN): manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd., high performance liquid chromatography Diaion HP-20 for Mitsubishi Chemical
Sep-Pak C18 plus: made by waters
HPLC column: GL Science, Inertsil ODS-3 (50 x 250 mm)
HPLC column: GL Science, Inertsil ODS-3 (20 × 250mm)
Corona (registered trademark) CAD (registered trademark) column: GL Sciences, Inertsil ODS-3 (4.6 x 250 mm)
グレリン分泌促進成分の同定に用いた測定機器の詳細は以下の通りである。
LC-MS；SYNAPT MS, waters社製
NMR；AVANCE600, Bruker社製
Corona （登録商標） CAD （登録商標）;ESA社製
The details of the measuring instrument used to identify the ghrelin secretion promoting component are as follows.
LC-MS; SYNAPT MS, manufactured by waters
NMR; AVANCE600, Bruker
Corona (registered trademark) CAD (registered trademark); made by ESA
なお、核磁気共鳴 (NMR)スペクトルにおいて、化学シフトδは百万分の一 (ppm)で表示し、略語はそれぞれ次の意味を有する： s：シングレット； d：ダブレット； dd：ダブ
ルダブレット； t：トリプレット； dt：ダブルトリプレット； q：クァルテット； dq：ダブルクァルテット； m：マルチプレット； br：ブロード
In the nuclear magnetic resonance (NMR) spectrum, chemical shift δ is expressed in parts per million (ppm), and abbreviations have the following meanings: s: singlet; d: doublet; dd: double doublet; t : Triplet; dt: double triplet; q: quartet; dq: double quartet; m: multiplet; br: broad
グレリン分泌促進成分の抽出および同定における参考文献は以下の通りである。
T. Nohara et al., Chem. Pharm. Bull., 1973, 21, 1240
M. Miyamura et al., Chem. Pharm. Bull., 1982, 30, 712
Sarah C. et al., J. Agric. Food. Chem., 1993, 41, 267
N. Sata et al., Biosci. Biotechnol.Biochem., 1998, 62, 1904
Zhao Wang et al., Biol.Pharm.Bull.,2001, 24, 159
References in the extraction and identification of ghrelin secretion promoting components are as follows.
T. Nohara et al., Chem. Pharm. Bull., 1973, 21, 1240
M. Miyamura et al., Chem. Pharm. Bull., 1982, 30, 712
Sarah C. et al., J. Agric. Food. Chem., 1993, 41, 267
N. Sata et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 1998, 62, 1904
Zhao Wang et al., Biol. Pharm. Bull., 2001, 24, 159
実施例２．ラット胃内分泌細胞を用いたグレリン分泌促進作用の評価
（１）サンプルの調製
実施例１で得られたジオスシン、実施例１で得られたパリサポニンｂ（フォルマサニンＣ）、および市販のジオスゲニン（シグマ社製）を、それぞれジメチルスルホシキド(DMSO)で一定濃度に調製し、サンプルとした。なお、ジオスゲニンはジオスシンおよびフォルマサニンＣのアグリコン（非糖成分）に相当し、すなわち、ジオスシンおよびフォルマサニンＣはいずれもジオスゲニンの配糖体である。
Example 2 Evaluation of Ghrelin Secretion Promoting Action Using Rat Gastric Endocrine Cells (1) Sample Preparation Dioscin obtained in Example 1, parisaponin b (formasanin C) obtained in Example 1, and commercially available diosgenin (Sigma) Were prepared to a constant concentration with dimethyl sulfoxide (DMSO), respectively, and used as samples. Note that diosgenin corresponds to aglycone (non-sugar component) of dioscin and formasanin C, that is, dioscin and formasanin C are both glycosides of diosgenin.
（２）評価法
7〜11週齢雄性SDラットを安楽死後、胃を摘出し、プロテアーゼ処理により胃体部を構
成する細胞を分離した。エルトリエーターシステム（日立工機）を用いてこれらの細胞をサイズおよび密度別に分取し、回転数2400rpm、流速25、30ml/minで得られる細胞画分を
培地(advanced DMEM/F-12)に懸濁後、37℃、5%CO2にて静置した。数時間後、細胞を回収
し、緩衝液(147mM NaCl、25mM NaHCO3、5mM KCl、1.3mM MgSO4、1.5mM CaCl2、15mM HEPES、20ｍM Glucose)にて懸濁した後、96ウェルプレートに1ウェルあたり1x105個の割合で播種した。上記調製したサンプルで細胞を60分間処理した後、上清を回収し、上清中のアシルグレリン（活性型グレリン）濃度をELISAキット（SCETI社）により測定した。各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度を、対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１として相対値で示した。なお、実施例１における各溶出画分のグレリン分泌促進作用の測定も同様に行っている。
(2) Evaluation method
After euthanizing 7-11 week old male SD rats, the stomach was removed and the cells constituting the gastric body were separated by protease treatment. These cells are sorted according to size and density using an L-triator system (Hitachi Koki), and the cell fraction obtained at a rotation speed of 2400 rpm, a flow rate of 25 and 30 ml / min is added to the medium (advanced DMEM / F-12). After suspension, the mixture was allowed to stand at 37 ° C. and 5% CO 2 . After several hours, the cells were collected and suspended in a buffer solution (147 mM NaCl, 25 mM NaHCO 3 , 5 mM KCl, 1.3 mM MgSO 4 , 1.5 mM CaCl 2 , 15 mM HEPES, 20 mM Glucose), and then suspended in a 96-well plate. 1 × 10 5 seeds were seeded per well. After treating the cells with the prepared sample for 60 minutes, the supernatant was collected, and the acyl ghrelin (active ghrelin) concentration in the supernatant was measured by ELISA kit (SCETI). The acyl ghrelin concentration of the group treated with each sample is shown as a relative value with the acyl ghrelin concentration of the control group (0.1% DMSO treatment group) being 1. In addition, the measurement of the ghrelin secretion promoting action of each eluted fraction in Example 1 is similarly performed.
（３）結果
終濃度12.5 μMのジオスゲニン、ジオスシン、フォルマサニンCでそれぞれ処理したと
ころ、ジオスゲニン処理群ではアシルグレリン濃度の上昇はほとんど認められなかったが、ジオスゲニン配糖体であるジオスシン処理群およびフォルマサニンC処理群においてアシルグレリン濃度の顕著な増加が認められた（図４）。また、ジオスシンおよびフォルマサニンCは濃度依存的なグレリン分泌促進作用を示し、一定濃度を超えるとその作用は減弱した（図５、６）。
(3) Results When treated with diosgenin, dioscin, and formasanin C at a final concentration of 12.5 μM, respectively, the increase in acyl ghrelin concentration was hardly observed in the diosgenin-treated group, but the diosgenin glycoside dioscin-treated group and formasanin C A significant increase in acyl ghrelin concentration was observed in the treated group (FIG. 4). In addition, dioscin and formasanin C showed a concentration-dependent ghrelin secretion promoting action, and when the concentration exceeded a certain level, the action was attenuated (FIGS. 5 and 6).
（４）
さらに、宝ヘルスケア社より発売されている「クーガイモ」にはヤムイモ由来のジオスゲニン配糖体ヤムスゲニン（登録商標）が含まれていることから、本商品をメタノール抽出することにより得られたサンプルを上記評価系に供し、グレリン分泌促進作用を測定した。その結果、図４に示すとおり、アシルグレリン濃度の顕著な増加が認められた。
(4)
Furthermore, “Kugaimo” released by Takara Healthcare, Inc. contains the yams-derived diosgenin glycoside Yamsgenin (registered trademark), so the sample obtained by extracting this product with methanol is the above It used for the evaluation system and measured the ghrelin secretion promotion effect. As a result, as shown in FIG. 4, a significant increase in the acyl ghrelin concentration was observed.
実施例３．各種ステロイドサポニン類によるグレリン分泌促進作用の評価
下記表１に記載のステロイドサポニン類（compound-1〜compound-11）を、文献（M.Yoshikawa et al., Chem. Pharm. Bull. 55(2) 308-316 (2007)）記載の方法に準じ、サトウヤシ（Borassus flabellifer）の雄花のメタノール抽出物から、分画、精製により得た。得られたステロイドサポニン類を、それぞれジメチルスルホシキド(DMSO)で２μＭおよび１０μＭに調製し、各サンプルとした。
Example 3 Evaluation of ghrelin secretion promoting action by various steroid saponins The steroid saponins (compound-1 to compound-11) described in Table 1 below are referred to the literature (M. Yoshikawa et al., Chem. Pharm. Bull. 55 (2) 308-316 (2007)), it was obtained by fractionation and purification from a methanol extract of male flowers of sugar palm (Borassus flabellifer). The obtained steroid saponins were prepared to 2 μM and 10 μM with dimethyl sulfoxide (DMSO), respectively, and used as samples.
各サンプルのグレリン分泌促進作用を、実施例２と同様の手法により測定した。 The ghrelin secretion promoting action of each sample was measured by the same method as in Example 2.
溶媒対照群（0.1%DMSO処理群）のアシルグレリン濃度を１とした場合の、各サンプルで処理した群のアシルグレリン濃度の比率（ratio）で、各サンプルのグレリン分泌促進活
性の有無を判定した。比率（ratio）≧２．０の場合に、グレリン分泌促進活性があると
判定した。結果、サンプル（compound-1〜compound-11）の内、フリー体であるcompound-１及び２には活性が認められなかったが、配糖体であるcompound-３〜１１の９種にグレ
リン分泌促進活性が認められた。結果を図８に示す。
When the acyl ghrelin concentration of the solvent control group (0.1% DMSO treatment group) is 1, the ratio of the acyl ghrelin concentration of the group treated with each sample was determined for the presence or absence of ghrelin secretion promoting activity in each sample. . When the ratio (ratio) ≧ 2.0, it was determined that there was ghrelin secretion promoting activity. As a result, among the samples (compound-1 to compound-11), no activity was observed in free compounds 1 and 2, but ghrelin was secreted by 9 glycosides, compounds 3 to 11. Promoting activity was observed. The results are shown in FIG.
このように、各種ステロイドサポニン類について、優れたグレリン分泌を促進する活性が確認された。したがって、これらのステロイドサポニン類は、グレリン分泌促進剤の有効成分として有用であることが示された。 As described above, various steroid saponins were confirmed to have excellent activity for promoting ghrelin secretion. Therefore, these steroid saponins have been shown to be useful as active ingredients of ghrelin secretion promoters.
実施例４．ジオスシン経口投与によるグレリン分泌促進作用の評価
（１）サンプルの調製
ジオスシン（Carbosynth社：Dioscorea zingiberensisの葉由来）を、10 mg/kgおよび45 mg/kgの投与量となるようそれぞれ量りとり、乳鉢上ですり混ぜながら0.5 % CMC-Na（
ナカライテスク：carboxymethylcellulose）を滴下し、ジオスシン懸濁液を調製した。
Example 4 Evaluation of ghrelin secretion promoting effect by oral administration of dioscin (1) Sample preparation Weighed dioscin (from Carbosynth: Dioscorea zingiberensis leaves) to a dosage of 10 mg / kg and 45 mg / kg, respectively. Mix with 0.5% CMC-Na (
Nacalai Tesque: carboxymethylcellulose) was added dropwise to prepare a dioscin suspension.
（２）評価法
被検動物としては、雄性SDラット（７週齢、7:00-明期／19:00-暗期の明暗サイクル、
飲料水は水道水、餌はAIN93G粉餌を与え、自由飲水、自由摂食の条件下でブラケットケージにて飼育したもの）を、明期開始時（7:00）から試験終了まで絶食して用いた。
(2) Evaluation method As test animals, male SD rats (7 weeks old, 7: 00-light period / 19: 00-dark period light-dark cycle,
The drinking water is tap water, the food is AIN93G powdered food, and it is kept in a bracket cage under the conditions of free drinking and free feeding) and fasted from the beginning of the light period (7:00) to the end of the test. Using.
調製した各ジオスシン懸濁液を経口投与ゾンデ付き5 mLシリンジに入れ、10 mL/kg量（ジオスシン量として、それぞれ10 mg/kgおよび45 mg/kg）をラットに経口投与した。また、別途、溶媒対照群として、0.5% CMC-Naを10 mL/kg量でラットに経口投与した。採血は、投与前と投与0.5, 2, 4, 6, 8, 10時間後に麻酔下で実施した。採血開始時間3分前に、ラットをイソフルラン（マイラン製薬）による吸入麻酔にかけ、右眼眼窩静脈叢よりヘパリン処理されたキャピラリーチューブ（Fisherbrand：22-362-566）を用いて採血を行なった。血液は、ヘパリン（持田製薬：ノボ・ヘパリン注1万単位/10 mL）10 μLが入った1.5 mLチューブに採取し、よく混和した。次いで、混合物300 μLをピペットで取り、アプロチニン（sigma：A6279）30 μLと0.5 M EDTA 3 μLをあらかじめ添加しておいた1.5 mLチューブに入れて、転倒混和した後、7000 r.p.m.、4 ℃、2分間で遠心し、血漿を分離した。得られた血漿は、1 mLチューブに採取した。血漿30 μLをピペットで取り、1N HCl 3 μL（血漿に対して1/10量）を添加した0.5 μLチューブに入れて、よく混和し、グレリン濃度測定用血漿とした。 Each of the prepared dioscin suspensions was placed in a 5 mL syringe with an orally administered sonde, and 10 mL / kg amounts (10 mg / kg and 45 mg / kg as dioscin amounts, respectively) were orally administered to rats. Separately, as a solvent control group, 0.5% CMC-Na was orally administered to rats in an amount of 10 mL / kg. Blood samples were collected under anesthesia before administration and 0.5, 2, 4, 6, 8, and 10 hours after administration. Three minutes before the start of blood collection, rats were subjected to inhalation anesthesia with isoflurane (Mylan Pharmaceutical), and blood was collected using a capillary tube (Fisherbrand: 22-362-566) treated with heparin from the right orbital orbital plexus. The blood was collected in a 1.5 mL tube containing 10 μL of heparin (Mochida Pharmaceutical: Novo-Heparin injection 10,000 units / 10 mL) and mixed well. Next, 300 μL of the mixture was pipetted, placed in a 1.5 mL tube to which 30 μL of aprotinin (sigma: A6279) and 3 μL of 0.5 M EDTA had been added, and mixed by inversion, followed by 7000 rpm, 4 ° C., 2 ° C. The plasma was separated by centrifugation for minutes. The obtained plasma was collected in a 1 mL tube. 30 μL of plasma was pipetted and placed in a 0.5 μL tube to which 3 μL of 1N HCl (1/10 volume relative to plasma) was added and mixed well to obtain plasma for measuring ghrelin concentration.
グレリン濃度としては、活性型グレリンであるアシルグレリンの濃度を測定した。血漿中のアシルグレリン濃度は、ELISAキット（SCETI社：Active Ghrelin ELISA kit,cat#97751）により測定した。血漿は、アッセイバッファーを用いて5倍希釈して測定に供し、希釈倍率で補正してアシルグレリン濃度を算出した。 As the ghrelin concentration, the concentration of acyl ghrelin, which is an active ghrelin, was measured. The concentration of acyl ghrelin in plasma was measured using an ELISA kit (SCETI: Active Ghrelin ELISA kit, cat # 97751). Plasma was diluted 5 times with assay buffer and used for measurement, and the acyl ghrelin concentration was calculated by correcting the dilution factor.
（３）結果
その結果、ジオスシン10mg/kg投与群およびジオスシン45mg/kg投与群共に、投与30分後に血中グレリン濃度の上昇が認められた（図９）。また、ジオスシン45mg/kg投与群は、
投与2時間後でも、溶媒対照群と比較して高い血中グレリン濃度を示した（図９）。
(3) Results As a result, an increase in blood ghrelin concentration was observed 30 minutes after administration in both the dioscin 10 mg / kg administration group and the dioscin 45 mg / kg administration group (FIG. 9). In addition, dioscin 45mg / kg administration group,
Even after 2 hours from the administration, the blood ghrelin concentration was higher than that in the solvent control group (FIG. 9).
実施例５．ジオスシン経口投与によるグレリン分泌促進作用の評価
（１）サンプルの調製
サンプル調製溶媒として、大豆油：Tween 80：DMSO：D.W.（7：11：1：1）を混和した
溶液を用いた。大豆油に、Tween80および水を、容量比（大豆油：Tween 80：D.W.）が7：11：1となるよう加え、激しく転倒混和した後、超音波破砕装置（TAITEC：VP-5S）を用いて溶液が白濁するまで乳化させた。ジオスシン（Carbosynth社：Dioscorea zingiberensisの葉由来）を、10 mg/kgおよび45 mg/kgの投与量となるようそれぞれ量りとり、DMSOで溶解後、乳化した上記溶媒に1の割合で加え、ボルテックスミキサーで激しく混和し、ジオスシン溶液を調製した。また、乳化した上記溶媒にDMSOを1の割合で加えたものを対照溶媒とした。
Example 5 FIG. Evaluation of ghrelin secretion promoting action by oral administration of dioscin (1) Preparation of sample As a sample preparation solvent, a solution in which soybean oil: Tween 80: DMSO: DW (7: 11: 1: 1) was mixed was used. Add Tween 80 and water to soybean oil so that the volume ratio (soybean oil: Tween 80: DW) is 7: 11: 1, mix vigorously by inversion, and then use an ultrasonic crusher (TAITEC: VP-5S) The solution was emulsified until it became cloudy. Weigh Dioscine (Carbosynth: Dioscorea zingiberensis leaves) to a dosage of 10 mg / kg and 45 mg / kg, dissolve in DMSO, add to the above emulsified solvent at a ratio of 1, and vortex mixer The mixture was vigorously mixed to prepare a dioscin solution. A control solvent was prepared by adding DMSO to the emulsified solvent at a ratio of 1.
（２）評価法
被検動物としては、雄性SDラット（9週齢、7:00-明期／19:00-暗期の明暗サイクル、飲料水は水道水、餌はAIN93G粉餌を与え、自由飲水、自由摂食の条件下でブラケットケージにて飼育したもの）を、明期開始時（7:00）から試験終了まで絶食して用いた。
(2) Evaluation method As test animals, male SD rats (9 weeks old, 7: 00-light period / 19: 00-dark period light / dark cycle, tap water for drinking water, AIN93G powder for food, Fast-drinking and free-feeding were used in a bracket cage) and fasted from the beginning of the light period (7:00) until the end of the test.
明期開始3時間後に、経口投与ゾンデ（フチガミ機械7206）付き5 mLシリンジに調製し
た各ジオスシン溶液を入れ、10 mL/kg量（ジオスシン量として、それぞれ10 mg/kgおよび45 mg/kg）をラットに経口投与した。また、別途、溶媒対照群として、上記対照溶媒を10
mL/kg量でラットに経口投与した。採血は、投与前と投与0.5, 2, 4, 6, 8, 10時間後に
麻酔下で実施した。採血開始時間3分前に、ラットをイソフルラン（マイラン製薬）によ
る吸入麻酔にかけ、右眼眼窩静脈叢よりヘパリン処理されたキャピラリーチューブ（Fisherbrand：22-362-566）を用いて採血を行なった。血液は、ヘパリン（持田製薬：ノボ・ヘパリン注1万単位/10 mL）10 μLが入った1.5 mLチューブに採取し、よく混和した。次いで、混合物300 μLをピペットで取り、アプロチニン（sigma：A6279）30 μLと0.5 M EDTA 3 μLをあらかじめ添加しておいた1.5 mLチューブに入れて、転倒混和した後、7000 r.p.m.、4 ℃、2分間で遠心し、血漿を分離した。得られた血漿は、1 mLチューブに採取した。血漿30 μLをピペットで取り、1N HCl 3 μL（血漿に対して1/10量）を添加した0.5 μLチューブに入れて、よく混和し、グレリン濃度測定用血漿とした。
3 hours after the start of the light period, put each prepared dioscin solution into a 5 mL syringe with an orally administered sonde (Fuchigami Machine 7206) and add 10 mL / kg amounts (10 mg / kg and 45 mg / kg respectively as dioscin amounts). Rats were administered orally. Separately, as a solvent control group, the above control solvent was added 10 times.
Rats were orally administered in a volume of mL / kg. Blood samples were collected under anesthesia before administration and 0.5, 2, 4, 6, 8, and 10 hours after administration. Three minutes before the start of blood collection, rats were subjected to inhalation anesthesia with isoflurane (Mylan Pharmaceutical), and blood was collected using a capillary tube (Fisherbrand: 22-362-566) treated with heparin from the right orbital orbital plexus. The blood was collected in a 1.5 mL tube containing 10 μL of heparin (Mochida Pharmaceutical: Novo-Heparin injection 10,000 units / 10 mL) and mixed well. Next, 300 μL of the mixture was pipetted, placed in a 1.5 mL tube to which 30 μL of aprotinin (sigma: A6279) and 3 μL of 0.5 M EDTA had been added, and mixed by inversion, followed by 7000 rpm, 4 ° C., 2 ° C. The plasma was separated by centrifugation for minutes. The obtained plasma was collected in a 1 mL tube. 30 μL of plasma was pipetted and placed in a 0.5 μL tube to which 3 μL of 1N HCl (1/10 volume relative to plasma) was added and mixed well to obtain plasma for measuring ghrelin concentration.
グレリン濃度としては、活性型グレリンであるアシルグレリンの濃度を測定した。血漿中のアシルグレリン濃度は、ELISAキット（SCETI社：Active Ghrelin ELISA kit,cat#97751）により測定した。血漿は、アッセイバッファーを用いて5倍希釈して測定に供し、希釈倍率で補正してアシルグレリン濃度を算出した。 As the ghrelin concentration, the concentration of acyl ghrelin, which is an active ghrelin, was measured. The concentration of acyl ghrelin in plasma was measured using an ELISA kit (SCETI: Active Ghrelin ELISA kit, cat # 97751). Plasma was diluted 5 times with assay buffer and used for measurement, and the acyl ghrelin concentration was calculated by correcting the dilution factor.
（３）結果
その結果、ジオスシン45 mg/kg投与群にて、投与30分以降に血中グレリン濃度の上昇が認められた（図１０）。
(3) Results As a result, in the dioscin 45 mg / kg administration group, an increase in blood ghrelin concentration was observed 30 minutes after administration (FIG. 10).
実施例６．ジオスシン経口投与による摂食量増加効果の評価
（１）サンプルの調製
サンプル調製溶媒として、大豆油：Tween 80：DMSO：D.W.（7：11：1：1）を混和した
溶液を用いた。大豆油に、Tween80および水を、容量比（大豆油：Tween 80：D.W.）が7：11：1となるよう加え、激しく転倒混和した後、超音波破砕装置（TAITEC：VP-5S）を用いて溶液が白濁するまで乳化させた。ジオスシン（Carbosynth社：Dioscorea zingiberensisの葉由来）を、10 mg/kgおよび45 mg/kgの投与量となるようそれぞれ量りとり、DMSOで溶解後、乳化した上記溶媒に1の割合で加え、ボルテックスミキサーで激しく混和し、ジオスシン溶液を調製した。また、乳化した上記溶媒にDMSOを1の割合で加えたものを対照溶媒とした。
Example 6 Evaluation of food intake increase effect by oral administration of dioscin (1) Sample preparation A solution in which soybean oil: Tween 80: DMSO: DW (7: 11: 1: 1) was mixed was used as a sample preparation solvent. Add Tween 80 and water to soybean oil so that the volume ratio (soybean oil: Tween 80: DW) is 7: 11: 1, mix vigorously by inversion, and then use an ultrasonic crusher (TAITEC: VP-5S) The solution was emulsified until it became cloudy. Weigh Dioscine (Carbosynth: Dioscorea zingiberensis leaves) to a dosage of 10 mg / kg and 45 mg / kg, dissolve in DMSO, add to the above emulsified solvent at a ratio of 1, and vortex mixer The mixture was vigorously mixed to prepare a dioscin solution. A control solvent was prepared by adding DMSO to the emulsified solvent at a ratio of 1.
（２）評価法
被検動物としては、雄性SDラット（7週齢、7:00-明期19:00-暗期の明暗サイクル、飲料水は水道水、餌はAIN93G粉餌を与え、自由飲水、自由摂食の条件下でブラケットケージにて飼育したもの）を用いた。明期開始3時間後に、経口投与ゾンデ（フチガミ機械7206）
付き5 mLシリンジに調製した各ジオスシン溶液を入れ、10 mL/kg量（ジオスシン量として、それぞれ10 mg/kgおよび45 mg/kg）をラットに経口投与した。また、別途、溶媒対照群として、上記対照溶媒を10 mL/kg量でラットに経口投与した。餌重量を、投与前と投与2, 4, 6, 8, 10, 24時間後に測定し、摂食量を算出した。
(2) Evaluation method As test animals, male SD rats (7 weeks old, 7: 00-light period 19: 00-dark period light-dark cycle, drinking water tap water, food is AIN93G powdered food, free What was raised in a bracket cage under the conditions of drinking water and free feeding) was used. Three hours after the start of the light period, orally administered sonde (Fuchigami Machine 7206)
Each of the prepared dioscin solutions was placed in a 5 mL syringe, and 10 mL / kg (10 mg / kg and 45 mg / kg, respectively) was orally administered to the rats. Separately, as a solvent control group, the above control solvent was orally administered to rats in an amount of 10 mL / kg. The food weight was measured before administration and 2, 4, 6, 8, 10, 24 hours after administration, and the amount of food intake was calculated.
（３）結果
その結果、ジオスシン投与群（10mg/kgおよび45mg/kg）において、投与2時間以降の累
積摂食量の増加が認められた（図１１）。
(3) Results As a result, in the dioscin administration groups (10 mg / kg and 45 mg / kg), an increase in cumulative food intake after 2 hours of administration was observed (FIG. 11).
Claims (8)
る、請求項１〜４のいずれか１項に記載のグレリン分泌促進剤。 Furthermore, the ghrelin secretion promoter of any one of Claims 1-4 containing the 1 or more component selected from an excipient | filler, a flavoring agent, and a fragrance | flavor.
Priority Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP2013071668A JP2013227309A (en) | 2012-03-30 | 2013-03-29 | Ghrelin secretion promotor |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012080572 | 2012-03-30 | ||
| JP2012080572 | 2012-03-30 | ||
| JP2013071668A JP2013227309A (en) | 2012-03-30 | 2013-03-29 | Ghrelin secretion promotor |
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ID=49675351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015199192A1 (en) * | 2014-06-25 | 2015-12-30 | 株式会社明治 | Ghrelin secretion promoter |
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-
2013
- 2013-03-29 JP JP2013071668A patent/JP2013227309A/en active Pending
Cited By (5)
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|---|---|---|---|---|
| WO2015199192A1 (en) * | 2014-06-25 | 2015-12-30 | 株式会社明治 | Ghrelin secretion promoter |
| CN106535915A (en) * | 2014-06-25 | 2017-03-22 | 株式会社明治 | Ghrelin secretion promoter |
| CN106535915B (en) * | 2014-06-25 | 2020-09-29 | 株式会社明治 | Ghrelin secretion promoter |
| JPWO2020218450A1 (en) * | 2019-04-26 | 2020-10-29 | ||
| JP7318897B2 (en) | 2019-04-26 | 2023-08-01 | 国立大学法人京都大学 | Peptides, compositions, and ghrelin secretagogues |
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