JP2012034671A - 土壌線虫の分離方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 軟質チューブに比重液を入れてピンチコックで止める。土壌分散液を比重液の上部に入れてピンチコックをはずし、土壌を沈降させる。チューブを横置きに静置して軟質チューブを巻き取って分離した線虫の溶液を排出取得し、沈降した土壌はチューブ内に残留させることを特徴とする線虫の分離方法。
【選択図】図1
Description
これに対して土壌線虫の密度測定や天敵微生物の寄生度の測定など、より詳細な分析を通して農薬の使用法の削減を図ることや有機質資材および天敵微生物の防除効果を確認することが検討されており、更には土壌中の微生物相を豊かにして特定の病原微生物の占有を防ぎ、化学農薬に頼らない作物の栽培を行なうことも実施され、今日、線虫をはじめ土壌微生物分析法の効率化と精緻化はますます重要な課題となっている。
1.土壌20gを、ティッシュペーパーが敷かれた網皿に入れ、水を張ったベルマン漏斗に置く。
2.72時間後に線虫の集まった管びんを回収する。
1.50mlの遠沈管に土壌10gと水20mlを入れてよくかき混ぜる。
2.遠沈管の底までピペットを挿入し、40%砂糖水10mlを静かに入れる。
3.1,500回転で1分間遠心。泥水は底に沈殿し、線虫は水と砂糖水の境界線に集まる。
4.上澄を20−40μmのふるいでこして,ふるいの上に残った線虫を集める。あるいは水と砂糖水の境界線からピペットで線虫を吸い取る(非特許文献1)。
「平成21年度野菜の難防除害虫(B)研修テキスト」、北海道農業研究センター Jenkins,W.R.(1964)Pl.Dis.Reptr.48,372−381 高木一夫(1970)応動昆14,108−110 Minagawa,N.(1979)Appl.Entmol.Zool.14,469−477,佐野善一(1975)日線虫研誌5,41−47 「線虫学実験法」日本線虫学会、2004年3月発行
底部をシールしたポリエチレンチューブ(直径30mm 長さ1000mm 厚さ50μm)に25%ショ糖水溶液200mlを注入しピンチコック1をする。次いで水200mlを注入しピンチコック2をする。被検土壌50gを水200mlに懸濁して液を注入する。(図1)。ピンチコックを1、2の順にはずすと、土壌懸濁液から土壌粒子が沈降し水層を通過してショ糖液に移行し底部に沈降する。ショ糖液と水層は界面を形成する。チューブを横に静置して土壌を沈降させ、出口に細管を付けて端からチューブを巻き取ると水層及びショ糖液が流出し、土壌は巻き取ったチューブ内に残る。取得した線虫溶液は570ml、残渣土壌はポリエチレンチューブを含めて78gであった。線虫溶液を50μmのナイロンメッシュに通して線虫を回収し水洗する。総ての操作は約10分で終了した。少量の水でサンプル皿にとり生物顕微鏡で数えた。
被検土壌25gを2%ヘキサメタリン酸ナトリウム液100mlに分散した。分散液は5分間超音波処理した後、250ml遠心管に入れた50%ショ糖液85mlの上に加えて、遠心分離機を用いて1分間、500rpmで2層遠心分離を行なった。上水を20ミクロンナイロンメッシュで線虫を回収した。回収した線虫を生物顕微鏡で数え、土壌50g当りに換算した。
Claims (5)
- 土壌からチューブ及び比重液を用いて線虫を分離する方法。
- 請求項1においてチューブ及び比重液に加えて土壌凝集剤溶液を用いる請求項1に記載の方法。
- 請求項1においてチューブが軟質であり透明である請求項1に記載の方法。
- 請求項1において比重液がショ糖液である請求項1に記載の方法。
- 請求項2において土壌凝集剤溶液が塩化マグネシウム溶液である請求項2に記載の方法。
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