JP2011125333A5 - - Google Patents
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Claims (20)
(a)チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動する転写調節因子をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損細胞を使用し、
前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写抑制因子である場合には、該遺伝子スイッチを活性化する化合物の非存在下でデオキシチミジン三リン酸(dTTP)のデノボ(de novo)合成経路の阻害剤を添加して該細胞をインキュベーションした後に生細胞を回収すること、若しくは、該遺伝子スイッチを活性化する物質の存在下で変異原性ヌクレオシドを添加して該細胞をインキュベーションした後に生細胞を回収すること、または
前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写活性化因子である場合には、該遺伝子スイッチを活性化する化合物の存在下でデオキシチミジン三リン酸(dTTP)のデノボ(de novo)合成経路の阻害剤を添加して該細胞をインキュベーションした後に生細胞を回収すること、若しくは、該遺伝子スイッチを活性化する物質の非存在下で変異原性ヌクレオシドを添加して該細胞をインキュベーションした後に生細胞を回収すること、
を含む、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a),
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a transcriptional regulatory factor that operates on the promoter sequence of (a),
Using thymidine kinase deficient cells into which
When the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional repressing factor, de novo of deoxythymidine triphosphate (dTTP) in the absence of a compound that activates the gene switch After recovering the live cells after incubation of the cells with the addition of an inhibitor of the synthetic pathway, or after incubating the cells with the addition of a mutagenic nucleoside in the presence of a substance that activates the gene switch When the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional activator, the deoxythymidine triphosphate (in the presence of a compound that activates the gene switch is collected. recovering live cells after incubating the cells with the addition of inhibitors of the de novo synthesis pathway of dTTP) or activating the gene switch Recovering viable cells after incubation the cells by adding a mutagenic nucleoside in the absence of quality,
A method of selecting a gene switch and a genetic circuit.
(1)下記配列(a)および(b)を少なくとも保持する発現ベクター：
(a)チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動する転写調節因子をコードする遺伝子配列、
を、チミジンキナーゼ欠損細胞に導入する工程、
(2)前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写抑制因子である場合には、該遺伝子スイッチを活性化する物質の存在下で上記細胞に変異原性ヌクレオシドを添加してインキュベーションする工程、または、前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写活性化因子である場合には、該遺伝子スイッチを活性化する物質の非存在下で上記細胞に変異原性ヌクレオシドを添加して該細胞をインキュベーションする工程、
および
(3)生細胞を回収する工程。 A method for selecting a gene switch and a genetic circuit including the following steps (1) to (3):
(1) An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a),
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a transcriptional regulatory factor that operates on the promoter sequence of (a),
A step for introducing thymidine kinase deficient cells,
(2) When the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional repressing factor, incubation is performed by adding a mutagenic nucleoside to the cell in the presence of a substance that activates the gene switch. Or when the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional activator, a mutagenic nucleoside is added to the cell in the absence of a substance that activates the gene switch. Adding and incubating the cells;
and
(3) A step of collecting live cells.
(4)回収した生細胞を、前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写抑制因子である場合には、前記遺伝子スイッチを活性化する物質の非存在下でデオキシチミジン三リン酸(dTTP)のデノボ(de novo)合成経路の阻害剤を添加してインキュベーションする工程、または、前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写活性化因子である場合には、前記遺伝子スイッチを活性化する物質の存在下でdTTPのde novo合成経路の阻害剤を添加してインキュベーションする工程、
および
(5)生細胞を回収する工程。 The method for selecting a gene switch and a gene circuit according to claim 2, further comprising the following steps (4) and (5) following the step (3):
(4) When the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional repressing factor, the collected live cells are deoxythymidine triphosphate in the absence of a substance that activates the gene switch. a step of adding an inhibitor of a denovo synthesis pathway of (dTTP) and incubating, or when the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional activator, the gene Adding an inhibitor of dTTP de novo synthesis pathway in the presence of a substance that activates the switch and incubating;
and
(5) A step of collecting live cells.
(6)下記配列(a)および(b)を少なくとも保持する発現ベクター：
(a)チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動する転写調節因子をコードする遺伝子配列、
を、チミジンキナーゼ欠損細胞に導入する工程、
(7)前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写抑制因子である場合には、前記遺伝子スイッチを活性化する物質の非存在下で上記細胞にデオキシチミジン三リン酸(dTTP)のデノボ(de novo)合成経路の阻害剤を添加してインキュベーションする工程、または、前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写活性化因子である場合には、前記遺伝子スイッチを活性化する物質の存在下で上記細胞にdTTPのde novo合成経路の阻害剤を添加して該細胞をインキュベーションする工程、
および
(8)生細胞を回収する工程。 A method for selecting a gene switch and a genetic circuit, including the following steps (6) to (8):
(6) An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a),
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a transcriptional regulatory factor that operates on the promoter sequence of (a),
A step for introducing thymidine kinase deficient cells,
(7) When the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional repressing factor, deoxythymidine triphosphate (dTTP) is added to the cell in the absence of a substance that activates the gene switch. A step of adding an inhibitor of the de novo synthesis pathway in the incubation step, or when the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional activator, activate the gene switch Adding an inhibitor of dTTP de novo synthesis pathway to the cells in the presence of a substance to be converted, and incubating the cells;
and
(8) A step of collecting live cells.
(9)回収した生細胞を、前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写抑制因子である場合には前記遺伝子スイッチを活性化する物質の存在下で変異原性ヌクレオシドを添加してインキュベーションする工程、または、前記(f)の転写調節因子をコードする遺伝子配列が転写活性化因子である場合には前記遺伝子スイッチを活性化する物質の非存在下で変異原性ヌクレオシドを添加してインキュベーションする工程、
および
(10)生細胞を回収する工程。 The method for selecting a gene switch and a gene circuit according to claim 4, further comprising the following steps (9) and (10) following the step (8):
(9) When the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional repressing factor, the recovered living cells are added with a mutagenic nucleoside in the presence of a substance that activates the gene switch. Or a mutagenic nucleoside is added in the absence of a substance that activates the gene switch when the gene sequence encoding the transcriptional regulatory factor of (f) is a transcriptional activator. Incubating,
and
(10) A step of collecting live cells.
(a)ヒトヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列であってリプレッサータンパク質CIの作用を受けるプロモータ、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動するCIタンパク質をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損大腸菌株を使用し、N-アシル-L-ホモセリンラクトン(AHL)の存在下で6-(β-D-2-デオキシリボ-フラノシル)-3,4-ジヒドロ-8H-ピリミド[4,5-c][1,2]オキザジン-7-オン(dP)を添加して該大腸菌株を5分間から60分間インキュベーションした後に生細胞を回収することを含む、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding human herpesvirus-derived thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a), which is subjected to the action of the repressor protein CI,
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a CI protein that operates on the promoter sequence of (a),
In the presence of N-acyl-L-homoserine lactone (AHL) and 6- (β-D-2-deoxyribo-furanosyl) -3,4-dihydro-8H-pyrimido Gene switch and gene circuit comprising collecting live cells after adding [4,5-c] [1,2] oxazin-7-one (dP) and incubating the E. coli strain for 5 to 60 minutes How to choose.
(a)ヒトヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列であってリプレッサータンパク質CIの作用を受けるプロモータ、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動するCIタンパク質をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損大腸菌株を使用し、N-アシル-L-ホモセリンラクトン(AHL)の非存在下で5-フルオロ-2'-デオキシウリジン(5FdU)を添加して該大腸菌株を12時間から20時間インキュベーションした後に生細胞を回収することを含む、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding human herpesvirus-derived thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a), which is subjected to the action of the repressor protein CI,
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a CI protein that operates on the promoter sequence of (a),
Was used in the absence of N-acyl-L-homoserine lactone (AHL) and 5-fluoro-2'-deoxyuridine (5FdU) was added for 12 hours. A method for selecting a gene switch and a genetic circuit, comprising recovering viable cells after incubation for 20 hours.
(a)ヒトヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列であってリプレッサータンパク質CIの作用を受けるプロモータ、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動するCIタンパク質をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損大腸菌株を使用し、N-アシル-L-ホモセリンラクトン(AHL)の存在下で6-(β-D-2-デオキシリボ-フラノシル)-3,4-ジヒドロ-8H-ピリミド[4,5-c][1,2]オキザジン-7-オン(dP)を添加して該大腸菌株を5分間から60分間インキュベーションした後に生細胞を回収し、次いで、AHLの非存在下で5-フルオロ-2'-デオキシウリジン(5FdU)を添加して該大腸菌株を12時間から20時間インキュベーションした後に生細胞を回収することを含む、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding human herpesvirus-derived thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a), which is subjected to the action of the repressor protein CI,
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a CI protein that operates on the promoter sequence of (a),
In the presence of N-acyl-L-homoserine lactone (AHL) and 6- (β-D-2-deoxyribo-furanosyl) -3,4-dihydro-8H-pyrimido [4,5-c] [1,2] Oxazin-7-one (dP) was added and the E. coli strain was incubated for 5 to 60 minutes before harvesting the viable cells and then in the absence of AHL A method for selecting a gene switch and a gene circuit, comprising recovering viable cells after adding 5-fluoro-2'-deoxyuridine (5FdU) and incubating the E. coli strain for 12 to 20 hours.
(a)ヒトヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列であってリプレッサータンパク質CIの作用を受けるプロモータ、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動するCIタンパク質をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損大腸菌株を使用し、N-アシル-L-ホモセリンラクトン(AHL)の非存在下で5-フルオロ-2'-デオキシウリジン(5FdU)を添加して該大腸菌株を12時間から20時間インキュベーションした後に生細胞を回収し、次いで、AHLの存在下で6-(β-D-2-デオキシリボ-フラノシル)-3,4-ジヒドロ-8H-ピリミド[4,5-c][1,2]オキザジン-7-オン(dP)を添加して該大腸菌株を5分間から60分間インキュベーションした後に生細胞を回収することを含む、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding human herpesvirus-derived thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a), which is subjected to the action of the repressor protein CI,
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a CI protein that operates on the promoter sequence of (a),
Was used in the absence of N-acyl-L-homoserine lactone (AHL) and 5-fluoro-2'-deoxyuridine (5FdU) was added for 12 hours. Viable cells were harvested after 20 hours of incubation, and then 6- (β-D-2-deoxyribo-furanosyl) -3,4-dihydro-8H-pyrimido [4,5-c] [4,5] in the presence of AHL 1,2] A method for selecting a gene switch and a gene circuit, comprising recovering viable cells after adding Oxazin-7-one (dP) and incubating the E. coli strain for 5 to 60 minutes.
(a)ヒトヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列であってリプレッサータンパク質CIの作用を受けるプロモータ、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動するCIタンパク質をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損大腸菌株を使用し、異なる濃度のN-アシル-L-ホモセリンラクトン(AHL)の存在下およびAHLの非存在下で5-フルオロ-2'-デオキシウリジン(5FdU)を添加して該大腸菌株を12時間から20時間インキュベーションした後に生細胞を回収し、次いで、前記濃度の1/10濃度のAHLの存在下で6-(β-D-2-デオキシリボ-フラノシル)-3,4-ジヒドロ-8H-ピリミド[4,5-c][1,2]オキザジン-7-オン(dP)を添加して該大腸菌株を5分間から60分間インキュベーションした後に生細胞を回収することにより、AHLに対する感度の異なる遺伝子スイッチおよび遺伝子回路を取得することを特徴とする、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding human herpesvirus-derived thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a), which is subjected to the action of the repressor protein CI,
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a CI protein that operates on the promoter sequence of (a),
5-fluoro-2'-deoxyuridine (5FdU) was added in the presence of N-acyl-L-homoserine lactone (AHL) at different concentrations and in the absence of AHL. Then, after the E. coli strain was incubated for 12 to 20 hours, the living cells were collected, and then 6- (β-D-2-deoxyribo-furanosyl) -3 in the presence of 1/10 concentration of AHL. , 4-dihydro-8H-pyrimido [4,5-c] [1,2] oxazin-7-one (dP) is added, and the E. coli strain is incubated for 5 to 60 minutes, and then the living cells are collected. To obtain a gene switch and a gene circuit having different sensitivities to AHL.
(a)ヒトヘルペスウイルス由来チミジンキナーゼをコードする遺伝子配列、
(b)前記(a)の配列の上流に該配列に作動可能に連結されたプロモータ配列であってリプレッサータンパク質CIの作用を受けるプロモータ、
並びに、
下記配列(c)から(f)を少なくとも保持する発現ベクター：
(c)前記プロモータ配列とは異なるプロモータ配列であってその下流の遺伝子スイッチ発現配列に作動可能に連結されたプロモータ配列
(d)前記遺伝子スイッチ発現配列、
(e)前記遺伝子スイッチ発現配列によりコードされる遺伝子スイッチの標的配列、
(f)前記標的配列が作動可能に連結された遺伝子であって前記(a)のプロモータ配列に作動するCIタンパク質をコードする遺伝子配列、
を導入したチミジンキナーゼ欠損大腸菌株を使用し、異なる種類のN-アシル-L-ホモセリンラクトン(AHL)の存在下およびAHLの非存在下で5-フルオロ-2'-デオキシウリジン(5FdU)を添加して該大腸菌株を12時間から20時間インキュベーションした後に生細胞を回収し、次いで、前記種類とは異なるAHLの存在下で6-(β-D-2-デオキシリボ-フラノシル)-3,4-ジヒドロ-8H-ピリミド[4,5-c][1,2]オキザジン-7-オン(dP)を添加して該大腸菌株を5分間から60分間インキュベーションした後に生細胞を回収することにより、AHL特異性の異なる遺伝子スイッチおよび遺伝子回路を取得することを特徴とする、遺伝子スイッチおよび遺伝子回路の選択方法。 An expression vector having at least the following sequences (a) and (b):
(a) a gene sequence encoding human herpesvirus-derived thymidine kinase,
(b) a promoter sequence operably linked to the sequence upstream of the sequence of (a), which is subjected to the action of the repressor protein CI,
And
An expression vector having at least the following sequences (c) to (f):
(c) a promoter sequence different from the promoter sequence and operably linked to a downstream gene switch expression sequence
(d) the gene switch expression sequence,
(e) a target sequence of a gene switch encoded by the gene switch expression sequence,
(f) a gene sequence in which the target sequence is operably linked and encodes a CI protein that operates on the promoter sequence of (a),
5-fluoro-2'-deoxyuridine (5FdU) was added in the presence of different types of N-acyl-L-homoserine lactone (AHL) and in the absence of AHL. Then, after the E. coli strain was incubated for 12 to 20 hours, the living cells were collected, and then 6- (β-D-2-deoxyribo-furanosyl) -3,4- in the presence of AHL different from the above type. AHL is obtained by recovering viable cells after adding dihydro-8H-pyrimido [4,5-c] [1,2] oxazin-7-one (dP) and incubating the E. coli strain for 5 to 60 minutes. A method for selecting a gene switch and a gene circuit, comprising obtaining a gene switch and a gene circuit having different specificities.
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