JP2012031135A - Prevention or improving agent for fructose-induced disease - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、フルクトースの摂取により誘発される疾患の予防又は改善剤に関する。 The present invention relates to a preventive or ameliorating agent for diseases induced by ingestion of fructose.
近年、メタボリックシンドロームと呼ばれる内臓脂肪の蓄積を中心とし、高血糖（糖尿病）、脂質異常、高血圧等の心血管病に対する複数のリスクを合併した症候群が増加しており、インスリン感受性の低下（インスリン抵抗性）がこれら症状の発症及び進展に重要な役割を担うとされている。インスリン抵抗性の発生には、内臓脂肪の過剰な蓄積や非脂肪組織（肝臓、筋肉など）における脂肪の蓄積が関与することが報告されている（非特許文献１及び２）。 In recent years, there has been an increase in syndromes with multiple risks for cardiovascular diseases such as hyperglycemia (diabetes), dyslipidemia, and hypertension, centering on the accumulation of visceral fat called metabolic syndrome, and decreased insulin sensitivity (insulin resistance Gender) is said to play an important role in the onset and progression of these symptoms. It has been reported that the occurrence of insulin resistance involves excessive accumulation of visceral fat and accumulation of fat in non-adipose tissue (liver, muscle, etc.) (Non-patent Documents 1 and 2).
特に、肝臓に脂肪が蓄積した状態は脂肪肝と呼ばれ、この脂肪肝は、健康診断で高脂血症と並び、異常所見とされることが多い項目である。脂肪肝の罹患者は増加の一途を辿っており、現在、日本人の約２５％が脂肪肝であると推測されている（非特許文献３）。脂肪肝は、生活習慣病の発症、悪化に関与するだけでなく、症状が進行すると、肝炎、肝硬変等の肝障害の原因となることが知られている（非特許文献４）。 In particular, a state in which fat is accumulated in the liver is called fatty liver, and this fatty liver is an item that is often regarded as an abnormal finding along with hyperlipidemia in health examinations. The number of patients with fatty liver is increasing, and it is estimated that about 25% of Japanese people have fatty liver (Non-patent Document 3). It is known that fatty liver not only contributes to the onset and worsening of lifestyle-related diseases, but also causes liver disorders such as hepatitis and cirrhosis as the symptoms progress (Non-Patent Document 4).
一方、フルクトースは甘味料として様々な食品に利用される糖分の一種である。このため、フルクトースの摂取量は、日米ともに年々増加しており、特に米国ではソフトドリンクの摂取量とともに飛躍的に増加しており（非特許文献５）、日常生活においてフルクトースを過剰に摂取しやすい状態にある。このフルクトースの過剰摂取についての動物やヒトを対象とした研究から、フルクトースの過剰摂取がインスリン抵抗性や脂肪肝等の様々な代謝異常症状を引き起こすことが報告されている（非特許文献６及び７）。
このことから、今後益々、フルクトースの摂取を原因としたインスリン抵抗性、脂肪肝や高脂血症等の疾患の予防又は改善は、非常に重要となってくる。
On the other hand, fructose is a kind of sugar used in various foods as a sweetener. For this reason, the intake of fructose has been increasing year by year in both Japan and the United States, especially in the United States, and has increased dramatically with the intake of soft drinks (Non-patent Document 5), and excessive intake of fructose in daily life. It is in an easy state. Research on animals and humans regarding the excessive intake of fructose has reported that excessive intake of fructose causes various metabolic abnormalities such as insulin resistance and fatty liver (Non-Patent Documents 6 and 7). ).
From this, prevention or improvement of diseases such as insulin resistance, fatty liver and hyperlipidemia caused by ingestion of fructose will become increasingly important in the future.
また、近年、炭水化物の摂取に応答して発現増加及び活性化する核内受容体転写因子であるＣｈＲＥＢＰ（Carbohydrate response element binding protein）は、糖負荷を原因とした各種疾患の発症に関与することが報告され（非特許文献８及び９）、当該ＣｈＲＥＢＰの抑制がフルクトースの摂取を原因とした疾患や症状の予防又は改善に重要であると考えられている。
また、ＣｈＲＥＢＰの直接的な下流因子であるＰＫＬＲ（Pyruvate kinase liver and red blood cell）は、フルクトースから脂肪酸への変換において重要な役割を果たしていることから、ＰＫＬＲの抑制もまた、フルクトースの摂取を原因とした疾患や症状の予防又は改善に重要であると考えられている。
In recent years, ChREBP (Carbohydrate response element binding protein), a nuclear receptor transcription factor that increases and activates in response to carbohydrate intake, may be involved in the development of various diseases caused by glucose load. It has been reported (Non-patent Documents 8 and 9), and suppression of the ChREBP is considered to be important for the prevention or improvement of diseases and symptoms caused by the intake of fructose.
In addition, PKLR (Pyruvate kinase liver and red blood cell), which is a direct downstream factor of ChREBP, plays an important role in the conversion of fructose to fatty acid, and thus suppression of PKLR is also caused by the intake of fructose. It is considered important for the prevention or improvement of the diseases and symptoms.
従来、魚油等の高度不飽和脂肪酸を含有する油脂に、高炭水化物の摂取により上昇する肝臓トリグリセリド濃度を低下させる作用があること（特許文献１）、また、リン脂質に、血中コレステロールの低下作用（特許文献２）、抗アレルギー作用（特許文献３）等があることが報告されている。 Conventionally, fats and oils containing polyunsaturated fatty acids such as fish oil have an action of lowering liver triglyceride concentration that increases due to intake of high carbohydrates (Patent Document 1), and phospholipids have an action of lowering blood cholesterol. (Patent Document 2), antiallergic action (Patent Document 3) and the like have been reported.
しかしながら、フルクトースの摂取を原因としたインスリン抵抗性、脂肪肝及び高脂血症等の疾患や症状、言い換えれば、フルクトースの摂取によって誘発されるこれら疾患や症状に対する有効な物質については、全く知られてはいない。 However, it is quite known about diseases and symptoms such as insulin resistance, fatty liver and hyperlipidemia caused by ingestion of fructose, in other words, effective substances for these diseases and symptoms induced by ingestion of fructose. Not.
本発明は、安全性に優れ、フルクトースの摂取により誘導されるインスリン抵抗性や脂肪肝、高脂血症等の疾患又は症状、及びこれらに起因又は関連して発症する種々の疾患の予防又は改善のための医薬品等、又は当該医薬品、食品、飼料等の有効成分として用いることができる素材を提供することに関する。 The present invention is excellent in safety and prevents or ameliorates diseases or symptoms such as insulin resistance, fatty liver, and hyperlipidemia induced by ingestion of fructose, and various diseases that develop due to or in association with these diseases or symptoms. It is related with providing the raw material which can be used as an active ingredient, such as a pharmaceutical for the purpose, or the said pharmaceutical, a foodstuff, feed.
本発明者らは、種々の物質について検討した結果、天然成分に含まれるリン脂質に、フルクトースの摂取により誘導される疾患又は症状（例えばインスリン抵抗性、脂肪肝及び高脂血症）の予防又は改善効果があることを見出した。 As a result of examining various substances, the present inventors have found that prevention or prevention of diseases or symptoms (for example, insulin resistance, fatty liver and hyperlipidemia) induced by ingestion of fructose into phospholipids contained in natural ingredients. It was found that there is an improvement effect.
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（８）に係るものである。
（１）リン脂質を有効成分とするフルクトース誘導性疾患の予防又は改善剤。
（２）フルクトース誘導性疾患が、フルクトース摂取により誘導される、インスリン抵抗性、脂肪肝又は高脂血症である上記（１）の予防又は改善剤。
（３）リン脂質がリゾ体である上記（１）又は（２）の予防又は改善剤。
（４）リン脂質が大豆由来のものである上記（３）の予防又は改善剤。
（５）リン脂質を有効成分とするＣｈＲＥＢＰ発現抑制剤。
（６）リン脂質がリゾ体である上記（５）のＣｈＲＥＢＰ発現抑制剤。
（７）リン脂質を有効成分とするＰＫＬＲ発現抑制剤。
（８）リン脂質がリゾ体である上記（７）のＰＫＬＲ発現抑制剤。
That is, the present invention relates to the following (1) to (8).
(1) A preventive or ameliorating agent for fructose-induced diseases comprising phospholipid as an active ingredient.
(2) The preventive or ameliorating agent of (1) above, wherein the fructose-induced disease is insulin resistance, fatty liver or hyperlipidemia induced by ingestion of fructose.
(3) The preventive or ameliorating agent according to (1) or (2) above, wherein the phospholipid is a lyso form.
(4) The preventive or improving agent according to (3) above, wherein the phospholipid is derived from soybean.
(5) A ChREBP expression inhibitor containing phospholipid as an active ingredient.
(6) The ChREBP expression inhibitor of the above (5), wherein the phospholipid is a lyso form.
(7) A PKLR expression inhibitor comprising phospholipid as an active ingredient.
(8) The PKLR expression inhibitor of the above (7), wherein the phospholipid is a lyso form.
本発明によれば、フルクトースの摂取により誘導される、インスリン抵抗性、脂肪肝及び高脂血症並びにこれらに起因又は関連して発症する種々の疾患を予防又は改善するための医薬品又は食品等を提供することができる。 According to the present invention, there is provided a pharmaceutical or food for preventing or improving insulin resistance, fatty liver and hyperlipidemia and various diseases caused by or related to these induced by ingestion of fructose. Can be provided.
本発明のリン脂質としては、好適にはグリセロリン脂質が挙げられ、当該分子から脂肪酸が外れたリゾ体（リゾリン脂質）を包含するものである。
前記グリセロリン脂質は、グリセリン骨格のＣ−１、２位に脂肪酸がエステル結合しているものが好ましく、また、リゾグリセロリン脂質は、このＣ２位の脂肪酸が外れたものを云う。
Preferable examples of the phospholipid of the present invention include glycerophospholipid, which includes a lyso form (lysophospholipid) in which a fatty acid is removed from the molecule.
The glycerophospholipid preferably has a fatty acid ester-bonded at positions C-1 and C-2 of the glycerin skeleton, and the lysoglycerophospholipid means that the fatty acid at the C2 position is removed.
本発明のリン脂質としては、より具体的には、例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール及びホスファチジン酸等のグリセロリン脂質又はそのリゾ体が挙げられ、このうち、安全性や薬理作用の点から、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール又はそれらのリゾ体が好ましく、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール又はそれらのリゾ体がより好ましく、ホスファチジルエタノールアミン又はそのリゾ体がさらに好ましい。 More specifically, examples of the phospholipid of the present invention include glycerophospholipids such as phosphatidylserine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylcholine, phosphatidylglycerol, phosphatidylinositol, and phosphatidic acid, or lyso forms thereof. From the viewpoint of pharmacological action, phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, or a lyso form thereof is preferable, phosphatidylethanolamine, phosphatidylinositol, or a lyso form thereof is more preferable, and phosphatidylethanolamine or a lyso form thereof is more preferable.
上記リン脂質を構成する脂肪酸としては、特に限定されず、飽和脂肪酸又は不飽和脂肪酸の何れでもよいが、例えば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、エライジン酸、リノール酸、α−リノレン酸、及びドコサヘキサエン酸の他、大豆油脂肪酸、菜種油脂肪酸、とうもろこし油脂肪酸等の動植物由来の混合脂肪酸が挙げられる。このうち、リノール酸、オレイン酸、パルミチン酸、α−リノレン酸及び大豆油脂肪酸が好ましい。
また、前記構成脂肪酸における脂肪酸組成としてのパルミチン酸：オレイン酸：リノール酸の各含有量は、それぞれ、１０〜４０質量％：５〜２０質量％：４０〜７０質量％であるのが好ましく、更に１５〜３５質量％：５〜１５質量％：４０〜６０質量％であるのが好ましい。
The fatty acid constituting the phospholipid is not particularly limited and may be either a saturated fatty acid or an unsaturated fatty acid. For example, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, elaidic acid, linoleic acid, In addition to α-linolenic acid and docosahexaenoic acid, mixed fatty acids derived from animals and plants such as soybean oil fatty acid, rapeseed oil fatty acid, corn oil fatty acid and the like can be mentioned. Of these, linoleic acid, oleic acid, palmitic acid, α-linolenic acid and soybean oil fatty acid are preferred.
Moreover, it is preferable that each content of the palmitic acid: oleic acid: linoleic acid as a fatty-acid composition in the said constituent fatty acid is 10-40 mass%: 5-20 mass%: 40-70 mass%, respectively. It is preferable that it is 15-35 mass%: 5-15 mass%: 40-60 mass%.
本発明において、前記リン脂質は、単体又は２種以上混合物（混合リン脂質）として使用することができるが、混合リン脂質としては、当該リン脂質を含む動植物（例えば、大豆、米、とうもろこし、菜種、綿実、小麦、落花生、ひまし、ヒマワリ、大麦、エンバク、紅花、ゴマ等の植物；卵黄、乳、魚介類等の動物の組織）を原料（由来）として得られる抽出レシチンを用いることができ、天然成分由来で安全性も高いことから当該抽出レシチンを用いるのが好ましい。更に、大豆油を製造する工程で発生する粗レシチンを、アセトンやエタノール等の溶剤で処理した不溶画分を抽出レシチンとして用いるのが好ましい。また、粗レシチン又は抽出レシチンから精製した精製レシチンを使用することもできる。また、抽出レシチンとして、ＳＬＰ−ホワイト（大豆由来リン脂質；辻製油）等の市販品を用いることもできる。
ここで、「レシチン」とは、広義の意味であり、動植物由来のリン脂質を含む脂質製品を云う。なお、レシチン中の全リン脂質の含有量は、レシチン全量中、２０質量％以上、より５０質量％以上であるのが好ましい。
In the present invention, the phospholipid can be used alone or as a mixture of two or more kinds (mixed phospholipid). As the mixed phospholipid, animals and plants containing the phospholipid (for example, soybean, rice, corn, rapeseed). Extracted lecithin obtained from the raw material (origin) of plants such as cottonseed, wheat, peanut, sunflower, sunflower, barley, oat, safflower, sesame, etc .; animal tissues such as egg yolk, milk, seafood, etc.) The extracted lecithin is preferably used because it is derived from natural ingredients and has high safety. Furthermore, it is preferable to use an insoluble fraction obtained by treating crude lecithin generated in the step of producing soybean oil with a solvent such as acetone or ethanol as the extracted lecithin. In addition, purified lecithin purified from crude lecithin or extracted lecithin can also be used. In addition, as the extracted lecithin, a commercially available product such as SLP-white (soybean-derived phospholipid; smoked oil) can be used.
Here, “lecithin” has a broad meaning and refers to a lipid product containing phospholipids derived from animals and plants. In addition, it is preferable that content of the total phospholipid in a lecithin is 20 mass% or more in a lecithin whole quantity, and is 50 mass% or more more.
また、抽出レシチン中の、ホスファチジルコリン及びそのリゾ体：ホスファチジルエタノールアミン及びそのリゾ体：ホスファチジルイノシトール及びそのリゾ体の各含有量は、それぞれ、１０〜３５質量％：１〜３０質量％：１〜３０質量％であるのが好ましく、更に１５〜３５質量％：５〜２０質量％：５〜２０質量％であるのが好ましい。 Moreover, each content of phosphatidylcholine and its lyso form: phosphatidylethanolamine and its lyso form: phosphatidylinositol and its lyso form in extracted lecithin is 10-35 mass%: 1-30 mass%: 1-30, respectively. It is preferable that it is mass%, and it is further preferable that it is 15-35 mass%: 5-20 mass%: 5-20 mass%.
前記リン脂質を単体で用いる場合は、上述の如き動植物等の組織からの抽出・単離、又は化学合成により得ることが可能である。例えば、ホスファジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン又はホスファジルイノシトールは、大豆より得られる粗大豆レシチンから定法に従って抽出・精製することにより得ることができる。例えば、大豆油の製造の際に生成する粗大豆レシチンを溶媒分画（固液抽出法）、イオン交換クロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー等により分離精製することによって得ることができる。また、ホスファチジルエタノールアミン又はホスファジルイノシトールは、酵素を用いた塩基交換法によってホスファチジルコリンから合成して得ることもできる。 When the phospholipid is used alone, it can be obtained by extraction / isolation from tissues such as animals and plants as described above, or chemical synthesis. For example, phosphadylcholine, phosphatidylethanolamine or phosphatidylinositol can be obtained by extraction and purification from crude soybean lecithin obtained from soybean according to a conventional method. For example, crude soybean lecithin produced during the production of soybean oil can be obtained by separation and purification by solvent fractionation (solid-liquid extraction method), ion exchange chromatography, silica gel column chromatography, thin layer chromatography, etc. . Phosphatidylethanolamine or phosphatidylinositol can also be obtained by synthesis from phosphatidylcholine by a base exchange method using an enzyme.
また、リゾ体は、上述のリン脂質からホスホリパーゼＡ2等の酵素処理により生産したものを用いることができ、又はＳＬＰ−ホワイトリゾ（大豆由来リゾリン脂質；辻製油）等の市販品を用いることもできる。 The lyso form may be produced from the above phospholipids by enzymatic treatment such as phospholipase A 2 , or a commercially available product such as SLP-white lyso (soybean-derived lysophospholipid; smoked oil) may be used. it can.
後記実施例に示すように、本発明のリン脂質は、フルクトース摂取により誘導される、インスリン抵抗性、脂肪肝及び高脂血症の抑制作用を有し、またＣｈＲＥＢＰ及びＰＫＬＲの発現を抑制する。よって、本発明のリン脂質は、ヒトを含む動物に摂取又は投与して、フルクトース摂取により誘導される疾患（以下、「フルクトース誘導性疾患」とも云う）の予防又は改善、ＣｈＲＥＢＰ発現抑制やＰＫＬＲ発現抑制を図るために使用することができる。また、本発明のリン脂質は、フルクトース誘導性疾患の予防又は改善剤、ＣｈＲＥＢＰ発現抑制剤及びＰＫＬＲ発現抑制剤（以下、「フルクトース誘導性疾患の予防・改善剤等」と云う）となり得、また、フルクトース誘導性疾患の予防・改善剤等を製造するために使用することができる。 As will be described later in Examples, the phospholipid of the present invention has an inhibitory action on insulin resistance, fatty liver and hyperlipidemia induced by ingestion of fructose, and suppresses the expression of ChREBP and PKLR. Therefore, the phospholipid of the present invention is taken or administered to animals including humans to prevent or ameliorate diseases induced by fructose intake (hereinafter also referred to as “fructose-induced diseases”), ChREBP expression suppression and PKLR expression. Can be used for suppression. In addition, the phospholipid of the present invention can be a preventive or ameliorating agent for fructose-induced diseases, a ChREBP expression inhibitor and a PKLR expression inhibitor (hereinafter referred to as “fructose-induced disease prevention / amelioration agent, etc.”). It can be used to produce an agent for preventing / ameliorating fructose-induced diseases.
ここで、「フルクトース誘導性疾患」とは、フルクトースの摂取によって引き起こされる様々な代謝異常の疾患・症状（例えばインスリン抵抗性、脂肪肝、高脂血症、高尿酸血漿等）及びこれらに起因又は関連して発症する種々の疾患・症状（例えば、糖尿病、高血圧、動脈硬化症等）を云う。
尚、前述のとおり、ＣｈＲＥＢＰやＰＫＬＲは、糖負荷を原因とした各種疾患の発症に関与することが報告されていることから（非特許文献８及び９）、ＣｈＲＥＢＰやＰＫＬＲの発現を抑制することにより、好ましくはフルクトース摂取により発現が増加するＣｈＲＥＢＰやＰＫＬＲを抑制することにより、フルクトース誘導性疾患を予防又は改善することができる。
As used herein, “fructose-induced disease” refers to various diseases and symptoms of metabolic disorders caused by ingestion of fructose (eg, insulin resistance, fatty liver, hyperlipidemia, high uric acid plasma, etc.) It refers to various diseases and symptoms (for example, diabetes, hypertension, arteriosclerosis, etc.) that develop in relation to each other.
As described above, since it has been reported that ChREBP and PKLR are involved in the development of various diseases caused by glucose load (Non-patent Documents 8 and 9), the expression of ChREBP and PKLR is suppressed. Thus, it is possible to prevent or ameliorate fructose-induced diseases by suppressing ChREBP and PKLR, which are preferably increased in expression by fructose intake.
当該フルクトース誘導性疾患の予防又は改善剤等は、それ自体、フルクトース摂取により誘導される疾患の予防又は改善、ＣｈＲＥＢＰ発現抑制やＰＫＬＲ発現抑制のための、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品であってもよく、又は当該医薬品、医薬部外品、食品又は飼料に配合して使用される素材又は製剤であってもよい。
また、当該食品には、フルクトース摂取によるインスリン抵抗性、脂肪肝及び高脂血症等、又はこれらに起因又は関連して発症する種々の疾患（例えば、糖尿病、高血圧、動脈硬化症）の予防、改善又は治療をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した美容食品、病者用食品若しくは特定保健用食品等の機能性食品が包含される。
The preventive or ameliorating agent for the fructose-induced disease itself is a human or veterinary drug or quasi-drug for preventing or ameliorating a disease induced by fructose intake, suppressing ChREBP expression or suppressing PKLR expression. It may be a material or a preparation used in combination with the pharmaceutical, quasi drug, food or feed.
In addition, the food includes insulin resistance by fructose intake, fatty liver and hyperlipidemia, etc., or prevention of various diseases (for example, diabetes, hypertension, arteriosclerosis) caused by or related to these, Functional foods such as beauty foods, foods for the sick, and foods for specified health use, which are based on the concept of improvement or treatment, and which are indicated as necessary, are included.
本発明のリン脂質を含有する上記医薬品の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、腸溶剤、トローチ剤、ドリンク剤等による経口投与又は注射剤、坐剤、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。
また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、本発明のリン脂質を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤（ソルビトール、グルコース、乳糖、デキストリン、澱粉等の糖類、炭酸カルシウム等の無機物、結晶セルロース、蒸留水、ゴマ油、とうもろこし油、オリーブ油、菜種油等）、結合剤、滑沢剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤、抗酸化剤、細菌抑制剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口投与用製剤中の本発明のリン脂質の含有量は、一般的に０．０１〜９５質量％とするのが好ましく、１０〜８０
質量％とするのがより好ましい。
Examples of the dosage form of the above-mentioned pharmaceutical containing the phospholipid of the present invention include oral administration or injection, suppository, transdermal administration such as tablets, capsules, granules, powders, syrups, intestinal solvents, troches, drinks and the like. Examples include parenteral administration using a skin absorbent, an external preparation and the like.
In order to prepare pharmaceutical preparations of such various dosage forms, the phospholipid of the present invention alone or other pharmaceutically acceptable excipients (sorbitol, glucose, lactose, dextrin, starch, etc.) Saccharides, inorganic substances such as calcium carbonate, crystalline cellulose, distilled water, sesame oil, corn oil, olive oil, rapeseed oil, etc.), binders, lubricants, extenders, disintegrants, surfactants, lubricants, dispersants, Suspending agents, emulsifiers, buffers, preservatives, flavoring agents, fragrances, coating agents, carriers, diluents, antioxidants, bacterial inhibitors, and the like can be used in appropriate combinations.
Among these dosage forms, the preferred form is oral administration, and the content of the phospholipid of the present invention in the preparation for oral administration is generally preferably 0.01 to 95% by mass, and preferably 10 to 80%.
It is more preferable to set it as the mass%.
本発明のリン脂質を含有する食品の形態としては、例えば、パン、麺類等に代表される小麦粉加工食品、お粥、炊き込みご飯等の米加工食品、ビスケット、ケーキ、ゼリー、チョコレート、せんべい、アイスクリーム等の菓子類、豆腐、その加工食品等の大豆加工食品、清涼飲料、果汁飲料、乳飲料、炭酸飲料等の飲料類、ヨーグルト、チーズ、バター、牛乳等の乳製品、醤油、ソース、味噌、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料、ハム、ベーコン、ソーセージ等の蓄肉、蓄肉加工食品、はんぺん、ちくわ、魚の缶詰等の水産加工食品、調理油ならびにフライ用油等が挙げられる。また、この他、当該製剤を配合して、カプセル等の錠剤食、濃厚流動食、自然流動食、半消化態栄養食、成分栄養食、ドリンク栄養食等の経口経腸栄養食品、機能性食品等の形態とすることもできる。
また、飼料としては、ウサギ、ラット、マウス等に用いる小動物用飼料、犬、猫、小鳥、リス等に用いるペットフード等の飼料等が挙げられる。
種々の形態の食品や飼料を調製するには、本発明のリン脂質を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。当該食品中の本発明のリン脂質の含有量は、一般的に０．０１〜２０質量％とするのが好ましく、０．１〜１０質量％とするのがより好ましい。
Examples of the form of food containing the phospholipid of the present invention include processed foods such as bread and noodles, processed rice foods such as rice cakes and cooked rice, biscuits, cakes, jelly, chocolate, rice crackers, ice Sweets such as cream, processed foods such as tofu, processed foods thereof, soft drinks, fruit juice drinks, milk drinks, carbonated drinks and other dairy products such as yogurt, cheese, butter and milk, soy sauce, sauce, miso And seasonings such as mayonnaise and dressing, meat storage such as ham, bacon and sausage, processed meat foods, marine processed foods such as canned fish, chikuwa and canned fish, cooking oil and frying oil. In addition, oral enteral nutritional foods such as capsules, concentrated liquid foods, natural liquid foods, semi-digested nutritional foods, ingredient nutritional foods, drink nutritional foods, etc. It is also possible to adopt a form such as
Examples of the feed include feed for small animals used for rabbits, rats, mice and the like, feed for pet foods used for dogs, cats, small birds, squirrels, and the like.
To prepare various forms of food and feed, the phospholipid of the present invention alone or other food materials, solvents, softeners, oils, emulsifiers, preservatives, fragrances, stabilizers, colorants, Antioxidants, humectants, thickeners and the like can be used in appropriate combinations. In general, the content of the phospholipid of the present invention in the food is preferably 0.01 to 20% by mass, and more preferably 0.1 to 10% by mass.
上記医薬品、医薬部外品、食品又は飼料における本発明のリン脂質の摂取・投与量は、効果が得られる量であれば特に限定されない。また、その摂取・投与量は、対象者の状態、体重、性別、年齢又はその他の要因に従って変動し得るが、成人（６０ｋｇ）１人当たりの１日の投与又は摂取量としては、本発明のリン脂質として、例えば５０〜５０００ｍｇとするのが好ましく、更に１００〜３０００ｍｇ、特に５００〜２０００ｍｇとするのが好ましい。また、当該製剤は、任意の摂取・投与計画に従って摂取・投与され得るが、１日１回〜数回に分け、数週間〜数カ月間継続して摂取・投与することが好ましい。
尚、フルクトース誘導性疾患は、上述の如く、フルクトースを多く摂取することによって引き起こされやすいので、フルクトースを多く含む食品や飲料を摂取する際に、摂取・投与するのが有利である。
また、上記医薬品、医薬部外品又は食品の摂取又は投与対象者としては、それを必要としていれば特に限定されないが、フルクトース誘導性疾患・症状の予防、改善又は治療を目的とするヒトやヒト以外の哺乳動物が好ましい。尚、当該対象者には、フルクトース誘導性疾患・症状が認められる者及びそのおそれがある者やその疾患・症状の予防を期待する者も含まれる。
The intake / dose amount of the phospholipid of the present invention in the above-mentioned pharmaceutical, quasi-drug, food or feed is not particularly limited as long as the effect is obtained. In addition, the intake / dose may vary according to the subject's condition, body weight, sex, age or other factors, but the daily dose or intake per adult (60 kg) may be For example, the lipid is preferably 50 to 5000 mg, more preferably 100 to 3000 mg, and particularly preferably 500 to 2000 mg. The preparation can be ingested / administered according to an arbitrary ingestion / administration plan, but is preferably divided into once to several times a day and continuously ingested / administered for several weeks to several months.
Since fructose-induced diseases are easily caused by ingesting a large amount of fructose as described above, it is advantageous to ingest and administer foods and beverages that contain a large amount of fructose.
In addition, the person who takes or administers the drug, quasi-drug or food is not particularly limited as long as it is necessary, but humans and humans aiming at prevention, improvement or treatment of fructose-induced diseases / symptoms Other mammals are preferred. In addition, the said subject person also includes the person who expects fructose induction disease and symptom, the person who may be, and the prevention of the disease and symptom.
以下、本発明を具体的に説明するために実施例及び試験例を挙げるが本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 Hereinafter, examples and test examples will be given to specifically describe the present invention, but the present invention is not limited to these examples.
実施例１〜４に使用した大豆由来リン脂質は、辻製油より購入した「ＳＬＰ−ホワイト」を使用した。尚、各実施例においては、便宜上これを「リン脂質」と称する。
実施例１〜４に用いた「ＳＬＰ−ホワイト」は、ＴＬＣ分析法に基づき、リン脂質組成として、ホスファチジルコリン ２１．２％、ホスファチジルエタノールアミン １６．４％、ホスファチジルイノシトール １１．５％、ホスファチジン酸 ２．７％、その他 ４８．２％を含有しており、脂肪酸組成として、Ｃ１６：０（パルミチン酸） １９．１％、Ｃ１８：１（オレイン酸） １０．４％、Ｃ１８：２（リノール酸） ５８．５％を含有していた。
また、実施例１〜４に使用した大豆由来リゾリン脂質は、辻製油より購入した「ＳＬＰ−ホワイトリゾ」を使用した。尚、各実施例においては、便宜上これを「リゾリン脂質」と称する。
実施例１〜４に用いた「ＳＬＰ−ホワイトリゾ」は、ＴＬＣ分析法に基づき、リン脂質組成として、ホスファチジルコリン ３．５％、ホスファチジルエタノールアミン １．７％、ホスファチジルイノシトール ８．１％、ホスファチジン酸 ４．４％、リゾホスファチジルコリン ２０．７％、リゾホスファチジルエタノールアミン ９．７％、リゾホスファチジルイノシトール ５．１％、その他 ４６．８％を含有しており、脂肪酸組成として、Ｃ１６：０（パルミチン酸） ３０．０％、Ｃ１８：１（オレイン酸） １０．５％、Ｃ１８：２（リノール酸） ４４．７％を含有していた。
The soybean-derived phospholipid used in Examples 1 to 4 was “SLP-White” purchased from Saga Oil. In each example, this is referred to as “phospholipid” for convenience.
“SLP-White” used in Examples 1 to 4 has a phospholipid composition of phosphatidylcholine 21.2%, phosphatidylethanolamine 16.4%, phosphatidylinositol 11.5%, phosphatidic acid 2 based on TLC analysis. And fatty acid composition as C16: 0 (palmitic acid) 19.1%, C18: 1 (oleic acid) 10.4%, C18: 2 (linoleic acid) It contained 58.5%.
In addition, as the soybean-derived lysophospholipid used in Examples 1 to 4, “SLP-white lyso” purchased from Tsuji Oil was used. In each example, this is referred to as “lysophospholipid” for convenience.
"SLP-white lyso" used in Examples 1 to 4 is phosphatidylcholine 3.5%, phosphatidylethanolamine 1.7%, phosphatidylinositol 8.1%, phosphatidic acid based on TLC analysis. It contains 4.4%, lysophosphatidylcholine 20.7%, lysophosphatidylethanolamine 9.7%, lysophosphatidylinositol 5.1% and other 46.8%. As a fatty acid composition, C16: 0 (palmitic acid 30.0%, C18: 1 (oleic acid) 10.5%, C18: 2 (linoleic acid) 44.7%.
実施例１ リン脂質のフルクトース誘導性インスリン抵抗性の抑制作用
実験動物は、日本ＳＬＣより購入した雄性Ｗｉｓｔａｒラット（６週齢）を用いた。市販固形飼料で１週間予備飼育した後、平均体重が等しくなるように、４群（１群当り６匹）に分けた。
Example 1 Inhibitory effect of phospholipid on fructose-induced insulin resistance Male Wistar rats (6 weeks old) purchased from Japan SLC were used as experimental animals. After pre-feeding with a commercial chow for one week, the animals were divided into 4 groups (6 animals per group) so that the average body weight was equal.
対照群（−）には、１００ｇあたり、５ｇコーン油、５ｇスクロース、２０ｇカゼイン、７．５ｇセルロールパウダー、３．５ｇミネラル混合、１ｇビタミン混合、５８ｇポテトスターチを含有する餌を与えて、８週間飼育した。フルクトース群（リン脂質及びリゾリン脂質−：フルクトース＋）には、上記餌から「５ｇのスクロース及び５５ｇのポテトスターチ」を「フルクトース（６０ｇ）」に置き換えた餌を与えて、８週間飼育した。
リン脂質群（リン脂質＋：フルクトース＋）及びリゾリン脂質群（リゾリン脂質＋：フルクトース＋）には、フルクトース群の餌から、「３ｇのポテトスターチ」を、それぞれ「リン脂質」及び「リゾリン脂質」に置き換えた餌を与え、それぞれの群を８週間飼育した。試験期間中の試験食及び水は自由摂取させた。試験期間中の試験食、水の摂取量に群間差は認められなかった。
８週間の飼育後、１２時間の絶食下で、ラットに２ｇ／ｋｇ体重量になる量のグルコース溶液を経口投与した。経口投与前、及び経口投与１５、３０、６０、１２０分後に尾静脈より採血し、各時間帯における血糖値及びインスリン値を測定した。測定した血糖値及び血中インスリン値より、それぞれについて１２０分までの濃度―時間曲線下面積（Ａｒｅａ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｃｕｒｖｅ；ＡＵＣ）を求め、インスリン感受性を比較した。血糖値はグルコースＣII−テストワコー(ムロターゼ・ＧＯＤ法)を用いて、血中インスリン値はモリナガ インスリン測定キットを用いて測定した。
The control group (-) is fed with a diet containing 5 g corn oil, 5 g sucrose, 20 g casein, 7.5 g cellulose powder, 3.5 g mineral mix, 1 g vitamin mix, 58 g potato starch per 100 g, Raised for a week. The fructose group (phospholipid and lysophospholipid-: fructose +) was fed with a diet in which “5 g of sucrose and 55 g of potato starch” was replaced with “fructose (60 g)” from the above diet and reared for 8 weeks.
In the phospholipid group (phospholipid +: fructose +) and lysophospholipid group (lysophospholipid +: fructose +), “3 g of potato starch”, “phospholipid” and “lysophospholipid” from the feed of the fructose group, respectively. Each group was fed for 8 weeks. During the test period, the test food and water were freely consumed. There were no differences between groups in the intake of test food and water during the study period.
After feeding for 8 weeks, the rats were orally administered with a glucose solution in an amount of 2 g / kg body weight under a 12-hour fast. Blood was collected from the tail vein before oral administration and 15, 30, 60, and 120 minutes after oral administration, and blood glucose level and insulin level were measured in each time zone. From the measured blood glucose level and blood insulin level, the area under the concentration-time curve (AUC) up to 120 minutes was determined for each, and the insulin sensitivity was compared. The blood glucose level was measured using Glucose CII-Test Wako (Murotase GOD method), and the blood insulin level was measured using the Morinaga insulin measurement kit.
図１に示すように、リン脂質及びリゾリン脂質の摂取によりフルクトース摂取による糖負荷後の血糖値、血中インスリン値の上昇が抑制された。このことから、リン脂質及びリゾリン脂質の何れもフルクトース誘導性インスリン抵抗性を予防・改善に有効であることが分る。 As shown in FIG. 1, the intake of phospholipid and lysophospholipid suppressed the increase in blood glucose level and blood insulin level after glucose loading due to fructose intake. This indicates that both phospholipids and lysophospholipids are effective in preventing and improving fructose-induced insulin resistance.
実施例２ リン脂質のフルクトース誘導性脂肪肝の抑制作用
Ｗｉｓｔａｒラット（雄、６週齢、日本ＳＬＣ）を市販固形飼料で１週間予備飼育した後、平均体重が等しくなるように、４群（１群当り６匹）に分けた。
Example 2 Inhibitory Effect of Phospholipids on Fructose-Induced Fatty Liver Wistar rats (male, 6 weeks old, Japan SLC) were preliminarily raised on a commercial chow for 1 week, and then the 4 groups (1 6 animals per group).
実施例１と同様に、対照群、（−）、フルクトース群（リン脂質及びリゾリン脂質−：フルクトース＋）、リン脂質群（リン脂質＋：フルクトース＋）、リゾリン脂質群（リゾリン脂質＋：フルクトース＋）を設け、１０週間飼育した。試験期間中の試験食及び水は自由摂取させた。試験期間中の試験食、水の摂取量に群間差は認められなかった。
１０週間の飼育後、ラットをエーテル麻酔下で開腹し、腹部大静脈から採血した後、肝臓を摘出した。摘出した肝臓の一部よりＦｏｌｃｈらの方法に従い肝臓脂質を抽出した（Folch J., J.Bio.Chem., 23； 497-509 (1957)）。抽出した肝臓脂質はトリグリセライドＥ−テストワコー(ＧＰＯ・ＨＤＡＯＳ法、グリセリン消去法)を用いて肝臓トリアシルグリセロール蓄積量を測定した。
As in Example 1, the control group, (−), fructose group (phospholipid and lysophospholipid−: fructose +), phospholipid group (phospholipid +: fructose +), lysophospholipid group (lysophospholipid +: fructose +) ) And reared for 10 weeks. During the test period, the test food and water were freely consumed. There were no differences between groups in the intake of test food and water during the study period.
After 10 weeks of breeding, the rats were laparotomized under ether anesthesia, blood was collected from the abdominal vena cava, and the liver was removed. Liver lipids were extracted from a part of the extracted liver according to the method of Folch et al. (Folch J., J. Bio. Chem., 23; 497-509 (1957)). The amount of liver triacylglycerol accumulated in the extracted liver lipid was measured using Triglyceride E-Test Wako (GPO / HDAOS method, glycerol elimination method).
図２に示すように、リン脂質、及びリゾリン脂質の摂取によりフルクトース摂取による肝臓トリアシルグリセロール蓄積量の増加が有意に抑制された。このことから、リン脂質及びリゾリン脂質の何れも肝臓脂質の蓄積を抑制し、フルクトース誘導性脂肪肝の予防・改善に有効であることが分る。 As shown in FIG. 2, the increase in the amount of accumulated liver triacylglycerol due to the intake of fructose was significantly suppressed by the intake of phospholipid and lysophospholipid. This indicates that both phospholipids and lysophospholipids suppress the accumulation of liver lipids and are effective in preventing and improving fructose-induced fatty liver.
実施例３ リン脂質のフルクトース誘導性高脂血症の抑制作用
Ｗｉｓｔａｒラット（雄、６週齢、日本ＳＬＣ）を市販固形飼料で１週間予備飼育した後、平均体重が等しくなるように、４群（１群当り６匹）に分けた。
Example 3 Inhibitory action of phospholipid on fructose-induced hyperlipidemia Wistar rats (male, 6 weeks old, Japan SLC) were preliminarily raised on a commercial chow for one week, and then the average body weight was made equal to 4 groups. (6 per group).
実施例１と同様に対照群（−）、フルクトース群（リン脂質及びリゾリン脂質−：フルクトース＋）、リン脂質群（リン脂質＋：フルクトース＋）、リゾリン脂質群（リゾリン脂質＋：フルクトース＋）を設け、６週間飼育した。試験期間中の試験食及び水は自由摂取させた。試験期間中の試験食、水の摂取量に群間差は認められなかった。
６週間の飼育後、尾静脈から採血し、血中トリアシルグリセロール濃度を測定した。血中トリアシルグリセロール濃度はトリグリセライド Ｅ−テストワコー(ＧＰＯ・ＨＤＡＯＳ法、グリセリン消去法)を用いて測定した。
Control group (-), fructose group (phospholipid and lysophospholipid-: fructose +), phospholipid group (phospholipid +: fructose +), lysophospholipid group (lysophospholipid +: fructose +) as in Example 1. Provided and raised for 6 weeks. During the test period, the test food and water were freely consumed. There were no differences between groups in the intake of test food and water during the study period.
After 6 weeks of breeding, blood was collected from the tail vein and blood triacylglycerol concentration was measured. The blood triacylglycerol concentration was measured using Triglyceride E-Test Wako (GPO / HDAOS method, glycerin elimination method).
図３に示すように、リン脂質、及びリゾリン脂質の摂取によりフルクトース摂取による血中ＴＧ濃度の上昇が有意に抑制された。このことから、リン脂質、及びリゾリン脂質の何れも血中トリアシルグリセロール濃度を抑制し、フルクトース誘導性高脂血症の予防・改善に有効であることが分る。 As shown in FIG. 3, the intake of phospholipid and lysophospholipid significantly suppressed the increase in blood TG concentration due to fructose intake. This indicates that both phospholipids and lysophospholipids are effective in preventing and improving fructose-induced hyperlipidemia by suppressing blood triacylglycerol concentration.
実施例４ リン脂質のＣｈＲＥＢＰ発現、及びその標的遺伝子発現抑制作用
Ｗｉｓｔａｒラット（雄、６週齢、日本ＳＬＣ）を市販固形飼料で１週間予備飼育した後、平均体重が等しくなるように、４群（１群当り６匹）に分け実験に用いた。
Example 4 ChREBP expression of phospholipid and its target gene expression inhibitory effect Wistar rats (male, 6 weeks old, Japan SLC) were preliminarily raised on a commercial chow for 1 week, and then the average body weight was equalized for 4 groups. It was divided into (6 per group) and used for the experiment.
実施例１と同様に対照群（−）、フルクトース群（リン脂質及びリゾリン脂質−：フルクトース＋）、リン脂質群（リン脂質＋：フルクトース＋）、リゾリン脂質群（リゾリン脂質＋：フルクトース＋）を設け、１０週間飼育した。試験期間中の試験食及び水は自由摂取させた。試験期間中の試験食、水の摂取量に群間差は認められなかった。
１０週間の飼育後、ラットをエーテル麻酔下で開腹し、腹部大静脈から採血した後、肝臓を摘出した。摘出した肝臓の一部よりＲＮＡ抽出試薬を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。抽出したｔｏｔａｌ ＲＮＡ１２５ｎｇを用いて、定法に従い、逆転写反応を行った。合成されたｃＤＮＡの一部（ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ６．２５ｎｇ相当）に対しＡＢＩ ＰＲＩＳＭ７５００ Ｓｅａｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ（アプライドバイオジャパン）を用いて、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ リアルタイムＰＣＲ解析法により、ＣｈＲＥＢＰ、及びＣｈＲＥＢＰの標的遺伝子であるＰＫＬＲの遺伝子発現の評価に用いた。また、遺伝子発現量はハウスキーピング遺伝子の一つであるＡｃｉｄｉｃ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ ＰＯ（Ａｒｂｐ）の発現量を基準として補正を行い比較した。
各遺伝子のＰＣＲ増幅のために用いたプライマーは以下の通りである。
Control group (-), fructose group (phospholipid and lysophospholipid-: fructose +), phospholipid group (phospholipid +: fructose +), lysophospholipid group (lysophospholipid +: fructose +) as in Example 1. Provided and reared for 10 weeks. During the test period, the test food and water were freely consumed. There were no differences between groups in the intake of test food and water during the study period.
After 10 weeks of breeding, the rats were laparotomized under ether anesthesia, blood was collected from the abdominal vena cava, and the liver was removed. Total RNA was extracted from a part of the extracted liver using an RNA extraction reagent. Using the extracted total RNA (125 ng), a reverse transcription reaction was performed according to a conventional method. A part of the synthesized cDNA (corresponding to total RNA of 6.25 ng) was subjected to SYBR Green real-time PCR analysis using ABI PRISM7500 Sequence Detection System (Applied Bio Japan), and PRE which is a target gene of ChREBP and ChREBP Used for evaluation of gene expression. Moreover, the gene expression level was corrected and compared based on the expression level of Acid ribosomal phosphoprotein PO (Arbp), which is one of the housekeeping genes.
The primers used for PCR amplification of each gene are as follows.
図４に示すように、リン脂質、及びリゾリン脂質の摂取によりフルクトース摂取による肝臓ＣｈＲＥＢＰ、及びＰＫＬＲの遺伝子発現の上昇が有意に抑制された。このことから、リン脂質及びリゾリン脂質の何れも、ＣｈＲＥＢＰ発現抑制に有効であることが分る。 As shown in FIG. 4, the increase in gene expression of liver ChREBP and PKLR due to the intake of fructose was significantly suppressed by the intake of phospholipid and lysophospholipid. This indicates that both phospholipids and lysophospholipids are effective in suppressing ChREBP expression.
実施例５ 各リン脂質成分のフルクトースによるＣｈＲＥＢＰ発現上昇の抑制作用
ヒト肝癌由来細胞株Ｈｅｐ−Ｇ２を６ウェルプレートに播き、１０％ ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ、ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ）および１００μｎｉｔｓ／ｍＬ ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ、１００μｇ／ｍＬ ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ、ＳＩＧＭＡ）中で１日培養した。培養開始から１日目に培地を４．５ｍｇ／ｍＬのフルクトースを含むＤＭＥＭ（Ｃｏｎｔ）、４．５ｍｇ／ｍＬのフルクトースと０．１ｍｇ／ｍＬのホスファチジルエタノールアミン（大豆由来、ＳＩＧＭＡ）を含むＤＭＥＭ（ＰＥ）、４．５ｍｇ／ｍＬのフルクトースと０．１ｍｇ／ｍＬのホスファチジルイノシトール（大豆由来、ＳＩＧＭＡ）を含むＤＭＥＭ（ＰＩ）に交換した。培養開始２日後に細胞からＲＮＡ抽出試薬を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出した。抽出したｔｏｔａｌ ＲＮＡ１２５ｎｇを用いて、定法に従い、逆転写反応を行った。合成されたｃＤＮＡの一部（ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ６．２５ｎｇ相当）に対しＡＢＩ ＰＲＩＳＭ７５００ Ｓｅａｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ（アプライドバイオジャパン）を用いて、ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ リアルタイムＰＣＲ解析法により、ＰＫＬＲ、ＣｈＲＥＢＰの遺伝子発現の評価に用いた。
ＰＫＬＲ、ＣｈＲＥＢＰのＰＣＲ増幅のために用いたプライマーは以下の通りである。
Example 5 Inhibition of ChREBP expression increase by fructose of each phospholipid component Human liver cancer-derived cell line Hep-G2 was seeded in a 6-well plate, 10% fetal bovine serum (FBS, ICN Biomedicals) and 100 μnits / mL penicillin, 100 μg / The cells were cultured for 1 day in Dulbecco's Modified Eagle's medium (DMEM, SIGMA) containing mL streptomycine (Invitrogen). On the first day from the start of the culture, the medium was DMEM (Cont) containing 4.5 mg / mL fructose, DMEM (4.5 mg / mL fructose and 0.1 mg / mL phosphatidylethanolamine (soybean derived, SIGMA)). PE), DMEM (PI) containing 4.5 mg / mL fructose and 0.1 mg / mL phosphatidylinositol (soybean derived, SIGMA). Two days after the start of the culture, total RNA was extracted from the cells using an RNA extraction reagent. Using the extracted total RNA (125 ng), a reverse transcription reaction was performed according to a conventional method. A portion of the synthesized cDNA (corresponding to total RNA of 6.25 ng) was used for evaluation of gene expression of PKLR and ChREBP by SYBR Green real-time PCR analysis method using ABI PRISM7500 Sequence Detection System (Applied Bio Japan). .
Primers used for PCR amplification of PKLR and ChREBP are as follows.
ＣｈＲＥＢＰ発現変化をリアルタイムＰＣＲにより解析した結果、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール添加によりＣｈＲＥＢＰ遺伝子発現を抑制した（図５）。特に、ホスファチジルエタノールアミンの添加により強くＣｈＲＥＢＰ遺伝子発現が減少した（図５）。
さらに、ＣｈＲＥＢＰの特異的下流遺伝子であるＰＫＬＲの発現変化をリアルタイムＰＣＲにより解析した結果、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール添加によりＰＫＬＲ遺伝子発現を抑制した（図５）。
図５に示すように、リン脂質の各種成分の単独処理がＣｈＲＥＢＰの発現抑制に有効であり、特に、ホスファチジルエタノールアミンが有効であることが分る。
As a result of analyzing the change in ChREBP expression by real-time PCR, the expression of ChREBP gene was suppressed by adding phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositol (FIG. 5). In particular, the addition of phosphatidylethanolamine strongly reduced ChREBP gene expression (FIG. 5).
Furthermore, as a result of analyzing the expression change of PKLR, which is a specific downstream gene of ChREBP, by real-time PCR, the expression of PKLR gene was suppressed by adding phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositol (FIG. 5).
As shown in FIG. 5, it can be seen that single treatment of various components of phospholipid is effective in suppressing the expression of ChREBP, and in particular, phosphatidylethanolamine is effective.
実施例６ 各リン脂質成分のフルクトースによるＣｈＲＥＢＰ蛋白質上昇の抑制作用
実施例５と同様にＨｅｐ−Ｇ２をフルクトース、及びリン脂質成分で処理した。得られた細胞からＮＥ−ＰＥＲ Ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｄ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（商品名、ＰＩＥＲＣＥ）を用いて、核蛋白質を精製した。 精製した核蛋白質の濃度をＢＣＡ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（商品名、ＰＩＥＲＣＥ）で測定した後、サンプル間の蛋白質濃度を２ｍｇ／ｍＬで一定になるよう調整した。その三分の一量のSDS Sample Buffer（Ｎｏｖａｇｅｎ社）を加えた後、９５℃で熱変性、４℃で急冷し、電気泳動用のサンプルを調製した。
上記で調製したサンプル（核蛋白質量として４０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（７．５％ゲル）に供し、イモビロン−Ｐ トランスファーメンブレン（ミリポア社）へ転写後、3%スキムミルクを用いて室温で１時間、ブロッキング反応を行った。続いてanti-ＣｈＲＥＢＰ（Ｐ−１３）抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚｕ Ｂｉｓｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を３０００倍希釈して、4℃で一晩、一次抗体反応を行った。反応後、３０００倍希釈したａｎｔｉ ｇｏａｔ ＩｇＧ−ＨＲＰ抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚｕ Ｂｉｓｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて、室温で１時間、二次抗体反応を行った。その後ＥＣＬ Ｐｌｕｓ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（商品名、ＧＥヘルスケア）を検出試薬として用いて、化学発光検出装置ChemiDoc XRS（バイオラッド）を用いてＣｈＲＥＢＰを検出した。
核内におけるＣｈＲＥＢＰ蛋白質量を解析した結果、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトールの添加により、核内のＣｈＲＥＢＰ蛋白質量が抑制された（図６）。特にホスファチジルエタノールアミンの添加により強くＣｈＲＥＢＰ蛋白質量が減少した（図６）。
Example 6 Inhibition of ChREBP protein elevation by fructose of each phospholipid component In the same manner as in Example 5, Hep-G2 was treated with fructose and a phospholipid component. Nucleoprotein was purified from the obtained cells using NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagent (trade name, PIERCE). After the concentration of the purified nucleoprotein was measured with BCA Protein Assay Kit (trade name, PIERCE), the protein concentration between samples was adjusted to be constant at 2 mg / mL. One third of the SDS Sample Buffer (Novagen) was added, followed by heat denaturation at 95 ° C. and rapid cooling at 4 ° C. to prepare a sample for electrophoresis.
The sample prepared above (40 μg as nucleoprotein mass) was subjected to SDS-PAGE (7.5% gel), transferred to Immobilon-P transfer membrane (Millipore), and then 3% skim milk for 1 hour at room temperature. A blocking reaction was performed. Subsequently, an anti-ChREBP (P-13) antibody (Santa Cruz Biotechnology) was diluted 3000 times, and a primary antibody reaction was performed overnight at 4 ° C. After the reaction, a secondary antibody reaction was performed at room temperature for 1 hour using an anti goat IgG-HRP antibody (Santa Cruz Biotechnology) diluted 3000 times. Thereafter, ChREBP was detected using a chemiluminescence detector ChemiDoc XRS (BioRad) using ECL Plus Western Blotting Detection System (trade name, GE Healthcare) as a detection reagent.
As a result of analyzing the amount of ChREBP protein in the nucleus, the amount of ChREBP protein in the nucleus was suppressed by the addition of phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositol (FIG. 6). In particular, the addition of phosphatidylethanolamine strongly decreased the amount of ChREBP protein (FIG. 6).
実施例７
「ＳＬＰ−ホワイト」（辻製油）をゼラチンカプセルに充填し、１錠３００ｍｇの軟カプセル剤を得た。
Example 7
“SLP-White” (Tsubaki Oil) was filled into a gelatin capsule to obtain a soft capsule of 300 mg per tablet.
実施例８
「ＳＬＰ−ホワイト」（辻製油） ２００ｍｇ、精製ホスファチジルエタノールアミン １００ｍｇをゼラチンカプセルに充填し、１錠３００ｍｇの軟カプセル剤を得た。
Example 8
200 mg of “SLP-white” (Tsubaki Oil) and 100 mg of purified phosphatidylethanolamine were filled into a gelatin capsule to obtain a soft capsule of 300 mg per tablet.
実施例９
下記成分を用い、定法に従って１錠３００ｍｇの錠剤を製造した。
組成（ｍｇ）； 「ＳＬＰ−ホワイト」（辻製油） １００、ヒドロキシプロピルセルロース ６０、軽質無水ケイ酸 １０、乳糖 ３５、結晶セルロース ３５、タルク ３０、トリアシルグリセロール ３０
Example 9
Using the following ingredients, one tablet of 300 mg was produced according to a conventional method.
Composition (mg); “SLP-White” (Tsubaki Oil) 100, Hydroxypropylcellulose 60, Light silicic acid anhydride 10, Lactose 35, Crystalline cellulose 35, Talc 30, Triacylglycerol 30
実施例１０
下記成分を用い、定法に従って１錠３００ｍｇの錠剤を製造した。
組成（ｍｇ）； 大豆由来の精製ホスファチジルイノシトール １００、デンプン １５０、ステアリン酸マグネシウム １０、乳糖 ４０
Example 10
Using the following ingredients, one tablet of 300 mg was produced according to a conventional method.
Composition (mg); Soybean-derived purified phosphatidylinositol 100, starch 150, magnesium stearate 10, lactose 40
実施例１１
下記成分を用い、定法に従って１錠３００ｍｇの錠剤を製造した。
組成（ｍｇ）； 大豆由来の精製ホスファチジルエタノールアミン ５０、精製ホスファチジルイノシトール ５０、デンプン １５０、ステアリン酸マグネシウム １０、乳糖 ４０
Example 11
Using the following ingredients, one tablet of 300 mg was produced according to a conventional method.
Composition (mg): Soybean-derived purified phosphatidylethanolamine 50, purified phosphatidylinositol 50, starch 150, magnesium stearate 10, lactose 40
実施例１２
市販の１００ｇのブラックチョコレートを６０℃で１時間保持して溶解した。これに、大豆由来の精製ホスファチジルエタノールアミンを２重量％添加してテンパリングすることによりリン脂質配合チョコレートを得た。
Example 12
Commercially available 100 g of black chocolate was dissolved by holding at 60 ° C. for 1 hour. To this, 2% by weight of purified phosphatidylethanolamine derived from soybeans was added and tempered to obtain a phospholipid-containing chocolate.
実施例１３
下記成分を混捏した後、原料を発酵後、ねかし、整形、焙炉の工程を経てリン脂質配合パンを得た。
組成（ｇ）； 「ＳＬＰ−ホワイトリゾ」（辻製油） １．０、強力粉 １００、イースト ２、食塩 ２、砂糖 ３、ショートニング ３、イーストフード ０．１５、水 ６０
Example 13
After kneading the following components, the raw material was fermented, then baked, shaped, and roasted to obtain a phospholipid-containing bread.
Composition (g): “SLP-white lyso” (Tsubaki Oil) 1.0, strong powder 100, yeast 2, salt 2, sugar 3, shortening 3, yeast food 0.15, water 60
実施例１４
下記成分を混合した原料を８０℃に加熱し、均質機を用いて６０ｋｇ／ｃｍ2 で均質し、５℃の冷蔵庫で１２時間保持した。５℃で１２時間保持した後、ホイップ用攪拌機を用いて４００ｒｐｍで４分間ホイップし、リン脂質含有ホイップクリームを得た。
組成（ｇ）； 「ＳＬＰ−ホワイト」（辻製油） ０．５、水 ４４．３５、融点３０℃の植物油脂 ３０、脱脂乳 ２５、ショ糖脂肪酸エステル ０．４、モノグリセライド ０．１、リン酸三カリウム ０．１５
Example 14
The raw materials mixed with the following components were heated to 80 ° C., homogenized at 60 kg / cm 2 using a homogenizer, and held in a refrigerator at 5 ° C. for 12 hours. After maintaining at 5 ° C. for 12 hours, the mixture was whipped at 400 rpm for 4 minutes using a whipping stirrer to obtain a phospholipid-containing whipped cream.
Composition (g): “SLP-White” (Tsubaki Oil) 0.5, water 44.35, vegetable oil 30 with melting point 30 ° C., skim milk 25, sucrose fatty acid ester 0.4, monoglyceride 0.1, phosphoric acid Tripotassium 0.15
実施例１５
下記成分を混合した原料を８０℃に加温し、均質機を用いて１５０ｋｇ／ｃｍ2 で均質し、２５０ｍｌ容のステンレス製缶に２５０ｍｌ充填した後、巻き締め機で蓋をした。これをレトルト釜で１２０℃、１０分間の殺菌を行い、その後１０℃に冷却し、リン脂質含有コーヒーを得た。
組成（ｇ）； 「ＳＬＰ−ホワイト」（辻製油） ０．２、水 ４０、牛乳 ８、砂糖 １０、インスタントコーヒー粉末 ２、モノグリセライド ０．１
Example 15
The raw materials mixed with the following components were heated to 80 ° C., homogenized at 150 kg / cm 2 using a homogenizer, filled in a 250 ml stainless steel can, and then covered with a winder. This was sterilized at 120 ° C. for 10 minutes in a retort kettle and then cooled to 10 ° C. to obtain a phospholipid-containing coffee.
Composition (g): “SLP-white” (smoked oil) 0.2, water 40, milk 8, sugar 10, instant coffee powder 2, monoglyceride 0.1
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Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015074647A (en) * | 2013-10-11 | 2015-04-20 | 有限会社 坂本薬草園 | Sterol regulatory element binding protein 1c gene expression inhibitor |
| WO2020166710A1 (en) * | 2019-02-15 | 2020-08-20 | 国立大学法人東北大学 | 1, 3-dioxolan derivative |
| JP2021145581A (en) * | 2020-03-17 | 2021-09-27 | 帝人株式会社 | Composition for preventing or improving fructose-induced disease |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09194362A (en) * | 1996-01-19 | 1997-07-29 | Bizen Kasei Kk | Composition consisting of phospholipid containing docosahexanenoic acid and eicosapentanenoic acid |
| JP2006316016A (en) * | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Fancl Corp | Lysophosphatidyl choline effective for obesity, diabetes, etc. |
| JP2007291078A (en) * | 2006-03-28 | 2007-11-08 | Chisso Corp | Prevention/therapeutic agent for life-style related disease |
| JP2008074794A (en) * | 2006-09-22 | 2008-04-03 | Kao Corp | Fatness preventive or improving agent |
| WO2008093826A1 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-07 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Adiponectin-increasing agent |
| WO2008093848A1 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-07 | Sunstar Inc. | Composition for decreasing inflammation marker comprising phosphatidylcholine |
| JP2008266311A (en) * | 2007-03-23 | 2008-11-06 | Nagase Chemtex Corp | Adiponectin increasing agent |
| JP2009500401A (en) * | 2005-07-07 | 2009-01-08 | ポステック ファンデーション | Sugar absorption regulator and pharmaceutical composition |
| JP2010053141A (en) * | 2009-12-02 | 2010-03-11 | Meiji Milk Prod Co Ltd | Nutritive composition |
-
2011
- 2011-04-27 JP JP2011099206A patent/JP2012031135A/en active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH09194362A (en) * | 1996-01-19 | 1997-07-29 | Bizen Kasei Kk | Composition consisting of phospholipid containing docosahexanenoic acid and eicosapentanenoic acid |
| JP2006316016A (en) * | 2005-05-13 | 2006-11-24 | Fancl Corp | Lysophosphatidyl choline effective for obesity, diabetes, etc. |
| JP2009500401A (en) * | 2005-07-07 | 2009-01-08 | ポステック ファンデーション | Sugar absorption regulator and pharmaceutical composition |
| JP2007291078A (en) * | 2006-03-28 | 2007-11-08 | Chisso Corp | Prevention/therapeutic agent for life-style related disease |
| JP2008074794A (en) * | 2006-09-22 | 2008-04-03 | Kao Corp | Fatness preventive or improving agent |
| WO2008093826A1 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-07 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Adiponectin-increasing agent |
| WO2008093848A1 (en) * | 2007-02-02 | 2008-08-07 | Sunstar Inc. | Composition for decreasing inflammation marker comprising phosphatidylcholine |
| JP2008266311A (en) * | 2007-03-23 | 2008-11-06 | Nagase Chemtex Corp | Adiponectin increasing agent |
| JP2010053141A (en) * | 2009-12-02 | 2010-03-11 | Meiji Milk Prod Co Ltd | Nutritive composition |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| J NUTR, vol. 139, no. 11, JPN6015009560, 2009, pages 2067 - 2071, ISSN: 0003026082 * |
| 医学のあゆみ, vol. 202, no. 12, JPN6015009557, 2002, pages 959 - 962, ISSN: 0003026081 * |
| 細胞, vol. 39, no. 3, JPN6015009554, 2007, pages 112 - 114, ISSN: 0003026080 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015074647A (en) * | 2013-10-11 | 2015-04-20 | 有限会社 坂本薬草園 | Sterol regulatory element binding protein 1c gene expression inhibitor |
| WO2020166710A1 (en) * | 2019-02-15 | 2020-08-20 | 国立大学法人東北大学 | 1, 3-dioxolan derivative |
| US11912688B2 (en) | 2019-02-15 | 2024-02-27 | Tohoku University | 1, 3-dioxolane derivative |
| JP2021145581A (en) * | 2020-03-17 | 2021-09-27 | 帝人株式会社 | Composition for preventing or improving fructose-induced disease |
| JP7025465B2 (en) | 2020-03-17 | 2022-02-24 | 帝人株式会社 | Composition for prevention or improvement of fructose-induced diseases |
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