JP2011521648A - Hivの侵入を阻害するための二機能性分子 - Google Patents
Hivの侵入を阻害するための二機能性分子 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011521648A JP2011521648A JP2011511825A JP2011511825A JP2011521648A JP 2011521648 A JP2011521648 A JP 2011521648A JP 2011511825 A JP2011511825 A JP 2011511825A JP 2011511825 A JP2011511825 A JP 2011511825A JP 2011521648 A JP2011521648 A JP 2011521648A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bifunctional molecule
- seq
- amino acid
- infection
- virus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Description
本発明は、米国特許法§119(e)の下、2008年5月28日に出願された米国仮特許出願第61/056,580号の利益を主張し、この出願の全内容は、本明細書中において参考として援用される。
本開示は、抗ウイルス薬の分野に関連する。特に、本開示は、ヒト免疫不全ウイルスの標的細胞への侵入を阻害する、二機能性分子を含む抗ウイルス薬に関連する。
2007年の終わりまでに、世界中で約3320万人の人々が、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)に感染して生きており、そして2500万人を超える人々が、後天性免疫不全症候群(AIDS)のために死亡した。従って、HIV感染に対する新しい治療戦略を発見および開発することが、緊急に必要である。今までのところ、15個の逆転写酵素阻害剤(RTI)、10個のプロテアーゼ阻害剤(PI)、1つのインテグラーゼ阻害剤(II)、および2つの侵入阻害剤(EI)を含む、HIVに感染した人々を治療するための28個の抗HIV薬が米国食品医薬品局によって認可された。RTI、PI、およびIIは全て、ウイルスが宿主細胞へ入った後にHIVの複製を阻害するが、2つのEIは、宿主細胞へのHIVの侵入を阻害し得る。
標的細胞へのHIVの侵入を阻害する二機能性分子が、本明細書中で開示される。現在の抗HIV薬と異なる作用メカニズムによって、これらの分子を、非Bおよび多剤耐性株を含む、HIVに感染した患者の治療のための治療薬として使用し得る。
(i)それぞれウイルスgp41NHR領域のポケット形成配列およびHR配列に結合する、ポケット結合ドメイン(PBD)および7アミノ酸繰り返し(HR)結合ドメイン(HBD)を含むC末端7アミノ酸繰り返し(CHR)ペプチド;(ii)それぞれウイルスgp41NHR領域のHR配列および標的細胞の脂質膜に結合する、HBDおよびトリプトファンリッチドメイン(TRD)を含むCHRペプチド;および(iii)これら2つの機能的ドメインが自由に動いて、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)またはHIV感染細胞上の対応する標的タンパク質に結合し得るように、2つのCHRペプチドを連結する、10から40アミノ酸から成る柔軟なリンカーから成る、二機能性(キメラ)分子が、本明細書中で提示される。その二機能性分子を、E.coli細胞、酵母細胞、昆虫細胞、または哺乳類細胞において発現し、クロマトグラフィーによって精製し、そしてHIVによる細胞−細胞融合およびHIV複製に対するその阻害活性に関して試験する。
二機能性分子TLT−1の発現、精製、および特徴付け
典型的な二機能性分子TLT−1のための発現プラスミドを創製するために、pTLT−1、T1144をコードするDNA断片、35マーのリンカー(GGGGS)7、およびT20を、3段階のオーバーラップPCRによっていっしょに連結した。まず、T1144、L35、およびT20 DNA断片を、表4で記載したような対応するプライマーペアを用いたオーバーラップPCRによって産生した。2番目に、L35およびT20をコードするDNA断片を、プライマーFL35およびプライマーRT20を用いるオーバーラップPCRによって連結した。3番目に、T1144およびL35−T20をコードする2つのDNA断片を、プライマーFT1144およびRT20を用いるオーバーラップPCRによって連結した。最後に、T1144−L35−T20をコードする増幅DNA断片を、BamHIおよびXhoIによって消化し、そして発現ベクターpGEX−6p−1へ挿入して、pTLT−1プラスミドを産生した。
TLT−1の抗HIV活性
TLT−1は、実験室適応HIV−1株および一次HIV−1株によるHIV−1媒介の細胞−細胞融合および感染の阻害において、高度に活性であった。
TLT−1の安定性
インビトロにおける安定性を試験するために、TLT−1、T20、またはT1144(最終濃度16μM)を、PBMC(10%ウシ胎仔血清を含むRPMI 1640中)またはヒト血清(100%)とそれぞれ37℃でインキュベートした。異なる間隔でサンプルを回収し、そして上記で記載したように、細胞−細胞融合阻害アッセイを用いて、活性成分の残存濃度に関して試験した。TLT−1は、ヒト血清およびPBMCの存在下で安定であり、そしてT1144およびT20よりもタンパク質分解に対してより抵抗性であった。TLT−1の安定性を、まずヒト血清およびPBMCの存在下でアッセイし、そしてT20およびT1144のそれと比較した。試験した3つのペプチドは全て、ヒト血清において安定であり、そして4日までの間完全に活性であり(図8A)、そしてその後活性を失い始めた;TLT−1は6日後に40%の活性を維持し、それぞれ20%および5%の残存活性を有するT1144およびT20よりも安定であった。T20はPBMC中で2日後に活性を失い始め、そして6日間のインキュベーション後90%を超える活性を失い、一方T1144およびTLT−1は、PBMCアッセイの間には活性の喪失を示さなかった(図8B)。
TLT−1の2次元構造
TLT−1は、高いαヘリックス含有量で、構築されたタンパク質へフォールディングし、そしてN−ペプチドと共に高度に熱安定性の複合体を形成する。円二色性(CD)を用いて、タンパク質およびペプチド2次構造の変化を研究した。2つのペプチドの相互作用誘導2次構造の変化を決定するために、混合物のCDおよび同じ濃度における個々のペプチドのものを測定し、そして混合物のCDスペクトルと2つの別々のペプチドのスペクトルをあわせたものとを比較した。
TLT−1は、6−ヘリックス束の形成を阻害する
TLT−1の6−HB形成を防止する能力を、蛍光C34−FAMプローブを用いた蛍光N−PAGE(FN−PAGE)によって決定した。図12に示すように、C34−FAMは、N36と安定な6−HBを形成した。T20、T1144、およびTLT−1のC34−FAM/N36 6−HB形成を阻害する能力も試験した。T20は、C34またはN36と競合して6−HB形成を防止することはできなかった。T1144は、C34−FAMと競合することによって、C34−FAM/N36 6−HB形成を完全に防止して、N36と安定な複合体を形成した。TLT−1は、C34−FAM/N36 6−HB形成を強力に防止し、そしてN36と複合体を形成した。重要なことに、N36/TLT−1/C34−FAM混合物において、速い移動速度を有する新しい蛍光バンドが見られた。そのバンドは、N36を含まないC34−FAMおよびTLTの混合物から成る、TLT−1/C34−FAM複合体と確認された(データは示していない)。速い移動速度は、TLT−1/C34−FAMがコンパクトな構造にフォールディングされ、そしてゲル中をより自由に移動することを示唆した。
TLT−1はそれほど免疫原性ではない
TLT−1は、分子量12kD程度のよくフォールディングされたタンパク質であり、そして従ってその抗原性を評価した。マウスをT20、T1144およびTLT−1で免疫し、10日後に2回追加免疫し、そして30日後に抗体レベルをチェックした。3つのペプチド全てに関して、非常に弱い抗体反応が観察され、そしてTLT−1はT20およびT1144よりもさらに低い免疫原性を示した(図13A)。T20、T1144およびTLT−1で免疫したマウス由来の抗血清は、HIV−1媒介の細胞−細胞融合に対していかなる阻害も示さず(図13B)、TLT−1を投与したマウスにおける弱い抗TLT−1抗体反応は、TLT−1の抗HIV活性を抑制し得ないことを確認した。
Claims (17)
- 二機能性分子であって、柔軟なリンカーに連結した、ポケット結合ドメインおよび7アミノ酸繰り返し(HR)結合ドメインを含む最初のC末端7アミノ酸繰り返し(CHR)ペプチドを含み、次にHR結合ドメインおよびトリプトファンリッチドメインを含む2番目のCHRペプチドに連結する、二機能性分子。
- 前記最初のCHRペプチドは、C34(配列番号11)、C36(配列番号12)、C38(配列番号3)、C46(配列番号13)、T1144(配列番号4)、T1144−C10(配列番号5)、シフビルチド(配列番号14)、C35−EK(配列番号15)、CP621−652(配列番号16)、CP32M(配列番号17)、T1249(配列番号18)、PBD−4HR(配列番号19)、およびC36B(配列番号20)から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記2番目のCHRペプチドは、T20(配列番号2)、T20−A(配列番号22)、および4HR−LBD(配列番号23)から成る群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記柔軟なリンカーは、アミノ酸配列(GGGGS)nを含み、ここでnは2および8の間の整数である、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記二機能性分子の前記C末端において、アミノ酸配列YSSGRIVTD(配列番号53)またはNSSGRIVTD(配列番号42)をさらに含む、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記二機能性分子は、
- 前記二機能性分子は、
- 前記二機能性分子は、
- 前記二機能性分子は、組換えDNA技術によって産生される、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記二機能性分子は、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞および哺乳類細胞から成る群から選択される発現システムにおいて産生される、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記二機能性分子は、Escherichia coliにおいて産生される、請求項9に記載の二機能性分子。
- 前記二機能性分子は、固体において、または溶液において合成される、請求項1に記載の二機能性分子。
- 前記二機能性分子は、数個の別々のセグメントとして合成され、そして次いで共に結合される、請求項1に記載の二機能性分子。
- ヒト免疫不全ウイルス感染の治療における請求項1に記載の二機能性分子の使用であって、
該二機能性分子を、ヒト免疫不全ウイルスに感染した個体に投与する工程;
該ウイルスの標的細胞への侵入を阻害する工程;および
該標的細胞の該ウイルスによる感染を阻害する工程
を含む、使用。 - ヒト免疫不全ウイルスによる感染の予防における請求項1に記載の二機能性分子の使用であって、
該二機能性分子を、該ヒト免疫不全ウイルスに感染するリスクのある個体に投与する工程;
該ウイルスの標的細胞への侵入を阻害する工程;および
該標的細胞の該ウイルスによる感染を阻害する工程
を含む、使用。 - ヒト免疫不全ウイルス感染を治療する方法であって、
請求項1に記載の二機能性分子を、該ヒト免疫不全ウイルスに感染した個体に投与する工程;
該ウイルスの標的細胞への侵入を阻害する工程;および
該標的細胞の該ウイルスによる感染を阻害する工程
を含む、方法。 - ヒト免疫不全ウイルスによる感染を予防する方法であって、
請求項1に記載の二機能性分子を、該ヒト免疫不全ウイルスに感染するリスクのある個体に投与する工程;
該ウイルスの標的細胞への侵入を阻害する工程;および
該標的細胞の該ウイルスによる感染を阻害する工程
を含む、方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US5658008P | 2008-05-28 | 2008-05-28 | |
US61/056,580 | 2008-05-28 | ||
PCT/US2009/045504 WO2009155064A1 (en) | 2008-05-28 | 2009-05-28 | Bifunctional molecules for inhibiting hiv entry |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011521648A true JP2011521648A (ja) | 2011-07-28 |
JP2011521648A5 JP2011521648A5 (ja) | 2012-05-24 |
Family
ID=41112467
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011511825A Pending JP2011521648A (ja) | 2008-05-28 | 2009-05-28 | Hivの侵入を阻害するための二機能性分子 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8828931B2 (ja) |
EP (1) | EP2291392B1 (ja) |
JP (1) | JP2011521648A (ja) |
AU (1) | AU2009260479A1 (ja) |
CA (1) | CA2724900A1 (ja) |
ES (1) | ES2468965T3 (ja) |
WO (1) | WO2009155064A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2730064A1 (en) | 2008-08-08 | 2010-02-11 | Asim Kumar Debnath | Small molecule inhibitors of retroviral assembly and maturation |
CN102883740B (zh) * | 2010-05-03 | 2015-10-14 | 纽约血库公司 | 用于使hiv失活并阻断hiv的双功能分子 |
US10765679B2 (en) * | 2015-07-04 | 2020-09-08 | Emory University | Use of TREM-1 inhibitors for treatment, elimination and eradication of HIV-1 infection |
WO2018191858A1 (zh) * | 2017-04-18 | 2018-10-25 | 中国医学科学院病原生物学研究所 | 强效抑制hiv的脂肽、其衍生物、其药物组合物及其用途 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004104033A2 (en) * | 2003-05-20 | 2004-12-02 | Academisch Medisch Centrum | Viruses dependent on inducing agents for viral entry into a host cell |
WO2005007831A2 (en) * | 2003-07-18 | 2005-01-27 | Vanderbilt University | Compositions of protein mimetics and methods of using same against hiv-1, sars-cov and the like |
WO2006105199A2 (en) * | 2005-03-30 | 2006-10-05 | Trimeris, Inc. | Compositions and methods for synthesis of peptide and related conjugate |
WO2008019817A1 (en) * | 2006-08-17 | 2008-02-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A conjugate of an antibody against ccr5 and an antifusogenic peptide |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5444044A (en) * | 1992-03-26 | 1995-08-22 | New York Blood Center | Synthetic polypeptides as inhibitors of HIV-1 |
US7144991B2 (en) * | 1999-06-07 | 2006-12-05 | Aletheon Pharmaceuticals, Inc. | Streptavidin expressed gene fusions and methods of use thereof |
NZ520754A (en) * | 2000-02-10 | 2004-02-27 | Panacos Pharmaceuticals Inc | Identifying compounds that disrupt formation of critical gp41 six-helix bundle and conformations necessary for HIV entry thereby blocking virus entry to the cell |
US7556813B2 (en) * | 2002-09-27 | 2009-07-07 | Trimeris, Inc. | Antiviral peptide-polymer conjugate comprising a polymer covalently attached to two or more synthetic HIV gp41 HR1 and/or HR2 peptides |
CN101415723B (zh) * | 2006-02-02 | 2014-06-25 | 特里梅里斯公司 | 具有改良生物学特性的hiv融合抑制肽 |
-
2009
- 2009-05-28 EP EP09767375.0A patent/EP2291392B1/en not_active Not-in-force
- 2009-05-28 JP JP2011511825A patent/JP2011521648A/ja active Pending
- 2009-05-28 US US12/474,105 patent/US8828931B2/en active Active
- 2009-05-28 ES ES09767375.0T patent/ES2468965T3/es active Active
- 2009-05-28 WO PCT/US2009/045504 patent/WO2009155064A1/en active Application Filing
- 2009-05-28 AU AU2009260479A patent/AU2009260479A1/en not_active Abandoned
- 2009-05-28 CA CA2724900A patent/CA2724900A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004104033A2 (en) * | 2003-05-20 | 2004-12-02 | Academisch Medisch Centrum | Viruses dependent on inducing agents for viral entry into a host cell |
WO2005007831A2 (en) * | 2003-07-18 | 2005-01-27 | Vanderbilt University | Compositions of protein mimetics and methods of using same against hiv-1, sars-cov and the like |
WO2006105199A2 (en) * | 2005-03-30 | 2006-10-05 | Trimeris, Inc. | Compositions and methods for synthesis of peptide and related conjugate |
WO2008019817A1 (en) * | 2006-08-17 | 2008-02-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A conjugate of an antibody against ccr5 and an antifusogenic peptide |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013046343; THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY vol.282 no.13, 2007, pp.9612-9620 * |
JPN6013046345; JOURNAL OF VIROLOGY vol.82 no.13, 200804, pp.6349-6358 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2291392B1 (en) | 2014-03-05 |
US8828931B2 (en) | 2014-09-09 |
WO2009155064A1 (en) | 2009-12-23 |
CA2724900A1 (en) | 2009-12-23 |
AU2009260479A1 (en) | 2009-12-23 |
ES2468965T3 (es) | 2014-06-17 |
US20090298774A1 (en) | 2009-12-03 |
EP2291392A1 (en) | 2011-03-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2009244400B2 (en) | Antiviral cell penetrating peptides | |
US9724383B2 (en) | Stabilized trimeric HIV-1 GP41 fusion inhibitor polypeptides comprising the N-terminal heptad repeat (NHR) and foldon (FD) trimerization motif | |
JP2011522796A5 (ja) | ||
US8936789B2 (en) | Immunoenhancer-linked oligomeric HIV envelope peptides | |
EP2566493B1 (en) | Bifunctional molecules for inactivating hiv and blocking hiv | |
ES2640961T3 (es) | Virus de la estomatitis vesicular para vacunas de sensibilización y refuerzo | |
JP2020513418A (ja) | ウイルス感染を管理するためのポリペプチド | |
US11680086B2 (en) | Lipopeptide for potently inhibiting HIV, derivative thereof, pharmaceutical composition thereof and use thereof | |
EP2291392B1 (en) | Bifunctional molecules for inhibiting hiv entry | |
CN1100564C (zh) | 用于治疗hiv感染的药物、其组合物及其用途 | |
US20030219451A1 (en) | Stable helical C peptides and uses therefor | |
CA2548483A1 (en) | Induction of antiviral neutralizing antibodies in humans and animals | |
US20060281673A1 (en) | Novel peptide inhibitor of hiv fusion that disrupts the internal trimeric coiled-coil of gp41 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110111 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120329 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120329 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130917 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140318 |