JP2013151442A - Antimicrobial peptide secretion promoter that mammalian secretes - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、哺乳類が分泌する抗菌ペプチドの分泌促進剤に関するものである。 The present invention relates to a secretagogue for antimicrobial peptides secreted by mammals.
β-ディフェンシンは幅広い抗菌活性を有するカチオン性のペプチドである。中でもHBD-1とHBD-2は1995年と1997年に発見されたものであり、ヒトのβ-ディフェンシンの代表的な例である。最近の研究によると、唾液腺、舌、歯茎や頬などの粘膜細胞内でのHBD-1 とHBD-2のmRNAの発現が確認され、さらに唾液の中にβ-ディフェンシン類が確認されている。HBD-1は常に一定量分泌されているconstitutiveなペプチドであり、HBD-2はIL1βやリポポリサッカライドなどの刺激により誘起されるものである。（たとえばMathews et al., Infection and Immunity, 1999, 67:2740-2745）。このように、ヒトβ-ディフェンシンは口腔、粘膜表面の微生物最近からの感染防止予防に重要な役割を担っている。ヒトの18-kd(kilodalton)のカチオン性抗菌タンパク(CAP-18) もまた歯茎の上皮細胞から分泌されるもので、これもまたβ-ディフェンシンと同じように微生物細菌からの感染防止予防に重要な役割を担っている（たとえばLehreretal., Curr Opin Hematol. 2002Jan;9(1):18-22)。 β-Defensin is a cationic peptide having a wide range of antibacterial activities. Among them, HBD-1 and HBD-2 were discovered in 1995 and 1997, and are representative examples of human β-defensins. Recent studies have confirmed the expression of HBD-1 and HBD-2 mRNA in mucosal cells such as salivary glands, tongue, gums and cheeks, and β-defensins in saliva. HBD-1 is a constitutive peptide that is always secreted in a constant amount, and HBD-2 is induced by stimuli such as IL1β and lipopolysaccharide. (For example, Mathews et al., Infection and Immunity, 1999, 67: 2740-2745). Thus, human β-defensins play an important role in preventing and preventing infection of microorganisms on the oral and mucosal surfaces. Human 18-kd (kilodalton) cationic antibacterial protein (CAP-18) is also secreted from the epithelial cells of the gums, which is also important for preventing infection from microbial bacteria, just like β-defensins (For example, Lehreretal., Curr Opin Hematol. 2002 Jan; 9 (1): 18-22).
また最近、これらの抗菌ペプチドが皮膚の免疫力に密接に関連する事がわかってきており、たとえば、皮膚の自己免疫疾患といわれている、アトピー性皮膚炎や乾癬やドライアイなどの疾患の治癒にこれらの抗菌ペプチドが関係している事が報告されている。
最近、ヒトのβ-ディフェンシンの分泌促進剤として、フマル酸などの有機酸をその有効成分とする発明が開示されている（特許文献１：国際公開パンフレットWO2005/027893号）。また2型のヒトβ-ディフェンシンを直接或いは間接的に分泌促進する医薬組成物が開示されている。この発明の中で、植物由来有効成分としてキノア抽出物、ボルドー抽出物やジャスモン酸などが開示されている。（特許文献２：特開2008-19264）。さらに、β-ディフェンシンの発現量を飛躍的に高める素材としてビフイズス菌や乳酸菌が開示されている（特許文献３：国際公開パンフレットWO2007/020884号）。
Recently, it has been found that these antibacterial peptides are closely related to skin immunity, for example, healing of diseases such as atopic dermatitis, psoriasis and dry eye, which are said to be skin autoimmune diseases. It is reported that these antibacterial peptides are related.
Recently, an invention using an organic acid such as fumaric acid as an active ingredient has been disclosed as a secretory promoter for human β-defensin (Patent Document 1: International Publication Pamphlet WO2005 / 027893). Also disclosed is a pharmaceutical composition that directly or indirectly promotes secretion of type 2 human β-defensin. In the present invention, quinoa extract, Bordeaux extract, jasmonic acid and the like are disclosed as plant-derived active ingredients. (Patent Document 2: JP 2008-19264). Furthermore, bifidobacteria and lactic acid bacteria have been disclosed as materials for dramatically increasing the expression level of β-defensin (Patent Document 3: International Publication Pamphlet WO2007 / 020884).
解決しようとする課題は、抗菌ペプチドの分泌を促進する新規な薬剤の提供である。 The problem to be solved is the provision of a novel drug that promotes the secretion of antimicrobial peptides.
本発明は口腔内の表皮細胞から分泌される抗菌ペプチド、β-ディフェンシン（e.g., HBD-1, HDB-2, and HBD-3）やCAP-18の分泌を天然のエピガロカテキンガレートが促進するという新規な知見をもとに、さらにいくつかの天然物質をエピガロカテキンガレートと組み合わせると、その促進効果が飛躍的に増大し、いわゆる予期しない相乗効果がえられるという知見に基づいている。この発明はこのコンビネーションとそのキャリアを含む皮膚や口腔清浄剤としての応用を提供する。たとえばそのキャリアとしては、皮膚や口腔のターゲット部位にデリバリーの適したキャリアとして（例えばコロイドシリカ、水、アルコール又は含水アルコール）などがある。エピガロカテキンガレートは 0.05重量％〜50重量％、0.25重量％〜20重量％又は0.5重量％〜15重量％の含量で用いることができる。エピガロカテキンガレートと混合することで相乗効果を示す物質は、ビタミンＣとケルセチンである。これらの構成は、経口剤以外にも歯磨き、うがい剤、ガム、ジェル、練りものなどの形態で皮膚口腔清浄に用いられる。また菌により感染で起こる皮膚口腔の疾患の治療にも用いられる。クリームやゲルやペーストは皮膚口腔のターゲット部位へ塗るのにとくに適している。
本発明のもうひとつの側面は、この発明がβ-ディフェンシンやCAP-18の分泌促進させる方法を提供することである。この方法はβ-ディフェンシンやCAP-18を精製分泌できる細胞表面にエピガロカテキンガレート或いはそのコンビを接触させることで可能になる。
更なる側面として、この発明は細菌感染によって引き起こされる、歯周病，歯茎炎、虫歯、胃炎，カンジダ病の治療法を提供する。この方法は治療に効果的な濃度のエピガロカテキンガレートやそのコンビを含む製剤を疾患部位にデリバリーする方法も含まれる。
In the present invention, natural epigallocatechin gallate promotes secretion of antibacterial peptides, β-defensins (eg, HBD-1, HDB-2, and HBD-3) and CAP-18 secreted from epidermal cells in the oral cavity. Based on this novel finding, it is based on the finding that when some natural substances are combined with epigallocatechin gallate, the promoting effect is dramatically increased and a so-called unexpected synergistic effect is obtained. The present invention provides an application as a skin and oral cleanser containing this combination and its carrier. For example, the carrier may be a carrier suitable for delivery to a target site on the skin or oral cavity (for example, colloidal silica, water, alcohol or hydrous alcohol). Epigallocatechin gallate can be used in a content of 0.05 wt% to 50 wt%, 0.25 wt% to 20 wt%, or 0.5 wt% to 15 wt%. Substances that show a synergistic effect when mixed with epigallocatechin gallate are vitamin C and quercetin. These structures are used for oral cleansing of the skin in the form of toothpaste, gargle, gum, gel, paste, etc. in addition to the oral preparation. It can also be used to treat skin and oral diseases caused by bacteria. Creams, gels, and pastes are particularly suitable for application to the target area of the oral cavity.
Another aspect of the present invention is that the present invention provides a method for promoting secretion of β-defensin and CAP-18. This method can be achieved by bringing epigallocatechin gallate or a combination thereof into contact with a cell surface capable of purifying and secreting β-defensin and CAP-18.
As a further aspect, the present invention provides a method for treating periodontal disease, gingivitis, caries, gastritis and candida disease caused by bacterial infection. This method includes a method of delivering a therapeutically effective concentration of epigallocatechin gallate or a combination thereof to a disease site.
本発明は以下からなる；
１．エピガロカテキンガレートに対して、ビタミンＣ 、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選ばれる少なくとも１種が有効成分として混合されてなる、哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
２．前項１記載のエピガロカテキンガレートに対して、ビタミンＣ 、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選ばれる少なくとも１種が有効成分として混合されてなる、哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、当該成分がそれぞれ0.25〜80重量％からなる前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤
３．前項１記載のエピガロカテキンガレートに対して、ビタミンＣ 、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選ばれる少なくとも１種が有効成分として混合されてなる、哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、エピガロカテキンガレートと混合されるビタミンＣ若しくはケルセチンの含有比がそれぞれ1.0：0.1〜0.1：1.0である前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
４．前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、エピガロカテキンガレート単独、又はエピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選ばれる少なくとも１種がそれぞれ0.5〜50重量％からなる前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
５．前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、有効成分がエピガロカテキンガレートとビタミンＣとケルセチンの組み合わせである前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
６．前項１記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、エピガロカテキンガレートとビタミンＣとケルセチンの重量比が1：2：2である哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
７．分泌される抗菌ペプチドが、β-ディフェンシン２とCAP-18である前項１〜６のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
８．天然植物由来の抗菌成分若しくは天然植物由来の口腔洗浄成分との組み合わせで用いる前項１〜７のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
９．天然植物由来抗菌成分がホップ由来である前項８に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
１０．皮膚または粘膜部で使用されるものである前項１〜９のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
１１．口唇部または口腔内で使用されるものである前項１〜９のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤。
１２．前項１〜９のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤を含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進用の皮膚疾患治療用外用組成物。
１３．前項１〜９のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤を含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進用の化粧品組成物。
１４．前項１〜９のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤を含有するヒト抗菌ペプチド分泌促進用の粘膜疾患治療用内用組成物。
１５．前項１〜９に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤を含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進用の眼疾治療用外用組成物。
１６．前項１〜９のいずれか一に記載の哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤を含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進用の食品。
The present invention comprises:
1. A mammalian antibacterial peptide secretion promoter comprising epigallocatechin gallate mixed with at least one selected from the group consisting of glycosides of vitamin C, quercetin and quercetin as an active ingredient.
2. In the antibacterial peptide secretion promoter comprising the epigallocatechin gallate described in the preceding item 1, at least one selected from the group consisting of glycosides of vitamin C, quercetin and quercetin as an active ingredient. 2. The mammalian antibacterial peptide secretion promoter according to the above item 1, wherein each comprises 0.25 to 80% by weight. In a mammalian antibacterial peptide secretagogue comprising the epigallocatechin gallate according to the preceding item 1, wherein at least one selected from the group consisting of glycosides of vitamin C, quercetin and quercetin is mixed as an active ingredient. 2. The mammalian antimicrobial peptide secretion promoter according to item 1 above, wherein the content ratio of vitamin C or quercetin mixed with catechin gallate is 1.0: 0.1 to 0.1: 1.0, respectively.
4). In the mammalian antibacterial peptide secretion promoter according to the preceding item 1, at least one selected from the group consisting of epigallocatechin gallate alone or epigallocatechin gallate and a glycoside of vitamin C, quercetin and quercetin is 0.5 to 50 wt. 2. The mammalian antimicrobial peptide secretion promoter according to 1 above, comprising%.
5. 2. The mammalian antimicrobial peptide secretagogue according to item 1, wherein the active ingredient is a combination of epigallocatechin gallate, vitamin C and quercetin.
6). The mammalian antibacterial peptide secretagogue according to item 1, wherein the weight ratio of epigallocatechin gallate, vitamin C and quercetin is 1: 2: 2.
7). The mammalian antimicrobial peptide secretion promoter according to any one of the preceding items 1 to 6, wherein the secreted antimicrobial peptide is β-defensin 2 and CAP-18.
8). The mammalian antimicrobial peptide secretion promoter according to any one of 1 to 7 above, which is used in combination with an antibacterial component derived from a natural plant or an oral cleansing component derived from a natural plant.
9. 9. The mammalian antimicrobial peptide secretion promoter according to 8 above, wherein the natural plant-derived antimicrobial component is derived from hops.
10. 10. The mammalian antibacterial peptide secretion promoter according to any one of items 1 to 9, which is used in skin or mucous membranes.
11. 10. The mammalian antibacterial peptide secretion promoter according to any one of 1 to 9 above, which is used in the lip or in the oral cavity.
12 A composition for external use for skin disease treatment for promoting mammalian antimicrobial peptide secretion, comprising the mammalian antimicrobial peptide secretion promoting agent according to any one of 1 to 9 above.
13. 10. A cosmetic composition for promoting mammalian antimicrobial peptide secretion, comprising the mammalian antimicrobial peptide secretion promoting agent according to any one of 1 to 9 above.
14 10. An internal composition for treatment of mucosal disease for promoting human antimicrobial peptide secretion, comprising the mammalian antimicrobial peptide secretion promoting agent according to any one of 1 to 9 above.
15. An external composition for treating eye diseases for promoting secretion of a mammalian antibacterial peptide comprising the mammalian antibacterial peptide secretion promoter according to any one of 1 to 9 above.
16. 10. A food product for promoting mammalian antimicrobial peptide secretion, comprising the mammalian antimicrobial peptide secretion promoter according to any one of 1 to 9 above.
本発明はエピガロカテキンガレート単独、又はエピガロカテキンガレートとある特定の物質とを組み合わせによる皮膚や口腔や鼻、眼などの粘膜の清浄剤に関連している。エピガロカテキンガレートは緑茶中のフラバン骨格を有する６種の代表的なカテキンの一種ではあるが、構造は類似しているものの、すべてのカテキンにこの効果があるのではない。驚くべきことに、このカテキン中ではただ唯一、エピガロカテキンガレートが本発明のヒト抗菌ペプチド、β-ディフェンシン（e.g.,HBD-1, HDB-2, and HBD-3）やCAP-18の分泌促進を促進する。さらに、エピガロカテキンガレートの促進作用をさらに高めるために、様々な食品添加物とのコンビネーションを試験したところ、ビタミンＣ、ケルセチン、ケルセチン配糖体との少なくとも１の混合において相乗効果を示す事が明らかになった。 The present invention relates to a cleansing agent for mucous membranes such as skin, oral cavity, nose and eyes by epigallocatechin gallate alone or a combination of epigallocatechin gallate and a specific substance. Epigallocatechin gallate is one of six typical catechins having a flavan skeleton in green tea, but although not similar in structure, not all catechins have this effect. Surprisingly, epigallocatechin gallate is the only one in this catechin that promotes secretion of human antimicrobial peptides of the present invention, β-defensins (eg, HBD-1, HDB-2, and HBD-3) and CAP-18 Promote. Furthermore, in order to further enhance the promoting action of epigallocatechin gallate, a combination with various food additives was tested, and it showed a synergistic effect in at least one mixture with vitamin C, quercetin and quercetin glycoside. It was revealed.
エピガロカテキンガレート、ビタミンＣ、ケルセチンは、公知化合物であり、広く市販されており、それらを利用できる。その純度は、一般的に医療分野、食用分野、あるいは化粧分野で、許容される程度であれば十分であり、一般的には純度70％以上、好適には80％以上、より好適には90％以上であれば十分である。本発明において、ケルセチン配糖体という用語は ケルセチン骨格を有する糖誘導体を意味している。具体的には、ルチン、イソケルセチン、ケルセチンの糖誘導体を意味している、quercetin-3-O-glucoside,quercetin-5-O-glucoside, quercetin-7-O-glucoside, quercetin-9-O-glucoside,quercetin-3-O-rutinoside, quercetin-3-O-[a-rhamnosyl-(1®2)-a-rhamnosyl-(1®6)]-b-glucoside,quercetin-3-O-galactoside, quercetin-7-O-galactoside, quercetin-3-O-rhamnoside,and quercetin-7-O-galactoside.などである。 Epigallocatechin gallate, vitamin C, and quercetin are known compounds and are widely available on the market and can be used. The purity is generally acceptable as long as it is acceptable in the medical field, edible field, or cosmetic field. Generally, the purity is 70% or more, preferably 80% or more, and more preferably 90%. % Or more is sufficient. In the present invention, the term quercetin glycoside means a sugar derivative having a quercetin skeleton. Specifically, quercetin-3-O-glucoside, quercetin-5-O-glucoside, quercetin-7-O-glucoside, quercetin-9-O-, which means rutin, isoquercetin, and sugar derivatives of quercetin glucoside, quercetin-3-O-rutinoside, quercetin-3-O- [a-rhamnosyl- (1 ® 2) -a-rhamnosyl- (1 ® 6)]-b-glucoside, quercetin-3-O-galactoside, quercetin-7-O-galactoside, quercetin-3-O-rhamnoside, and quercetin-7-O-galactoside.
本発明のエピガロカテキンガレート単独、又はエピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選ばれる少なくとも１種を有効成分として含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、当該成分の配合量は、それぞれ0.25〜80重量％であり、あるいは0.5〜50重量％であり、好適な配合量は、哺乳類抗菌ペプチド分泌促進効果によって容易に変化可能である。 In the antibacterial peptide secretion promoter containing at least one selected from the group consisting of epigallocatechin gallate of the present invention alone or epigallocatechin gallate and a glycoside of vitamin C, quercetin and quercetin as an active ingredient, The compounding amount of each component is 0.25 to 80% by weight, or 0.5 to 50% by weight, and the preferable compounding amount can be easily changed by the effect of promoting secretion of mammalian antimicrobial peptide.
本発明のエピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選らばれる少なくとも１種を有効成分として含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、当該成分の配合比は、1.0：0.1〜0.1：1.0であり、好適な配合比は、哺乳類抗菌ペプチド分泌促進効果によって容易に変化可能である。 In the mammalian antibacterial peptide secretion promoter containing as an active ingredient at least one selected from the group consisting of epigallocatechin gallate according to the present invention and vitamin C, quercetin and a glycoside of quercetin, the mixing ratio of these components is 1.0. : 0.1 to 0.1: 1.0, and the preferred compounding ratio can be easily changed by the effect of promoting secretion of mammalian antimicrobial peptide.
本発明のエピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選らばれる少なくとも１種を有効成分として含有する哺乳類抗菌ペプチド分泌促進剤において、当該成分の配合量は、それぞれ0.25〜80重量％であり、あるいは0.5〜50重量％であり、エピガロカテキンガレートと、ビタミンＣとケルセチン若しくはケルセチンの配糖体の組み合わせである。そして、その配合重量比は、例えば1：2：2である。この配合比は、所望により、±0.5の範囲で変更可能である。エピガロカテキンガレート単独よりも、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選らばれる少なくとも１種との配合が、さらに、ビタミンＣとケルセチン若しくはケルセチンの配糖体との配合が、哺乳類抗菌ペプチド分泌促進効果が、有意に上昇する。 In the mammalian antibacterial peptide secretion promoter containing epigallocatechin gallate of the present invention and at least one selected from the group consisting of glycosides of vitamin C, quercetin and quercetin as active ingredients, It is 0.25 to 80% by weight, or 0.5 to 50% by weight, and is a combination of epigallocatechin gallate and vitamin C and quercetin or quercetin glycoside. The blending weight ratio is, for example, 1: 2: 2. This blending ratio can be changed within a range of ± 0.5, if desired. A combination of at least one selected from the group consisting of vitamin C, quercetin and quercetin glycosides, and a combination of vitamin C and quercetin or quercetin glycoside rather than epigallocatechin gallate alone The antibacterial peptide secretion promoting effect is significantly increased.
本発明の製剤は既知の方法で製造できる。たとえばエピガロカテキンガレート10％とビタミンＣ 20％、ケルセチン10％を含む50 gの混合物を170 mLのエタノールに溶かし780 mLの蒸留水で希釈することでうがい剤を作製する事ができる。使用においては患者はそのうがい液の約14 mLでうがいをする。
別の応用としては、エピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選らばれる少なくとも１種と、歯磨き用の所定の物質とを組み合わせて、歯磨きの成分としてもちいることができる。
また、それに限らず、これらの組み合わせは様々な皮膚疾患予防治療、粘膜、口腔清浄や口臭予防製品に応用できる。製剤化は、自体公知の外用剤の処方により、エピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選らばれる少なくとも１種を、外用剤中に配合し調製できる。また、これらの組み合わせには他の抗菌剤（たとえば４級塩やトリクロサン）を混ぜることも可能である。またそれらにはスペアミントオイル、ペッパーミントオイル、ササフラスオイル、クローブオイル、ウインターグリーンオイルなどの芳香成分を入れることもできる。また必要に応じて、アスパルテーム、ステビアン、サッカリン、ナトリウムシクラメート、デキストロース、キシリトール、レブロースなどの甘味料を混ぜても良い。さらに、効果を増強させるために天然の植物由来の抗菌素材と組み合わせをすることもできる。本発明のエピガロカテキンガレートと、ビタミンＣ、ケルセチン及びケルセチンの配糖体からなる群から選らばれる少なくとも１種を配合した製剤は、皮膚疾患、歯周病、虫歯菌、カンジダ病、胃腸炎のような菌感染によって生じる口腔疾患の治療と予防に用いられる。植物由来の抗菌素材としては、ヒノキチオール（ひのき）、キサントフモール（ホップ）、カプサイシン（唐辛子）、ローズマリ酸（ローズマリ）、アルテミシン（プロポリス）、アルテビリン（プロポリス）、オレガノオイル（オレガノ）、ぺリルアルデヒド（シソ）、カルバクロール（シソ）、シンナムアルデヒド（シナモン）、ラウリルアルデヒド（どくだみ）が挙げられる。
The preparation of the present invention can be produced by a known method. For example, a mouthwash can be prepared by dissolving 50 g of a mixture containing 10% epigallocatechin gallate, 20% vitamin C and 10% quercetin in 170 mL of ethanol and diluting with 780 mL of distilled water. In use, the patient gargles with approximately 14 mL of the gargle.
As another application, epigallocatechin gallate, at least one selected from the group consisting of vitamin C, quercetin and quercetin glycoside, and a predetermined toothpaste substance are combined and used as a toothpaste component. be able to.
In addition, these combinations are applicable to various skin disease preventive treatments, mucous membranes, oral cleansing products, and bad breath prevention products. The formulation can be prepared by blending at least one selected from the group consisting of epigallocatechin gallate and vitamin C, quercetin and quercetin glycosides into the external preparation by the formulation of external preparations known per se. Moreover, it is also possible to mix other antibacterial agents (for example, quaternary salt and triclosan) in these combinations. They can also contain aromatic components such as spearmint oil, peppermint oil, sassafras oil, clove oil and winter green oil. If necessary, sweeteners such as aspartame, stevian, saccharin, sodium cyclamate, dextrose, xylitol, and levulose may be mixed. Furthermore, it can be combined with natural plant-derived antibacterial materials to enhance the effect. A preparation comprising epigallocatechin gallate according to the present invention and at least one selected from the group consisting of glycosides of vitamin C, quercetin and quercetin is a skin disease, periodontal disease, caries fungus, candida disease, gastroenteritis It is used for the treatment and prevention of oral diseases caused by such bacterial infections. Plant-derived antibacterial materials include hinokitiol (hinoki), xanthohumol (hop), capsaicin (hot pepper), rosemariic acid (rosemari), artemisin (propolis), arteviline (propolis), oregano oil (oregano), peryl Examples thereof include aldehyde (seed), carvacrol (seed), cinnamaldehyde (cinnamon), and lauryl aldehyde (dokudomi).
治療とは、菌などによって皮膚や口腔や粘膜疾患の症状を呈しているヒト、或いはその予防を期待するヒトにたいして効果的な量を含む概発明の成分を投与することを意味する。投与とは皮膚や口腔や眼や鼻などの粘膜の疾患部位に 概発明の成分をデリバリーすることを意味する。効果的な量とは 疾患の治療や予防に必要な成分量を意味する。この効果的な量は治療する疾患のタイプによって異なる。また他の治療剤との併用でも用いる事が出来る。その至適量はvitroやvivoの関連実験によって決定する事ができる。また、この発明がカバーする範囲には、vitro或いはvivoでβ-ディフェンシンやCAP-18などの抗菌ペプチドを分泌する能力のある細胞に本発明の概成分がコンタクトすることとでβ-ディフェンシンやCAP-18などの抗菌ペプチドの分泌或いは生成を促進させるvitro或いはvivoでの方法が含まれる。 Treatment means administering the components of the general invention including an effective amount to a human who is symptomatic of skin, oral cavity or mucosal disease due to bacteria or the like, or who is expected to prevent it. Administration means the delivery of the components of the invention to the diseased part of the mucous membranes such as the skin, oral cavity, eyes and nose. Effective amount means the amount of ingredients necessary to treat or prevent a disease. This effective amount depends on the type of disease being treated. It can also be used in combination with other therapeutic agents. The optimal amount can be determined by relevant experiments in vitro or in vivo. In addition, the scope of the present invention is that β-defensin and CAP can be obtained by contacting the general components of the present invention with cells capable of secreting antimicrobial peptides such as β-defensin and CAP-18 in vitro or in vivo. Vitro or vivo methods that promote the secretion or production of antimicrobial peptides such as -18 are included.
次にいくつかの実施例を示すが、本発明はこれらに限定されない。 Some examples are shown below, but the present invention is not limited thereto.
（実施例１）組成Ａによるうがい効果
エピガロカテキンガレート（80％純度）とビタミンＣ とケルセチンはシグマSigma, St. Louis, MIから購入した。組成Ａは以下のようにして調整した。エピガロカテキンガレートとビタミンＣ とケルセチン1：2：2（重量比）の混合物1 gを27 w/v%含水エタノール99 mLに溶解した。（混合物10 mg/mL（1 w/v%）の溶液）。市販のうがい薬、リステリン（登録商標）（27 w/v%エタノール配合）と27 w/v%エタノールをコントロールに用いた。
9人の口腔が健常な成人（7人男性。2人女性：年齢は16歳から40歳））を用いて試験を行った。唾液サンプル（約 500〜750μL) をまず試験前に被験者から採取した。その後、被験者は14 mLの組成Ａ、水、リステリン（登録商標）、27 w/v%含水エタノールを用いて約2分間口腔をうがいした。1時間後、再度唾液サンプルを各人から約 500〜750μLずつ採取した。それぞれの唾液サンプルを遠心分離した後、リン酸緩衝液(PBS)によって0.5％溶液にまで希釈した。それぞれの溶液に60μLのバクテリア溶液を入れ 、羊血液寒天培地にて、嫌気あるいは好気性の両条件にて37℃48時間培養した。その後、それぞれの培地に発生した細菌コロニーをカウントした。阻害効果はうがい前と後で採取した唾液の希釈液で調整したサンプルにおける細菌の生成コロニーの数の差で判定した。その結果を表１に示す。うがい前を100としたときのうがい後の唾液中のバクテリアの 割合を％であらわしている。これによると、リステリン（登録商標）や組成Ａでのうがいが水や22 w/v%エタノールよりも有意にバクテリア数が減少している事がわかる。さらに、組成Ａによるうがいは、22 w/v%エタノール中に有機酸として安息香酸を主成分として含むリステリン（登録商標）よりもさらに優れている事がわかる。
(Example 1) Gargle effect by composition A Epigallocatechin gallate (80% purity), vitamin C and quercetin were purchased from Sigma Sigma, St. Louis, MI. Composition A was prepared as follows. 1 g of a mixture of epigallocatechin gallate, vitamin C and quercetin 1: 2: 2 (weight ratio) was dissolved in 99 mL of 27 w / v% aqueous ethanol. (Solution of mixture 10 mg / mL (1 w / v%)). A commercially available mouthwash, Listerin (registered trademark) (containing 27 w / v% ethanol) and 27 w / v% ethanol were used as controls.
Nine oral healthy adults (7 males, 2 females: age 16 to 40) were used for the study. Saliva samples (approximately 500-750 μL) were first collected from subjects prior to testing. Thereafter, the subject gargled the oral cavity with 14 mL of Composition A, water, Listerin (registered trademark), and 27 w / v% aqueous ethanol for about 2 minutes. After 1 hour, about 500 to 750 μL of saliva samples were collected again from each person. Each saliva sample was centrifuged and then diluted to 0.5% solution with phosphate buffer (PBS). 60 μL of bacterial solution was added to each solution, and cultured in a sheep blood agar medium at 37 ° C. for 48 hours under both anaerobic and aerobic conditions. Thereafter, the bacterial colonies generated in each medium were counted. The inhibitory effect was judged by the difference in the number of bacterial colonies in the sample prepared with a diluted saliva sample collected before and after gargling. The results are shown in Table 1. The percentage of bacteria in the saliva after gargling when the value before gargling is 100 is expressed in%. According to this, it can be seen that gargle in Listerin (registered trademark) and composition A has a significantly reduced number of bacteria than water and 22 w / v% ethanol. Furthermore, it can be seen that gargle by composition A is superior to Listerin (registered trademark) containing benzoic acid as a main component in 22 w / v% ethanol as an organic acid.
表１：口腔うがい１時間後の唾液中のバクテリアの減少
（実施例２）エピガロカテキンと他の天然物とのペプチド分泌相乗効果のin vitro実験
Midorikawaらの文献に従って３つのグループの兎がヒト合成抗菌ペプチド HBD-1, HBD-2, andCAP-18によって免疫化された（Midorikawa et al., Infection & Immunity. 2003,71:3730-3739）。それぞれの兎の血清から得られたIgGフラクションはプロテインＡカラムによって精製された。精製IgGは相当するそれぞれの合成ペプチドに対して強い親和性を示し、この３つのペプチド間に交差反応がないことはELISAによって確認できた。精製IgGはビオチンでラベル化された(EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin, Pierce Biotechnology, Rockford, IL)。そしてそれぞれの合成ペプチドに特異的な非標識の兎IgGをコートすることでサンドイッチELISAシステムが作製された。ビオチンをラベルした特異的IgGはStreptavidin-conjugated peroxidase(Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, IN) によって検出された。HBD-1,HBD-2, そして CAP-18 溶液の連続希釈法はELISA検出の場合の定法に従った。O-phenylenediamineがペルオキシダーゼの基質に使われ、発色強度はOD490nmで分光計にて測定された。
(Example 2) In vitro experiment of peptide secretion synergistic effect of epigallocatechin and other natural products
Three groups of spiders were immunized with human synthetic antimicrobial peptides HBD-1, HBD-2, and CAP-18 according to Midorikawa et al. (Midorikawa et al., Infection & Immunity. 2003, 71: 3730-3739). The IgG fraction obtained from each sputum serum was purified by a protein A column. Purified IgG showed strong affinity for each corresponding synthetic peptide, and it was confirmed by ELISA that there was no cross-reactivity between the three peptides. Purified IgG was labeled with biotin (EZ-Link Sulfo-NHS-Biotin, Pierce Biotechnology, Rockford, IL). A sandwich ELISA system was prepared by coating unlabeled rabbit IgG specific for each synthetic peptide. Specific IgG labeled with biotin was detected by Streptavidin-conjugated peroxidase (Roche Diagnostics Corp., Indianapolis, IN). The serial dilution method of HBD-1, HBD-2, and CAP-18 solution followed the standard method for ELISA detection. O-phenylenediamine was used as a substrate for peroxidase, and the color intensity was measured with a spectrometer at OD490nm.
各濃度のサンプルはDulbecco's modified Eagle's medium-10% fetalbovine serumに溶かして調整した。human gingival epithelial 細胞（OBA-9)(Saito et al., J. Dent. Res., 1997, 76:441参照)はKeratinocyte-serum free medium中にて24穴プレートで培養しsub-confluentの状態まで増殖させた。次に細胞を洗浄後、それぞれのテストサンプルをいれて種々の時間培養した。その上澄液を集め、ELISAによるアッセイまで-70℃に保存した。生成した抗菌ペプチドの測定は各検体３回繰り返しで行われた。ペプチドの濃度は定法の滴定により行われた。データは基本的に精製したペプチド(ng/mL)±SDで示した。その結果を表２〜６に示す Samples of each concentration were prepared by dissolving in Dulbecco's modified Eagle's medium-10% fetalbovine serum. Human gingival epithelial cells (OBA-9) (see Saito et al., J. Dent. Res., 1997, 76: 441) are cultured in a 24-well plate in Keratinocyte-serum free medium until sub-confluent Allowed to grow. Next, after washing the cells, each test sample was added and cultured for various times. The supernatant was collected and stored at -70 ° C. until assayed by ELISA. The measurement of the produced antimicrobial peptide was repeated 3 times for each specimen. The peptide concentration was determined by standard titration. Data are basically expressed as purified peptide (ng / mL) ± SD. The results are shown in Tables 2-6.
表２はエピガロカテキンのヒトディフェンシン２の分泌促進に対する相乗効果の実験である。エピガロカテキン10μgにケルセチンを混合すると10-4〜10-5 Mの範囲で（30μg/mL〜3μg/mL）その効果が有意に増大する事がわかる。一方、ローズマリ酸やクルクミンではその効果は見られなかった。 Table 2 is an experiment of the synergistic effect of epigallocatechin on the promotion of secretion of human defensin 2. When quercetin is mixed with 10 μg of epigallocatechin, the effect is significantly increased in the range of 10 −4 to 10 −5 M (30 μg / mL to 3 μg / mL). On the other hand, rosmarinic acid and curcumin did not show the effect.
表２：ヒトディフェンシン２の分泌促進に対するエピガロカテキンと他の天然物との相乗効果の実験
* これらの値はすべてコントロール（無添加）におけるヒトディフェンシン２の分泌量も同条件で測定し、それによって規格化した値である。
Table 2: Experiments on the synergistic effect of epigallocatechin and other natural products on the promotion of human defensin 2 secretion
* All of these values are values normalized by measuring the amount of secreted human defensin 2 in the control (no addition) under the same conditions.
表３はCAP-18分泌促進に対する同様の相乗効果の実験結果である。ヒトディフェンシン２の分泌を促進したケルセチンをエピガロカテキンガレート10μgに混合しても（10-4〜10-5の範囲で（30μg/mL〜3μg/mL)その効果は有意ではなかった。 Table 3 shows the results of a similar synergistic effect on the promotion of CAP-18 secretion. When quercetin that promoted the secretion of human defensin 2 was mixed with 10 μg of epigallocatechin gallate (in the range of 10 −4 to 10 −5 (30 μg / mL to 3 μg / mL), the effect was not significant.
表３：CAP-18の分泌促進に対するエピガロカテキンと他の天然物との相乗効果の実験
表４はヒト歯茎上皮細胞を用いたエピガロカテキンのディフェンシン２分泌促進に対するビタミンＣ との相乗効果の実験である。エピガロカテキン10μgにビタミンＣを混合すると１〜４倍量の添加でその効果が有意に増大する事がわかる。 Table 4 is an experiment of synergistic effects with vitamin C on epigallocatechin promotion of defensin 2 secretion using human gum epithelial cells. It can be seen that when vitamin C is mixed with 10 g of epigallocatechin, the effect is significantly increased by adding 1 to 4 times the amount.
表４：ディフェンシン２の分泌促進に対するエピガロカテキンとビタミンＣとの相乗効果の実験
表５はエピガロカテキンのCAP-18分泌促進に対するビタミンＣの相乗効果の実験である。ヒトディフェンシン２の分泌を促進したビタミンＣ をエピガロカテキンに混合した場合、その効果はエピガロカテキンガレートの２〜４倍量の添加でCAP-18の分泌を有意に増大させた。 Table 5 is an experiment of the synergistic effect of vitamin C on the promotion of CAP-18 secretion by epigallocatechin. When vitamin C 3 that promoted the secretion of human defensin 2 was mixed with epigallocatechin, the effect significantly increased the secretion of CAP-18 by adding 2 to 4 times the amount of epigallocatechin gallate.
表５：CAP-18の分泌促進に対するエピガロカテキンとビタミンＣとの相乗効果の実験
上記の実験結果ではエピガロカテキンガレートとの組み合わせにおいて、ビタミンＣがヒトディフェンシン２とCAP-18の分泌促進に、ケルセチンがヒトディフェンシン２の分泌促進にそれぞれ効果を示した。 In the above experimental results, vitamin C was effective in promoting secretion of human defensin 2 and CAP-18, and quercetin was effective in promoting secretion of human defensin 2 in combination with epigallocatechin gallate.
表６ではエピガロカテキンガレート，ビタミンＣ、ケルセチンの３成分を重量比(１：２：２）で混合した組成ＡとエピガロカテキンガレートとビタミンＣの２成分を比率（１：２）で混合した場合との促進効果の比較実験である。３成分の混合によりさらにその促進効果がより増大することがわかる。 In Table 6, composition A mixed with epigallocatechin gallate, vitamin C, and quercetin at a weight ratio (1: 2: 2), and epigallocatechin gallate and vitamin C with two components mixed at a ratio (1: 2) It is a comparative experiment of the promotion effect with the case. It can be seen that the promotion effect is further increased by mixing the three components.
表６: エピガロカテキンガレート，ビタミンＣ、ケルセチンの３成分混合実験結果
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2017007978A (en) * | 2015-06-23 | 2017-01-12 | 三栄源エフ・エフ・アイ株式会社 | Oral composition |
| US11000050B2 (en) | 2015-10-09 | 2021-05-11 | Axichem Ab | Bird feed and in particular poultry feed, comprising synthetic capsaicinoid derivatives and such feed for prophylactic use or treatment of Salmonella infection |
-
2012
- 2012-01-24 JP JP2012012514A patent/JP2013151442A/en active Pending
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