JP2011523848A - 運動ニューロン疾患の調節物質を用いる処置方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、米国特許法(35U.S.C.)第119条(e)に基づいて、2008年5月21日に出願された米国仮出願第61/128,522号に対する、および米国特許法(35U.S.C.)第120条に基づいて、2007年1月5日に出願された米国特許第11650,020号に対する(2006年1月5日に出願された米国仮出願第60/756,836号および2006年1月5日に出願された同第60/756,952号に対する米国特許法(35U.S.C.)第119条(e)に基づく優先権の利益を主張している)優先権の利益を主張するものであり、すべての出願の内容がそれらの全体を参照することにより本明細書に組み込まれる。
細胞体の直径が数桁の長さに達し得る軸索樹状突起間突起の存在を特徴とするニューロンの高度に非対称の形態は、かかる突起を維持し、非常に長い距離にわたり細胞小器官、小胞、もしくはタンパク質サブユニットならびに複合体(「カーゴ」)の輸送を支える細胞骨格の能力により決定される。主な細胞骨格系の1つは、それに沿ってキネシンおよびダイニンモータータンパク質が力を生じ、多くの細胞成分(例えばシナプス小胞)の輸送を促す微小管に基づく輸送系である。微小管(MT)依存性軸索輸送は主要ニューロンの伝達および輸送網であり、これは様々なタイプの分泌された神経伝達物質(成長因子(例えば神経栄養因子‐1[NueR‐1])、神経伝達物質(例えばアセチルコリン[Ach])、神経ペプチド(例えばアセチルコリン[Ach])、酵素(例えばアセチルコリンエステラーゼ[AChE])および糖タンパク質(例えばクロモグラニンB[Chr‐B])など)の経路として働く。「カーゴ」分子は、「カーゴ」分子生成の原発部位である運動ニューロンの細胞体から神経末端へと移動し、そこで「カーゴ」分子はシナプス間隙に放出される。脳脊髄液(CSF)はニューロンから分泌される神経ペプチド、酵素および糖タンパク質の媒介物である。分泌された成長因子(例えば神経栄養因子‐1[NueR‐1])、神経伝達物質(例えばアセチルコリン[Ach])、神経ペプチド(例えばアセチルコリン[Ach])、酵素(例えばアセチルコリンエステラーゼ[AChE])および糖タンパク質(例えばクロモグラニンB[Chr‐B])は、血中に放出されて循環し得る。血液または腰CSF中の成長因子、神経伝達物質、神経ペプチド、酵素または糖タンパク質のインビボ動力学測定値をMT機能の直接指標として用い得、速い軸索輸送の改善および神経系における分泌機能を誘発する治療のモニタリングが可能となる。ALSなどの運動ニューロン疾患、糖尿病性ニューロパシーなどの様々なニューロパシー、およびパーキンソン病などは、軸索輸送障害および変更された分泌機能などの変化を共有する病態である。
微小管(「MT」)はニューロンに豊富にあり、そこで神経突起(軸索および樹状突起)の形成を促して安定性を付与する。微小管はニューロン形態の主な決定要因であり、神経突起(軸索および樹状突起)の形成を促進して安定性を付与する。軸索微小管の会合および脱会合過程(「微小管動的挙動」として知られている)は、ニューロン形態を決定して維持する微小管の能力に基づく。ニューロンの構造的安定性に必須のこの過程は、ニューロン内のシグナル伝達経路も表す。微小管動的挙動は、大部分が微小管結合タンパク質(MAP)により制御される。ニューロンMAPは、特異的極性分布を有し、微小管の安定化において顕著な役割を果たす。
本明細書に開示の発明は、以下に関する:(1)微小管動的挙動を直接測定するための新規同位体標識技術の使用による、運動ニューロン疾患に対する新規治療標的、つまり、ニューロン微小管の動的性(すなわち、チューブリン二量体からの微小管の特定のサブ集団の会合および脱会合速度)の発見;(2)ニューロン微小管の動的性を、同位体標識技術の使用により生存動物またはヒト対象で測定することができ、それは、動物またはヒト対象における身体症状または神経機能喪失の発現前でも、ALSなどの運動ニューロン疾患において著しく変更されているという発見;(3)ALSなどの運動ニューロン疾患におけるニューロン微小管の変更された動的性を、ノスカピン、ノコダゾール、タキサン、および他の薬剤が挙げられるが、これらに限定されないある種の薬剤を単独で、または他のニューロン系、受容体、または経路を標的とする薬剤と併用して投与することにより調節することができるという所見;(4)確定または初期の運動ニューロン疾患(ALSなど)を呈する動物またはヒト対象に対して、ニューロンの微小管動的挙動を調節する薬剤の単独投与または薬剤の併用投与が、運動ニューロン疾患の神経機能喪失を著しく遅延または予防でき(運動ニューロン疾患の徴候および症状の発症を遅らせ、徴候および症状の進行を緩慢化し、死亡までの時間を延ばすこと(すなわち、延命)など)、それにより成功した神経保護療法であることを表すことができることの発見;(5)神経保護療法をもたらすことを意図した薬剤の投与に応答した、確定または初期の運動ニューロン疾患(ALSなど)を呈する動物またはヒト対象におけるニューロン微小管動的挙動のモニタリングが、運動ニューロン疾患を呈する個々の対象または対象の薬剤試験における最適用量、薬剤、薬剤併用、レジメン、治療のタイミング、治療期間、または他の最適な治療戦略の態様の同定(すなわち、診断的モニタリング)を可能にすることの発見。
本発明方法の第一工程として、同位体標識前駆体を生物系に投与する。「生物系」としては、細胞、細胞株、患動物モデル、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、他のペット動物、マウス、ラット、非ヒト霊長類、およびヒトが挙げられるが、これらに限定されない。「個体」は、脊椎動物、通常、哺乳類(特にヒト)であり、「哺乳類」としては、ヒト、ならびにチンパンジーおよび他の類人猿ならびにサル種などの非ヒト霊長類;ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、およびウマなどの家畜;イヌおよびネコなどの飼育哺乳類;マウス、ラット、およびモルモットなどの齧歯類を含む実験動物が挙げられるが、これらに限定されない哺乳綱の任意のメンバーを意味する。これらの用語は特定の年齢または性別を示さない。したがって、雄または雌の、成体および新生対象、ならびに胎児に及ぶことを意図する。一般に、本明細書で使用される「試験対象」とは、脊髄運動ニューロン微小管動的挙動の変化、および/または運動ニューロン疾患症状の変化を検討されている個体である。
本発明方法の実施において、1つの態様では、タンパク質は当該技術分野で知られた方法により生物系から得られる。一般に、試料は、運動ニューロンを含み、それらは試験対象の種々の部位(例えば、脳の運動皮質、坐骨神経、末梢神経)から採取でき、坐骨神経が特に有用である。
タンパク質中の同位体富化は、NMR、レーザー分光法、液体シンチレーション計測、ガイガーカウンター、および質量分析法などの当該技術分野で知られた様々な方法により測定することができる。質量分析法を用いる方法において本発明で用途が見出されるいくつもの異なるタイプの質量分析器があり、ガスクロマトグラフィー‐質量分析法(GC‐MS)、同位体‐比質量分析法、GC‐同位体比‐燃焼‐MS、GC‐同位体比‐熱分解‐MS、液体クロマトグラフィー‐MS、電気スプレーイオン化‐MS、マトリックス支援レーザー脱離‐飛行時間‐MS、フーリエ変換‐イオン‐サイクロトロン‐共鳴‐MS、およびサイクロイダル‐MSが挙げられるが、これらに限定されない。
ks=[‐ln(1‐f)]/t
(式中、f=分画合成=生成物の富化/漸近前駆体/富化、およびt=試験系において接触する標識投与時間)
を適用することにより測定し得る。
kd=[‐ln f]/t
に基づいて計算し得る。
本発明は、運動ニューロン疾患の調節物質をスクリーニングする方法を提供する(図4〜7、10参照)。この文脈において「調節物質」とは、活性のアゴニストおよびアンタゴニストを意味し、アンタゴニストが特に有用である。調節物質は、機能異常の活性を抑制し、任意の関連担体の副作用を最小限にするように選択される。
1つの実施形態では、候補薬の運動ニューロンの微小管活性を調節する能力についてスクリーニングする。本明細書で使用される「候補薬剤(candidate agent)」または「候補薬(candidate drug)」とは、本明細書に概説した活性についてスクリーニングすることができる、任意の分子、例えば、生体治療法剤(抗体および酵素など)を含むタンパク質、既知の薬剤および薬剤候補を含む小有機分子、多糖類、脂肪酸、ワクチン、核酸などを説明する。この文脈において、「一般」候補薬は、微小管、運動ニューロン、および/または運動ニューロン疾患の調節との関連が未知である。
上に概説したように、一般的候補薬に加え、本発明は、微小管活性、運動ニューロン機能不全、および/または運動ニューロン疾患の調節物質のスクリーニングに用途が見出される。本明細書において「微小管活性」とは、種々の微小管生物活性のうちの1つを意味し、これには微小管重合および/または脱重合の速度、ある細胞位置から別の位置への細胞成分の輸送を持続させる能力、微小管の細胞骨格機能などが含まれるが、これらに限定されない。
1つの実施形態では、微小管標的調節剤を試験する。本明細書において「微小管標的調節剤」または「MTMA」とは、微小管重合および/または脱重合の速度に影響し、特に微小管の不安定性(すなわち、動的性)を低減するか遅くすることが先に認識されているか提唱されている薬剤を意味する。
主な興奮性神経伝達物質であるL‐グルタメート経路に関与するリガンド依存性イオンチャンネル(イオノトロピック受容体)には3つの主なタイプがある。これらはNMDA、AMPA、およびカイネート受容体であり、その各調節物質は本発明の経路スクリーニングに用途が見出される。
NMDA受容体は、N‐メチル‐D‐アスパラギン酸(NMDA)による選択的活性化により最初に同定された。NMDA受容体は、NR1サブユニット、および4つの分離した遺伝子産物の1つ(NR2A‐D)であり得るNR2サブユニットの組立体からなる。両サブユニットの発現は機能的チャンネルを形成するのに必要である。グルタメート結合ドメインは、NR1およびNR2サブユニットの接合部に形成される(したがって、発現する両サブユニットに必要)。グルタメートに加えて、NMDA受容体は、その受容体を機能させるために結合させるコアゴニストであるグリシンを必要とする。グリシン結合部位はNR1サブユニット上に見出される。NR2Bサブユニットは、NMDA受容体の機能を調節する調節分子であるポリアミンに対する結合部位も有する。グルタメート(NMDA)結合部位に加えて、NMDA受容体上には調節化合物に対する複数の結合部位もある。効率的なNMDA受容体の活性化には、NMDAだけでなくグリシンも必要である。活性化はポリアミンの結合により調節することもできる。各結合部位(グルタメート、グリシン、ポリアミン)は、受容体とサブタイプ選択的化合物の両方の開発用の潜在的標的として用いられている。
MTMAおよび受容体アンタゴニストに加え、他の経路‐選択薬として、運動ニューロンにおいて酸化ストレスをもたらすものが挙げられる。これらの薬剤としては、ビタミンE、プロシステイン、N‐アセチルシステイン、リポ酸、および様々なタイプのニトロンなどの一般の抗酸化剤が挙げられる。
神経炎症が最近、運動ニューロン疾患に対する有意な誘因として浮上している。例えば、ALS組織は、孤発性と家族性の両ALSおよびSODトランスジェニックマウスモデルにおいて観察される炎症変化を特徴とする。炎症変化には、多数の活性化小グリアおよび星状細胞の蓄積が含まれる。腫瘍壊死因子(TNF)などの前炎症性サイトカインはALSにおいて確実に上方制御される。腫瘍壊死因子受容体(TNF‐R1)は、疾患の未発症期後半ならびに症候期で増加する。TNFはALSにおける神経炎症の主な促進物質として作用するのに対し、共刺激サイトカインおよびケモカインのいくつかはTNF効果を可能にするように作用する。これらの変化は、パーキンソン病、および糖尿病性ニューロパシーなどの様々な末梢ニューロパシーなどの他の運動ニューロン疾患でも観察される。
加えて、抗グルタメート剤、他の抗炎症剤および他の抗痙攣剤をすべて試験できる。無論、本発明は任意の特定クラスの化合物における任意の特定の化合物に制限されることはない。任意の化合物または任意の化合物の併用が、本発明方法における使用のために想定される。
本明細書に概説した通り、運動ニューロン疾患(特にALS)を治療するのに使用できる種々の医薬組成物がある。1つの実施形態では、該医薬組成物は本明細書に概説したMTMA剤および医薬担体を含む。この実施形態では、ノスカピンに特定の用途が見出される。
1つの実施形態では、本発明の方法は、症状発症前に運動ニューロン疾患の検出を可能にする本明細書に概説した生化学マーカーの使用により、運動ニューロン疾患の初期診断を可能にする。したがって、本発明方法を利用することにより、ならびに例えば、小丘および軸索シャフト(STOP)微小管の過剰な動的性(例えば、不安定性、高速代謝回転)を検出することにより、運動ニューロン疾患(ALSなど)の存在を検出できる。通常、軸索微小管は非常に安定しているため(本質的に標準アッセイ時間にわたりチューブリン交換はない)、この文脈における「不安定性」とは、運動ニューロン微小管内への新規チューブリンの取り込み百分率の増大である。
1つの実施形態では、本方法は、生物系を化合物または化合物併用に曝露後に観察される微小管動的性に対する効果を評定することを可能にする。したがって、得られたおよび分析したデータは、薬剤の発見、開発、および承認(Drug Discovery, Development, and Approval:DDDA)過程において有用である。なぜなら、そのデータは、DDDA意思決定過程を促進する;すなわち、化合物または併用化合物の開発をさらに継続するか(例えば、微小管動的性安定化データが有望と思われる場合)、あるいは前記活動を中断するか(例えば、微小管動的性安定化データが不振と思われる場合)を決定する上で意思決定者にとって有用な情報を提供するからである(この過程の図解表示については、図13を参照されたい)。
チューブリンは先に記載されたプロトコールを少し修正したものを用いて精製した(Fanara, P., Oback, B., Ashman, K., Podtelejnikov, A., Brandt, R. Identification of MINUS, a small polypeptide that functions as a microtubule nucleation suppressor. EMBO J. 18, 565‐577 (1999); Fanara, P. et al. In vivo measurement of microtubule dynamics using stable isotope labeling with heavy water. Effect of taxanes. J. Biol. Chem. 279, 49940‐49947 (2004)。体外(ex vivo)精製のため、マウスをイソフルランで麻酔し、頸椎脱臼により安楽死させた。坐骨神経を解剖し、次の通り単離した。皮膚を引き下げて下半身の筋肉を露出させた。腰部直下で広域仙骨部の真上にある脊髄をはさみで横に切断した。半ば開いたはさみを、臀部の広域腸骨部にほぼ当たるまで腰部の背骨に滑り下ろした。こうすることにより脊髄のできるだけ近くで坐骨神経を切断することとなる。鉗子を用いて筋層を肢の大腿部(大腿)上方に持ち上げた。次いで、筋肉の表層を注意深く切断して筋層間の白質神経を露出させた。神経上の筋肉を横に切断し、切断部を足と臀部に向かって広げた。臀部で神経は向きを変えて骨盤骨中を下降する。小さなはさみの先端を背骨と平行に第一脊髄切断部に向かって筋肉に差し入れた。これにより坐骨神経の最後の部分(神経筋接合部の成長円錐)を露出させた。鉗子を用いて、白質神経をつかんで持ち上げた。より小さなはさみを使って筋肉に残ったわずかな付着部を切断した。組織を次に速やかにチューブに入れ、MSB中で穏やかにホモゲナイズした。微小管ポリマーから細胞質チューブリン二量体を分離するため、核除去後の上清を20℃で190,000×g、35分間遠心した。上清または非微小管分画(可溶性二量体チューブリンを含む)をペレットまたは微小管分画(重合チューブリンを含む)から分離し、急速冷凍して‐20℃で保存した。微小管ペレットを連続イムノ親和性クロマトグラフィー工程によりさらに分画した。タウ結合微小管を単離するため、タウ5抗体を0.25mg/mLの濃度でエポキシ活性化セファロースビーズ(Amersham Pharmacia Biotech)と共有結合させた。約0.2mgの微小管ペレットを室温で1時間0.5mL MSB中のタウ‐5ビーズとインキュベーションした。非結合物質を除去し、ビーズを0.5mLのMSBで3回洗浄し、結合物質を1M NaCl含有0.5mL MSBで溶出させた。一部の実験では、MAP2結合微小管を、同じプロトコールを用いてMAP2抗体と結合させたエポキシ活性化セファロースビーズ(0.5mg抗体/mLビーズ)上のイムノ親和性クロマトグラフィーによりタウ5非結合物質から捕捉した。各調製物(チューブリン二量体およびタウ5‐結合、MAP2‐結合、および非結合微小管分画)中のチューブリンの相対存在比をウエスタンブロットにより定量し、これらの分画由来のチューブリンを先に記載のごとくイオン交換およびサイズ排除クロマトグラフィーによりさらに精製した(Fanara, P. et al. In vivo measurement of microtubule dynamics using stable isotope labeling with heavy water. Effect of taxanes. J. Biol. Chem. 279, 49940‐49947 (2004))。
低温安定微小管を先に記載のプロトコールを少し修正したものを用いて単離した(Pirollet, F., Derancourt, J., Haiech, J., Job, D., Margolis, R. L. Ca (2+)‐calmodulin regulated effectors of microtubule stability in bovine brain. Biochemistry 31, 8849‐8855 (1992))。簡単に述べると、細胞または組織粗ホモジネートを1.5mM CaCl2含有氷冷MSB中で調製し、緩衝液の細胞塊または脳組織に対する割合は1.4:1(vol/wt)の比率に設定した(Fanara, P., Oback, B., Ashman, K., Podtelejnikov, A., Brandt, R. Identification of MINUS, a small polypeptide that functions as a microtubule nucleation suppressor. EMBO J. 18, 565‐577 (1999)。氷上で2分後、EGTAを添加して最終濃度3mMとし、混合物をさらに1分間氷上でホモゲナイズした。抽出物を4℃で150,000×g、30分間遠心し、上清を収集した。上清を30℃でインキュベーションして微小管会合を開始した。1時間後、抽出物を4℃で20分間冷却し、微小管安定化緩衝液中の50%(wt/vol)ショ糖クッションを介して200,000×gで30分間遠心した。4℃で微小管脱安定化緩衝液に最終ペレット(低温安定微小管)を懸濁してから、チューブリンを先に記載のごとく精製した(Fanara, P. et al. In vivo measurement of microtubule dynamics using stable isotope labeling with heavy water. Effect of taxanes. J. Biol. Chem. 279, 49940‐49947 (2004))。
チューブリン試料は、6N HClで110℃にて16時間処理することにより加水分解した。タンパク質由来アミノ酸を誘導体化してペンタフルオロベンジル誘導体とし、アラニンへの2Hの取り込みを他に詳述されているGC/MSにより測定した(Fanara, P. et al. In vivo measurement of microtubule dynamics using stable isotope labeling with heavy water. Effect of taxanes. J. Biol. Chem. 279, 49940‐49947 (2004))。2H富化は、(M+1)質量アイソトポマーとして存在するアラニン誘導体の百分率の天然存在比に対する増加パーセントとして計算した。
体水の2H2O富化および培地は上記のごとく測定した。簡単に述べると、炭化カルシウムとの反応により血漿水由来のプロトンをアセチレンに転移させた。アセチレン試料を、次にm/z 26および27(M0およびM1)でイオンを記録するよう改変し、99.9% 2H2Oを非標識水と混合して作製した標準曲線に対して較正したSeries 3000サイクロイダル質量分析計(Monitor Instruments, Cheswick, PA)を用いて分析した。体水の2H富化は薬剤処置の影響を受けなかった(データ示さず)。
雌SOD‐1 G93A TGNマウスをジャクソンラボラトリー(系統#2726)から入手した。対照は適合同腹仔とした。処置群は3匹/群とした。ノスカピンを、3回/週(0.2mg/kg腹腔内)大腿部に腹腔内注射し、MK801を飲水にて連続投与した(12mg/kg/日)。歩行分析を、Wooley et al., Muscle Nerve 2005 32(1):43‐50およびCarter et al. J. Neurosci., 19(8):3248‐3257(それらの全体を参照することにより本明細書に組み込まれる)の方法により行なった。
臨床徴候:完全な運動性、および年齢適合対照の行動と観察し得る差なし(歩行または歩幅分析)。
臨床徴候:異常な歩行もしくは歩幅の分析、ならびに下肢脱力:年齢適合同腹仔に対して歩幅が40%超低減。
臨床徴候:顕著な下肢完全麻痺(この系統では一方の肢に、他方より多く生じる)、および5秒間の時間枠での直立不能。この終末期は、通常、マウスが歩行分析試験に合格せず、終末期に入る際、開始する。したがって、SOD1‐G93A TGNトランスジェニックマウスは、顕著な下肢完全麻痺および5秒間の時間枠での直立不能の発現時に安楽死させる。
新規の2剤の薬剤療法の成功の確認を図16に示す。MTMA/KM‐ID05薬を症候性SOD1G93Aマウス(10週齢)に投与し、3週間処置を行なった(n=3)。処置の最終2日間に2H2O(8%)をマウスに投与し、標識48時間後に屠殺した。腰椎部脊髄(L2〜L5レベル)および坐骨神経の全長を解剖し、注意深く取り出した。脊髄運動ニューロンおよび坐骨神経のすべてのニューロンコンパートメントで微小管動的挙動を測定した。
MT依存性の遅い軸索輸送の侵襲的なインビボでの測定。図23に示すように、症候性SDO1G93Aトランスジェニックの坐骨神経運動軸索において2H標識チューブリンのMT依存性の遅い軸索輸送は正常な野生型(WT)同腹仔に比べて低減する。各データポイントは、30〜35mL/kg 2H2O単ボーラス投与から21日後に屠殺した13週齢マウスのL5神経根および坐骨神経の2mmの連続部分を表す。しかしながら、3週間のMTMA処置後、微小管動的挙動および2H‐チューブリンの遅い軸索輸送は大幅に回復する。一方、リルゾールに有意な効果はなかった。
MT依存性の速い軸索輸送の非侵襲的なインビボでの測定。変性運動ニューロンに対する健常運動ニューロンの神経シナプス小胞カーゴ分子の分泌速度を測定するための動力学技法の代表モデルを図24に示す。目標は、疾患に罹患したニューロン中のMT依存性輸送障害の特定の即時指標を提供することである。MTに基づく輸送系は主要な細胞骨格系の1つであり、それに沿って、キネシンおよびダイニンモータータンパク質が力を生じ、多くの細胞成分(例えばシナプス小胞)の輸送を促す。MT依存性軸索輸送は主なニューロンの伝達および輸送網であり、分泌小胞カーゴ(成長因子、神経伝達物質、酵素および糖タンパク質など)の経路として働く。本明細書で試験した基本的な戦略は、MT動的挙動障害のもと、輸送され、次いで分泌された2H標識小胞「カーゴ」の速度(すなわち細胞体内での合成からシナプス放出までの時間)がMT輸送系の影響を受け、CSF収集によりインビボで測定可能であることである。重水(2H2O)のパルス投与後、CSF中の出現、脊髄運動ニューロン中の同時保持、変性運動ニューロン中の2H標識小胞カーゴ分子の動力学の遅延に基づき、MT依存性の速い軸索輸送は遅くなる。
Claims (9)
- 運動ニューロン疾患を呈する対象における薬剤効果をモニタリングする方法であり:
a)試験生物系を1つまたは複数の薬剤に曝露し;
b)前記生物系に同位体標識基質を、前記同位体標識基質が運動ニューロン軸索における1つまたは複数のカーゴ分子中に入るのに十分な期間投与し;
c)前記生物系から複数の試料を採取し;
d)前記複数の試料中、分泌シナプス小胞カーゴ分子における同位体富化の経時変化、パターンもしくは量を定量し;
e)対照系からの試料中の分泌シナプス小胞カーゴ分子における同位体富化の経時変化、パターンもしくは量を測定し;
f)前記生物系において単離された前記シナプス小胞カーゴ分子における同位体富化の経時変化、パターンもしくは量を対照生物系における同一パラメータと比較し;ならびに
g)運動ニューロンにおける微小管(MT)依存性の遅いおよび速い軸索輸送速度に対する前記薬剤の効果を決定すること
を含む前記モニタリング方法。 - 前記分泌シナプス小胞カーゴ分子が、成長因子、神経伝達物質、糖タンパク質、および分泌酵素からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記成長因子が神経栄養因子‐1を含み、前記神経伝達物質がアセチルコリンを含み、前記糖タンパク質がクロモグラニンBを含み、前記分泌酵素がアセチルコリンエステラーゼを含む、請求項2に記載の方法。
- 前記分泌シナプス小胞カーゴ分子における同位体富化の経時変化、パターンもしくは量、ならびにそれによる前記試験生物系の運動ニューロン中のMT依存性軸索輸送効率を分泌カーゴ分子中の同位体富化の経時変化、パターンもしくは量、ならびにそれによる前記対照生物系の運動ニューロン中の速い軸索輸送効率と比較する、請求項1による方法。
- 前記複数の薬剤が単独または併用投与される、請求項1〜4による方法。
- 前記試料がCSF、血液または組織試料を含む、請求項1〜5による方法。
- 前記試料が複数時点に収集される、請求項1〜6による方法。
- 運動ニューロンにおけるMT依存性の遅いおよび速い軸索輸送効率を改変する薬剤を投与し、運動ニューロンにおいて前記運動ニューロン疾患を処置することを含む、運動ニューロン疾患の処置方法。
- 運動ニューロンにおけるMT依存性の遅いおよび速い軸索輸送効率を改変する薬剤とニューロンを接触させることを含む、運動ニューロン疾患において有効な薬剤をスクリーニングする方法。
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