JP2012147900A - Device for fixing graft to target site - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、移植片、特にヒトを含む動物の傷病の治療に用いる移植片の標的部位への固定を、簡便・確実に行うことができるデバイスに関する。 The present invention relates to a device capable of simply and reliably fixing a graft, particularly a graft used for treatment of wounds of animals including human beings, to a target site.
近年の心臓病に対する治療の革新的進歩にかかわらず、重症心不全に対する治療体系は未だ確立されていない。心不全の治療法としては、βブロッカーやＡＣＥ阻害剤による内科治療が行われるが、これらの治療が奏功しないほど重症化した心不全には、補助人工心臓や心臓移植などの置換型治療、つまり外科治療が行われる。 Despite recent advances in the treatment of heart disease, a treatment system for severe heart failure has not yet been established. For the treatment of heart failure, medical treatment with β-blockers or ACE inhibitors is performed. For heart failure that has become so severe that these treatments are not successful, replacement therapy such as an artificial heart or a heart transplant, that is, surgical treatment Is done.
このような外科治療の対象となる重症心不全には、進行した弁膜症や高度の心筋虚血に起因するもの、急性心筋梗塞やその合併症、急性心筋炎、虚血性心筋症（ＩＣＭ）、拡張型心筋症（ＤＣＭ）などによる慢性心不全やその急性憎悪など、多種多様の原因がある。
これらの原因と重症度に応じて弁形成術や置換術、冠動脈バイパス術、左室形成術、機械的補助循環などが適用される。
Severe heart failure that is the subject of such surgical treatment includes those caused by advanced valvular disease and severe myocardial ischemia, acute myocardial infarction and its complications, acute myocarditis, ischemic cardiomyopathy (ICM), dilation There are a wide variety of causes such as chronic heart failure due to dilated cardiomyopathy (DCM) and acute aversion.
Depending on these causes and severity, valvuloplasty and replacement, coronary artery bypass surgery, left ventricular plastic surgery, mechanical assisted circulation, etc. are applied.
この中で、ＩＣＭやＤＣＭによる高度の左室機能低下から心不全を来たしたものについては、心臓移植や人工心臓による置換型治療のみが有効な治療法とされてきた。しかしながら、これら重症心不全患者に対する置換型治療は、慢性的なドナー不足、継続的な免疫抑制の必要性、合併症の発症など解決すべき問題が多く、すべての重症心不全に対する普遍的な治療法とは言い難い。 Of these, only heart transplantation or replacement treatment with an artificial heart has been regarded as an effective treatment for those who have suffered heart failure due to a severe decrease in left ventricular function caused by ICM or DCM. However, replacement therapy for these patients with severe heart failure has many problems to be solved, such as chronic donor shortages, the need for continuous immunosuppression, and the development of complications. Is hard to say.
その一方、最近、重症心不全治療の解決策として新しい再生医療の展開が不可欠と考えられている。
重症心筋梗塞等においては、心筋細胞が機能不全に陥り、さらに線維芽細胞の増殖、間質の線維化が進行し心不全を呈するようになる。心不全の進行に伴い、心筋細胞は傷害されてアポトーシスに陥るが、心筋細胞は殆ど細胞分裂をおこさないため、心筋細胞数は減少し心機能の低下もさらに進む。
このような重症心不全患者に対する心機能回復には細胞移植法が有用とされ、既に自己骨格筋芽細胞による臨床応用が開始されている。
On the other hand, recently, development of new regenerative medicine is considered indispensable as a solution for the treatment of severe heart failure.
In severe myocardial infarction and the like, cardiomyocytes become dysfunctional, and fibroblast proliferation and interstitial fibrosis progress, resulting in heart failure. As the heart failure progresses, the cardiomyocytes are damaged and fall into apoptosis, but the cardiomyocytes hardly undergo cell division, so the number of cardiomyocytes decreases and the cardiac function further decreases.
Cell transplantation is considered useful for the recovery of cardiac function in such patients with severe heart failure, and clinical application with autologous skeletal myoblasts has already been started.
近年、これらの問題に対し、組織工学を応用した温度応答性培養皿を用いることによって、成体の心筋以外の部分に由来する細胞を含む心臓に適用可能な三次元に構成された細胞培養物と、その製造方法が提供された（特許文献１〜３）。
また、細胞培養物の強度を補うため、親水性ＰＶＤＦ膜、ニトロセルロース膜を用いた支持体やヒトフィブリノゲン等を足場とした支持体が知られ、さらに細胞培養物を対象とした移動治具や運搬投与器具が提供されており、前述の温度応答性培養皿に対応した細胞培養物のための支持体（Cell ShifterTM、セルシード製）が市販されている。
In recent years, in response to these problems, a three-dimensional cell culture that can be applied to the heart including cells derived from parts other than the adult myocardium by using a temperature-responsive culture dish applying tissue engineering, and The manufacturing method was provided (patent documents 1 to 3).
In addition, in order to supplement the strength of the cell culture, a support using a hydrophilic PVDF membrane, a nitrocellulose membrane, or a support using human fibrinogen or the like as a scaffold is known. A carrier administration device is provided, and a support (Cell Shifter ™ , manufactured by Cell Seed) for cell culture corresponding to the aforementioned temperature-responsive culture dish is commercially available.
一方、移植片を標的部位に固定する方法としては、縫合糸、ボルトおよびステープルによる固定が行われている。しかし、このような方法で移植片を固定するためには、移植片を予め標的部位に設置してから、縫合作業やステープラー操作などを行う必要があるため、移植作業に手間と時間を要する。したがって、かかる移植作業を心臓等の動きのある標的部位に対して行う場合、動きのある標的部位に移植片を適切に貼付し、標的部位と共に動く移植片を縫合や、ステープルにより固定していくのは熟練した術者でも困難な作業であり、移植片全体の固定が終了する前に、移植片が標的部位からズレたり、移植片が破損したりしてしまうおそれがある。また、移植片が細胞培養物である場合、良好な生着のためには、その形状を保った状態で移植部位に固定し続ける必要があるが、心臓等の動きのある部位に適用する場合、固定が不十分だと、細胞培養物が貼付された位置からズレたり、剥れたり、皺が生じたりするおそれがある。しかしながら、かかる問題点を解決する手段はこれまで存在しなかった。 On the other hand, as a method of fixing the graft to the target site, fixation with a suture, a bolt and a staple is performed. However, in order to fix the graft by such a method, it is necessary to perform a suturing operation, a stapler operation, etc. after the graft is set in advance at the target site, so that the transplanting operation requires time and effort. Therefore, when such a transplantation operation is performed on a target site having movement such as the heart, the graft is appropriately attached to the target site having movement, and the graft moving together with the target site is fixed by sewing or stapling. This is a difficult task even for a skilled surgeon, and there is a possibility that the graft is displaced from the target site or the graft is damaged before the fixation of the entire graft is completed. In addition, when the graft is a cell culture, it is necessary to continue to be fixed to the transplanted site while maintaining its shape for good engraftment, but when applied to a moving part such as the heart If the fixation is insufficient, the cell culture may be displaced from the position where it is affixed, peeled off or wrinkled. However, there has been no means for solving such problems.
本発明の目的は、ヒトを含む動物の傷病の治療に用いる移植片の標的部位への固定を含む移植作業において、上記のような不利点を有しない、簡便な操作性を有する移植デバイスの提供を課題とし、簡易な構成で、容易、迅速かつ確実に、移植片を標的部位に固定することができる移植デバイスを提供することにある。 An object of the present invention is to provide a transplant device having a simple operability that does not have the above-mentioned disadvantages in a transplantation operation including fixation of a graft to a target site for use in the treatment of diseases of animals including humans. It is an object of the present invention to provide an implantation device capable of fixing a graft to a target site easily, quickly and reliably with a simple configuration.
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねる中で、移植片を支持するための支持部および支持部を標的部位に機械的に固定し、移植片を把持するための、少なくとも１つの固定構造を含む、移植片を標的部位に固定するためのデバイスを利用することにより、移植片を容易、迅速かつ確実に標的部位、特に、心臓などの動きのある標的部位に固定できることを見出し、本発明を完成させるに至った。 The present inventor has conducted attentive research to solve the above-mentioned problems, and at least one for holding the graft mechanically by fixing the support part for supporting the graft and the support part to the target site mechanically. It has been found that the device can be easily, quickly and reliably fixed to a target site, especially a moving target site such as the heart, by utilizing a device for fixing the implant to the target site, including two fixation structures. The present invention has been completed.
すなわち本発明は、以下に関する。
（１）移植片を標的部位に固定するためのデバイスであって、
（i）移植片を支持するための支持部
（ii）支持部を標的部位に機械的に固定し、移植片を担持するための、少なくとも１つの固定構造
を含む、前記デバイス。
（２）移植片が、シート状細胞培養物である、上記（１）に記載のデバイス。
（３）支持部が、標的部位の動きに合わせて変形可能な平面を構成する、上記（１）または（２）に記載のデバイス。
（４）標的部位が、心臓である、上記（１）〜（３）のいずれかに記載のデバイス。
That is, the present invention relates to the following.
(1) A device for fixing a graft to a target site,
(I) a support for supporting the implant; (ii) the device comprising at least one fixation structure for mechanically fixing the support to the target site and for carrying the implant.
(2) The device according to (1) above, wherein the graft is a sheet-shaped cell culture.
(3) The device according to (1) or (2) above, wherein the support portion forms a plane that can be deformed in accordance with the movement of the target site.
(4) The device according to any one of (1) to (3), wherein the target site is a heart.
（５）支持部が、ビーズの連結構造を有する、上記（１）〜（４）のいずれかに記載のデバイス。
（６）支持部が、メッシュ構造を有する、上記（１）〜（５）のいずれかに記載のデバイス。
（７）移植構造体であって、
（i）上記（１）〜（６）のいずれかに記載のデバイス、
（ii）前記デバイスに載置された移植片、
を含む、前記移植構造体。
（８）移植構造体の製造方法であって、
（i）上記（１）〜（６）のいずれかに記載のデバイスを培養容器内に設置する工程、
（ii）培養容器内に設置されたデバイス上に細胞を播種、培養し、移植片を形成する工程、
（iii）移植片をデバイスと共に培養容器から取り出す工程、を含む、前記製造方法。
(5) The device according to any one of (1) to (4), wherein the support has a bead connection structure.
(6) The device according to any one of (1) to (5), wherein the support portion has a mesh structure.
(7) A transplant structure,
(I) The device according to any one of (1) to (6) above,
(Ii) an implant placed on the device;
The graft structure comprising:
(8) A method for producing an implant structure,
(I) installing the device according to any one of (1) to (6) in a culture vessel;
(Ii) a step of seeding and culturing cells on a device installed in a culture container to form a graft;
(Iii) The said manufacturing method including the process of taking out a graft from a culture container with a device.
本発明のデバイスは、移植片を支持するための支持部および支持部を標的部位に機械的に固定し、移植片を把持するための、少なくとも１つの固定構造を含むことにより、シート状細胞培養物などの移植片の移植作業を、心臓などの動きのある標的部位に対しても簡便・確実に行うことができる。特に、本発明のデバイスにより、標的部位の動きに追随した移植片の固定が可能となるため、移植作業後に移植片が移植位置からズレたり、剥れたり、変形することを防止でき、移植片の標的部位への良好な生着を促すことができる。 The device of the present invention includes a support for supporting the graft and a sheet cell culture by including at least one fixing structure for mechanically fixing the support to the target site and gripping the graft. The transplantation operation of a graft such as an object can be easily and reliably performed on a target site with movement such as the heart. In particular, the device of the present invention enables the fixation of the graft following the movement of the target site, so that it is possible to prevent the graft from being displaced, peeled, or deformed after the transplantation operation. Good engraftment on the target site can be promoted.
本発明は、移植片を標的部位に固定するためのデバイスであって、
（i）移植片を支持するための支持部
（ii）支持部を標的部位に機械的に固定し、移植片を担持するための、少なくとも１つの固定構造
を含む、前記デバイスに関する。
The present invention is a device for securing an implant to a target site comprising:
(I) a support for supporting the implant; (ii) the device including at least one fixation structure for mechanically fixing the support to the target site and for carrying the implant.
本発明の移植用デバイスは、支持部および固定構造を含み、支持部は移植片を支持するものであり、固定構造は支持部を標的部位に機械的に固定し、移植片を把持するためのものである。支持部は、シート状細胞培養物などの平面状の移植片を支持することができるように、好ましくは平面形状を有している。固定構造は、支持部を標的部位に機械的に固定することにより、支持部を介して平面状の移植片全体を標的部位に固定する。固定構造は標的部位において血管には刺入されない。すなわち、固定構造は標的部位において血管が存在しない部位に固定される。 The transplant device of the present invention includes a support portion and a fixing structure, and the support portion supports the graft. The fixing structure mechanically fixes the support portion to the target site and grips the graft. Is. The support portion preferably has a planar shape so that a planar graft such as a sheet-shaped cell culture can be supported. The fixing structure fixes the entire planar graft to the target site via the support unit by mechanically fixing the support unit to the target site. The fixation structure is not inserted into the blood vessel at the target site. That is, the fixing structure is fixed to a site where no blood vessel exists in the target site.
図１に示す態様において、本発明のデバイス１は、支持部２および支持部２に備えられた固定構造３によって構成され、支持部には移植片４が支持されている。支持部は、円形で平面状の移植片をその形状を保った状態で支持することができるように、円形の平面を有している。支持部の縁部には針状の固定構造が備えられており、図２に示されるように、支持部２を移植片４と共に心臓（標的部位）に貼付して、固定構造３により支持部２を標的部位に固定することにより、移植片４をその形状を保った状態で、標的部位に移送、貼付、固定することができる。ここで、固定構造３は、かえしのついた針状構造体であり、心臓に刺入しても出血を伴わないものである。また、かえしが付いているため、刺入は容易だが、一度刺入されると外れる可能性が低い。 In the embodiment shown in FIG. 1, the device 1 of the present invention is constituted by a support portion 2 and a fixing structure 3 provided in the support portion 2, and a graft 4 is supported on the support portion. The support portion has a circular plane so that the circular and planar graft can be supported while maintaining its shape. A needle-like fixing structure is provided at the edge of the support portion. As shown in FIG. 2, the support portion 2 is attached to the heart (target site) together with the graft 4, and the support portion is supported by the fixing structure 3. By fixing 2 to the target site, the graft 4 can be transferred, affixed and fixed to the target site while maintaining its shape. Here, the fixing structure 3 is a needle-like structure with a barb and does not bleed even when inserted into the heart. In addition, since it has a barb, insertion is easy, but once inserted, it is unlikely to come off.
上記態様では、移植片を支持部に載置して、支持部を移植片と共に標的部位に貼付し、支持部を固定構造で標的部位に固定する態様を示したが、本発明のデバイスを、標的部位にすでに貼付されている移植片の上に適用して、これを固定してもよい。この場合は、移植片を支持部に載置して、支持部を移植片と共に標的部位に貼付する作業は必要ない。また、上記態様では、支持部の表面積が移植片の表面積より大きく、支持部は移植片全体を支持しているが、移植片の表面積より小さな表面積を有する支持部に固定構造を設置し、この支持部で移植片を部分的に固定してもよいし、または、複数の部分に分れた支持部を利用して移植片を複数箇所で固定することにより、移植片の全体を固定してもよい。そして、支持部および／または固定構造は、取り外されるか、または体内で分解されることが望ましいため、本発明の一態様において、支持部および／または固定構造は、ヒトを含む動物の体への影響が少ない生体適合性の素材、例えば、体内で分解される生分解性の素材で作られている。こうすることにより、移植片が標的部位に定着した後に、支持部および／または固定構造を標的部位から人為的に取外す必要がなく、レシピエントの負担を軽減することができる。 In the above aspect, the graft is placed on the support portion, the support portion is attached to the target site together with the graft, and the support portion is fixed to the target site with a fixed structure. It may be applied and fixed on a graft already affixed to the target site. In this case, it is not necessary to place the graft on the support and attach the support to the target site together with the graft. In the above aspect, the surface area of the support part is larger than the surface area of the graft, and the support part supports the entire graft, but the fixing structure is installed on the support part having a surface area smaller than the surface area of the graft. The graft may be partially fixed by the support part, or the entire graft may be fixed by fixing the graft at a plurality of positions using the support part divided into a plurality of parts. Also good. And since it is desirable that a support part and / or a fixing structure are removed or decomposed | disassembled in a body, in one aspect | mode of this invention, a support part and / or a fixing structure are used for the body of animals including a human. It is made of biocompatible materials that are less affected, such as biodegradable materials that are broken down in the body. By doing so, it is not necessary to artificially remove the support and / or the fixing structure from the target site after the graft has settled on the target site, and the burden on the recipient can be reduced.
本発明における移植片は、典型的には培養した細胞および／またはその産生物（例えば細胞培養物など）で構成されるが、生体の所定部（例えば標的部位等）を補填および／または支持するための各種の材料（補填材料や支持材料）なども含む。移植片は、典型的には移植操作が可能な動物、例えば、ヒトや家畜等の傷病の治療等に用いられるものであるが、これに限定されるものではない。移植片の形状は特に限定されず、支持部に装着可能な形状であればシート状、膜状、塊状、柱状等の種々の形状であってよいが、標的部位への固定のしやすさなどの観点からシート状であることが好ましい。したがって、本発明における好ましい移植片としては、限定されずに、シート状細胞培養物が挙げられる。 The graft according to the present invention is typically composed of cultured cells and / or products thereof (for example, cell culture), and supplements and / or supports a predetermined part (for example, a target site) of a living body. Including various materials (complementary materials and support materials). The graft is typically used for treatment of an injured disease such as an animal that can be transplanted, for example, a human or a domestic animal, but is not limited thereto. The shape of the graft is not particularly limited, and may be various shapes such as a sheet shape, a membrane shape, a lump shape, and a column shape as long as the shape can be attached to the support portion. From the viewpoint of the above, a sheet shape is preferable. Accordingly, preferred grafts in the present invention include, but are not limited to, sheet-like cell cultures.
本発明において、シート状の細胞培養物は、細胞が互いに連結してシート状（膜状）になったものをいい、典型的には１の細胞層からなるものであるが、２以上の細胞層から構成されるものも含む。細胞同士は、直接および／または介在物質を介して、互いに連結していてもよい。介在物質としては、細胞同士を少なくとも物理的（機械的）に連結し得る物質であれば特に限定されないが、例えば、細胞外マトリックスなどが挙げられる。介在物質は、好ましくは細胞由来のもの、特に、細胞培養物を構成する細胞に由来するものである。細胞は少なくとも物理的（機械的）に連結されるが、さらに機能的、例えば、化学的、電気的に連結されてもよい。 In the present invention, a sheet-shaped cell culture refers to a sheet-like (membrane-like) cell connected to each other, and is typically composed of one cell layer. Includes those composed of layers. The cells may be linked to each other directly and / or via an intervening substance. The intervening substance is not particularly limited as long as it is a substance that can connect cells at least physically (mechanically), and examples thereof include an extracellular matrix. The intervening substance is preferably derived from cells, in particular, derived from the cells constituting the cell culture. The cells are at least physically (mechanically) connected, but may be further functionally, for example, chemically or electrically connected.
シート状細胞培養物は、上記の構造を形成し得る任意の細胞から構成される。かかる細胞の例としては、限定されずに、筋芽細胞（例えば、骨格筋芽細胞）、心筋細胞、線維芽細胞、滑膜細胞、上皮細胞（例えば、角膜上皮細胞、口腔粘膜上皮細胞）、内皮細胞、肝細胞、膵細胞、歯根膜細胞などが挙げられる。これらのうち、本発明においては、単層の細胞培養物を形成するもの、例えば、筋芽細胞などが好ましい。細胞は、細胞培養物による治療が可能な任意の生物に由来し得る。かかる生物には、限定されずに、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジなどが含まれる。また、シート状細胞培養物の形成に用いる細胞は１種類のみであってもよいが、２種類以上の細胞を用いることもできる。本発明の好ましい態様において、細胞培養物を形成する細胞が２種類以上ある場合、最も多い細胞の比率（純度）は、細胞培養物製造終了時において、６５％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは７５％以上である。 The sheet-like cell culture is composed of arbitrary cells capable of forming the above structure. Examples of such cells include, but are not limited to, myoblasts (eg, skeletal myoblasts), cardiomyocytes, fibroblasts, synovial cells, epithelial cells (eg, corneal epithelial cells, oral mucosal epithelial cells), Examples include endothelial cells, hepatocytes, pancreatic cells, periodontal ligament cells and the like. Among these, in the present invention, those forming a monolayer cell culture, such as myoblasts, are preferred. The cells can be derived from any organism capable of being treated with cell culture. Such organisms include, but are not limited to, humans, non-human primates, dogs, cats, pigs, horses, goats, sheep and the like. Further, only one type of cell may be used for forming the sheet-shaped cell culture, but two or more types of cells may be used. In a preferred embodiment of the present invention, when there are two or more types of cells forming a cell culture, the most cell ratio (purity) is 65% or more, preferably 70% or more at the end of cell culture production. Preferably it is 75% or more.
本発明において、「生体適合性」とは、バイオコンパチビリティを有する、すなわち生体組織や細胞に対して炎症反応、免疫反応、中毒反応などの望まない作用を起こさないか、少なくともかかる作用が小さいことを意味する。したがって、生体適合性の素材とは、限定されずに、例えば、生体不活性な素材や生体毒性を有しない素材を含む。生体適合性素材には、生分解性素材が含まれる。ここで、「生分解性」とは、生体の作用により分解され得る性質を意味する。生体の作用としては、限定されずに、例えば、生体内に存在する化学物質、例えば酵素などの作用や、ｐＨや温度などの生体内環境による作用が挙げられる。生分解性素材としては、限定されずに、例えば、ポリグリコール酸、ポリジオキサノン、ポリ乳酸、ラクチド/カプロラクトン共重合体、グリコール酸/乳酸共重合体等の医療用生体材料が挙げられる。
本発明の支持部および／または固定構造に生分解性の素材を用いた場合は、移植作業の際に移植片を支持部から離脱させることなく、支持部と移植片を共に移植部位に貼付し、固定することが可能となるため、移植操作に必要な複数の工程や器具を用いることなく、簡便に移植片を移植することができる。そして、移植部位に固定された支持部および／または固定構造は、移植片が標的部位に定着するまで移植片を固定し続け、移植片が定着した後に体内で分解されるため、移植片が標的部位に定着した後に、支持部および／または固定構造を標的部位から人為的に取外す必要がなく、レシピエントの負担を軽減することができる。
In the present invention, “biocompatibility” means biocompatibility, that is, it does not cause unwanted effects such as inflammatory reaction, immune reaction, poisoning reaction, etc. on living tissue or cells, or at least such action is small. Means. Therefore, the biocompatible material is not limited and includes, for example, a bioinert material and a material that does not have biotoxicity. Biocompatible materials include biodegradable materials. Here, “biodegradable” means a property that can be decomposed by the action of a living body. Examples of the action of the living body include, but are not limited to, an action of a chemical substance existing in the living body, such as an enzyme, and an action of an in vivo environment such as pH and temperature. Examples of the biodegradable material include, but are not limited to, medical biomaterials such as polyglycolic acid, polydioxanone, polylactic acid, lactide / caprolactone copolymer, and glycolic acid / lactic acid copolymer.
When a biodegradable material is used for the support part and / or the fixing structure of the present invention, the support part and the graft are both attached to the transplant site without causing the graft to be detached from the support part during the transplantation operation. Since it can be fixed, the graft can be transplanted easily without using a plurality of steps and instruments necessary for the transplantation operation. The support portion and / or the fixing structure fixed to the transplant site continues to fix the graft until the graft is fixed at the target site, and is decomposed in the body after the graft is fixed. It is not necessary to artificially remove the support part and / or the fixing structure from the target site after fixing to the site, and the burden on the recipient can be reduced.
本発明において、支持部は、移植片を少なくとも支持、移送、貼付、固定できるだけの強度を有することが望ましい。また、支持部の構造は、支持部を心臓などの動きのある標的部位へ固定することができるように、標的部位の動きに合わせて変形可能な構造であることが望ましい。支持部の外形形状は上記機能を果すことができれば特に限定されず、例えば、円形、三角形、四角形、五角形等の多角形、楕円形等として作製されてもよい。支持部は、好ましくは平面を構成する。平面を構成することにより、平面状の移植片を載置しやすく、また移植片との接触面積も拡がるため、移植片をその形状を保ったまま、支持、移送、貼付、固定することが容易となる。さらにまた、複数の部分に分れた支持部を並べて、その上に移植片を載置しても、移植片の形状を保った状態で移植作業を行うことができるので、本発明における平面を構成する支持部には、上記支持部が複数の部分に分れ、平面的に並べられたものも含まれる（図６参照）。 In the present invention, it is desirable that the support portion has at least strength sufficient to support, transfer, stick, and fix the graft. Further, the structure of the support part is desirably a structure that can be deformed in accordance with the movement of the target part so that the support part can be fixed to a target part with movement such as the heart. The outer shape of the support part is not particularly limited as long as the above function can be achieved. For example, the support part may be formed as a circle, a triangle, a rectangle, a polygon such as a pentagon, an ellipse, or the like. The support part preferably constitutes a plane. By constructing a flat surface, it is easy to place a planar graft and the contact area with the graft also increases, so it is easy to support, transfer, stick, and fix the graft while maintaining its shape. It becomes. Furthermore, even if the support parts divided into a plurality of parts are arranged and the graft is placed thereon, the transplantation operation can be performed while maintaining the shape of the graft. The constituting support part includes one in which the support part is divided into a plurality of parts and arranged in a plane (see FIG. 6).
平面状の移植片を支持することが可能な、メッシュ構造を有する支持部（図３参照）や、移植片の少なくとも一部を支持することができる、フレーム構造を有する支持部（図８参照）も、本発明の支持部に含まれる。また、支持部が、動きのある心臓などの標的部位に合わせて変形可能な構造を有する場合も、本発明の支持部に含まれる。変形可能な構造としては、これに限定するものではないが、例えば、図３に示されるような、網目状のメッシュ構造や、図４に示されるような、生体適合性のポリマー等で作られたビーズに伸縮可能な生体適合性の糸を通して連結させた構造、伸縮可能な糸でビーズを連結し、ビーズ間距離が可変となる構造、またはこれらの組み合わせが挙げられる。図５は、上記メッシュ構造およびビーズの連結構造を組み合わせた構造を有する支持部を示し、ビーズの連結構造は、メッシュ構造を補強する補強部の役目を果たしている。 A support part having a mesh structure (see FIG. 3) capable of supporting a planar graft, and a support part having a frame structure capable of supporting at least a part of the graft (see FIG. 8). Is also included in the support portion of the present invention. Further, the case where the support portion has a structure that can be deformed in accordance with a target site such as a moving heart is also included in the support portion of the invention. Examples of the deformable structure include, but are not limited to, a mesh-like mesh structure as shown in FIG. 3 and a biocompatible polymer as shown in FIG. For example, a structure in which the beads are connected to each other through stretchable biocompatible threads, a structure in which the beads are connected with stretchable threads, and the distance between the beads is variable, or a combination thereof. FIG. 5 shows a support portion having a structure in which the mesh structure and the bead connection structure are combined. The bead connection structure serves as a reinforcing portion for reinforcing the mesh structure.
支持部の表面の形状としては、これに限定するものではないが、略平面状、曲面状、凹凸面状などが含まれる。例えば、移植片が支持部に適切に把持されるように、凹凸、湾曲、溝、突起などの把持力増大構造を設けることもできる。また、移植片が均一に展開された状態で支持部に装着され、全体が支持部に支持された状態で標的部位に固定できるように、支持部の面積を移植片の表面積と同等か、それより広く、例えば、１．１倍以上、１．２５倍以上、１．５倍以上、２倍以上などとなるように作製してもよい。 The shape of the surface of the support portion is not limited to this, but includes a substantially planar shape, a curved surface shape, an uneven surface shape, and the like. For example, a structure for increasing gripping force such as unevenness, curvature, grooves, and protrusions can be provided so that the graft is appropriately gripped by the support portion. In addition, the area of the support is equal to the surface area of the graft, so that the graft can be attached to the support in a uniformly deployed state and fixed to the target site with the whole supported by the support. You may produce more widely, for example, 1.1 times or more, 1.25 times or more, 1.5 times or more, 2 times or more, etc.
固定構造は、支持部を標的部位に少なくとも固定できるだけの強度を有する。固定構造の形状としては、支持部を標的部位に機械的に固定できるものであれば、特に限定されないが、針、フック、ステープル、ネジ、ボルト、ロッド、ピン、吸盤またはこれらに類する形状からなる群から選択することができる。これらのうち、標的部位に対する悪影響が少ないもの、限定されずに、例えば、標的部位を傷害しにくいか、標的部位に与える傷害が軽度のもの（例えば、マイクロニードル、吸盤など）が好ましい。また、標的部位に設置後、そこから外れにくいもの（例えば、かえし構造を有するものなど）も好ましい。固定構造の寸法および形状の組合せは自由に選択可能であり、用途に合わせて寸法および形状を適宜選択して作製することで、その強度や、標的部位への固定力が異なる様々な種類の固定構造を作製することができる。固定構造は支持部と一体成形してもよいし、支持部と固定構造とを取り外し可能に構成することもできる。固定構造は、支持部のいずれの部分に設置してもよいが、支持部の移植片が載置されない部分に設置すると、移植片を傷つけることなく支持部に載置することができる。また、支持部を標的部位に強固に固定する場合や、面積の大きな支持部を標的部位に固定する場合は、固定構造を、移植片載置部分を含む支持部全体に設けることが好ましい。この場合は、移植片が、固定構造に貫通される形で支持部に載置されるが、移植片が細胞培養物の場合には、例えば後述のように細胞培養物を固定構造を含む支持部上で培養して形成することなどにより、移植片を損傷することなく、移植片を支持部に設置することができる。さらにまた、固定構造の支持部への設置は、標的部位の形状や大きさ、組織の種類、移植片の形状に合わせて選択されてもよい。例えば、支持部にピンなどの固定構造を刺入して設置する場合に、移植片の形や、標的部位の大きさに合わせて、ピンの設置位置を変えたり、また、支持部を心臓等の動きのある標的部位に固定する場合は、動きの大きな部分に固定される支持部の箇所には、強度および／または固定力の高い固定構造を設置し、動きの小さな部分には、標的部位の組織を損傷しにくい、小さな固定構造を設置したりしてもよい。 The fixing structure has a strength sufficient to fix the support portion to the target site at least. The shape of the fixing structure is not particularly limited as long as the support portion can be mechanically fixed to the target site, but includes a needle, hook, staple, screw, bolt, rod, pin, sucker, or a similar shape. You can choose from a group. Among these, those that have little adverse effect on the target site, and are not limited, for example, those that are difficult to damage the target site or those that cause minor damage to the target site (for example, microneedles, suction cups, etc.) are preferable. Moreover, after installation in a target site | part, the thing (for example, thing which has a barb structure etc.) which cannot be easily removed from there is also preferable. The combination of dimensions and shape of the fixing structure can be freely selected, and various types of fixings with different strengths and fixing forces to the target site can be made by appropriately selecting the dimensions and shape according to the application. A structure can be made. The fixing structure may be integrally formed with the support part, or the support part and the fixing structure can be detachable. The fixing structure may be installed on any part of the support part, but if it is installed on a part of the support part where the graft is not placed, it can be placed on the support part without damaging the graft. Moreover, when fixing a support part to a target site | part firmly, or when fixing a support part with a large area to a target part, it is preferable to provide a fixing structure in the whole support part including a graft mounting part. In this case, the graft is placed on the support portion so as to penetrate the fixing structure. However, when the graft is a cell culture, the cell culture is supported including the fixing structure as described later, for example. The graft can be placed on the support without damaging the graft, for example, by culturing on the part. Furthermore, the installation of the fixing structure on the support portion may be selected according to the shape and size of the target site, the type of tissue, and the shape of the graft. For example, when installing a fixed structure such as a pin in the support part, the pin installation position is changed according to the shape of the graft or the target site, or the support part is placed in the heart or the like. When fixing to a target site with a large amount of movement, a fixing structure with high strength and / or fixing force is installed at the location of the support portion fixed to a large portion of movement, and the target site is located at a portion of small movement A small fixing structure that does not easily damage the tissue may be installed.
また、図１の態様では、支持部の面積が移植片の面積とほぼ同等かそれより大きく、支持部は移植片全体を支持している態様が示されたが、これに限られず、移植片の面積より小さな面積を有する支持部に固定構造を設置し、この支持部を移植片の上から標的部位に固定することにより、移植片を部分的に支持してもよいし、前記支持部が複数の部分に分れたものを用意して、移植片の上からその複数箇所を固定することにより、移植片の凝集力を介して移植片の全体を支持してもよい。図６には、移植片を複数の部分に分れた支持部および固定構造で固定する、本発明の移植用デバイスの態様を示す。本態様では、固定構造が備えられた支持部の面積は移植片の面積より小さく、また支持部は複数の部分に分れている。そして、この複数の支持部の部分を移植片の異なる場所に別々に配置することにより、全体として平面状の支持部構造を実現する。これら複数の支持部の部分は、図６のように独立して存在しても、また、図７のように互いに連結されていてもよい。そして、この複数の支持部の部分を連結するものもまた、生体適合性のものが好ましく、その形状は糸状、帯状など、支持部を繋ぐことができれば、どのようなものでもよい。図８は、複数の支持部の部分が帯状の構造で互いに連結された、本発明のデバイスの一態様を示しているが、この場合は、複数の支持部の部分およびこれらを連結する帯状のものを合わせた全体が、支持部となる。 In the embodiment of FIG. 1, the area of the support portion is approximately equal to or larger than the area of the graft, and the support portion supports the entire graft. However, the present invention is not limited to this. A fixing structure is installed on a support part having an area smaller than the area of the graft part, and the support part may be fixed to the target site from above the graft part to support the graft partly. The whole graft may be supported via the cohesive force of the graft by preparing a part divided into a plurality of parts and fixing the plurality of parts from above the graft. FIG. 6 shows an embodiment of the implantable device of the present invention in which the implant is fixed with a support and a fixing structure divided into a plurality of parts. In this aspect, the area of the support part provided with the fixing structure is smaller than the area of the graft, and the support part is divided into a plurality of parts. Then, by arranging the portions of the plurality of support portions separately at different locations of the graft, a planar support portion structure as a whole is realized. The portions of the plurality of support portions may exist independently as shown in FIG. 6 or may be connected to each other as shown in FIG. And what connects these parts of a support part is also a biocompatible thing, and the shape may be what as long as it can connect support parts, such as a thread form and a strip | belt shape. FIG. 8 shows an embodiment of the device of the present invention in which a plurality of support portions are connected to each other in a band-like structure. In this case, the plurality of support portions and the band-like shape connecting them are shown. The whole thing becomes a support part.
本発明の別の側面は、本発明の移植用デバイスと、それに設置された移植片を含む移植構造体およびその製造方法に関する。
移植片の移植用デバイスへの設置は、細胞培養容器で培養された移植片を容器から取り出し、デバイスに設置してもよいし、移植片を移植用デバイス上で培養して、移植片が移植用デバイスに接着された移植構造体として製造してもよい。本発明の移植構造体は、支持部と固定構造を有するため、標的部位に容易に移送、貼付、固定することができ、動きのある臓器であっても良好に生着することができる。
Another aspect of the present invention relates to an implantable device of the present invention, an implant structure including an implant placed thereon, and a method for manufacturing the implant structure.
The graft may be placed on the transplant device by taking out the graft cultured in the cell culture container from the container and placing it on the device, or by culturing the graft on the transplant device and transplanting the graft. It may be manufactured as an implant structure bonded to a device for use. Since the transplanted structure of the present invention has a support part and a fixing structure, it can be easily transferred, affixed, and fixed to a target site, and even a moving organ can be successfully engrafted.
本発明の移植構造体の製造方法は、
（i）本発明のデバイスを培養容器内に設置する工程、
（ii）培養容器に設置されたデバイス上に細胞を播種、培養し、移植片を形成する工程、
（iii）移植片をデバイスと共に培養容器から取り出す工程、
を含んでもよい。
The method for producing the transplant structure of the present invention comprises:
(I) installing the device of the present invention in a culture vessel;
(Ii) a step of seeding and culturing cells on a device installed in a culture container to form a graft;
(Iii) removing the graft from the culture vessel together with the device;
May be included.
本発明において、培養容器は、内部に本発明のデバイスを、その上に細胞が付着し、細胞培養物を形成できるように設置できるものであれば特に限定されず、市販の細胞培養容器を含む任意のものを用いることができる。培養の際には、一般に培養液などの液体を用いることから、液体を透過させない構造・材料が好ましい。かかる材料としては、限定することなく、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、テフロン（登録商標）、ポリエチレンテレフタレート、ポリメチルメタクリレート、ナイロン６，６、ポリビニルアルコール、セルロース、シリコン、ポリスチレン、ガラス、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、金属（例えば、鉄、ステンレス、アルミニウム、銅、真鍮）等が挙げられる。また、容器は、細胞がデバイス上に良好に定着するために、少なくとも１つの平坦な面を有することが好ましい。かかる容器の例としては、限定することなく、例えば、細胞培養皿、細胞培養ボトルなどが挙げられる。また、容器は、その内部に固形もしくは半固形の表面を有してもよい。固形の表面としては、上記のごとき種々の材料のプレートや容器などが、半固形の表面としては、ゲル、軟質のポリマーマトリクスなどが挙げられる。 In the present invention, the culture container is not particularly limited as long as the device of the present invention can be installed so that cells can adhere to it and form a cell culture, and includes a commercially available cell culture container. Any thing can be used. In culturing, since a liquid such as a culture solution is generally used, a structure / material that does not allow liquid to permeate is preferable. Examples of such materials include, but are not limited to, polyethylene, polypropylene, Teflon (registered trademark), polyethylene terephthalate, polymethyl methacrylate, nylon 6,6, polyvinyl alcohol, cellulose, silicon, polystyrene, glass, polyacrylamide, polydimethyl. Examples include acrylamide and metals (for example, iron, stainless steel, aluminum, copper, brass). Also, the container preferably has at least one flat surface so that the cells can settle well on the device. Examples of such containers include, but are not limited to, cell culture dishes and cell culture bottles. Further, the container may have a solid or semi-solid surface therein. Examples of solid surfaces include plates and containers of various materials as described above, and examples of semi-solid surfaces include gels and soft polymer matrices.
本発明の製造方法において、デバイスの支持部の培養可能面積は所望の移植片の底面積より大きくても、同一であっても、小さくてもよい。デバイスの支持部の培養可能面積が移植片の底面積より小さい場合、細胞培養物の培養容器からの遊離を容易にするために、培養容器の培養面の少なくともデバイスの培養面に被覆されない部分を、刺激応答性材料で作製または被覆してもよい。 In the production method of the present invention, the culturable area of the support portion of the device may be larger, the same or smaller than the desired bottom area of the graft. When the culturable area of the support part of the device is smaller than the bottom area of the graft, in order to facilitate the release of the cell culture from the culture container, at least the part of the culture surface of the culture container that is not covered with the culture surface of the device is used. It may be made or coated with a stimulus responsive material.
ここで、「刺激応答性材料」は、刺激、例えば、温度、光、ｐＨなどに応答して物性が変化する材料を指す。かかる材料としては、限定されずに、例えば、（メタ）アクリルアミド化合物、Ｎ−アルキル置換（メタ）アクリルアミド誘導体（例えば、Ｎ−エチルアクリルアミド、Ｎ−ｎ−プロピルアクリルアミド、Ｎ−ｎ−プロピルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルメタクリルアミド、Ｎ−シクロプロピルアクリルアミド、Ｎ−シクロプロピルメタクリルアミド、Ｎ−エトキシエチルアクリルアミド、Ｎ−エトキシエチルメタクリルアミド、Ｎ−テトラヒドロフルフリルアクリルアミド、Ｎ−テトラヒドロフルフリルメタクリルアミド等）、Ｎ，Ｎ−ジアルキル置換（メタ）アクリルアミド誘導体（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−エチルメチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジエチルアクリルアミド等）、環状基を有する（メタ）アクリルアミド誘導体（例えば、１−（１−オキソ−２−プロペニル）−ピロリジン、１−（１−オキソ−２−プロペニル）−ピペリジン、４−（１−オキソ−２−プロペニル）−モルホリン、１−（１−オキソ−２−メチル−２−プロペニル）−ピロリジン、１−（１−オキソ−２−メチル−２−プロペニル）−ピペリジン、４−（１−オキソ−２−メチル−２−プロペニル）−モルホリン等）、またはビニルエーテル誘導体（例えば、メチルビニルエーテル）のホモポリマーまたはコポリマーからなる温度応答性材料、アゾベンゼン基を有する光吸収性高分子、トリフェニルメタンロイコハイドロオキシドのビニル誘導体とアクリルアミド系単量体との共重合体、および、スピロベンゾピランを含むＮ−イソプロピルアクリルアミドゲル等の光応答性材料などの公知のものを用いることができる（例えば、特開平２−２１１８６５、特開２００３−３３１７７参照）。これらの材料に所定の刺激を与えることによりその物性、例えば、親水性や疎水性を変化させ、同材料上に付着した細胞培養物の剥離を促進することができる。 Here, the “stimulus responsive material” refers to a material whose physical properties change in response to stimulation, for example, temperature, light, pH, and the like. Examples of such materials include, but are not limited to, (meth) acrylamide compounds, N-alkyl substituted (meth) acrylamide derivatives (for example, N-ethylacrylamide, Nn-propylacrylamide, Nn-propylmethacrylamide, N-isopropylacrylamide, N-isopropylmethacrylamide, N-cyclopropylacrylamide, N-cyclopropylmethacrylamide, N-ethoxyethylacrylamide, N-ethoxyethylmethacrylamide, N-tetrahydrofurfurylacrylamide, N-tetrahydrofurfurylmethacrylate Amides), N, N-dialkyl-substituted (meth) acrylamide derivatives (eg, N, N-dimethyl (meth) acrylamide, N, N-ethylmethylacrylamide, N, N-diethyl) Chloramide and the like), (meth) acrylamide derivatives having a cyclic group (for example, 1- (1-oxo-2-propenyl) -pyrrolidine, 1- (1-oxo-2-propenyl) -piperidine, 4- (1-oxo -2-propenyl) -morpholine, 1- (1-oxo-2-methyl-2-propenyl) -pyrrolidine, 1- (1-oxo-2-methyl-2-propenyl) -piperidine, 4- (1-oxo -2-methyl-2-propenyl) -morpholine), or a vinyl ether derivative (for example, methyl vinyl ether) homopolymer or copolymer, a temperature-responsive material, a light-absorbing polymer having an azobenzene group, triphenylmethane leucohydro Copolymer of vinyl derivative of oxide and acrylamide monomer, and spirobenzopyra It can be used to include N- and isopropyl acrylamide gels known, such as photoresponsive materials (e.g., JP-A-2-211865, see JP-2003-33177). By giving a predetermined stimulus to these materials, the physical properties, for example, hydrophilicity and hydrophobicity can be changed, and peeling of the cell culture adhered on the materials can be promoted.
本発明において、移植片が細胞培養物である場合、細胞の播種および培養は、用いる細胞が細胞培養物を形成するのに適した任意の条件で行うことができ、かかる条件としては当該技術分野で周知のものや、これに適切な改変を加えたものを採用することができる。
本発明の好ましい態様において、細胞は、実質的に増殖することなくシート状細胞培養物を形成し得る密度で播種する。「実質的に増殖することなくシート状細胞培養物を形成し得る密度」とは、成長因子を含まない非増殖系の培養液で培養した場合に、シート状細胞培養物を形成することができる細胞密度を意味する。例えば、骨格筋芽細胞の場合、成長因子を含む培養液を用いる従来法では、シート状細胞培養物を形成するために、約６，５００個／ｃｍ２の密度の細胞をプレートに播種していたが（例えば、特許文献１参照）、かかる密度の細胞を、成長因子を含まない培養液で培養してもシート状の細胞培養物を形成することはできない。したがって、本態様における細胞密度は、成長因子を含む培養液を用いる従来法におけるものよりも高いものである。具体的には、例えば、骨格筋芽細胞については、かかる密度は典型的には３００，０００個／ｃｍ２以上である。細胞密度の上限は、細胞培養物の形成が損なわれず、細胞が分化に移行しなければ特に制限されないが、骨格筋芽細胞については、例えば、１，０００，０００個／ｃｍ２である。当業者であれば、本発明に適した細胞密度を、実験により適宜決定することができる。培養期間中、細胞は増殖してもしなくてもよいが、増殖するとしても、細胞の性状が変化する程には増殖しない。例えば、骨格筋芽細胞はコンフルエントになると分化を開始するが、本発明においては、骨格筋芽細胞は、細胞培養物は形成するが、分化に移行しない密度で播種される。本発明の好ましい態様において、細胞は計測誤差の範囲を超えて増殖しない。細胞が増殖したか否かは、例えば、播種時の細胞数と、細胞培養物形成後の細胞数とを比較することにより評価することができる。本態様において、細胞培養物形成後の細胞数は、典型的には播種時の細胞数の３００％以下、好ましくは２００％以下、より好ましくは１５０％以下、さらに好ましくは１２５％以下、特に好ましくは１００％以下である。
In the present invention, when the graft is a cell culture, the seeding and culturing of the cells can be performed under any conditions suitable for the cells to be used to form the cell culture. Can be employed, and those appropriately modified can be used.
In a preferred embodiment of the invention, the cells are seeded at a density that can form a sheet cell culture without substantial growth. “The density at which a sheet-like cell culture can be formed without substantially growing” means that a sheet-like cell culture can be formed when cultured in a non-proliferating culture medium that does not contain growth factors. Refers to cell density. For example, in the case of skeletal myoblasts, in the conventional method using a culture solution containing a growth factor, cells having a density of about 6,500 cells / cm 2 are seeded on a plate in order to form a sheet-like cell culture. However (for example, refer to Patent Document 1), even if cells having such a density are cultured in a culture solution containing no growth factor, a sheet-like cell culture cannot be formed. Therefore, the cell density in this embodiment is higher than that in the conventional method using a culture solution containing a growth factor. Specifically, for example, for skeletal myoblasts, such density is typically 300,000 cells / cm 2 or more. The upper limit of the cell density is not particularly limited as long as the formation of the cell culture is not impaired and the cells do not shift to differentiation, but for skeletal myoblasts, for example, 1,000,000 cells / cm 2 . A person skilled in the art can appropriately determine the cell density suitable for the present invention by experiments. During the culture period, the cells may or may not proliferate, but even if they proliferate, they do not proliferate to the extent that the properties of the cells change. For example, skeletal myoblasts start to differentiate when they become confluent, but in the present invention, skeletal myoblasts are seeded at a density that forms a cell culture but does not transition to differentiation. In a preferred embodiment of the invention, the cells do not grow beyond the range of measurement errors. Whether or not the cells have proliferated can be evaluated, for example, by comparing the number of cells at the time of seeding with the number of cells after formation of the cell culture. In this embodiment, the number of cells after the formation of the cell culture is typically 300% or less, preferably 200% or less, more preferably 150% or less, even more preferably 125% or less, particularly preferably the number of cells at the time of seeding. Is 100% or less.
培養に用いる細胞培養液（単に「培養液」もしくは「培地」と呼ぶ場合もある）は、細胞の生存を維持できるものであれば特に限定されないが、典型的には、アミノ酸、ビタミン類、電解質を主成分としたものが利用できる。本発明の一態様において、培養液は、細胞培養用の基礎培地をベースにしたものである。かかる基礎培地には、限定されずに、例えば、ＤＭＥＭ、ＭＥＭ、Ｆ１２、ＤＭＥ、ＲＰＭＩ１６４０、ＭＣＤＢ（ＭＣＤＢ１０２、１０４、１０７、１３１、１５３、１９９など）、Ｌ１５、ＳｋＢＭ、ＲＩＴＣ８０−７などが含まれる。これらの基礎培地の多くは市販されており、その組成も公知となっている。
基礎培地は、標準的な組成のまま（例えば、市販されたままの状態で）用いてもよいし、細胞種や細胞条件に応じてその組成を適宜変更してもよい。したがって、本発明に用いる基礎培地は、公知の組成のものに限定されず、１または２以上の成分が追加、除去、増量もしくは減量されたものを含む。
The cell culture medium used for the culture (sometimes simply referred to as “culture medium” or “medium”) is not particularly limited as long as it can maintain cell survival, but typically, amino acids, vitamins, electrolytes are used. Can be used. In one embodiment of the present invention, the culture solution is based on a basal medium for cell culture. Such basal media include, but are not limited to, for example, DMEM, MEM, F12, DME, RPMI 1640, MCDB (MCDB102, 104, 107, 131, 153, 199, etc.), L15, SkBM, RITC80-7, and the like. . Many of these basal media are commercially available, and their compositions are also known.
The basal medium may be used in a standard composition (for example, as it is commercially available), or the composition may be appropriately changed depending on the cell type and cell conditions. Therefore, the basal medium used in the present invention is not limited to those having a known composition, and includes one in which one or more components are added, removed, increased or decreased.
基礎培地に含まれるアミノ酸としては、限定されずに、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−シスチン、Ｌ−グルタミン、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−セリン、Ｌ−トレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、Ｌ−バリンなどが、ビタミン類としては、限定されずに、例えば、Ｄ−パントテン酸カルシウム、塩化コリン、葉酸、ｉ−イノシトール、ナイアシンアミド、リボフラビン、チアミン、ピリドキシン、ビオチン、リポ酸、ビタミンＢ１２、アデニン、チミジンなどが、そして、電解質としては、限定されずに、例えば、ＣａＣｌ２、ＫＣｌ、ＭｇＳＯ４、ＮａＣｌ、ＮａＨ２ＰＯ４、ＮａＨＣＯ３、Ｆｅ（ＮＯ３）３、ＦｅＳＯ４、ＣｕＳＯ４、ＭｎＳＯ４、Ｎａ２ＳｉＯ３、（ＮＨ４）６Ｍｏ７Ｏ２４、ＮａＶＯ３、ＮｉＣｌ２、ＺｎＳＯ４などがそれぞれ含まれる。基礎培地には、これらの成分のほか、Ｄ−グルコースなどの糖類、ピルビン酸ナトリウム、フェノールレッドなどのｐＨ指示薬、プトレシンなどを含んでもよい。 Examples of amino acids contained in the basal medium include, but are not limited to, L-arginine, L-cystine, L-glutamine, glycine, L-histidine, L-isoleucine, L-leucine, L-lysine, L-methionine, L-phenylalanine, L-serine, L-threonine, L-tryptophan, L-tyrosine, L-valine and the like are not limited to vitamins, for example, calcium D-pantothenate, choline chloride, folic acid, i - inositol, niacinamide, riboflavin, thiamine, pyridoxine, biotin, lipoic acid, vitamin B 12, adenine, thymidine and then, as the electrolyte, without limitation, for example, CaCl 2, KCl, MgSO 4 , NaCl, NaH 2 PO 4 , NaHCO 3 , Fe (NO 3 ) 3 , FeS O 4 , CuSO 4 , MnSO 4 , Na 2 SiO 3 , (NH 4 ) 6 Mo 7 O 24 , NaVO 3 , NiCl 2 , ZnSO 4 and the like are included. In addition to these components, the basal medium may contain sugars such as D-glucose, pH indicators such as sodium pyruvate and phenol red, putrescine and the like.
本発明の一態様において、基礎培地に含まれるアミノ酸の濃度は、Ｌ−アルギニン：６３．２〜８４ｍｇ／Ｌ、Ｌ−シスチン：３５〜６３ｍｇ／Ｌ、Ｌ−グルタミン：４．４〜５８４ｍｇ／Ｌ、グリシン：２．３〜３０ｍｇ／Ｌ、Ｌ−ヒスチジン：４２ｍｇ／Ｌ、Ｌ−イソロイシン：６６〜１０５ｍｇ／Ｌ、Ｌ−ロイシン：１０５〜１３１ｍｇ／Ｌ、Ｌ−リジン：１４６〜１８２ｍｇ／Ｌ、Ｌ−メチオニン：１５〜３０ｍｇ／Ｌ、Ｌ−フェニルアラニン：３３〜６６ｍｇ／Ｌ、Ｌ−セリン：３２〜４２ｍｇ／Ｌ、Ｌ−トレオニン：１２〜９５ｍｇ／Ｌ、Ｌ−トリプトファン：４．１〜１６ｍｇ／Ｌ、Ｌ−チロシン：１８．１〜１０４ｍｇ／Ｌ、Ｌ−バリン：９４〜１１７ｍｇ／Ｌである。
また、本発明の一態様において、基礎培地に含まれるビタミン剤の濃度は、Ｄ−パントテン酸カルシウム：４〜１２ｍｇ／Ｌ、塩化コリン：４〜１４ｍｇ／Ｌ、葉酸：０．６〜４ｍｇ／Ｌ、ｉ−イノシトール：７．２ｍｇ／Ｌ、ナイアシンアミド：４〜６．１ｍｇ／Ｌ、リボフラビン：０．００３８〜０．４ｍｇ／Ｌ、チアミン：３．４〜４ｍｇ／Ｌ、ピリドキシン：２．１〜４ｍｇ／Ｌである。
In one embodiment of the present invention, the concentration of amino acids contained in the basal medium is as follows: L-arginine: 63.2 to 84 mg / L, L-cystine: 35 to 63 mg / L, L-glutamine: 4.4 to 584 mg / L Glycine: 2.3-30 mg / L, L-histidine: 42 mg / L, L-isoleucine: 66-105 mg / L, L-leucine: 105-131 mg / L, L-lysine: 146-182 mg / L, L -Methionine: 15-30 mg / L, L-phenylalanine: 33-66 mg / L, L-serine: 32-42 mg / L, L-threonine: 12-95 mg / L, L-tryptophan: 4.1-16 mg / L L-tyrosine: 18.1 to 104 mg / L, L-valine: 94 to 117 mg / L.
In one embodiment of the present invention, the concentration of the vitamin preparation contained in the basal medium is as follows: calcium D-pantothenate: 4 to 12 mg / L, choline chloride: 4 to 14 mg / L, folic acid: 0.6 to 4 mg / L , I-inositol: 7.2 mg / L, niacinamide: 4-6.1 mg / L, riboflavin: 0.0038-0.4 mg / L, thiamine: 3.4-4 mg / L, pyridoxine: 2.1- 4 mg / L.
細胞培養液は、上記のほか、血清、成長因子、ステロイド剤成分、セレン成分などの１種または２種以上の添加物を含んでもよい。しかし、これらの成分は臨床においてはレシピエントに対するアナフィラキシーショック等の副作用要因となり得ることが否定できない製造工程由来不純物であり、臨床への適用にあたっては排除すべき成分である。したがって、本発明の好ましい態様において、細胞培養液は、これらの添加物の少なくとも１種の有効量を含まない。また、本発明のより好ましい態様において、細胞培養液は、これらの添加物の少なくとも１種を実質的に含まない。さらに、本発明の特に好ましい態様において、細胞培養液は、添加物を実質的に含まない。したがって、細胞培養液は、基礎培地のみを含んでもよい。 In addition to the above, the cell culture medium may contain one or more additives such as serum, growth factor, steroid component, and selenium component. However, these components are impurities derived from the manufacturing process that cannot be denied that they can cause side effects such as anaphylactic shock to the recipient in the clinic, and should be excluded in clinical application. Accordingly, in a preferred embodiment of the invention, the cell culture medium does not contain an effective amount of at least one of these additives. In a more preferred embodiment of the present invention, the cell culture medium is substantially free of at least one of these additives. Furthermore, in a particularly preferred embodiment of the present invention, the cell culture medium is substantially free of additives. Therefore, the cell culture medium may contain only the basal medium.
本発明の好ましい一態様において、細胞培養液は血清成分を実質的に含まない。血清成分を実質的に含まない細胞培養液のことを、本明細書中で「無血清培地」と呼ぶこともある。血清成分としては、異種血清成分および同種血清成分が挙げられる、ここで「異種血清成分」は、細胞培養物を移植に用いる場合、そのレシピエントとは異なる種の生物に由来する血清成分を意味する。例えば、レシピエントがヒトである場合、ウシやウマに由来する血清、例えば、ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＦＣＳ）、仔ウシ血清（ＣＳ）、ウマ血清（ＨＳ）などが異種血清成分に該当する。また、「同種血清成分」は、レシピエントと同一の種の生物に由来する血清成分を意味する。例えば、レシピエントがヒトである場合、ヒト血清が同種血清成分に該当する。同種血清成分は、自己血清成分、すなわち、レシピエントに由来する血清成分を含む。したがって、「血清成分を実質的に含まない」とは、培養液におけるこれらの血清の含量が、細胞培養物を生体に適用した場合に悪影響を及ぼさない程度（例えば、細胞培養物中の血清アルブミン含量が５０ｎｇ未満となる量）であること、好ましくは、培養液にこれらの物質を積極的に添加しないことを意味する。なお、本明細書中で、自己血清以外の血清、すなわち、異種血清と同種他家血清を他家血清または非自己血清と総称することもある。 In a preferred embodiment of the present invention, the cell culture medium is substantially free of serum components. A cell culture medium substantially free from serum components may be referred to herein as “serum-free medium”. Serum components include heterogeneous serum components and allogeneic serum components, where “heterologous serum components” refers to serum components derived from an organism of a species different from the recipient when the cell culture is used for transplantation. To do. For example, when the recipient is a human, serum derived from bovine or horse, for example, fetal calf serum (FBS, FCS), calf serum (CS), horse serum (HS), etc. corresponds to the heterologous serum components. In addition, “same serum component” means a serum component derived from the same species of organism as the recipient. For example, when the recipient is a human, human serum corresponds to the homologous serum component. Allogeneic serum components include autologous serum components, ie, serum components derived from the recipient. Therefore, “substantially free of serum components” means that the content of these sera in the culture solution does not have an adverse effect when the cell culture is applied to a living body (for example, serum albumin in the cell culture). It means that the content is less than 50 ng), preferably that these substances are not actively added to the culture solution. In the present specification, sera other than autoserum, that is, heterologous serum and allogeneic autologous serum may be collectively referred to as autologous serum or non-autologous serum.
本発明の一態様において、細胞培養液は有効量の成長因子を含まない。ここで、「成長因子」は、細胞の増殖を、それがない場合に比べて促進する任意の物質を意味し、例えば、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）などを含む。また、「有効量の成長因子」とは、細胞の増殖を、成長因子がない場合に比べて、有意に促進する成長因子の量、または、便宜的に、当該技術分野において細胞の増殖を目的として通常添加する量を意味する。細胞増殖促進の有意性は、例えば、当該技術分野で知られた任意の統計学的手法、例えば、ｔ検定などにより適宜評価することができ、また、通常の添加量は当該技術分野の種々の公知文献から知ることができる。具体的には、骨格筋芽細胞の培養におけるＥＧＦの有効量は、例えば０．００５μｇ／ｍＬ以上である。 In one embodiment of the invention, the cell culture fluid does not contain an effective amount of growth factor. As used herein, “growth factor” means any substance that promotes cell proliferation as compared to the case without it, such as epithelial cell growth factor (EGF), vascular endothelial growth factor (VEGF), fibroblast, and the like. Cell growth factor (FGF) and the like. In addition, an “effective amount of growth factor” refers to the amount of growth factor that significantly promotes cell proliferation compared to the absence of growth factor, or for the purpose of cell proliferation in the art for convenience. Means the amount usually added. The significance of cell growth promotion can be appropriately evaluated, for example, by any statistical method known in the art, for example, t-test, and the usual addition amount is various in the art. It can be known from known literature. Specifically, the effective amount of EGF in skeletal myoblast culture is, for example, 0.005 μg / mL or more.
したがって、「有効量の成長因子を含まない」とは、本発明における培養液における成長因子の濃度がかかる有効量未満であることを意味する。例えば、骨格筋芽細胞の培養におけるＥＧＦの培養液中の濃度は、好ましくは０．００５μｇ／ｍＬ未満、より好ましくは０．００１μｇ／ｍＬ未満である。本発明の好ましい態様においては、培養液における成長因子の濃度は、生体における通常の濃度未満である。かかる態様においては、例えば、骨格筋芽細胞の培養におけるＥＧＦの培養液中の濃度は、好ましくは５．５ｎｇ／ｍＬ未満、より好ましくは１．３ｎｇ／ｍＬ未満、さらに好ましくは、０．５ｎｇ／ｍＬ未満である。さらに好ましい態様において、本発明における培養液は、成長因子を実質的に含まない。ここで、実質的に含まないとは、培養液中の成長因子の含量が、細胞培養物を生体に適用した場合に悪影響を及ぼさない程度であること、好ましくは、培養液に成長因子を積極的に添加しないことを意味する。したがって、この態様においては、培養液は、その中の他の成分、例えば血清などに含まれる以上の濃度の成長因子を含まない。 Therefore, “not containing an effective amount of growth factor” means that the concentration of the growth factor in the culture medium of the present invention is less than the effective amount. For example, the concentration of EGF in the culture medium in skeletal myoblast culture is preferably less than 0.005 μg / mL, more preferably less than 0.001 μg / mL. In a preferred embodiment of the present invention, the concentration of the growth factor in the culture solution is less than the normal concentration in the living body. In such an embodiment, for example, the concentration of EGF in the culture medium in skeletal myoblast culture is preferably less than 5.5 ng / mL, more preferably less than 1.3 ng / mL, and even more preferably 0.5 ng / mL. Less than mL. In a further preferred embodiment, the culture medium in the present invention is substantially free from growth factors. Here, “substantially free” means that the content of the growth factor in the culture solution is such that the cell culture is not adversely affected when applied to a living body, and preferably the growth factor is positively added to the culture solution. Means that it is not added. Therefore, in this embodiment, the culture solution does not contain a growth factor at a concentration higher than that contained in other components such as serum.
本発明の一態様において、細胞培養液は、ステロイド剤成分を実質的に含まない。ここで「ステロイド剤成分」は、ステロイド核を有する化合物のうち、生体に、副腎皮質機能不全、クッシング症候群などの悪影響を及ぼし得るものをいう。かかる化合物としては、限定されずに、例えば、コルチゾール、プレドニゾロン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、ベタメタゾン等が含まれる。したがって、「ステロイド剤成分を実質的に含まない」とは、培養液におけるこれらの化合物の含量が、細胞培養物を生体に適用した場合に悪影響を及ぼさない程度であること、好ましくは、培養液にこれらの化合物を積極的に添加しないこと、すなわち、培養液が、その中の他の成分、例えば血清などに含まれる以上の濃度のステロイド剤成分を含まないことを意味する。 In one embodiment of the present invention, the cell culture medium is substantially free of steroid component. Here, the “steroid component” refers to a compound having a steroid nucleus that can adversely affect a living body such as adrenal cortex dysfunction and Cushing's syndrome. Such compounds include, but are not limited to, for example, cortisol, prednisolone, triamcinolone, dexamethasone, betamethasone and the like. Therefore, “substantially free of steroid component” means that the content of these compounds in the culture solution is such that the cell culture is not adversely affected when applied to a living body. This means that these compounds are not actively added, that is, the culture solution does not contain a steroid component at a concentration higher than that contained in other components such as serum.
本発明の一態様において、細胞培養液は、セレン成分を実質的に含まない。ここで「セレン成分」は、セレン分子、およびセレン含有化合物、特に、生体内でセレン分子を遊離し得るセレン含有化合物、例えば、亜セレン酸などを含む。したがって、「セレン成分を実質的に含まない」とは、培養液におけるこれらの物質の含量が、細胞培養物を生体に適用した場合に悪影響を及ぼさない程度であること、好ましくは、培養液にこれらの物質を積極的に添加しないこと、すなわち、培養液が、その中の他の成分、例えば血清などに含まれる以上の濃度のセレン成分を含まないことを意味する。具体的には、例えば、ヒトの場合、培養液中のセレン濃度は、ヒト血清中の正常値（例えば、１０．６〜１７．４μｇ／ｄＬ）に、培地中に含まれるヒト血清の割合を乗じた値よりも低い（すなわち、ヒト血清の含量が１０％であれば、セレン濃度は、例えば、１．０〜１．７μｇ／ｄＬ未満である）。 In one embodiment of the present invention, the cell culture solution is substantially free of a selenium component. Here, the “selenium component” includes a selenium molecule and a selenium-containing compound, in particular, a selenium-containing compound capable of releasing a selenium molecule in vivo, such as selenite. Therefore, “substantially free of selenium component” means that the content of these substances in the culture solution is such that the cell culture is not adversely affected when applied to a living body. This means that these substances are not actively added, that is, the culture solution does not contain a selenium component at a concentration higher than that contained in other components such as serum. Specifically, for example, in the case of humans, the selenium concentration in the culture solution is the normal value in human serum (for example, 10.6 to 17.4 μg / dL), and the ratio of human serum contained in the medium is It is lower than the multiplied value (that is, if the content of human serum is 10%, the selenium concentration is, for example, 1.0 to less than 1.7 μg / dL).
本発明の上記好ましい態様においては、生体に適用する細胞培養物を作製する場合に従来必要であった、成長因子、ステロイド剤成分、異種血清成分などの製造工程由来不純物を、洗浄などにより除去する工程が不要となる。したがって、本発明の方法の一態様は、この製造工程由来不純物を除去する工程を含まない。
ここで、「製造工程由来不純物」とは、典型的には、製造各工程に由来する以下に列挙するものが含まれる。すなわち、細胞基材に由来するもの（例えば、宿主細胞由来蛋白質、宿主細胞由来ＤＮＡ）、細胞培養液に由来するもの（例えば、インデューサー、抗生物質、培地成分）、あるいは細胞培養以降の工程である目的物質の抽出、分離、加工、精製工程に由来するものなどである（例えば、医薬審発第５７１号参照）。
In the above preferred embodiment of the present invention, impurities derived from production processes such as growth factors, steroid components, and heterogeneous serum components, which have been conventionally required when preparing a cell culture to be applied to a living body, are removed by washing or the like. A process becomes unnecessary. Therefore, one embodiment of the method of the present invention does not include the step of removing impurities derived from the production process.
Here, “manufacturing process-derived impurities” typically include those listed below, which are derived from each manufacturing process. That is, a substance derived from a cell substrate (for example, host cell-derived protein, host cell-derived DNA), a substance derived from a cell culture medium (for example, inducer, antibiotic, medium component), or a process after cell culture. It is derived from the extraction, separation, processing, and purification steps of a certain target substance (see, for example, Pharmaceutical Examination No.571).
細胞の培養は、当該技術分野で通常なされている条件で行うことができる。例えば、典型的な培養条件としては、３７℃、５％ＣＯ２での培養が挙げられる。本発明における所定の培養期間は、細胞培養物の十分な形成、および、細胞分化防止の観点から、好ましくは４８時間以内、より好ましくは４０時間以内、さらに好ましくは２４時間以内である。 Cell culture can be performed under conditions usually used in the art. For example, typical culture conditions include culture at 37 ° C. and 5% CO 2 . The predetermined culture period in the present invention is preferably within 48 hours, more preferably within 40 hours, and even more preferably within 24 hours from the viewpoint of sufficient formation of cell culture and prevention of cell differentiation.
本方法において、デバイスの支持部の面積が細胞培養物の底面積より小さく、培養容器の基材に刺激応答性材料を用いる場合には、所定の刺激を加えて細胞培養物を培養容器から遊離させる。ここで、所定の刺激とは、刺激応答性材料の物性、例えば、疎水性・親水性などを変化させることができる刺激を意味し、例えば、刺激応答性材料が温度応答性材料であれば、特定の温度変化であり、光応答性材料であれば、特定の波長もしくは強度の光であり、ｐＨ応答性材料であれば、特定のｐＨの変化である。刺激応答性材料の物性変化に必要な具体的な刺激の種類や強度は当業者に既知である。 In this method, when the area of the support part of the device is smaller than the bottom area of the cell culture and a stimulus-responsive material is used for the substrate of the culture container, the cell culture is released from the culture container by applying a predetermined stimulus. Let Here, the predetermined stimulus means a stimulus that can change the physical properties of the stimulus-responsive material, for example, hydrophobicity / hydrophilicity. For example, if the stimulus-responsive material is a temperature-responsive material, If it is a specific temperature change, if it is a photoresponsive material, it is light of a specific wavelength or intensity, and if it is a pH responsive material, it is a specific pH change. A person skilled in the art knows the specific kind and intensity of the stimulus necessary for changing the physical properties of the stimulus-responsive material.
以下に、本発明のデバイスおよび移植構造体を図面を参照してより詳細に説明するが、これは本発明の特定の具体例を示すものであり、本発明はこれに限定されるものではない。 In the following, the device and the implant structure of the present invention will be described in more detail with reference to the drawings, but this shows a specific embodiment of the present invention and the present invention is not limited thereto. .
実施例１ 固定構造を有する補強部の作製
補強部を構成する部材としては、外径２ｍｍ、内径０．８ｍｍ、長さ４ｍｍのポリ乳酸樹脂製ビーズ（円筒状）およびビーズ連結用の吸収性合成縫合糸（ポリグリコール酸製）を用意した。８個のビーズには、かえしを有する針状の固定構造（図１０参照）を、ポリ乳酸を射出成形することにより作製した。固定構造を有するビーズが円周上に配置されるよう、縫合糸をビーズの中空部分に通してビーズを連結し、図９に示すように、円形の平面構造を有する、円周部分と直径（１５ｍｍ）に沿って円周上の点を結ぶ直線部分とからなる構造物を作製した。針状固定構造は、挿通された糸を軸にビーズが回転しないように、ビーズの側面に糸の挿通方向に沿って２以上の孔を設け、これに糸を並縫い状に挿通させることにより、その先端の向きを一定にすることが可能である。
Example 1 Production of a reinforcing part having a fixing structure As a member constituting the reinforcing part, a polylactic acid resin bead (cylindrical shape) having an outer diameter of 2 mm, an inner diameter of 0.8 mm, and a length of 4 mm, and an absorptive composite for connecting the beads are used. A suture (made of polyglycolic acid) was prepared. In eight beads, a needle-like fixing structure having a barb (see FIG. 10) was produced by injection molding polylactic acid. A suture is passed through the hollow portion of the bead so that the bead having a fixed structure is arranged on the circumference, and the beads are connected to each other, as shown in FIG. 15 mm), a structure consisting of a straight line connecting points on the circumference was produced. The needle-like fixing structure has two or more holes along the thread insertion direction on the side of the bead so that the bead does not rotate around the thread that has been inserted, and the thread is inserted in a parallel stitch shape. It is possible to make the direction of the tip constant.
実施例２ 移植構造体の形成（１）
細胞培養皿（３．５ｃｍディッシュ）に、実施例１で用いた縫合糸で作製したメッシュを敷き、ＤＭＥＭ／Ｆ１２培地（Invitrogen製）にヒト血清を２０％となるように加え、フィルターユニットにてろ過した培地を入れた。これに、ヒト骨格筋芽細胞（Lonza製）を９．３×１０6個播種し、３７℃、５％ＣＯ２で１２〜２６時間培養してシート状細胞培養物を形成させた（直径１５〜２０ｍｍ程度、厚さ３０〜６０μｍ程度）。こうして得たシート状細胞培養物を、シート状細胞培養物が付着しているメッシュ（支持部）ごと培養容器から取り出し、支持部の細胞培養物が付着していない面と、実施例１で作製した補強部の固定構造が突出している面とを、固定構造が支持部の細胞培養物が付着していない部分を貫通するようにして合わせて固定し、本発明の移植構造体を形成した。
Example 2 Formation of transplanted structure (1)
A cell culture dish (3.5 cm dish) is covered with a mesh made of the sutures used in Example 1, human serum is added to DMEM / F12 medium (manufactured by Invitrogen) to a concentration of 20%, and the filter unit is used. A filtered medium was added. To this, 9.3 × 10 6 human skeletal myoblasts (Lonza) were seeded and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 for 12 to 26 hours to form a sheet-shaped cell culture (diameter 15). ˜20 mm, thickness about 30-60 μm). The sheet-like cell culture thus obtained is taken out from the culture vessel together with the mesh (support part) to which the sheet-like cell culture is attached, and the surface of the support part to which the cell culture is not attached is prepared in Example 1. The surface of the reinforcing portion where the fixing structure protrudes is fixed so that the fixing structure penetrates the portion of the supporting portion where the cell culture is not attached, thereby forming the transplant structure of the present invention.
実施例３ 移植構造体の形成（２）
実施例１で作製した構造物（固定デバイス）の固定構造が突出している面に、実施例１で用いた縫合糸で作製したメッシュ（支持部）を、これに固定構造を貫通させて固定し、固定構造が露出したメッシュ面を上にして細胞培養皿（１０ｃｍディッシュ）に配置した。培養皿に実施例２で用いた培地を入れ、ヒト骨格筋芽細胞（Lonza製）を６×１０７個播種し、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。２４時間後に培養皿から固定デバイスを取り出し、支持部上にシート状細胞培養物が付着した本発明の移植構造体を得た。
Example 3 Formation of transplant structure (2)
The mesh (support part) produced with the suture used in Example 1 is fixed to the surface of the structure (fixing device) produced in Example 1 on which the fixing structure protrudes, through the fixing structure. Then, it was placed in a cell culture dish (10 cm dish) with the mesh surface with the fixed structure exposed facing up. The culture medium used in Example 2 was placed in a culture dish, 6 × 10 7 human skeletal myoblasts (Lonza) were seeded, and cultured at 37 ° C. and 5% CO 2 . After 24 hours, the fixing device was taken out from the culture dish, and the transplanted structure of the present invention in which the sheet-like cell culture was adhered on the support portion was obtained.
Claims (8)
（i）移植片を支持するための支持部
（ii）支持部を標的部位に機械的に固定し、移植片を担持するための、少なくとも１つの固定構造
を含む、前記デバイス。 A device for securing an implant to a target site,
(I) a support for supporting the implant; (ii) the device comprising at least one fixation structure for mechanically fixing the support to the target site and for carrying the implant.
（i）請求項１〜６のいずれか一項に記載のデバイス、
（ii）前記デバイスに載置された移植片、
を含む、前記移植構造体。 An implant structure,
(I) The device according to any one of claims 1 to 6,
(Ii) an implant placed on the device;
The graft structure comprising:
（i）請求項１〜６のいずれか一項に記載のデバイスを培養容器内に設置する工程、
（ii）培養容器内に設置されたデバイス上に細胞を播種、培養し、移植片を形成する工程、
（iii）移植片をデバイスと共に培養容器から取り出す工程、
を含む、前記製造方法。 A method for producing an implant structure, comprising:
(I) installing the device according to any one of claims 1 to 6 in a culture vessel;
(Ii) a step of seeding and culturing cells on a device installed in a culture container to form a graft;
(Iii) removing the graft from the culture vessel together with the device;
The said manufacturing method including.
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015501179A (en) * | 2011-10-21 | 2015-01-15 | リヴィジョン・オプティックス・インコーポレーテッド | Corneal graft storage and delivery device |
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