JP2012528946A - 酵素的織物カラー変更 - Google Patents

Abstract

【課題】酵素的織物カラー変更
【解決手段】染色されたセルロース系織物繊維材料の色調を調整する方法であって、前記織物材料を織物材料の測定可能な漂白を可能にするのに適する時間と条件下で（１）ペルヒドロラーゼ酵素、（ｉｉ）前記ペルヒドロラーゼ酵素のエステル基質、及び（ｉｉｉ）過酸化水素源を含有する酵素的織物処理組成物と接触させる工程を含む方法。
【選択図】なし

Description

本出願は、米国特許仮出願シリアル番号第６１／２２３，３４８号（２００９年７月７日出願）、米国特許仮出願シリアル番号第６１／３２２，７４３号（２０１０年４月９日出願）、欧州特許出願番号第０９１６２０４７．６（２００９年６月５日出願）及び欧州特許出願番号第０９１６３７５１．２（２００９年６月２５日出願）（それら全体が参照により本明細書に援用される）に対する優先権を主張する。

本発明は、染色されたセルロース系織物繊維材料、特に、インディゴ又は硫化染料で染色されたデニムの、酵素によるカラー変更のための方法に関する。

幾つかの織物材料は、染色された織物の色調又は色合い（陰影）を調整する目的で、ウォッシュダウン効果としても知られているように、染色後に洗浄される。例えば、インディゴ染色デニムから製造されたブルージーンズを、軽石と酵素的デサイジング剤の存在下で洗浄し、続いてトーン−ウォッシュダウン工程を経て、所望のウォーン（着古した）外観を得ることができる。従来のウォッシュダウン工程は、繊維損傷の外観の観点並びに環境保全の理由から好ましくない、次亜塩素酸ナトリウムを用いた着色されたデニムの処理を含む。過酸化水素水を用いたウォッシュダウンは別の解決策である。過酸化水素水を用いて調整効果は得られるが、それはかなり限定される。さらに、高いｐＨを必要とすることが環境保全には好ましくない。

上述の不利点を示さない酵素的ウォッシュダウン工程が望ましい。従来の織物カラー変更工程に比べて、穏和な条件下で所望のウォッシュ−アウト効果を提供し、環境への悪影響を最小限に抑える、着色された綿織物のための効果的な酵素的ウォッシュダウン工程に関する要望が存在する。

本発明は、従って、染色されたセルロース系織物繊維材料の色調を調整する方法であって、前記織物材料を
（ｉ）ペルヒドロラーゼ酵素
（ｉｉ）前記ペルヒドロラーゼ酵素のエステル基質、及び
（ｉｉｉ）過酸化水素源
を含有する酵素的織物処理組成物と接触させる工程を含む方法に関する。

本発明の酵素的処理段階は、他に指定がない限り、当業者の技術の範囲内にある、従来の分子生物学（組み換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学及び生化学の技術を用いる。そのような技術は、例えば、分子クローニング：実習マニュアル 第二版（サムブルックら、１９８９年）；オリゴヌクレオチド合成（Ｍ．Ｊ．ゲイト編、１９８４年）；分子生物学における最新プロトコル（Ｆ．Ｍ．アウスベルら編１９９４年）；ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応（マリスら編、１９９４年）；及び遺伝子導入及び発現：実習マニュアル（クリーグラー、１９９０年）などの文献に十分に説明されている。

本書において他に定義されない限り、本明細書で使用された全ての技術的及び科学的用語は、この発明に関連する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。

シングルトンら、微生物学及び分子生物学辞典、第二版、ジョン ウィリー及びソンズ、ニューヨーク（１９９４年）、及びヘイル＆マークハム、ハーパーコリンズ生物学辞典、ハーパーペレニアル、ニューヨーク（１９９１年）は、本発明で使用される多くのバイオテクノロジー関連用語に関する一般的な辞典を当業者に提供する。本書に記載されたものと類似又は同等の任意の方法及び材料が、本発明の実践又は試験に使用可能である。

本書に規定される数値範囲は、範囲を定義する数値を含む。他に指定の無い限り、核酸は５位’から３’位を左から右に、アミノ酸配列はアミノ位からカルボキシ位を左から右にそれぞれ記載する。

以下の用語及びフレーズを明確にするために定義する。

本明細書において、用語「調整（ａｄｊｕｓｔｉｎｇ）」は、織物材料においてより明るいカラーを生み出すために、織物材料において着色を誘発する化合物の除去、変性又はマスキングによって、織物材料を、十分な時間、適切なｐＨと温度条件下で、処理する工程を意味する。よって「調整」とは、織物材料の増白をもたらすための織物材料の処理を指す。いくつかの実施態様において、増白は織物材料からの色除去のパーセンテージとして定義される。色除去の量は、本発明の酵素的織物処理組成物を用いた処理後のカラーレベル（すなわち、残存カラーレベル）と、当初の織物材料のカラーレベル（すなわち、元のカラーレベル）を、既知の分光光度法又は目視検査法を用いて比較することによって測定される。

本明細書において用語“元のカラーレベル”は、本発明の酵素的織物処理組成物と接触させる前の染色された織物材料のカラーレベルを言及する。元のカラーレベルは、既知の分光光度法又は目視検査法を用いて測定され得る。

本明細書において“残存カラーレベル”は、本発明の酵素的織物処理組成物と接触させた後の染色された織物材料のカラーレベルを言及する。残存カラーレベルは、既知の分光光度法又は目視検査法を用いて測定され得る。

本明細書において、“セルロース系織物繊維材料”は、綿、麻及びヘンプ等の天然セルロース系繊維、ビスコース及びリヨセル等の半合成セルロース系繊維、並びに、エラスティン等のセルロース系繊維と合成繊維のブレンドを含む材料を言及する。本発明の方法で処理することが可能な適切なセルロース系織物繊維材料としては、ヤーン、織布、編布及び衣類である。

本明細書において、“ペルヒドロラーゼ”は、過加水分解反応を触媒して、本書に記載されている方法による酵素的織物調整組成物における使用に適する、十分に多量な過酸の製造につながることが可能となる酵素を言及する。一般に、本書に記載される方法において使用されるペルヒドロラーゼ酵素は、高い過加水分解対加水分解比率を示す。幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のマイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼアミノ酸配列、又はそれらの変異体又は同族体を含むか、それらから構成されるか、或いは本質的にそれらから構成される。幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、アシルトランスフェラーゼ活性を含み、水性アシル転位反応を触媒する。

本明細書において、“過酸”は、式ＲＣ（＝Ｏ）ＯＯＨで表される有機酸を表し、式中、Ｒは脂肪族、芳香族又はアラリファティック（ａｒａｌｉｐｈａｔｉｃ）基を表す。

本明細書において、“エステル基質”は、エステル結合を含むペルヒドロラーゼ基質である。脂肪族及び／又は芳香族カルボン酸及びアルコールからなるエステルは、ペルヒドロラーゼ酵素とともに基質として利用され得る。幾つかの実施態様において、エステル源は一種以上の下記酸のエステルから選択される：ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、カプリル酸、ノナン酸、デカン酸、ドデカン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びオレイン酸。幾つかの実施態様において、エステル源は酢酸エステルである。幾つかの実施態様において、エステル源は、プロピレングリコールジアセテート、エチレングリコールジアセテート、グリセロールトリアセテート、酢酸エチル、及びグリセロールトリブチレートの一種以上から選択される。

本明細書において、用語“過加水分解（ｐｅｒｈｙｄｒｏｌｙｚａｔｉｏｎ）”、“過加水分解する（ｐｅｒｈｙｄｒｏｌｙｚｅ）”及び“過加水分解（ｐｅｒｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ）”は、過酸がエステル基質及び過酸化水素源から生じる反応を言及する。過加水分解反応は、ペルヒドロラーゼ酵素、例えば、アシルトランスフェラーゼ又はアリールエステラーゼ酵素で触媒される。幾つかの実施態様において、過酸は、過酸化水素（Ｈ₂Ｏ₂）の存在下における式ＲＣ（＝Ｏ）ＯＲ^*（式中、Ｒ及びＲ^*は同一又は異なって有機基を表す）で表されるエステル基質の過加水分解によって製造される。ある実施態様において、−ＯＲ^*は−ＯＨである。ある実施態様において、−ＯＲ^*は−ＮＨ₂で置き換えられる。幾つかの実施態様において、過酸はカルボン酸又はアミド基質の過加水分解によって製造される。

本明細書において、用語“過酸”は、過酸化水素と反応して、その酸素原子の一つが転移可能であるような高活性反応物を生じる、カルボン酸エステルから誘導される分子又はそれから誘導され得るものを言及する。過酢酸などの過酸が増白剤として機能することができる、酸素原子を転移する能力がこの能力である。

本明細書において、フレーズ“加水分解対加水分解比率”は、定義された条件下且つ定義された時間内で、エステル基質からペルヒドロラーゼ酵素によって、酵素的に生じた過酸の総量対酵素的に生じた酸の総量の比率を言及する。幾つかの実施態様において、国際公開第０５／０５６７８２号パンフレットにおいて提案された試験が、酵素によって製造された過酸及び酸の総量を測定するために用いされる。

本明細書において、“ペルヒドロラーゼ酵素の効果量”とは、本書に記載される工程又は方法において要求される酵素活性を獲得するのに必要なペルヒドロラーゼ酵素の数量を言及する。前記効果量は、当業者によって容易に確認され、そして用いた特定の酵素変異体、用いたｐＨ、使用温度や、所望の結果（例えば、増白のレベルなど）などの多くの要因に基づく。

本明細書において、用語“トランスフェラーゼ”は、一つの基質から別の基質への官能基の転移を触媒する酵素を言及する。例えば、アシルトランスフェラーゼは、アシル基を、エステル基質から過酸化水素基質に転移させて過酸を形成させ得る。

本明細書において、用語“アシル”は、有機酸から−ＯＨ基の除去によって誘導される一般式ＲＣＯ−で表される有機基を言及する。概して、アシル基は、最後に接尾辞“−ｏｙｌ”を有して命名され、例えば、エタノイルクロリド：ＣＨ₃ＣＯ−Ｃｌは、エタノール酸：ＣＨ₃ＣＯＯＨから形成されるアシルクロリドである。

本明細書において、用語“アシル化（ａｃｙｌａｔｉｏｎ）”は、分子の置換基の一つがアシル基によって置換される化学変化、或いは、分子内にアシル基を導入する工程を言及する。

本明細書において、“酸化薬品（ｏｘｉｄｉｚｉｎｇ ｃｈｅｍｉｃａｌ）”は、織物を増白することが可能な化学薬品である。酸化薬品は増白するために適切な量、ｐＨ及び温度で存在する。この用語は、過酸化水素及び過酸を含むが、但しこれらに限定されない。

本明細書において、用語“精製された（ｐｕｒｉｆｉｅｄ）”及び“分離された（ｉｓｏｌａｔｅｄ）”は、試料からの混入物質の除去及び／又は試料又は材料が、それらが天然に結び付いている少なくとも一種の成分から摘出されている、材料（例えばタンパク質、核酸、細胞等）を言及する。例えば、これらの用語は、例えば無傷の生態系などの自然な状態において見られるような、通常付随する成分を実質的に或いは本質的に含まない材料を言及する。

本明細書において、用語“ポリヌクレオチド”は、任意の長さ、そして任意の三次元構造及びシングル又はマルチストランド（例えばシングルストランド、ダブルストランド、トリプルヘリカルなど）のヌクレオチドの多量体型を言及し、それらは、デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び／又は、変形ヌクレオチド又は塩基又はそれらの類似体などのデオキシオリゴヌクレオチド又はリボヌクレオチドの類似体又は変形体を含む。遺伝情報は退化しているため、複数のコドンが特定のアミノ酸をエンコードするために使用され得、本発明の文脈中で使用されるポリヌクレオチドは、特定のアミノ酸配列をエンコードする。任意の型の変形ヌクレオチド又はヌクレオチド類似体が使用され得、ポリヌクレオチドが使用条件下で所望の官能性を保有する限りにおいて、ヌクレアーゼ耐性（例えば、デオキシ，２’−Ｏ−Ｍｅ，ホスホロチオエート等）を増加させる変形物が含まれる。放射性又は非放射性標識又はビオチン等のアンカー等の検知又は捕獲の目的で、標識もまた組み込まれる。用語ポリヌクレオチドはまた、ペプチド核酸（ＰＮＡ）も含む。ポリヌクレオチドは天然物又は非天然物で有り得る。用語“ポリヌクレオチド”及び“核酸”及び“オリゴヌクレオチド”は、本書において互換的に使用される。本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡ，ＤＮＡ、又は双方、及び／又はそれらの変形体及び／又は類似体を含み得る。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド成分で中断され得る。一種以上のホスホジエステル結合は、別の結合基で置換され得る。これら代替の結合基としては、但しこれらに限定されないが、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（“チオエート”）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（“ジチオエート）”、（Ｏ）ＮＲ₂（“アミデート”）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ又はＣＨ₂（“ホルムアセタール”）（式中、各Ｒ又はＲ’はそれぞれ独立して、Ｈ、または置換又は非置換であり所望によりエーテル（−Ｏ−）結合を含む炭素原子数１乃至２０のアルキル基、アリール基、アルケニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基又はアラルジル（ａｒａｌｄｙｌ）基を表す）で置換されている実施態様が挙げられる。ポリヌクレオチドにおけるすべての結合が同一である必要はない。ポリヌクレオチドは線状又は円形であり得、或いは線状と円形の組み合わせ部分を含み得る。適切なポリヌクレオチドは、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレットに記載されている。

本明細書において用語“ポリペプチド”は、アミノ酸からなり、当業者によってタンパク質として認識される、任意の合成物を言及する。本書において、アミノ酸残基に対して通常の１文字又は３文字のコードが用いられる。用語“ポリペプチド”及び“プロテイン”は、本書において互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸ポリマーを言及する。ポリマーは、線状又は分岐状であり得、それは変性アミノ酸を含み得、非アミノ酸で中断され得る。この用語はまた自然に変性された、又は、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、脂質化、酢酸化、リン酸化、或いは、標識化合物との結合などのその他の操作又は変性などの介入による変性がなされたアミノ酸ポリマーも包含する。また定義には、例えば、１種以上のアミノ酸類似体（例えば非天然アミノ酸等）、並びに、当業界で既知の変性物を含むポリペプチドも含まれる。

本明細書において、用語“類似配列”、“同族配列”、“野生型（ｗｉｌｄ−ｔｙｐｅ）又は天然（ｎａｔｉｖｅ）タンパク質”、“野生型配列”、“天然配列”、“自然発生的（ｎａｔｕｒａｌｌｙ−ｏｃｃｕｒｉｎｇ）配列”、“野生型遺伝子”、“関連タンパク質”“誘導タンパク質”、“変異タンパク質”などは、当業者によく知られており、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレット、１２、１３及び５０−５２頁に詳細に記載され、参照することにより本書に援用される。幾つかの実施態様において、同族タンパク質は所望の活性を有する酵素を製造するために操作される。

本書に記載される酵素の変異体の製造に適する幾つかの方法は当技術分野において既知であり、これらに限定されないが、部位飽和変異、走査変異、挿入変異、ランダム変異、部位特異的変異、及び指向進化、並びに様々な他の組み換え手法等が挙げられる。

配列間の相同性の度合いは、任意の既知である適切な方法を用いて測定され得る。例えば、ＰＩＬＥＵＰは配列の相同性のレベルを測定するのに有用なプログラムである。ＰＩＬＥＵＰは、先進的な、対のアラインメントを用い、関連配列のグループから、多配列アラインメントを創りだす。それはまた、アライメントを創りだすのに用いられた集団関係性を示すツリーをプロットする。他の有用なアルゴリズムの例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。有用な方法及びプログラムは、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレット、５９頁及び６０頁において言及され、参照することにより本書に援用される。

参照（例えば野生型）配列と比較されるポリヌクレオチド又はポリペプチド配列、並びに、配列同一性が測定される方法の文脈中で通常使用されている用語“実質的に類似の”及び“実施的に同一の”は、国際公開第２００５／０５６７８２号パンフレット、６１頁及び６２頁においてより詳細に記載され、参照することにより本書に援用される。

本明細書において、用語“界面活性剤”は、液体の表面張力を減少させる物質を言及する。

本明細書において、用語“乳化剤”は、別の溶液中である液体の懸濁を促進する物質を言及する。

本明細書において、用語“金属イオン封鎖剤”は、金属が非イオン化形態を有している水溶性錯体を形成することによって、金属イオンと反応することができる物質を言及する。

本明細書において、用語“カタラーゼ”は、水と酸素への過酸化水素の分解を触媒する酵素（すなわち、触媒活性を有するポリペプチド）を言及する。

本明細書において、用語“バッチプロセス”又は“バッチ式プロセス”又は“不連続プロセス”又は“排出プロセス”は、各バッチ全体が一度に一つのプロセス又は一つのプロセス段階を受ける、ロット毎又はバッチ毎の織物の処理を言及する。

本明細書において、用語“溶液比（ｌｉｑｕｏｒ ｒａｔｉｏ）”は、織物処理工程中に使用する溶液（ｌｉｑｕｉｄ）の質量と、処理する織物の質量の比率を言及する。

本発明の酵素的織物色調調整方法に従い使用する酵素的色調調整組成物は、ペルヒドロラーゼ酵素、過酸化水素源及び／又は過酸化水素の存在中で、基質上のペルヒドロラーゼ酵素の触媒的反応で過酸の製造に適するペルヒドロラーゼ酵素のためのエステル基質を含む。酵素的色調調整組成物は、所望により、さらに、界面活性剤及び／又は乳化剤、過酸化物安定剤、蛍光増白剤、酵素的デサイジング剤、バイオポリッシング剤、併用製品、金属イオン封鎖剤、又は、織物色調調整プロセスの間、ｐＨを約６乃至約８に維持するバッファーを含み得る。

以下に、本発明の方法に従って使用する成分をそれら成分の量の情報と共に、より詳細に記述する。特に記載の無い限り、部（ｐｐｍ）は質量部を表す。

ペルヒドロラーゼ酵素
一種以上のペルヒドロラーゼ酵素が、本明細書に記載された、酵素的織物色調を調整する方法に従う組成物で使用され得る。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は自然に発生する（即ち、ペルヒドロラーゼ酵素は細胞ゲノムによってエンコードされる）。幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、自然発生するペルヒドロラーゼ酵素のアミノ酸配列と等しい、少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％のアミノ酸配列を含むか、それらから構成されるか、或いは本質的にそれらから構成される。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、自然に発生するマイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼ酵素である。幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のアミノ酸配列、又はそれらの変異体又は同族体を含むか、それらから構成されるか、或いは本質的にそれらから構成される。幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のアミノ酸配列と等しい、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％又は９９．５％のアミノ酸配列を含むか、それらから構成されるか、或いは本質的にそれらから構成される。

マイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼのアミノ酸配列を以下に示す。
ＭＡＫＲＩＬＣＦＧＤＳＬＴＷＧＷＶＰＶＥＤＧＡＰＴＥＲＦＡＰＤＶＲＷＴＧＶＬＡＱＱＬＧＡＤＦＥＶＩＥＥＧＬＳＡＲＴＴＮＩＤＤＰＴＤＰＲＬＮＧＡＳＹＬＰＳＣＬＡＴＨＬＰＬＤＬＶＩＩＭＬＧＴＮＤＴＫＡＹＦＲＲＴＰＬＤＩＡＬＧＭＳＶＬＶＴＱＶＬＴＳＡＧＧＶＧＴＴＹＰＡＰＫＶＬＶＶＳＰＰＰＬＡＰＭＰＨＰＷＦＱＬＩＦＥＧＧＥＱＫＴＴＥＬＡＲＶＹＳＡＬＡＳＦＭＫＶＰＦＦＤＡＧＳＶＩＳＴＤＧＶＤＧＩＨＦＴＥＡＮＮＲＤＬＧＶＡＬＡＥＱＶＲＳＬＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）。

マイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼをエンコードする、対応するポリヌクレオチド配列は以下のとおりである：
５’−ＡＴＧＧＣＣＡＡＧＣＧＡＡＴＴＣＴＧＴＧＴＴＴＣＧＧＴＧＡＴＴＣＣＣＴＧＡＣＣＴＧＧＧＧＣＴＧＧＧＴＣＣＣＣＧＴＣＧＡＡＧＡＣＧＧＧＧＣＡＣＣＣＡＣＣＧＡＧＣＧＧＴＴＣＧＣＣＣＣＣＧＡＣＧＴＧＣＧＣＴＧＧＡＣＣＧＧＴＧＴＧＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＡＧＣＴＣＧＧＡＧＣＧＧＡＣＴＴＣＧＡＧＧＴＧＡＴＣＧＡＧＧＡＧＧＧＡＣＴＧＡＧＣＧＣＧＣＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＡＴＣＧＡＣＧＡＣＣＣＣＡＣＣＧＡＴＣＣＧＣＧＧＣＴＣＡＡＣＧＧＣＧＣＧＡＧＣＴＡＣＣＴＧＣＣＧＴＣＧＴＧＣＣＴＣＧＣＧＡＣＧＣＡＣＣＴＧＣＣＧＣＴＣＧＡＣＣＴＧＧＴＧＡＴＣＡＴＣＡＴＧＣＴＧＧＧＣＡＣＣＡＡＣＧＡＣＡＣＣＡＡＧＧＣＣＴＡＣＴＴＣＣＧＧＣＧＣＡＣＣＣＣＧＣＴＣＧＡＣＡＴＣＧＣＧＣＴＧＧＧＣＡＴＧＴＣＧＧＴＧＣＴＣＧＴＣＡＣＧＣＡＧＧＴＧＣＴＣＡＣＣＡＧＣＧＣＧＧＧＣＧＧＣＧＴＣＧＧＣＡＣＣＡＣＧＴＡＣＣＣＧＧＣＡＣＣＣＡＡＧＧＴＧＣＴＧＧＴＧＧＴＣＴＣＧＣＣＧＣＣＡＣＣＧＣＴＧＧＣＧＣＣＣＡＴＧＣＣＧＣＡＣＣＣＣＴＧＧＴＴＣＣＡＧＴＴＧＡＴＣＴＴＣＧＡＧＧＧＣＧＧＣＧＡＧＣＡＧＡＡＧＡＣＣＡＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＣＧＴＧＴＡＣＡＧＣＧＣＧＣＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＡＴＧＡＡＧＧＴＧＣＣＧＴＴＣＴＴＣＧＡＣＧＣＧＧＧＴＴＣＧＧＴＧＡＴＣＡＧＣＡＣＣＧＡＣＧＧＣＧＴＣＧＡＣＧＧＡＡＴＣＣＡＣＴＴＣＡＣＣＧＡＧＧＣＣＡＡＣＡＡＴＣＧＣＧＡＴＣＴＣＧＧＧＧＴＧＧＣＣＣＴＣＧＣＧＧＡＡＣＡＧＧＴＧＣＧＧＡＧＣＣＴＧＣＴＧＴＡＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のマイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼアミノ酸配列中の位置と等しい一種以上アミノ酸位置で、一種以上の置換基を含む。幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、
Ｍ１，Ｋ３，Ｒ４，Ｉ５，Ｌ６，Ｃ７，Ｄ１０，Ｓ１１，Ｌ１２，Ｔ１３，Ｗ１４，Ｗ１６，Ｇ１５，Ｖ１７，Ｐ１８，Ｖ１９，Ｄ２１，Ｇ２２，Ａ２３，Ｐ２４，Ｔ２５，Ｅ２６，Ｒ２７，Ｆ２８，Ａ２９，Ｐ３０，Ｄ３１，Ｖ３２，Ｒ３３，Ｗ３４，Ｔ３５，Ｇ３６，Ｌ３８，Ｑ４０，Ｑ４１，Ｄ４５，Ｌ４２，Ｇ４３，Ａ４４，Ｆ４６，Ｅ４７，Ｖ４８，Ｉ４９，Ｅ５０，Ｅ５１，Ｇ５２，Ｌ５３，Ｓ５４，Ａ５５，Ｒ５６，Ｔ５７，Ｔ５８，Ｎ５９，Ｉ６０，Ｄ６１，Ｄ６２，Ｐ６３，Ｔ６４，Ｄ６５，Ｐ６６，Ｒ６７，Ｌ６８，Ｎ６９，Ｇ７０，Ａ７１，Ｓ７２，Ｙ７３，Ｓ７６，Ｃ７７，Ｌ７８，Ａ７９，Ｔ８０，Ｌ８２，Ｐ８３，Ｌ８４，Ｄ８５，Ｌ８６，Ｖ８７，Ｎ９４，Ｄ９５，Ｔ９６，Ｋ９７，Ｙ９９Ｆ１００，Ｒ１０１，Ｒ１０２，Ｐ１０４，Ｌ１０５，Ｄ１０６，Ｉ１０７，Ａ１０８，Ｌ１０９，Ｇ１１０，Ｍ１１１，Ｓ１１２，Ｖ１１３，Ｌ１１４，Ｖ１１５，Ｔ１１６，Ｑ１１７，Ｖ１１８，Ｌ１１９，Ｔ１２０，Ｓ１２１，Ａ１２２，Ｇ１２４，Ｖ１２５，Ｇ１２６，Ｔ１２７，Ｔ１２８，Ｙ１２９，Ｐ１４６，Ｐ１４８，Ｗ１４９，Ｆ１５０，Ｉ１５３，Ｆ１５４，Ｉ１９４,及びＦ１９６から選択されるアミノ酸置換基の任意の一つ又は任意の組み合わせを含む。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のマイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼアミノ酸配列中の位置と等しい一種以上のアミノ酸位置で、一種以上の下記置換基を含む：
Ｌ１２Ｃ，Ｑ，又はＧ；Ｔ２５Ｓ，Ｇ，又はＰ；Ｌ５３Ｈ，Ｑ，Ｇ，又はＳ；Ｓ５４Ｖ，Ｌ Ａ，Ｐ，Ｔ，又はＲ；Ａ５５Ｇ又はＴ；Ｒ６７Ｔ，Ｑ，Ｎ，Ｇ，Ｅ，Ｌ，又はＦ；Ｋ９７Ｒ；Ｖ１２５Ｓ，Ｇ，Ｒ，Ａ，又はＰ；Ｆ１５４Ｙ；Ｆ１９６Ｇ。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロドラーゼ酵素はＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＳ５４Ｖ変異体であり、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３として示され、Ｓ５４Ｖ置換基に下線が付されている。

マイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼのアミノ酸配列を以下に示す：
ＭＡＫＲＩＬＣＦＧＤＳＬＴＷＧＷＶＰＶＥＤＧＡＰＴＥＲＦＡＰＤＶＲＷＴＧＶＬＡＱＱＬＧＡＤＦＥＶＩＥＥＧＬＶＡＲＴＴＮＩＤＤＰＴＤＰＲＬＮＧＡＳＹＬＰＳＣＬＡＴＨＬＰＬＤＬＶＩＩＭＬＧＴＮＤＴＫＡＹＦＲＲＴＰＬＤＩＡＬＧＭＳＶＬＶＴＱＶＬＴＳＡＧＧＶＧＴＴＹＰＡＰＫＶＬＶＶＳＰＰＰＬＡＰＭＰＨＰＷＦＱＬＩＦＥＧＧＥＱＫＴＴＥＬＡＲＶＹＳＡＬＡＳＦＭＫＶＰＦＦＤＡＧＳＶＩＳＴＤＧＶＤＧＩＨＦＴＥＡＮＮＲＤＬＧＶＡＬＡＥＱＶＲＳＬＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のマイコバクテリウム・スメグマティスペルヒドロラーゼアミノ酸配列中のアミノ酸位置と等しいアミノ酸位置で、アミノ酸置換基の組み合わせ：Ｌ１２Ｉ Ｓ５４Ｖ；Ｌ１２Ｍ Ｓ５４Ｔ；Ｌ１２Ｔ Ｓ５４Ｖ；Ｌ１２Ｑ Ｔ２５Ｓ Ｓ５４Ｖ；Ｌ５３Ｈ Ｓ５４Ｖ；Ｓ５４Ｐ Ｖ１２５Ｒ；Ｓ５４Ｖ Ｖ１２５Ｇ；Ｓ５４Ｖ Ｆ１９６Ｇ；Ｓ５４Ｖ Ｋ９７Ｒ Ｖ１２５Ｇ；又はＡ５５Ｇ Ｒ６７Ｔ Ｋ９７Ｒ Ｖ１２５Ｇ：を含む。

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、少なくとも１の過加水分解対加水分解比率を含む、幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、１より大きい過加水分解対加水分解比率を含む、

幾つかの実施態様において、ペルヒドロラーゼ酵素は、織物材料の処理に使用する水性組成物（浴）の総質量に対して、約０．５乃至約２．５ｐｐｍ、約１．５乃至約２．０ｐｐｍ、例えば１．７ｐｐｍの濃度で本発明の織物の色調を調整する方法に使用する酵素的織物色調調整組成物中に供給される。

エステル基質
本明細書に記載される方法に従い使用される酵素的色調調整組成物は、過酸化水素の存在下で過酸を生じさせるため、ペルヒドロラーゼ酵素の基質としての役割を担うエステルを含む。幾つかの実施態様において、エステル基質は脂肪族及び／又は芳香族カルボン酸のエステルである。幾つかの実施態様において、エステル基質は、下記ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、カプリル酸、ノナン酸、デカン酸、ドデカン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸及びオレイン酸の一種以上のエステルである。幾つかの実施態様において、過酸の形成のためのアシル供与体としてグリセロールトリアセテート、グリセロールトリブチレート及び他のエステル類が使用される。幾つかの実施態様において、エステル基質は、プロピレングリコールジアセテート、エチレングリコールジアセテート、グリセロールトリアセテート、酢酸エチル、及びグリセロールトリブチレートから選択される。幾つかの実施態様において、エステル基質はプロピレングリコールジアセテート、エチレングリコールジアセテート又は酢酸エチルである。幾つかの実施態様において、エステル基質はプロピレングリコールジアセテートである。

幾つかの実施態様において、例えばプロピレングリコールジアセテートなどのエステル基質は、織物材料の処理に使用される水性組成物（浴）の総質量に対して、約２０００乃至約４０００ｐｐｍ、約２５００乃至約３５００ｐｐｍ、約２８００ｐｐｍ乃至約３２００ｐｐｍ、又は約３０００ｐｐｍの濃度で与えられる。

過酸化水素源
本明細書に記載の方法に従い使用される酵素的色調調整組成物は、過酸化水素源を含む。過酸化水素は浴に直接添加され得るか、或いは、化学的、電気化学的、及び／又は酵素的手法によって“その場で”連続的に製造される。

幾つかの実施態様において、過酸化水素源は過酸化水素である。幾つかの実施態様において、過酸化水素源は、水の添加で自然に過酸化水素が生じる固体化合物である。そのような化合物は、様々な無機又は有機化合物の過酸化水素付加物が挙げられ、最も広く利用されるのは過炭酸ナトリウムとしても言及される過酸化水素炭酸ナトリウムである。

無機過酸化水素塩は、過酸化水素源の一つの実施態様である。無機過酸化水素塩の例としては、過ホウ素塩、過炭酸塩、過リン酸塩、過硫酸塩及び過ケイ酸塩が挙げられる。無機過酸化水素塩は一般にアルカリ金属塩である。

本明細書に記載の方法に従い使用される組成物において有用な他の過酸化水素付加物としては、ゼオライトの過酸化水素付加物、或いは過酸化水素尿素である。

過酸化水素源化合物は、結晶性の及び／又は他の保護を含まない実質的に純粋な固体として含まれ得る。しかしながら、特定の過酸化水素塩に関して、粒状組成物の好ましい実行形態は、粒状製品中の過酸化水素塩のより良い保管安定性をもたらす材料の被覆形態を利用する。適切な被覆は、アルカリ金属ケイ酸塩、炭酸塩、又はホウ素塩又はそれらの混合物などの無機塩、又はワックス、オイル又は脂肪酸石鹸等の有機物質を含む。

幾つかの実施態様において、過酸化水素源は、酵素的過酸化水素生成システムである。
一つの実施態様において、酵素的過酸化水素生成システムは、オキシダーゼ及びその基質を含む。適切なオキシダーゼ酵素として、但しこれらに限定されないが、グルコースオキシダーゼ、ソルビトールオキシダーゼ、ヘキソースオキシダーゼ、コリンオキシダーゼ、アルコールオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、カルボキシアルコールオキシダーゼ、Ｌ−アミノ酸オキシダーゼ、グリシンオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダーゼ、グルタミン酸オキシダーゼ、サルコシンオキシダーゼ、リジンオキシダーゼ、乳酸オキシダーゼ、バニリルオキシダーゼ、グリコレートオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ウリカーゼ、シュウ酸オキシダーゼ、及びキサンチンオキシダーゼが挙げられる。

下記方程式は、過酸化水素の酵素的生成の結合システムの例を与える。
グルコースオキシダーゼ
グルコース＋Ｈ₂Ｏ ――――――――――――→ グルコン酸＋Ｈ₂Ｏ₂
＋
ペルヒドロラーゼ
Ｈ₂Ｏ₂＋エステル基質 ――――――――――――→ アルコール＋過酸

本発明は、本発明において使用され得る適切な基質と共にＨ₂Ｏ₂を生成する任意の酵素として、特定の酵素を限定することを意図していない。例えば、酪酸と酸素からＨ₂Ｏ₂を生成することが知られているラクトバチルス種からのラクターゼオキシダーゼを使用し得る。酸（例えば、上述の例のグルコン酸の）の酵素的生成の一つの有利点は、塩基性溶液のｐＨを、色調の調整において過酸が最も効果的であるｐＨ範囲（即ち、ｐＫａ以下）に下げる点である。過酸化水素を生成可能な他の酵素（例えばアルコールオキシダーゼ、エチレングリコールオキシダーゼ、グリセロールオキシダーゼ、アミノ酸オキシダーゼ等）もまた、過酸の生成のために、本発明のペルヒドロラーゼ酵素と組み合わせてエステル基質と共に使用され得る。

幾つかの実施態様において、過酸化水素生成オキシダーゼは、糖質オキシダーゼである。

過酸化水素はまた、例えば酸素と水素ガスが供給される燃料電池を用いて、電気化学的に生成し得る。

幾つかの実施態様において、過酸化水素源は、織物材料の処理に使用する水性組成物（浴）の総質量に対して、約１０００乃至約３２００ｐｐｍ、約１５００乃至約２８００ｐｐｍ、約２０００乃至約２２００ｐｐｍ、又は約２１００ｐｐｍの濃度で供給される過酸化水素である。

界面活性剤及び乳化剤
本発明方法に従い使用される酵素的織物色調調整組成物は、一種以上、即ち少なくとも一種の界面活性剤及び／又は少なくとも一種の乳化剤を含み得る。本発明の実施に使用するのに適する界面活性剤としては、限定されるものではないが、非イオン性（例えば米国特許第４，５６５，６４７号明細書を参照、参照によって本明細書に援用される）；アニオン性；カチオン性；及び両性イオン性界面活性剤（例えば米国特許第３，９２９，６７８号明細書を参照、参照によって本明細書に援用される）が挙げられる。アニオン性界面活性剤としては、限定されるものではないが、線状アルキルベンゼンスルホネート、α−オレフィンスルホネート、アルキルスルフェート（脂肪族アルコールスルフェート）、アルコールエトキシスルフェート、第二アルカンスルホネート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、アルキル−又はアルケニルコハク酸及び石鹸が挙げられる。非イオン性界面活性剤としては、限定されるものではないが、脂肪族アルコールエトキシレート、イソトリデカノールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、及びグルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（“グルカミド”）が挙げられる。

幾つかの実施態様において、界面活性剤及び／又は乳化剤は、非イオン性界面活性剤を含む。ある実施態様において、非イオン性界面活性剤は脂肪族アルコールエトキシレートである。ある実施態様において、非イオン性界面活性剤はイソトリデカノールエトキシレートである。ある実施態様において、非イオン性界面活性剤は脂肪族アルコールエトキシレートとイソトリデカノールエトキシレートである。

ある実施態様において、本発明の方法に従い使用される組成物は、界面活性剤と乳化剤を含む。

界面活性剤は、織物材料の処理に使用される水性組成物（浴）の総質量に対して、約３００ｐｐｍ乃至約４８００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ乃至約３６００ｐｐｍ、又は約３００ｐｐｍ乃至約１２００ｐｐｍの濃度で存在し得る。

幾つかの実施態様において、酵素的色調調整組成物は、イソトリデカノールエトキシレートを、織物材料の処理に使用する水性組成物（浴）の総質量に対して、約３００ｐｐｍ乃至約３６００ｐｐｍ、約６００ｐｐｍ乃至約３０００ｐｐｍ、又は約９００ｐｐｍ乃至約２４００ｐｐｍの濃度で含み得る。

過酸化物安定剤
本明細書に記載される方法に従い使用される酵素的色調調整組成物は過酸化物安定剤を含み得る。過酸化物安定剤の例としては、但し限定されないが、ケイ酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、アクリル酸ポリマー、マグネシウム塩及びホスホン酸である。ある実施態様において、過酸化物安定剤はホスホン酸である。

過酸化物安定剤は、織物材料の処理に使用する水性組成物（浴）の総質量に対して、約６０ｐｐｍ乃至約６００ｐｐｍ、約６０ｐｐｍ乃至約１２００ｐｐｍ、又は約１２０ｐｐｍ乃至約９６０ｐｐｍの濃度で、酵素的織物色調調整組成物に存在し得る。

併用製品（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔ）
少なくとも一種の界面活性剤及び／又は乳化剤、少なくとも一種の過酸化物安定剤及び少なくとも一種の金属イオン封鎖剤が、適切に、少なくとも一種の界面活性剤及び／又は乳化剤、少なくとも一種の過酸化物安定剤及び少なくとも一種の金属イオン封鎖剤の各々が含まれる併用製品として、適用される。前記併用製品は、漂白処理剤が指定され、市販されており、例えばＣＬＡＲＩＴＥ（登録商標）ＬＴＣ、ＣＬＡＲＩＴＥ（登録商標）ＷＩＮ、又はＣＬＡＲＩＴＥ（登録商標）ＯＮＥ（ハンツマン製）である。

界面活性剤は、漂白処理剤の総質量に対して、約５％乃至約４０％、約２０％乃至約３０％、又は約５％乃至約１０％の濃度で存在し得る。

過酸化物安定剤は、漂白処理剤の総質量に対して、約１％乃至約５％、約１％乃至約１０％、又は約２％乃至約８％の濃度で、併用製品に存在し得る。

金属イオン封鎖剤は、漂白処理剤の総質量に対して、約１％乃至約１５％、約５％乃至約１０％、又は約３％乃至約１０％の濃度で、併用製品に存在し得る。

幾つかの実施態様において、漂白処理剤はイソトリデカノールエトキシレートを、漂白処理剤の総質量に対して、約５％乃至約３０％、約１０％乃至約２５％、又は約１５％乃至約２０％の濃度で含む。

漂白処理剤は、上記成分を含む水性組成物として適切に提供される。

バッファー（Ｂｕｆｆｅｒ）
酵素的色調調整組成物は、ｐＨ約６乃至約８に組成物のｐＨを維持することができるバッファーを含み得る。前記バッファーは、例えば、ｐＨ７のリン酸バッファーであり、又はｐＨ７の炭酸ナトリウム又は炭酸カリウムである。

酵素的織物色調調整方法
本発明による方法は、特に、バット染料、反応性染料、直接染料及び硫化染料による染色デニムの処理に適し、特に好ましくはインディゴ染色デニム及び／又は硫化染色デニムに適する。本方法は、従来の方法を用いて処理した織物と比較して、織物材料にやわらかな手触りと優れたシワ回復効果を与える。本明細書に記載の方法は、特に、不連続プロセスとして実施されるが、パッド−バッチ又はパッド−ロールのように半連続プロセスとして実施されることも可能である。

本発明の方法は、約２：１乃至約５０：１、約５：１乃至約２０：１、例えば約２０：１又は約１０：１の溶液比を適切に使用する。織物は、温度約５５℃乃至約７５℃、約６０℃乃至約７０℃で、処理時間約２０乃至約６０分で、ｐＨ約６乃至約８で、酵素的色調調整組成物と接触される。ある実施態様において、処理温度は約６５℃であり、処理時間は約５０分である。幾つかの実施態様において、酵素的色調調整組成物の温度は、当初温度約２０℃から約５０℃まで、例えば約２０℃から約４０℃まで、色調調整の処理温度に到達するまで、毎分約２℃ずつ上昇される。一回以上のリンス工程が、酵素的色調調整組成物による織物材料の処理後に実施され、色調調整組成物を除去する。
適切に、織物は水性組成物（水又は水含有組成物）でリンスされる。幾つかの実施態様において、リンス温度は約４０℃乃至約６０℃、例えば約５０℃である。

幾つかの実施態様において、水性リンス組成物は、過酸化水素の水と酸素への分解を触媒するカタラーゼ酵素を含む。ある実施態様において、織物は、カタラーゼを含む水性組成物で、各リンス１０分間、２回リンスされる。ある実施態様において、残りの過酸化水素は、カタラーゼを含む水性組成物で、約５０℃で２回リンスすることによって除去される。幾つかの実施態様において、カタラーゼは、最初に浴に滴下することなく、ペルヒドロラーゼ酵素が含まれる溶液に、直接添加され得る。

本発明に好適に使用されるポリエステル基質を加水分解する酵素として、例えばペクチナーゼ、クチナーゼ又はリパーゼが使用され得る。これら酵素、その用途並びに酵素活性の分析方法は、国際公開第２００７／１３６４６９号パンフレット、２１及び２２頁に詳細に記載並びに言及され、参照することにより本書に援用される。

本発明に従う方法において所望により使用され得るさらなる好適な酵素は、アミラーゼ（デサイジング剤）及びセルラーゼ（バイオポリッシング剤）である。

以下の実施例は、本発明を説明することを意図するものであって、限定することを意図するものはない。他に記載の無い限り、温度はセルシウス度であり、パーツは質量部であり、パーセント値は質量パーセントである。質量部は、キログラム対リットルとしての質量体積と同じ意味を有する。

本発明の方法と従来の過酸化水素を用いた酸化漂白の方法との比較を、下記に記述の手順に従い、マチスＡＧ社のラボマット（Ｍａｔｈｉｓ ＡＧ Ｌａｂｏｍａｔ）を用いる布地の排出処理により、実施した。

実施例１及び２及び比較例３
１浴排出法にて実施した酵素的色調調整（実施例１及び２）：
６５℃で５分間洗浄し、オーバーフロー／５分間で冷却したインディゴ染色デニム見本（長さ：１１ｃｍ、幅：９．５ｃｍ）を、併用製品、バッファー、プロピレングリコールジアセテート、過酸化水素及びペルヒドロラーゼ酵素を表１に示す量にて含む浴で、溶液比１０：１で処理した。温度を周囲温度から目的温度６５℃まで毎分２℃ずつ上昇させた。浴を、６５℃で５０分間維持し、洗浄及び脱水後に、見本を１０分間、それぞれ５０℃で２回洗浄し、７０℃で乾燥させた。カタラーゼＴ１００（ジェネンコア（Ｇｅｎｅｎｃｏｒ）社販売）の２５％溶液 ０．５ｇ／ｌが各リンス液に含まれていた。

１浴排出法で実施したアルカリ着色調整（比較例３）：
ペルヒドロラーゼ酵素及びリン酸バッファーを水酸化ナトリウムに替えた以外は、上記手順を繰り返した。

実施例４
１浴排出法にて実施した酵素的色調洗浄：
１０：１の溶液比で、６０℃で１０分間、０．５ｇ／ｌ ＣＬＡＲＩＴＥ（登録商標）ＷＩＮ、０．５ｇ／ｌ Ａｌｂｆｌｕｉｄ Ｃ及び１．５ｇ／ｌ ＵＬＴＲＡＶＯＮ（登録商標）ＲＷ（非イオン性界面活性剤、ハンツマン社によって市販される）にてデサイズしたインディゴ染色デニム見本（長さ：１１ｃｍ、幅：９．５ｃｍ）を、同じ浴で、１．５ｇ／ｌのＩＮＶＡＺＹＭＥ（登録商標）ＬＴＥ（ペルヒドロラーゼ酵素）で、１０：１の溶液比、６０℃／１０分間処理した。
デサイジング後、デニムを回転洗浄機で１ｋｇの軽石でストーンウォッシュ加工した（６０℃、４０分間）。続いて、１．０ｇ／ｌ ＣＬＡＲＩＴＥ（登録商標）ＬＴＣ（併用製品、ハンツマン製）、２．５ｇ／ｌのソーダ灰、３．０ｇ／ｌのプロピレングリコールジアセテート、３．０ｇ／ｌの過酸化水素及び１．０ｇのＩＮＶＡＺＹＭＥ（登録商標）ＬＴＥ（ペルヒドロラーゼ酵素）を、溶液に添加した。浴を６５℃で５０分間維持し、冷却し、脱水した見本を、０．５ｇ／ｌ ＩＮＶＡＺＹＭＥ（登録商標）ＣＡＴ（残存する過酸化物を除去するための安定化された液体カタラーゼ酵素）を含む浴で各５０℃で１５分間２回リンスし、その後、１５分間、１．０ｇ／ｌの柔軟剤（Ｔｕｒｐｅｘ ＣＡＮ ｎｅｗ）を含む浴で室温にてリンスし、その後乾燥させた。得られたデニム見本は柔らかい手触りと、非常に優れたシワ回復特性を有していた。

実施例５
インディゴ染色デニムにおける染色変色のペルヒドロラーセ濃度効果
材料
ペルヒドロラーゼ（ＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＷｈｉｔｅ １（３２１Ｕ／ｇ、ダニスコＵＳ社のジェネンコア・デビジョンより入手）をこの例に使用した。Ｈ₂Ｏ₂分析グレード（３０質量％）及びプロピレングリコールジアセテート＞９９．７％（ＰＤＧＡ）をシグマアルドリッチ社より購入した。

手順
約３ｋｇの重さの１２レッグ（ＡＣＧデニムスタイル８０２７０）のデニムをユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０洗浄機にて下記条件にてデサイズした。
・１５分間、１０：１の溶液比、５０℃で、０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）のＯｐｔｉｓｉｚｅ（登録商標）１６０アミラーゼ（ジェネンコア社）及び０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）の非イオン界面活性剤（Ｕｌｔｒａｖｏｎ（登録商標）ＲＷ（ハンツマン社））でデサイジング
・５分間、３０：１の溶液比で２回のリンス工程
デサイジング後、デニムをユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０回転洗浄機で下記プログラムに従ってストーンウォッシュ加工した。
・５分間、１０：１の溶液比で冷却リンス
・６０分間、１０：１の溶液比、５５℃で、１ｋｇの軽石、ｐＨ６．５−７（１ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．５３ｇ／ｌのクエン酸Ｈ₂Ｏ）、０．０２５ｇ／ｌのＭＥＸ−５００天然セルラーゼ（明治）を用いてストーンウォッシュ加工
・各５分間の２回の冷却リンス工程
デニムを家庭用乾燥機で乾燥した後、見本（７×７ｃｍ）を製造した。ストーンウォッシュ後、実験をラウンダー−Ｏ−メーター（ラピッドラボラトリーダイングマシーンタイプＨ１２）にて、下記工程に従って実施した：
・４５０ｍｌステンレス製反応容器を、１００ｍｌのｐＨ８リン酸バッファー（８．９ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．４ｇ／ｌのリン酸一ナトリウム無水物）で満たした。
・各容器に、５つの１０ｇ質量のストーンウォッシュ化デニム見本（７×７ｃｍ）を加えた。
・６ｍｌ／ｌのＨ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）と２ｍｌ／ｌのＰＤＧＡ（＞９９．７％）を加えた。
・ペルヒドロラーゼを濃度０．０１、０．０５、０．３、１．０、３．０又は１０ｍｌ／ｌで加えた。
・反応容器を閉鎖し、６０℃に予備加熱したラウンダー−Ｏ−メーターに搭載した。
・６０分間インキュベーション（低温放置）を実施し、その後、見本をオーバーフローによってリンスし、ＡＥＧ ＩＰＸ４遠心分離機で回転乾燥させ、Ｅｌｎａ Ｐｒｅｓｓ電気アイロンで綿プログラムにて乾燥させ、評価した。

デニム見本の評価
デニム見本を、ペルヒドロラーゼ処理の後に、ミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。測定は、ペルヒドロラーゼ処理の前後に行い、５つの見本の結果を平均した。総色差（ＴＣＤ）を式：ＴＣＤ＝√（ΔＬ）²＋（Δａ）²＋（Δｂ）²より算出した。結果を表２に示す。

実施例６
インディゴ染色デニムにおけるペルヒドロラーゼの染色変色性能のＨ₂Ｏ₂及びＰＤＧＡ濃度効果
手順
実施例５に記載されるように、約３ｋｇの重さの１２レッグ（ＡＣＧデニムスタイル８０２７０）のデニムをデサイズしストーンウォッシュ加工した。ストーンウォッシュ後、実験をラウンダー−Ｏ−メーター（ラピッドラボラトリーダイングマシーンタイプＨ１２）にて、下記工程に従って実施した：
・４５０ｍｌステンレス製反応容器を、１００ｍｌのｐＨ８リン酸バッファー（８．９ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．４ｇ／ｌのリン酸一ナトリウム無水物）で満たした。
・各容器に、５つの１０ｇ質量のストーンウォッシュ化デニム見本（７×７ｃｍ）を加えた。
・Ｈ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）とＰＤＧＡ（＞９９．７％）を、表３に示すような実験計画に従って添加した。

・１．０ｍｌ／ｌのペルヒドロラーゼを加えた（ＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＷｈｉｔｅ １（３２１Ｕ／ｇ）。
・反応容器を閉鎖し、６０℃に予備加熱したラウンダー−Ｏ−メーターに搭載した。
・６０分間インキュベーション（低温放置）を実施し、見本をオーバーフローによってリンスした後、ＡＥＧ ＩＰＸ４遠心分離機で回転乾燥させ、Ｅｌｎａ Ｐｒｅｓｓ電気アイロンで綿プログラムにて乾燥させ、評価した。

デニム見本の評価
デニム見本を、ペルヒドロラーゼ処理の後に、ミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。測定は、ペルヒドロラーゼ処理の前後に行い、５つの見本の結果を平均した。総色差（ＴＣＤ）を式：ＴＣＤ＝√（ΔＬ）²＋（Δａ）²＋（Δｂ）²より算出した。結果を表４に示す。

実施例７
インディゴ染色デニムにおけるペルヒドロラーゼの染色変色性能の時間効果
手順
実施例５に記載されるように、約３ｋｇの重さの１２レッグ（ＡＣＧデニムスタイル８０２７０）のデニムをデサイズしストーンウォッシュ加工した。ストーンウォッシュ後、実験をラウンダー−Ｏ−メーター（ラピッドラボラトリーダイングマシーンタイプＨ１２）にて、下記工程に従って実施した：
・４５０ｍｌステンレス製反応容器を、１００ｍｌのｐＨ８リン酸バッファー（８．９ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．４ｇ／ｌのリン酸一ナトリウム無水物）で満たした。
・各容器に、５つの１０ｇ質量のストーンウォッシュ化デニム見本（７×７ｃｍ）を加えた。
・６ｍｌ／ｌのＨ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）と０．２ｍｌ／ｌのＰＤＧＡ（＞９９．７％）をて添加した。
・１．０ｇ／ｌのペルヒドロラーゼを加えた（ＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＷｈｉｔｅ １（３２１Ｕ／ｇ）。
・反応容器を閉鎖し、６０℃に予備加熱したラウンダー−Ｏ−メーターに搭載した。
・１０、２０、３０、４０、５０、又は６０分間インキュベーション（低温放置）を実施し、見本をオーバーフローによってリンスした後、ＡＥＧ ＩＰＸ４遠心分離機で回転乾燥させ、Ｅｌｎａ Ｐｒｅｓｓ電気アイロンで綿プログラムにて乾燥させ、評価した。

デニム見本の評価
デニム見本を、ペルヒドロラーゼ処理の後に、ミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。測定は、ペルヒドロラーゼ処理の前後に行い、５つの見本の結果を平均した。総色差（ＴＣＤ）を式：ＴＣＤ＝√（ΔＬ）²＋（Δａ）²＋（Δｂ）²より算出した。結果を表５に示す。

実施例８
インディゴ染色デニムにおけるペルヒドロラーゼの染色変色性能の温度効果
手順
実施例５に記載されるように、約３ｋｇの重さの１２レッグ（ＡＣＧデニムスタイル８０２７０）のデニムをデサイズしストーンウォッシュ加工した。ストーンウォッシュ後、実験をラウンダー−Ｏ−メーター（ラピッドラボラトリーダイングマシーンタイプＨ１２）にて、下記工程に従って実施した：
・４５０ｍｌステンレス製反応容器を、１００ｍｌのｐＨ８リン酸バッファー（８．９ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．４ｇ／ｌのリン酸一ナトリウム無水物）で満たした。
・各容器に、５つの１０ｇ質量のストーンウォッシュ化デニム見本（７×７ｃｍ）を加えた。
・６ｍｌ／ｌのＨ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）と０．２ｍｌ／ｌのＰＤＧＡ（＞９９．７％）をて添加した。
・１．０ｍｌ／ｌのペルヒドロラーゼを加えた（ＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＷｈｉｔｅ １（３２１Ｕ／ｇ）。
・反応容器を閉鎖し、３０、４０、５０又は６０℃に予備加熱したラウンダー−Ｏ−メーターに搭載した。
・６０分間インキュベーション（低温放置）を実施し、見本をオーバーフローによってリンスした後、ＡＥＧ ＩＰＸ４遠心分離機で回転乾燥させ、Ｅｌｎａ Ｐｒｅｓｓ電気アイロンで綿プログラムにて乾燥させ、評価した。

デニム見本の評価
デニム見本を、ペルヒドロラーゼ処理の後に、ミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。測定は、ペルヒドロラーゼ処理の前後に行い、５つの見本の結果を平均した。総色差（ＴＣＤ）を式：ＴＣＤ＝√（ΔＬ）²＋（Δａ）²＋（Δｂ）²より算出した。結果を表６に示す。

実施例９
前面挿入式洗浄機におけるインディゴ染色デニムのセルラーゼ＋ペルヒドロラーゼ逐次プロセスによる色調整性能
手順
約３ｋｇの重さの１２レッグ（ＡＣＧデニムスタイル８０２７０）のデニムをユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０洗浄機にて下記条件にてデサイズした。
・１５分間、１０：１の溶液比、５０℃で、０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）のＯｐｔｉｓｉｚｅ（登録商標）１６０アミラーゼ（ジェネンコア社）及び０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）の非イオン界面活性剤（Ｕｌｔｒａｖｏｎ（登録商標）ＲＷ（ハンツマン社））でデサイジング
・５分間、３０：１の溶液比で２回の冷却リンス
デサイジング後、デニムをユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０回転洗浄機で下記プログラムに従ってストーンウォッシュ加工した。
・５分間、１０：１の溶液比で冷却リンス
・６０分間、１０：１の溶液比、５５℃で、１ｋｇの軽石、ｐＨ４．８（１ｇ／ｌのクエン酸三ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．８７ｇ／ｌのクエン酸Ｈ₂Ｏ）、１．１７ｇ／ｌのＩｎｄｉａｇｅ（登録商標）２ＸＬセルラーゼ（ジェネンコア社）を用いてストーンウォッシュ加工
・各５分間の２回の冷却リンス工程
・コントロールとして４レッグを引き上げ
ストーンウォッシュ後、ペルヒドロラーゼを用いた処理を、ユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０洗浄機にて下記工程に従って実施した。
・６０分間、溶液比１０：１、１ｇ／ｌのペルヒドロラーゼ（ＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＷｈｉｔｅ １（３２１Ｕ／ｇ））、６ｇ／ｌのＨ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）、及び３ｇ／ｌのＰＤＧＡ（＞９９．７％、）を用い、ｐＨ７（１ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．１７ｇ／ｌのクエン酸）及び温度６０℃。４Ｍの水酸化ナトリウム溶液の添加によりｐＨを７に維持した。
・５分間３０：１の溶液比で２回の冷却リンス
・デニムを家庭用ドライヤーで乾燥させた。

デニムレッグの評価
デニムレッグの色調調整を、処理後に、ミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。各デニムレッグに関して、８回の測定を行い、１２レッグ（９６測定）の結果を平均した。得られた結果を表７に示す。

実施例１０
前面挿入式洗浄機におけるインディゴ染色デニムのセルラーゼ＋ラッカーゼ＋ペルヒドロラーゼ逐次プロセスによる色調整性能
手順
約３ｋｇの重さの１２レッグ（ＡＣＧデニムスタイル８０２７０）のデニムをユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０洗浄機にて下記条件にてデサイズした。
・１５分間、１０：１の溶液比、５０℃で、０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）のＯｐｔｉｓｉｚｅ（登録商標）１６０アミラーゼ（ジェネンコア社）及び０．５ｇ／ｌ（１５ｇ）の非イオン界面活性剤（Ｕｌｔｒａｖｏｎ（登録商標）ＲＷ（ハンツマン社））でデサイジング
・５分間、３０：１の溶液比で２回の冷却リンス
デサイジング後、デニムをユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０回転洗浄機で下記プログラムに従ってストーンウォッシュ加工した。
・５分間、１０：１の溶液比で冷却リンス
・６０分間、１０：１の溶液比、５５℃で、１ｋｇの軽石、ｐＨ４．８（１ｇ／ｌのクエン酸三ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．８７ｇ／ｌのクエン酸Ｈ₂Ｏ）、１．１７ｇ／ｌのＩｎｄｉａｇｅ（登録商標）２ＸＬセルラーゼ（ジェネンコア社）を用いてストーンウォッシュ加工
・各５分間の２回の冷却リンス工程
ストーンウォッシュ後、ラッカーゼ処理を、ユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０洗浄機にて下記工程に従って実施した。
・３０分間、１０：１の溶液比、３ｇ／ｌの即時使用のＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＦａｄｅ ＬＴ１００（ジェネンコア社）ラッカーゼ及びラッカーゼメディエーターを用い、ｐＨ６、温度３０℃。
・５分間、３０：１の溶液比で２回の冷却リンス
・デニムを家庭用ドライヤーで乾燥させた。
ラッカーゼを用いた増白後、ペルヒドロラーゼを用いた処理を、ユニマック（Ｕｎｉｍａｃ）ＵＦ５０洗浄機にて下記工程に従って実施した。
・６０分間、溶液比１０：１、１ｇ／ｌのペルヒドロラーゼ（ＰｒｉｍａＧｒｅｅｎ（登録商標）ＥｃｏＷｈｉｔｅ １（３２１Ｕ／ｇ））、６ｇ／ｌのＨ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）、及び３ｇ／ｌのＰＤＧＡ（＞９９．７％、）を用い、ｐＨ８（８．９ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋０．４ｇ／ｌのリン酸一ナトリウム無水物）及び温度６０℃。
・５分間３０：１の溶液比で２回の冷却リンス
デニムを家庭用ドライヤーで乾燥させた。

デニムレッグの評価
デニムレッグの増白を、ラッカーゼ処理及びペルヒドロラーゼ処理後にミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。各デニムレッグに関して、８回の測定を行い、１２レッグ（９６測定）の結果を平均した。得られた結果を表８に示す。

実施例１１
染色布地におけるペルヒドロラーゼ処理の効果
材料
ペルヒドロラーゼ（マイコバクテリウム・スメグマティスのＳ５４Ｖ変異体、１．５ｍｇ／ｇ活性タンパク質含有）をこの例に用いた。過酸化水素（分析グレード；３０％ｗ／ｗ）及びプロピレングリコールジアセテート（＞９９．７％）をシグマ・アルドリッチ社から購入した。標準染色布地を試験材料センター、フラールディンゲン、オランダより得た。布地を（英国）染料染色学会及び（米国）線繊化学染色協会に従うカラーインデックス（ＣＩ）番号により特定される、表１５に示す染料の一つ（又は染料の組み合わせ）で染色した。

手順
約１２．５ｃｍ×１２．５ｃｍの染色布地の２つの各見本（表９参照）を、ラウンダー−Ｏ−メーター（ラピッドラボラトリーダイングマシーンタイプＨ１２）にて、下記工程に従って処理した：
・３つの各４５０ｍｌステンレス製反応容器を、１００ｍｌのリン酸バッファー（ｐＨ８、８．９ｇ／ｌのリン酸二ナトリウム２Ｈ₂Ｏ＋１．０６ｇ／ｌのリン酸一ナトリウム無水物）で満たした。
・各容器に、２つの各標準布地見本を加えた。
・６ｍｌ／ｌのＨ₂Ｏ₂溶液（３０質量％）と３．０ｍｌ／ＬのＰＤＧＡ（＞９９．７％）を各２つの反応容器に添加した（“ペルヒドロラーゼ”及び“ブランク”）。バッファーのみを３つめの反応容器に添加した。
・１．０ｍｌ／ｌのペルヒドロラーゼを“ペルヒドロラーゼ”反応容器に加えた。
・反応容器を閉鎖し、６０℃に予備加熱したラウンダー−Ｏ−メーターに搭載した。
３０分間インキュベーション（低温放置）を実施した。インキュベーション後、見本をオーバーフローによってリンスした後、ＡＥＧ ＩＰＸ４遠心分離機で回転乾燥させ、Ｎｏｖｏｔｒｏｎｉｃ Ｔ ４９４Ｃ家庭用ドライヤーで乾燥させた。得られた試験サンプルを“ペルヒドロラーゼ”（ペルヒドロラーゼ＋Ｈ₂Ｏ₂＋ＰＧＤＡ）、“ブランク”（Ｈ₂Ｏ₂＋ＰＧＤＡ）及び“バッファーのみ”に指定した。

標準布地見本の評価
標準の布地見本のペルヒドロラーゼ処理効果を、ミノルタクロマメーターＣＲ３１０を用いて、Ｄ６５光源を備えたＣＩＥ Ｌａｂカラースペース中で、評価した。測定は、ペルヒドロラーゼ（又はコントロール）処理の前後に行った。各見本で３回試験を実施（各試験条件でトータル６回）、結果を平均した。総色差（ＴＣＤ）を式：ＴＣＤ＝√（ΔＬ）²＋（Δａ）²＋（Δｂ）²より算出した。Δ値は、処理前の布地と処理後の布地の差である。ＴＣＤ^*値は、ブランク値とペルヒドロラーゼ処理より得られる値の差である。布地に適用した染料を示す、以下の表に、結果を示す。

ペルヒドロラーゼ介在脱色は、すべての試験された染色された見本に関して観察された。これらの結果は、酵素的脱色が幅広い染料の使用に関して効果的であることが示された。

前述の発明は、明確な理解を目的として説明と例によって少し詳細に記載されているものの、本発明の趣旨と範囲から逸脱しない範囲で若干の変更及び改変を実施し得ることは当業者に明らかである。よって、明細書は、添付のクレームによって説明される本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載されたすべての出版物、特許及び特許出願は参照することによって、まるで各個別の出版物、特許又は特許出願が具体的且つ個別に参照によって援用されることが示されているように、それら全体がすべての目的のために本書に援用される。

国際公開第０５／０５６７８２号パンフレット 米国特許第４，５６５，６４７号明細書 米国特許第３，９２９，６７８号明細書 国際公開第２００７／１３６４６９号パンフレット

分子クローニング：実習マニュアル 第二版（サムブルックら、１９８９年） オリゴヌクレオチド合成（Ｍ．Ｊ．ゲイト編、１９８４年） 分子生物学における最新プロトコル（Ｆ．Ｍ．アウスベルら編１９９４年） ＰＣＲ：ポリメラーゼ連鎖反応（マリスら編、１９９４年） 遺伝子導入及び発現：実習マニュアル（クリーグラー、１９９０年） シングルトンら、微生物学及び分子生物学辞典、第二版、ジョン ウィリー及びソンズ、ニューヨーク（１９９４年） ヘイル＆マークハム、ハーパーコリンズ生物学辞典、ハーパーペレニアル、ニューヨーク（１９９１年）

Claims (15)

1. 染色されたセルロース系織物繊維材料の色調を調整する方法であって、
   前記織物材料を
   （ｉ）ペルヒドロラーゼ酵素
   （ｉｉ）前記ペルヒドロラーゼ酵素のエステル基質、及び
   （ｉｉｉ）過酸化水素源
   を含有する酵素的織物処理組成物と接触させる工程を含む、方法。
2. 前記ペルヒドロラーゼ酵素が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に記載のアミノ酸配列又はそれらの変異体又は同族体である、請求項１記載の方法。
3. 前記ペルヒドロラーゼ酵素が、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のＳ５４Ｖ変異体である、請求項１又は請求項２記載の方法。
4. 前記ペルヒドロラーゼ酵素が、１より大きい過加水分解対加水分解比率を含む、請求項１乃至請求項３のうちいずれか一項に記載の方法。
5. 前記エステル基質が、
   プロピレングリコールジアセテート、エチレングリコールジアセテート、グリセロールトリアセテート、酢酸エチル、及びグリセロールトリブチレートから選択される、請求項１乃至請求項４のうちいずれか一項に記載の方法。
6. 前記過酸化水素源が、過酸化水素である、請求項１乃至請求項５のうちいずれか一項に記載の方法。
7. 前記酵素的織物処理組成物が、さらに
   （ｉｖ）界面活性剤及び／又は乳化剤
   を含有する、請求項１乃至請求項６のうちいずれか一項に記載の方法。
8. 前記酵素的織物処理組成物が、さらに、
   （ｖ）蛍光増白剤
   を含有する、請求項１乃至請求項７のうちいずれか一項に記載の方法。
9. 前記酵素的織物処理組成物が、さらに
   （ｖｉ）酵素的デサイジング剤
   を含有する、請求項１乃至請求項８のうちいずれか一項に記載の方法。
10. 前記酵素的織物処理組成物が、さらに
    （ｖｉｉ）バイオポリッシング剤
    を含有する、請求項１乃至請求項９のうちいずれか一項に記載の方法。
11. 前記酵素的織物処理組成物が、さらに
    （ｖｉｉｉ）併用製品
    を含有する、請求項１乃至請求項１０のうちいずれか一項に記載の方法。
12. 前述の漂白された織物が製造された後、前記過酸化水素をカタラーゼ酵素で加水分解する工程をさらに含む、請求項１乃至請求項１１のうちいずれか一項に記載の方法。
13. 前記方法が、バッチプロセス、排出プロセス、及び不連続プロセスより選択されるプロセスで実施される、
    請求項１乃至請求項１２のうちいずれか一項に記載の方法。
14. 前記織物材料を、前記酵素的織物処理組成物と、温度６０℃乃至７５℃、処理時間３０乃至６０分間接触させる、請求項１乃至請求項１３のうちいずれか一項に記載の方法。
15. 前記染色されたセルロース系織物繊維材料が、インディゴ染色デニムである、請求項１乃至請求項１４のうちいずれか一項に記載の方法。