JP2012524893A - マルチパラメータデータ解析の方法及び装置 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図2
Description
i)2以上のパラメータが相関を有しているか否かを確定する手段、
ii)標本内距離計量と標本間距離計量との組み合わせを利用して、マルチパラメータデータに基づいて表現型シグネチャーを図形的に表わす表現型マップを生成する手段、
iii)標本間測定を利用して、標本内測定から生成されるデータに加重して順位を決定し、一定範囲の測定パラメータにわたり二つの細胞群の間の累積差を要約する単一の表現型スコア計量を生成する手段、及び
iv)標本間距離計量を用いてパラメータ相関の変化の測定によって付加的な表現型特性決定データを与える手段
を提供する。
i)パラメータ同士の間の相関についての検定(全ての条件において小さい標本間KS距離の検出)、及び
ii)諸条件の間でのパラメータ相関の変化の強調(条件間にわたって変化する標本間KS距離の検出)
のための新たな方法を提供する。
CHO−K1細胞を、5%FBSを加えたハムF12培地において細胞6000個/ウェルとしてGE Healthcare 96 well MatriPlateに接種し、標準的な組織培養条件の下で24時間にわたりインキュベートした。マイトマイシンC(MMC)溶液を培地に加えてアッセイにおける最終的な濃度を0mM〜10mMとし、細胞をさらに48時間にわたりインキュベートした。培地をウェルから取り出して、細胞200mLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で1回洗浄し、続いて室温において30分間にわたりエタノールにおいて固定した。核を室温において15分間にわたり5mMのHoechst(商標)33342(Sigma社)によって染色し、細胞を200mLのPBSで洗浄した。
i)面積及び長さ(A−L)は、全MMC濃度範囲にわたって一定の小さいKS距離を示し、これら2個のパラメータが高い相関度を有する類似した分布を示していることを示す。これら二つの形態学的計量は両方とも核寸法によって直接影響されるため、このデータは、核はMMC処理後に寸法が増大しているが、面積と長さとの間の関係を変化させる形態学的変化(例えば円形から卵形への変化)を蒙っていないことを示す。
ii)長さ及びWMOI(L−W)は、MMC濃度範囲の殆どにわたって一定の高いKS距離を示し、これら2個のパラメータが低い相関度を有すること、すなわち核の内部でのDNA強度分布が核長さには関係していないことを示す。
iii)周長及びWMOI(P−W)は、これらのパラメータについて標本内KS距離の場合に観察されたものと反対の態様でのKS距離の投与量依存型の変化を示し、すなわち周長分布とWMOI分布との間での標本間KS距離がMMC濃度と共に減少しており、これら2個のパラメータが、低投与量においては相関していないが高投与量においては相関するようになり、増加する核周長とDNA分布との間の何らかの形態の関係性が絡んだ表現型の変化を示唆している。
iv)面積及び周長(A−W)は、低MMC濃度及び高MMC濃度において小さいKS標本間距離を示し、中間的な濃度ではKS距離の増大を示し、低いMMC濃度、中間的なMMC濃度及び高いMMC濃度において2種又は3種の表現型クラスが生じている可能性を示す。
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2. S. Siegel and N. J. Castellan, Non-Parametric Statistics for the Behavioural Sciences, McGraw-Hill, New York, USA, 2nd Edition, 1988
3. Z. E. Perlman, M. D. Slack, Y. Feng, T. J. Mitchison, L. F. Wu and S. J. Altschuler, “Multidimensional drug profiling by automated microscopy,” Science, Vol. 306, pp. 1194-1198, 12 November 2004
4. B. Zhang, X. Gu, U. Uppalapati, M. A. Ashwell, D. S. Leggett and C. J. Li, “High-content fluorescent-based assay for screening activators of DNA damage checkpoint pathways,” Journal of Biomolecular Screening, Vol. 13, No. 6, pp. 538-543, 19 June 2008
5. US 2006/0154236 (Altschuler et al)
認められる場合には以上の参考文献の内容を参照により全体として本出願に援用する。
102:光源
104:集光装置
106:開口絞り
108:鏡検プレート
109:ウェル(スポット)
110:対物レンズ
112:検出器システム
114:プロセッサ
120a、120b:光
120c:発散光
120d:集束光
200:マルチパラメータデータセットから1以上の表現型を識別する方法
Claims (13)
- マルチパラメータデータセットから1以上の表現型を識別する方法(200)であって、
前記マルチパラメータデータセットの内部でパラメータの各対の間での相関を測定するステップ(202)と、
解析パラメータセットを形成するために、所定のマルチパラメータデータ解析セットの内部で相関のあるパラメータ値を修正するステップ(204)と、
前記マルチパラメータデータセットから1以上の表現型を識別するために、前記解析パラメータセットを用いて前記マルチパラメータデータセットを解析するステップ(206)と
を含む方法。 - 複数のマルチパラメータデータセットから1以上の表現型を識別するステップと、前記マルチパラメータデータセットからのそれぞれの表現型の間の変動を識別するためにそれぞれの表現型を比較するステップとをさらに含む、請求項1記載の方法(200)。
- 複数のマルチパラメータデータセットについて1以上のそれぞれの解析パラメータセットを形成するステップと、相関関係が前記マルチパラメータデータセット同士の間で保たれているか否かを決定するために前記解析パラメータセットを比較するステップとをさらに含む、請求項1又は請求項2記載の方法(200)。
- 相関が、前記所定のマルチパラメータデータ解析セットにおいて前記表現型同士の間で行なわれるノンパラメトリックの統計学的な対単位の測定により決定される、請求項1乃至請求項3のいずれか1項記載の方法(200)。
- 前記ノンパラメトリックの統計学的な対単位の測定が、コルモゴロフ−スミルノフ(KS)距離測定解析を含む、請求項4記載の方法(200)。
- 前記所定のマルチパラメータデータ解析セットの内部で相関のあるパラメータ値を修正する前記ステップ(204)は、前記解析パラメータセットから所定の閾値を超える相関を有する一対のパラメータの一方を除去することを含む、請求項1乃至請求項5のいずれか1項記載の方法(200)。
- 請求項1乃至請求項6のいずれか1項記載の方法(200)を具現化するようにデータ処理装置を構成するように動作可能である機械命令を備えるコンピュータプログラムプロダクト。
- 1以上のマルチパラメータデータセットの自動ハイコンテントスクリーニング(HCS)のための装置(100)であって、
マルチパラメータデータセットの内部でパラメータの各対の間での相関を測定し、
解析パラメータセットを形成するために、前記マルチパラメータデータセットについて所定のマルチパラメータデータ解析セットの内部で相関のあるパラメータ値を修正して、
前記マルチパラメータデータセットから1以上の表現型を識別するために、前記解析パラメータセットを用いて前記マルチパラメータデータセットを解析する
ように動作可能であるプロセッサ(114)を備える装置(100)。 - 前記プロセッサ(114)は、複数のマルチパラメータデータセットから1以上の表現型を識別して、前記マルチパラメータデータセットからのそれぞれの表現型の間の変動を識別するためにそれぞれの表現型を比較するようにさらに動作可能である、請求項8記載の装置(100)。
- 前記プロセッサ(114)は、複数のマルチパラメータデータセットについて1以上のそれぞれの解析パラメータセットを形成して、相関関係が前記マルチパラメータデータセット同士の間で保たれているか否かを決定するために前記解析パラメータセットを比較するようにさらに動作可能である、請求項8又は請求項9記載の装置(100)。
- 前記プロセッサ(114)は、前記所定のマルチパラメータデータ解析セットにおいて前記表現型同士の間で行なわれるノンパラメトリックの統計学的な対単位の測定を用いることにより相関を決定するようにさらに動作可能である、請求項8乃至請求項10のいずれか1項記載の装置(100)。
- 前記ノンパラメトリックの統計学的な対単位の測定が、コルモゴロフ−スミルノフ(KS)距離測定解析の利用を含む、請求項11記載の装置(100)。
- 前記プロセッサ(114)が、前記解析パラメータセットから所定の閾値を超える相関を有する一対のパラメータの一方を除去することにより、相関のあるパラメータ値を修正するようにさらに動作可能である、請求項8乃至請求項12のいずれか1項記載の装置(100)。
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