JP2013040235A - Method for producing lipid containing useful fatty acid residue of docosapentaenoic acid, arachidonic acid or the like - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、軟体動物、特に、マキガイ綱、ニマイガイ綱、及びヒザラガイ綱（以下、これらを合わせて「貝」又は「貝類」ということがある。）、並びにイカ綱よりなる群から選択されるいずれか１種以上の動物、特にその軟体部及び／又は卵からなる群から選択されるものを原料として用いる、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上の残基を含む脂質を製造する方法に関する。
本発明で得られるドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を残基として含む脂質成分は、食品素材を始め、医薬品素材、化粧品素材、及び研究用試薬等に広く用いることができる。
The present invention relates to molluscs, in particular, snails, snails, and clams (hereinafter collectively referred to as “shells” or “shells”), and any one selected from the group consisting of squids. Selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid, using as a raw material one or more animals, particularly those selected from the group consisting of their soft bodies and / or eggs The present invention relates to a method for producing a lipid containing one or more residues.
The lipid component containing at least one selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid obtained in the present invention is a food material, a pharmaceutical material, and a cosmetic material. And widely used for research reagents and the like.
水産物由来の脂質に含まれるドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、２２：６ｎ−３）やイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５ｎ−３）は、ｎ−３不飽和脂肪酸（ｎ−３ＰＵＦＡ）の一種で、ヒトにとって必須の成分であり、ヒトの健康によい生理機能が明らかとなっており、例えば、ＥＰＡは医薬品として認可され、ＤＨＡは特定保健用食品素材として利用されている（非特許文献１）。最近、ＤＨＡの前駆体である、ドコサペンタエン酸が、ＥＰＡの１／１０程度の量で、ＤＨＡと同等以上の生理機能を示すことが明らかとなった（非特許文献２）。一方、リノール酸（１８：２ｎ−６）などのｎ−６不飽和脂肪酸（ｎ−６ＰＵＦＡ）もヒトに必須の成分とされ、特にアラキドン酸（２０：４ｎ−６）は、ヒトの脳の発達や老化防止に重要な役割を果たす脂肪酸であって、自然界に高純度なものはほとんどない（非特許文献３）。また、最近では、ドコサペンタエン酸やアラキドン酸の生産が微生物などから見出され、その利用が拡大してきている（特許文献１、２、及び３）。ただし、食経験のない微生物由来のドコサペンタエン酸やアラキドン酸を飲食用とする場合、安全性の試験を行い毒性のないことを確認する煩雑な操作が必要である。 Docosahexaenoic acid (DHA, 22: 6n-3) and icosapentaenoic acid (EPA, 20: 5n-3) contained in lipids derived from marine products are a type of n-3 unsaturated fatty acids (n-3 PUFA) and are essential for humans For example, EPA is approved as a pharmaceutical and DHA is used as a food material for specific health (Non-patent Document 1). Recently, it has been clarified that docosapentaenoic acid, which is a precursor of DHA, exhibits physiological functions equivalent to or higher than DHA in an amount about 1/10 of EPA (Non-patent Document 2). On the other hand, n-6 unsaturated fatty acids (n-6PUFA) such as linoleic acid (18: 2n-6) are also essential components in humans. In particular, arachidonic acid (20: 4n-6) is a human brain development. There are almost no fatty acids that play an important role in preventing aging and are highly purified in nature (Non-patent Document 3). Recently, production of docosapentaenoic acid and arachidonic acid has been found from microorganisms and the use thereof has been expanded (Patent Documents 1, 2, and 3). However, when docosapentaenoic acid or arachidonic acid derived from microorganisms with no dietary experience is used for food and drink, a complicated operation for performing a safety test and confirming that there is no toxicity is required.
このように、ｎ−３やｎ−６不飽和脂肪酸の中でも、ドコサペンタエン酸やアラキドン酸は、有用機能を持ち、近年その需要が増しているものの、これらの不飽和脂肪酸及びこれらの不飽和脂肪酸を残基として含む脂質の供給源がほとんどないため、その供給源の開発が待たれている。特に、安全性に問題のない食経験のある素材からの簡便な供給が望まれている。 Thus, among n-3 and n-6 unsaturated fatty acids, docosapentaenoic acid and arachidonic acid have useful functions and their demand has increased in recent years, but these unsaturated fatty acids and their unsaturated Since there are few sources of lipids containing fatty acids as residues, development of such sources is awaited. In particular, a simple supply from a material with no food safety problems is desired.
そこで、本発明の解決しようとする課題は、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を高い含量で脂質構成脂肪酸として含む脂質を効率良く得るための製造方法を提供することである。
さらに、本発明の別の課題は、上記の脂質を多量に供給することができる製造方法を提供することにある。好ましくは、食経験のある素材からの製造方法を提供することにある。
また、本発明のさらなる課題は、種々の未利用マキガイや廃棄されるマキガイ内臓、低利用の陸生貝類を再資源化し、環境保全に寄与することにある。
Therefore, the problem to be solved by the present invention is to efficiently use a lipid containing a high content of one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid constituent fatty acid. It is to provide a manufacturing method for obtaining well.
Furthermore, another subject of this invention is providing the manufacturing method which can supply said lipid in large quantities. Preferably, it is to provide a production method from a material with experience of eating.
Another object of the present invention is to recycle various unused mussels, discarded mussel viscera, and low-utility terrestrial shellfish to contribute to environmental conservation.
本明細書の記載中、脂質中の脂肪酸の量を「％」で示した場合は、リン脂質及びトリアシルグリセロールなどの脂質を構成する脂肪酸残基を遊離脂肪酸として計算した量及び脂質中に遊離脂肪酸が存在する場合にはその遊離脂肪酸をさらに合わせた質量％を意味する。
また、本明細書中、脂質構成脂肪酸とは、リン脂質及びトリアシルグリセロールなどの脂質成分の脂肪酸残基を遊離脂肪酸と見なしたもの及び、存在する場合には、脂質に含まれる遊離の脂肪酸を合わせていう。また、本明細書において、脂質に含まれる脂肪酸に言及する場合には、他に特に注釈がない限り、この脂質構成脂肪酸のことをいう。
「脂質」とは、脂質を構成する２種以上の脂質成分の混合物であっても、その混合物からさらに単離精製した１つの成分であってもよく、これらは遊離の脂肪酸を成分として含んでいてもよい。
また、軟体部とは、軟体動物の貝殻、軟甲、又は甲を除いた全ての部分をいい、軟体部には、例えば、筋肉、外套膜、生殖巣、及び中腸腺などが含まれるがこれらに限定されない。
In the description of the present specification, when the amount of fatty acid in the lipid is indicated by “%”, the amount of fatty acid residue constituting the lipid such as phospholipid and triacylglycerol is calculated as free fatty acid and released in the lipid. When a fatty acid is present, it means the mass% further combined with the free fatty acid.
In the present specification, the lipid-constituting fatty acid refers to a fatty acid residue of a lipid component such as phospholipid and triacylglycerol as a free fatty acid, and if present, a free fatty acid contained in the lipid. Say together. Further, in the present specification, when referring to a fatty acid contained in a lipid, it refers to this lipid-constituting fatty acid unless otherwise noted.
The “lipid” may be a mixture of two or more lipid components constituting the lipid, or may be a single component further isolated and purified from the mixture. These include free fatty acids as components. May be.
The soft body part refers to all parts except mollusk shells, shells, and shells. Soft body parts include, for example, muscle, mantle, gonad, and midgut gland. It is not limited to these.
本発明者は、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される不飽和脂肪酸を標的として、軟体動物から脂質成分を抽出し、その脂質を分析したところ、腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）の軟体部、例えば、アメフラシ（Aplysia kurodai、アプリシア クロダイ）並びにマガキガイ（Conomurex luchuanus、コノムレックス ルチュアヌス）やミスジマイマイ（Euhadra peliomphala、ユーカドラ ペリオンホラ）等のマキガイの筋肉や内臓にこれらの酸を残基として含む脂質が高い含量で含まれていることを見出した。特に、植（草・藻）食性及び／または雑食性の腹足類の極性脂質には驚くべきことに特異的に高い含量でこれらの脂質が含まれていることを見出した。例えば、アメフラシ内臓では、脂質構成脂肪酸として、アラキドン酸が、粗製脂質中の6%以上（精巣で8.7〜15.0%、その他内臓で6.3〜7.3%）（これら数値の範囲は複数回の試験の結果で得られた数値の最大値と最小値による範囲を表す。本明細書に記載した脂質構成脂肪酸の量を示す数値範囲について以下に同じである。）に達した。従来報告されている動物筋肉や内臓では、この量は１%程度であるの対し、上記の動物においては飛躍的に脂質構成脂肪酸全体に占めるアラキドン酸の割合が高いことを見出した。さらに、精製したリン脂質（ホスファチジルエタノールアミン中では、それぞれ精巣で10.9〜11.0%、卵巣で10.0〜13.1%、中腸腺で6.3〜9.4%、筋肉で6.3〜7.6%、及びその他内臓で11.3〜11.7%で含まれ、ホスファチジルコリン中では、それぞれ精巣で5.9〜8.9%、卵巣で13.3〜13.3%、中腸腺で7.6〜17.2%、筋肉で4.7〜5.0%、及びその他内臓で10.3〜16.9%で含まれ、脂質構成脂肪酸全体に占めるアラキドン酸の割合が高いことも見出した。成熟した卵巣で高い含量のアラキドン酸が得られることから放卵された卵や卵塊を脂質採取の原料として用いることもできる。陸棲のマキガイではこの量はさらに高く、スクミリンゴガイ（Pomacea canaliculata、ポマセア カナリキュラタ）では、ホスファチジルエタノールアミン中で26.9%、ホスファチジルコリン中で18.3%に達していた。同様に、陸棲の貝類では、アラキドン酸の誘導体であるドコサテトラエン酸も、脂質構成脂肪酸全体に占める割合が高いことを見出した。例えば、スクミリンゴガイでは、脂質構成脂肪酸全体に占めるドコサテトラエン酸の割合が、軟体部ホスファチジルエタノールアミン中で15.3〜16.3%、ホスファチジルコリン中で11.9〜13.6%に達していた。 The present inventor extracted a lipid component from a mollusk using an unsaturated fatty acid selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid, and analyzed the lipid. , Gastropods, snails, crustaceans, and cephalopods, squids, eg, Aplysia kurodai, Conulurex luchuanus, Conomurex luchuanus, It has been found that lipids containing these acids as residues are contained in a high content in the muscles and internal organs of snails such as Euhadra peliomphala (Euhadra peliomphala). In particular, it has been found that polar lipids of vegetative (grass / algae) edible and / or omnivorous gastropods contain these lipids in surprisingly specifically high content. For example, in the viscera viscera, arachidonic acid is 6% or more of the crude lipid (8.7 to 15.0% in the testis and 6.3% to 7.3% in the other viscera) as a lipid constituent fatty acid (the range of these values is the result of multiple tests) Represents the range of the maximum value and the minimum value of the numerical values obtained in step 1. The numerical range indicating the amount of lipid-constituting fatty acids described in the present specification is the same below. It has been found that the amount of arachidonic acid in the above-mentioned animals is remarkably high in the total fat-constituting fatty acid, whereas the amount of animal muscle and viscera reported heretofore is about 1%. Furthermore, purified phospholipids (in phosphatidylethanolamine, 10.9 to 11.0% in testis, 10.0 to 13.1% in ovary, 6.3 to 9.4% in midgut gland, 6.3 to 7.6% in muscle, and 11.3 to 3 in other internal organs) In phosphatidylcholine, 5.9 to 8.9% in testis, 13.3-13% in ovaries, 7.6 to 17.2% in midgut glands, 4.7 to 5.0% in muscles, and 10.3 to 16.9% in other internal organs, respectively It has also been found that arachidonic acid is a high percentage of the total lipid constituent fatty acids, and eggs and egg masses that have been ovulated can be used as a raw material for collecting lipids because of the high content of arachidonic acid in mature ovaries. This amount was even higher in land snails, reaching 26.9% in phosphatidylethanolamine and 18.3% in phosphatidylcholine in Pomacea canaliculata. Similarly, in terrestrial shellfish, docosatetraenoic acid, which is a derivative of arachidonic acid, has also been found to have a high proportion of the total lipid constituent fatty acids. The percentage reached 15.3 to 16.3% in soft part phosphatidylethanolamine and 11.9 to 13.6% in phosphatidylcholine.
一方、ドコサペンタエン酸は、海産のマキガイに多く、例えば、マガキガイではドコサペンタエン酸は足及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ13.7〜17.2%、及び16.8〜19.7%、足及びその他内臓ホスファチジルコリン中で、それぞれ17.6〜18.0%、及び13.0〜17.8%含まれていた。公知のタテゴトアザラシ（Phoca groenlandicaフォカ グロエンランディカ）由来成分では4%程度であるの対し、それより高いことを見出した。また、同時にドコサペンタエン酸の前駆体であるイコサペンタエン酸も高含量で含まれることが分かった。さらに、マキガイを、アラキドン酸などの有用脂肪酸やその前駆体を含む藻類や植物を餌として用いて飼育すると、当該マキガイ筋肉や内臓に、天然の採取したマキガイと比較してさらに高含量のアラキドン酸などの有用脂肪酸を蓄積させることができることを見出し、これらの脂質を採取し、必要に応じて精製することによって、上記有用脂肪酸を脂質構成脂肪酸として多く含む脂質を得る方法について検討し、本発明を完成するに至った。 On the other hand, docosapentaenoic acid is abundant in marine mussels.For example, in oysters, docosapentaenoic acid is 13.7 to 17.2% and 16.8 to 19.7% in foot and other visceral phosphatidylethanolamine, respectively, and foot and other visceral phosphatidylcholine. Among them, 17.6 to 18.0% and 13.0 to 17.8% were contained, respectively. It was found that the component derived from the well-known vertical seal (Phoca groenlandica) was about 4%, but higher. At the same time, it was found that icosapentaenoic acid, which is a precursor of docosapentaenoic acid, is also contained in a high content. Furthermore, when snails are bred using algae and plants containing useful fatty acids such as arachidonic acid and their precursors as food, the mussels and internal organs of the snails have a higher content of arachidonic acid than natural snails collected. And a method for obtaining a lipid containing a large amount of the useful fatty acid as a lipid-constituting fatty acid by collecting these lipids and purifying them as necessary. It came to be completed.
本発明は、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択されるいずれか１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質成分を収率よく製造する方法を提供するものである。
また、本発明は、種々の未利用マキガイや廃棄されるマキガイ内臓、低利用の陸生貝類を再資源化し、環境保全に寄与するものである。さらに、本発明は、安定かつ豊富な供給が望まれているドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を高い含量で脂質構成脂肪酸として含む脂質成分を多量に供給することができるその製造方法を提供するものである。
なお、上記のドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質ないし脂質成分とは、具体的には例えば、これらの脂肪酸の１種以上を構成酸残基として含むモノ、ジ、トリアシルグリセロール、及びリン脂質、リン脂質としては特にホスファチジルコリン及びホスファチジルエタノールからなる群から選択される脂質ないし２種以上の脂質成分を含む脂質混合物を典型的にはいうがこれに限定されず、技術常識によって「脂質」と理解される全ての成分が含まれる。さらに、この「脂質」の成分には、前記の遊離脂肪酸が含まれていてもよい。
The present invention provides a method for producing a lipid component containing at least one selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid constituent fatty acid with high yield. Is.
The present invention also contributes to environmental conservation by recycling various unused mussels, discarded mussel viscera, and low-use terrestrial shellfish. Furthermore, the present invention provides a lipid-containing fatty acid with a high content of at least one selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid, for which a stable and abundant supply is desired. The present invention provides a production method capable of supplying a large amount of lipid components.
The lipid or lipid component containing one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid specifically includes, for example, Mono-, di-, triacylglycerol, and phospholipids and phospholipids containing at least one fatty acid as a constituent acid residue, particularly a lipid selected from the group consisting of phosphatidylcholine and phosphatidylethanol, or two or more lipid components The lipid mixture to be included is typically, but not limited to, all components that are understood as “lipids” by common general technical knowledge. Furthermore, the above-mentioned free fatty acid may be contained in the “lipid” component.
また、本発明においては、簡便に高濃度の上記標的脂肪酸を脂質構成脂肪酸として含有する脂質成分を抽出法によって製造できることから、本発明は、これらの脂肪酸に関してはこれらを低濃度で含む脂質しか供給できないという従来の知見を革新的に変えることができた。また、本発明の製造方法に用いる原料である軟体動物はその多くが、食経験がある動物かそれに類似する動物であり、かつ、本発明の製造方法の一態様では、脂質の抽出に飲食用成分の抽出に許容される抽出溶媒、例えばエタノールなどを用いることから、得られた脂質ないし脂質成分は飲食用素材として安全性に問題なく使用できる。
さらに、素材の軟体動物を、ドコサペンタエン酸やアラキドン酸、及び／又はそれらの前駆体であるリノール酸、リノレン酸、オクタデカトリエン酸、オクタデカテトラエン酸、及びイコサジエン酸からなる群から選択される脂肪酸のいずれか１種以上が含まれる植物を餌として飼育することによって、その軟体動物から、より高含量のドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂質構成脂肪酸を含む脂質ないし脂質成分を得ることができる。この発見に基づいて、本発明の脂質の製造方法において、リノール酸、リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、及びイコサジエン酸からなる群から選択される１種以上含む藻類以外の植物、並びに、リノール酸、リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、及びイコサジエン酸からなる群から選択される１種以上を含む、紅藻、褐藻、及び緑藻からなる群から選択される植物を餌として飼育した軟体動物を原料として用いる方法も完成した。この紅藻、褐藻、及び緑藻としては、以下の植物が例示できるが、これらに限られない。ワカメ（Undaria pinnatifida ウンダリア・ピナティフィダ）やカジメ（Ecklonia cava エクロニア・カバ）、アラメ（Eisenia bicyclis エイセニア・ビシクリス）やコンブ（Laminaria spp. ラミナリア種）、ヒバマタ（Fucus evanescens フクス・エバネセンス）などのコンブ目やヒバマタ目などの褐藻類、エゴノリ（Camphylaephora hyopnaeoides カムフィァエホラ・ヒプナエオイデス）やマクサ（Gelidium amansii ゲリヂウム・アマンシイ）、スサビノリ（Porphyra spp. ポルフィラ種）などのウシケノリ目、テングサ目、スギノリ目、イギス目などの紅藻類、アオサ類（Ulva spp. ウルバ種）などの緑藻類が挙げられ、特に、アラキドン酸、オクタデカテトラエン酸、オクタデカトリエン酸、イコサペンタエン酸の１種以上の脂肪酸を多く含むので好ましい。また、藻類以外の植物としては、野菜や果実類が挙げられ、特にトウモロコシ、ニンジンが、脂質含量も高くアラキドン酸の前駆体であるリノール酸を多く含み好ましい。また、それらの皮や茎、葉、芯（軸）等の不可食部を用いることもできる。さらに、飼育した軟体動物を原料として用いた場合、軟体動物に含まれる脂質の含量を上げることができるとともに、水温や餌などの影響による収量の変動を小さくでき、アラキドン酸等の目的とする脂肪酸や目的とする脂肪酸を残基として含む脂質を、常に一定の量確保できる。
Further, in the present invention, since a lipid component containing the above-mentioned target fatty acid at a high concentration as a lipid constituent fatty acid can be easily produced by the extraction method, the present invention supplies only lipids containing these at a low concentration. It was possible to change the conventional knowledge that it was impossible. In addition, mollusks that are raw materials used in the production method of the present invention are mostly animals that have dietary experience or similar animals, and in one embodiment of the production method of the present invention, food and drink are used for lipid extraction. Since an extraction solvent that is acceptable for extraction of components, such as ethanol, is used, the obtained lipid or lipid component can be used safely as a food or drink material.
Furthermore, the mollusc of the material is selected from the group consisting of docosapentaenoic acid and arachidonic acid and / or their precursors linoleic acid, linolenic acid, octadecatrienoic acid, octadecatetraenoic acid, and icosadienoic acid By feeding a plant containing any one or more of the fatty acids to be fed as a bait, from the mollusk, a higher content of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid A lipid or lipid component containing a selected lipid-constituting fatty acid can be obtained. Based on this discovery, in the method for producing lipids of the present invention, plants other than algae containing at least one selected from the group consisting of linoleic acid, linolenic acid, octadecatetraenoic acid, and icosadienoic acid, and linoleic acid A mollusk raised on a plant selected from the group consisting of red algae, brown algae, and green algae containing at least one selected from the group consisting of linolenic acid, octadecatetraenoic acid, and icosadienoic acid The method used as is also completed. The red algae, brown algae, and green algae can be exemplified by the following plants, but are not limited thereto. Wakame (Undaria pinnatifida), Kajime (Ecklonia cava), Alame (Eisenia bicyclis), Kombu (Laminaria spp. Laminaria spp.), Hibamata (Fucus evanescens, etc.) Brown algae such as eyes, Botanic eyes such as Echinori (Camphylaephora hyopnaeoides), Maxa (Gelidium amansii gelidium amansi), Porphyra spp. Porphyra spp. Examples include green algae such as Aosa (Ulva spp. Urba species), and are particularly preferable because they contain a large amount of one or more fatty acids of arachidonic acid, octadecatetraenoic acid, octadecatrienoic acid, and icosapentaenoic acid. Examples of plants other than algae include vegetables and fruits, and corn and carrots are particularly preferable because they have a high lipid content and contain a large amount of linoleic acid, which is a precursor of arachidonic acid. Moreover, inedible parts, such as those skins, stems, leaves, and cores (shafts), can also be used. Furthermore, when using a mollusk raised as a raw material, the lipid content in the mollusc can be increased, and fluctuations in yield due to the effects of water temperature, food, etc. can be reduced, and target fatty acids such as arachidonic acid And a certain amount of lipids containing the desired fatty acid as a residue can always be secured.
同時に、本発明の製造方法に用いる軟体動物には、アラキドン酸の誘導体であるドコサテトラエン酸も脂質構成脂肪酸として相当量含まれていることを見出した。 At the same time, it has been found that mollusks used in the production method of the present invention also contain a considerable amount of docosatetraenoic acid, which is a derivative of arachidonic acid, as a lipid-constituting fatty acid.
これらの有用脂肪酸類を脂質構成脂肪酸として含む脂質は、クロロホルムやメタノールなどの抽出溶媒でもエタノール等の溶媒を用いた場合と同様に効率良く抽出でき、それらの抽出溶媒を用いて得られた脂質は、医薬品、化粧品、及び研究用の試薬としての用途に用いることができる。 Lipids containing these useful fatty acids as lipid-constituting fatty acids can be extracted efficiently with an extraction solvent such as chloroform or methanol, as in the case of using a solvent such as ethanol. Lipids obtained using these extraction solvents are It can be used for pharmaceuticals, cosmetics, and research reagents.
すなわち、本発明は、上記知見に基づいて完成されたものであって、次のとおりの軟体動物のいずれか１種以上を原料として用いる、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を製造する方法に関する。
（１）腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）のいずれかに属する１種以上の軟体動物の軟体部及び／又は卵を原料として用いる、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質の製造方法。
（２）腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）からなる群のいずれかに属する１種以上の軟体動物の軟体部及び／又は卵を原料として用い、前記軟体部及び／又は卵から脂質を有機溶媒で抽出してドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択されるいずれか１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質成分を採取することを特徴とする（１)に記載の製造方法。
（３）腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）のいずれかに属する１種以上の軟体動物の軟体部及び／又は卵を原料として用いて有機溶媒で抽出をし、さらに抽出物をクロマトグラフィー処理し、有機溶媒によって分画してドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を得ることを特徴とするドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質の製造方法。
（４）腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）のいずれかに属する１種以上の軟体動物の軟体部及び／又は卵を原料として用いて、エタノール、含水エタノール、アセトン、及びヘキサンからなる群から選択される１種以上の溶媒で抽出をし、抽出物をエタノール、含水エタノール、アセトン、及びヘキサンからなる群から選択される１種以上の溶媒でクロマトグラフィー処理及び分画して、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を採取することを特徴とするドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を含む脂質の製造方法。
（５）用いる軟体動物が、上記の腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、及びヒザラガイ綱よりなる群から選択される１種以上の貝である上記（１）〜（３）のいずれかの製造方法。
（６）上記の貝が、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、オクタデカテトラエン酸、及びオクタデカトリエン酸からなる群から選択される１種以上を含む紅藻、褐藻、及び緑藻、並びにリノール酸、リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、及びイコサジエン酸からなる群から選択される１種以上を含む藻類以外の植物のうちの１種以上を餌として用いて飼育した、腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、及びヒザラガイ綱よりなる群から選択される１種以上の貝である上記（１）から（４）のいずれかの製造方法。
That is, the present invention has been completed based on the above knowledge, and uses docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetra using any one or more of the following mollusks as raw materials. The present invention relates to a method for producing a lipid containing at least one selected from the group consisting of enoic acids as a lipid-constituting fatty acid.
(1) One or more mollusks belonging to any one of gastropods (Makigaidae), axopoda (Nikagaidae), Hirasagidae, and cephalopods (Squididae) are used as raw materials. A method for producing a lipid comprising, as a lipid-constituting fatty acid, one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid.
(2) One or more mollusk molluscs and / or eggs belonging to any of the group consisting of gastropods (spotted snails), axpods (spotted snails), clams, and cephalopods (squid) As a raw material, lipid is extracted from the soft body part and / or egg with an organic solvent and selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid. The production method according to (1), wherein a lipid component contained as a constituent fatty acid is collected.
(3) Using as a raw material the molluscan part and / or egg of one or more mollusks belonging to any of gastropods (Spotted squirrel), axpods (Spotted squirrel), Hizaratai, and cephalopods (Squid) One or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid. A method for producing a lipid comprising one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid .
(4) Using as a raw material the molluscan part and / or egg of one or more mollusks belonging to any of gastropods (Makigaidae), axopoda (Nikagaidae), Hizaragaidae, and cephalopods (squid class) And extracting with one or more solvents selected from the group consisting of ethanol, hydrous ethanol, acetone, and hexane, and the extract is selected from the group consisting of ethanol, hydrous ethanol, acetone, and hexane. Collecting a lipid containing one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid. One or more selected from the group consisting of characterized docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid Method of manufacturing a lipid, including.
(5) The molluscs to be used are one or more kinds of shellfish selected from the group consisting of the gastropods (Makigaidae), the axpods (Mysidae), and the Hirasagidae of (1) to (3) above Either manufacturing method.
(6) Red algae, brown algae, green algae, and linoleic acid, linolen, wherein the shellfish includes at least one selected from the group consisting of arachidonic acid, icosapentaenoic acid, octadecatetraenoic acid, and octadecatrienoic acid Gastropods (Apisidae), axopoda, reared using one or more of non-algae plants containing at least one selected from the group consisting of acids, octadecatetraenoic acid, and icosadienoic acid as food The manufacturing method according to any one of (1) to (4) above, wherein the shellfish is one or more shellfish selected from the group consisting of (Spotted mussels) and Chestnuts.
本発明の脂質の製造方法によれば、腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）のいずれかに属する１種以上の軟体動物の軟体部及び／又は卵を原料として効率よくドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を得ることができる。この結果、従来、タテゴトアザラシに微量存在しているとされていたドコサペンタエン酸や微生物を用いて供給されていたアラキドン酸を脂質構成脂肪酸として含む脂質を安全な食品素材から多量に簡便に効率よく製造することができる。本発明の方法によって得られるドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質は、たとえ粗製油であっても、充分な量の上記の有用脂肪酸を脂質構成脂肪酸として含有しているため、食品素材、医薬品素材、及び化粧品素材等として広く用いることができるし、また、研究試薬としても用いることができる。さらに、アフリカマイマイ及びスクミリンゴガイなどの軟体部及び／又は卵を原料に用いると、従来、害虫として駆除され、用途のほとんどなかったそれらの動物の軟体部及び／又は卵を有用資源として利用することができる。 According to the method for producing lipids of the present invention, the soft body part of one or more molluscs belonging to any one of gastropods (Makigaidae), axopodaes (Mysidae), Hirasagidae, and cephalopods (Squididae) In addition, a lipid containing one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid can be efficiently obtained using eggs as raw materials. As a result, a large amount of lipids that contain docosapentaenoic acid and arachidonic acid that have been supplied using microorganisms as a lipid component fatty acid, which have been conventionally present in small amounts in vertical seals, can be easily and efficiently produced in large quantities from safe food materials. Can be manufactured. The lipid containing one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid obtained by the method of the present invention as a lipid-constituting fatty acid, even if it is a crude oil, Since a sufficient amount of the above-mentioned useful fatty acid is contained as a lipid-constituting fatty acid, it can be widely used as a food material, a pharmaceutical material, a cosmetic material, etc., and can also be used as a research reagent. Furthermore, when soft body parts and / or eggs such as African mussels and scallop apple mussels are used as raw materials, the soft body parts and / or eggs of those animals that have conventionally been exterminated as pests and have little use can be used as useful resources. it can.
本発明における腹足類（マキガイ綱）としては、以下に記す巻き貝が例示される。オキナエビスガイ（Mikadotrochus beyrichii ミカドトロチュス ベイリッチイ）、リュウグウオキナエビスガイ（Entemnotrochus rumphii エンテムノトロチェス ルムフィイ）等のオキナエビスガイ（Archaeogastropoda アーキアガストロポーダ）類、マダカアワビ（Haliotis madaka ハリオティス マダカ）、メガイアワビ（Haliotis gigantea ハリオティス ギガンテア）、ミミガイ（Haliotis asinina ハリオティス アシニナ）、アカネアワビ（Haliotis rufescens ハリオティス ルフェスセンス）などのミミガイ（Haliotidae ハリオティダエ）類、カサガイ（Cellana mazatlandica セラナ マザトランディカ）、ヨメガカサガイ（Cellana toreuma セラナ トレウマ）、トラフザラガイ（Cellana testudinaria セラナ テストディナリア）等のツタノハガイ（Patellidae パテリダエ）類、ウノアシガイ（Patelloida saccharina パテロイダ サッカリナ）、アオガイ（Notoacmea schrenckii ノトアメア シュレネキイ）、シロガイ（Collisella cassis コリセラ カッシス）、スゲガサガイ（Lepeta lima レペタ リマ）等のユキノカサガイ（Acmaeidae アクマエイダエ）・シロガサガイ（Lapetidae ラペティダエ）類、キサゴ（Umbonium costatum ウムボニウム ソスタツム）、ダンベイキサゴ（Umbonium giganteum ウムボニウム ギガンテウム）、ナツモモガイ（Clanculus margaritarius クランキュルス マルガリタリウス）、マキアゲエビスガイ（Turcica coreensis ツルシカ コレーンシス）、ギンエビスガイ（Ginebis argenteonitens ギネビス アルゲンテオニテンス）、オオコシダカガンガラ（Omphalius pfeifferi オムファリウス フェイフェリ）、コシダカガンガラ（Omphalius rusticus オムファリウス ルスチクス）、ギンタカハマガイ（Tectus pyramis テクツス ピラミス）、サラサバテイラ（Tectus maximus テクツス マキシムス）、ニシキウズガイ（Trochus maculatus トロチュス マキュラツス）、クボガイ（Chlorostoma lischkei クロロストマ リスクケイ）等のニシキウズガイ類、イシダタミガイ（Monodonta labio モノドンタ ラビオ）等のニシキウズガイ類（Trochidae）、アマオブネガイ（Nerita albicilla ネリタ アルビシラ）、アマガイ（Nerita japonica ネリタ ジャポニカ）、カノコガイ（Clithon sowerbianus クリソン ソエルビアヌス）等のアマオブネガイ類、サザエ（Batillus cornutus バチルス コルヌッツス）、タツマキサザエ（Turbo reevei ツルボ レベイ）、チョウセンサザエ（Marmarostoma argyrostoma マルマロストマ アルジロストマ）、ヤコウガイ（Lunatica marmorata ルナティカ マルマラタ）等のリュウテンサザエ類(Turbinidae ツルビニダエ)、オオタニシ（Cipangopaludina japonica シパンゴパルヂナ ジャポニカ）、マルタニシ（Cipangopaludina chinensis シパンゴパルヂナ チネンシス）等のタニシ類（Vivipariidae ビビパリイダエ）、カワニナ（Semisuleospira libertina セミスレオスピラ リベルチナ）、クロダカカワニナ（Semisulcospira kurodai セミスレオスピラ クロダイ）等のカワニナ類（Pleuroceridae プレウロセリダエ）、タマキビガイ（Littorina brevicula リットリナ ブレビクラ）、クロタマキビガイ（Neritorema sitkana ネリトレナ シトカナ）等のタマキビガイ類（Littorinidae リトリニダエ）、ウミニナ（Batillaria multiformis バチラリア マルチフォルミス）等のウミニナ類（Potamididae ポタミヂアエ）、オニノツノガイ（Cerithium modulosum セリシウム モヅロスム）等のオニツノガイ類（Cerithidae セリシダエ）、クモガイ（Lambis lambis ランビス ランビス）、スイジガイ（Harpago chiragra ハルパゴ チラグラ）、サソリガイ（Lambis crocata ランビス クロカタ）等のスイショウガイ類（Stombidae ストンビダエ）、ハチジョウダカラガイ（Mauritia mauritiana マウリチア マウリチアナ）、ナンヨウダカラガイ（Callistocypraea aurantium カリプトシプラエア アウランチウム）等のタカラガイ類（Cypraeidae シプラエイダエ）、アメフラシ（Aplysia kurodai アプリシア クロダイ）、フウセンアメフラシ（Notarchus punctatus ノタルチュス プンクタツス）、タツナミガイ（Dolabella auricula ドラベラ アウリクラ）等のアメフラシ類（Anaspidae アナスピダエ）、エダウミウシ（Kaloplocamus ramosus カロプロカムス ラモサス）、ムカミノデウミウシ（Pteraeolidia ianthina テラエオリディア イアンチナ）、オオミノウミウシ（Aeolidiella papillosa アエリヂエラ パピロサ）等のウミウシ類（Nudibranchia ヌディブランキア）、イソアワモチ（Oncidium verruculatum オンシヂウム ベルキュカツム）類、モノアラガイ（Radix japonicaラディックス ジャポニカ）、オオモノアラガイ（Radix megasoma ラディックス メガソーマ）等のモノアラガイ類（Basommatphora バソマトホラ）、オカモノアラガイ類（Succineidae スッシネイダエ）、スルガギセルガイ（Decolliphaedusa surugensis デコリファエデュサ スルガエンシス）等のキセルガイ類（Crausiliidae クラウシリイダエ）、ミスジマイマイ（Euhadra peliomphala ユーハドラ ペリオムファラ）、アフリカマイマイ（Achatina fulica アチャチナ フリカ）、シマアフリカマイマイ（Achatina zebra アチャチナ ゼブラ）、ナメクジ（Incilaria bilineata インシラリア ビリネアタ）、ヤマナメクジ（Incilaria fruhstorferi インシナリア フルストルフェリ）、ダイオウマイマイ（Ryossota otahietana リョソタ オタヘタナ）、ナミマイマイ（Euhadra sandai ユーハドラ サンダイ）、アワマイマイ（Euhadra awaensis ユーハドラ アワエンシス）、サラセンマイマイ（Otala galena オタラ ガレナ）、エスカルゴ（Helix pomatia ヘリックス ポマテア）、キブツネジレガイ（Gonaxis kibweziensis ゴナキス キブジエンシス）、プチグリ（Helix aspersa ヘリックス アスペルサ）、オオアカマイマイ（Strophocheilus popelairianus ストロフォチェイルス ポペライリアヌス）などのマイマイ類、スクミリンゴガイ（ジャンボタニシ、Pomacea canaliculata ポマセア カナリキュラタ）、タニシモドキ（Pila polita ピラ ポリタ）等のリンゴガイ類（Ampullariidae アムプラリイダエ）、ツノガイ類（Scaphopoda スカフォポーダ）を例示することが出来る。 Examples of gastropods in the present invention include snails described below. Mikadotrochus beyrichii Mikadotrochus beyrichii, Entemnotrochus rumphii Entemnotroches rumphii, etc. ), Miri mussel (Haliotis asinina), Akane abalone (Haliotis rufescens), limpet (Cellana mazatlandica serrana), Cellana toreuma serra (Dinaria), etc. (Patellidae), Unasashigai (Patel) loida saccharina pateroida saccharina, green oyster (Notoacmea schrenckii), white scallop (Collisella cassis) Sostatum, Umbonium giganteum Umbonium giganteum, Crunculus margaritarius Cranculus margaritarius phi peus , Omphalius rusticus ), Gintaka Hamagai (Tectus pyramis Tectus pyramis), Sarasabateira (Tectus maximus Tectus Maximus), Nishikizugai (Trochus maculatus), Mongolia (Chlorostoma lischkei) Japanese mussels (Trochidae), Nerita albicilla (Nerita albicilla), Aga mussels (Nerita japonica Nerita japonica), scallops (Clithon sowerbianus), Sazae (Batillus corus) Tulbo lebei, butterfly frog (Marmarostoma argyrostoma), mussel (Lunatica marmorata) Ryuten Sazae such as Rata (Turbinidae turbinidae), Otanishi (Cipangopaludina japonica) Spango Pardina japonica, Martiani (Cipangopaludina spiren sina) kurodai Semisreospira (Pleuroceridae pleuurocerididae), periwinkle (Littorina brevicula), periwinkle (Neritorema sitkana Neritorena multis) (Littorine) Umininas (Potamididae), Onitsu nogai (Cerithium modulosum) Cypridids such as Rothum (Cerithidae Cerciidae), spiders (Lambis lambis), swordfish (Harpago chiragra Harpago Chiragura), scorpions (Lambis crocata) mauritiana Mauritia, Callistocypraea aurantium, Calyptospiraea aurantium, and other species ), Etc. (Anaspidae anaspidae), Eudaumiushi (Kaloplocamus ramosus caroprocamus ramosus), mukaminode Sea slugs (Nudibranchia nudibranchia) such as Miyu (Pteraeolidia ianthina), Aeolidiella papillosa (Aeolidiella papillosa), Isoawamochi (Oncidium verruculatum), Radix jap Mega-soma and other mono-aragai (Basommatphora), okamono-aragai (Succineidae sushineidae), Sulgagi-selgai (Decolliphaedusa surugensis), Xelgai (Crausiliidae) pel dra Africa Maimai (Achatina fulica), Shima Africa Maimai (Achat) ina zebra Achachina zebra), Slug (Incilaria bilineata Insilaria bilineata), Salamander (Incilaria fruhstorferi) Maimai (Otala galena Otara Galena), Escargot (Helix pomatia helix pomatea), Kibbutsujiregai (Gonaxis kibweziensis gonakis kibujiensis), Petit guri (Helix aspersa helix Aspersa), Oakamaimai (Strophocheilus popelairian squirmy mussel) Jumbo snail, Pomacea canaliculata (Pomacea canariculata), snail Examples include apple oysters (Ampullariidae) and horn oysters (Scaphopoda) such as doki (Pila polita).
また、ヒザラガイ綱としては、ヒザラガイ（Acanthopleura japonica アカントプレウラ ジャポニカ）、ババガゼ（Placiphorella stimpsoni プラシフォレラ スチムプソニ）、ニシキヒザラガイ（Ornithochiton hirasei オルニソキートン ヒラセイ）、オニヒザラガイ（Acanthopleura gemmata アカントプレウラ ゲマタ）、エゾヤスイリヒザラガイ（Lepidozona albrechtii レピドゾナ アルブレチ）、オオバンヒザラガイ（Cryptochiton stelleri クロプトキートン ステレリ）、クサズリガイ（Rhyssoplax kurodai リソプラックス クロダイ）等のヒザラガイ（Polyplacophora ポリプラコフォレ）類、斧足類（ニマイガイ綱）には、マシジミ（Corbicula leana コルビキュラ レアナ）等のシジミ類（Corbiculidae コルビキュリダエ）、ツキガイ（Codakia tigerina コダキア チゲリナ）、ウメノハナガイ（Pillucina pisidium ピルシナ ピシヂウム）等のツキガイ類（Lucinidae ルシニダエ）、ミドリガイ（Smaragdinella calyculata スマラグヂネラ カリキュラタ）等のブドウガイ類（Cephalaspidae セファラスピダエ）、ザルガイ（Vasticardium burchardi バスチカルヂウム ブルチャルディ）、イシカゲガイ（Clinocardium buellowi クリノカルヂウム ブエロイ）等のザルガイ類（Cardiidae カルヂイダエ）、ヒメシャコガイ（Tridacna crocea トリダクナ クロセア）、シラナミガイ（Tridacna maxima トリダクナ マキシマ）等のシャコガイ類（Tridacnidae トリダクニイダエ）、ウチムラサキガイ（Saxidamus purparatus サキシダムス プルパラツス）、アサリ（Ruditapes phillipinarum ルヂタペス フィリピナラム）、ハマグリ（Meretrix lusoria メレトリックス ルソリア）、コタマガイ（Gomphina melanaegis ゴムフィナ メラナエギス）、カガミガイ（Phacosoma japonucum ファコソマ ジャポニクム）、ホンビノスガイ（Mercenaria mercenaria メルセナリア メルセナリア）、スダレガイ（Pophia lischkei ポフィア リスチケイ）等のマルスダレガイ類（Veneridae ベネリイダエ）、アカガイ（Scapharea broughtonii スカファレア ブログトニイ）、サルボウガイ（Scapharea subcrenata スカファレア サブクレナタ）等のフネガイ類（Archidae アーキダエ）、マガキ（Crassostrea gigas クラスオストレア ギガス）、イタボガキ（Ostrea denselamellosa オストレア デンセラメロサ）、ヨーロッパガキ（Ostrea edulis オストレア エデュリス）等のイボタガキ類（Ostreidae オストレイダエ）、ホタテガイ（Mizhopecten yessoensis ミズホペクテン エゾエンシス）、ヒオウギガイ（Chlamys nobilis チュラミス ノビリス）、ニシキガイ（Chlamys squamata チュラミス スクアマタ）、ツキヒガイ（Amusium japonicum アムシウム ジャポニカム）等のイタヤガイ類（Pectiniidae ペクティニダエ）、ウバガイ（Pseudocardium sachalinense シュウドカルヂウム サチャリネンシス）、バカガイ（Mactra chinensis マクトラ チネンシス）、オオトリガイ（Lutraria maxima ルトラリア マキシマ）、ミルクイガイ（Tresus keenae トレスス キーナエ）等のバカガイ類（Mactriidae マクトリイダエ）、アコヤガイ（Pinctada fucata ピンクタダ フカタ）、シロチョウガイ（Pinctada maxima ピンクタダ マキシマ）、クロチョウガイ（Pinctada margaritifera ピンクタダ マルガリチフェラ）、マベガイ（Pteria penguin プテリア ペングイン）等のウグイスガイ類（Pteriidae プテリイダエ）、タイラギ（Atrina pectinata アトリナ ペクチナタ）等のハボウキガイ類（Pinnidae ピニダエ）、ムラサキイガイ（Mytilus galloprovincialis ミチルス ガロプロバンシアリス）、カワヒバリガイ（Limnoperna fortunei リムノペルナ フォルツネイ）等のイガイ類（Mytilidae ミチリダエ）、ドブガイ（Anodonta woodiana アノドンタ ウーディアナ）、カラスガイ（Cristaria plicata クリスタリア プリカタ）、イケチョウガイ（Hyriopsis schlegeli ヒリオプシス シュレゲリ）等のサンカクガイ類（Paleoheterodonta パレオヘテロドンタ）、アゲマキガイ（Sinonovacula constricta シノノバクラ コンストリクタ）、マテガイ（Solen strictusソレン ストリクトス）等のマテガイ類（Solenidae ソレニダエ）、オオノガイ（Mya arenariaミア アレナリア）類（Myidae ミイダエ）等を例示することができる。 As for the clam class, Acanthopleura japonica Acanthopleura japonica, Babagaze (Placiphorella stimpsoni), Nishikihisaragai (Ornithochiton hirasei), Rhissoplax kurodai, lysoprax kurodai, etc. Lea (Corbiculidae Corbiculidae), Tsukigai (Codakia tigerina), Umenohanagai (Pil) Lucinidae lucina pisidium, etc. (Lucinidae lucinidae), Smaragdinella calyculata, etc. Cardiidae, Tridacna crocea Tridacna crodia, Tridacna maxima Tridacna maxima Tridacna maxima lusoria meletricks solitary mussel (Gomphina melanaegis) Marsdalegai (Veneridaeca), Venidaeca (Peneriasca) Scallops (Archidae archidae), oysters (Crassostrea gigas class Ostrea gigas), lobsters (Ostrea denselamellosa), European oysters (Ostrea edulis ostreaenis) Ezoensis), Chlamys nobilis Churamys nobilis ), Japanese mussel (Chlamys squamata Chlamys squamata), Japanese mussel (Pectiniidae) such as Amusium japonicum (Pectiniidae), Japanese oyster (Pseudocardium sachalinense), Maca Large mussel (Lutraria maxima), mussels (Mactriidae), pearl oysters (Pinctada fucata), white moths (Pinctada maxima pink) ), Mussels (Pteria penguin) and other mussels (Pteriidae pteriidae), tiger oysters (Atrina pectinata Atrina) Mussels such as Pectinida (Pinnidae Pinidae), mussels (Mytilus galloprovincialis), limpets (Limnoperna fortunei) such as Limnoperna fortunei (Mytilidae militidae) dont C Mole oysters (Paleoheterodonta pareoheterodonta) such as rear pricata, Hyriopsis schlegeli (Hyriopsis schlegeli); Examples include Mya arenaria (Myidae).
さらに、頭足類（イカ綱）としては、コウイカ（Sepia esculenta セピア エスキュレンタ）、カミナリイカ（Sepia lycidas セピア リシダス）、シリヤケイカ（Sepiella japonica セピエラ ジャポニカ）、モンゴウイカ（Sepia afficinalis セピア アフィシナリス）、コブシメ（Sepia latimanus セピア ラチナムス）、ダンゴイカ（Sepiola birostrata セピオラ ビロストラタ）、ミミイカ（Euprymna morsei ユープリムナ モルセイ）、アオリイカ（Sepioteuthis lessoniana セピオテウチス レソニアナ）、ヤリイカ（Loligo bleekeri ロリゴ ブリーケリ）、ケンサキイカ（Loligo edulis ロリゴ エデュリス）、ジンドウイカ（Loligo japonica ロリゴ ジャポニカ）、スルメイカ（Todarodes pacificus トダロデス パシフィクス）、トビイカ（Stenoteuthis oualaniensis ステノテウチス オウアラニエンシス）、ソデイカ（Thysanoteuthis rhombus チサノテウチス ロンブス）、ツメイカ（Onychoteuthis borealijaponica オニコテウチス ボレアリジャポニカ）、ホンツメイカ（Onychoteuthis banksii オニコテウチス バンクシイ）、ホタルイカ（Watasenia scintillans ワタセニア シンチランス）、アカイカ（Ommastrephes bartramii オマストレフェス バルトラミイ）、アメリカオオアカイカ（Dosidicus gigas ドシディクス ギガス）、スジイカ（Eucleoteuthis luminosa エウクレオチス ルミノサ）、タコイカ（Gonatopsis borealis ゴナトプシス ボレアリス）等のイカ類、イイダコ（Octopus ocellatus オクトパス オケラトス）、スナダコ（Octopus aegina オクトパス アエギナ）、マダコ（Octopus vulgaris オクトパス ブルガリス）、マメダコ（Octopus brenice オクトパス ブレニセ）、テナガダコ（Octopus minor オクトパス マイナー）、ヤナギダコ（Octopus conispadiceus オクトパス コニスパヂセウス）、エゾクモダコ（Octopus araneoides オクトパス アラネオイデス）、ミズダコ（Octopus dofleini オクトパス ドフレイニ）、ワモンダコ（Callistoctopus cyanea カリストオクトパス シアネア）、チヒロダコ（Benthoctopus frofundorum ベントオクトパス フロフンドルム）、シマダコ（Octopus ornata オクトパス オルナタ）等のタコ類を挙げることができる。 Furthermore, cephalopods (squid class) include cuttlefish (Sepia esculenta sepia esculenta), cuttlefish (Sepia lycidas sepia ricidas), silla squid (Sepiella japonica sepiela japonica), mongo squid (Sepia afficinalis sepia aphisimais sepia aphisinais sepia aphisinais) Latinum, Dango squid (Sepiola birostrata), Mimi squid (Euprymna morsei Euprymna Morsei), Sika squid (Sepioteuthis lessoniana Sepioteutis Lesonia), Loligo bleekeri Loligo briseli , Squid (Todarodes pacificus Todarodes pacificus), squid (Stenoteuthis oualaniensis) , Green squid (Thysanoteuthis rhombus) Squids such as Dosidicus gigas), Squid squid (Eucleoteuthis luminosa), Octopus ocellatus (Gontopsis borealis) (Octopus brenice Octopus brenice) Topas minor), willow octopus (Octopus conispadiceus octopus conispadiceus), Ezo octopus (Octopus araneoides octopus araneoides), octopus dofleini octopus octopus octopus An octopus such as Octopus Ornate) can be mentioned.
これらの軟体動物には、ヒザラガイ、キサゴ、カサガイ、ウミウシ類やイカ・タコ類のように海洋に生棲する生物、シジミ等のように汽水に生息する生物、或いはオオタニシ、モノアラガイ、及びカワニナのように淡水に生息する生物、エスカルゴ及びアフリカマイマイのように陸上に生息する生物がある。本発明では、これらいずれかの軟体動物の軟体部及び／又は卵を用いることができ、その１種だけでなく２種以上を併用することができる。これら軟体動物のうち、植食性の腹足類であるカサガイやアメフラシ、並びにウミウシ類にはドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸を脂質構成脂肪酸として高い含量で含むグリセリド脂質が多く、その軟体部のすべての部位を原料として用いることができる。また、ヒザラガイ、オオバンヒザラガイ、及びムラサキイガイ等の軟体部にも、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸を脂質構成脂肪酸として高い含量で含むグリセリド脂質が多く、本発明の製造方法のための好ましい原料として用いることができる。なお、貝類の場合、軟体部としては、足、外套膜、閉穀筋、生殖巣、その他の内蔵のいずれを用いてもよいが、これらの２種以上の組み合わせ、あるいはこれらを全て用いてもよい。また、頭足類の場合、外套膜、腕部、触腕、頭部、及び内臓のいずれを用いてもよいが、これらの２種以上の組み合わせ、あるいはこれらを全て用いてもよい。また、それらの生物の卵を用いてもよい。特にサザエやアワビなどの筋肉部を採取した後の軟体部内臓、スクミリンゴガイ、及び／又はアフリカマイマイから本発明の方法によりドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂肪酸を高い含量で脂質構成脂肪酸として含むグリセリド脂質、又はドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂肪酸を高い含量で含む脂肪酸の混合物を採取した場合には、従来は廃棄されている資源や害虫として駆除されている生物を再資源化することができ、これらを抽出素材として用いる脂質の製造方法が実用化された場合、環境や農業の保全に寄与するばかりでなく、上述した有用脂肪酸成分の含量が多い点からみても明らかに有利である。また、これらの植食性の腹足類を養殖によって飼育し、その場合にそれらの餌である海藻や陸上植物として、ドコサペンタエン酸やアラキドン酸、及び／又はそれらの前駆体であるリノール酸、リノレン酸、オクタデカトリエン酸、オクタデカテトラエン酸、及びイコサジエン酸からなる群から選択される脂肪酸のいずれか１種以上が含まれる海藻や陸上植物を餌として用いることよって、当該腹足類の軟体部にはより高濃度のドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂質構成脂肪酸を含む脂質が蓄積されるため、さらに効率良くそこからドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂肪酸を脂質構成脂肪酸として高い含量で含むグリセリド脂質を採取したり、特定の脂肪酸が脂質構成脂肪酸として濃縮されたグリセリド脂質を採取することができる。 These mollusks include living organisms that live in the ocean, such as crab, scorpion, limpet, squid and octopus, organisms that inhabit brackish water, such as rainbow trout, or giant snails, monoaragai, and kinana Some organisms inhabit freshwater, such as escargots and African maimai. In the present invention, any of these molluscan molluscs and / or eggs can be used, and not only one but also two or more can be used in combination. Among these molluscs, herbivorous gastropods, limpets and scallops, and sea slugs, have many glyceride lipids that contain docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid in high content as lipid constituent fatty acids Any part of the soft body part can be used as a raw material. In addition, soft body parts such as oyster oysters, coleopterus mussels, and mussels have many glyceride lipids containing docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as lipid-constituting fatty acids in a high content. It can be used as a preferred raw material for the process. In the case of shellfish, as the soft body part, any of the foot, mantle, cereal muscle, gonad, and other built-in parts may be used, or a combination of two or more of these or all of them may be used. Good. In the case of cephalopods, any of the mantle, arm, tentacles, head, and internal organs may be used, or a combination of two or more of these or all of them may be used. Moreover, you may use the egg of those living things. From the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid by the method of the present invention from the internal organs of the soft body after collecting muscle parts, such as turban shell and abalone, and / or African mussel A glyceride lipid containing a high content of selected fatty acids as a lipid constituent fatty acid, or a mixture of fatty acids containing a high content of fatty acids selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid When collected, it is possible to recycle resources that have been disposed of as waste or pests in the past, and when lipid production methods using these as extraction materials are put to practical use, the environment and agriculture Not only contributes to the conservation of the It is clearly advantageous. In addition, these herbivorous gastropods are bred by aquaculture, in which case docosapentaenoic acid and arachidonic acid and / or their precursors linoleic acid and linolenic acid are used as seaweed and land plants as their food. , Using a seaweed or land plant containing at least one fatty acid selected from the group consisting of octadecatrienoic acid, octadecatetraenoic acid, and icosadienoic acid as a bait, Lipids containing lipid constituent fatty acids selected from the group consisting of higher concentrations of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid are accumulated, so that docosapentaenoic acid and arachidon are more efficiently produced therefrom. A fatty acid selected from the group consisting of acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid Or taken glyceride lipid containing a high content of the acid, it is possible to identify the fatty acid collecting concentrated glyceride lipid as lipid constituent fatty.
本発明では、これらの腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）のいずれか１種以上の軟体動物の軟体部をそのまま及び／または煮熟し、エタノール等の食品用の抽出溶媒として許容される有機溶媒及び／またはその他の種々の有機溶媒で抽出し、必要に応じてさらにクロマトグラフィー処理し、ｎ−ヘキサン、アセトン、エタノール、含水エタノール等食品に用いることのできる有機溶媒又はその他の有機溶媒を用いて分画して、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂肪酸を脂質構成脂肪酸として含む脂質のうち、中性脂質であるトリグリセリド、極性脂質であるリン脂質画分等を別々に又は混合物として採取し、さらに必要に応じて精製することによってドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸のいずれか１種以上を脂質構成脂肪酸として多く含む脂質を効率良く得ることができる。
上記の抽出溶媒としては、食品に用いることのできる前述の具体的な溶媒以外に、メタノール、ブタノール、ｔ−ブタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、及びその他のアルコール類、クロロホルム、ジクロロメタン、ジクロロエタン、トリクロロエタン、及びその他のハロゲン化炭化水素、酢酸エチル、並びにエーテル等が用いられる。また、抽出溶媒として超臨界二酸化炭素を用いてもよい。医薬品素材や化粧品素材として用いる脂質を得ることを目的とする場合、これらの溶媒を単独で用いてもよいし、数種の溶媒を混合して用いてもよい。中でも、エタノールや含水エタノール、アセトン、ｎ−ヘキサンは、飲食用に用いる脂質を抽出するために用いる溶媒として好ましく、特に、エタノールや含水エタノールが、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される脂肪酸を脂質構成脂肪酸として含む極性脂質を高濃度で溶解することができるので好ましい。
In the present invention, the molluscan part of one or more molluscs of these gastropods (Makigaidae), axopoda (Nikagaidae), Hirasaragae, and cephalopods (Squididae) are used as they are and / or boiled. And extraction with an organic solvent that is acceptable as an extraction solvent for food such as ethanol and / or other various organic solvents, and further chromatographic treatment as necessary, n-hexane, acetone, ethanol, hydrous ethanol, etc. Fatty acid selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid by fractionation using an organic solvent that can be used in foods or other organic solvents Of the lipids contained, triglycerides, which are neutral lipids, and phospholipid fractions, which are polar lipids, are collected separately or as a mixture. It can docosapentaenoic acid, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, and of docosapentaenoic efficiently obtaining a lot containing lipid as any one or more lipid constituent fatty tetra enoate by purification as needed.
As the extraction solvent, in addition to the above-mentioned specific solvents that can be used for food, methanol, butanol, t-butanol, propyl alcohol, isopropyl alcohol, and other alcohols, chloroform, dichloromethane, dichloroethane, trichloroethane, And other halogenated hydrocarbons, ethyl acetate, ether and the like. Further, supercritical carbon dioxide may be used as the extraction solvent. When the purpose is to obtain lipids used as pharmaceutical materials and cosmetic materials, these solvents may be used alone or in combination with several solvents. Among them, ethanol, hydrous ethanol, acetone, and n-hexane are preferable as a solvent used for extracting lipids used for eating and drinking. In particular, ethanol and hydrous ethanol are docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosa. A polar lipid containing a fatty acid selected from the group consisting of tetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid can be dissolved at a high concentration, which is preferable.
また、上記のクロマトグラフィー処理は、充填剤としてシリカゲル、アルミナ、フロリジル等から選択される充填剤を用いることができ、また、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）処理する場合は充填剤としてシリカゲル（順相）やＣ１８、フェニル、及び／又はＣＮ等が化学結合したシリカゲル（逆相）等を用いて行うことができる。 In the above chromatography treatment, a filler selected from silica gel, alumina, florisil, etc. can be used as a filler. In the case of high performance liquid chromatography (HPLC) treatment, silica gel (normal phase) is used as a filler. ), C18, phenyl, and / or CN or the like, which is chemically bonded to the silica gel (reverse phase).
ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質の製造は、上記の軟体動物の軟体部及び／又は卵を生のままおよび／または煮熟、すなわち熱湯中で煮沸 し、冷却後取り出し、そのまま／又は乾燥させてから、エタノールや含水エタノール等の有機溶媒に浸漬し、破砕し、さらに必要に応じて同様の有機溶媒をさらに加えてドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸のうち１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を抽出し、次に濃縮して粗製脂質を得る。生のまま抽出しても十分量のドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸のうちの１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を得ることができるが、原料を水等で煮熟することにより、タンパク質を固化させ、且つ原料から水を除く効果があり、その結果、次の抽出工程において目的とする脂質をより効率よく抽出できる。また、得られた原料を抽出前に凍結乾燥すれば、水分をさらに除き、より効率よくエタノールなどの抽出溶媒を用いて脂質を抽出できる。次いで、得られた粗製脂質をクロマトグラフィー処理し、ｎ−ヘキサン、アセトン、エタノール、又は含水エタノール等の有機溶媒を用いて成分を分画し、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸のいずれか１種以上を脂質構成脂肪酸として高濃度で含む各脂質クラスを得る。粗製脂質及び／又は各脂質クラスに含まれるドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸の同定は、粗製脂質または精製各脂質を、メチルエステル化し、標品のドコサペンタエン酸メチル、アラキドン酸メチル、イコサペンタエン酸メチル、及びドコサテトラエン酸メチルと、ガスクロマトグラフィーのクロマトグラム中の保持時間が一致することで行うことができる。また、ガスクロマトグラフィー−質量分析装置（ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器）で分子量やその分子フラグメントからも化合物の同定を行うことができる。ここで、本発明の製造方法によれば、成分分画及び／又は精製をする前の粗製脂質であっても、飲食用としては充分に高い濃度のドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸を脂質構成脂肪酸として含む脂質であるといえるが、さらに精製することにより、さらに高濃度でこれらの酸を脂質構成脂肪酸として含む各脂質クラス（脂質群）に分画することができる。また、それぞれの脂質クラスは、酸や塩基等の触媒を用いてエタノールと反応させることにより、ドコサペンタエン酸エチル、アラキドン酸エチル、イコサペンタエン酸エチル、及びドコサテトラエン酸エチルからなる群から選択される１種以上を高濃度で含む脂肪酸エチルエステル混合物へと変換することもできる。 The production of a lipid comprising one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid can produce the molluscs and / or eggs of the molluscs. As it is and / or boiled, that is, boiled in hot water, taken out after cooling, taken as it is / or dried, soaked in an organic solvent such as ethanol or hydrous ethanol, crushed, and if necessary, similar organic A solvent is further added to extract a lipid containing one or more of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid, and then concentrated to obtain a crude lipid. Even if extracted as raw, a lipid containing a sufficient amount of one or more of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid can be obtained. The effect of solidifying the protein and removing the water from the raw material is obtained by simmering in, so that the target lipid can be extracted more efficiently in the next extraction step. Moreover, if the obtained raw material is freeze-dried before extraction, the moisture can be further removed, and lipid can be extracted more efficiently using an extraction solvent such as ethanol. The resulting crude lipid is then chromatographed and the components are fractionated using an organic solvent such as n-hexane, acetone, ethanol, or water-containing ethanol to produce docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosa. Each lipid class containing at least one of tetraenoic acids as a lipid-constituting fatty acid at a high concentration is obtained. The identification of crude lipid and / or docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid contained in each lipid class is carried out by methylating the crude lipid or each purified lipid, Methyl, methyl arachidonic acid, methyl icosapentaenoate, and methyl docosatetraenoate can be obtained by matching the retention times in the chromatogram of gas chromatography. Moreover, a compound can be identified also from molecular weight and its molecular fragment with a gas chromatography-mass spectrometer (gas chromatography-mass spectrum detector). Here, according to the production method of the present invention, even for crude lipids before fractionation and / or purification, docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid at a sufficiently high concentration for food and drink, And docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid, it can be further purified to fractionate these acids into lipid classes (lipid groups) that contain these acids as lipid-constituting fatty acids at higher concentrations. it can. Each lipid class is selected from the group consisting of ethyl docosapentaenoate, ethyl arachidonate, ethyl icosapentaenoate, and ethyl docosatetraenoate by reacting with ethanol using a catalyst such as acid or base. Can also be converted to a fatty acid ethyl ester mixture containing one or more of these in a high concentration.
本発明者は、多数の天然及び飼育した軟体動物を原料にしてその脂質を分析し、腹足類、斧足類及び頭足類の脂質に、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸が脂質構成脂肪酸として多く含まれることを見出し、本発明の製造方法を完成したものであるが、脂質の分析例を、アメフラシを例にとって示すと次のとおりである。 The present inventor has analyzed the lipids of many natural and domestic mollusks as raw materials, and the docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetra The present inventors have found that a large amount of enoic acid is contained as a lipid-constituting fatty acid and have completed the production method of the present invention. An example of analysis of lipids is shown as follows.
アメフラシ（Aplysia kurodai、体重301.0g及び293.1g）2個体の軟体部を95℃で5分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓に分け、各々の一部をそれぞれエタノール50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。それをろ過後、200mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。ろ液すべてを減圧下濃縮して乾固させ、粗製脂質を得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化（メタノール、触媒量濃塩酸、80℃、2時間）し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メルク社製カラムクロマトグラフィー用シリカゲル60、粒径0.663〜0.200mm、70〜230メッシュ）により、トリアシルグリセロールなどの中性脂質（アセトンのみでトリアシルグリセロールは溶出でき、アセトン−エタノール、2／1、v／vでジアシルグリセロール及び遊離脂肪酸が溶出できる）、ホスファチジルエタノールアミン（10%含水エタノールで溶出できる）、及びホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出できる）などの各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにする（アジレント社製ガスクロマトグラフィー：HP-5890又はHP-6890、スペルコ社製キャピラリーカラム：オメガワックス−250、30m×0.25mm内径、厚さ0.25μm、カラム温度215℃、注入口温度230℃、FID検出器温度240℃、キャリヤーガス：ヘリウム及びインテグレーター：HPケミステーション、A.06）とともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し（アジレント社製ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器：HP-5973N、スペルコ社製キャピラリーカラム：オメガワックス−250、30m×0.25mm内径、厚さ0.25μm、カラム温度215℃、注入口温度230℃、キャリヤーガス：ヘリウム及びPCワークステーション−データ処理システム：MSDChemStationG1701CJガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器）に供し、化学構造の解析を行った（図１及び図２）。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、精巣、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ8.7〜15.0%、6.3〜7.3%で含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中では、それぞれ10.9〜11.0%、10.0〜13.1%、6.3〜9.4%、6.3〜7.6%、及び11.3〜11.7%で含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルコリン中では、それぞれ5.9〜8.9%、13.3〜13.3%、7.6〜17.2%、4.7〜5.0%、及び10.3〜16.9%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、精巣、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ4.9〜5.8%、2.0〜3.0%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中では、それぞれ4.1〜8.9%、3.2〜4.4%、5.0〜5.9%、6.9〜8.9%、及び3.5〜3.6%、ホスファチジルコリン中では、それぞれ2.9〜6.1%、3.2〜3.2%、2.8〜3.1%、4.9〜6.1%、及び3.6〜4.5%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は、精巣、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ6.4〜12.3%、1.9〜4.6%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ8.1〜9.8%、10.9〜12.5%、5.5〜7.9%、7.4〜14.6%、及び11.4〜11.7%含まれていた。
The soft parts of two Aplysia kurodai (Aplysia kurodai, weight 301.0 g and 293.1 g) were boiled at 95 ° C. for 5 minutes, then drained and cooled to room temperature. The testis, ovary, midgut gland, muscle, and other internal organs were divided, and a part of each was immersed in 50 mL of ethanol and crushed with a homogenizer. After filtration, 200 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. All the filtrates were concentrated under reduced pressure to dryness to obtain crude lipids. Part of the crude lipid was methyl esterified as it was (methanol, catalytic amount of concentrated hydrochloric acid, 80 ° C., 2 hours), and the composition of the lipid-constituting fatty acid was clarified. In addition, by using silica gel column chromatography (
なお、全脂質構成脂肪酸に占める各脂肪酸の割合は、上記のとおり脂質構成脂肪酸をメチルエステルに公知の方法で変換し、そのメチルエステルを上で例示した、ガスクロマトグラフィー及び／又はガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器を用いて定量することによって決定することができる。上で示した脂質中に含まれる脂質構成脂肪酸の量も、以下で示す本発明の実施例に示した脂質構成脂肪酸の量もこの定量方法を用いて測定した値である。 The ratio of each fatty acid in the total lipid-constituting fatty acid is as described above by converting the lipid-constituting fatty acid into a methyl ester by a known method and exemplifying the methyl ester in the gas chromatography and / or gas chromatography- It can be determined by quantification using a mass spectrum detector. The amount of lipid-constituting fatty acid contained in the lipid shown above and the amount of lipid-constituting fatty acid shown in the examples of the present invention shown below are values measured using this quantification method.
ここで、トリアシルグリセロールの溶出溶媒として、アセトンの他にエタノール−n-ヘキサン（1／1、v／v）を用いてもよい。また、ジアシルグリセロールや遊離脂肪酸の溶出溶媒として、アセトン−エタノール（2／1、v／v）の他に、エタノールのみを用いてもよい。ホスファチジルエタノールアミンの溶出には5%含水エタノールの他に、10%含水エタノールで溶出できる場合もある。ホスファチジルコリンは、20%含水エタノールで溶出されるが、他に30%含水エタノールでも溶出できる。以上のように、食品用として許容される抽出溶媒を用いて簡便に、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択されるいずれか１種以上が脂質構成脂肪酸として含まれる精製脂質を高収率で得ることができる。また、クロロホルムやジクロルメタンなどの塩素系溶媒やメタノールなどアルコール系溶媒を用いても、同様に、目的とするドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上が含まれる精製脂質が容易に得られる。
次に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定して解釈されるものではない。
Here, as an elution solvent for triacylglycerol, ethanol-n-hexane (1/1, v / v) may be used in addition to acetone. In addition to acetone-ethanol (2/1, v / v), only ethanol may be used as an elution solvent for diacylglycerol and free fatty acid. In some cases, phosphatidylethanolamine can be eluted with 10% aqueous ethanol in addition to 5% aqueous ethanol. Phosphatidylcholine is eluted with 20% aqueous ethanol, but can also be eluted with 30% aqueous ethanol. As described above, any one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid can be easily formed using an extraction solvent acceptable for foods. Purified lipids contained as fatty acids can be obtained in high yield. Further, even when using a chlorinated solvent such as chloroform or dichloromethane or an alcoholic solvent such as methanol, it is similarly selected from the group consisting of the desired docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid. Purified lipids containing one or more can be easily obtained.
Examples of the present invention are shown below, but the present invention should not be construed as being limited to these examples.
アメフラシ（Aplysia kurodai、平均体重697.2g）5個体の軟体部を、95℃で5分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓に分け、各々の一部をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液、約50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。そこへ約200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、有機相を減圧下濃縮し、粗製脂質を得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。また、粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）やホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂肪酸組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ3.0〜4.6%、2.4〜4.7%、5.1〜6.5%、及び5.2〜9.0%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ7.3〜13.3%、13.6〜14.6%、7.2〜10.1%、7.8〜9.1%、及び9.9〜13.8%含まれていた。また、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルコリン中では、それぞれ5.5〜8.8%、5.6〜7.9%、3.4〜8.1%、4.7〜9.8%、及び5.9〜13.9%で含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ2.4〜3.2%、1.7〜2.9%、3.6〜5.7%、及び3.8〜4.3%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、その他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ4.3〜5.0%、4.8〜5.1%、5.3〜6.5%、8.5〜11.0%、及び8.6〜9.5%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、イコサペンタエン酸は、精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ6.7〜9.0%、3.2〜9.4%、6.4〜9.6%、及び9.0〜12.0%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ15.5〜18.4%、16.1〜18.6%、10.3〜14.2%、5.6〜11.1%、及び11.7〜14.6%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルコリン中では、それぞれ10.2〜12.9%、12.4〜13.6%、8.7〜13.2%、11.5〜12.7%、及び10.3〜14.8%含まれていた。全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は、精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ2.0〜3.6%、2.0〜3.5%、4.1〜9.5%、及び3.2〜7.1%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ6.6〜9.6%、4.8〜5.1%、5.4〜9.3%、8.9〜17.7%、及び7.1〜9.5%含まれていた。 Soft body parts of 5 Aplysia kurodai (average weight 697.2 g) were boiled at 95 ° C. for 5 minutes, then drained and cooled to room temperature. It was divided into testis, ovary, midgut gland, muscle, and other internal organs, and a part of each was immersed in about 50 mL of chloroform-methanol 2/1 mixture and crushed with a homogenizer. About 200 mL of saturated saline was added thereto, followed by extraction three times with 50 mL of dichloromethane, and the organic phase was concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The crude lipid was partially methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acid. Crude lipids were triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v) and phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v) by column chromatography. And lipid classes of phosphatidylcholine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v) were separated. Each lipid class was methyl esterified to clarify the fatty acid composition, derivatized with dimethyloxazoline (DMOX) to obtain a DMOX body, and subjected to a gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is contained in 3.0 to 4.6%, 2.4 to 4.7%, 5.1 to 6.5%, and 5.2 to 9.0% of the testis, ovary, muscle, and other visceral crude lipids, respectively. The ovary, midgut gland, muscle, and other visceral phosphatidylethanolamines contained 7.3 to 13.3%, 13.6 to 14.6%, 7.2 to 10.1%, 7.8 to 9.1%, and 9.9 to 13.8%, respectively. In testis, ovary, midgut gland, muscle, and other visceral phosphatidylcholines, they were included in 5.5 to 8.8%, 5.6 to 7.9%, 3.4 to 8.1%, 4.7 to 9.8%, and 5.9 to 13.9%, respectively. . In addition, docosapentaenoic acid is contained in the total lipid constituent fatty acids in the testis, ovary, muscle, and other internal organs crude lipids 2.4-3.2%, 1.7-2.9%, 3.6-5.7%, and 3.8-4.3%, respectively. In testis, ovary, midgut gland, muscle, and other visceral phosphatidylethanolamine, 4.3-5.0%, 4.8-5.1%, 5.3-6.5%, 8.5-11.0%, and 8.6-9.5%, respectively . In addition, in the total lipid constituent fatty acid, icosapentaenoic acid is contained 6.7-9.0%, 3.2-9.4%, 6.4-9.6%, and 9.0-12.0% in crude lipids of testis, ovary, muscle, and other internal organs, In the testis, ovary, midgut gland, muscle, and other visceral phosphatidylethanolamines included 15.5-18.4%, 16.1-18.6%, 10.3-14.2%, 5.6-11.1%, and 11.7-14.6%, respectively, testis, In phosphatidylcholine of ovary, midgut gland, muscle, and other internal organs, 10.2 to 12.9%, 12.4 to 13.6%, 8.7 to 13.2%, 11.5-1 to 12.7%, and 10.3-1 to 14.8% were contained, respectively. Among the total lipid constituent fatty acids, docosatetraenoic acid is contained in the testis, ovary, muscle, and other visceral crude lipids of 2.0 to 3.6%, 2.0 to 3.5%, 4.1 to 9.5%, and 3.2 to 7.1%, respectively. 6.6 to 9.6%, 4.8 to 5.1%, 5.4 to 9.3%, 8.9 to 17.7%, and 7.1 to 9.5% were contained in phosphatidylethanolamine of testis, ovary, midgut gland, muscle, and other internal organs, respectively .
アマクサアメフラシ（Aplysia juliana、平均体重347.2g）5個体の軟体部を、95℃で5分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。それぞれ精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓に分け、各々の一部をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液約50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。そこに約200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、有機相を減圧下濃縮し、粗製脂質を得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。また、粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）、及びホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ7.0〜14.9%、5.6〜6.4%、3.2〜7.4%、及び4.8〜10.3%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓トリアシルグリセロールにおいて、それぞれ3.5〜5.9%、2.9〜4.1%、3.2〜5.6%、8.9〜12.4%、及び3.5〜5.2%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ11.2〜17.4%、12.1〜16.1%、6.8〜10.2%、8.9〜12.4%、及び7.6〜13.6%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ8.2〜16.0%、5.4〜12.8%、6.3〜9.3%、8.5〜14.2%、及び8.0〜16.8%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、精巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ2.9〜5.9%、2.5〜5.3%、及び2.0〜3.0%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中では、それぞれ4.8〜10.0%、3.8〜6.5%、3.3〜5.3%、5.3〜7.2%、及び3.7〜4.8%で含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルコリン中では、それぞれ2.9〜6.5%、2.5〜4.4%、2.0〜4.5%、3.9〜4.7%、及び3.2〜3.4%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸が精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ6.3〜12.6%、5.2〜5.2%、3.3〜5.3%、及び1.9〜7.3%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ10.7〜18.1%、10.9〜14.4%、8.4〜12.1%、11.4〜14.8%、及び6.7〜11.4%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ7.9〜14.4%、7.1〜10.3%、5.2〜7.0%、6.7〜7.4%、及び5.2〜8.5%含まれていた。イコサペンタエン酸が精巣、卵巣、筋肉、及びその他内臓の粗製脂質では、それぞれ8.6〜10.9%、5.4〜5.6%、4.4〜7.0%、及び3.3〜6.1%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、その他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ10.4〜14.1%、3.8〜6.5%、4.4〜7.4%、5.3〜7.2%、及び6.0〜6.6%含まれ、精巣、卵巣、中腸腺、筋肉、及びその他内臓のホスファチジルコリン中では、それぞれ9.3〜11.3%、9.3〜11.3%、7.3〜9.7%、8.1〜8.2%、及び7.2〜8.9%含まれていた。 The soft part of 5 individuals of Aplysia juliana (average weight 347.2g) was boiled at 95 ° C for 5 minutes, then drained and cooled to room temperature. Each was divided into testis, ovary, midgut gland, muscle, and other internal organs, and a part of each was soaked in about 50 mL of a chloroform-methanol 2/1 mixture and crushed with a homogenizer. About 200 mL of saturated saline was added thereto, followed by extraction three times with 50 mL of dichloromethane, and the organic phase was concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The crude lipid was partially methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acid. Crude lipids were triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v) and phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v) by column chromatography. , And phosphatidylcholine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v) were separated. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid contained 7.0-14.9%, 5.6-6.4%, 3.2-7.4%, and 4.8-10.3% in the testis, ovary, muscle and other visceral crude lipids, testis, ovary , Midgut gland, muscle, and other visceral triacylglycerols contained 3.5-5.9%, 2.9-4.1%, 3.2-5.6%, 8.9-12.4%, and 3.5-5.2%, testis, ovary, midgut, respectively 11.2 to 17.4%, 12.1 to 16.1%, 6.8 to 10.2%, 8.9 to 12.4%, and 7.6 to 13.6% in phosphatidylethanolamine of the gland, muscle, and other internal organs, testis, ovary, midgut gland , Muscle, and other visceral phosphatidylcholines were 8.2 to 16.0%, 5.4 to 12.8%, 6.39 to 9.3%, 8.5 to 14.2%, and 8.0 to 16.8%, respectively. Among the total lipid constituent fatty acids, docosapentaenoic acid is contained 2.9-5.9%, 2.5-5.3%, and 2.0-3.0% in testis, muscle, and other visceral crude lipids, testis, ovary, medium, respectively. Intestinal gland, muscle, and other visceral phosphatidylethanolamines contained 4.8 to 10.0%, 3.8 to 6.5%, 3.3 to 5.3%, 5.3 to 7.2%, and 3.7 to 4.8%, respectively, testis, ovary, midgut In phosphatidylcholine of glands, muscles, and other internal organs, 2.9 to 6.5%, 2.5 to 4.4%, 2.0 to 4.5%, 3.9 to 4.7%, and 3.2 to 3.4% were contained, respectively. In addition, docosatetraenoic acid is included in the total lipid constituent fatty acids in the testis, ovary, muscle, and other internal organs crude lipids, 6.3 to 12.6%, 5.2 to 5.2%, 3.3 to 5.3%, and 1.9 to 7.3%, respectively. , Testis, ovary, midgut gland, muscle, and other visceral phosphatidylethanolamine, respectively, contained 10.7 to 18.1%, 10.9 to 14.4%, 8.4 to 12.1%, 11.4 to 14.8%, and 6.7 to 11.4%, The testis, ovary, midgut gland, muscle, and other visceral phosphatidylcholine contained 7.9 to 14.4%, 7.1 to 10.3%, 5.2 to 7.0%, 6.7 to 7.4%, and 5.2 to 8.5%, respectively. Eicosapentaenoic acid is contained in the testis, ovary, muscle, and other visceral crude lipids at 8.6 to 10.9%, 5.4 to 5.6%, 4.4 to 7.0%, and 3.3 to 6.1%, respectively, testis, ovary, midgut gland, muscle , Other visceral phosphatidylethanolamines, 10.4 to 14.1%, 3.8 to 6.5%, 4.4 to 7.4%, 5.3 to 7.2%, and 6.0 to 6.6%, respectively, testis, ovary, midgut gland, muscle, and The other visceral phosphatidylcholine contained 9.3-11.3%, 9.3-11.3%, 7.3-9.7%, 8.1-8.2%, and 7.2-8.9%, respectively.
ミスジマイマイ（Euhadra peliomphala、殻高20mm、体重4.1583g）1個体の軟体部全体をそれぞれ含水エタノール、約50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。ろ過後、200mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。ろ液すべてを減圧下で濃縮して乾固させ、粗製脂質11.4mg（脂質含量：0.27%）を得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（アセトンで溶出した）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（5%含水エタノールで溶出した）、及びホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、粗製脂質中では、10.8〜10.9%含まれ、ホスファチジルエタノールアミン中で14.7〜17.8%、ホスファチジルコリン中で12.2〜12.3%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸も粗製脂質中では、4.0〜4.1%含まれ、ホスファチジルエタノールアミン中で4.5〜5.4%、ホスファチジルコリン中で4.7〜4.7%で含まれていた。 The whole soft body part of one Misumimaimai (Euhadra peliomphala, shell height 20 mm, body weight 4.1583 g) was soaked in about 50 mL of water-containing ethanol and crushed with a homogenizer. After filtration, 200 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. All the filtrates were concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 11.4 mg of crude lipid (lipid content: 0.27%). The crude lipid was partially methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acid. In addition, neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with acetone), phosphatidylethanolamine (eluted with 5% aqueous ethanol), and phosphatidylcholine (eluted with 30% aqueous ethanol) by silica gel column chromatography. Separated classes. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid contained 10.8 to 10.9% in the crude lipid, 14.7 to 17.8% in phosphatidylethanolamine, and 12.2 to 12.3% in phosphatidylcholine. Moreover, docosatetraenoic acid was also contained in the total lipid-constituting fatty acid in the crude lipid at 4.0 to 4.1%, in phosphatidylethanolamine at 4.5 to 5.4%, and in phosphatidylcholine at 4.7 to 4.7%.
にんじん（リノール酸及びリノレン酸を含有する）及びキュウリ（リノール酸及びリノレン酸を含有する）で9ヶ月間飼育したミスジマイマイ（Euhadra peliomphala、殻高15mm、体重9.1844g）1個体の軟体部（筋肉）及び内臓の一部をそれぞれ含水エタノール、約50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これをろ過後、200mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。ろ液すべてを減圧下で濃縮して乾固させ、粗製脂質71.2mg（筋肉から：13.3mg、内臓から：57.9mg、用いた原料全体に対する脂質含量：0.78%）を得た。組成脂質の一部は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（アセトンで溶出した）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（5%含水エタノールで溶出した）やホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出した）などの各脂質クラスを分離させた。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、筋肉及び内臓のトリアシルグリセロールでそれぞれ5.9〜6.0%、及び4.1〜4.1%、筋肉及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中でそれぞれ14.7〜14.9%、及び21.8〜22.0%、筋肉及び内臓のホスファチジルコリン中でそれぞれ11.3〜11.6%、及び12.0〜12.0%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸も、筋肉及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中でそれぞれ8.4〜8.5%、及び6.3〜6.3%、筋肉及び内臓のホスファチジルコリン中でそれぞれ6.4〜6.8%、及び4.0〜4.0%含まれていた。目的とするアラキドン酸などの各脂肪酸の各クラス中の百分率は実施例１４の天然ミスジマイマイとほぼ近接していた。一方、飼育したミスジマイマイでは、原料全体に対する脂質含量が0.78%と、天然ミスジマイマイに比較して、約2.9倍の脂質含量であったため、目的とするアラキドン酸等の各脂肪酸の実際の収量は、天然ミスジマイマイより飼育したものでは2.9倍程度多かった。 Soft body (muscles) of 1 individual, Mishaimai (Euhadra peliomphala, shell height 15 mm, body weight 9.1844 g) raised for 9 months in carrot (containing linoleic acid and linolenic acid) and cucumber (containing linoleic acid and linolenic acid) ) And a part of the internal organs were immersed in about 50 mL of water-containing ethanol, and crushed with a homogenizer. After filtration, 200 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. All the filtrates were concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 71.2 mg of crude lipid (from muscle: 13.3 mg, from viscera: 57.9 mg, lipid content with respect to the whole raw material used: 0.78%). Part of the composition lipid was neutralized by silica gel column chromatography, such as triacylglycerol (eluted with acetone), phosphatidylethanolamine (eluted with 5% aqueous ethanol) or phosphatidylcholine (30% aqueous ethanol). ) And other lipid classes were separated. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Of the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is 5.9-6.0% and 4.1-4.1% for muscle and visceral triacylglycerol, respectively, and 14.7-14.9% and 21.8-22.0% for muscle and visceral phosphatidylethanolamine, respectively. In muscular and visceral phosphatidylcholines, 11.3-11.6% and 12.0-12.0%, respectively. Also, among the total lipid constituent fatty acids, docosatetraenoic acid is also 8.4-8.5% and 6.36.3% in muscle and visceral phosphatidylethanolamine, 6.4-6.8% and 4.0 respectively in muscle and visceral phosphatidylcholine. Contained ~ 4.0%. The percentage of each fatty acid, such as the desired arachidonic acid, in each class was almost close to that of the natural misdimaimy of Example 14. On the other hand, the fat content of the reared Miss Jimmy is 0.78% of the total raw material, which is about 2.9 times that of natural Miss Jimmy, so the actual yield of each target fatty acid such as arachidonic acid is It was about 2.9 times more than those raised from natural misjimaimai.
スクミリンゴガイ（Pomacea canaliculata、殻高42mm及び54mm、体重12.7094g及び29.8182g）2個体の軟体部一部をそれぞれエタノール約50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これを濾過し、約200mLのエタノールを数度に分けてろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせた抽出液を減圧下で濃縮して乾固させ、粗製脂質43.5〜191.5mgを得た。組成脂質の一部は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（アセトンで溶出）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（10%含水エタノールで溶出）、及びホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、トリアシルグリセロールでは13.5〜14.5%、ホスファチジルエタノールアミン中で25.4〜26.9%、ホスファチジルコリン中で17.8〜18.3%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸も、ホスファチジルエタノールアミン中で15.3〜16.3%、ホスファチジルコリン中で11.9〜13.6%含まれていた。 A part of the soft body part of 2 individuals of Sukurimingaigai (Pomacea canaliculata, shell height 42 mm and 54 mm, body weight 12.7094 g and 29.8182 g) was immersed in about 50 mL of ethanol and crushed by a homogenizer. This was filtered and about 200 mL of ethanol was divided into several portions and poured onto the solid matter on the filter paper to extract the lipid and added to the filtrate. The combined extracts were concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 43.5-191.5 mg of crude lipid. A portion of the composition lipids was analyzed by silica gel column chromatography for neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with acetone), phosphatidylethanolamine (eluted with 10% aqueous ethanol), and phosphatidylcholine (eluted with 30% aqueous ethanol). Each lipid class was separated. Each lipid class was methyl esterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid contained 13.5 to 14.5% in triacylglycerol, 25.4 to 26.9% in phosphatidylethanolamine, and 17.8 to 18.3% in phosphatidylcholine. Further, docosatetraenoic acid was also contained in the total lipid-constituting fatty acid in 15.3 to 16.3% in phosphatidylethanolamine and 11.9 to 13.6% in phosphatidylcholine.
マガキガイ（Conomurex luchuanus、殻高43.0、47.0mm、体重16.686g、19.709g）2個体の軟体部を足（筋肉）とその他内臓に分け、それぞれの一部をそれぞれエタノール50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これをろ過後、150mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせたろ液を減圧下濃縮して乾固させ、粗製脂質を得た。粗製脂質は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（アセトンで溶出した）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（10%含水エタノールで溶出した）やホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化した。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が足及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ15.6〜19.0%、及び19.4〜20.0%、足及びその他内臓ホスファチジルコリン中で、それぞれ12.7〜15.9%、及び17.0〜17.3%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は足及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ13.7〜17.2%、及び16.8〜19.7%、足及びその他内臓ホスファチジルコリン中で、それぞれ17.6〜18.0%、及び13.0〜17.8%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は、足及びその他内臓ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ10.4〜13.7%、及び12.9〜20.0%、足及びその他内臓ホスファチジルコリン中で、それぞれ9.0〜10.2%、7.2〜10.2%含まれていた。 The soft body of two oysters (Conomurex luchuanus, shell height 43.0, 47.0mm, body weight 16.686g, 19.709g) is divided into legs (muscles) and other internal organs, each part is soaked in 50mL of ethanol and crushed by a homogenizer did. After filtration, 150 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. The combined filtrates were concentrated to dryness under reduced pressure to obtain crude lipids. Crude lipids were analyzed by silica gel column chromatography for neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with acetone), phosphatidylethanolamine (eluted with 10% aqueous ethanol) and phosphatidylcholine (eluted with 30% aqueous ethanol). The lipid class was separated. Each lipid class was methyl esterified. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is 15.6 to 19.0% and 19.4 to 20.0% in the foot and other visceral phosphatidylethanolamine, respectively, and 12.7 to 15.9% and 17.0 to 17.3% in the foot and other visceral phosphatidylcholine, respectively. It was included. Further, in the total lipid constituting fatty acid, docosapentaenoic acid is 13.7 to 17.2% and 16.8 to 19.7% in the foot and other visceral phosphatidylethanolamine, respectively, 17.6 to 18.0% in the foot and other visceral phosphatidylcholine, and 13.0-17.8% was included. Further, in the total lipid constituting fatty acid, docosatetraenoic acid is 10.4 to 13.7% and 12.9 to 20.0% in the foot and other visceral phosphatidylethanolamine, respectively, and 9.0 to 0.2% in the foot and other visceral phosphatidylcholine, respectively. It contained 7.2 to 10.2%.
マガキガイ（Conomurex luchuanus、殻高50.8〜57.0mm、体重26.0〜34.7g）10個体を煮熟後、冷凍で数日間保存した。それぞれの軟体部を足及びその他内臓に分け、各々の一部をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液、50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、有機相を減圧下で濃縮し、粗製脂質を得た。得られた粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）やホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、足及びその他内臓のトリアシルグリセロール中で、それぞれ3.2〜6.6%、及び4.4〜6.6%含まれ、足及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ15.8〜18.2%、及び13.7〜20.5%、足及びその他内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ12.7〜17.2%、及び14.4〜18.5%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、足及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ19.1〜24.1%、及び11.7〜14.1%、足及びその他内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ18.6〜25.7%、及び11.5〜15.2%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は、足及びその他内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ10.2〜14.8%、及び9.6〜13.0%、足及びその他内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ7.2〜10.5%、及び6.7〜10.4%含まれていた。 Ten oysters (Conomurex luchuanus, shell height 50.8-57.0 mm, body weight 26.0-34.7 g) were boiled and stored frozen for several days. Each soft body part was divided into legs and other internal organs, and a part of each was soaked in 50 mL of a chloroform-methanol 2/1 mixture and crushed with a homogenizer. 200 mL of saturated saline was added, extraction was performed 3 times with 50 mL of dichloromethane, and the organic phase was concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The resulting crude lipid was eluted by triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v) and phosphatidylethanolamine (dichloromethane / methanol, 1/1, v / v) by column chromatography. ) And phosphatidylcholine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v). Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is contained in the foot and other visceral triacylglycerols in 3.2 to 6.6% and 4.4 to 6.6%, respectively, and in the foot and other visceral phosphatidylethanolamines in the range of 15.8 to 18.2 respectively. %, And 13.7 to 20.5%, and 12.7 to 17.2% and 14.4 to 18.5%, respectively, in the phosphatidylcholine of the foot and other internal organs. Further, among the total lipid constituting fatty acids, docosapentaenoic acid is 19.1 to 24.1% and 11.7 to 14.1% in phosphatidylethanolamine of the foot and other viscera, and 18.6 to 25.7% in phosphatidylcholine of the foot and other viscera, respectively. %, And 11.5-15.2%. Among the total lipid fatty acids, docosatetraenoic acid is 10.2 to 14.8% and 9.6 to 13.0% in phosphatidylethanolamine in the foot and other viscera, and 7.2 to 10.5 in phosphatidylcholine in the foot and other viscera, respectively. %, And 6.7 to 10.4%.
バテイラ（Omphalius pfeifferi、殻高31〜41ｍｍ、体重11.4537〜19.2229g）6個体（雌3個体、雄3個体）の軟体部を足（筋肉）及び内臓に分け、それぞれ95度で3分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。各々の一部をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液、50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これに200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、有機相を減圧下で濃縮し、粗製脂質を得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）、及びホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が足の粗製脂質では、13.9〜14.6%含まれ、内臓及び足のトリアシルグリセロール中に、それぞれ3.1〜5.2%、及び3.2〜6.6%含まれ、内臓及び足のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ18.1〜23.9%、及び16.2〜22.7%、内臓及び足のホスファチジルコリン中で、それぞれ11.1〜17.0%、及び11.0〜14.5%で含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、足の粗製脂質では、7.3〜8.0%含まれ、内臓及び足のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ4.1〜7.2%、及び9.1〜12.5%、内臓及び足のホスファチジルコリン中で、それぞれ5.6〜8.3%、8.2〜10.4%含まれていた。さらに、全脂質構成脂肪酸中、イコサペンタエン酸は、足の粗製脂質では、5.2〜5.7%含まれ、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ11.0〜14.1%、8.2〜15.4%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ6.6〜8.4%、6.0〜13.1%含まれていた。 Bataira (Omphalius pfeifferi, shell height 31-41mm, body weight 11.4537-19.2229g) The soft body part of 6 individuals (3 females, 3 males) was divided into legs (muscles) and internal organs and each was simmered at 95 degrees for 3 minutes Thereafter, water was drained and the mixture was cooled to room temperature. A part of each was immersed in 50 mL of a chloroform-methanol 2/1 mixed solution, and crushed with a homogenizer. To this was added 200 mL of saturated saline, followed by extraction three times with 50 mL of dichloromethane, and the organic phase was concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The crude lipid was partially methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acid. The crude lipid was analyzed by column chromatography with triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v), phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v), and Each lipid class of phosphatidylcholine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v) was separated. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Of the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is included in the crude lipid of the foot from 13.9 to 14.6%, and the visceral and foot triacylglycerols are included from 3.1 to 5.2% and 3.2 to 6.6%, respectively. It was contained in phosphatidylethanolamine at 18.1 to 23.9% and 16.2 to 22.7%, respectively, and in visceral and foot phosphatidylcholine at 11.1 to 17.0% and 11.0 to 14.5%, respectively. Further, docosapentaenoic acid is contained in the total lipid-constituting fatty acid in the crude lipid of the foot, 7.3 to 8.0%, and in the visceral and foot phosphatidylethanolamines, 4.1 to 7.2% and 9.1 to 12.5%, respectively. And phosphatidylcholine in the foot and 5.6 to 8.3% and 8.2 to 10.4%, respectively. Furthermore, in the total lipid constituent fatty acid, icosapentaenoic acid is included in the crude lipid of the foot in 5.2 to 5.7%, and in the phosphatidylethanolamine of the foot and the viscera, 11.0 to 14.1%, 8.2 to 15.4%, the foot and the visceral, respectively. The phosphatidylcholine contained 6.6 to 8.4% and 6.0 to 13.1%, respectively.
クマノコガイ（Chlorostoma xanthostigma、殻高24〜31mm、体重9.4984〜24.7592g）6個体の軟体部を筋肉及び内臓に分け、それぞれ95℃で3分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。各々一部をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液、50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これに200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、有機相を減圧下濃縮し、粗製脂質を得た。粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）及びホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が内臓及び足のトリアジルグリセロールでは、それぞれ7.7〜7.7%、及び21.4〜21.5%、内臓及び足のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ16.3〜41.8%、及び24.5〜27.6%、内臓及び足のホスファチジルコリン中で、それぞれ16.3〜28.8%、及び16.8〜21.1%含まれていた。また、脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は内臓及び足のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ3.1〜3.2%、及び5.6〜8.0%、内臓及び足のホスファチジルコリン中で、それぞれ2.5〜4.8%、及び4.8〜6.7%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は、内臓及び足のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ6.1〜7.1%、及び6.8〜9.3%、内臓及び足のホスファチジルコリン中で、それぞれ5.3〜10.3%、及び6.3〜11.1%含まれていた。さらに、全脂質構成脂肪酸中、イコサペンタエン酸は、筋肉及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ4.6〜7.2%、4.1〜5.8%、筋肉及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ3.4〜3.9%、2.2〜5.8%で含まれていた。 The soft body part of 6 individuals (Chlorostoma xanthostigma, shell height 24-31 mm, body weight 9.4984-24.7592 g) was divided into muscles and internal organs, each was boiled at 95 ° C. for 3 minutes, then drained and cooled to room temperature. A part of each was immersed in 50 mL of a chloroform-methanol 2/1 mixture and crushed with a homogenizer. To this was added 200 mL of saturated saline, followed by extraction three times with 50 mL of dichloromethane, and the organic phase was concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The crude lipid was analyzed by column chromatography with triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v), phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v) and phosphatidylcholine. Each lipid class (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v) was separated. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is 7.7 to 7.7% and 21.4 to 21.5% for visceral and foot triazylglycerol, and 16.3 to 41.8% and 24.5 to 27.6, respectively, in visceral and foot phosphatidylethanolamine. % In visceral and foot phosphatidylcholines, 16.3% to 28.8% and 16.8% to 21.1%, respectively. Among lipid constituent fatty acids, docosapentaenoic acid is 3.1 to 3.2% and 5.6 to 8.0% in visceral and foot phosphatidylethanolamine, and 2.5 to 4.8% and 4.8 in visceral and foot phosphatidylcholine, respectively. Contained ~ 6.7%. Moreover, in the total lipid constituent fatty acid, docosatetraenoic acid is 6.1 to 7.1% and 6.8 to 9.3% in visceral and foot phosphatidylethanolamine, respectively, and 5.3 to 10.3% in visceral and foot phosphatidylcholine, respectively. And 6.3-11.1%. In addition, among the total lipid constituent fatty acids, icosapentaenoic acid is 4.6-7.2%, 4.1-5.8% in muscle and visceral phosphatidylethanolamine, respectively, 3.4-3.9%, 2.2-5.8 in muscle and visceral phosphatidylcholine, respectively. It was included in%.
ヤコウガイ（Lunatica marmorata、殻高149〜186mm、体重1380.0〜1520.0g）3個体の軟体部から、足（筋肉）、中腸腺、及び生殖巣（卵巣）の各々の一部をそれぞれ95℃で3分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。それぞれをクロロホルム−メタノール2／1混液50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。そこへ200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、有機相を減圧下濃縮し、粗製脂質を得た。粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）、及びホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、足、中腸腺、及び卵巣の粗製脂質では、12.8〜12.9%、8.6〜10.9%、10.1〜10.2%含まれ、足、中腸腺、及び卵巣の各トリアシルグリセロールでは、それぞれ5.6〜13.1%、9.6〜11.0%、及び10.5〜10.6%、足、中腸腺、及び卵巣の各ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ18.5〜23.0%、17.5〜21.9%、及び18.0〜18.0%、足、中腸腺、及び卵巣の各ホスファチジルコリン中で、それぞれ10.4〜10.9%、14.0〜17.1%、及び12.3〜12.3%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、足の粗製脂質では、8.9〜9.0%含まれ、足、中腸腺、及び卵巣の各ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ12.9〜14.9%、6.0〜7.5%、及び2.8〜2.8%、足、中腸腺、及び卵巣のホスファチジルコリン中で、それぞれ9.4〜11.0%、5.1〜6.5%、及び2.8〜2.8%含まれていた。さらに、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は、足、及び卵巣の粗製脂質では、7.3〜7.3%、4.4〜4.4%含まれ、足、中腸腺、及び卵巣のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ13.0〜13.8%、5.2〜6.2%、及び5.9〜5.9%、足、中腸腺、及び卵巣のホスファチジルコリン中で、それぞれ6.0〜6.4%、4.1〜5.3%、及び8.3〜8.3%含まれていた。 From the soft body of three mussels (Lunatica marmorata, shell height 149-186mm, body weight 1380.0-1520.0g), each part of each leg (muscle), midgut gland, and gonad (ovary) at 95 ° C 3 After ripening for a minute, water was drained and cooled to room temperature. Each was immersed in 50 mL of a chloroform-methanol 2/1 mixture and crushed with a homogenizer. Thereto was added 200 mL of saturated saline, followed by extraction three times with 50 mL of dichloromethane, and the organic phase was concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The crude lipid was analyzed by column chromatography with triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v), phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v), and Each lipid class of phosphatidylcholine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v) was separated. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is contained in 12.8 to 12.9%, 8.6 to 10.9%, and 10.1 to 10.2% of crude lipids of the foot, midgut gland, and ovary, and each of the foot, midgut gland, and ovary For triacylglycerol, 5.6 to 13.1%, 9.6 to 11.0%, and 10.5 to 10.6%, respectively, in each phosphatidylethanolamine of the foot, midgut gland, and ovary, 18.5-23.0%, 17.5-21.9%, and 18.0 to 18.0% were contained in the phosphatidylcholine of the foot, midgut gland, and ovary, respectively, 10.4 to 10.9%, 14.0 to 17.1%, and 12.3 to 12.3%. Further, in the total lipid constituting fatty acid, docosapentaenoic acid is contained in 8.9 to 9.0% in the crude lipid of the foot, and in each phosphatidylethanolamine of the foot, midgut gland, and ovary, 12.9 to 14.9% and 6.0, respectively. -7.5% and 2.8-2.8% were included in the phosphatidylcholine of the foot, midgut gland, and ovary, respectively, 9.4-11.0%, 5.1-6.5%, and 2.8-2.8%. Furthermore, among the total lipid constituent fatty acids, docosatetraenoic acid is contained 7.73 to 7.3%, 4.4 to 4.4% in the foot and ovary crude lipid, and in the phosphatidylethanolamine in the foot, midgut and ovary, 13.0 to 13.8%, 5.2 to 6.2%, and 5.9 to 5.9%, respectively, in the phosphatidylcholine of the foot, midgut gland, and ovary, 6.0 to 6.4%, 4.1 to 5.3%, and 8.3% to 8.3%, respectively .
ヒメタニシ（Sinotaia quadrata histrica、殻高24〜27mm、体重2.2412〜3.8868g）5個体の軟体部一部をそれぞれエタノール、約50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これを濾過し、約200mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせた抽出液を減圧下にて濃縮して乾固させ、粗製脂質10.4〜12.3mgを得た。粗製脂質は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（エタノール／n-ヘキサン、1／1、v／vで溶出）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（5%含水エタノールで溶出）、及びホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、トリアジルグリセロールでは3.8〜4.2%、ホスファチジルエタノールアミン中では12.5〜14.2%、ホスファチジルコリン中では8.1〜9.4%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、イコサペンタエン酸は、トリアジルグリセロールで3.6〜6.7%、ホスファチジルエタノールアミン中で4.9〜5.1%、ホスファチジルコリン中で3.2〜3.6%含まれていた。 A part of the soft body part of 5 individuals of S. (H. nidu) (Sinotaia quadrata histrica, shell height 24-27 mm, body weight 2.2142-3.8868 g) was immersed in ethanol and about 50 mL, respectively, and crushed with a homogenizer. This was filtered and about 200 mL of ethanol was divided into several portions and poured onto the solid on the filter paper to extract the lipid and added to the filtrate. The combined extracts were concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 10.4 to 12.3 mg of crude lipid. Crude lipids were analyzed by silica gel column chromatography with neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with ethanol / n-hexane, 1/1, v / v), phosphatidylethanolamine (eluted with 5% aqueous ethanol), and phosphatidylcholine. Each lipid class (eluted with 30% aqueous ethanol) was separated. Each lipid class was methyl esterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid contained 3.8 to 4.2% in triazylglycerol, 12.5 to 14.2% in phosphatidylethanolamine, and 8.1 to 9.4% in phosphatidylcholine. Further, in the total lipid constituting fatty acid, icosapentaenoic acid was contained in 3.6 to 6.7% of triazylglycerol, 4.9 to 5.1% in phosphatidylethanolamine, and 3.2 to 3.6% in phosphatidylcholine.
トコブシ（Haliotis diversicolor、殻長6.1〜8.1cm、43.0〜70.0g）6個体の内臓の一部を肝臓（中腸腺）、卵巣、その他内臓に分割し、それぞれ95度で3分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。前記のそれぞれの部位をエタノール50mLにそれぞれ浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。ろ過後、150mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせたろ液を減圧下濃縮して乾固させ、粗製脂質をそれぞれ22.2〜112.6mgを得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂肪酸組成を明らかにした。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロールなどの中性脂質（アセトンで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（5%含水エタノールで溶出した）やホスファチジルコリン（20%含水エタノールで溶出した）などの各脂質クラスに分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂肪酸組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン(DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、粗製脂質では、肝臓で8.0〜13.1%、卵巣で10.0〜17.0%、その他内臓で11.0〜14.0%含まれていた。また、ホスファチジルエタノールアミン中には、それぞれ肝臓で14.0〜22.9%、卵巣で18.2〜26.3%、その他内臓で14.3〜22.6%、ホスファチジルコリン中では、それぞれ肝臓で6.2〜13.3%、卵巣で11.7〜15.9%、その他内臓では10.0〜14.8%含まれていた。また、脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は、粗製脂質中では、肝臓で7.0〜9.9%、卵巣で8.1〜11.5%、その他内臓で6.7〜9.2%含まれていた。また、ホスファチジルエタノールアミン中では、それぞれ肝臓で7.4〜12.0%、卵巣で5.3〜7.6%、その他内臓で5.2〜9.2%のドコサペンタエン酸が全脂質構成脂肪酸に対して含まれていた。ホスファチジルコリン中には、全脂質構成脂肪酸中、それぞれ肝臓で6.6〜12.2%、卵巣で9.7〜12.5%、その他内臓で8.2〜11.9%のドコサペンタエン酸が含まれていた。全脂質構成脂肪酸中、イコサペンタエン酸は、粗製脂質では、肝臓で6.0〜8.6%、卵巣で8.5〜10.1%、その他内臓で4.6〜6.7%含まれていた。また、ホスファチジルエタノールアミン中には、それぞれ肝臓で8.2〜11.7%、卵巣で12.6〜14.6%、その他内臓で5.6〜10.0%、ホスファチジルコリン中には、それぞれ肝臓で4.7〜8.0%、卵巣で8.9%〜9.9%、その他内臓では5.2〜7.2%のイコサペンタエン酸が含まれていた。さらに、得られた脂質には相当量のドコサテトラエン酸も脂質構成脂肪酸として含まれていた。たとえば、ホスファチジルエタノールアミン中には、それぞれ肝臓で3.1〜3.6%、卵巣で2.1〜3.2%、その他内臓で3.4〜4.8%、ホスファチジルコリン中には、肝臓で2.0〜3.7%、卵巣で2.6〜3.4%、その他内臓では3.9〜4.7%のドコサテトラエン酸が脂質構成脂肪酸として含まれていた。 Tocobushi (Haliotis diversicolor, shell length 6.1-8.1cm, 43.0-70.0g) A part of internal organs of 6 individuals was divided into liver (middle gut), ovaries and other internal organs, and each was boiled at 95 degrees for 3 minutes The water was drained and cooled to room temperature. Each of the above parts was immersed in 50 mL of ethanol and crushed with a homogenizer. After filtration, 150 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. The combined filtrates were concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 22.1 to 112.6 mg of crude lipids, respectively. The crude lipid was partially methyl esterified to reveal the fatty acid composition. In addition, neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with acetone), phosphatidylethanolamine (eluted with 5% aqueous ethanol), and phosphatidylcholine (eluted with 20% aqueous ethanol) by silica gel column chromatography. Separated into classes. Each lipid class was methylesterified to clarify the fatty acid composition, dimethyloxazoline (DMOX) derivative to obtain DMOX, and the chemical structure was analyzed. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid contained 8.0 to 13.1% in the liver, 10.0 to 17.0% in the ovary, and 11.0 to 14.0% in the other internal organs in the crude lipid. In phosphatidylethanolamine, 14.0 to 22.9% in the liver, 18.2 to 26.3% in the ovary, 14.2 to 22.6% in the other internal organs, 6.2 to 13.3% in the liver, and 11.7 to 15.9% in the ovary, respectively. The other internal organs contained 10.0-14.8%. Further, among the lipid-constituting fatty acids, docosapentaenoic acid was contained in the crude lipid at 7.0 to 9.9% in the liver, 8.1 to 11.5% in the ovary, and 6.7 to 9.2% in the other internal organs. In phosphatidylethanolamine, 7.4 to 12.0% of the liver, 5.3 to 7.6% of the ovary, and 5.2 to 9.2% of the other internal organs were contained in the total lipid constituent fatty acid. The phosphatidylcholine contained 6.6-12.2% in the liver, 9.7-12.5% in the ovary, and 8.2-11.9% in the other internal organs in the total lipid constituent fatty acids. Among the total lipid-constituting fatty acids, icosapentaenoic acid was contained in the crude lipid at 6.0 to 8.6% in the liver, 8.5 to 10.1% in the ovary, and 4.6 to 6.7% in the other internal organs. In phosphatidylethanolamine, 8.2 to 11.7% in the liver, 12.6 to 14.6% in the ovary, 5.6 to 10.0% in the other internal organs, 4.7 to 8.0% in the liver and 8.9% in the ovary, respectively, in phosphatidylcholine 9.9% and other internal organs contained 5.2 to 7.2% icosapentaenoic acid. Furthermore, the obtained lipid contained a considerable amount of docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid. For example, in phosphatidylethanolamine, 3.1-3.6% in the liver, 2.1-3.2% in the ovary, 3.4-4.8% in the other internal organs, 2.0-3.7% in the liver, 2.6-3.4% in the ovary in phosphatidylcholine, respectively. In other internal organs, 3.9 to 4.7% of docosatetraenoic acid was contained as a lipid constituent fatty acid.
サザエ（Batillus cornuttus、殻高7.0〜10.5cm、体重184.043〜281.790g）11個体の軟体部の内、足（筋肉）及びその他内臓のそれぞれ一部をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液、50mLにそれぞれ浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、減圧下濃縮し、粗製脂質138.9〜212.0mg（脂質含量：0.5 ± 0.0%、筋肉）、及び393.3〜930.4mg（脂質含量：1.7 ± 0.1%、その他内臓）を得た。粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタン／エーテル、50／1、v／vで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）、及びホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン(DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が足及び内臓のトリアシルグリセロールに、それぞれ8.5〜14.2%、及び7.7〜17.4%、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ18.4〜26.0%、及び27.4〜34.6%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ11.1〜16.0%、及び18.9〜24.7%含まれていた。また、ドコサペンタエン酸は足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ10.2〜15.5%、及び4.6〜11.7%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ6.6〜9.8%、及び4.0〜8.5%含まれていた。さらに、ドコサテトラエン酸が足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ12.1〜17.0%、及び9.6〜15.8%、足及び内臓のホスファチジルコリン中では、それぞれ6.8〜11.7%、及び7.7〜16.3%含まれていた。 Sazae (Batillus cornuttus, shell height 7.0 to 10.5 cm, body weight 184.043 to 281.790 g) Among the 11 soft body parts, each part of the legs (muscles) and other internal organs in chloroform-methanol 2/1 mixture, 50 mL, respectively It was immersed and crushed with a homogenizer. Add 200 mL of saturated saline, extract 3 times with 50 mL of dichloromethane, concentrate under reduced pressure, and crude lipid 138.9-212.0 mg (lipid content: 0.5 ± 0.0%, muscle) and 393.3-930.4 mg (lipid content: 1.7 ± 0.1%, other internal organs). The crude lipid was analyzed by column chromatography with triacylglycerol (eluted with dichloromethane / ether, 50/1, v / v), phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v), and Each lipid class of phosphatidylcholine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/50, v / v) was separated. Each lipid class is methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Of the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is 8.5 to 14.2% and 7.7 to 17.4% in the foot and visceral triacylglycerol, respectively, and 18.4 to 26.0% and 27.4 to 34.6 in the foot and visceral phosphatidylethanolamine, respectively. %, In the foot and visceral phosphatidylcholine were 11.1-16.0% and 18.9-24.7%, respectively. In addition, docosapentaenoic acid is contained in phosphatidylethanolamine of the foot and viscera in 10.2 to 15.5% and 4.6 to 11.7%, respectively, and 6.6 to 9.8% and 4.0 to 8.5% in the phosphatidylcholine of foot and viscera, respectively. It was. In addition, docosatetraenoic acid is contained in phosphatidylethanolamine of the foot and viscera, respectively 12.1 to 17.0% and 9.6 to 15.8%, and phosphatidylcholine in the foot and viscera is contained 6.8 to 11.7% and 7.7 to 16.3%, respectively. It was.
ワカメ（褐藻；成分として含まれる全脂肪酸中、リノール酸が平均6.5%、リノレン酸平均9.0%、オクタデカテトラエン酸平均20.5%、アラキドン酸平均12.0%、及びイコサペンタエン酸平均13.1%を含有していた。これら含有量は上述したメチルエステル化した試料をガスクロマトグラフィーで分析して測定した。）で8ヶ月間飼育したサザエ（Batillus cornuttus、殻高10.5、11.0cm、体重275.449、315.726g）2個体の軟体部一部の足、内臓をそれぞれ二昼夜凍結乾燥機に供し、乾燥した足、内臓を得た。これをそれぞれ10%含水エタノール50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。ろ過後、150mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせたろ液を減圧下濃縮・乾固し、粗製脂質を得た（脂質含量：0.5 ± 0.0%、筋肉、及び脂質含量：4.2 ± 0.0%、その他内臓）。粗製脂質は、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ヘキサン−エタノール、1／1、v／vで溶出した）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（5%含水エタノールで溶出した）、及びホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出した）などの各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が足及び内臓のトリアシルグリセロールで、それぞれ8.8〜12.1%、及び4.3〜15.9%、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ25.8〜25.9%、及び33.4〜33.8%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ13.6〜14.0%、及び19.8〜22.6%含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中、ドコサペンタエン酸は足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ13.6〜14.0%、及び5.4〜6.1%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ8.4〜8.6%、及び6.2〜7.0%の含有量だった。さらに、全脂質構成脂肪酸中、ドコサテトラエン酸は足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ15.6〜16.5%、及び10.5〜13.0%、ホスファチジルコリン中で、それぞれ7.8〜8.6%、及び9.1〜15.3%の含有量だった。イコサペンタエン酸は足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、全脂質構成脂肪酸のうち、それぞれ6.0〜6.2%、4.1〜9.0%で含まれていた。目的とするアラキドン酸などの各脂肪酸の各クラス中の百分率は実施例3の天然サザエとほぼ近接していた。足を原料として用いた場合には、ほぼ同量の各脂肪酸が回収された。一方、飼育したサザエでは、その他内臓の脂質含量が4.2%と、天然サザエに比較して、約2.5倍であったため、目的とするアラキドン酸等の各脂肪酸の実際の収量は、天然サザエに比較して2.5倍程度多く回収された。また、飼育サザエではバラツキも小さく、安定した品質であり、季節変動などの影響も少ない。 Wakame (brown algae; contains 6.5% of linoleic acid, 9.0% of linolenic acid, 20.5% of octadecatetraenoic acid, 12.0% of arachidonic acid, and 13.1% of icosapentaenoic acid. These contents were measured by analyzing the methyl esterified sample described above by gas chromatography.) Sazae (Batillus cornuttus, shell height 10.5, 11.0 cm, body weight 275.449, 315.726 g) 2 The legs and internal organs of a part of the soft body part of the individual were each subjected to a freeze-dryer for two days and nights to obtain dry feet and internal organs. Each was immersed in 50 mL of 10% water-containing ethanol and crushed with a homogenizer. After filtration, 150 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. The combined filtrate was concentrated and dried under reduced pressure to obtain crude lipid (lipid content: 0.5 ± 0.0%, muscle and lipid content: 4.2 ± 0.0%, other internal organs). Crude lipids were analyzed by silica gel column chromatography with neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with hexane-ethanol, 1/1, v / v), phosphatidylethanolamine (eluted with 5% aqueous ethanol), and phosphatidylcholine. Each lipid class such as (eluted with 30% aqueous ethanol) was separated. Each lipid class was methyl esterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids. Of the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is the foot and visceral triacylglycerol, 8.8-12.1%, and 4.3-15.9%, respectively, and the foot and visceral phosphatidylethanolamine, 25.8-25.9%, and 33.4-33.8, respectively. %, In the phosphatidylcholine of the foot and viscera, 13.6 to 14.0% and 19.8 to 22.6%, respectively. Also, among the total lipid-constituting fatty acids, docosapentaenoic acid is 13.6 to 14.0% and 5.4 to 6.1% in phosphatidylethanolamine in the foot and viscera, respectively, 8.4 to 8.6% in phosphatidylcholine in the foot and viscera, and The content was 6.2-7.0%. Furthermore, among the total lipid constituent fatty acids, docosatetraenoic acid is 15.6 to 16.5% and 10.5 to 13.0% in phosphatidylethanolamine of the foot and viscera, respectively, and 7.8 to 8.6% and 9.1 to 15.3% in phosphatidylcholine, respectively. Was the content of. Eicosapentaenoic acid was contained in the phosphatidylethanolamine of the foot and viscera at 6.0 to 6.2% and 4.1 to 9.0% of the total lipid constituent fatty acids, respectively. The percentage of each fatty acid in each class, such as the desired arachidonic acid, was almost close to the natural tuna of Example 3. When the foot was used as a raw material, almost the same amount of each fatty acid was recovered. On the other hand, the fat content of other viscera in the reared Sazae was 4.2%, which was about 2.5 times that of natural Sazae, so the actual yield of each fatty acid such as arachidonic acid was compared to that of natural Sazae. About 2.5 times as much was recovered. In addition, breeding sazae has small variations, stable quality, and little influence from seasonal fluctuations.
クロアワビ（Haliotis discus discus、殻長90mm、体重63.3g）1個体の内臓部を95℃で3分間煮熟した後、水を切り室温まで冷却した。中腸腺、その他の内臓をそれぞれエタノール50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕し、ろ過した。150mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせたろ液を減圧下濃縮して乾固させ、粗製脂質504.8mg（中腸腺）、及び175.2mg（その他内臓）をそれぞれ得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。中腸腺の粗製脂質には、アラキドン酸、ドコサペンタエン酸、イコサペンタエン酸がそれぞれ7.6〜7.6%、3.0〜3.0%、7.1〜7.3%含まれていた。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（アセトンで溶出した）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（10%含水エタノールで溶出した）やホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出した）などの各脂質クラスに分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸がトリアシルグリセロール中、前記の部位に対してそれぞれ7.6〜7.7%、10.6〜10.6%含まれていた。また、ホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ17.0〜17.2%、19.2〜19.3%、ホスファチジルコリン中で、それぞれ9.9〜10.0%、7.5〜7.5%のアラキドン酸が全脂質構成脂肪酸中に含まれていた。また、ドコサペンタエン酸はホスファチジルエタノールアミン中に6.5〜6.6%、7.2〜7.3%、ホスファチジルコリン中に4.4〜4.4%、2.1〜2.1%、脂質構成脂肪酸として含まれていた。また、イコサペンタエン酸はホスファチジルエタノールアミン中でそれぞれ12.8〜13.0%、11.4〜11.4%、脂質構成脂肪酸として含まれていた。 The visceral part of one black abalone (Haliotis discus discus, shell length 90 mm, weight 63.3 g) was boiled at 95 ° C. for 3 minutes, then drained and cooled to room temperature. The midgut gland and other internal organs were immersed in 50 mL of ethanol, crushed with a homogenizer, and filtered. 150 mL of ethanol was divided into several portions and poured onto the solid on the filter paper to extract the lipids and added to the filtrate. The combined filtrate was concentrated to dryness under reduced pressure to obtain 504.8 mg of crude lipid (midgut gland) and 175.2 mg (other viscera), respectively. The crude lipid was partially methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acid. The crude lipid of the midgut gland contained 7.6-7.6%, 3.0-3.0%, 7.1-7.3% of arachidonic acid, docosapentaenoic acid, and icosapentaenoic acid, respectively. In addition, by silica gel column chromatography, neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with acetone), and various lipids such as phosphatidylethanolamine (eluted with 10% aqueous ethanol) and phosphatidylcholine (eluted with 30% aqueous ethanol) Separated into classes. Each lipid class was methyl esterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids. Among the total lipid-constituting fatty acids, arachidonic acid was contained in the triacylglycerol at 7.6 to 7.7% and 10.6 to 10.6%, respectively, with respect to the aforementioned sites. In addition, arachidonic acid of 17.0 to 17.2% and 19.2 to 19.3% in phosphatidylethanolamine and 9.9 to 10.0% and 7.5 to 7.5% of phosphatidylcholine, respectively, was contained in the total lipid constituent fatty acid. Further, docosapentaenoic acid was contained in phosphatidylethanolamine as 6.5 to 6.6% and 7.2 to 7.3%, and phosphatidylcholine as 4.4 to 4.4% and 2.1 to 2.1% as a lipid constituent fatty acid. In addition, icosapentaenoic acid was contained in phosphatidylethanolamine as 12.8 to 13.0% and 11.4 to 11.4%, respectively, as a lipid constituent fatty acid.
クロアワビ（Haliotis discus discus、殻長119〜149mm、体重274.35〜601.16g）5個体の軟体部を足（筋肉）、内臓に分け、各一部分をそれぞれクロロホルム−メタノール2／1混液、50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。200mLの飽和食塩水を加え、ジクロルメタン50mLで3回抽出し、減圧下濃縮し、粗製脂質を得た。粗製脂質は、カラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（ジクロロメタンで溶出した）、ホスファチジルエタノールアミン（ジクロロメタン／メタノール、1／1、v／vで溶出した）、及びホスファチジルコリン（ジクロロメタン／メタノール、1／50、v／vで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにするとともに、ジメチルオキサゾリン（DMOX）誘導体化し、DMOX体を得て、ガスクロマトグラフィー−マススペクトル検出器に供し、化学構造の解析を行った。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、足及び内臓のトリアシルグリセロールで、それぞれ15.8〜22.0%、及び6.3〜12.4%、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ19.7〜27.4%、及び19.3〜24.1%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ9.7〜14.5%、及び14.9〜17.4%含まれていた。また、ドコサペンタエン酸は、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ5.6〜11.5%、及び4.7〜6.8%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ6.6〜10.3%、及び3.8〜5.8%含まれていた。 Black abalone (Haliotis discus discus, shell length 119-149mm, weight 274.35-601.16g) The soft body part of 5 individuals is divided into legs (muscles) and internal organs, each part is soaked in 50 mL of chloroform-methanol 2/1 mixture, The mixture was crushed with a homogenizer. 200 mL of saturated saline was added, extracted three times with 50 mL of dichloromethane, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude lipid. The crude lipid was analyzed by column chromatography with triacylglycerol (eluted with dichloromethane), phosphatidylethanolamine (eluted with dichloromethane / methanol, 1/1, v / v), and phosphatidylcholine (dichloromethane / methanol, 1/50, Each lipid class (eluted at v / v) was separated. Each lipid class is methylesterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids, dimethyloxazoline (DMOX) derivatized to obtain DMOX, and used for gas chromatography-mass spectrum detector to analyze the chemical structure went. Of the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid is foot and visceral triacylglycerol, 15.8 to 22.0% and 6.3-12.4%, respectively, and foot and visceral phosphatidylethanolamine, respectively 19.7 to 27.4% and 19.3 to 24.1% contained 9.7 to 14.5% and 14.9 to 17.4% in phosphatidylcholine of the foot and viscera, respectively. In addition, docosapentaenoic acid is contained in phosphatidylethanolamine of feet and viscera, respectively, 5.6 to 11.5% and 4.7 to 6.8%, and phosphatidylcholine of feet and viscera, respectively, 6.6 to 10.3% and 3.8 to 5.8%, respectively. It was.
エゾアワビ（Haliotis discus hannai、殻長10.0〜10.8cm、体重112.2〜193.8g）3個体の足、内臓を分け、各部の一部をそれぞれエタノール50mLに浸せきし、ホモジナイザーにより破砕した。これをろ過後、150mLのエタノールを数度に分け、ろ紙上の固形物に注ぎかけ、脂質を抽出し、ろ液に加えた。合わせたろ液を減圧下濃縮して乾固させ、粗製脂質をそれぞれ112.2〜193.8mg（足部）、及び242.9〜617.6mg（内臓）の量で得た。粗製脂質は、一部をそのままメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。また、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより、トリアシルグリセロール（アセトンで溶出した）などの中性脂質、ホスファチジルエタノールアミン（10%含水エタノールで溶出した）やホスファチジルコリン（30%含水エタノールで溶出した）の各脂質クラスを分離した。それぞれの脂質クラスをメチルエステル化し、脂質構成脂肪酸の組成を明らかにした。全脂質構成脂肪酸中、アラキドン酸が、足及び内臓のトリアシルグリセロールで、それぞれ4.4〜6.0%、及び4.5〜5.5%で含まれていた。また、全脂質構成脂肪酸中のアラキドン酸の割合は、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ14.6〜17.2%、及び20.0〜23.8%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ8.3〜10.8%、及び14.0〜15.8%であった。また、脂質構成脂肪酸に占めるドコサペンタエン酸の量は、足及び内臓のホスファチジルエタノールアミン中で、それぞれ8.0〜10.2%、3.8〜8.9%、足及び内臓のホスファチジルコリン中で、それぞれ7.3〜8.6%、4.5〜5.4%であった。 Ezo abalone (Haliotis discus hannai, shell length 10.0 to 10cm, body weight 112.2 to 193.8g) The legs and internal organs of 3 individuals were divided, and a part of each part was immersed in 50 mL of ethanol and crushed by a homogenizer. After filtration, 150 mL of ethanol was divided into several portions, poured onto the solid matter on the filter paper, lipids were extracted, and added to the filtrate. The combined filtrates were concentrated to dryness under reduced pressure, and crude lipids were obtained in amounts of 112.2 to 193.8 mg (foot) and 242.9 to 617.6 mg (internal organs), respectively. The crude lipid was partially methyl esterified to clarify the composition of the lipid-constituting fatty acid. In addition, neutral lipids such as triacylglycerol (eluted with acetone), phosphatidylethanolamine (eluted with 10% aqueous ethanol), and phosphatidylcholine (eluted with 30% aqueous ethanol) by silica gel column chromatography. Separated. Each lipid class was methyl esterified to clarify the composition of lipid-constituting fatty acids. Among the total lipid constituent fatty acids, arachidonic acid was contained in leg and visceral triacylglycerols at 4.4-6.0% and 4.5-5.5%, respectively. The ratio of arachidonic acid in the total lipid constituent fatty acid is 14.6 to 17.2% and 20.0 to 23.8% in phosphatidylethanolamine of the foot and viscera, respectively, and 8.3 to 10.8% in the phosphatidylcholine of the foot and viscera, respectively. And 14.0 to 15.8%. The amount of docosapentaenoic acid in the lipid constituent fatty acids is 8.0 to 0.2% and 3.8 to 8.9% in phosphatidylethanolamine in the foot and viscera, respectively, and 7.3 to 8.6% in phosphatidylcholine in the foot and viscera, respectively. 4.5-5.4%.
このように、上記実施例に記載したように本発明の製造方法によって、腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）からなる群のいずれかに属する１種以上の軟体動物の軟体部及び／又は卵から選択される部位を原料として用いて、ドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上の脂質構成脂肪酸を豊富に含む脂質を製造することができた。 Thus, according to the production method of the present invention as described in the above embodiment, any one of the group consisting of gastropods (Makigaidae), axopods (Namigaiidae), Hirasagidae, and cephalopods (Squididae) 1 selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid, using as a raw material a part selected from the molluscs and / or eggs of one or more molluscs belonging to Lipids rich in more than one species of lipid-constituting fatty acids could be produced.
以上詳細に説明したとおり、本発明によれば、腹足類（マキガイ綱）、斧足類（ニマイガイ綱）、ヒザラガイ綱、及び頭足類（イカ綱）のいずれかに属する軟体動物の１種以上の軟体部及び／又は卵を原料として多量にかつ収率よくドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含む脂質を製造できる。また、本発明の方法によって得られるドコサペンタエン酸、アラキドン酸、イコサペンタエン酸、及びドコサテトラエン酸からなる群から選択される１種以上を脂質構成脂肪酸として含有する脂質には、たとえ粗製脂質であっても、機能性リン脂質が含まれるため、生理活性物質として食品素材、化粧品素材、及び医薬品素材等として広く用いることができるし、また、研究用試薬としても用いることができる。
このように、本発明の製造方法は、食品、医薬品、化粧品などの研究分野や製造の現場において広く活用できる有益な発明である。
As explained in detail above, according to the present invention, one or more mollusks belonging to any of gastropods (Spotted turtles), axpods (Spotted mussels), squirrels, and cephalopods (Squid) Manufactures lipids that contain one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid as a lipid-constituting fatty acid in a large amount and with high yield from soft body parts and / or eggs it can. In addition, the lipid containing one or more selected from the group consisting of docosapentaenoic acid, arachidonic acid, icosapentaenoic acid, and docosatetraenoic acid obtained by the method of the present invention as a lipid-constituting fatty acid may be a crude lipid. Even if it exists, since functional phospholipid is contained, it can be widely used as a food material, a cosmetic material, a pharmaceutical material, etc. as a physiologically active substance, and can also be used as a research reagent.
Thus, the production method of the present invention is a useful invention that can be widely used in research fields such as foods, pharmaceuticals, and cosmetics, and in the field of production.
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