JP2011195604A - Method for removing foreign matter in solution containing hyaluronic acid and/or salt thereof - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、「ヒアルロン酸及び／又はその塩」の含有液から、医薬品に適合した「ヒアルロン酸及び／又はその塩」（以下、総称してヒアルロン酸類という）の注射液を製造するにあたり、ヒアルロン酸類の含有液中の異物を除去する方法に関するものである。 The present invention provides a method for producing an injection solution of “hyaluronic acid and / or salt thereof” (hereinafter collectively referred to as hyaluronic acid) that is compatible with pharmaceuticals from a solution containing “hyaluronic acid and / or salt thereof”. The present invention relates to a method for removing foreign substances in an acid-containing liquid.
ヒアルロン酸は、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミンとＤ−グルクロン酸とが結合した２糖単位がくりかえし連鎖してなる、分子量が５００万にもおよぶと言われている高分子量の多糖類である。一般に、そのグルクロン酸がナトリウム塩の形となったヒアルロン酸ナトリウムとして分離精製される。分子量約２００万のヒアルロン酸ナトリウムは、分子量約８０万のものに比べて医薬品として、変形性膝関節症、肩関節周囲炎、慢性関節リウマチ等の治療に優れた効果を発揮することが知られている（薬理と治療 Ｖｏｌ．２２ Ｎｏ．９ ２８９（１９９４）；薬理と治療 Ｖｏｌ．２２ Ｎｏ．９ ３１９（１９９４））。 Hyaluronic acid is a high molecular weight polysaccharide that is said to have a molecular weight of up to 5,000,000, which is formed by repeating and linking disaccharide units in which N-acetyl-D-glucosamine and D-glucuronic acid are linked. Generally, the glucuronic acid is separated and purified as sodium hyaluronate in the form of sodium salt. Sodium hyaluronate with a molecular weight of about 2 million is known to exhibit superior effects in the treatment of knee osteoarthritis, shoulder periarthritis, rheumatoid arthritis, etc., as a pharmaceutical compared with a molecular weight of about 800,000. (Pharmacology and Treatment Vol. 22 No. 9 289 (1994); Pharmacology and Treatment Vol. 22 No. 9 319 (1994)).
更に、外科手術後の癒着防止用として、また皮膚科領域、眼科領域においても医薬品としての効果が知られており、実用化されているものもある。微生物発酵法により製造されるヒアルロン酸ナトリウムは、例えばある種のストレプトコッカス属を用いて培養し、得られた培養液を希釈し、種々の精製工程を経て、粉末状で取得される。 Furthermore, it has been known to be effective as a medicine for preventing adhesion after surgery and also in the dermatological and ophthalmological areas, and some of them have been put into practical use. Sodium hyaluronate produced by microbial fermentation is cultured using, for example, a certain genus Streptococcus, the obtained culture solution is diluted, and is obtained in powder form through various purification steps.
微生物発酵法によれば、ヒアルロン酸ナトリウムを高分子量のまま精製取得することができるが、ヒアルロン酸ナトリウム注射液を大量製造するに際しては、種々の困難な問題があった。
即ち、高分子量のヒアルロン酸ナトリウムの溶解を短時間で効率よく行うことが難しいこと、該溶液の粘度が非常に高いため取り扱いにくいこと、更に熱等に不安定でろ過あるいは滅菌が難しいこと等である。
従って、高分子量のヒアルロン酸ナトリウム注射液を大量に製造する方法については、明らかにされていなかった。
According to the microbial fermentation method, sodium hyaluronate can be purified and obtained with a high molecular weight, but there are various difficult problems when mass-producing sodium hyaluronate injection solutions.
That is, it is difficult to efficiently dissolve high molecular weight sodium hyaluronate in a short time, it is difficult to handle because the viscosity of the solution is very high, and it is unstable to heat, etc., and filtration or sterilization is difficult. is there.
Accordingly, a method for producing a large amount of high molecular weight sodium hyaluronate injection has not been clarified.
本発明者は、ヒアルロン酸類の含有液を注射液として大量に製造するにあたり、ヒアルロン酸類の含有液中から異物を効率よく分離除去し、高純度の医薬品グレードのヒアルロン酸類を取得する方法について鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成した。 The present inventor has eagerly studied how to obtain high-purity pharmaceutical grade hyaluronic acid by efficiently separating and removing foreign substances from the hyaluronic acid-containing liquid in producing a large amount of hyaluronic acid-containing liquid as an injection solution. As a result, the present invention was completed.
本発明は以下に記す方法に関するものである。
即ち、
（１）ろ過膜にてヒアルロン酸類の含有液をろ過処理することを特徴とするヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（２）ろ過膜処理時のヒアルロン酸類の含有液のｐＨが２〜１０である（１）記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（３）ろ過膜処理時のヒアルロン酸類の含有液の温度が５〜１００℃である（２）記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（４）ろ過膜処理時のヒアルロン酸類の含有液の濃度が７．５〜１２．５ｇ／ｌである（３）記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（５）ろ過膜の孔径が０．２〜５０μｍの範囲である（４）記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物処理除去方法、（６）ろ過膜のろ材形状が、平膜、フィルターカートリッジ及びディスポーザブルフィルターから選ばれた一種である（５）記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（７）ろ過膜の材質がポリテトラフルオロエチレン、ポリエステル、テフロン（登録商標)、ポリプロピレン、ポリフッ化ビニリデン及びナイロンから選ばれた一種である（６）記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（８）ヒアルロン酸類の平均分子量が１５０万〜４００万であることを特徴とする（１）〜（７）のいずれかに記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（９）ヒアルロン酸類が、ストレプトコッカス・エクイＦＭ−１００を用いて、発酵法により製造されるものであることを特徴とする（１）〜（７）のいずれかに記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法、（１０）ヒアルロン酸類が、ストレプトコッカス・エクイＦＭ−３００を用いて、発酵法により製造されるものであることを特徴とする（１）〜（７）のいずれかに記載のヒアルロン酸類の含有液中の異物除去方法である。
The present invention relates to the method described below.
That is,
(1) A method for removing foreign matter in a hyaluronic acid-containing liquid, wherein the hyaluronic acid-containing liquid is filtered through a filtration membrane, (2) the pH of the hyaluronic acid-containing liquid during filtration membrane treatment is 2 to 2 (1) The method for removing foreign matter in the hyaluronic acid-containing liquid according to (1), (3) The hyaluronic acid content according to (2), wherein the temperature of the hyaluronic acid-containing liquid during filtration membrane treatment is 5 to 100 ° C. Foreign matter removal method in the liquid, (4) The foreign matter removal method in the hyaluronic acid-containing liquid according to (3), wherein the concentration of the hyaluronic acid-containing liquid during filtration membrane treatment is 7.5 to 12.5 g / l, (5) The foreign matter treatment and removal method in the hyaluronic acid-containing liquid according to (4), wherein the pore size of the filtration membrane is in the range of 0.2 to 50 μm, (6) the filter medium shape of the filtration membrane is a flat membrane, a filter cartridge, and From disposable filter (7) The foreign substance removal method in the hyaluronic acid-containing liquid as described in (5), (7) The material of the filtration membrane is polytetrafluoroethylene, polyester, Teflon (registered trademark), polypropylene, polyvinylidene fluoride, and nylon (1) to (7), wherein the method for removing foreign matter in the hyaluronic acid-containing liquid according to (6), which is a selected kind, (8) the average molecular weight of the hyaluronic acid is 1.5 to 4 million (9) The hyaluronic acid is produced by a fermentation method using Streptococcus equii FM-100 (1). ) To (7), the method for removing foreign matter from the hyaluronic acid-containing liquid according to any one of the above items, and (10) the hyaluronic acid is Streptococcus equii F -300 using a foreign matter removing method in containing liquid hyaluronic acids according to any one of characterized in that produced by fermentation (1) to (7).
本発明は、分子量１５０万〜４００万のヒアルロン酸類を注射用水、生理食塩水、及びリン酸緩衝生理食塩水から選ばれた一種の注射用溶解液に溶解して後、ろ過膜に通液させることにより、ヒアルロン酸類を含有する注射液の大量製造における異物の除去が可能となる。 In the present invention, hyaluronic acids having a molecular weight of 1,500,000 to 4,000,000 are dissolved in a kind of injection solution selected from water for injection, physiological saline, and phosphate buffered saline, and then passed through a filtration membrane. This makes it possible to remove foreign substances in mass production of injection solutions containing hyaluronic acids.
以下、更に本発明について詳しく説明する。
本発明に用いられるヒアルロン酸類は、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸の塩、又はヒアルロン酸とヒアルロン酸の塩との混合物を包含している。ヒアルロン酸類は、遊離の形でもよく又その塩でもよく例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、リチウム塩等が挙げられるが、ナトリウム塩が好ましい。更に本発明で使用するヒアルロン酸類含有液は動物組織から抽出したものでも、また発酵法で製造したものでも使用できる。好ましくは、発酵法で製造したものである。
The present invention will be further described in detail below.
The hyaluronic acid used in the present invention includes hyaluronic acid, a salt of hyaluronic acid, or a mixture of hyaluronic acid and a salt of hyaluronic acid. Hyaluronic acids may be in a free form or a salt thereof, for example, sodium salt, potassium salt, calcium salt, lithium salt and the like, and sodium salt is preferable. Furthermore, the hyaluronic acid-containing liquid used in the present invention may be extracted from animal tissue or manufactured by fermentation. Preferably, it is produced by a fermentation method.
発酵法によるヒアルロン酸類は例えばストレプトコッカス属のバクテリアを使用して既知の方法で得ることができる。 Hyaluronic acids by fermentation can be obtained by known methods using, for example, bacteria of the genus Streptococcus.
発酵法で使用する菌株は自然界から分離されるストレプトコッカス属等のヒアルロン酸生産能を有する微生物、又は特開昭６３−１２３３９２号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第９０２７号）、特開平２−２３４６８９号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−３００（微工研菌寄第２３１９号）のような高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が望ましい。
上記の変異株を用いて培養、精製されたものが用いられる。
The strain used in the fermentation method is a microorganism having the ability to produce hyaluronic acid such as Streptococcus isolated from nature, or Streptococcus equii FM-100 described in Japanese Patent Laid-Open No. 63-123392 (90, Koseikenbyo No. 9027). No.) and Streptococcus equii FM-300 described in Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 2-23489 are desirable, such as mutant strains that stably produce hyaluronic acid at a high yield.
Those cultured and purified using the above mutant strains are used.
本発明に使用されるヒアルロン酸類の分子量は１５０万〜４００万のものが適している。平均分子量が１５０万〜４００万より小さい場合には医薬品としての効能が低下する。また、該範囲より大きいものをこの方法で得ることは、困難である。 The molecular weight of hyaluronic acid used in the present invention is suitably from 1.5 million to 4 million. When the average molecular weight is smaller than 1,500,000 to 4,000,000, the efficacy as a pharmaceutical is lowered. Also, it is difficult to obtain a material larger than this range by this method.
ヒアルロン酸類を溶解する工程で用いる注射用溶解液としては、注射用水、生理食塩水及びそれに酸、アルカリ、リン酸塩のような緩衝剤を含むｐＨ調整剤等を加えた日本薬局方の製剤総則注射剤の項で、認められているものを使用することができる。 As a solution for injection used in the step of dissolving hyaluronic acid, the general rules of formulation of the Japanese Pharmacopoeia with water for injection, physiological saline and pH adjusters including buffers such as acid, alkali and phosphate added to it Injectables, those recognized can be used.
溶解工程でのヒアルロン酸類の添加量としては、ヒアルロン酸類濃度が７．５〜１２．５ｇ／ｌとなるように設定する。ヒアルロン酸類濃度７．５ｇ／ｌ以下では、ヒアルロン酸類溶液の粘度は低く、製造が容易である。また１２．５ｇ／ｌ以上は、ヒアルロン酸類の溶解度から大量に調製することは難しい。高粘度の溶液となるヒアルロン酸類濃度７．５〜１２．５ｇ／ｌが本発明の製造条件に該当する。 The amount of hyaluronic acid added in the dissolution step is set so that the hyaluronic acid concentration is 7.5 to 12.5 g / l. When the hyaluronic acid concentration is 7.5 g / l or less, the viscosity of the hyaluronic acid solution is low and the production is easy. Moreover, it is difficult to prepare 12.5 g / l or more in large quantities from the solubility of hyaluronic acids. A hyaluronic acid concentration of 7.5 to 12.5 g / l that is a highly viscous solution corresponds to the production conditions of the present invention.
溶解するヒアルロン酸類はバルブ付の気密容器に充填しておく。投入シュートの角度は、５０°以上の急勾配にしてあり、それは該容器を逆さにして、ヒアルロン酸類を投入するとき、ロスが少ないようにするためである。 The dissolved hyaluronic acid is filled in an airtight container with a valve. The angle of the charging chute is a steep slope of 50 ° or more, so that the loss is reduced when the container is inverted and hyaluronic acid is charged.
バルブは、バタフライ弁を用い、その切り換えによりヒアルロン酸類を外気にふれさせることなく、無菌的に溶解用の撹拌槽に添加することができる。このバルブ付の気密容器の内面の材質は、ステンレス鋼もしくはそのテフロン（登録商標）コーティングしたものが好ましい。
従って、該容器は、洗浄性がよく、更に取り扱いが簡便である。
As the valve, a butterfly valve is used, and hyaluronic acids can be added aseptically to a stirring tank for dissolution without touching the outside air by switching. The material of the inner surface of the airtight container with a valve is preferably stainless steel or a Teflon (registered trademark) coated material.
Therefore, the container has good cleaning properties and is easy to handle.
溶解には、撹拌装置を具備した撹拌槽を使用する。ヒアルロン酸類の注射用溶解液への溶解性がよくないことと、溶液が高粘度であることから、撹拌装置としては、タービン型及び／またはディスパー型の撹拌羽根を有するものが好ましく、しかも羽根は偏芯させた位置に取り付けるのが特に溶解速度を速めるのに効果がある。 For dissolution, a stirring tank equipped with a stirring device is used. Since the solubility of hyaluronic acid in an injectable solution is poor and the solution has a high viscosity, the stirring device preferably has a turbine type and / or a disperse type stirring blade. Attaching at an eccentric position is particularly effective for increasing the dissolution rate.
撹拌羽根は一段もしくは多段にしてもよい。該撹拌羽根の回転数は１００〜５０００ｒｐｍ、好ましくは、８００〜２０００ｒｐｍが適当である。回転数が該範囲より小さい場合は、ヒアルロン酸類の注射用溶解液への浸透が悪く、完全に溶解するまでに長時間を要する。回転数が該範囲より大きい場合はヒアルロン酸類の注射用溶解液への分散が不良になり、撹拌槽内の界面上部への飛散が大きくなり、溶解が円滑に進まない。好ましい回転数であれば、溶解速度を上げるために撹拌槽外部から加温をする必要はなく、短時間で、溶解することができる。このように短時間で穏和な条件で溶解できるため、ヒアルロン酸類の分子量低下のような物性変化は少ない。 The stirring blades may be one stage or multistage. The rotation speed of the stirring blade is 100 to 5000 rpm, preferably 800 to 2000 rpm. When the rotational speed is smaller than the above range, the penetration of hyaluronic acid into the solution for injection is poor, and it takes a long time to completely dissolve. When the rotational speed is larger than the above range, the hyaluronic acid is poorly dispersed in the injectable solution, the scattering to the upper part of the interface in the stirring tank is increased, and the dissolution does not proceed smoothly. If it is a preferable rotation speed, it is not necessary to heat from the outside of the stirring vessel in order to increase the dissolution rate, and it is possible to dissolve in a short time. Thus, since it can melt | dissolve on mild conditions in a short time, there are few physical-property changes like the molecular weight fall of hyaluronic acid.
溶解操作に於て、適宜撹拌槽内を減圧することが好ましい。それはヒアルロン酸類及び液中の気泡を除去するためで、溶解速度を速めるためにも有効である。
ヒアルロン酸類溶液は高粘度であるが、その脱泡のために真空ポンプ等の通常の減圧手段を用い、５〜２０ｋＰａ ａｂｓ程度まで減圧するのが好ましい。温度を上げたり、溶液の撹拌を併用して行うとさらに効果が上がる。
In the melting operation, the inside of the stirring tank is preferably depressurized appropriately. It removes hyaluronic acids and bubbles in the liquid, and is effective in increasing the dissolution rate.
The hyaluronic acid solution has a high viscosity, but it is preferable to reduce the pressure to about 5 to 20 kPa abs by using a normal pressure reducing means such as a vacuum pump for the defoaming. When the temperature is increased or the solution is stirred together, the effect is further improved.
溶解用撹拌槽内面の材質は、食塩水に対する耐食性、溶解後の内面の洗浄性などから、ステンレス、ガラス、テフロン(登録商標)等が挙げられるが、ヒアルロン酸類溶液の材質表面への付着の点から、テフロン(登録商標)、テフロン(登録商標)ライニングまたはテフロン(登録商標)コーティングが好ましい。テフロン(登録商標)は他の材質に比べ、ヒアルロン酸類溶液の付着が少ないので、撹拌槽から溶解液を排出したり、撹拌槽を洗浄するのに適している。 The material of the inner surface of the stirring tank for dissolution includes stainless steel, glass, Teflon (registered trademark), etc. due to the corrosion resistance to saline solution and the cleanability of the inner surface after dissolution, etc., but the hyaluronic acid solution adheres to the material surface. From the viewpoint, Teflon (registered trademark), Teflon (registered trademark) lining or Teflon (registered trademark) coating is preferable. Since Teflon (registered trademark) has less adherence of hyaluronic acid solutions than other materials, it is suitable for discharging the solution from the stirring tank and washing the stirring tank.
ヒアルロン酸類溶液の滅菌は、異物除去の前、又はバイアル等の容器に充填した後で行う。 Sterilization of the hyaluronic acid solution is performed before removing foreign substances or after filling a container such as a vial.
本発明において異物ろ過はろ過処理により行われる。ろ過で使用されるろ過膜は孔径０．２〜５０μｍが好ましい。孔径がその範囲より小さい場合は、前工程で得られた滅菌液が非常に高粘度液のため膜を通液させるのが困難であり、また孔径がその範囲より大きい場合は、異物ろ過が不完全になり、注射液中に目視で判別できる不溶性異物が混在するので好ましくない。 In the present invention, foreign matter filtration is performed by filtration. The filtration membrane used for filtration preferably has a pore size of 0.2 to 50 μm. If the pore size is smaller than that range, it is difficult to pass the membrane because the sterilizing liquid obtained in the previous step is very viscous, and if the pore size is larger than that range, foreign matter filtration is not possible. This is not preferable because it becomes complete and insoluble foreign matter that can be visually discerned is mixed in the injection solution.
ろ過膜の材質はポリテトラフルオロエチレン、ポリエステル、テフロン(登録商標)、ポリプロピレン、ポリフッ化ビニリデン及びナイロン等の中から選定できるが、ポリフッ化ビニリデン、ポリプロピレン又はナイロンが好ましい。 The material of the filtration membrane can be selected from polytetrafluoroethylene, polyester, Teflon (registered trademark), polypropylene, polyvinylidene fluoride, nylon, and the like, but polyvinylidene fluoride, polypropylene, or nylon is preferable.
ろ過膜の形状としては、平膜、フィルターカートリッジ、ディスポーザブルフィルターのいずれも可能であるが、大量に処理する場合には、フィルターカートリッジ又はディスポーザブルフィルターが好ましい。 As the shape of the filtration membrane, any of a flat membrane, a filter cartridge, and a disposable filter can be used. However, when processing in a large amount, a filter cartridge or a disposable filter is preferable.
本発明で使用できるろ過膜の具体例としては日本ミリポア社製ミリパックやデュラポアミリディスク等がある。 Specific examples of filtration membranes that can be used in the present invention include Millipack and Durapore Millidisk manufactured by Nippon Millipore.
ヒアルロン酸類含有液のｐＨは２〜１０、温度は５〜１００℃の中で任意の条件が選択される。通液時の流量及び圧力については、フィルターの種類に応じて耐圧性を考慮して設定するが、圧力をかけるとフィルターから異物が流出することもあるので注意しなければならない。日本ミリポア社製ミリディスク４０では、流速５０〜３００ｌ／ｈｒ、処理圧０．０１〜０．５０ＭＰａが好ましい。ろ過液は注射用溶解液で希釈し、濃度調整することもできる。 Arbitrary conditions are selected in the pH of a hyaluronic acid containing liquid being 2-10, and temperature being 5-100 degreeC. The flow rate and pressure at the time of liquid flow are set in consideration of pressure resistance according to the type of filter, but care must be taken because foreign matter may flow out of the filter when pressure is applied. In the millidisk 40 manufactured by Nippon Millipore, a flow rate of 50 to 300 l / hr and a processing pressure of 0.01 to 0.50 MPa are preferable. The filtrate can be diluted with a solution for injection to adjust the concentration.
充填工程で使用される充填機としては、ヒアルロン酸類溶液を容器に充填する部分と充填後の容器にゴム栓を打栓あるいは容器を熔封する密封部分からなる充填機が使用される。 As a filling machine used in the filling step, a filling machine comprising a part for filling a container with a hyaluronic acid solution and a sealing part for plugging a rubber stopper into the container after filling or sealing the container is used.
注射液用容器としては、一般のアンプル、バイアル、デュファージョクト型やプレフィルドシリンジが使用できる。 As an injection solution container, a general ampoule, a vial, a Duffer Jocto type or a prefilled syringe can be used.
次に、実施例により、本発明につき詳細に説明するが、本発明は、この実施例の記載内容に限定されるものではない。 Next, although an Example demonstrates this invention in detail, this invention is not limited to the description content of this Example.
実施例１
ストレプトコッカス・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第９０２７号）を用いて発酵法で得られた分子量２３７万のヒアルロン酸ナトリウム１５８０ｇを２０ｌのバタフライ弁のついた気密容器に充填した。内面がテフロン(登録商標)コーティングされているステンレス製の容量２００ｌの溶解槽にタービン型の撹拌羽根を内割で１：２の位置に取付け、ｐＨ７．３の２ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液を含む生理食塩液（注射用溶解液）１４９ｌを溶解槽に仕込んだ。前述のヒアルロン酸ナトリウムを充填した容器を溶解槽の原末投入口に逆さにとりつけ、バタフライ弁を開き、ヒアルロン酸ナトリウムを溶解槽中に投入した。１８００ｒｐｍで撹拌を５０分間行い、ヒアルロン酸ナトリウムを完全に溶解した。液中の気泡を除去するため、溶解槽内圧力を２０分間、真空度１５ｋＰａ ａｂｓ以下に維持し気泡を除去した後、常圧に戻した。撹拌開始後、１時間でヒアルロン酸ナトリウムは完全に溶解し、ヒアルロン酸ナトリウム濃度をカルバゾール硫酸法により測定したところ、１．００％となった。
この液の極根粘度を第十五改正日本薬局方に従って測定すると、３３．８ｄｌ／ｇであり、分子量に換算すると２３７万であった。
Example 1
1580 g of sodium hyaluronate having a molecular weight of 2.37 million obtained by a fermentation method using Streptococcus equii FM-100 (Microtechnical Laboratories No. 9027) was filled into an airtight container equipped with a 20 l butterfly valve. A turbine-type stirring blade is attached to a 200-liter stainless steel dissolution tank whose inner surface is coated with Teflon (registered trademark) at a 1: 2 position, and a physiological solution containing 2 mM sodium phosphate buffer at pH 7.3. 149 l of saline solution (injection solution) was charged into the dissolution tank. The container filled with sodium hyaluronate was attached upside down to the raw powder inlet of the dissolution tank, the butterfly valve was opened, and sodium hyaluronate was charged into the dissolution tank. Stirring was performed at 1800 rpm for 50 minutes to completely dissolve sodium hyaluronate. In order to remove bubbles in the liquid, the pressure in the dissolution tank was maintained at a vacuum degree of 15 kPa abs or lower for 20 minutes to remove bubbles and then returned to normal pressure. One hour after the start of stirring, the sodium hyaluronate was completely dissolved, and the sodium hyaluronate concentration was measured by the carbazole sulfate method and found to be 1.00%.
It was 33.8 dl / g when the polar root viscosity of this liquid was measured according to the 15th revision Japanese Pharmacopoeia, and it was 2.37 million when converted into molecular weight.
この溶解液をキッコーマン社製キッズクッカー連続滅菌機で連続滅菌した。この装置は、二重管からなり、内管は内径２３ｍｍで、固定の撹拌機が内蔵され、加熱部の容積３．４ｌ、ホールド部容積０．６ｌ、冷却部容積２．６ｌであった。ホールド部の温度が１３５℃になるように、加熱部外管の熱水を調節し、ホールド部での滞留時間が３４秒になるように加熱部入口の定量ポンプを制御した。
冷却部は、出口温度が４０℃以下になるように、冷却部外管の水を調節した。
冷却部出口圧力が０．３３ＭＰａなるように圧力調節弁で制御し、冷却したヒアルロン酸ナトリウム溶解液を孔径５μｍのナイロン製のろ過膜からなる日本ミリポア社製ミリディスク４０で流速６０ｌ／ｈｒろ過した。
This solution was continuously sterilized with a kids cooker continuous sterilizer manufactured by Kikkoman. This apparatus consisted of a double tube, the inner tube had an inner diameter of 23 mm, a fixed stirrer was incorporated, the heating unit volume was 3.4 l, the hold unit volume was 0.6 l, and the cooling unit volume was 2.6 l. The hot water in the heating unit outer tube was adjusted so that the temperature of the holding unit was 135 ° C., and the metering pump at the heating unit inlet was controlled so that the residence time in the holding unit was 34 seconds.
The cooling unit adjusted the water in the cooling unit outer tube so that the outlet temperature was 40 ° C. or lower.
The cooling part outlet pressure was controlled by a pressure control valve so that the pressure was 0.33 MPa, and the cooled sodium hyaluronate solution was filtered with a Millidisk 40 manufactured by Nihon Millipore Corporation consisting of a nylon filtration membrane having a pore diameter of 5 μm at a flow rate of 60 l / hr. .
ろ過液を、３０分間、１４４ｒｐｍで撹拌混合した。次いで、その液をダイアフラム型の充填ポンプを有する充填部、ゴム栓の打栓、巻締め機構を有するバイアル充填密封機で、バイアル瓶に２．８５ｌずつ充填した。ゴム栓はブチルゴム（大協精工社製）を打栓した。
製品の品質試験を第十五改正日本薬局方、製剤総則・注射剤の項に従って不溶性異物検査を行ったところ、合格率は９９．９％以上であった。
The filtrate was stirred and mixed at 144 rpm for 30 minutes. The liquid was then filled in 2.85 liters at a time using a vial filling and sealing machine having a filling part having a diaphragm-type filling pump, a stopper for a rubber stopper, and a tightening mechanism. The rubber stopper was stoppered with butyl rubber (Daikyo Seiko Co., Ltd.).
When the product quality test was inspected for insoluble foreign matter in accordance with the 15th revised Japanese Pharmacopoeia, General Rules for Preparations and Injections, the pass rate was 99.9% or more.
比較例１
実施例１で、異物ろ過膜処理なしで、充填密封したバイアル６０００本の不溶性異物試験合格率は６５．３％であった。
Comparative Example 1
In Example 1, the insoluble foreign matter pass rate of 6000 filled and sealed vials without foreign matter filtration membrane treatment was 65.3%.
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