JP2012001504A - Humectant - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は保湿剤、更に詳しくは、皮膚の水分保持能が相乗的に向上したことを特徴とする保湿剤に関する。 The present invention relates to a humectant, and more particularly, to a humectant characterized by synergistically improving the moisture retention ability of the skin.
人の皮膚は、角質層によって覆われており、乾燥した大気中においても水分を失うことなく生命活動を維持できるのは、外界と接しているこの角質層が存在しているからであることはよく知られている。角質層は薄く柔軟で且つ体内の水分を保ち、健常な皮膚状態を維持するように調節している。 Human skin is covered by the stratum corneum, and life activity can be maintained without losing moisture even in a dry atmosphere because the stratum corneum is in contact with the outside world. well known. The stratum corneum is thin and flexible and maintains moisture in the body and is adjusted to maintain a healthy skin state.
しかしながら、我々は環境要因等（例えば、温度変化、湿度変化、光、水との接触、洗剤の使用等）により、しばしば表皮に何らかの損傷をきたすことがある。ダメージを受けた皮膚は、硬く、弾力性も失われ、カサカサとした肌荒れ状態となる。こうした肌荒れ皮膚は、近年、急増傾向にあるアトピー性皮膚炎との関連性も指摘されており、深刻なスキントラブルを招く恐れもある。 However, we often cause some damage to the epidermis due to environmental factors (eg temperature change, humidity change, light, contact with water, use of detergents, etc.). Damaged skin is hard, loses elasticity, and becomes rough and rough. Such rough skin has recently been pointed out to be associated with atopic dermatitis, which is rapidly increasing, and may cause serious skin troubles.
荒れ肌には、角質細胞の剥離によるものと、乾燥により皮膚の健康状態が悪化して表皮の硬化や損傷に至るものがある。前者の荒れ肌はコレステロール、セラミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖・角化バランスの崩壊による角層透過バリアの形成不全等によって発生する。この荒れ肌を予防または治癒する目的で、角質細胞間脂質成分又はそれに類似する合成の角質細胞間脂質を供給するなどの検討が行われている。この角層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層の細胞で生合成された層板顆粒が、角層直下で細胞間に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成されるが、角層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシルセラミドは、β−グルコセレブロシダーゼによって加水分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドがラメラ構造をとる結果、角層細胞間脂質として角層透過バリアの形成を改善し、荒れ肌防御のバリアの働きを持つと考えられる。洗浄剤による肌荒れはセラミドの補充が有効であり、肌荒れの改善に高い効果を示すことが報告されている（非特許文献１）。 Rough skin may be due to exfoliation of keratinocytes, or may be caused by dryness and deterioration of skin health leading to hardening or damage of the epidermis. The former rough skin is elution of keratinocyte lipids such as cholesterol, ceramide, fatty acid, and the formation of stratum corneum permeation barrier due to degeneration of keratinocytes caused by UV rays, detergents, etc. Caused by. For the purpose of preventing or healing this rough skin, studies have been made on supplying a keratinocyte lipid component or a synthetic keratinocyte lipid similar thereto. This stratum corneum intercellular lipid is a lamellar granule that is biosynthesized by cells in the spinous layer and the granule layer, and is released between the cells just below the stratum corneum and extends, taking a lamellar (lamellar) structure. It has spread to. The lamellar granule is composed of glucosylceramide, cholesterol, ceramide, phospholipid, etc., but the horny layer intercellular lipid hardly contains glucosylceramide. That is, glucosylceramide in lamellar granules is hydrolyzed by β-glucocerebrosidase and converted to ceramide. As a result of this ceramide having a lamellar structure, formation of a stratum corneum permeation barrier is improved as a stratum corneum intercellular lipid. Therefore, it is considered to have a barrier function for preventing rough skin. It has been reported that ceramide supplementation is effective for rough skin caused by a cleaning agent, and shows a high effect in improving rough skin (Non-patent Document 1).
一方、後者の荒れ肌には、保湿剤には皮膚の恒常性維持の他、皮膚からの水分揮散を防止し、皮膚を構成する表皮、角質層に水分を保持させ皮膚に保湿性、柔軟性を保たせみずみずしい肌を保持する等の目的で保湿剤が配合されている。従来より用いられてきた保湿剤としては、オリーブ油、等の植物油やラノリンのような動物由来の脂質に代表される親油性の保湿剤の他に親水性の保湿剤としては、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ソルビトール等の水溶性多価アルコール、ヒアルロン酸及びキサンタンガムのような多糖類、ポリエチレングリコールなどの水溶性高分子、ピロリドンカルボン酸塩及びアミノ酸に代表される低分子量の天然保湿因子、植物抽出エキス等が知られている。 On the other hand, for the latter rough skin, moisturizers maintain the skin's homeostasis, prevent moisture from escaping from the skin, and retain moisture in the epidermis and stratum corneum that make up the skin, thereby maintaining moisture and flexibility in the skin A moisturizing agent is blended for the purpose of keeping fresh skin. Conventionally used moisturizers include glycerin, 1, 3 as hydrophilic moisturizers in addition to lipophilic moisturizers typified by vegetable oils such as olive oil and animal-derived lipids such as lanolin. -Water-soluble polyhydric alcohols such as butylene glycol, propylene glycol, sorbitol, polysaccharides such as hyaluronic acid and xanthan gum, water-soluble polymers such as polyethylene glycol, low molecular weight natural moisturizing typified by pyrrolidone carboxylates and amino acids Factors, plant extracts and the like are known.
このように様々な種類の親水性、親油性の保湿剤が存在するが、安全性を重要視する風潮などから、昨今では動物由来のものや化学合成品は避けられる傾向にあり、好ましくは天然物や微生物による発酵生産物で、さらには生体のみならず環境にも負荷の少ない生分解性の素材が期待され注目を浴びている。 There are various types of hydrophilic and lipophilic moisturizers as described above. However, due to the trend of emphasizing safety, animal-derived products and chemical synthetic products tend to be avoided recently, preferably natural. Biodegradable materials that are fermented products by products and microorganisms and that have less burden on the environment as well as the living body are expected and attracting attention.
一方で、微生物が生産するバイオポリマーが有望視されている。バイオポリマーの中でも、アミノ酸が縮重合して構成されるポリアミノ酸と呼ばれる一群のバイオポリマーには、様々な機能が見出されており、その潜在能力に注目が集まっている。従来、ポリアミノ酸として、ポリ−γ−グルタミン酸（以下、「ＰＧＡ」と表記することがある）、ポリ−ε−リジンおよびシアノファイシンの３種類が同定されている。 On the other hand, biopolymers produced by microorganisms are promising. Among biopolymers, various functions have been found in a group of biopolymers called polyamino acids constituted by condensation polymerization of amino acids, and attention has been focused on their potential. Conventionally, three types of polyamino acids have been identified: poly-γ-glutamic acid (hereinafter sometimes referred to as “PGA”), poly-ε-lysine and cyanophysin.
ＰＧＡは、グルタミン酸のα−アミノ基とγ−カルボキシル基とがアミド結合したポリアミノ酸である。ＰＧＡは、古くから日本人に親しまれている納豆の糸引きの主体物質として知られる、吸水性のポリアミノ酸であるが、このように親しまれてきた背景として、その魅力的な機能性によるところが大きい。ＰＧＡの魅力的な機能としては、生分解性及び高吸水性を兼ね備えている点が知られている。これらの機能を利用して、上述した保湿剤をはじめ、医療品、食品等、種々の分野、用途で用いられることが期待されている。 PGA is a polyamino acid in which an α-amino group and a γ-carboxyl group of glutamic acid are amide-bonded. PGA is a water-absorbing polyamino acid known as the main material of stringing of natto, which has been familiar to Japanese people for a long time, but as a background of this familiarity, it is due to its attractive functionality. large. As an attractive function of PGA, it is known that it has both biodegradability and high water absorption. Utilizing these functions, it is expected to be used in various fields and applications such as the above-described moisturizing agents, medical products, and foods.
最近、ポリアミノ酸の構造的特徴（構成アミノ酸の光学活性や種類、分子サイズ、結合様式など）がその機能性に強く反映されていることが分かってきた。よく知られているところでは、生分解性と高吸水性を兼ね備えている点が挙げられる。それらの機能を利用し、食品、化粧品、医療品などの多くの分野で、種々の用途があるものと期待されている。しかし、現在、製品化されているＰＧＡは、化学的にヘテロなＤＬ−ＰＧＡである。具体的には、ＰＧＡは、納豆菌やその類縁菌から生産され、Ｄ−グルタミン酸及びＬ−グルタミン酸が不規則に結合しており、その含有比率や、配列は生産菌の培養毎に変動する。一般に、ポリアミノ酸の構造的特徴（構成するアミノ酸の光学活性や種類、分子サイズ、結合様式など）は、その機能に強く影響を与える。上記ＤＬ−ＰＧＡは、分子毎に構造が異なるため、その性質も分子毎に異なる。これでは、所望の品質を有するＤＬ−ＰＧＡを安定して製造することが困難である。 Recently, it has been found that structural characteristics of polyamino acids (optical activity and type of constituent amino acids, molecular size, binding mode, etc.) are strongly reflected in their functionality. A well-known point is that it has both biodegradability and high water absorption. Utilizing these functions, it is expected to have various applications in many fields such as foods, cosmetics, and medical products. However, currently commercially available PGA is a chemically heterogeneous DL-PGA. Specifically, PGA is produced from Bacillus natto and its related bacteria, and D-glutamic acid and L-glutamic acid are irregularly bound, and the content ratio and sequence vary depending on the culture of the producing bacteria. In general, the structural characteristics of polyamino acids (optical activity and type of constituent amino acids, molecular size, binding mode, etc.) strongly influence their functions. Since the DL-PGA has a different structure for each molecule, its property also differs for each molecule. This makes it difficult to stably produce DL-PGA having a desired quality.
ホモポリ−γ−グルタミン酸を生産する菌も報告されている。例えば、炭疸菌Bacillus anthracisはＤ−グルタミン酸のみからなるポリ−γ−Ｄ−グルタミン酸（以下、Ｄ−ＰＧＡと記載することもある）を生産する事が報告されている（非特許文献２）。しかし、本菌は強い病原性を有する細菌であるため、工業的なＰＧＡ生産菌としては不適切であり、生産されるＤ−ＰＧＡの分子量も小さい。また、好アルカリ性細菌Bacillus haloduransは、Ｌ−グルタミン酸のみからなるポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩（以下Ｌ−ＰＧＡと記載することもある）を生産する事も報告されている（非特許文献３）。しかし、本菌の生産するＬ−ＰＧＡは分子量が極めて小さく、実用的な性能を得るには不十分である。 Bacteria that produce homopoly-γ-glutamic acid have also been reported. For example, Bacillus anthracis has been reported to produce poly-γ-D-glutamic acid (hereinafter sometimes referred to as D-PGA) consisting only of D-glutamic acid (Non-patent Document 2). However, since this bacterium is a bacterium having a strong pathogenicity, it is inappropriate as an industrial PGA-producing bacterium, and the molecular weight of D-PGA produced is small. In addition, it has been reported that the alkalophilic bacterium Bacillus halodurans produces poly-γ-L-glutamic acid and / or a salt thereof (hereinafter sometimes referred to as L-PGA) consisting only of L-glutamic acid (non-native). Patent Document 3). However, L-PGA produced by this bacterium has an extremely small molecular weight, and is insufficient to obtain practical performance.
一方、高分子量のホモポリ−γ−グルタミン酸の生産菌として、好塩性古細菌Natrialba aegyptiacaが分子量１０万〜１００万程度のＬ−ＰＧＡを生産することが報告されている。しかし、本菌は液体培養条件下では分子量が１０万程度と小さい、かつ殆どポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩を生産しないため、工業的な生産菌として問題があった（非特許文献４、特許文献１）。 On the other hand, it has been reported that the halophilic archaeon Natrialba aegyptiaca produces L-PGA having a molecular weight of about 100,000 to 1,000,000 as a high-molecular-weight homopoly-γ-glutamic acid-producing bacterium. However, since this bacterium has a molecular weight as small as about 100,000 under liquid culture conditions and hardly produces poly-γ-L-glutamic acid and / or a salt thereof, there is a problem as an industrially producing bacterium (non-patent) Document 4, Patent Document 1).
上記以外に、Ｌ−ＰＧＡを生産する生物としては、ヒドラ等が挙げられるが、ヒドラの場合も同様に分子量が極めて小さいという問題がある（非特許文献３）。 In addition to the above, examples of organisms that produce L-PGA include hydra and the like, but hydra also has a problem that its molecular weight is extremely small (Non-patent Document 3).
一方本発明者らは、均一な光学純度でかつ高分子量のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩を液体培養などで大量に調製することを可能とした。より具体的には、数平均分子量が１３０万以上で、かつ均一な光学純度のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩を、培養液１Ｌあたり４．９９ｇ以上の高い生産性で取得している（特許文献２）。 On the other hand, the present inventors made it possible to prepare a large amount of poly-γ-L-glutamic acid and / or a salt thereof with uniform optical purity and high molecular weight by liquid culture or the like. More specifically, poly-γ-L-glutamic acid and / or a salt thereof having a number average molecular weight of 1.3 million or more and uniform optical purity are obtained with a high productivity of 4.99 g or more per liter of culture solution. (Patent Document 2).
また、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の架橋方法と架橋体（特許文献３）、並びにポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸及びポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体のうち少なくとも一方を含むことを特徴とする保湿剤（特許文献４）の報告がある。 Moreover, the crosslinking method of poly-γ-L-glutamic acid and a crosslinked product (Patent Document 3), and at least one of poly-γ-L-glutamic acid and poly-γ-L-glutamic acid crosslinked product are included. There is a report of a humectant (Patent Document 4).
従来、薬用植物をはじめとする多種類の植物の抽出物が皮膚外用剤に用いられてきた。近年、自然志向及び動物愛護による植物志向の高まりを受けて、ますます植物や菌類抽出物に有効成分を求める傾向が高まっている。しかし植物や菌類の抽出物は、それぞれが多様な作用を有するものの、総じてその作用はさほど強くないことが多く、皮膚外用剤において、期待する作用効果の生じる量の植物や菌類抽出物を含有させると、好ましくない着色，着臭が見られたり、製剤安定性の低下が見られたりすることがあった。複数の植物や菌類抽出物を併用して作用効果の増強を図る試みもなされてはいるが、皮膚の生理機能には種々の因子が複雑に関与するため、皮膚の状態を十分に向上させることは困難である。 Conventionally, extracts of many kinds of plants including medicinal plants have been used for skin external preparations. In recent years, with the increase in plant orientation due to nature and animal welfare, there is an increasing tendency to seek active ingredients in plant and fungal extracts. However, although plant and fungal extracts each have a variety of actions, the action is generally not so strong, and the external preparation for skin contains an amount of plant or fungal extract that produces the expected action and effect. In some cases, unfavorable coloring and odor were observed, and the stability of the preparation was decreased. Although attempts have been made to enhance the action and effect by using multiple plant and fungal extracts in combination, various factors are involved in the physiological functions of the skin, so the skin condition must be sufficiently improved. It is difficult.
また、加齢ジワを予防、改善する目的で真皮の主要な構成成分であるコラーゲンを外用、内服で適用する商品や、コラーゲンの産生を促進する物質を配合した皮膚外用剤が上市されている。かかるコラーゲンとしては、魚類に由来する海洋性コラーゲン（特許文献５）や、植物由来のコラーゲン類似タンパク質（特許文献６）が、コラーゲンの産生を促進し、シワ、タルミの予防、改善に有効な成分としては、アシル化オリゴペプチド（特許文献７）、各種植物由来成分などが知られている。ポリグルタミン酸は従来から化粧料業界で使用されてきており、増粘作用に加え、保湿剤（特許文献８）の他に、整髪剤（特許文献９）等に利用されている。しかしながら、コラーゲン類やポリグルタミン酸単独での保湿効果はさほど高いものではなく、保湿有効量を配合すると、肌の表面に皮膜を形成し、逆に乾燥を招いたりするという問題があった。 In addition, for the purpose of preventing and improving aging wrinkles, products for external application and internal use of collagen, which is a major component of the dermis, and external preparations for skin containing substances that promote collagen production are on the market. As such collagen, marine collagen derived from fish (Patent Document 5) and plant-derived collagen-like protein (Patent Document 6) promote the production of collagen and are effective in preventing and improving wrinkles and talmi. As such, acylated oligopeptides (Patent Document 7), various plant-derived components, and the like are known. Polyglutamic acid has been used in the cosmetics industry in the past, and in addition to a thickening action, it is used for a hair conditioner (Patent Document 9) and the like in addition to a moisturizer (Patent Document 8). However, the moisturizing effect of collagens and polyglutamic acid alone is not so high, and when a moisturizing effective amount is added, there is a problem that a film is formed on the surface of the skin and conversely, drying is caused.
本発明の目的は、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の有する保湿効果を相乗的に向上させ、肌への浸透性が向上した保湿剤を得ることにある。 The object of the present invention is to synergistically improve the moisturizing effect of poly-γ-L-glutamic acid and to obtain a moisturizing agent with improved permeability to the skin.
斯かる実情において、本発明者らは鋭意研究を行ったところ、ローズマリーエキスを有効成分とすることにより、保湿効果を向上さできることを見出した。 Under such circumstances, the present inventors have conducted intensive research and found that the moisture retention effect can be improved by using rosemary extract as an active ingredient.
すなわち、本発明は以下のような構成からなる。
（１）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩と、ローズマリーエキスを有効成分とすることを特徴とする保湿剤。
（２）ポリ−γ−L−グルタミン酸が、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸分子同士の架橋構造を有することを特徴とするポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体であることを特徴とする（１）の保湿剤。
（３）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が１００万以上であることを特徴とする（１）または（２）の保湿剤。
（４）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が２００万以上であることを特徴とする（１）〜（３）のいずれかの保湿剤。
（５）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の平均分子量が３５０万以上であることを特徴とする（１）〜（４）のいずれかの保湿剤。
（６）ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の吸水倍率が１０倍以上５０００倍以下であることを特徴とする（１）〜（５）のいずれかの保湿剤。
That is, the present invention has the following configuration.
(1) A moisturizing agent comprising poly-γ-L-glutamic acid and / or a salt thereof and rosemary extract as active ingredients.
(2) Poly-γ-L-glutamic acid is a cross-linked poly-γ-L-glutamic acid characterized by having a cross-linked structure between poly-γ-L-glutamic acid molecules (1) Moisturizer.
(3) The humectant according to (1) or (2), wherein the average molecular weight of poly-γ-L-glutamic acid is 1 million or more.
(4) The humectant according to any one of (1) to (3), wherein the average molecular weight of poly-γ-L-glutamic acid is 2 million or more.
(5) The humectant according to any one of (1) to (4), wherein the average molecular weight of poly-γ-L-glutamic acid is 3.5 million or more.
(6) The humectant according to any one of (1) to (5), wherein the water absorption ratio of poly-γ-L-glutamic acid is 10 to 5000 times.
本発明の保湿剤は、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸とともに、ローズマリーエキスを用いることにより、水分保持能が相乗的に向上し、優れた保湿効果並びに皮膚への高い浸透効果を発揮するものである。 The moisturizing agent of the present invention uses rosemary extract together with poly-γ-L-glutamic acid, thereby synergistically improving water retention ability and exhibiting excellent moisturizing effect and high skin penetration effect. is there.
本発明の「ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸」とは、Ｌ−グルタミン酸のみからなるホモポリマ−である。その構造は式（Ｉ）にて示される構造である。α−ＣＯＯＨの水素は水素であっても良いし他の金属対イオンでも良い。例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、カルシウム、亜鉛及び鉄等一般的なものあれば限定する必要はない。そのなかでも好ましくはナトリウムである。 The “poly-γ-L-glutamic acid” of the present invention is a homopolymer consisting only of L-glutamic acid. Its structure is the structure represented by formula (I). The hydrogen of α-COOH may be hydrogen or another metal counter ion. For example, there is no need to limit the general materials such as sodium, potassium, magnesium, manganese, calcium, zinc and iron. Of these, sodium is preferred.
本発明の「分子量」とはプルラン標準物質の分子量換算にて算出した数平均分子量（Ｍｎ）のことを指す。 The “molecular weight” of the present invention refers to the number average molecular weight (Mn) calculated in terms of the molecular weight of the pullulan standard substance.
本発明のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸は、既存の方法で得ることができる。たとえば、特許文献２（特開２００７−３１４４３４号公報）に記載された方法で、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を得ることができる。以下に、一例として、特許文献２を参考にしたポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の製造方法を述べるがこれに限定されるものではない。 The poly-γ-L-glutamic acid of the present invention can be obtained by an existing method. For example, poly-γ-L-glutamic acid can be obtained by the method described in Patent Document 2 (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2007-314434). Hereinafter, as an example, a method for producing poly-γ-L-glutamic acid with reference to Patent Document 2 will be described, but the present invention is not limited thereto.
たとえば、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−に、ナトリアルバ エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−８２株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−２０８７２）、ナトリアルバ エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３０−２４３株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−２０８７３）、またはナトリアルバ エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）０８３１−２６４株（受託機関名：独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センタ−、受託日：平成１８年４月４日、受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−２０８７４）として寄託されている菌株をもちいてポリ−γ−L−グルタミン酸を得る場合、液体培養によりポリ−γ−L−グルタミン酸を得ることができる。または、特許文献２（特開２００７−３１４４３４号公報）に記載された方法で微生物を変異処理し、液体培養によりポリ−γ−L−グルタミン酸を生産できる微生物を作製し、ポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することもできる。また、ナトリアルバ エジプチアキア（Natrialba aegyptiaca）を常法により固相培養し、ポリ−γ−L−グルタミン酸を生産することもできる。 For example, the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (AIST) Patent Biological Depositary Center has a Natrialba aegyptiaca 0830-82 strain (trusted organization: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patent Biological Depositary Center), date of deposit: Heisei April 4, 2006, accession number: FERM BP-20872), Natrialba aegyptiaca 0830-243 strain (trusted institution: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Organism Depositary), accession date: 2006 April 4, 2000, accession number: FERM BP-20873), or Natrialba aegyptiaca 0831-264 strain (trusted institution name: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Patent Biological Depositary Center), trust date: 2006 Deposited on April 4, 2000 as accession number: FERM BP-20874) To obtain poly-gamma-L-glutamic acid using a with that strain, it is possible to obtain poly-gamma-L-glutamic acid by liquid culture. Alternatively, a microorganism can be mutated by the method described in Patent Document 2 (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2007-314434) to produce a microorganism capable of producing poly-γ-L-glutamic acid by liquid culture, and poly-γ-L- Glutamic acid can also be produced. Moreover, it is also possible to produce poly-γ-L-glutamic acid by solid-phase culture of Natrialba aegyptiaca by a conventional method.
液体培養する場合には、振とう培養、通気攪拌培養など好気条件などで行うことが望ましい。その際の培養温度は、３０〜５０℃、好ましくは３５〜４５℃が適当である。また、培地のｐＨは、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、塩酸、硫酸またそれらの水溶液などによって調整できるが、ｐＨ調整できれば限定されない。培養ｐＨ５．０−９．０、好ましくはｐＨ６．０−８．５で培養するのが望ましい。また、培養期間は、通常２〜７日間程度でよい。また、培養時のＮａＣｌ濃度は１０〜３０％、好ましくは１５〜２５％で培養するのが望ましい。また、Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ濃度は０．１〜１０％、好ましくは０．５〜５．０％濃度で培養するのが望ましい。また、固体培養の場合においても前期液体培養の場合と応用に、培養温度は３０〜５０℃、好ましくは３５〜４５℃、培養時のｐＨは５．０−９．０、好ましくはｐＨ６．０−８．５、培養時のＮａＣｌ濃度は１０−３０％、好ましくは１５〜２５％、Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ濃度は０．１−１０％、好ましくは０．５−５％濃度が採用される。このようにして培養すると、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸は、主として菌体外に蓄積されて前記した培養物中に含まれる。特に限定はされないが、ＰＧＡ生産液体培地−１（２２．５％ ＮａＣｌ、２％ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２％ ＫＣｌ、３％ Ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ Ｃｉｔｒａｔｅ、１％ Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、０．７５％ Ｃａｓａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）を使用してもよく、各添加量は菌株にあわせて適宜調整すればよい。 In the case of liquid culture, it is desirable to perform under aerobic conditions such as shaking culture and aeration and agitation culture. The culture temperature at that time is 30 to 50 ° C, preferably 35 to 45 ° C. The pH of the medium can be adjusted with sodium hydroxide, potassium hydroxide, ammonia, hydrochloric acid, sulfuric acid, or an aqueous solution thereof, but is not limited as long as the pH can be adjusted. It is desirable to culture at a culture pH of 5.0 to 9.0, preferably at a pH of 6.0 to 8.5. In addition, the culture period is usually about 2 to 7 days. Further, it is desirable to culture at a NaCl concentration of 10 to 30%, preferably 15 to 25% during culture. Further, it is desirable to culture at a yeast extract concentration of 0.1 to 10%, preferably 0.5 to 5.0%. Also in the case of solid culture, the culture temperature is 30 to 50 ° C., preferably 35 to 45 ° C., and the pH during the culture is 5.0 to 9.0, preferably pH 6.0, in the case of liquid culture and application. -8.5, NaCl concentration during culture is 10-30%, preferably 15-25%, Yeast Extract concentration is 0.1-10%, preferably 0.5-5%. When cultured in this manner, poly-γ-L-glutamic acid is mainly accumulated outside the cells and contained in the culture described above. Although not specifically limited, PGA production liquid medium-1 (22.5% NaCl, 2% MgSO 4 .7H 2 O, 0.2% KCl, 3% Trisodium Citrate, 1% Yeast Extract, 0.75% Casamino acid ) May be used, and the amount of each additive may be appropriately adjusted according to the strain.
培養液中のポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の定量方法としては、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を含む試料から、硫酸銅やエタノ−ルを用いて沈澱させ、その沈殿物の重量測定およびＫｉｊｅｒｄｅｒ法による総窒素の測定を行なうもの（Ｍ．Ｂｏｖａｒｎｉｃｋ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１４５巻、４１５ペ−ジ、１９４２年）、塩酸加水分解後のグルタミン酸量を測定する方法（Ｒ．Ｄ．Ｈｏｕｓｅｗｒｉｇｔ，Ｃ．Ｂ．Ｔｈｏｒｎｅ，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，６０巻、８９ペ−ジ、１９５０年）及び、塩基性色素との定量的な結合を利用した比色法（Ｍ．Ｂｏｖａｒｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０７巻、５９３ペ−ジ、１９５４年）が知られているが好ましくは、塩基性色素との定量的な結合を利用した比色法である。 As a method for quantifying poly-γ-L-glutamic acid in a culture solution, precipitation is carried out from a sample containing poly-γ-L-glutamic acid using copper sulfate or ethanol, and the weight measurement of the precipitate and the Kijderder method (M. Bovarnick, J. Biol. Chem., 145, 415, 1942), a method for measuring the amount of glutamic acid after hydrochloric acid hydrolysis (RD Housewright, CB Thorne, J. Bacteriol., 60, 89, 1950) and a colorimetric method using quantitative binding with basic dyes (M. Bovarnick et al., J. Biol). Chem., 207, 593, 1954), preferably using quantitative binding with basic dyes. A color process.
塩基性色素としてはクリスタルバイオレット、アニリンブル−、サフラニンオ−、メチレンブル−、メチルバイオレット、トルイジネブル−、コンゴレッド、アゾカルマイン、チオニン、ヘマトキシリンなどがあげられるが、サフラニンオ−が好ましい。 Examples of basic dyes include crystal violet, aniline blue, safranino, methylene blue, methyl violet, toluine nebula, congo red, azocarmine, thionine, and hematoxylin, with safranino being preferred.
この培養物からポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を分離、採取するには、硫酸銅やエタノ−ルを用いて沈澱させるなどの前記の公知の方法を用いればよい。一例を挙げると、例えば、培養液を遠心分離し、菌体を取り除く。続いて、得られた上清液に３倍量の水を加え希釈した後、ｐＨを３．０に調整する。ｐＨ調整後、５時間 室温で攪拌した。その後、３倍量のエタノ−ルを加え、ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を沈殿物として回収した。沈殿物を０．１ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解させ、低分子物質を透析により除去する。透析後、得られた液を核酸除去のため、ＤＮａｓｅ、ＲＮａｓｅ処理を行っても良いし、次いでタンパク質除去のために、Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ処理を行っても良い。Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ処理後、透析により低分子物質を除去しても良い。透析後、凍結乾燥等により、乾燥ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸を得ればよい。また、必要により陰イオン交換樹脂を用いた精製を行うことができるが、一般的な条件で精製可能である。 In order to separate and collect poly-γ-L-glutamic acid from this culture, the above-mentioned known methods such as precipitation using copper sulfate or ethanol may be used. As an example, for example, the culture solution is centrifuged to remove the cells. Subsequently, after adding and diluting 3 times the amount of water to the obtained supernatant, the pH is adjusted to 3.0. After pH adjustment, the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. Thereafter, 3 times the amount of ethanol was added, and poly-γ-L-glutamic acid was recovered as a precipitate. The precipitate is dissolved in 0.1 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0), and low-molecular substances are removed by dialysis. After dialysis, the resulting solution may be treated with DNase or RNase for nucleic acid removal, and then with proteinase treatment for protein removal. After the proteinase treatment, the low molecular weight substance may be removed by dialysis. After dialysis, dry poly-γ-L-glutamic acid may be obtained by freeze-drying or the like. Moreover, although refinement | purification using an anion exchange resin can be performed if necessary, it can refine | purify on general conditions.
本発明に使用するポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の分子量は、特に限定されないが、好ましくは５０万以上、より好ましくは８０万以上、さらに好ましくは１００万以上、特に好ましくは１３０万以上である。 The molecular weight of poly-γ-L-glutamic acid used in the present invention is not particularly limited, but is preferably 500,000 or more, more preferably 800,000 or more, still more preferably 1,000,000 or more, and particularly preferably 1.3 million or more.
Ｌ−ＰＧＡの分子量の上限値は特に限定されるものではないが、前述のＬ−ＰＧＡの製造方法によれば、例えば、６００万、最大で１５００万のＬ−ＰＧＡを得ることができる。 The upper limit value of the molecular weight of L-PGA is not particularly limited, but according to the above-described L-PGA production method, for example, L-PGA having 6 million or 15 million at the maximum can be obtained.
このポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩は、古細菌によって生産されるために、納豆菌によって生産されるポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸および／またはその塩と比べて特有の臭気が軽減することで、化粧品、医薬部外品、医療用品、衛生用品または医薬品の用途に利用しても品質を損なうことがない。 Since this poly-γ-L-glutamic acid and / or salt thereof is produced by archaea, the specific odor is reduced compared to poly-γ-L-glutamic acid and / or its salt produced by Bacillus natto. Thus, the quality is not impaired even when used for cosmetics, quasi-drugs, medical supplies, hygiene products, or pharmaceutical applications.
本発明において用いるローズマリーエキスは、通常皮膚外用剤に配合し得るローズマリーエキスであれば特に限定されない。ローズマリーエキスは保湿剤に、保湿剤全量に対して、０．０００１〜２質量％配合することができる。０．０００１質量％未満の配合では、保湿効果の向上は認められない。２質量％を越えて配合しても、さらなる保湿効果の向上は認められない。 The rosemary extract used in the present invention is not particularly limited as long as it is a rosemary extract that can be usually blended into a skin external preparation. Rosemary extract can be added to the moisturizer in an amount of 0.0001 to 2% by mass based on the total amount of the moisturizer. When the amount is less than 0.0001% by mass, no improvement in the moisturizing effect is observed. Even if it exceeds 2% by mass, no further improvement in moisturizing effect is observed.
本願発明の保湿剤は、皮膚や毛髪に対して優れた保湿作用を発揮し、特に皮膚に対する保湿効果が高い。本発明に係る保湿剤は、ローション剤，乳剤，ゲル剤，クリーム剤，軟膏剤，粉末剤，顆粒剤等、種々の剤型で提供することができる。また、化粧水，乳液，クリーム，美容液，パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション，メイクアップベースクリーム等の下地化粧料、乳液状，油性，固形状等の各剤型のファンデーション，アイカラー，チークカラー等のメイクアップ化粧料、クレンジングクリーム，クレンジングローション，クレンジングフォーム，洗顔石鹸，ボディシャンプー等の皮膚洗浄料、ヘアーシャンプー，ヘアーリンス，ヘアートリートメント等の毛髪用化粧料等としても提供することができる。 The moisturizing agent of the present invention exhibits an excellent moisturizing action on the skin and hair, and has a particularly high moisturizing effect on the skin. The humectant according to the present invention can be provided in various dosage forms such as lotions, emulsions, gels, creams, ointments, powders, granules and the like. In addition, skin cosmetics such as lotion, milky lotion, cream, beauty essence, packs, foundation cosmetics such as makeup base lotion and makeup base cream, foundations for each dosage form such as emulsion, oily, solid, etc. Also provided as makeup cosmetics such as color and cheek color, cleansing cream, cleansing lotion, cleansing foam, skin cleanser such as facial soap, body shampoo, hair cosmetic such as hair shampoo, hair rinse, hair treatment etc. be able to.
なお本発明に係る保湿剤には、上記必須成分の他に、油性成分，界面活性剤，保湿剤，顔料，紫外線吸収剤，抗酸化剤，香料，防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用原料や、皮膚細胞賦活剤，美白剤等の生理活性成分をも含有させることができる。 In addition to the above essential components, the moisturizer according to the present invention includes general pharmaceutical products such as oil components, surfactants, moisturizers, pigments, ultraviolet absorbers, antioxidants, fragrances, antifungal agents, and the like. In addition, raw materials for cosmetics and physiologically active ingredients such as skin cell activators and whitening agents can also be contained.
以下、本発明を実施例に基づき、より詳細に説明する。なお、本発明は、特に実施例に限定されるものではない。また、本明細書中に記載された学術文献および特許文献の全てが、本明細書中において参考として援用される。なお、以下の実施例に示す「％」は全て「重量％」である。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples. The present invention is not particularly limited to the examples. Moreover, all the academic literatures and patent literatures described in this specification are incorporated herein by reference. In the following examples, “%” is “% by weight”.
〔製造例１；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の製造〕
Natrialba aegyptica（受託番号：ＦＥＲＭ ＢＰ−１０７４９）のＬ乾燥アンプルに、０．４ｍｌのＰＧＡ生産用液体培地（２２．５％ ＮａＣｌ、２％ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２％ ＫＣｌ、３％ Ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ Ｃｉｔｒａｔｅ、１％ Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、０．７５％ Ｃａｓａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）を加えて懸濁液を得た。０．２ｍｌの当該懸濁液を、ＰＧＡ寒天培地（１０％ ＮａＣｌ、２％ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２％ ＫＣｌ、３％ Ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ Ｃｉｔｒａｔｅ、１％ Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、０．７５％ Ｃａｓａｍｉｎｏ ａｃｉｄ、２％ Ａｇａｒ）に接種し、３７℃で３日間培養して、シングルコロニーを得た。
[Production Example 1; Production of poly-γ-L-glutamic acid]
To an L dry ampoule of Natrialba aegyptica (Accession Number: FERM BP-10749), 0.4 ml of PGA production liquid medium (22.5% NaCl, 2% MgSO 4 .7H 2 O, 0.2% KCl, 3% (Trisodium Citrate, 1% Yeast Extract, 0.75% Casamino acid) was added to obtain a suspension. 0.2 ml of the suspension was added to PGA agar medium (10% NaCl, 2% MgSO 4 .7H 2 O, 0.2% KCl, 3% Trisodium Citrate, 1% Yeast Extract, 0.75% Casamino acid, 2% Agar) and cultured at 37 ° C. for 3 days to obtain a single colony.
次に、５本の１８ｍｌ容試験管に、それぞれ、３ｍｌのＰＧＡ生産液体培地（２２．５％ ＮａＣｌ、２％ ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．２％ ＫＣｌ、３％ Ｔｒｉｓｏｄｉｕｍ Ｃｉｔｒａｔｅ、１％ Ｙｅａｓｔ Ｅｘｔｒａｃｔ、０．７５％ Ｃａｓａｍｉｎｏ ａｃｉｄ、ｐＨ７．２）を入れ、さらに、上記シングルコロニーを白金耳で１白金耳掻き取り植菌した。植菌後の試験管を、３７℃、３００ｒｐｍで３日間培養して、さらに、得られた培養液０．５ｍｌを、５０ｍｌ ＰＧＡ生産液体培地を入れた５００ｍｌ容坂口フラスコ１０本にそれぞれ植菌し、３７℃で５日間培養した。培養後、得られた培養液を遠心し、菌体を取り除いて上清を回収した。 Next, in each of five 18 ml test tubes, 3 ml of PGA production liquid medium (22.5% NaCl, 2% MgSO 4 .7H 2 O, 0.2% KCl, 3% Trisodium Citrate, 1% Yeast Extract, 0.75% Casamino acid, pH 7.2) was added, and the single colony was scraped and inoculated with one platinum ear with a platinum ear. The test tube after inoculation was cultured at 37 ° C. and 300 rpm for 3 days, and 0.5 ml of the obtained culture solution was inoculated into 10 500 ml Sakaguchi flasks each containing 50 ml PGA production liquid medium. And cultured at 37 ° C. for 5 days. After culturing, the obtained culture solution was centrifuged, the cells were removed, and the supernatant was collected.
次に、回収した上清に３倍量の水を加え希釈した後、１Ｎ硫酸でｐＨを３．０に調整した。ｐＨを調整した後、室温で５時間攪拌した。その後、３倍量のエタノールを加えて遠心分離を行い、沈殿物を回収した。この沈殿物がＬ−ＰＧＡである。 Next, 3 times the amount of water was added to the collected supernatant for dilution, and then the pH was adjusted to 3.0 with 1N sulfuric acid. After adjusting the pH, the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. Thereafter, 3 times the amount of ethanol was added and centrifuged, and the precipitate was collected. This precipitate is L-PGA.
回収したＬ−ＰＧＡを０．１ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ８．０）に溶解して、これを、低分子物質等の不純物を除去するために透析した。次に、透析後の液体に含まれる核酸を除去するために、当該液体に、ＭｇＣｌ２が１ｍＭ、ＤＮａｓｅＩ（ＴＡＫＡＲＡ社製）が１０Ｕ／ｍｌ、ＲＮａｓｅＩ（ニッポンジーン製）が２０μｇ／ｍｌとなるように加えて、３７℃で２時間インキュベートした。次いでタンパク質を除去するために、核酸を除去した後の液体にＰｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋ（タカラバイオ製）を３Ｕ／ｍｌとなるように添加して、３７℃で５時間インキュベートしてＰｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋ処理を行なった。 The collected L-PGA was dissolved in 0.1 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0), and dialyzed to remove impurities such as low molecular weight substances. Next, in order to remove nucleic acid contained in the liquid after dialysis, MgCl 2 is 1 mM, DNase I (manufactured by TAKARA) is 10 U / ml, and RNase I (manufactured by Nippon Gene) is 20 μg / ml. In addition, it was incubated at 37 ° C. for 2 hours. Next, in order to remove the protein, Proteinase K (manufactured by Takara Bio Inc.) was added to the liquid after removing the nucleic acid so as to be 3 U / ml, and incubated at 37 ° C. for 5 hours to carry out Proteinase K treatment.
Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｋ処理の後、超純水で透析し、低分子物質を除去した。次に、Ｌ−ＰＧＡを陰イオン交換樹脂（Ｑ ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ、ＧＥ ヘルスケア バイオサイエンス社製）に吸着させ、０．５ＭのＮａＣｌ水溶液で洗浄した後、１ＭのＮａＣｌ水溶液で溶出した。得られた溶液を、さらに超純水で透析し、透析後の溶液を凍結乾燥することにより、Ｌ−ＰＧＡのナトリウム塩（以下、「Ｌ−ＰＧＡ・Ｎａ塩」と表記する）を得た。なお、超純水は、ＭｉｌｌｉＱ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製の純水製造装置）で作製した。 After Proteinase K treatment, dialyzed with ultrapure water to remove low molecular weight substances. Next, L-PGA was adsorbed on an anion exchange resin (Q Sepharose Fast Flow, manufactured by GE Healthcare Bioscience), washed with 0.5 M NaCl aqueous solution, and then eluted with 1 M NaCl aqueous solution. The obtained solution was further dialyzed with ultrapure water, and the solution after dialysis was freeze-dried to obtain a sodium salt of L-PGA (hereinafter referred to as “L-PGA / Na salt”). In addition, the ultrapure water was produced with MilliQ (pure water production apparatus manufactured by Millipore).
〔製造例２；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の分子量分析−１〕
製造例１で得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩の平均分子量を、ＧＰＣ分析にて測定した。その結果、Ｍｗ＝７，５２２，０００、Ｍｎ＝３，７０４，０００、Ｍｗ／Ｍｎ＝２．０３１であることが確認された（プルラン換算）。
[Production Example 2; Molecular weight analysis of poly-γ-L-glutamic acid-1]
The average molecular weight of the L-PGA · Na salt obtained in Production Example 1 was measured by GPC analysis. As a result, it was confirmed that Mw = 7,522,000, Mn = 3,704,000, and Mw / Mn = 2.031 (in pullulan conversion).
なお、ＧＰＣ分析は、以下の条件で行なった。
装置：ＨＬＣ−８２２０ＧＰＣ（東ソー社製）
カラム：ＴＳＫｇｅｌ α−Ｍ（東ソー社製）
流速：０．６ｍｌ／ｍｉｎ
溶出液：０．１５Ｍ ＮａＣｌ水溶液
カラム温度：４０℃
注入量：１０μｌ
検出器：示差屈折計
The GPC analysis was performed under the following conditions.
Apparatus: HLC-8220GPC (manufactured by Tosoh Corporation)
Column: TSKgel α-M (manufactured by Tosoh Corporation)
Flow rate: 0.6 ml / min
Eluent: 0.15M NaCl aqueous solution Column temperature: 40 ° C
Injection volume: 10 μl
Detector: Differential refractometer
〔製造例３；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸の分子量分析−２〕
製造例１において、１．０ＭのＮａＣｌ水溶液溶出した後、さらに、１Ｎ ＨＣｌを用いて、ｐＨを２．０に調製した以外は、製造例１と同様の操作を行なって得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩の平均分子量をＧＰＣ分析により測定した。その結果、Ｍｗ＝２，８８８，０００、Ｍｎ＝１，３２７，０００、Ｍｗ／Ｍｎ＝２．１７６であることが確認された（プルラン換算）。なお、本製造例におけるＧＰＣ分析は、製造例２と同様の操作で行なった。
[Production Example 3; Molecular weight analysis of poly-γ-L-glutamic acid-2]
In Production Example 1, after elution of a 1.0 M NaCl aqueous solution, L-PGA · obtained by performing the same operation as in Production Example 1 except that 1N HCl was used to adjust the pH to 2.0. The average molecular weight of the Na salt was measured by GPC analysis. As a result, it was confirmed that Mw = 2,888,000, Mn = 1,327,000, and Mw / Mn = 2.176 (in pullulan conversion). The GPC analysis in this production example was performed in the same manner as in Production Example 2.
〔製造例４；ポリ−γ−Ｌ−グルタミン酸架橋体の作製〕
製造例１で得たＬ−ＰＧＡ・Ｎａ塩の５％水溶液を作製した。
[Production Example 4: Production of crosslinked poly-γ-L-glutamic acid]
A 5% aqueous solution of the L-PGA · Na salt obtained in Production Example 1 was prepared.
次に、Ｌ−ＰＧＡ・Ｎａ塩水溶液を、窒素を用いて３分間バブリングした後、蓋付き１０ｍｌサンプル瓶に、２ｍｌ分取して蓋を閉めた。 Next, the L-PGA / Na salt aqueous solution was bubbled with nitrogen for 3 minutes, and then 2 ml was taken into a 10 ml sample bottle with a lid and the lid was closed.
次に、サンプル瓶に、線源をコバルト６０とするγ線照射装置を用いてγ線を照射した。照射線量は、５ｋＧｙとなるように照射した。γ線照射後に得られた生成物を、サンプル瓶から取り出し、余分な水分を８０メッシュの金網で水切りした後、凍結乾燥することで、Ｌ−ＰＧＡ架橋体粉末を得た。なお、上記余分な水分には、未架橋のＬ−ＰＧＡが含まれており、当該水切りは、未架橋のＬ−ＰＧＡを除去することが主たる目的である。 Next, the sample bottle was irradiated with γ-rays using a γ-ray irradiation device using cobalt 60 as a radiation source. Irradiation dose was 5 kGy. The product obtained after γ-ray irradiation was taken out of the sample bottle, excess water was drained with an 80-mesh wire mesh, and freeze-dried to obtain L-PGA crosslinked powder. The excess water contains uncrosslinked L-PGA, and the main purpose of draining is to remove uncrosslinked L-PGA.
（Ｌ−ＰＧＡ酸溶液）
製造例１のＬ−ＰＧＡ（Ｌ−ＰＧＡ(1)）もしくは製造例４のＬ−ＰＧＡ架橋体（Ｌ−ＰＧＡ(2)）１０質量％と、精製水９０質量％を混合し、Ｌ−ＰＧＡ溶液を調製した。
(L-PGA acid solution)
10% by mass of L-PGA (L-PGA (1)) of Production Example 1 or L-PGA crosslinked product (L-PGA (2)) of Production Example 4 and 90% by mass of purified water were mixed, and L-PGA A solution was prepared.
（ローズマリー溶液）
ローズマリーエキス１０質量％（商品名ローズマリーエキス２１Ｒ；美容薬理研究所製）と、精製水９０質量％を混合し、ローズマリー溶液を調製した。
(Rosemary solution)
Rosemary extract 10% by mass (trade name Rosemary Extract 21R; manufactured by Aesthetic Pharmacology Laboratories) and 90% by mass of purified water were mixed to prepare a rosemary solution.
上記製造例１〜３を用いて、表１に示した実施例、比較例を調製した。 Examples and Comparative Examples shown in Table 1 were prepared using the above Production Examples 1 to 3.
［保湿効果］
実施例１〜３及び比較例１〜３を用いて、保湿効果の測定を行った。実施例若しくは比較例を前腕部、３×４ｃｍ2の範囲に２４μＬずつ塗布し、塗布前、塗布後３０分の角質水分量を測定した。角質水分量は、ＳＫＩＣＯＮ−２００（アイ・ビイ・エス株式会社製）を用い、各塗布部位から５ポイントずつの角質水分量を、測定した。５ポイントの測定値の平均値を角質水分量とし、塗布前の角質水分量を１とした相対値で表２に示した。３０分後の角質水分量について、比較例３と実施例の間で有意差検定を行い、５％の確率で有意差が認められたものは「＊」、１％の確率で有意差が認められたものは「＊＊」を表２に付した。
[Moisturizing effect]
The moisturizing effect was measured using Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 to 3. Examples or Comparative Examples were applied to the forearm portion in a range of 3 × 4 cm 2 by 24 μL, and the amount of keratin moisture was measured before application and 30 minutes after application. The horny water content was measured by using SKICON-200 (manufactured by IBI S Co., Ltd.), and the horny water content at 5 points from each application site was measured. Table 2 shows the relative values with the average value of the five-point measurement values as the keratin water content and the keratin water content before application as 1. For the keratin water content after 30 minutes, a significant difference test was performed between Comparative Example 3 and the Example, and a significant difference was recognized with a probability of 5% was “*”, and a significant difference was recognized with a probability of 1%. Those marked with “**” are given in Table 2.
表２に示した通り、比較例３のローズマリーエキスは単独では全く保湿効果を示さなかった。しかしながら、Ｌ−ＰＧＡと、ローズマリーエキスを併用した実施例１〜３は、保湿有効成分であるＬ−ＰＧＡの塗布量が減少しているにもかかわらず、対応する比較例より高い保湿効果を示していた。したがって、Ｌ−ＰＧＡと、ローズマリーエキスを併用して肌に塗布することにより、保湿効果が相乗的に向上する。 As shown in Table 2, the rosemary extract of Comparative Example 3 alone showed no moisturizing effect. However, Examples 1-3 using L-PGA and rosemary extract in combination have a higher moisturizing effect than the corresponding comparative examples, although the application amount of L-PGA, which is a moisturizing active ingredient, is reduced. Was showing. Therefore, the moisturizing effect is synergistically improved by applying L-PGA and rosemary extract together to the skin.
［浸透性］
実施例１〜３及び比較例１、２を用いて、肌への浸透性の評価を行った。化粧料のヘビーユーザーである２０から３０才代の女性１０名を一群として、実施例１、２、比較例１、２をそれぞれ手に塗布させ、肌への浸透性を評価させた。肌に浸透性があると評価した評価者の人数を表３に示す。
[Penetration]
Using Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 and 2, the permeability to skin was evaluated. A group of 10 females in their 20s to 30s who are heavy users of cosmetics, Examples 1, 2 and Comparative Examples 1 and 2 were applied to their hands, and the permeability to skin was evaluated. Table 3 shows the number of evaluators who evaluated that the skin has permeability.
表３に示した通り、本発明の実施例は、Ｌ−ＰＧＡを単独で配合した比較例１、２より、肌への浸透性を実感することができた。 As shown in Table 3, the Examples of the present invention were able to realize the permeability to skin from Comparative Examples 1 and 2 in which L-PGA was blended alone.
[実施例４]
下記（１）から（１２）の成分を混合、均一化して、エッセンスを調製した。
（１）カルボキシビニルポリマー（１．０質量％水溶液） ８．０００（質量％）
（２）精製水
（３）キサンタンガム（１．０質量％水溶液） ３．０００
（４）グリセリン ５．０００
（５）Ｌ−ＰＧＡ １０．５００
（６）ローズマリー溶液 １．０００
（７）プロリン ０．００１
（８）ヒドロキシプロリン ０．００１
（９）アルテアエキス ０．０１０
（１０）フェノキシエタノール ０．２００
（１１）１，３−ブチレングリコール １５．０００
（１２）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液） ０．８００
[Example 4]
The following components (1) to (12) were mixed and homogenized to prepare an essence.
(1) Carboxyvinyl polymer (1.0 mass% aqueous solution) 8.000 (mass%)
(2) Purified water (3) Xanthan gum (1.0 mass% aqueous solution) 3.000
(4) Glycerin 5.000
(5) L-PGA 10.500
(6) Rosemary solution 1.000
(7) Proline 0.001
(8) Hydroxyproline 0.001
(9) Altea extract 0.010
(10) Phenoxyethanol 0.200
(11) 1,3-butylene glycol 15.000
(12) L-arginine (10% by mass aqueous solution) 0.800
本発明は、ポリ−γ−L−グルタミン酸および／またはその塩、ローズマリーエキスを含有することにより、ポリ−γ−L−グルタミン酸の保湿効果を相乗的に向上させ、肌への浸透性が向上した保湿剤を提供することができる。さらに、従来のポリ−γ−L−グルタミン酸よりも、原料コストが安価であり、大量生産可能となり、長期にわたる使用に十分に耐え得ることからも、産業界に大きく寄与することが期待される。
By containing poly-γ-L-glutamic acid and / or a salt thereof and rosemary extract, the present invention synergistically improves the moisturizing effect of poly-γ-L-glutamic acid and improves the permeability to the skin. Moisturizer can be provided. Furthermore, since the raw material cost is lower than that of conventional poly-γ-L-glutamic acid, it can be mass-produced, and can sufficiently withstand long-term use, it is expected to greatly contribute to the industry.
Claims (6)
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2019011274A (en) * | 2017-06-30 | 2019-01-24 | 三省製薬株式会社 | Skin permeability enhancer and skin external preparation |
-
2010
- 2010-06-18 JP JP2010139332A patent/JP2012001504A/en active Pending
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