JP2012102132A

JP2012102132A - Vaccine against hpv16 and hpv18 and at least another hpv type selected from hpv 31, 45 or 52

Info

Publication number: JP2012102132A
Application number: JP2012001102A
Authority: JP
Inventors: Serge Debrus; デブリュ，セルジュ; Marie-Therese Martin; マルティン，マリー−テレーズ; Robert John Stephen; ジョンステファン，ロバート; Jean Stephenne; シュテファン，ジャン; Martine Anne Cecil Wettendorff; ヴェッテンドルフ，マルティーヌ，アンヌ，セシル
Original assignee: GlaxoSmithKline Biologicals SA
Current assignee: GlaxoSmithKline Biologicals SA
Priority date: 2004-06-16
Filing date: 2012-01-06
Publication date: 2012-05-31
Also published as: HUS1500060I1; PT1758609E; TW200612983A; KR20120123617A; LTC1758609I2; CN1976718A; SI1758609T1; GB0413510D0; DK1758609T3; NL300774I2; ZA200610057B; NL300773I2; NL300774I1; HUS1500061I1; HUS1500059I1; ES2394448T3; NL300771I1; CN1976718B; NL300773I1; KR101359943B1

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a vaccine that protects against multiple (e.g., 2 or more) HPV types.SOLUTION: An immunogenic composition and methods for producing the composition, the composition comprising VLPs from HPV 16 and 18 and at least one other HPV cancer type, the other cancer type being selected from the list consisting of HPV types 31, 45 and 52, wherein the dose of the VLP of the at least one other cancer types is reduced relative to that of HPV 16 or 18.

Description

本発明はヒトパピローマウイルスに対するワクチンに関する。 The present invention relates to a vaccine against human papillomavirus.

パピローマウイルスは、高度に種特異的な小さなDNA腫瘍ウイルスである。現在までに100を超えるヒトパピローマウイルス（HPV）遺伝子型が記載されている。HPVは、一般には、皮膚（例えば、HPV-1および-2）または粘膜表面（例えば、HPV-6および-11）に特異的であり、通常は、数ヶ月または数年間持続する良性腫瘍（疣贅）を引き起こす。そのような良性腫瘍は、気になる人にとっては悩ましいものではあるが、少数の例外を除き、生命を脅かす傾向にはない。 Papillomaviruses are small, highly species-specific DNA tumor viruses. To date, over 100 human papillomavirus (HPV) genotypes have been described. HPV is generally specific to the skin (eg HPV-1 and -2) or mucosal surface (eg HPV-6 and -11) and is usually a benign tumor (warts) that persists for months or years. Cause). Such benign tumors, while annoying to those who care, do not tend to be life-threatening, with a few exceptions.

また、いくつかのHPVは癌に関連しており、発癌性HPV型として知られる。HPVとヒトの癌との間の最も強い正の相関は、HPV-16およびHPV-18と子宮頚癌との間に存在するものである。子宮頚癌は、発展途上国において最もよく見られる悪性疾患であり、全世界で毎年約500,000の新たな症例が生じている。 Also, some HPVs are associated with cancer, known as oncogenic HPV types. The strongest positive correlation between HPV and human cancer is that which exists between HPV-16 and HPV-18 and cervical cancer. Cervical cancer is the most common malignancy in developing countries, with approximately 500,000 new cases occurring annually worldwide.

癌に関して特に関心が持たれる他のHPVは31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82、26、53および66型である。 Other HPVs of particular interest for cancer are types 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73, 82, 26, 53 and 66.

HPVウイルス様粒子（VLP）がHPVの治療のための潜在的なワクチンとして示唆されている。VLPを使用する二価ワクチンは、若い女性におけるHPV 16および18型の感染の予防に有効であることが示されている（Lancet, vol 364, issue 9447, November 2004, pages 1757-1765）。 HPV virus-like particles (VLPs) have been suggested as a potential vaccine for the treatment of HPV. Bivalent vaccines using VLPs have been shown to be effective in preventing HPV 16 and 18 infections in young women (Lancet, vol 364, issue 9447, November 2004, pages 1757-1765).

Lancet, vol 364, issue 9447, November 2004, pages 1757-1765Lancet, vol 364, issue 9447, November 2004, pages 1757-1765

複数の（例えば、2以上の）HPV型に対して防御するワクチンが依然として望まれている。 There remains a need for vaccines that protect against multiple (eg, two or more) HPV types.

本発明はこの要求に対処するものである。 The present invention addresses this need.

発明の概要
第1の態様において、本発明は、HPV 16および18ならびに少なくとも1つの別のHPV癌型に由来するVLPを含んでなる免疫原性組成物であって、その別の癌型が、HPV 31、45および52型よりなる群から選ばれ、その少なくとも1つの別の癌型のVLPの用量がHPV 16または18のものより低い、免疫原性組成物に関する。 SUMMARY OF THE INVENTIONIn a first aspect, the invention provides an immunogenic composition comprising VLPs from HPV 16 and 18 and at least one other HPV cancer type, wherein the other cancer type is An immunogenic composition selected from the group consisting of HPV types 31, 45 and 52, wherein the dose of VLPs of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.

関連態様において、本発明は、HPV 16および少なくとも1つの別のHPV癌型に由来するVLPを含んでなる免疫原性組成物であって、その別の癌型が、HPV 31および52型よりなる群から選ばれ、その少なくとも1つの別の癌型のVLPの用量がHPV 16のものより低い、免疫原性組成物に関する。 In a related embodiment, the invention provides an immunogenic composition comprising VLPs derived from HPV 16 and at least one other HPV cancer type, wherein the other cancer type comprises HPV 31 and 52. An immunogenic composition, wherein the dose of VLPs of at least one other cancer type selected from the group is lower than that of HPV 16.

関連態様において、本発明は、HPV 18およびHPV 45に由来するVLPを含んでなる免疫原性組成物であって、HPV 45 VLPの用量がHPV 18のものより低い、免疫原性組成物に関する。 In a related aspect, the invention relates to an immunogenic composition comprising VLPs derived from HPV 18 and HPV 45, wherein the dose of HPV 45 VLPs is lower than that of HPV 18.

本発明は更に、アジュバントおよび／または担体と組合わされた前記の免疫原性組成物に関する。 The invention further relates to the above immunogenic composition in combination with an adjuvant and/or carrier.

本発明は更に、前記の免疫原性組成物と製薬上許容される賦形剤とを含んでなるワクチンに関する。 The invention further relates to a vaccine comprising the above immunogenic composition and a pharmaceutically acceptable excipient.

本発明は更に、HPV感染および／または疾患の予防方法であって、それを要する個体に前記の組成物またはワクチンを投与することを含んでなる方法に関する。 The present invention further relates to a method of preventing HPV infection and/or disease comprising administering to an individual in need thereof a composition or vaccine as described above.

本発明は更に、HPV 16および18に由来するVLPを少なくとも1つの別のHPV癌型と混合することを含んでなる、前記免疫原性組成物の製造方法であって、その別の癌型が、HPV 31、45および52型よりなる群から選ばれ、その少なくとも1つの別の癌型のVLPの用量がHPV 16または18のものより低い、製造方法に関する。 The invention further comprises a method of making the immunogenic composition, wherein the VLPs from HPV 16 and 18 are mixed with at least one other HPV cancer type, wherein the other cancer type is , HPV types 31, 45 and 52, wherein the dose of VLPs of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.

本発明の前記態様においては、VLPではなくHPVカプソメアを使用することも可能である。 In the above aspect of the invention, it is also possible to use HPV capsomeres rather than VLPs.

詳細な説明
本発明者らは、驚くべきことに、HPV 16および18 VLPが、特定の別のHPV癌型（すなわち、HPV 31、HPV 45およびHPV 52）による感染および／または疾患に対して交差防御をもたらしうることを確認した。本明細書中の実施例においてデータを記載する。 DETAILED DESCRIPTION The inventors have surprisingly found that HPV 16 and 18 VLPs cross over infection and/or disease with certain other HPV cancer types (ie, HPV 31, HPV 45 and HPV 52). Confirmed that it could provide protection. The data is described in the examples herein.

交差防御は、1つのHPV型を含有するワクチンによりもたらされる、異なるHPV型が引き起こす感染（偶発性（incident）または持続性）および／または疾患に対する防御とみなされうる。偶発性および持続性感染は、HarperらによるLancetの論文（Vol 364, issue 9447, November 2004, pages 1757-1765）に記載されているとおりに定義される。交差防御は、ワクチン有効性（V.E.）を考慮することにより評価されうる。ここで、V.E.は、ある所定の型に関する、プラシーボ群と比較した場合の、該ワクチンによる感染防御の改善率（％）である。 Cross protection can be considered as protection against infections (incident or persistent) and/or disease caused by different HPV types brought about by a vaccine containing one HPV type. Incidental and persistent infections are defined as described by Harper et al. in Lancet's article (Vol 364, issue 9447, November 2004, pages 1757-1765). Cross protection can be assessed by considering vaccine efficacy (V.E.). Here, V.E. is the improvement rate (%) of the protection against infection by the vaccine when compared with the placebo group for a given type.

したがって、HPV 16および18 VLPを含むHPVワクチンは、より低用量の別の（非HPV 16/18）癌型VLP（31、45または52）を使用して（さもなければHPV 16および18 VLPの非存在下で必要であろう用量と比較した場合）製剤化することができ、それでも尚、該ワクチンはその別の型に関する偶発性および／または持続性HPV感染に対して同じ防御応答を達成しうる。多価ワクチン計画における別の癌型VLPの用量の減少は、それらの別の型により引き起こされる防御に対する有意な影響を伴わないのであれば、抗原の合計量が例えば物理的な、化学的なまたは規制上の制約により制限されうる場合には好都合であろう。それは、所定の抗原量当たり、より多くのワクチン用量の製造を可能にし、全体的なワクチンのコストを潜在的に減少させうる。 Therefore, HPV vaccines containing HPV 16 and 18 VLPs can be used with lower doses of another (non-HPV 16/18) cancerous VLPs (31, 45 or 52) (otherwise than HPV 16 and 18 VLPs). (Compared to the dose that would be required in the absence), the vaccine still achieves the same protective response against incidental and/or persistent HPV infection for that other type. sell. A reduction in the dose of another cancerous VLP in a multivalent vaccine regimen would mean that the total amount of antigen would be, for example, physical, chemical or chemical, unless it was associated with a significant impact on the protection caused by those other types. It would be advantageous if it could be limited by regulatory constraints. It may allow the production of higher vaccine doses for a given antigen dose, potentially reducing the overall vaccine cost.

本明細書におけるVLPの用量は、好適には、重量で測定されるVLPの量である。 The dose of VLPs herein is preferably the amount of VLPs measured by weight.

すなわち、偶発性および／または持続性の感染および／または疾患に対して同じ防御応答を達成するために、HPV 16および／またはHPV 18 VLPと組合わせて使用する必要のある（HPV 16/HPV 18ではない）「別の癌型」VLPの用量を、そのような16および／または18型VLPの非存在下で要求されるレベルと比較して減少させることが可能である。 That is, it must be used in combination with HPV 16 and/or HPV 18 VLPs to achieve the same protective response against incidental and/or persistent infections and/or diseases (HPV 16/HPV 18 It is possible (but not) to reduce the dose of "another cancer type" VLP compared to the level required in the absence of such a 16 and/or 18 type VLP.

したがって、本発明は、HPV 16および18ならびに少なくとも1つの別のHPV癌型に由来するVLPを含んでなり、その別の癌型が、HPV 31、45および52型よりなる群から選ばれ、その少なくとも1つの別の癌型のVLPの用量がHPV 16または18のものより低い、免疫原性組成物に関する。 Accordingly, the invention comprises VLPs from HPV 16 and 18 and at least one other HPV cancer type, the other cancer type selected from the group consisting of HPV 31, 45 and 52, wherein An immunogenic composition, wherein the dose of VLPs of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.

もう1つの態様においては、本発明は、HPV 16および18ならびに少なくとも1つの別のHPV癌型に由来するVLPを含んでなる免疫原性組成物であって、その別の癌型が、HPV型31、45および52よりなる群から選ばれ、その別の癌型による偶発性および／または持続性HPV感染に対する同じ防御をもたらすために、その少なくとも1つの別の癌型のVLPの用量が、HPV16または18の非存在下でさもなければ必要となる用量より低い、免疫原性組成物に関する。 In another aspect, the invention is an immunogenic composition comprising VLPs from HPV 16 and 18 and at least one other HPV cancer type, wherein the other cancer type is HPV type. The dose of VLPs of at least one other cancer type selected from the group consisting of 31, 45 and 52 is HPV16 to provide the same protection against incident and/or persistent HPV infection by that other cancer type. Or in the absence of 18 lower than the dose otherwise required.

1つの態様においては、（HPV 16、18ではない）別の癌型VLPの用量は、その型による偶発性および／または持続性感染に対する防御をもたらすのに十分なものであり、本発明の1つの態様においては、少なくとも偶発性感染に対する防御をもたらすのに十分なものである。 In one embodiment, the dose of another cancerous VLP (not HPV 16, 18) is sufficient to confer protection against incident and/or persistent infection by that type, and In one aspect, it is at least sufficient to provide protection against accidental infection.

本発明の1つの態様においては、本発明の組成物はヒト対象における感染および／または疾患の防御に適している。 In one aspect of the invention, the compositions of the invention are suitable for protection against infection and/or disease in human subjects.

適当な用量は、例えば、本明細書中の実施例に記載されているようなヒトにおける治験により決定されうる。 Appropriate doses can be determined by clinical trials in humans, eg, as described in the Examples herein.

ある所与のHPV型、例えばHPV 16、18、31、45または52による偶発性および／または持続性感染に対する防御は、好適には、その型による感染に対するワクチン接種集団の50％における防御であり、本発明の1つの態様においては60％の防御であり、さらなる態様においては70％の防御であり、さらなる態様においては80％の防御であり、さらなる態様においては90％の防御であり、さらなる態様においては95％の防御であり、さらなる態様においては96％の防御であり、さらなる態様においては97％の防御であり、さらなる態様においては98％の防御であり、さらなる態様においては99％の防御であり、なおさらなる態様においては100％の防御である。 Protection against accidental and/or persistent infection by a given HPV type, eg HPV 16, 18, 31, 45 or 52, is preferably protection in 50% of the vaccinated population against infection by that type. , In one embodiment of the invention 60% protection, in a further embodiment 70% protection, in a further embodiment 80% protection, in a further embodiment 90% protection, In an embodiment, 95% protection, in a further embodiment 96% protection, in a further embodiment 97% protection, in a further embodiment 98% protection, in a further embodiment 99% protection. Protection, and in yet a further aspect 100% protection.

好適には、この防御は、少なくとも6ヶ月の期間にわたって、例えば少なくとも9ヶ月、少なくとも1年、少なくとも18ヶ月の期間にわたって、好適には、2年または2年を越える期間にわたって評価される。 Suitably, this protection is assessed over a period of at least 6 months, for example over a period of at least 9 months, at least 1 year, at least 18 months, preferably 2 years or more than 2 years.

本発明の1つの態様においては、該防御は、HPV 16および／またはHPV 18により引き起こされる感染または疾患に対して、また、1つの態様においては、HPV 16およびHPV 18の両方の感染および／または疾患に対して認められる。 In one embodiment of the invention, the protection is against infection or disease caused by HPV 16 and/or HPV 18, and in one embodiment both HPV 16 and HPV 18 infection and/or Approved for disease.

感染の予防は、例えば、PCR分析および／またはハイブリダイゼーション技術（例えば、参照により本明細書に組み入れるWO03014402およびWO9914377に記載されているもの）により、ワクチン接種された個体におけるHPV種を分析することにより、評価されうる。 Prevention of infection is by analysis of HPV species in the vaccinated individual, for example, by PCR analysis and/or hybridization techniques such as those described in WO03014402 and WO9914377, which are incorporated herein by reference. , Can be evaluated.

本発明の免疫原性組成物がHPV 16 VLPおよびHPV 18 VLPの両方を含む場合には、非HPV 16/18癌型VLPは31型または45型または52型またはそれらの組合わせである。1つの態様においては、本発明の免疫原性組成物は、HPV 16、18、31および45に由来するVLPを含む。1つの態様においては、本発明の免疫原性組成物は、HPV 16、18、31および52に由来するVLPを含む。1つの態様においては、本発明の免疫原性組成物は、HPV 16、18、45および52に由来するVLPを含む。1つの態様においては、本発明の免疫原性組成物は、HPV 16、18、31、52および45に由来するVLPを含む。2以上の別の癌型VLP（例えば、31および45、31および52、45および52）が存在する場合には、これらの別の癌型の少なくとも1つはHPV 16またはHPV 18のものより低い用量で存在する。 When the immunogenic composition of the invention comprises both HPV 16 VLPs and HPV 18 VLPs, the non-HPV 16/18 cancerous VLPs are types 31 or 45 or 52 or a combination thereof. In one embodiment, the immunogenic composition of the invention comprises VLPs derived from HPV 16, 18, 31 and 45. In one embodiment, the immunogenic composition of the invention comprises VLPs derived from HPV 16, 18, 31 and 52. In one embodiment, the immunogenic composition of the invention comprises VLPs from HPV 16, 18, 45 and 52. In one embodiment, the immunogenic composition of the invention comprises VLPs derived from HPV 16, 18, 31, 52 and 45. If two or more different cancer type VLPs (eg, 31 and 45, 31 and 52, 45 and 52) are present, at least one of these other cancer types is lower than that of HPV 16 or HPV 18. Present in dose.

1つの態様においては、HPV 31の用量はHPV 16のものより低い。 In one embodiment, the dose of HPV 31 is lower than that of HPV 16.

1つの態様においては、HPV 52の用量はHPV 16のものより低い。 In one embodiment, the dose of HPV 52 is lower than that of HPV 16.

1つの態様においては、HPV 45の用量はHPV 18のものより低い。 In one embodiment, the dose of HPV 45 is lower than that of HPV 18.

好適には、前記の免疫原性組成物は、HPV 16、HPV 18、および前記の群内に存在する1以上の別の（31、45または52の）HPV型により引き起こされる偶発性感染および／または持続性感染および／または疾患（例えば、偶発性感染）に対する防御をもたらす。 Suitably, said immunogenic composition comprises an incidental infection caused by HPV 16, HPV 18, and one or more (31, 45 or 52) HPV types present within said group and/or Alternatively, it provides protection against persistent infections and/or diseases (eg, incidental infections).

本発明の免疫原性組成物がHPV 16 VLPは含むがHPV 18 VLPは含まない場合には、好適には、非HPV 16/18 VLP癌型は31型および／または52型である。 When the immunogenic composition of the invention comprises HPV 16 VLPs but not HPV 18 VLPs, preferably the non-HPV 16/18 VLP cancer types are types 31 and/or 52.

本発明の免疫原性組成物がHPV 18 VLPは含むがHPV 16 VLPは含まない場合には、好適には、非HPV 16/18 VLP癌型は45型である。 When the immunogenic composition of the invention comprises HPV 18 VLPs but not HPV 16 VLPs, preferably the non-HPV 16/18 VLP cancer type is type 45.

本発明の1つの態様においては、該組成物は、HPV 16 VLPおよびHPV 18 VLPを、HPV 31 VLPおよびHPV 45 VLPの一方または両方と共に含む。 In one embodiment of the invention, the composition comprises HPV 16 VLPs and HPV 18 VLPs with one or both HPV 31 VLPs and HPV 45 VLPs.

本発明の1つの態様においては、該組成物は、少なくともHPV 16 VLPを、HPV 31 VLPと共に含む。 In one aspect of the invention, the composition comprises at least HPV 16 VLPs with HPV 31 VLPs.

本発明の組成物は、低い用量のVLPに加えて、任意の適当な用量の別のHPV VLPを含みうる。例えば、本発明の組成物は、追加的な「高リスク」癌型、例えば、HPV 33、35、39、51、56、58、59、66または68のうち1以上を含みうる。 The compositions of the present invention may include any suitable dose of another HPV VLP in addition to the low dose VLP. For example, the compositions of the present invention may include additional "high risk" cancer types, such as one or more of HPV 33, 35, 39, 51, 56, 58, 59, 66 or 68.

1つの態様においては、該組成物は、追加的ないわゆる「性器疣贅」型、例えばHPV 6および／または11、あるいはいわゆる「皮膚」型、例えばHPV 5および／または8を含みうる。1つの態様においては、該追加的VLPは、HPV 16および／またはHPV 18と同じ用量またはそれらより高い用量で存在する。 In one embodiment, the composition may comprise an additional so-called “genital wart” type, eg HPV 6 and/or 11, or a so-called “skin” type, eg HPV 5 and/or 8. In one embodiment, the additional VLPs are present at the same or higher doses as HPV 16 and/or HPV 18.

本発明の1つの態様においては、該組成物は、HPV 39および／またはHPV 51 VLPを含み、これらのうち少なくとも1つの用量はHPV 16および／またはHPV 18より低い。 In one embodiment of the invention, the composition comprises HPV 39 and/or HPV 51 VLPs, the dose of at least one of which is lower than HPV 16 and/or HPV 18.

1つの態様においては、任意の追加的なVLPの量は、該追加的型に対して感染または疾患に対して或る程度の防御が得られるように選択される。 In one embodiment, the amount of any additional VLP is selected to provide some protection against infection or disease against the additional type.

以下に個々に示す本発明の特定の組成物は、以下の用量のVLPを含む。 Specific compositions of the invention, shown individually below, comprise the following doses of VLPs.

好適には、本発明の組成物中のHPV VLP間に、有意なまたは生物学的に関連した干渉は存在せず、本発明の混合（combined）VLPワクチンは、該ワクチンにおいて代表される各HPV VLP型による感染に対して有効な防御をもたらしうる。好適には、該組合わせに含まれる所定のVLP型に対する免疫応答は、個別に測定された場合のその同じVLP型の免疫応答の少なくとも50％であり、好ましくは100％または実質的に100％である。HPV 16およびHPV 18 VLP成分に対する応答の場合、本発明の混合ワクチンは、好ましくは、混合HPV 16/HPV 18 VLPワクチンによりもたらされる免疫応答の少なくとも50％である免疫応答を刺激する。好適には、本発明のワクチンにより生成される免疫応答は、各VLP型の防御効果が尚も見られるレベルのものである。該免疫応答は、好適には、例えば、ELISAのような標準的な技術を用いる抗体応答により、および本明細書に記載の臨床試験により測定されうる。 Suitably, there is no significant or biologically relevant interference between the HPV VLPs in the composition of the invention and the combined VLP vaccine of the invention comprises each HPV represented by the vaccine. It can provide effective protection against infection by VLP types. Suitably, the immune response to a given VLP type included in the combination is at least 50%, preferably 100% or substantially 100%, of the immune response of that same VLP type when measured individually. Is. In the case of response to HPV 16 and HPV 18 VLP components, the combined vaccine of the invention preferably stimulates an immune response that is at least 50% of the immune response produced by the combined HPV 16/HPV 18 VLP vaccine. Suitably, the immune response generated by the vaccine of the present invention is at a level at which the protective effect of each VLP type is still seen. The immune response may suitably be measured, for example, by an antibody response using standard techniques such as ELISA, and by the clinical tests described herein.

1つの態様においては、本発明の組成物は熱ショックタンパク質またはその断片を含まない。 In one embodiment, the composition of the invention does not include heat shock protein or fragments thereof.

1つの態様においては、本発明の組成物は、HPV L2タンパク質またはペプチドを含まない。もう1つの態様においては、本発明の組成物はHPV L2タンパク質またはペプチドを含。 In one embodiment, the composition of the invention does not include HPV L2 protein or peptide. In another embodiment, the composition of the invention comprises a HPV L2 protein or peptide.

HPV VLPおよびVLPの製造方法は当技術分野でよく知られている。VLPは、典型的には、該ウイルスのL1および場合によってはL2構造タンパク質から構築される。例えば、WO9420137、WO9629413およびWO9405792を参照されたい。本発明においては、L1またはL1+L2 VLPのような任意の適当なHPV VLPが使用されうる。 HPV VLPs and methods of making VLPs are well known in the art. VLPs are typically constructed from the L1 and optionally L2 structural proteins of the virus. See, for example, WO9420137, WO9629413 and WO9405792. Any suitable HPV VLP may be used in the present invention, such as L1 or L1+L2 VLPs.

VLPの形成は、標準的な方法、例えば電子顕微鏡検査および動的レーザー光散乱により評価されうる。 VLP formation can be assessed by standard methods, such as electron microscopy and dynamic laser light scattering.

本発明の1つの態様においては、VLPは、L1のみのVLPである。 In one aspect of the invention, the VLP is an L1-only VLP.

該VLPは完全長L1タンパク質を含みうる。 The VLP may include the full length L1 protein.

本発明の1つの態様においては、VLPを形成させるために使用するL1タンパク質は、末端切断型（トランケート化）L1タンパク質である。末端切断型HPV L1タンパク質は、例えば、参照により本明細書に組み入れるUS6361778に開示されている。1つの態様においては、該末端切断は核局在化シグナルを除去する。さらなる態様においては、該末端切断はC末端切断である。さらなる態様においては、C末端切断は50個未満のアミノ酸、好適には40個未満のアミノ酸を除去する。好適には、HPV 16 L1配列は、例えば以下の配列内に示す第2メチオニンコドンから、あるいは別のHPV型における同様の位置から始まる。VLPがHPV 16 VLPである場合には、1つの態様においては、C末端切断はHPV 16 L1配列から34個のアミノ酸を除去する。VLPがHPV 18 VLPである場合には、1つの態様においては、C末端切断はHPV 18 L1配列から35個のアミノ酸を除去する。 In one embodiment of the invention, the L1 protein used to form VLPs is a truncated (truncated) L1 protein. Truncated HPV L1 proteins are disclosed, for example, in US6361778, which is incorporated herein by reference. In one embodiment, the truncation removes a nuclear localization signal. In a further embodiment, the truncation is a C-terminal truncation. In a further embodiment, the C-terminal truncation removes less than 50 amino acids, preferably less than 40 amino acids. Suitably, the HPV 16 L1 sequence begins, for example, with the second methionine codon shown in the sequence below or from a similar position in another HPV type. When the VLP is an HPV 16 VLP, in one embodiment the C-terminal truncation removes 34 amino acids from the HPV 16 L1 sequence. When the VLP is an HPV 18 VLP, in one embodiment the C-terminal truncation removes 35 amino acids from the HPV 18 L1 sequence.

1つの態様においては、HPV 16配列は以下の配列である。
MSLWLPSEATVYLPPVPVSKVVSTDEYVARTNIYYHAGTSRLLAVGHPYFPIKKPNNNKI 60
LVPKVSGLQYRVFRIHLPDPNKFGFPDTSFYNPDTQRLVWACVGVEVGRGQPLGVGISGH 120
PLLNKLDDTENASAYAANAGVDNRECISMDYKQTQLCLIGCKPPIGEHWGKGSPCTNVAV 180
NPGDCPPLELINTVIQDGDMVDTGFGAMDFTTLQANKSEVPLDICTSICKYPDYIKMVSE 240
PYGDSLFFYLRREQMFVRHLFNRAGAVGENVPDDLYIKGSGSTANLASSNYFPTPSGSMV 300
TSDAQIFNKPYWLQRAQGHNNGICWGNQLFVTVVDTTRSTNMSLCAAISTSETTYKNTNF 360
KEYLRHGEEYDLQFIFQLCKITLTADVMTYIHSMNSTILEDWNFGLQPPPGGTLEDTYRF 420
VTSQAIACQKHTPPAPKEDPLKKYTFWEVNLKEKFSADLDQFPLGRKFLLQ 471 In one embodiment, the HPV 16 sequence is the following sequence.
MSLWLPSEATVYLPPVPVSKVVSTDEYVARTNIYYHAGTSRLLAVGHPYFPIKKPNNNKI 60
LVPKVSGLQYRVFRIHLPDPNKFGFPDTSFYNPDTQRLVWACVGVEVGRGQPLGVGISGH 120
PLLNKLDDTENASAYAANAGVDNRECISMDYKQTQLCLIGCKPPIGEHWGKGSPCTNVAV 180
NPGDCPPLELINTVIQDGDMVDTGFGAMDFTTLQANKSEVPLDICTSICKYPDYIKMVSE 240
PYGDSLFFYLRREQMFVRHLFNRAGAVGENVPDDLYIKGSGSTANLASSNYFPTPSGSMV 300
TSDAQIFNKPYWLQRAQGHNNGICWGNQLFVTVVDTTRSTNMSLCAAISTSETTYKNTNF 360
KEYLRHGEEYDLQFIFQLCKITLTADVMTYIHSMNSTILEDWNFGLQPPPGGTLEDTYRF 420
VTSQAIACQKHTPPAPKEDPLKKYTFWEVNLKEKFSADLDQFPLGRKFLLQ 471

該HPV 16配列は、例えば、好適には末端切断された、WO9405792またはUS6649167に開示されているものでありうる。適当な末端切断体は、配列比較により評価した場合に、前記に示すものと同等の位置で末端切断されている。 The HPV 16 sequence may be for example that disclosed in WO9405792 or US6649167, preferably truncated. Suitable truncations are truncated at positions equivalent to those shown above as assessed by sequence comparison.

1つの態様においては、HPV 18配列は以下の配列である。
MALWRPSDNTVYLPPPSVARVVNTDDYVTRTSIFYHAGSSRLLTVGNPYFRVPAGGGNKQ 60
DIPKVSAYQYRVFRVQLPDPNKFGLPDNSIYNPETQRLVWACVGVEIGRGQPLGVGLSGH 120
PFYNKLDDTESSHAATSNVSEDVRDNVSVDYKQTQLCILGCAPAIGEHWAKGTACKSRPL 180
SQGDCPPLELKNTVLEDGDMVDTGYGAMDFSTLQDTKCEVPLDICQSICKYPDYLQMSAD 240
PYGDSMFFCLRREQLFARHFWNRAGTMGDTVPPSLYIKGTGMRASPGSCVYSPSPSGSIV 300
TSDSQLFNKPYWLHKAQGHNNGVCWHNQLFVTVVDTTRSTNLTICASTQSPVPGQYDATK 360
FKQYSRHVEEYDLQFIFQLCTITLTADVMSYIHSMNSSILEDWNFGVPPPPTTSLVDTYR 420
FVQSVAITCQKDAAPAENKDPYDKLKFWNVDLKEKFSLDLDQYPLGRKFLVQ 472 In one embodiment, the HPV 18 sequence is the following sequence.
MALWRPSDNTVYLPPPSVARVVNTDDYVTRTSIFYHAGSSRLLTVGNPYFRVPAGGGNKQ 60
DIPKVSAYQYRVFRVQLPDPNKFGLPDNSIYNPETQRLVWACVGVEIGRGQPLGVGLSGH 120
PFYNKLDDTESSHAATSNVSEDVRDNVSVDYKQTQLCILGCAPAIGEHWAKGTACKSRPL 180
SQGDCPPLELKNTVLEDGDMVDTGYGAMDFSTLQDTKCEVPLDICQSICKYPDYLQMSAD 240
PYGDSMFFCLRREQLFARHFWNRAGTMGDTVPPSLYIKGTGMRASPGSCVYSPSPSGSIV 300
TSDSQLFNKPYWLHKAQGHNNGVCWHNQLFVTVVDTTRSTNLTICASTQSPVPGQYDATK 360
FKQYSRHVEEYDLQFIFQLCTITLTADVMSYIHSMNSSILEDWNFGVPPPPTTSLVDTYR 420
FVQSVAITCQKDAAPAENKDPYDKLKFWNVDLKEKFSLDLDQYPLGRKFLVQ 472

代替的なHPV 18配列はWO9629413に開示されており、好適には末端切断されうる。適当な末端切断体は、配列比較により評価した場合に、前記に示すものと同等の位置で末端切断されている。 An alternative HPV 18 sequence is disclosed in WO9629413 and can be suitably truncated. Suitable truncations are truncated at positions equivalent to those shown above as assessed by sequence comparison.

他のHPV 16およびHPV 18配列は当技術分野でよく知られており、本発明での使用に好適でありうる。 Other HPV 16 and HPV 18 sequences are well known in the art and may be suitable for use in the present invention.

また、HPV 31、HPV 45およびHPV 52の適当な末端切断体は、好適には、配列アライメントにより評価した場合に前記のものと同等のL1タンパク質C末端部分を除去することにより得られうる。 In addition, suitable truncations of HPV 31, HPV 45 and HPV 52 can be obtained, preferably by removing the C-terminal part of the L1 protein, which is equivalent to that described above when assessed by sequence alignment.

末端切断型L1タンパク質は、例えば、参照により本明細書に組み入れるWO9611272およびUS6066324に開示されている。 Truncated L1 proteins are disclosed, for example, in WO9611272 and US6066324, which are incorporated herein by reference.

1つの態様においては、末端切断型L1タンパク質は、好適には、（必要に応じて、適切にアジュバント化されている場合に）免疫応答を生成させうる機能性L1タンパク質誘導体であり、該免疫応答は、完全長L1タンパク質および／または該L1タンパク質が由来するHPV型よりなるVLPを認識しうる。 In one embodiment, the truncated L1 protein is suitably a functional L1 protein derivative that is capable of generating an immune response (when optionally adjuvanted appropriately), wherein the immune response is Can recognize VLPs consisting of full-length L1 protein and/or HPV type from which the L1 protein is derived.

本発明のVLPは、完全長または末端切断型HPV L1タンパク質の突然変異体（例えば、欠失、置換または挿入突然変異体）を含む別の型の機能性タンパク質誘導体をも含みうる。また、該L1タンパク質または誘導体は、融合タンパク質、例えばL1タンパク質とL2または初期タンパク質との融合体でありうる。該L1タンパク質または機能性タンパク質誘導体はVLPを形成しうる。VLPの形成は、標準的な技術、例えば電子顕微鏡検査および動的レーザー光散乱により評価されうる。 VLPs of the invention may also include other types of functional protein derivatives, including mutants of full-length or truncated HPV L1 protein (eg, deletion, substitution or insertion mutants). Also, the L1 protein or derivative may be a fusion protein, for example a fusion of the L1 protein with L2 or an early protein. The L1 protein or functional protein derivative can form a VLP. VLP formation can be assessed by standard techniques, such as electron microscopy and dynamic laser light scattering.

VLPは、任意の適当な細胞基質、例えば酵母細胞または昆虫細胞、例えばバキュロウイルス細胞において製造うるが、VLPの製造技術は当技術分野でよく知られている（例えば、WO9913056およびUS6245568ならびにそれらに記載の参考文献など。それらの全内容を参照により本明細書に組み入れることとする）。 VLPs can be produced in any suitable cell substrate, such as yeast cells or insect cells, such as baculovirus cells, although the techniques for producing VLPs are well known in the art (eg, WO9913056 and US6245568 and described therein). , Etc., the entire contents of which are incorporated herein by reference).

1つの態様においては、VLPは分解（disassembly）および再構築（reassembly）技術により製造され、これは、より安定および／または均一なパピローマウイルスVLPを与えうる。例えば、McCarthyら, 1998 "Quantitative Disassembly and Reassembly of Human Papillomavirus Type 11 Viruslike Particles in Vitro" J. Virology 72(1):33-41は、VLPの均一調製物を得るための、昆虫細胞から精製された組換えL1 HPV 11 VLPの分解および再構築を記載している。また、WO9913056およびUS6245568は、HPV VLPを製造するための分解／再集合方法を記載している。 In one embodiment, VLPs are produced by disassembly and reassembly techniques, which may result in more stable and/or homogeneous papillomavirus VLPs. For example, McCarthy et al., 1998 "Quantitative Disassembly and Reassembly of Human Papillomavirus Type 11 Viruslike Particles in Vitro" J. Virology 72(1):33-41 was purified from insect cells to obtain a uniform preparation of VLPs. Degradation and reassembly of recombinant L1 HPV 11 VLPs is described. WO9913056 and US6245568 also describe a decomposition/reassembly method for producing HPV VLPs.

1つの態様においては、本発明のHPV VLPは、WO9913056またはUS6245568に記載されているようにして製造される。 In one embodiment, the HPV VLPs of the invention are made as described in WO9913056 or US6245568.

本発明のVLPは、アジュバントまたは免疫刺激物質、例えば、限定するものではないが、任意の起源に由来する無毒化リピドAおよびリピドAの非毒性誘導体、サポニン、およびTH1型応答を刺激しうる他の試薬と組合わされうる。 The VLPs of the present invention may stimulate adjuvants or immunostimulants such as, but not limited to, detoxified lipid A and non-toxic derivatives of lipid A from any source, saponins, and other TH1-type responses. Can be combined with other reagents.

腸内細菌リポ多糖（LPS）は免疫系の強力な刺激物質であることが古くから公知であるが、アジュバントにおける腸内細菌リポ多糖（LPS）の使用はその毒性作用により削減されてきている。コア炭水化物基とホスファートとを還元末端グルコサミンから除去することにより産生されるLPSの非毒性誘導体であるモノホスホリルリピドA（MPL）が、Ribiら（1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., NY, p407-419）により記載されており、以下の構造を有する。

Although it has long been known that enterobacterial lipopolysaccharide (LPS) is a powerful stimulator of the immune system, the use of enterobacterial lipopolysaccharide (LPS) in adjuvants has been reduced by its toxic effects. Monophosphoryl lipid A (MPL), a non-toxic derivative of LPS produced by removing core carbohydrate groups and phosphates from reducing-terminal glucosamine, is described by Ribi et al. (1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp. ., NY, p407-419) and has the following structure:

MPLの更なる無毒化形態が、該二糖バックボーンの3位からアシル鎖を除去することにより得られ、3-O-脱アシル化モノホスホリルリピドA（3D-MPL）と称される。それは、GB 2122204Bに教示されている方法により精製し調製することが可能であり、その参考文献はまた、ジホスホリルリピドAおよびその3-O-脱アシル化変異体の製造を開示している。 A further detoxified form of MPL was obtained by removing the acyl chain from the 3-position of the disaccharide backbone and is termed 3-O-deacylated monophosphoryl lipid A (3D-MPL). It can be purified and prepared by the method taught in GB 2122204B, which reference also discloses the preparation of diphosphoryl lipid A and its 3-O-deacylated variants.

1つの態様においては、3D-MPLは、直径0.2μm未満の小さな粒径を有するエマルションの形態であり、その製造方法はWO 94/21292に開示されている。モノホスホリルリピドAと界面活性剤とを含む水性製剤がWO 98/43670A2に記載されている。 In one embodiment the 3D-MPL is in the form of an emulsion with a small particle size of less than 0.2 μm in diameter, the process for its preparation is disclosed in WO 94/21292. Aqueous formulations containing monophosphoryl lipid A and a surfactant are described in WO 98/43670A2.

本発明の組成物に製剤化される細菌リポ多糖由来アジュバントは、細菌源から精製し加工してもよく、あるいはそれは合成物であってもよい。例えば、精製されたモノホスホリルリピドAはRibiら 1986（前掲）に記載されており、Salmonella sp.由来の3-O-脱アシル化モノホスホリルまたはジホスホリルリピドAはGB 2220211およびUS 4912094に記載されている。他の精製リポ多糖および合成リポ多糖が既に記載されている（Hilgersら, 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79(4):392-6; Hilgersら, 1987, Immunology, 60(1):141-6; およびEP 0 549 074 B1）。1つの態様においては、該細菌リポ多糖アジュバントは3D-MPLである。 The bacterial lipopolysaccharide-derived adjuvant formulated in the composition of the present invention may be purified and processed from a bacterial source, or it may be synthetic. For example, purified monophosphoryl lipid A is described in Ribi et al. 1986 (supra), 3-O-deacylated monophosphoryl or diphosphoryl lipid A from Salmonella sp. is described in GB 2220211 and US 4912094. ing. Other purified and synthetic lipopolysaccharides have been previously described (Hilgers et al., 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79(4):392-6; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1). :141-6; and EP 0 549 074 B1). In one embodiment, the bacterial lipopolysaccharide adjuvant is 3D-MPL.

したがって、本発明で使用しうるLPS誘導体は、LPSまたはMPLまたは3D-MPLと構造において類似した免疫刺激物質である。本発明のもう1つの態様においては、該LPS誘導体は、MPLの前記構造の副次的部分であるアシル化単糖でありうる。 Thus, LPS derivatives that can be used in the present invention are immunostimulators that are structurally similar to LPS or MPL or 3D-MPL. In another aspect of the invention, the LPS derivative may be an acylated monosaccharide that is a sub-portion of the structure of MPL.

サポニンは、Lacaille-Dubois, MおよびWagner H.（1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386）に教示されている。サポニンは、植物界および海洋動物界に広く分布するステロイドまたはトリテルペン配糖体である。サポニンは、振とうされると発泡する水中コロイド溶液を形成する点およびコレステロールを沈殿させる点で注目される。サポニンが細胞膜付近に存在する場合には、それは、該膜を破裂させる該膜内の孔様構造体を形成する。赤血球の溶血がこの現象の一例であり、これは、すべてという訳ではないが或る種のサポニンの特性の1つである。 Saponins are taught in Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (1996. A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol 2 pp 363-386). Saponins are steroids or triterpene glycosides that are widely distributed in the plant kingdom and the marine animal kingdom. Saponins are noted for forming colloidal solutions in water that foam when shaken and for precipitating cholesterol. When saponin is present near the cell membrane, it forms a pore-like structure within the membrane that ruptures the membrane. Hemolysis of red blood cells is an example of this phenomenon, which is one but not all of the properties of some saponins.

サポニンは全身投与用のワクチン中のアジュバントとして公知である。個々のサポニンのアジュバントおよび溶血活性が、当技術分野において詳細に研究されている（Lacaille-DuboisおよびWagner, 前掲）。例えば、Quil A（クウィルA）（南米産樹木Quillaja Saponaria Molinaの樹皮に由来する）およびその画分が、US 5,057,540および「ワクチンアジュバントとしてのサポニン（Saponins as vaccine adjuvants）」, Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12(1-2);1-55およびEP 0 362 279 B1に記載されている。Quil Aの画分を含む免疫刺激性複合体（Immune Stimulating Complexes）（ISCOM）と称される微粒子構造体は溶血性であり、ワクチンの製造において使用されている（Morein, B., EP 0 109 942 B1; WO 96/11711; WO 96/33739）。溶血性サポニンQS21およびQS17（Quil AのHPLC精製画分）は強力な全身性アジュバントとして記載されており、それらの製造方法は米国特許第5,057,540号およびEP 0 362 279 B1に開示されている。全身ワクチン接種研究において使用されている他のサポニンには、ギプソフィラ（Gypsophila）およびサポナリア（Saponaria）のような他の植物種に由来するものが含まれる（Bomfordら, Vaccine, 10(9):572-577, 1992）。 Saponin is known as an adjuvant in vaccines for systemic administration. The adjuvant and hemolytic activity of individual saponins has been extensively studied in the art (Lacaille-Dubois and Wagner, supra). For example, Quil A (derived from the bark of the South American tree Quillaja Saponaria Molina) and its fractions are described in US 5,057,540 and “Saponins as vaccine adjuvants”, Kensil, CR, Crit Rev. Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12(1-2); 1-55 and EP 0 362 279 B1. A particulate structure called the Immune Stimulating Complexes (ISCOM) containing a fraction of Quil A is hemolytic and has been used in the manufacture of vaccines (Morein, B., EP 0 109). 942 B1; WO 96/11711; WO 96/33739). The hemolytic saponins QS21 and QS17 (HPLC purified fraction of Quil A) have been described as potent systemic adjuvants and their method of preparation is disclosed in US Pat. No. 5,057,540 and EP 0 362 279 B1. Other saponins used in systemic vaccination studies include those derived from other plant species such as Gypsophila and Saponaria (Bomford et al., Vaccine, 10(9):572. -577, 1992).

増強された系は、非毒性リピドA誘導体とサポニン誘導体との組合わせ、特に、QS21と3D-MPLとの組合わせ（WO 94/00153に開示されているもの）、またはQS21がコレステロールで抑制された、より低い反応性の組成物（WO 96/33739に開示されているもの）を含む。 The enhanced system includes a combination of non-toxic Lipid A and saponin derivatives, particularly QS21 and 3D-MPL (as disclosed in WO 94/00153), or QS21 inhibited by cholesterol. And lower reactivity compositions (as disclosed in WO 96/33739).

1つの態様においては、アジュバントは、WO 95/17210に記載されている、水中油エマルション中にQS21と3D-MPLとを含む特に強力なアジュバント製剤である。 In one embodiment, the adjuvant is a particularly potent adjuvant formulation containing QS21 and 3D-MPL in an oil-in-water emulsion as described in WO 95/17210.

したがって、本発明の1つの実施形態においては、無毒化リピドAまたはリピドA非毒性誘導体でアジュバント化された、より好ましくは、モノホスホリルリピドAまたはその誘導体でアジュバント化された組成物を提供する。 Accordingly, in one embodiment of the invention there is provided a composition adjuvanted with a detoxified lipid A or lipid A non-toxic derivative, more preferably with a monophosphoryl lipid A or derivative thereof.

1つの態様においては、該組成物は更に、サポニン、より好ましくはQS21を含む。 In one embodiment, the composition further comprises a saponin, more preferably QS21.

1つの態様においては、アジュバント製剤は更に、水中油エマルションを含む。本発明はまた、本発明のVLPを製薬上許容される賦形剤、例えば3D-MPLと混合することを含む、ワクチン製剤の製造方法を提供する。 In one embodiment, the adjuvant formulation further comprises an oil-in-water emulsion. The present invention also provides a method for producing a vaccine formulation, which comprises mixing the VLP of the present invention with a pharmaceutically acceptable excipient such as 3D-MPL.

本発明のアジュバント化組成物中に好ましくは存在する追加的成分としては、本明細書に記載するような非イオン性界面活性剤、例えばオクトキシノールおよびポリオキシエチレンエステル、特にt-オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（Triton X-100）およびポリオキシエチレンソルビタンモノオレアート（Tween 80）；本明細書に記載するような胆汁酸塩またはコール酸誘導体、特にデオキシコール酸ナトリウムまたはタウロデオキシコール酸ナトリウムが包含される。1つの態様においては、該アジュバント製剤は、適当なワクチンを得るためにHPV VLPと組合わされうる3D-MPL、Triton X-100、Tween 80およびデオキシコール酸ナトリウムを含む。 Additional components preferably present in the adjuvanted compositions of the present invention include nonionic surfactants such as those described herein, such as octoxynol and polyoxyethylene esters, especially t-octylphenoxypoly. Ethoxyethanol (Triton X-100) and polyoxyethylene sorbitan monooleate (Tween 80); including bile salts or cholic acid derivatives as described herein, especially sodium deoxycholate or sodium taurodeoxycholate To be done. In one embodiment, the adjuvant formulation comprises 3D-MPL, Triton X-100, Tween 80 and sodium deoxycholate which can be combined with HPV VLPs to obtain a suitable vaccine.

本発明の1つの実施形態においては、該組成物は、コレステロール、サポニンおよびLPS誘導体を含む小胞アジュバント製剤を含む。これに関しては、該アジュバント製剤は、ジオレオイルホスファチジルコリンを好適には含む脂質二重層を有する、コレステロールを含む単層小胞を含むことが可能であり、ここで、該サポニンおよびLPS誘導体は該脂質二重層と会合しているかまたはその中に包埋されている。より好ましくは、これらのアジュバント製剤は、サポニンとしてのQS21と、LPS誘導体としての3D-MPLとを含み、ここで、QS21:コレステロールの比は1:1〜1:100重量/重量であり、最も好ましくは1:5重量/重量である。そのようなアジュバント製剤はEP 0 822 831 B（その開示を参照により本明細書に組み入れることとする）に記載されている。 In one embodiment of the invention, the composition comprises a vesicle adjuvant formulation comprising cholesterol, saponin and LPS derivative. In this regard, the adjuvant formulation can include cholesterol-containing unilamellar vesicles having a lipid bilayer, which preferably comprises dioleoylphosphatidylcholine, wherein the saponin and LPS derivative are the lipids. Associated with or embedded in the bilayer. More preferably, these adjuvant formulations comprise QS21 as saponin and 3D-MPL as LPS derivative, wherein the ratio of QS21:cholesterol is 1:1 to 1:100 w/w, most It is preferably 1:5 weight/weight. Such adjuvant formulations are described in EP 0 822 831 B, the disclosure of which is hereby incorporated by reference.

1つの態様においては、本発明の組成物はアルミニウムと共に使用され、好適には、アルミニウムアジュバント上に吸着または部分的に吸着される。好適には、該アジュバントはアルミニウム塩であり、これは1つの態様においては3D MPLと組合わされる（例えば、リン酸アルミニウムと3D MPL）。もう1つの態様においては、該アジュバントは、所望により3D MPLと組合わされていてもよい水酸化アルミニウムである。 In one embodiment, the compositions of the invention are used with aluminum, preferably adsorbed or partially adsorbed on an aluminum adjuvant. Suitably, the adjuvant is an aluminum salt, which in one embodiment is combined with 3D MPL (eg aluminum phosphate and 3D MPL). In another embodiment, the adjuvant is aluminum hydroxide, optionally in combination with 3D MPL.

もう1つの態様においては、該組成物は、VLPと、アルミニウム塩またはアルミニウム塩＋3D MPLとの組合わせである。本発明の1つの態様においては、該アルミニウム塩は水酸化アルミニウムである。 In another embodiment, the composition is a combination of VLPs and aluminum salts or aluminum salts plus 3D MPL. In one aspect of the invention, the aluminum salt is aluminum hydroxide.

また、本発明の組成物は、安定剤としてアルミニウムまたはアルミニウム化合物を含みうる。 In addition, the composition of the present invention may include aluminum or an aluminum compound as a stabilizer.

本発明は、全般的には、VLPの組合わせに関する。しかし、VLPの本質的成分はL1タンパク質であると理解される。L1タンパク質は会合して五量体（カプソメア）を形成し、ついでこれがモザイク状に合わさって（集合）してVLPを形成する。したがって、本発明はまた、本明細書に記載のVLPの代わりにL1タンパク質またはL1タンパク質含有カプソマーを含む、前記の免疫原性組成物に関する。好適には、L1タンパク質は防御免疫応答を刺激しうる。好適には、L1タンパク質はコンホメーション的に正しいものである。 The present invention relates generally to VLP combinations. However, it is understood that the essential component of VLPs is the L1 protein. The L1 proteins associate to form pentamers (capsomeres), which then combine (assemble) in a mosaic to form VLPs. Therefore, the invention also relates to an immunogenic composition as described above, which comprises an L1 protein or an L1 protein-containing capsomer in place of the VLPs described herein. Suitably, the L1 protein may stimulate a protective immune response. Suitably, the L1 protein is conformationally correct.

したがって、疑義を避けるために、本発明は、前記の機能性L1誘導体、例えばL1の末端切断、欠失、置換または挿入突然変異体および融合タンパク質（好適には、HPVウイルスを認識しうる免疫応答を惹起しうるもの）の使用に関する。そのようなタンパク質を含むカプソメアも本発明に含まれる。免疫原性物質としてのカプソメアは、例えばWO0204007に記載されている。また、WO9901557は、HPVカプソメア含有組成物を開示している。L1タンパク質、誘導体およびカプソメアは、前記でVLPに関して記載されているのと同様にして使用されうる。 Therefore, for the avoidance of doubt, the present invention provides a functional L1 derivative as described above, such as truncation, deletion, substitution or insertion mutants of L1 and fusion proteins (preferably an immune response capable of recognizing HPV virus). Which may cause). Capsomeres containing such proteins are also included in the present invention. Capsomeres as immunogenic substances are described, for example, in WO0204007. WO9901557 also discloses HPV capsomer-containing compositions. L1 proteins, derivatives and capsomeres can be used in the same manner as described for VLPs above.

したがって、本発明は、HPV 16および18ならびに少なくとも1つの別のHPV癌型に由来するL1タンパク質またはその機能性誘導体を含んでなる免疫原性組成物に関すると理解されうる。ここで、その別の癌型は、HPV 31、45および52型よりなる群から選ばれ、その少なくとも1つの別の癌型のL1タンパク質またはその誘導体の用量はHPV 16または18のものより低い。
したがって、本発明は、HPV 16および18ならびに少なくとも1つの別のHPV癌型に由来するHPVカプソメアを含んでなる免疫原性組成物に関すると理解されうる。ここで、その別の癌型は、HPV 31、45および52型よりなる群から選ばれ、その少なくとも1つの別の癌型のカプソメアの用量はHPV 16または18のものより低い。
1つの態様においては、本発明は、製薬上許容される賦形剤と組合わされた前記の免疫原性組成物に関する。適当な賦形剤は当業者によく知られており、それらには、例えばバッファーおよび水が包含される。 Therefore, the present invention can be understood as relating to an immunogenic composition comprising HPV 16 and 18 and an L1 protein from at least one other HPV cancer type or a functional derivative thereof. Here, the other cancer type is selected from the group consisting of HPV types 31, 45 and 52, and the dose of the L1 protein or derivative thereof of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.
Thus, the present invention may be understood to relate to immunogenic compositions comprising HPV 16 and 18 and HPV capsomeres from at least one other HPV cancer type. Here, the other cancer type is selected from the group consisting of HPV types 31, 45 and 52, and the dose of capsomeres of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.
In one aspect the invention relates to an immunogenic composition as described above in combination with a pharmaceutically acceptable excipient. Suitable excipients are well known to those skilled in the art and include, for example, buffers and water.

本発明の組成物およびワクチンは、種々の任意の経路、例えば経口、局所、皮下、粘膜（典型的には膣内）、静脈内、筋肉内、鼻腔内、舌下、皮内経路および坐剤により投与され送達されうる。 The compositions and vaccines of the present invention may be administered by any of a variety of routes including oral, topical, subcutaneous, mucosal (typically vaginal), intravenous, intramuscular, intranasal, sublingual, intradermal and suppository. Can be administered and delivered by.

本発明の1つの態様においては、該組成物またはワクチンは、HPV初期抗原、例えば、HPV E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7およびE8よりなる群から選ばれる抗原と共に、製剤化または共投与されうる。もう1つの態様においては、該ワクチンは、HPV初期抗原、例えば、HPV E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7およびE8よりなる群から選ばれる抗原を欠如していてもよい。 In one embodiment of the invention, the composition or vaccine is formulated or combined with an HPV early antigen, for example, an antigen selected from the group consisting of HPV E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7 and E8. It can be co-administered. In another embodiment, the vaccine may lack an HPV early antigen, eg, an antigen selected from the group consisting of HPV E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7 and E8.

また、所望により、該組成物またはワクチンは非HPV抗原と共に製剤化または共投与されうる。好適には、これらの非HPV抗原は、他の疾患、最も好ましくは性行為感染症、例えば単純ヘルペスウイルス、EBV、クラミジアおよびHIVに対する防御をもたらしうる。特に、該組成物またはワクチンは、HSVに由来するgDまたはその末端切断体、好適には、gD2tとして公知の、HSV-2に由来するC末端切断体を含むことが好ましい。このように、該組成物またはワクチンはHPVおよびHSVの両方に対する防御をもたらす。 Also, if desired, the composition or vaccine can be formulated or co-administered with a non-HPV antigen. Suitably, these non-HPV antigens may provide protection against other diseases, most preferably sexually transmitted diseases such as herpes simplex virus, EBV, chlamydia and HIV. In particular, it is preferred that the composition or vaccine comprises gD derived from HSV or a truncated form thereof, preferably a C-terminal truncated form derived from HSV-2 known as gD2t. Thus, the composition or vaccine provides protection against both HPV and HSV.

該組成物またはワクチン成分の用量は、個体の状態、性別、年齢および体重、投与経路ならびに該ワクチンのHPVに左右されるであろう。また、その量はVLP型の数によって様々となりうる。好適には、該供給は、免疫学的防御応答を生成するのに適したワクチン量の供給である。好適には、各ワクチン量は1〜100μgの各VLP、1つの態様においては5〜80μg、さらなる態様においては5〜30μgの各VLP、さらなる態様においては5〜20μgの各VLP、更に別の態様においては特に5μg、6μg、10μg、15μgまたは20μgを含む。 The dose of the composition or vaccine component will depend on the individual's condition, sex, age and weight, route of administration and HPV of the vaccine. Also, the amount can vary depending on the number of VLP types. Suitably, the supply is of a vaccine dose suitable to generate an immunological protective response. Suitably, each vaccine dose is 1-100 μg of each VLP, in one embodiment 5-80 μg, in a further embodiment 5-30 μg of each VLP, in a further embodiment 5-20 μg of each VLP, yet another embodiment. Particularly includes 5 μg, 6 μg, 10 μg, 15 μg or 20 μg.

ヒトにおける使用に適した用量は、典型的には、20〜40μgのHPV 16およびHPV 18 VLPを、本明細書に記載の低い用量（好適には、VLP当たり20μg未満のレベル、好適には、少なくとも一部のワクチン接種個体において防御免疫応答を惹起しうるレベル）の別のHPV癌型（31、45、52）と共に含む。 Suitable doses for use in humans are typically 20-40 μg of HPV 16 and HPV 18 VLPs at the lower doses described herein (preferably levels below 20 μg per VLP, suitably, With other HPV cancer types (31, 45, 52) at levels that can elicit a protective immune response in at least some vaccinated individuals.

ヒトにおける使用に適した他の用量は、そのような用量が、本明細書に記載の治験で評価されうるようにヒトにおいて防御的である限り、より低い量のHPV 16および／または18を含みうる。そのような用量は、本発明のVLPを例えば強力なアジュバントと組合わせる場合に適当でありうる。 Other doses suitable for use in humans include lower amounts of HPV 16 and/or 18 as long as such dose is protective in humans as can be evaluated in the trials described herein. sell. Such a dose may be appropriate when the VLPs of the invention are combined, eg with a strong adjuvant.

1つの態様においては、本発明の組成物は、20μgのHPV 16、20μgのHPV 18、および別の癌型（31、45または52）に由来する各VLP5〜18μg、例えば5〜15μg、ならびにさらなる態様においては特に、各非HPV 16/18癌型に由来するVLPを5、6、7、8、9、10、11、12、13、14または15μg含む。 In one embodiment, the composition of the invention comprises 20 μg HPV 16, 20 μg HPV 18, and 5-18 μg of each VLP from another cancer type (31, 45 or 52), such as 5-15 μg, and further In particular, embodiments include 5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 or 15 μg of VLPs from each non-HPV 16/18 cancer type.

1つの態様においては、本発明の組成物は、10〜15μgのHPV 16、10〜15μgのHPV 18、および別の癌型（31、45または52）に由来する各VLP5〜9μg、ならびに1つの態様においては、特に、各非HPV 16/18癌型に由来するVLPを5、6、7、8または9μg含む。 In one embodiment, the composition of the invention comprises 10-15 μg HPV 16, 10-15 μg HPV 18, and 5-9 μg of each VLP from another cancer type (31, 45 or 52), and one In embodiments, in particular, comprises 5, 6, 7, 8 or 9 μg of VLPs from each non-HPV 16/18 cancer type.

1つの態様においては、HPV 16 VLPと別の癌型（31、45または52）VLPとの重量比は1:0.9〜1:0.1（HPV 16:別の型）の範囲、好適には1:0.9〜1:0.3、好適には1:0.8〜1:0.4の範囲内である。 In one embodiment, the weight ratio of HPV 16 VLP to another cancer type (31, 45 or 52) VLP ranges from 1:0.9 to 1:0.1 (HPV 16:other type), preferably 1:. It is in the range of 0.9 to 1:0.3, preferably 1:0.8 to 1:0.4.

1つの態様においては、HPV 18 VLPと別の癌型（31、45または52）VLPとの重量比は1:0.9〜1:0.1（HPV 18:別の型）の範囲、好適には1:0.9〜1:0.3、好適には1:0.8〜1:0.4の範囲内である。 In one embodiment, the weight ratio of HPV 18 VLP to another cancer type (31, 45 or 52) VLP is in the range of 1:0.9 to 1:0.1 (HPV 18:other type), preferably 1:. It is in the range of 0.9 to 1:0.3, preferably 1:0.8 to 1:0.4.

すなわち、低い用量は、好適には、HPV 16またはHPV 18 VLPの用量の10〜90％、1つの態様においては、HPV 16またはHPV 18 VLPの用量の20〜80％、さらなる態様においては、30〜70％、更に別の態様においては、30〜60％、特に、HPV 16またはHPV 18の用量の10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％または90％である。 That is, the low dose is suitably 10-90% of the dose of HPV 16 or HPV 18 VLPs, in one embodiment 20-80% of the dose of HPV 16 or HPV 18 VLPs, in a further aspect 30 -70%, in yet another embodiment, 30-60%, in particular 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% of the dose of HPV 16 or HPV 18 or 90%.

1つの態様においては、該組成物は、好適には、HPV-16および／またはHPV-18感染、持続性HPV-16および／またはHPV-18感染ならびにHPV-16および／またはHPV-18関連子宮頚新生物のうち1以上を予防するために使用される。 In one embodiment, the composition is preferably HPV-16 and/or HPV-18 infection, persistent HPV-16 and/or HPV-18 infection and HPV-16 and/or HPV-18 associated uterus. Used to prevent one or more of the cervical neoplasms.

好適には、本発明の免疫原性組成物の使用は、別の（HPV 16、18ではない）発癌型による感染に関連した子宮頚新生物および／または偶発性（incident）感染および／または持続性感染を予防するために使用される。 Suitably, the use of the immunogenic composition of the present invention comprises the use of cervical neoplasms and/or incident infections and/or persistent infections associated with another (non-HPV 16, 18) oncogenic type of infection. Used to prevent sexually transmitted infections.

好適には、本発明の免疫原性組成物は、成人および10歳以降の青春期女性の能動免疫化において使用される。本発明の全ての組成物およびワクチンに関しては、該組成物またはワクチンは、好適には、10〜15歳、好ましくは10〜13歳の青春期少女のワクチン接種のために使用される。該組成物またはワクチンは、異常なパパニコロースミアの後の、またはHPVにより引き起こされた病変の除去を伴う手術の後の、またはHPV癌型に関して血清陰性かつDNA陰性である、より年長の成人女性にも投与されうる。10〜55歳の女性は別の好適な標的群である。別の態様においては、該ワクチンは、乳児以降の全ての年齢の少女および女性において使用され、さらなる態様においては、該ワクチンは少年または男性に投与されうる。もう1つの態様においては、該ワクチンは、HPVウイルスに関して血清陽性である女性において治療用に使用されうる。 Suitably, the immunogenic composition of the invention is used in the active immunization of adults and adolescent women after age 10. For all compositions and vaccines of the invention, the composition or vaccine is suitably used for vaccination of adolescent girls aged 10 to 15 years, preferably 10 to 13 years. The composition or vaccine is an older adult female, who is seronegative and DNA negative for HPV cancer type, after abnormal Papanicolaou smear, or after surgery with removal of lesions caused by HPV. Can also be administered. Women aged 10-55 are another suitable target group. In another aspect, the vaccine is used in girls and women of all ages after infants, and in a further aspect, the vaccine may be administered to boys or men. In another embodiment, the vaccine may be used therapeutically in women who are seropositive for HPV virus.

1つの態様においては、本発明の組成物は、HPV感染により引き起こされる子宮頚癌またはCIN I、CIN IIもしくはCIN III病状を予防または治療するために使用されうる。 In one embodiment, the compositions of the invention may be used to prevent or treat cervical cancer or CIN I, CIN II or CIN III pathologies caused by HPV infection.

1つの態様においては、該ワクチンは、2〜3回の投与計画で、例えば、それぞれ、0、1ヶ月の計画もしくは0、2ヶ月の計画、または0、2、6ヶ月の計画もしくは0、1および6ヶ月の計画で投与される。好適には、該ワクチン接種計画は、3〜10年後または5〜10年後、例えば好ましくは3、4、5、6、7、8、9または10年後の追加免疫注射を含む。 In one embodiment, the vaccine is in a 2-3 dose regimen, for example, 0, 1 month schedule or 0, 2 month schedule, or 0, 2, 6 month schedule or 0, 1 schedule, respectively. And will be administered on a 6-month schedule. Suitably the vaccination regimen comprises a booster injection 3 to 10 years later or 5 to 10 years later, for example preferably 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 years later.

1つの態様においては、本発明の組成物またはワクチンは液体ワクチン製剤であるが、該ワクチンは凍結乾燥され、投与前に再構成されるものでもよい。また、例えば局所用製剤、例えば膣内クリーム剤も使用されうる。 In one embodiment, the composition or vaccine of the invention is a liquid vaccine formulation, but the vaccine may be lyophilized and reconstituted prior to administration. Also, for example, topical formulations such as vaginal creams may be used.

特許出願および許可された特許を含む、本出願中の全ての参考文献の教示を、参照により完全に本明細書中に組み入れることとする。 The teachings of all references in this application, including patent applications and granted patents, are hereby incorporated by reference in their entirety.

本発明の組成物およびワクチンは、前記の所定のHPV成分を含む。本発明のさらなる態様においては、該ワクチンは、該成分から本質的になるか、または該成分からなる。 The compositions and vaccines of the present invention include the predetermined HPV component described above. In a further aspect of the invention the vaccine consists essentially of or consists of the component.

本明細書では、HPV 16およびHPV 18 VLPによる交差防御に関連する以下の非限定的な実施例、ならびにHPV VLPの製造を示す以下の非限定的な実施例を参照することにより、本発明を説明する。 The present invention is described herein by reference to the following non-limiting examples relating to cross protection by HPV 16 and HPV 18 VLPs, and the following non-limiting examples showing the production of HPV VLPs. explain.

実施例１
15〜25歳の健康な女性をHPV 16およびHPV 18 L1 VLPの混合物で免疫化した。参加した女性は、1）HPV-16およびHPV-18に関して血清陰性であり、2）（HPV PCRにより検出される）子宮頚の高リスクHPV感染に関して陰性であり、3）これまでに性交渉をもった相手が6人以下であり、そして4）正常なパパニコロースミアを示した。 Example 1
Healthy women aged 15-25 years were immunized with a mixture of HPV 16 and HPV 18 L1 VLPs. Participating women were 1) seronegative for HPV-16 and HPV-18, 2) negative for high-risk HPV infection of the cervix (detected by HPV PCR), and 3) had previously had sex. Fewer than 6 people had, and 4) showed normal Papanicolaou smear.

該混合物は0.5ml用量当たり20μgのHPV-16 L1 VLP、20μgのHPV-18 L1 VLPを含み、該混合物を500μgの水酸化アルミニウムおよび50μgの3D-MPLでアジュバント化した。プラシーボ群には500μgの水酸化アルミニウム単独を注射した。 The mixture contained 20 μg HPV-16 L1 VLPs, 20 μg HPV-18 L1 VLPs per 0.5 ml dose and the mixture was adjuvanted with 500 μg aluminum hydroxide and 50 μg 3D-MPL. The placebo group was injected with 500 μg of aluminum hydroxide alone.

高リスク癌HPV型に対するワクチン有効性（V.E.）を評価した。ここで、V.E.は、プラシーボ群と比較した場合の、該ワクチンによる感染防御の改善率（％）である。 Vaccine efficacy (V.E.) against high risk cancer HPV type was evaluated. Here, V.E. is the improvement rate (%) of the infection protection by the vaccine when compared with the placebo group.

該ワクチン接種者および対照群において、種々の発癌型に特異的な核酸の存在を検出することにより、交差防御を評価した。検出は、WO03014402およびそこに記載の参考文献に記載の技術、特に、HPV DNAの非特異的増幅およびそれに続くLiPA系を用いたDNA型の検出のための技術（WO 99/14377およびKleterら, [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517]に記載されている）（それらの刊行物の全内容を参照により本明細書に組み入れることとする）を用いて行った。 Cross protection was assessed in the vaccinated and control groups by detecting the presence of nucleic acids specific for different oncogenic types. The detection is carried out by the techniques described in WO03014402 and references therein, in particular for the non-specific amplification of HPV DNA and the subsequent detection of DNA types using the LiPA system (WO 99/14377 and Kleter et al., [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517]), the entire contents of which are hereby incorporated by reference.

しかし、サンプル中のHPV DNAの検出のためには、任意の適当な方法、例えば、関心のある各HPV型に特異的なプライマーを使用する、型特異的PCRが用いられうる。適当なプライマーは当業者に公知であるか、あるいは、発癌性HPV型の配列が知られていれば容易に構築されうる。 However, for detection of HPV DNA in a sample, any suitable method can be used, such as type-specific PCR using primers specific for each HPV type of interest. Appropriate primers are known to those of skill in the art or can be readily constructed if the oncogenic HPV type sequence is known.

12個の高リスク癌型、HPV-16に系統発生学的に関連した型（31、35および58の群；31、33、35、52および58の群）およびHPV-18に系統発生学的に関連した型（45および59）の全てに関して、感染に対するワクチン有効性を評価した。 12 high-risk cancer types, phylogenetically related to HPV-16 (groups 31, 35 and 58; 31, 33, 35, 52 and 58 groups) and HPV-18 phylogenetically Vaccine efficacy against infection was evaluated for all of the types associated with (45 and 59).

「ITT」（Intention To Treat cohort［意図した治療に基づくコホート解析］；少なくとも1用量のワクチンが投与された全ての個体を含む）に対して初期解析を行った。このデータを表1に示す。 The initial analysis was performed on; (including all of at least one dose of vaccine is administered an individual I ntention T o T reat cohort [intended cohort analysis based treatment was]) "ITT". This data is shown in Table 1.

表2および3に示す結果は、該治験の全ての基準に従った患者を示す「ATP」（According To Protocol［プロトコール遵守］）群に関するものである。表2は、コホート（集団）の少なくとも50％が彼女らの初回ワクチン接種後18ヶ月である時点で全ての患者から取得したデータを用いた中点（midpoint）分析である。表3は最終結果を示し、その全てのデータは初回ワクチン接種（第0月）の18ヶ月後の対象者からのものである。ATP群においては、すべての患者は0、1および6ヶ月の時点でワクチンを3回投与され、6ヶ月の時点で血清陰性であった。 The results shown in Tables 2 and 3 show a patient in accordance with all the criteria of the trial "ATP" (A ccording T o P rotocol [per-protocol]) relates to the group. Table 2 is a midpoint analysis using data obtained from all patients when at least 50% of the cohort was 18 months after their first vaccination. Table 3 shows the final results, all the data of which is from the subjects 18 months after the first vaccination (month 0). In the ATP group, all patients were vaccinated three times at 0, 1 and 6 months and were seronegative at 6 months.

表1に示すデータから示されるとおり、HPV 16およびHPV 18 VLPの混合物を用いた免疫化は、別のHPV型に対する見掛け上の交差防御をもたらした。この時点では、厳密な統計分析を行うにはサンプルサイズが小さすぎた。しかし、該データは正の傾向を示しており、HPV 16およびHPV 18 VLPでの免疫化が別のHPV型による感染に対して有効であることを示唆している。 As shown by the data presented in Table 1, immunization with a mixture of HPV 16 and HPV 18 VLPs resulted in apparent cross protection against another HPV type. At this point the sample size was too small for rigorous statistical analysis. However, the data show a positive trend, suggesting that immunization with HPV 16 and HPV 18 VLPs is effective against infection with another HPV type.

これは、この研究が進行するにつれて証明された。 This has been proven as the study progresses.

該プロトコールの詳細は、実施例3において更に詳しく説明する。 Details of the protocol are described in more detail in Example 3.

表2は、HPV 16およびHPV 18が、高リスク癌型31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66および68の群に対する統計的に有意な交差防御をもたらすことを示している。 Table 2 shows that HPV 16 and HPV 18 provide statistically significant cross protection against the high risk cancer types 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 and 68 groups. It is shown that.

表3は、HPV-18関連型（これは非常に強い傾向を示す）を除き、評価したHPV 31、35、58の群；HPV 31、33、35、52、58の群；および12個の高リスク（非HPV-16/18）型の群に対する統計的に有意な交差防御が認められることを示している。 Table 3 shows the HPV 31, 35, 58 group evaluated; HPV 31, 33, 35, 52, 58 group; and 12 HPV-18-related types, which show a very strong trend. It is shown that there is statistically significant cross protection against the high-risk (non-HPV-16/18) type group.

該治験データのその後の解析は、実施例1で使用した混合HPV 16および18ワクチンが、HPV 31による統計的偶発性感染に対する統計的に有意な交差防御をもたらすことを示している（ワクチン有効性 75.1％、p = 0.007）。該サンプルサイズは尚も、別の型について統計的に有意な結論を導き出すことを可能にするものではないが、例えば39、45、51および52のような別の型に関するデータは、HPV 16およびHPV 18 VLPを用いた免疫化が別のHPV型の感染に対して有効であることについて、正の傾向を示し、それを示唆している。 Subsequent analysis of the trial data shows that the combined HPV 16 and 18 vaccines used in Example 1 provide statistically significant cross protection against statistically incident HPV 31 infections (vaccine efficacy). 75.1%, p = 0.007). Although the sample size still does not allow to draw statistically significant conclusions for other types, data for other types, such as 39, 45, 51 and 52, are available in HPV 16 and Immunization with HPV 18 VLPs shows and suggests a positive trend for immunization against other HPV type infections.

実施例3に示すデータは、同じ研究において得た更なるデータを示しており、ある特定の型に対してもたらされる交差防御に焦点を絞ったものである。 The data presented in Example 3 represent further data obtained in the same study, focusing on the cross protection afforded against a particular type.

実施例２
HPV 16およびHPV 18 VLPは以下の方法で製造されうる。 Example 2
HPV 16 and HPV 18 VLPs can be manufactured by the following method.

例1
HPV 16およびHPV 18 L1 VLPの組合わせは本明細書に詳細に記載されている。別のHPV遺伝子型に由来するL1タンパク質は、当技術分野で既に公知の同様の方法により容易に製造されうる。 Example 1
The combination of HPV 16 and HPV 18 L1 VLPs is described in detail herein. L1 proteins derived from another HPV genotype can be readily produced by similar methods already known in the art.

A．HPV 16/18 L1 VLPの製造
標準的なプロトコール（例えば、WO9913056を参照されたい）を用いて、HPV 16およびHPV 18 VLPの製造を行った。HPV 16/18タンパク質を、関心のあるHPV 16または18 L1遺伝子をコードする組換えバキュロウイルス（0.3のMOI）に感染させたTrichoplusia ni （High Five（商標））細胞（約350000細胞/mlの密度）中で発現させた。感染の約72時間後に細胞を集めた。 A. Production of HPV 16/18 L1 VLPs Production of HPV 16 and HPV 18 VLPs was performed using standard protocols (see eg WO9913056). HPV 16/18 proteins were infected with a recombinant baculovirus (MOI of 0.3) encoding the HPV 16 or 18 L1 gene of interest (Trichoplusia ni (High Five™) cells (density of approximately 350,000 cells/ml). ). Cells were harvested approximately 72 hours post infection.

4.1 B 細胞回収／抗原抽出
濃縮、抽出、清澄化の3段階のプロセスで、抗原（L1-16/18）をHi5細胞から抽出した。濃縮工程では培地の90％までを除去するが、これは接線流（tangential flow）濾過により行った。抽出工程は低張バッファー（Tris 20mM, pH 8.5）で行った。該抽出を行うためには、培養体積に等しい体積を使用した。滑らかな攪拌下で少なくとも30分間の接触時間を用いた。清澄化は接線流濾過により行った。 4.1 B cell recovery/antigen extraction Antigen (L1-16/18) was extracted from Hi5 cells by a three-step process of concentration, extraction, and clarification. The concentration step removes up to 90% of the medium, which was done by tangential flow filtration. The extraction step was performed with a hypotonic buffer (Tris 20 mM, pH 8.5). A volume equal to the culture volume was used to perform the extraction. A contact time of at least 30 minutes with gentle agitation was used. Clarification was done by tangential flow filtration.

C 精製
精製プロセスは室温で行った。L1-16/18の両方の抗原に関しても、VLPをカプソメアに分解するために、該抽出物にβ-メルカプトエタノール（4％ w/w）を加えた。β-メルカプトエタノールの添加の直前に、グリセロールを10％ w/wの濃度まで加えた。 C Purification The purification process was performed at room temperature. For both L1-16/18 antigens, β-mercaptoethanol (4% w/w) was added to the extract to break down VLPs into capsomeres. Glycerol was added to a concentration of 10% w/w just prior to the addition of β-mercaptoethanol.

2℃〜8℃での保存の前に、使用した全てのバッファーを0.22μmフィルター上で濾過した。各精製の実施の前に、ゲルマトリックスを消毒し、適当なバッファーで平衡化した後、サンプルのローディングを行う。 All buffers used were filtered on a 0.22 μm filter before storage at 2-8°C. Prior to each purification run, the gel matrix is sterilized and equilibrated with the appropriate buffer prior to sample loading.

精製方法は、HPV 16および18からのL1の別々の精製に関して記載されている。これらの方法は概ね類似しており、以下の工程を含む：
陰イオン交換クロマトグラフィー（ジメチルアミノエチル -DMAE）、
陰イオン交換クロマトグラフィー（トリメチルアミノエチル -TMAE）、
ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、
ナノメトリック（Nanometric）濾過（Planova）、
限外濾過、
HPV 18については疎水性相互作用クロマトグラフィー（オクチルセファロースを使用）、あるいはHPV 16については陰イオン交換クロマトグラフィー（DEAE）、ならびに
滅菌濾過。 The purification method is described for the separate purification of L1 from HPV 16 and 18. These methods are generally similar and include the following steps:
Anion exchange chromatography (dimethylaminoethyl-DMAE),
Anion exchange chromatography (trimethylaminoethyl-TMAE),
Hydroxyapatite chromatography,
Nanometric filtration (Planova),
Ultrafiltration,
Hydrophobic interaction chromatography (using octyl sepharose) for HPV 18 or anion exchange chromatography (DEAE) for HPV 16 and sterile filtration.

4.1.1 詳細
4.1.2 C1 L1-18抗原の精製
4.1.2.1 陰イオン交換クロマトグラフィーDMAE
清澄化抽出物（約150mg/mlのL1タンパク質を含有する約1g/ml濃度のタンパク質）を陰イオン交換カラム（ジメチルアミノエチル）にアプライする。溶出は、バッファー（Tris 20mM｜NaCl 200mM｜4％ β-メルカプトエタノールBME）（pH 7.9±0.2）で行う。該抗原は約5カラム容量中に溶出される。溶出プロフィールは280nmでモニターする。 4.1.1 Details
4.1.2 Purification of C1 L1-18 antigen
4.1.2.1 Anion exchange chromatography DMAE
The clarified extract (protein at a concentration of about 1 g/ml containing about 150 mg/ml L1 protein) is applied to an anion exchange column (dimethylaminoethyl). Elution is performed with a buffer (Tris 20 mM|NaCl 200 mM|4% β-mercaptoethanol BME) (pH 7.9±0.2). The antigen is eluted in approximately 5 column volumes. The elution profile is monitored at 280 nm.

4.1.2.2 陰イオン交換クロマトグラフィーTMAE
第1工程の溶出液を1容量のH₂O/BME 4％で希釈する。ついで、その希釈した溶出液を第2の陰イオン交換カラム（トリメチルアミノエチル）にアプライする。溶出はバッファー（20mM Tris｜NaCl 200mM｜4％BME）（pH 7.9±0.2）で行う。該抗原は約4カラム容量中に溶出される。溶出プロフィールは280nmでモニターする。 4.1.2.2 Anion exchange chromatography TMAE
Dilute the first step eluate with 1 volume of H ₂ O/BME 4%. Then, the diluted eluate is applied to a second anion exchange column (trimethylaminoethyl). Elution is performed with a buffer (20 mM Tris|NaCl 200 mM|4% BME) (pH 7.9±0.2). The antigen is eluted in approximately 4 column volumes. The elution profile is monitored at 280 nm.

4.1.2.3 ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー
該TMAE工程の溶出液をヒドロキシアパタイト（HA）カラムにアプライする。サンプルをアプライした後、該ゲルを約2.5カラム容量のバッファー（NaH₂PO₄ 100mM｜NaCl 30mM｜4％BME）（pH 6.0±0.2）で溶出する。 4.1.2.3 Hydroxyapatite chromatography Apply the eluate of the TMAE process to a hydroxyapatite (HA) column. After applying the sample, the gel is eluted with approximately 2.5 column volumes of buffer (NaH ₂ PO ₄ 100 mM|NaCl 30 mM|4% BME) (pH 6.0±0.2).

4.1.2.4 ナノメトリック（Nanometric）濾過（Planova）
該HA溶出液を希釈して、以下の条件となるようにする：バッファー（NaH₂PO₄ 25mM｜NaCl 10mM｜4％BME）（pH 7.5±0.2）。ついでそれを0.2μmプレフィルター上および0.12 m²のPlanova 15Nフィルター上で連続的に濾過する。該濾過は、200 mbar±20 mbarの一定の圧力で行う。 4.1.2.4 Nanometric Filtration (Planova)
The HA eluate is diluted to meet the following conditions: buffer (NaH ₂ PO ₄ 25 mM|NaCl 10 mM|4% BME) (pH 7.5±0.2). It is then filtered continuously on a 0.2 μm prefilter and a 0.12 m ² Planova 15N filter. The filtration is carried out at a constant pressure of 200 mbar ± 20 mbar.

4.1.2.5 限外濾過
ポリエーテルスルホン膜（Centramateカセット0.1 m², 100kD）を備えた接線流（tangential flow）限外濾過系で限外濾過を行う。該Planova溶出液を以下の条件となるように処理する：（NaH₂PO₄ 100mM｜NaCl 30mM｜4％BME）、pH 6.0±0.2。ついでそれを該系内にローディングし、5倍濃縮し、バッファー（NaH₂PO₄ 20mM｜NaCl 500mM）（pH 6.0±0.2）の約10倍の開始容量の連続的注入でダイアフィルトレーションに付す。 4.1.2.5 Ultrafiltration Ultrafiltration is performed with a tangential flow ultrafiltration system equipped with a polyethersulfone membrane (Centramate cassette 0.1 m ² , 100 kD). The Planova eluate is treated under the following conditions: (NaH ₂ PO ₄ 100 mM|NaCl 30 mM|4% BME), pH 6.0±0.2. It is then loaded into the system, concentrated 5 times and subjected to diafiltration with a continuous injection of about 10 times the starting volume of buffer (NaH ₂ PO ₄ 20 mM|NaCl 500 mM) (pH 6.0 ± 0.2). ..

4.1.2.6 疎水性相互作用クロマトグラフィー（オクチルセファロース）
該限外濾過透過液をオクチルセファロースカラムにアプライする。このクロマトグラフィー工程は、バッファー（Na₃PO₄ 20mM｜NaCl 500mM）（pH 6.0±0.2）の約5カラム容量でネガティブモードで行う。 4.1.2.6 Hydrophobic interaction chromatography (octyl sepharose)
The ultrafiltration permeate is applied to an octyl sepharose column. This chromatography step is performed in negative mode with about 5 column volumes of buffer (Na ₃ PO ₄ 20 mM|NaCl 500 mM) (pH 6.0±0.2).

4.1.2.7 滅菌濾過
精製されたL1-18抗原溶液を0.22μm膜上の濾過により滅菌する。 4.1.2.7 Sterile filtration The purified L1-18 antigen solution is sterilized by filtration on a 0.22 μm membrane.

4.1.3
4.1.4 C2 L1-16抗原の精製
4.1.4.1 陰イオン交換クロマトグラフィーDMAE
該清澄化抽出物を陰イオン交換カラム（ジメチルアミノエチル）にアプライする。溶出はバッファー（Tris 20mM｜NaCl 180mM｜4％BME）（pH 7.9±0.2）で行う。該抗原は約4カラム容量中に溶出される。溶出プロフィールは280nmでモニターする。 4.1.3
4.1.4 Purification of C2 L1-16 antigen
4.1.4.1 Anion exchange chromatography DMAE
The clarified extract is applied to an anion exchange column (dimethylaminoethyl). Elution is performed with a buffer (Tris 20 mM|NaCl 180 mM|4% BME) (pH 7.9±0.2). The antigen is eluted in approximately 4 column volumes. The elution profile is monitored at 280 nm.

4.1.4.2 陰イオン交換クロマトグラフィーTMAE
第1工程の溶出液を1容量のH₂O/BME 4％で希釈する。ついで、その希釈した溶出液を第2の陰イオン交換カラム（トリメチルアミノエチル）にアプライする。溶出はバッファー（20mM Tris｜NaCl 180mM｜4％BME）（pH 7.9±0.2）で行う。該抗原は約5カラム容量中に溶出される。溶出プロフィールは280nmでモニターする。 4.1.4.2 Anion exchange chromatography TMAE
Dilute the first step eluate with 1 volume of H ₂ O/BME 4%. Then, the diluted eluate is applied to a second anion exchange column (trimethylaminoethyl). Elution is performed with a buffer (20 mM Tris|NaCl 180 mM|4% BME) (pH 7.9±0.2). The antigen is eluted in approximately 5 column volumes. The elution profile is monitored at 280 nm.

4.1.4.3 ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー（HA）
該TMAE工程の溶出液をHAカラムにアプライする。サンプルをアプライした後、該ゲルを約3カラム容量のバッファー（NaH₂PO₄ 100mM｜NaCl 30mM｜4％BME）（pH 6.0±0.2）で溶出する。 4.1.4.3 Hydroxyapatite chromatography (HA)
The eluate of the TMAE step is applied to the HA column. After applying the sample, the gel is eluted with approximately 3 column volumes of buffer (NaH ₂ PO ₄ 100 mM|NaCl 30 mM|4% BME) (pH 6.0±0.2).

4.1.4.4 ナノメトリック（Nanometric）濾過（Planova）
該HA溶出液を希釈して、以下の条件となるようにする：バッファー（NaH₂PO₄ 25mM｜NaCl 10mM｜4％BME）（pH 7.5±0.2）。ついでそれを0.2μmプレフィルターおよび0.12 m²のPlanova 15Nフィルターで連続的に濾過する。該濾過は、200 mbar±20 mbarの一定の圧力で行う。 4.1.4.4 Nanometric Filtration (Planova)
The HA eluate is diluted to meet the following conditions: buffer (NaH ₂ PO ₄ 25 mM|NaCl 10 mM|4% BME) (pH 7.5±0.2). It is then continuously filtered with a 0.2 μm prefilter and a 0.12 m ² Planova 15N filter. The filtration is carried out at a constant pressure of 200 mbar ± 20 mbar.

4.1.4.5 限外濾過
ポリエーテルスルホン膜（Centramateカセット0.1 m², 100kD）を備えた接線流（tangential flow）限外濾過系で限外濾過を行う。該Planova溶出液を以下の条件となるように処理する：（NaH₂PO₄ 100mM｜NaCl 30mM｜4％BME）、pH 6.0±0.2。ついでそれを該系内にローディングし、5倍濃縮し、バッファー（NaH₂PO₄ 20mM｜NaCl 500mM）（pH 6.0±0.2）の約10倍の開始容量の連続的注入でダイアフィルトレーションに付す。 4.1.4.5 Ultrafiltration Ultrafiltration is performed with a tangential flow ultrafiltration system equipped with a polyethersulfone membrane (Centramate cassette 0.1 m ² , 100 kD). The Planova eluate is treated under the following conditions: (NaH ₂ PO ₄ 100 mM|NaCl 30 mM|4% BME), pH 6.0±0.2. It is then loaded into the system, concentrated 5 times and subjected to diafiltration with a continuous injection of about 10 times the starting volume of buffer (NaH ₂ PO ₄ 20 mM|NaCl 500 mM) (pH 6.0 ± 0.2). ..

4.1.4.6 陰イオン交換クロマトグラフィーDEAE
該限外濾過溶出液を平衡バッファー（Na₃PO₄ 20mM｜NaCl 250mM）（pH 6.0±0.2）の伝導度に調節し、陰イオン交換カラム（ジエチルアミノエチル）上にアプライする。溶出はバッファー（NaH₂PO₄ 20mM｜NaCl 500mM）（pH 6.0±0.2）で行う。該抗原は約3カラム容量中に溶出される。溶出プロフィールは280nmでモニターする。 4.1.4.6 Anion exchange chromatography DEAE
The ultrafiltration eluate is adjusted to the conductivity of an equilibration buffer (Na ₃ PO ₄ 20 mM|NaCl 250 mM) (pH 6.0±0.2) and applied on an anion exchange column (diethylaminoethyl). Elution is performed with a buffer (NaH ₂ PO ₄ 20 mM|NaCl 500 mM) (pH 6.0±0.2). The antigen elutes in approximately 3 column volumes. The elution profile is monitored at 280 nm.

4.1.4.7 滅菌濾過
精製されたL1-18抗原溶液を0.22μm膜での濾過により滅菌する。 4.1.4.7 Sterile filtration The purified L1-18 antigen solution is sterilized by filtration through a 0.22 μm membrane.

C3
各VLP型を別々に吸着させて、濃縮された吸着一価体を得る。 C3
Each VLP type is adsorbed separately to obtain a concentrated adsorbed monovalent form.

VLP16濃縮吸着一価体の製造
HPV 16からの60μgの精製VLPを、穏やかに攪拌しながら室温にて1時間にわたり、6.0±0.2のpHでAl(OH)₃からの150μgのAl³⁺上に吸着させる。この濃縮吸着一価体を±4℃で保存する。吸着は、該調製物を遠心分離し、その上清中のVLPを定量することにより、確認する。 VLP16 Concentrated adsorption monovalent production
60 μg of purified VLPs from HPV 16 are adsorbed onto 150 μg of Al ³⁺ from Al(OH) ₃ at pH of 6.0±0.2 for 1 hour at room temperature with gentle stirring. Store this concentrated adsorbed monovalent at ±4°C. Adsorption is confirmed by centrifuging the preparation and quantifying VLPs in the supernatant.

VLP 18濃縮吸着一価体の製造
HPV 18からの60μgの精製VLPを、穏やかに攪拌しながら室温にて1時間にわたり、6.0±0.2のpHでAl(OH)₃からの150μgのAl³⁺上に吸着させる。この濃縮吸着一価体を±4℃で保存する。吸着は、該調製物を遠心分離し、上清中のVLPを定量することにより、確認する。 VLP 18 Concentrated adsorption monovalent production
60 μg of purified VLPs from HPV 18 are adsorbed onto 150 μg Al ³⁺ from Al(OH) ₃ at pH of 6.0±0.2 for 1 hour at room temperature with gentle stirring. Store this concentrated adsorbed monovalent at ±4°C. Adsorption is confirmed by centrifuging the preparation and quantifying VLPs in the supernatant.

D 最終的なワクチン調製
上記方法により製造された濃縮吸着一価体を組み合わせて、用量当たり20μgの各VLPを含有する懸濁液を構成してもよい。最終的なワクチンは＋4℃で保存する。 D Final Vaccine Preparation The concentrated adsorbed monovalents produced by the above method may be combined to form a suspension containing 20 μg of each VLP per dose. The final vaccine is stored at +4°C.

別の癌型由来のVLPは、本発明に従い、適宜、適当な濃度で加えられうる。そのような型の配列は当技術分野でよく知られており、そのようなタンパク質を含むVLPは当業者により容易に発現されうる。 VLPs from other cancer types may be added in any suitable concentration according to the invention. Such types of sequences are well known in the art, and VLPs containing such proteins can be readily expressed by those of ordinary skill in the art.

組み合わせた吸着バルクまたは個々の吸着バルクは、例えば3D-MPLのようなアジュバントと更に混合されうる。 The combined adsorption bulk or individual adsorption bulks can be further mixed with an adjuvant such as 3D-MPL.

実施例３
行った実験の厳密な詳細はHarperら, the Lancet. 2004 Nov 13;364(9447):1757-65に記載されている。 Example 3
The exact details of the experiments performed are described in Harper et al., the Lancet. 2004 Nov 13;364(9447):1757-65.

要約すると、15〜25歳の健康な女性をHPV 16およびHPV 18 L1 VLPの混合物で免疫化した。参加した女性は、1）HPV-16およびHPV-18に関して血清陰性であり、2）（HPV PCRにより検出される）子宮頚の高リスクHPV感染に関して陰性であり、3）これまでに性交渉をもった相手が6人以下であり、そして4）正常なパパニコロースミアを示した。 In summary, healthy women aged 15-25 years were immunized with a mixture of HPV 16 and HPV 18 L1 VLPs. Participating women were 1) seronegative for HPV-16 and HPV-18, 2) negative for high-risk HPV infection of the cervix (detected by HPV PCR), and 3) had previously had sex. Fewer than 6 people had, and 4) showed normal Papanicolaou smear.

HPV 16 VLPは、471アミノ酸からなる、34アミノ酸が欠失したC末端切断型HPV L1タンパク質から構成されている。HPV 18 VLPは、35アミノ酸が欠失した、C末端切断型の472アミノ酸HPV L1タンパク質から構成されている。 HPV 16 VLP is composed of a C-terminal truncated HPV L1 protein consisting of 471 amino acids, with 34 amino acids deleted. HPV 18 VLPs are composed of a C-terminal truncated 472 amino acid HPV L1 protein with a deletion of 35 amino acids.

所定の癌HPV型に対するワクチン有効性（V.E.）を評価した。ここで、V.E.は、プラシーボ群と比較した場合の、該ワクチンによる感染防御の改善率（％）である。 The vaccine efficacy (V.E.) against a given cancer HPV type was evaluated. Here, V.E. is the improvement rate (%) of the infection protection by the vaccine when compared with the placebo group.

該ワクチン接種者および対照群において、種々の発癌型に特異的な核酸の存在を検出することにより、交差防御を評価した。検出は、WO03014402およびそこに記載の参考文献に記載の技術、特に、HPV DNAの非特異的増幅およびそれに続くLiPA系を用いたDNA型の検出のための技術（WO 99/14377およびKleterら, [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517]に記載されているもの）（それらの刊行物の全内容を参照により本明細書に組み入れることとする）を用いて行った。 Cross protection was assessed in the vaccinated and control groups by detecting the presence of nucleic acids specific for different oncogenic types. The detection is carried out by the techniques described in WO03014402 and references therein, in particular for the non-specific amplification of HPV DNA and the subsequent detection of DNA types using the LiPA system (WO 99/14377 and Kleter et al., [Journal of Clinical Microbiology (1999), 37 (8): 2508-2517] (the entire contents of those publications are incorporated herein by reference). ..

しかし、サンプル中のHPV DNAの検出のためには、任意の適当な方法、例えば、関心のある各HPV型に特異的なプライマーを使用する型特異的PCRが用いられうる。適当なプライマーは当業者に公知であるか、あるいは、発癌性HPV型の配列が知られていれば容易に構築されうる。 However, any suitable method can be used for detection of HPV DNA in a sample, such as type-specific PCR using primers specific for each HPV type of interest. Appropriate primers are known to those of skill in the art or can be readily constructed if the oncogenic HPV type sequence is known.

本明細書においては、完全を期すために、前記のLancet文献の方法の部を以下に詳細に複製する。 For completeness, the method section of the above Lancet reference is reproduced in detail herein below.

Harpeら, the Lancet. 2004 Nov 13;364(9447):1757-65 - 実験の詳細
本研究の主要目的は、HPV-16/18に関してELISAで血清陰性でありHPV-16/18 DNAに関してPCRで陰性であることが予め示された参加者において、6〜18ヶ月間、HPV-16、HPV-18またはそれらの両方（HPV-16/18）の感染の予防におけるワクチン有効性を評価することであった。二次的な目的としては以下が含まれた：HPV-16/18の持続性感染の予防におけるワクチン有効性の評価、ならびにHPV-16/18感染に関連した細胞学的に確認された軽度扁平上皮内病変（LSIL）、重度扁平上皮内病変（HSIL）および組織学的に確認されたLSIL（CIN 1）、HSIL（CIN 2または3）扁平上皮細胞癌または腺癌の予防におけるワクチン有効性の評価（第6〜18ヶ月および第6〜27ヶ月におけるもの）。HPV-16/18感染と細胞学的に関連した意義不明異型扁平上皮細胞（ASCUS）の予防を、結果の解析に事後的に加えた。 Harpe et al., the Lancet. 2004 Nov 13;364(9447):1757-65-Experimental Details The main purpose of this study was seronegative for HPV-16/18 by PCR and PCR for HPV-16/18 DNA. By assessing vaccine efficacy in preventing infection with HPV-16, HPV-18 or both (HPV-16/18) for 6-18 months in participants previously shown to be negative there were. Secondary objectives included: Evaluation of vaccine efficacy in the prevention of persistent HPV-16/18 infection, and cytologically confirmed mild flattening associated with HPV-16/18 infection. Intraepithelial lesion (LSIL), severe squamous intraepithelial lesion (HSIL) and histologically confirmed LSIL (CIN 1), HSIL (CIN 2 or 3) of vaccine efficacy in the prevention of squamous cell carcinoma or adenocarcinoma Evaluation (at 6-18 months and 6-27 months). Prophylaxis of atypical squamous cells of unknown significance (ASCUS) that were cytologically associated with HPV-16/18 infection was added post hoc to the analysis of the results.

我々は、病変組織内でPCRにより検出されたHPV-16/18 DNAと関連した組織病理学的エンドポイントCIN 1および2の精査分析も行った。他の目的には、ワクチンの免疫原性、安全性および忍容性の評価が含まれた。 We also performed a close analysis of the histopathological endpoints CIN 1 and 2 associated with HPV-16/18 DNA detected by PCR in diseased tissues. Other objectives included assessment of vaccine immunogenicity, safety and tolerability.

北米（カナダおよび米国）およびブラジルの研究者は、この有効性研究のために、広告により、あるいは以前の2000年7月〜12月に実施したHPV横断的疫学研究の参加者から、女性を募集した。 Researchers in North America (Canada and the United States) and Brazil are recruiting women for this efficacy study, either by advertisement or from participants in a previous HPV cross-epidemiological study conducted July-December 2000. did.

32の研究実施箇所のそれぞれについて、施設内審査機関がプロトコール、同意書および修正を承認した。女性は、研究への参加および膣鏡検査に関する別々の同意書面に署名した。18歳未満の女性については、両親の同意および参加者からの承諾が必須であった。 For each of the 32 study sites, the institutional review agency approved the protocol, consent form and amendments. Women signed separate consent forms for study participation and colposcopy. For women under the age of 18, parental consent and consent from participants were mandatory.

以下の2つの研究段階で実施した。すなわち、ワクチン接種および追跡調査のための18ヶ月で完了する第一段階、そして、18ヶ月で完了する盲検化拡張追跡調査段階である。 It was conducted in the following two research stages. A 18-month first stage for vaccination and follow-up, and a blinded extended follow-up stage for 18 months.

第一段階（0ヶ月〜18ヶ月）に適格な女性には、15〜25歳の健康な女性であって、これまでに性交渉をもった相手が6人以下であり、異常なパパニコロー検査結果または子宮頚部の除去もしくは切除処置の前歴を有さず、外部コンジローマの治療中ではなく、また、研究への参加の90日前以降に細胞学的に陰性であり、HPV-16およびHPV-18抗体に関してELISAで血清陰性であり、14種の高リスクHPV型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66および68）に関してPCRでHPV-DNA陰性であった女性が、含められた。 The women eligible for the first stage (0 to 18 months) are healthy women aged 15 to 25, with fewer than 6 people who have had sexual intercourse so far, and abnormal Papanicolaou test results. Or with no prior cervical ablation or excision procedure, not on treatment of external condyloma, and cytologically negative 90 days prior to study entry with HPV-16 and HPV-18 antibodies Is seronegative for ELISA and HPV-DNA by PCR for 14 high-risk HPV types (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 and 68) Women who were negative were included.

該研究の初期段階を最も早く完了し、登録後に子宮頚部の除去もしくは切除療法または子宮摘出術を受けなかった女性が、該研究の拡張段階（18ヶ月〜27ヶ月）に参加する資格を得た。 Women who completed the earliest stages of the study and who did not undergo cervical removal or ablation therapy or hysterectomy after enrollment were eligible to participate in the dilation stage (18 months to 27 months) of the study. ..

方法
二価HPV-16/18ウイルス様粒子ワクチン（GlaxoSmithKline Biologicals, Rixensart, Belgium）の各投与量は、20μgのHPV-16 L1ウイルス様粒子および20μgのHPV-18 L1ウイルス様粒子を含有していた。単回用量バイアルとして供給された500μgの水酸化アルミニウムおよび50μgの3-デアシル化モノホスホリルリピドA（MPL, Corixa, Montana, USA）を含有するAS04アジュバントを使用して、Spodoptera frugiperda Sf-9およびTrichoplusia ni Hi-5細胞基質上で、各型のウイルス様粒子を産生させた。プラシーボは投与量当たり500μgの水酸化アルミニウムを含有し、外見上はHPV-16/18ワクチンと同一であった。0ヶ月、1ヶ月および6ヶ月の時に、各研究参加者に0.5mL用量のワクチンまたはプラシーボを投与した。 Method Each dose of bivalent HPV-16/18 virus-like particle vaccine (GlaxoSmithKline Biologicals, Rixensart, Belgium) contained 20 μg HPV-16 L1 virus-like particles and 20 μg HPV-18 L1 virus-like particles . Spodoptera frugiperda Sf-9 and Trichoplusia using AS04 adjuvant containing 500 μg aluminum hydroxide and 50 μg 3-deacylated monophosphoryl lipid A (MPL, Corixa, Montana, USA) supplied as single dose vials. Each type of virus-like particle was produced on ni Hi-5 cell substrate. Placebo contained 500 μg aluminum hydroxide per dose and was visually identical to the HPV-16/18 vaccine. Each study participant received a 0.5 mL dose of vaccine or placebo at 0, 1 and 6 months.

スクリーニング時ならびに6ヶ月、12ヶ月および18ヶ月時に、細胞学的検査およびHPV DNA試験のために、子宮頚刷毛およびへら（PreservCyt, Cytyc Corporation, Boxborough, MA, USA中で洗浄されたもの）を用いて医療提供者が子宮頚部検体を得た。0ヶ月および6ヶ月時、その後は3ヶ月ごとに、女性は、HPV DNA試験のために2つの逐次スワブ（PreservCyt内に配置される）で子宮頚膣サンプルを自分で採取した。［DM Harper, WW Noll, DR BelloniおよびBF. Cole, Randomized clinical trial of PCR-determined human papillomavirus detection methods: self-sampling versus clinician-directed −biologic concordance and women's preferences. Am J Obstet Gynecol 186 (2002), pp. 365-373］。中央検査室（Quest Diagnostics, Teterboro, NJ, USA）は、1991 Bethesda分類系を用いて細胞学的検査の結果（ThinPrep, Cytyc Corporation）を報告した。 Cervical brush and spatula (washed in PreservCyt, Cytyc Corporation, Boxborough, MA, USA) for cytology and HPV DNA testing at screening and at 6, 12 and 18 months The health care provider obtained a cervical specimen. At 0 and 6 months, and then every 3 months, women self-collected cervical vaginal samples with two sequential swabs (placed in PreservCyt) for HPV DNA testing. [DM Harper, WW Noll, DR Belloni and BF. Cole, Randomized clinical trial of PCR-determined human papillomavirus detection methods: self-sampling versus clinician-directed −biologic concordance and women's preferences. Am J Obstet Gynecol 186 (2002), pp. . 365-373]. The central laboratory (Quest Diagnostics, Teterboro, NJ, USA) reported the results of cytological tests (ThinPrep, Cytyc Corporation) using the 1991 Bethesda classification system.

プロトコールガイドラインは、ASCUSについての2つの論文または意義不明異型腺細胞（atypical glandular cells of undetermined significance）、LSILもしくはHSIL、扁平上皮細胞癌、in situ腺癌または腺癌についての1つの論文の後、膣鏡検査を推奨した。これらのガイドラインは、疑わしい病変がある場合にはその生検をも推奨した。 The protocol guidelines include two articles on ASCUS or one article on atypical glandular cells of undetermined significance, LSIL or HSIL, squamous cell carcinoma, in situ adenocarcinoma or adenocarcinoma, followed by colposcopy. Inspection recommended. These guidelines also recommended biopsy of any suspicious lesions.

中央組織検査室は、臨床管理のためのホルマリン固定組織検体の初期診断を行った。3名の病理学者の一団が、CIN系によるHPV-16およびHPV-18関連病変について後日一致した診断を行った。この一致した診断は、病変部HPV DNAのPCR検出のために顕微解剖時に採取された切片の精査をも含むものであった。 The central histology laboratory made the initial diagnosis of formalin-fixed tissue specimens for clinical management. A panel of three pathologists later made a consensus diagnosis of HPV-16 and HPV-18-related lesions of the CIN system. This consistent diagnosis also included a close examination of the sections taken at the time of microdissection for PCR detection of lesion HPV DNA.

細胞学的検体から単離したHPV DNA（MagNaPure Total Nucleic Acid system, Roche Diagnostics, Almere, Netherlands）および子宮頚生検検体から単離されたHPV DNA（プロテイナーゼK抽出）を、L1遺伝子の65bpの領域を増幅するSPF10広域スペクトルプライマーを使用して、精製された全DNAのアリコートから増幅した［B Kleter, LJ van Doorn, J ter Scheggetら, Novel short-fragment PCR assay for highly sensitive broad-spectrum detection of anogenital human papillomaviruses. Am J Pathol 153 (1998), pp. 1731-1739: LJ van Doorn, W Quint, B Kleterら, Genotyping of human papillomavirus in liquid cytology cervical specimens by the PGMY line blot assay and the SPF(10) line probe assay. J Clin Microbiol 40 (2002), pp. 979-983 およびWG Quint, G Scholte, LJ van Doorn, B Kleter, PH SmitsおよびJ. Lindeman, Comparative analysis of human papillomavirus infections in cervical scrapes and biopsy specimens by general SPF(10) PCR and HPV genotyping. J Pathol 194 (2001), pp. 51-58］。増幅産物をDNA酵素イムノアッセイにより検出した。ラインプローブアッセイ（LiPA Kit HPV INNO LiPA HPVジェノタイピングアッセイ, SPF-10システムバージョン1, Innogenetics, Gent, Belgium, Labo Bio-medical Products製, Rijswijk, Netherlands）は25個のHPV遺伝子型（6、11、16、18、31、33、34、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70および74）を検出した［B Kleter, LJ van Doorn, L Schrauwenら, Development and clinical evaluation of a highly sensitive PCR-reverse hybridization line probe assay for detection and identification of anogenital human papillomavirus. J Clin Microbiol 37 (1999), pp. 2508-2517］。DNA酵素イムノアッセイにより陽性であった任意の検体を型特異的HPV-16およびHPV-18 PCRにより試験した。HPV-16型特異的PCRプライマーはE6/E7遺伝子の92bpの断片を増幅し、HPV-18型特異的PCRプライマーはL1遺伝子の126bpの断片を増幅した［MF Baay, WG Quint, J Koudstaalら, Comprehensive study of several general and type-specific primer pairs for detection of human papillomavirus DNA by PCR in paraffin-embedded cervical carcinomas. J Clin Microbiol 34 (1996), pp. 745-747］。 HPV DNA (MagNaPure Total Nucleic Acid system, Roche Diagnostics, Almere, Netherlands) isolated from cytological specimens and HPV DNA (proteinase K extraction) isolated from cervical biopsy specimens in the region of 65 bp of L1 gene Was amplified from an aliquot of purified total DNA using an SPF10 broad-spectrum primer that amplifies B. Kleter, LJ van Doorn, Jter Schegget et al. human papillomaviruses. Am J Pathol 153 (1998), pp. 1731-1739: LJ van Doorn, W Quint, B Kleter et al., Genotyping of human papillomavirus in liquid cytology cervical specimens by the PGMY line blot assay and the SPF(10) line. probe assay. J Clin Microbiol 40 (2002), pp. 979-983 and WG Quint, G Scholte, LJ van Doorn, B Kleter, PH Smits and J. Lindeman, Comparative analysis of human papillomavirus infections in cervical scrapes and biopsy specimens by. general SPF(10) PCR and HPV genotyping. J Pathol 194 (2001), pp. 51-58]. Amplification products were detected by DNA enzyme immunoassay. The line probe assay (LiPA Kit HPV INNO LiPA HPV Genotyping Assay, SPF-10 System version 1, Innogenetics, Gent, Belgium, Labo Bio-medical Products, Rijswijk, Netherlands) has 25 HPV genotypes (6, 11, 16, 18, 31, 33, 34, 35, 39, 40, 42, 43, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 70 and 74) were detected [B Kleter , LJ van Doorn, L Schrauwen et al., Development and clinical evaluation of a highly sensitive PCR-reverse hybridization line probe assay for detection and identification of anogenital human papillomavirus. J Clin Microbiol 37 (1999), pp. 2508-2517]. Any specimens that were positive by DNA enzyme immunoassay were tested by type-specific HPV-16 and HPV-18 PCR. The HPV-16 type specific PCR primer amplified a 92 bp fragment of the E6/E7 gene, and the HPV-18 type specific PCR primer amplified a 126 bp fragment of the L1 gene [MF Baay, WG Quint, J Koudstaal et al. Comprehensive study of several general and type-specific primer pairs for detection of human papillomavirus DNA by PCR in paraffin-embedded cervical carcinomas. J Clin Microbiol 34 (1996), pp. 745-747].

我々は、HPV-16/18による偶発性（incident）子宮頚感染を、該治験中のHPV-16またはHPV-18に関する少なくとも1つの陽性のPCR結果として定義し、HPV-16/18による持続性感染を、少なくとも6ヶ月間隔を空けて行った同じウイルス遺伝子型に関するHPV-DNA PCRアッセイでの少なくとも2つの陽性結果として定義した［H Richardson, G Kelsall, P Tellierら, The natural history of type-specific human papillomavirus infections in female university students. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 12 (2003), pp. 485-490ならびにAB Moscicki, JH Ellenberg, S FarhatおよびJ. Xu, Persistence of human papillomavirus infection in HIV-infected and -uninfected adolescent girls: risk factors and differences, by phylogenetic type. J Infect Dis 190 (2004), pp. 37-45］。HPV-DNA試験結果は該研究中は研究者には秘密にし、臨床管理目的に細胞学的および組織学的診断のみが明らかにされた。分析は、子宮頚検体ならびに組み合わせた子宮頚および自己採取子宮頚膣検体に関するHPV-16/18 DNA結果を含むものであった。 We defined an incident cervical infection with HPV-16/18 as at least one positive PCR result for HPV-16 or HPV-18 in the study, and persistent with HPV-16/18. Infection was defined as at least two positive results in the HPV-DNA PCR assay for the same viral genotype at least 6 months apart [H Richardson, G Kelsall, P Tellier et al., The natural history of type-specific Human papillomavirus infections in female university students.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 12 (2003), pp. 485-490 and AB Moscicki, JH Ellenberg, S Farhat and J. Xu, Persistence of human papillomavirus infection in HIV-infected and -uninfected adolescent girls. : risk factors and differences, by phylogenetic type. J Infect Dis 190 (2004), pp. 37-45]. The HPV-DNA test results were kept secret to the investigator during the study, revealing only cytological and histological diagnosis for clinical management purposes. The analysis included HPV-16/18 DNA results for cervical specimens and combined cervical and self-collected cervical vaginal specimens.

我々は0、1、6、7、12および18ヶ月時に免疫原性の評価のために研究参加者から血清を集めた。HPV-16およびHPV-18ウイルス様粒子に対する抗体に関する血清学的試験はELISAによるものであった。抗体検出のためのコーティング抗原として、組換えHPV-16またはHPV-18ウイルス様粒子を使用した（ウェブ添付書類http://image.thelancet.com/extras/04art10103webappendix.pdfを参照されたい）。血清陽性は、HPV-16に関しては8 ELISA単位/mLでおよびHPV-18に関しては7 ELISA単位/mlで確立されたアッセイカットオフ力価と同等かそれより大きい力価として定義された。典型的な自然力価は、ELISAによりHPV-16またはHPV-18に関して血清陽性であることが判明した先行疫学研究において女性から得た血液サンプルを使用することにより測定した。 We collected sera from study participants for evaluation of immunogenicity at 0, 1, 6, 7, 12 and 18 months. Serological testing for antibodies to HPV-16 and HPV-18 virus-like particles was by ELISA. Recombinant HPV-16 or HPV-18 virus-like particles were used as coating antigen for antibody detection (see web attachment http://image.thelancet.com/extras/04art10103webappendix.pdf). Seropositivity was defined as a titer equal to or greater than the assay cutoff titer established at 8 ELISA units/mL for HPV-16 and 7 ELISA units/ml for HPV-18. Typical natural titers were determined by using blood samples obtained from women in a prior epidemiologic study that was found to be seropositive for HPV-16 or HPV-18 by ELISA.

女性は、ワクチン接種後の最初の7日間に経験した症状を3等級スケールの症状強度として日記カードに記録した。また、彼女らは、ワクチン接種後の最初の30日以内の全ての有害事象を、面接により、研究職員に報告した。該研究全体を通じて、重大な有害事象および妊娠に関する情報を集めた。 Women recorded the symptoms they experienced during the first 7 days after vaccination on a diary card as a 3-grade scale of symptom intensity. In addition, they reported all adverse events within the first 30 days after vaccination to research personnel by interview. Information on serious adverse events and pregnancy was collected throughout the study.

統計的方法
12ヶ月にわたるHPV-16型およびHPV18型の感染の両方の累積発生率を6％と仮定して、我々は、処理群当たり500人の女性が、0を超えるワクチン有効性の95％ CIの下限を評価する上で80％の検出力（power）を有すると見積もった。我々は18ヶ月にわたる80％の維持率（retention rate）を仮定した。専ら将来の研究計画目的のために、有効性、安全性および免疫原性に関する中間解析を行った。中間解析を行った後の最終分析のためにα値を補正するためには、O'BrienおよびFlemingの方法を用いた（総α= 0.05; 両側検定）［PC O'BrienおよびTR. Fleming, A multiple testing procedure for clinical trials. Biometrics 35 (1979), pp. 549-556］。 Statistical method
Assuming a cumulative incidence of both HPV-16 and HPV18 infections over 12 months of 6%, we found that 500 women per treatment group had a 95% CI lower limit of >0 vaccine efficacy. Was estimated to have a power of 80%. We assumed an 80% retention rate over 18 months. Interim analyzes on efficacy, safety and immunogenicity were performed exclusively for future research planning purposes. The method of O'Brien and Fleming was used to correct the α value for the final analysis after performing the interim analysis (total α = 0.05; two-sided test) [PC O'Brien and TR. Fleming, A multiple testing procedure for clinical trials. Biometrics 35 (1979), pp. 549-556].

有効なアルゴリズムによる層別ブロックランダム化をインターネットランダム化システムで集中制御した。層別は年齢（15〜17歳、18〜21歳および22〜25歳）および地域（北米およびブラジル）によるものであった。各ワクチン用量は、研究職員によりコンピューター化ランダム化システムに入力された特定の参加者情報に基づいて無作為に選択された数によるものであった。処理割付けは、研究者および長期追跡研究に参加している女性には秘密にされたままである。 Layered block randomization by an effective algorithm was centrally controlled by the Internet randomization system. Stratification was by age (15-17 years, 18-21 years and 22-25 years) and region (North America and Brazil). Each vaccine dose was due to a randomly selected number based on specific participant information entered into the computerized randomization system by research staff. Treatment allocations remain secret for researchers and women participating in long-term follow-up studies.

ITT（intention-to-treat；意図した治療）およびATP（according-to-protocol；プロトコール遵守）コホートが図に示されている。ここでは、分析から除外される理由が順位で列挙されており、2以上の除外基準を満たした女性は、最高順位付け基準に従い1度だけカウントされた。ITTおよびATP解析に参加した参加者の集合はコホートと称されるが、ATPへの対象者の組み入れを制限するために用いた情報は、追跡調査後に初めて知らされた。 The ITT (intention-to-treat) and ATP (according-to-protocol) cohorts are shown in the figure. Here, the reasons for being excluded from the analysis are listed by rank, and women who meet two or more exclusion criteria are counted only once according to the highest ranking criteria. Although the set of participants who participated in the ITT and ATP analyzes is called a cohort, the information used to limit their inclusion in the ATP was made public only after follow-up.

我々は有効性に関してATP分析およびITT分析の両方を行った。ATP 18ヶ月解析におけるワクチン有効性の計算は、ワクチン接種群対プラシーボ群におけるHPV-16/18感染を有する参加者の割合に基づくものであった。ワクチン有効性は、これらの2つの割合間の比率を1から引き算したものと定義され、95％ CIは有効性推定の精度を示すものであった。p値は、フィッシャーの直接両側検定で計算した。対応する比率は、その結果を有する症例数を、リスクを有する参加者数で割り算して得られた値として表した。ATP 18ヶ月コホートは、3回の計画されたワクチン投与を受け、図に記載のプロトコールに従った登録女性を含めた。 We performed both ATP and ITT analyzes for efficacy. The calculation of vaccine efficacy in the 18-month ATP analysis was based on the proportion of participants with HPV-16/18 infection in the vaccinated versus placebo groups. Vaccine efficacy was defined as the ratio between these two proportions minus one, with a 95% CI indicating the accuracy of the efficacy estimate. P-values were calculated by Fisher's exact two-tailed test. Corresponding proportions were expressed as the number of cases with the result divided by the number of participants at risk. The ATP 18 month cohort included enrolled women who received 3 planned vaccinations and followed the protocol described in the figure.

ITTおよびATP 27ヶ月解析におけるワクチン有効性の計算は、ワクチン接種群対プラシーボ群におけるHPV-16/18感染症例の発生までに要した期間を用いたコックス比例ハザードモデルに基づくものであった。これは、各群における累計個人-時間データに関するコントロールを可能にした。ワクチン有効性は、1からハザード比率を引き算した値を使用して計算し、p値は、ログランク検定を用いて計算した。対応する比率は、症例数を合計の個人-時間（person-time）で割り算して得た値として表した。ワクチンまたはプラシーボの少なくとも1回の投与を受け、0ヶ月において高リスクHPV-DNAに関して陰性であり、結果測定のために入手可能なデータを有する全ての登録女性を、ITTコホートに含めた。ATP 27ヶ月コホートには、ATP 18ヶ月コホートから得た結果、および拡張段階（18ヶ月〜27ヶ月）の間に生じた結果を含めた。 Vaccine efficacy calculations in the 27-month ITT and ATP analyzes were based on the Cox proportional hazards model with the time required to develop HPV-16/18-infected cases in the vaccinated versus placebo groups. This allowed control over cumulative individual-time data in each group. Vaccine efficacy was calculated using 1 minus the hazard ratio and p-values were calculated using the log-rank test. Corresponding proportions were expressed as the number of cases divided by the total person-time. All enrolled women who received at least one dose of vaccine or placebo, were negative for high-risk HPV-DNA at 0 months, and had available data for outcome measurements were included in the ITT cohort. The ATP 27-month cohort included results from the ATP 18-month cohort and results that occurred during the diastolic phase (18-27 months).

安全性解析のためのp値の計算は、フィッシャーの直接検定比較を用いて行った。ワクチンまたはプラシーボの少なくとも1回の投与を受け、特定の最小限のプロトコール要件に従った全ての登録女性を、安全性分析のためのコホートに含めた（以下の図を参照されたい）。 Calculation of p-values for safety analysis was performed using Fisher's exact test comparison. All enrolled women who received at least one dose of vaccine or placebo and who followed certain minimum protocol requirements were included in the cohort for safety analysis (see figure below).

ATP安全性コホートの部分集団において免疫原性を評価した。その亜集団には、0ヶ月、7ヶ月および18ヶ月時の血清学的結果を有する女性であって、スケジュール通りに研究ワクチンまたはプラシーボの3回の投与を全て受け、血液採取スケジュールを遵守し、該治験中にHPV-16/18-DNAに関して陽性にならなかった女性を含めた。ワクチン群とプラシーボ群との間で血清陽性率をフィッシャーの直接検定（p < 0.001を有意と判定）で比較した。幾何平均力価をANOVAおよびKruskal-Wallis検定で比較した。 Immunogenicity was evaluated in a subpopulation of the ATP safety cohort. The subpopulation was a woman with serological results at 0, 7, and 18 months, who received all three doses of study vaccine or placebo on schedule and adhered to a blood sampling schedule, Women who did not become positive for HPV-16/18-DNA during the trial were included. The seropositivity rates were compared between the vaccine group and the placebo group by Fisher's direct test (p <0.001 was determined to be significant). Geometric mean titers were compared by ANOVA and Kruskal-Wallis test.

ブロックランダム化および統計解析はSAS version 8.2 (SAS Institute, Cary, North Carolina)を用いて行った。 Block randomization and statistical analysis were performed using SAS version 8.2 (SAS Institute, Cary, North Carolina).

結果
交差防御に関する最初の解析の結果を、参照によりその内容全体を本明細書に組み入れる特許出願WO2004/056389に示している。 Results The results of the first analysis on cross protection are shown in patent application WO 2004/056389, the entire contents of which are incorporated herein by reference.

更なる解析
該治験の基準のすべてを遵守した患者について「ATP」（According To Protocol）群として解析を行った。該ATP群において、すべての患者は0、1および6ヶ月時の3回のワクチン投与を受け、6ヶ月時に血清陰性であった。 It was analyzed as "ATP" (A ccording T o P rotocol) group for in compliance with all the criteria further analysis the trial patients. In the ATP group, all patients received three vaccinations at 0, 1 and 6 months and were seronegative at 6 months.

表4に示すデータにより示されるとおり、HPV 16およびHPV 18 VLPの混合物を用いた免疫化は、対照と比較して、HPV 31、52および45型による偶発性感染に対して統計的に有意な交差防御をもたらした。 As shown by the data presented in Table 4, immunization with a mixture of HPV 16 and HPV 18 VLPs was statistically significant for incident infections with HPV 31, 52 and 45 compared to controls. Brought cross defense.

偶発性感染に対する統計的に有意な交差防御は、すべてのHPV 16関連型（HPV-31、33、35、52および58）の群、および16と18とを除くすべての高リスク型（HPV 31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66および68）の群に対しても認められた。 Statistically significant cross-protection against incident infections was found in all HPV 16-related groups (HPV-31, 33, 35, 52 and 58) and in all high-risk groups except 16 and 18 (HPV 31 , 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 and 68).

また、持続性感染に対する統計的に有意な交差防御が、31および52型に対して認められ（表5を参照されたい）、すべてのHPV 16関連型の群に対しても認められた（表5を参照されたい）。 Statistically significant cross-protection against persistent infection was also observed for types 31 and 52 (see Table 5) and for all HPV 16-related groups (Table 5). See 5).

統計的に有意な交差防御は、HPV 52に関連した細胞学的異常に対しても認められた。表6を参照されたい。すべてのHPV 16関連型（HPV-31、33、35、52および58）の群および16と18とを除くすべての高リスク型（31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66および68）の群に関連した細胞学的異常に対しても、統計的に有意な防御が認められた。 Statistically significant cross protection was also observed for HPV 52-related cytological abnormalities. See Table 6. All HPV 16 related types (HPV-31, 33, 35, 52 and 58) and all high risk types except 16 and 18 (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, There was also statistically significant protection against cytological abnormalities associated with groups 58, 59, 66 and 68).

表4、5および6中、
N = 特定のコホート内の対象者の数
AR = 発病率 = n（表毎に適宜、HPVの偶発性感染、持続性感染または細胞学的異常のいずれかを有する対象者の数）/ N
ワクチン有効性（％） = 1 - (A / B) × 100［ワクチン群およびプラシーボ群の相対サイズに関して補正した］
上記式中、
A = 表毎に適宜、偶発性感染、持続性感染または細胞学的異常を有するワクチン群に含まれる女性の％
B = 表毎に適宜、偶発性感染、持続性感染または細胞学的異常を有するプラシーボ群に含まれる女性の％ In Tables 4, 5 and 6,
N = number of participants in a particular cohort
AR = Incidence rate = n (Number of subjects with either incidental HPV infection, persistent infection or cytological abnormalities, as appropriate for each table) / N
Vaccine efficacy (%) = 1-(A / B) x 100 [corrected for relative size of vaccine and placebo groups]
In the above formula,
A =% of women in the vaccine group with incidental, persistent or cytological abnormalities, as appropriate for each table
B =% of women in the placebo group with incidental, persistent or cytological abnormalities, as appropriate for each table

Claims

An immunogenic composition comprising VLPs or capsomeres from HPV 16 and 18 and at least one other HPV cancer type, wherein the other cancer type is from the group consisting of HPV 31, 45 and 52 types. An immunogenic composition selected from which the dose of VLPs or capsomeres of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.

The composition of claim 1, wherein the other cancer type is HPV 31.

The composition of claim 1, wherein the other cancer type is HPV 45.

The composition of claim 1, wherein the other cancer type is HPV 52.

The composition of claim 1, wherein the other cancer types are HPV 31 and HPV 45.

The composition of claim 1, wherein the other cancer types are HPV 31 and HPV 52.

The composition of claim 1, wherein the other cancer types are HPV 52 and HPV 45.

The composition of claim 1, wherein the other cancer types are HPV 31, HPV 45 and HPV 52.

9.The composition of any one of claims 1-8, wherein the composition comprises 10 μg or more of HPV 16 and/or HPV 18 VLPs or capsomeres, and 2-9 μg of VLPs or capsomeres from another cancer type. Immunogenic composition.

9.The composition of any one of claims 1-8, wherein the composition comprises 20 μg or more of HPV 16 and/or HPV 18 VLPs or capsomeres and 5-15 μg of VLPs or capsomeres from another cancer type. Immunogenic composition.

11. The immunogenic composition of claim 10, wherein the composition comprises 10 μg VLPs or capsomeres from another cancer type.

The immunogenic composition according to any one of claims 1 to 11, in combination with an adjuvant.

13. The composition of claim 12, wherein the adjuvant is an aluminum salt.

14. The composition of claim 13, wherein the adjuvant is aluminum hydroxide.

13. The composition according to claim 12, wherein the adjuvant is a lipid A derivative.

16. The composition of claim 15, wherein the adjuvant is 3D MPL.

18. The composition of claim 16, wherein the adjuvant is 3D MPL and aluminum hydroxide.

A vaccine comprising the immunogenic composition according to any one of claims 1 to 17 and a pharmaceutically acceptable excipient.

A method of preventing HPV infection and/or disease comprising administering to an individual in need thereof a composition or vaccine as described above.

A method of making an immunogenic composition as described above, comprising mixing VLPs or capsomeres from HPV 16 and 18 with at least one other HPV cancer type, wherein the other cancer type is , HPV 31, 45 and 52, wherein the dose of VLPs or capsomeres of at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.

A method of preventing or treating HPV infection and/or disease comprising delivering to an individual an immunogenic composition comprising VLPs or capsomeres from HPV 16 and 18 and at least one other HPV cancer type The method wherein the another cancer type is selected from the group consisting of HPV types 31, 45 and 52 and wherein the dose of VLPs or capsomeres of the at least one other cancer type is lower than that of HPV 16 or 18.