JP2011202967A - フローサイトメトリーによる微生物検出方法およびそれに用いる装置 - Google Patents
フローサイトメトリーによる微生物検出方法およびそれに用いる装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011202967A JP2011202967A JP2010067734A JP2010067734A JP2011202967A JP 2011202967 A JP2011202967 A JP 2011202967A JP 2010067734 A JP2010067734 A JP 2010067734A JP 2010067734 A JP2010067734 A JP 2010067734A JP 2011202967 A JP2011202967 A JP 2011202967A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- antibody
- microorganism
- microorganisms
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 86
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims abstract description 9
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 58
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 37
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 36
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 29
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 29
- 241000223935 Cryptosporidium Species 0.000 claims description 28
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 26
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 14
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 12
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 claims description 8
- 238000011001 backwashing Methods 0.000 claims description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 3
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 36
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 75
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 37
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 17
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 17
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 13
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 10
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 5
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 239000012468 concentrated sample Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 210000003250 oocyst Anatomy 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 2
- 241001333951 Escherichia coli O157 Species 0.000 description 2
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 2
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000010865 sewage Substances 0.000 description 2
- QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 3-nitrobicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2,3-dicarboxylic acid Chemical compound C1C2C=CC1C(C(=O)O)C2(C(O)=O)[N+]([O-])=O QJZYHAIUNVAGQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 EasyStain Chemical compound 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004720 dielectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004021 humic acid Substances 0.000 description 1
- 239000010954 inorganic particle Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011110 re-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000004016 soil organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【解決手段】 試料中の病原性微生物をフローサイトメトリー法により検出する方法であって、病原性微生物を含む試料に微生物に特異的な蛍光標識抗体を添加し、病原性微生物と抗体とを4℃〜15℃の温度条件下において結合させ、試料中の病原性微生物をフローサイトメトリー法により計測する。
【選択図】 図1
Description
クリプトスポリジウムと蛍光標識抗体との抗原抗体反応における温度条件の最適化を図るために、以下の実験を行った。
試料は、1Lの河川(濁度2度)を孔型3μmの膜(直径90mm、Track−Etheced membrane、Whatman社)でろ過し、補足した微粒子を、誘出液(クリプト検査用1%PET溶液)を標識溶液として用いて回収した河川水濃縮液に不活性化クリプト標準試料を添加して、103〜104oocyst/mLとなるように調整したものを用いた。なお、不活性化クリプト標準試料は、Cryptosporidium parvum oocyst(Waterboene社製アイオワ株(106 oocyst/mL、USA)(以下、クリプトと記載))を用いた。
抗体は、蛍光標識抗体(FITC、EasyStain、BTF社、Australia)を用いた。標識条件は、2mLの河川水濃縮試料に蛍光抗体の最終添加濃度を40μL/mLとなるように添加し、3〜37℃の温度条件で30分間撹拌反応後、緑色光強度と散乱光強度をFCMにて分析した。また、緑色蛍光強度と散乱光強度を比較する標準粒子として、緑色蛍光粒子(R1:5μmおよびR2:3μm、Green Fluorescent Microspheres、Duke Scientific社)とクリプトレーサ1号(財団法人 水道技術研究センター)を用いた。
FCM分析はFACS Calibur、BECTON DICKINSON社製を用いた。試料は蛍光抗体標識後の試料2mLを設定時間ごとに測定した。FCM測定は前方散乱光強度と緑色蛍光強度をそれぞれ5.5(Amplifer、FCS)と400(Detector、FL1)の設定で、60μL/minの速度で行った。また、同時に自動測定装置用に開発、試作した光学検出器(専用フローサイトメーター)を用い比較検討を行った。
河川水濃縮試料を用いたときの蛍光抗体標識クリプトの蛍光散乱光強度の変動について、標識時間と温度での比較を図2に示す。蛍光抗体を添加した直後(図2A)からクリプトの緑蛍光強度が強くなる傾向が認められた。さらに、蛍光抗体標識する際の反応温度を4℃(図2B)としたときに、河川試料水中の夾雑物の影響は、37℃(図2C)より非常に少なかった。これは低い温度ほど抗体の選択性が高くなり、夾雑物への非特異的な吸着も少なくなることを示すと考えられた。
クリプトスポリジウムと蛍光標識抗体との抗原抗体反応における反応時間の最適化を図るために、以下の実験を行った。
リン酸緩衝溶液(PBS、pH7.4)を用いた標識溶液に不活性化クリプト標準試料を103〜104oocyst/mLの濃度になるように調整してPBS試料を作製した。また、実施例1と同様の蛍光標識抗体を使用した。標識条件は、10mLのPBS試料に40μL/mLの蛍光抗体を最終添加濃度で添加し、4〜24℃の温度条件で30〜270分間標識反応を行った後、自動測定装置用に試作した光学検出器で測定した。
結果を図4に示す。図4は、異なる反応温度と異なる反応時間における緑蛍光強度比を示すグラフである。緑蛍光強度比は、標準粒子として使用する緑色蛍光粒子(3μm)の緑蛍光強度を1としたときの相対的な値を示す。図4に示すように、クリプトスポリジウムの蛍光強度は染色時間の増加に伴い強度を増した。しかしながら、反応温度が20℃以上(20℃および25℃)になると、反応時間を延ばしたときの蛍光強度の増加量は減少した。反応温度20℃では、反応時間を270分とした場合であっても、蛍光強度比が0.6以下になった。反応時間を1時間とすると、反応温度15℃が最も高い蛍光強度比(0.36)にとどまった。また、反応時間の増加は、夾雑物の非特異的結合の増加にもつながる。これらの結果より、蛍光抗体染色の条件は15℃、1時間が好ましいと考えられた。
クリプトスポリジウムと蛍光標識抗体との抗原抗体反応における抗体濃度の最適化を図るために、以下の実験を行った。
実施例2と同様のPBS試料と蛍光標識抗体を使用した。標識条件は、蛍光標識抗体を0〜80μL/mLの濃度で添加した試料を4℃で1時間撹拌(150rpm)し、上記光学検出器を用い、添加量による影響を検討した。標識されたクリプトは顕微鏡(BX−61、オリンパス社製)を用いて確認した。
蛍光抗体の添加量は、同じ標識条件(4℃、150rpm、60分)では、添加量が増加すると緑色蛍光強度が強くなった。しかしながら、添加量の増加とともに非特異的な結合も増えてしまうためノイズ(夾雑物の妨害)との分離を考慮すると15〜20μL/mLが適当であると考えられた。
クリプトスポリジウムと蛍光標識抗体との抗原抗体反応における標識溶液の検討をするために、以下の実験を行った。
実施例2と同様の不活性化クリプト標準試料と蛍光標識抗体を使用し、蛍光標識抗体を20μL/mLの濃度となるように添加した試料を4℃で1時間撹拌(150rpm)し、上記光学検出器を用い、標識溶液の違いによる影響を検討した。標識されたクリプトは顕微鏡(BX−61、オリンパス社製)を用いて確認した。
図6Aは、MilliQ、PBS、PBS+MeOH(10%)、PET、およびPET+MEOH(10%)を標識溶液に用いたときの結果を示す。メタノール(MeOH)が細胞膜(細胞表面タンパク質)を活性化し、良好な洗浄力および効率を期待したが、信号が全体的に広がってしまうという結果となった。図6Bは、PET、またはTween80、Tween20、もしくはSDSの界面活性剤を0.01%となるようにPBSに添加した標識溶液を用いたときの結果を示す。図6Bに示すように、界面活性剤を入れたPBSの方が、PETに比べてS/N比が大きくなった。図6Cは、Tween80を異なる濃度(0、0.01%、0.05%、0.10%)でPBSに添加した標識溶液を用いたときの結果を示す。いずれも高いS/N比を示したが、特に0.10%Tweenを添加した区では、高いカウント値を得ることができた。
クリプトスポリジウムと蛍光標識抗体との抗原抗体反応における標識溶液中の界面活性剤の濃度の最適化をさらに検討するために、以下の実験を行った。
実施例2と同様のPBS試料に界面活性剤(Tween80)を0%、0.0005%、0.005%、および0.1%の濃度で含有するPBSTを標識溶液として用い、実施例2と同様の蛍光標識抗体を使用した。標識反応時の条件は、4℃の温度条件下で1時間撹拌(150rpm)し、上記光学検出器を用い、標識溶液中の界面活性剤の濃度による影響を検討した。標識されたクリプトは顕微鏡(BX−61、オリンパス社製)を用いて確認した。
図7(A)は、Tween80が0%のPBSを標識溶液としたときのクリプトの散乱光強度および緑蛍光強度を示す。同様に、図7(B)はTween80を0.0005%含有するPBST、(C)Tween80を0.005%含有するPBST、および(D)Tween80を0.1%含有するPBSTをそれぞれ標識溶液としたときのクリプトの散乱光強度および緑蛍光強度を示す。図7(A)および(B)に示すように、Tween80を0.0005%以下で含有するPBSTでは、非特異的結合による蛍光が、クリプトを観察することができたが、非特異的結合との区別は容易ではなかった。一方で、図7(C)および(D)に示すように、Tween80を0.005%以上で含有するPBSTでは、非特異的結合がほとんど消失し、クリプトの蛍光のみが明確に検出可能となった。図8には、(A)界面活性剤を含まないPBS、および(B)0.1%Tween80を含有するPBSTを標識試料として蛍光抗体標識に使用したときのクリプト検出を示す画像データである。図8(A)では、非特異結合によるバックグラウンドの蛍光が上昇しているのに対して、図8(B)では、クリプトのみが検出され、容易に判別可能であった。
2 分離濃縮回収部
3 抗体標識部
4 フローサイトメーター
Claims (7)
- 試料中の病原性微生物をフローサイトメトリー法により検出する方法であって、
前記微生物を含む試料に前記微生物に特異的な蛍光標識抗体を添加する工程であって、前記微生物と前記抗体とを4℃〜15℃の温度条件下において結合させる工程と
前記試料中の微生物をフローサイトメトリー法により計測する蛍光微粒子計測工程と
を含む検出方法。 - 対象となる前記微生物が、クリプトスポリジウムである請求項1に記載の方法。
- 前記試料中の微生物を分離濃縮する工程と、分離濃縮後の微生物を標識溶液で測定用の測定試料として回収する回収工程とを、前記抗体標識工程の前にさらに含む請求項1または2に記載の方法。
- 前記標識溶液が、リン酸緩衝生理食塩水または界面活性剤を含むリン酸緩衝生理食塩水である請求項3に記載の方法。
- 前記分離濃縮工程が、分離膜および逆洗浄を用いた微生物の分離濃縮であって、前記試料の濁度を測定して逆洗浄回数を決定する工程を前記分離濃縮工程前にさらに含み、前記決定される逆洗浄回数で前記試料を分離濃縮する請求項1〜4に記載の測定方法。
- 前記試料が、河川もしくは湖沼を含む環境水または下水道由来である請求項1〜5のいずれか一項に記載の測定方法。
- 試料中の病原性微生物を検出するための装置であって、
前記試料中の微生物を分離濃縮し、回収する分離濃縮回収部と
前記回収した測定試料に蛍光標識抗体を添加して抗原抗体反応を行う抗体標識部であって、前記反応が4℃〜15℃の温度範囲内で行われるように温度調節する抗体標識部と、
前記抗体標識部で蛍光標識された測定試料中の微生物を検出するフローサイトメーターとからなる装置。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010067734A JP5430463B2 (ja) | 2010-03-24 | 2010-03-24 | フローサイトメトリーによる微生物検出方法およびそれに用いる装置 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010067734A JP5430463B2 (ja) | 2010-03-24 | 2010-03-24 | フローサイトメトリーによる微生物検出方法およびそれに用いる装置 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011202967A true JP2011202967A (ja) | 2011-10-13 |
JP5430463B2 JP5430463B2 (ja) | 2014-02-26 |
Family
ID=44879794
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010067734A Active JP5430463B2 (ja) | 2010-03-24 | 2010-03-24 | フローサイトメトリーによる微生物検出方法およびそれに用いる装置 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5430463B2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111778310A (zh) * | 2020-08-07 | 2020-10-16 | 广西壮族自治区蚕业技术推广站 | 一种检测昆虫中微粒子原虫孢子的试剂盒及方法 |
WO2021241061A1 (ja) * | 2020-05-29 | 2021-12-02 | ソニーグループ株式会社 | 情報処理装置、情報処理方法、コンピュータプログラム、およびターゲット分子検出システム |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08507857A (ja) * | 1993-03-11 | 1996-08-20 | ジンベント エイ/エス | 細胞および他の粒子の固定化および分離 |
JP2010054335A (ja) * | 2008-08-28 | 2010-03-11 | Metawater Co Ltd | 微生物計測方法 |
-
2010
- 2010-03-24 JP JP2010067734A patent/JP5430463B2/ja active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08507857A (ja) * | 1993-03-11 | 1996-08-20 | ジンベント エイ/エス | 細胞および他の粒子の固定化および分離 |
JP2010054335A (ja) * | 2008-08-28 | 2010-03-11 | Metawater Co Ltd | 微生物計測方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021241061A1 (ja) * | 2020-05-29 | 2021-12-02 | ソニーグループ株式会社 | 情報処理装置、情報処理方法、コンピュータプログラム、およびターゲット分子検出システム |
CN111778310A (zh) * | 2020-08-07 | 2020-10-16 | 广西壮族自治区蚕业技术推广站 | 一种检测昆虫中微粒子原虫孢子的试剂盒及方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5430463B2 (ja) | 2014-02-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
McGrath et al. | Analysis of parasitic protozoa at the single-cell level using microfluidic impedance cytometry | |
Efstratiou et al. | Evolution of monitoring for Giardia and Cryptosporidium in water | |
EP2379738B1 (en) | Coliform detection process | |
Bridle et al. | Application of microfluidics in waterborne pathogen monitoring: A review | |
Bukhari et al. | Immunomagnetic separation of Cryptosporidium parvum from source water samples of various turbidities | |
Li et al. | Rapid detection methods for bacterial pathogens in ambient waters at the point of sample collection: a brief review | |
US20160011087A1 (en) | A method for improving analysis of microorganisms in complex matrices | |
Zhang et al. | An automated bacterial concentration and recovery system for pre-enrichment required in rapid Escherichia coli detection | |
Ramadan et al. | Microfluidic applications of functionalized magnetic particles for environmental analysis: focus on waterborne pathogen detection | |
JPH03503361A (ja) | 微生物を採取し検出するための方法および装置 | |
JP5586867B2 (ja) | 水質自動測定装置及びその方法 | |
US20140342397A1 (en) | Particle Detection Device and Method | |
Bridle et al. | Sample processing | |
JP5030897B2 (ja) | 微生物計測方法 | |
JP5430463B2 (ja) | フローサイトメトリーによる微生物検出方法およびそれに用いる装置 | |
JP2009222566A (ja) | 微生物計測方法およびシステム | |
WO2022181047A1 (ja) | 水処理方法、制御装置、及び水処理システム | |
Ogura et al. | Direct centrifugation for detecting Giardia spp. cysts in filter backwash water | |
JP4895642B2 (ja) | 微生物の分離方法 | |
JP2007232382A (ja) | 微生物検出方法及び微生物検出装置 | |
Lindquist et al. | A comparison of four fluorescent antibody-based methods for purifying, detecting, and confirming Cryptosporidium parvum in surface waters | |
Hammes et al. | Online flow cytometry: Towards a rapid, robust, and reliable microbial sensor | |
Kim et al. | Evaluation of cyst loss in standard procedural steps for detecting of Giardia lamblia and Cryptosporidium parvum in water | |
Grundlingh et al. | The search for Cryptosporidiumoocysts and Giardia cystsin source water used for purification | |
JP2000342300A (ja) | 細菌の検出方法及び検出装置 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20121024 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130308 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20130313 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131108 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131203 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Ref document number: 5430463 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |