JP2011024513A - Method for measuring dehydrogenase or the corresponding substrate by dry chemistry, and inspection instrument to be used therefor - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質をドライケミストリーによる測定する方法およびそれに用いる検査器具に関する。 The present invention relates to a method for measuring dehydrogenase or a corresponding substrate in a sample by dry chemistry, and a test instrument used therefor.
血清、血漿等の試料中には、高濃度のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質が存在する。臨床化学診断においては、それらを測定するため、補酵素としてニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ）またはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェート（ＮＡＤＰ）を用いることが一般的である。このような方法に用いられるデヒドゲナーゼと基質との組み合わせとしては、乳酸デヒドロゲナーゼと乳酸、グルタミン酸デヒドロゲナーゼとグルタミン酸、アルコールデヒドロゲナーゼとアルコール、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼとグリセロール−３−リン酸、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼとグルコース−６−リン酸等が知られている。この場合、その組み合わせのいずれか一方を測定するため、他の一方を、補酵素とともに試薬として用いる。また、それと同様に、試料中の尿素等の特定物質を測定するため、特定物質を試薬により酵素反応させることにより、特定のデヒドロゲナーゼ又は対応する基質を中間的または最終的に発生させ、そのデヒドロゲナーゼ又は対応する基質を上記補酵素とともに反応させ、結果的に特定物質を測定することも幅広く行われている。 A high concentration of dehydrogenase or a corresponding substrate is present in a sample such as serum or plasma. In clinical chemistry diagnosis, in order to measure them, it is common to use nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) or nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) as a coenzyme. The combination of dehydrase and substrate used in such a method includes lactate dehydrogenase and lactate, glutamate dehydrogenase and glutamate, alcohol dehydrogenase and alcohol, glycerol-3-phosphate dehydrogenase and glycerol-3-phosphate, glucose-6- Phosphate dehydrogenase and glucose-6-phosphate are known. In this case, in order to measure either one of the combinations, the other one is used as a reagent together with the coenzyme. Similarly, in order to measure a specific substance such as urea in a sample, a specific dehydrogenase or a corresponding substrate is generated intermediately or finally by enzymatic reaction of the specific substance with a reagent, and the dehydrogenase or It is also widely performed to react a corresponding substrate with the above-mentioned coenzyme and consequently measure a specific substance.
これらの測定方法においては、最終的にはＮＡＤまたはＮＡＤＰがデヒドロゲナーゼ反応により、還元型であるＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨに変換され、その結果生ずる紫外線波長域（通常、３４０ｎｍ）における吸光度の上昇に基づいてデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定する方法を採用することが一般的である。しかし、この場合、紫外線領域で測定するため、測定セルとして簡便なガラスやプラスチックは使えず、高価な石英を用いる必要があり、加えて分析装置として紫外線光源や検出装置を使う必要があり、そのため、分析装置が大型で高価になりやすいという傾向があった。その結果、ドライケミストリーの分野や小さい病院でも測定できる可視分光光度計を用いた装置には適用できなかった。よって、そのような場合に使用できるようにするためには、可視部で、前記したデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定する方法が望まれている。 In these measurement methods, NAD or NADP is finally converted into reduced NADH or NADPH by a dehydrogenase reaction, and the resulting increase in absorbance in the ultraviolet wavelength region (usually 340 nm) It is common to employ a method of measuring the corresponding substrate. However, in this case, since measurement is performed in the ultraviolet region, simple glass or plastic cannot be used as a measurement cell, expensive quartz must be used, and in addition, an ultraviolet light source or detection device must be used as an analyzer. The analysis apparatus tends to be large and expensive. As a result, it could not be applied to a device using a visible spectrophotometer that can be measured in the field of dry chemistry and small hospitals. Therefore, in order to be able to use in such a case, a method for measuring the aforementioned dehydrogenase or the corresponding substrate in the visible region is desired.
他方、特許文献１には、グルコース−６−リン酸にグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを反応させる際に、補酵素としてチオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰとＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨとの組み合わせを用いて、酵素サイクリング反応を行わせ、生成する還元型酵素であるチオＮＡＤＨまたはチオＮＡＤＰＨを４００nｍ付近の可視部の吸光度に基いて、グルコース−６−リン酸を測定する方法が提案されている。しかしながら、この方法は酵素サイクリング反応を用いるものであって、必ずも簡便な測定方法とは言えないものであり、また高濃度の測定対象物を測定するのに適した測定方法とも言えないものである。
また、特許文献２には、液状流体の試料を、第１の平面および第２の平面から構成される反応室であって、それらの平面には試薬が付着された反応室に導入して、液状流体の試料中の測定対象物と、該試料中に溶解した試薬とを反応させて測定対象物を、所謂、ドライケミストリーの技術により測定する方法が提案されている。しかしながら、この方法が、血清、血漿等の試料中に高濃度に存在するデヒドロゲナーゼまたは対応する基質の測定に適応できるか否かについては明らかではない。
On the other hand, in Patent Document 1, when glucose-6-phosphate dehydrogenase is reacted with glucose-6-phosphate, an enzyme cycling reaction is performed using a combination of thioNAD or thioNADP and NADH or NADPH as a coenzyme. A method has been proposed in which glucose-6-phosphate is measured based on the absorbance of the visible region around 400 nm of thio-NADH or thio-NADPH, which is a reduced enzyme produced. However, this method uses an enzyme cycling reaction, and is not necessarily a simple measurement method, and cannot be said to be a measurement method suitable for measuring a high concentration measurement object. is there.
Patent Document 2 introduces a liquid fluid sample into a reaction chamber composed of a first plane and a second plane, and a reagent is attached to these planes. There has been proposed a method in which a measurement object in a liquid fluid sample is reacted with a reagent dissolved in the sample to measure the measurement object by a so-called dry chemistry technique. However, it is not clear whether this method can be applied to the measurement of dehydrogenase or the corresponding substrate present in high concentrations in samples such as serum, plasma and the like.
本発明の課題は、高濃度で試料中に存在するデヒドロゲナーゼまたは対応する基質をドライケミストリーの技術により正確に測定する方法およびそれに用いる検査器具を提供することにある。更には、可視部での吸光度に基く測定が可能で、ドライケミストリーの分野や小さい病院でも測定できる可視分光光度計を用いた装置に適用でき、かつ、高濃度で試料中に存在するデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を正確に測定する方法およびそれに用いる測定器具を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a method for accurately measuring dehydrogenase or a corresponding substrate present in a sample at a high concentration by a dry chemistry technique and a test instrument used therefor. Furthermore, it is possible to measure based on absorbance in the visible region, and can be applied to devices using a visible spectrophotometer that can be measured in the field of dry chemistry and small hospitals. It is an object to provide a method for accurately measuring a substrate to be measured and a measuring instrument used therefor.
本発明者らは、特許文献２に記載されているような、所謂、ドライケミストリーの技術によるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質の測定について検討した結果、ドライケミストリーの技術により、血清、血漿等の試料中に高濃度に存在するデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を正確に測定できることを見出した。
また、例えば特許文献１に記載されているように、酵素サイクリング法により低濃度のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するために用いられている補酵素チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰが酵素反応により可視部の吸光度を変化させるのに注目し、その補酵素を用いて、試料中に高濃度で存在する測定対象を測定する方法について検討した。その結果、高濃度の測定対象を補酵素としてチオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰを用いた場合、高濃度領域で直線性が維持されにくく、加えてブランクも高くなることがあり、測定対象を正確に測定できないことが判明した。
本発明者は、試料中のある種の物質をある酵素で除去するため、補酵素としてＮＡＤを用いて酵素反応をさせ、次に、その物質を除去した試料を用いてデヒドロゲナーゼ、対応する基質およびチオＮＡＤを反応させて可視部領域の吸光度を測定することにより、試料中のデヒドロゲナーゼまたはその対応する基質を測定しようと試みた。ところが、ＮＡＤとチオＮＡＤの添加の順番にかかわらず、試料にデヒドロゲナーゼ、対応する基質、チオＮＡＤ、ＮＡＤを共存させた単純な構成で可視部領域の吸光度を測定することにより、驚くべきことに、反応ブランクが減少し、検量線の傾きが小さくなり、試料中のデヒドロゲナーゼまたはその対応する基質を正確に測定できることを発見した。その結果、このような構成により、上記の問題が解決され、高濃度領域でもデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を正確に測定できることが判明した。
従って、試料中に含まれるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を可視部の吸光度で測定する方法において、補酵素として、チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰとＮＡＤまたはＮＡＤＰの両方を用いることにより、測定対象が高濃度領域でも直線性を維持でき、かつ、検量線のブランクを小さくすることができ、その結果、簡便な可視分光光度計にて測定対象濃度の広い領域で、簡単かつ正確にデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定する方法を提供できることを見出し、更には、この方法を、特許文献２に記載されているような、所謂、ドライケミストリーの技術に適用できることを見出した。
本発明はこれらの知見により完成されたものである。
As a result of examining the measurement of dehydrogenase or a corresponding substrate by the so-called dry chemistry technique as described in Patent Document 2, the present inventors have found that the dry chemistry technique can be used in a sample such as serum or plasma. It has been found that dehydrogenase or the corresponding substrate present at high concentrations can be accurately measured.
Further, as described in, for example, Patent Document 1, coenzyme thioNAD or thioNADP used for measuring a low concentration of dehydrogenase or a corresponding substrate by an enzyme cycling method is subjected to an absorbance reaction in the visible region. Focusing on the change in the temperature, we examined a method for measuring the measurement target present in the sample at a high concentration using the coenzyme. As a result, when thio-NAD or thio-NADP is used with a high-concentration measurement target as a coenzyme, linearity is difficult to maintain in the high-concentration region, and in addition, the blank may be high, and the measurement target cannot be measured accurately. It has been found.
In order to remove a certain substance in a sample with a certain enzyme, the present inventor makes an enzyme reaction using NAD as a coenzyme, and then uses the sample from which the substance has been removed to use a dehydrogenase, a corresponding substrate and An attempt was made to measure dehydrogenase or its corresponding substrate in a sample by reacting thio-NAD and measuring the absorbance in the visible region. However, regardless of the order of addition of NAD and thio-NAD, surprisingly, by measuring the absorbance in the visible region with a simple structure in which dehydrogenase, the corresponding substrate, thio-NAD, and NAD coexist in the sample, It has been discovered that the reaction blank is reduced, the slope of the calibration curve is reduced, and the dehydrogenase or its corresponding substrate in the sample can be accurately measured. As a result, it has been found that such a configuration solves the above-described problems and can accurately measure dehydrogenase or a corresponding substrate even in a high concentration region.
Therefore, in the method of measuring the dehydrogenase or the corresponding substrate contained in the sample by the absorbance in the visible region, by using both thio-NAD or thio-NADP and NAD or NADP as a coenzyme, even if the measurement target is a high concentration region The linearity can be maintained and the blank of the calibration curve can be made small. As a result, the dehydrogenase or the corresponding substrate can be measured easily and accurately in a wide range of concentration to be measured with a simple visible spectrophotometer. It has been found that a method can be provided, and furthermore, it has been found that this method can be applied to a so-called dry chemistry technique as described in Patent Document 2.
The present invention has been completed based on these findings.
従って、本発明は、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する液状流体試料中の特定物質を測定する方法であって、該液状流体試料と試薬とを反応させる検査器具を用いた測定方法であり、
用いる検査器具が、少なくとも反応室とその反応室を構成するための隣接する面を有し、その面の少なくとも一部に試薬が付着されており、かつ、試薬が、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するための酵素反応を行うための試薬、あるいは、酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する液状流体試料中の特定物質を測定するための試薬であり、かつ、液状流体試料を反応室に供給し、試薬が付着された面と接触させることにより、付着された試薬を液状流体試料中に溶解させて液状流体試料と混合し、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質と試薬による酵素反応を液状で行い、その液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または特定物質を測定する、測定方法に関する。
Accordingly, the present invention is a method for measuring a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample, or a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or a corresponding substrate by an enzymatic reaction, It is a measurement method using an inspection instrument for reacting the liquid fluid sample with a reagent,
The test instrument to be used has at least a reaction chamber and an adjacent surface for constituting the reaction chamber, a reagent is attached to at least a part of the surface, and the reagent is a dehydrogenase in a liquid fluid sample or A reagent for performing an enzymatic reaction to measure the corresponding substrate, or a reagent for measuring a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or the corresponding substrate by the enzymatic reaction And supplying the liquid fluid sample to the reaction chamber and bringing it into contact with the surface on which the reagent is attached, so that the attached reagent is dissolved in the liquid fluid sample and mixed with the liquid fluid sample, and dehydrogenase or a corresponding substrate Enzyme reaction is performed in liquid form with the reagent, and dehydrogenase or the corresponding substrate or specific substance in the liquid sample is measured. A method for.
上記の測定方法において、好ましい態様は、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を、補酵素としてチオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰおよびＮＡＤまたはＮＡＤＰを用いて、反応室にて反応させ、生成するチオＮＡＤＨまたはチオＮＡＤＰＨに由来する吸光度の増加を測定することにより、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定する、測定方法である。
上記の測定方法において、更に好ましい態様は、第１の平面および第２の平面のいずれかの面に、デヒドロゲナーゼと基質のうち測定対象以外の成分が付着され、他の面に、チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰおよびＮＡＤまたはＮＡＤＰが付着されている、測定方法である。
上記の測定方法において、他の好ましい態様は、液状流体試料中の特定物質を、酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生させるための成分と、反応室にて反応させ、次いで、発生させたデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を、デヒドロゲナーゼと対応する基のうち発生させた以外の成分と、補酵素としてチオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰおよびＮＡＤまたはＮＡＤＰを用いて、反応室にて反応させ、生成するチオＮＡＤＨまたはチオＮＡＤＰＨに由来する吸光度の増加を測定することにより、液状流体試料中の特定物質を測定する、測定方法である。
上記の他の好ましい態様において、更に好ましい態様は、第１の平面および第２の平面のいずれかの面に、液状流体試料中の特定物質を酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生させるための成分と、デヒドロゲナーゼと対応する基のうち発生させる以外の成分とが付着され、他の面に、チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰおよびＮＡＤまたはＮＡＤＰが付着されている、測定方法である。
In the above-described measurement method, a preferred embodiment is that a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample is reacted in a reaction chamber using thioNAD or thioNADP and NAD or NADP as a coenzyme to generate thioNADH or It is a measurement method in which dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample is measured by measuring an increase in absorbance derived from thio-NADPH.
In the above-described measurement method, a further preferred embodiment is that a component other than the measurement target of the dehydrogenase and the substrate is attached to either one of the first plane and the second plane, and thio-NAD or thio is attached to the other plane. This is a measurement method in which NADP and NAD or NADP are attached.
In the above measurement method, another preferred embodiment is a method in which a specific substance in a liquid fluid sample is reacted in a reaction chamber with a component for generating dehydrogenase or a corresponding substrate intermediately or finally by an enzymatic reaction, Then, the generated dehydrogenase or the corresponding substrate is reacted in a reaction chamber with a component other than the generated one of the group corresponding to the dehydrogenase and thioNAD or thioNADP and NAD or NADP as a coenzyme, This is a measurement method for measuring a specific substance in a liquid fluid sample by measuring an increase in absorbance derived from thio-NADH or thio-NADPH produced.
In the other preferred embodiments described above, in a further preferred embodiment, the dehydrogenase or the corresponding substrate is intermediately or finalized by enzymatic reaction of a specific substance in the liquid fluid sample on either one of the first plane and the second plane. This is a measurement method in which a component to be generated automatically and a component other than the group to be generated among the groups corresponding to dehydrogenase are attached, and thio-NAD or thio-NADP and NAD or NADP are attached to the other surface .
更に、本発明は、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する液状流体試料中の特定物質を測定するための検査器具であって、
少なくとも反応室とその反応室を構成するための隣接する面を有し、その面の少なくとも一部に試薬が付着されており、かつ、試薬が、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するための酵素反応を行うための試薬、あるいは、酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する試料中の特定物質を測定するための試薬であり、かつ、液状流体試料を反応室に供給し、試薬が付着された面と接触させることにより、付着された試薬を液状流体試料中に溶解させて液状流体試料と混合し、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質および試薬による酵素反応を液状で行い、その液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または特定物質を測定するための、検査器具に関する。
Furthermore, the present invention relates to a test instrument for measuring a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample, or a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or ultimately generates a dehydrogenase or a corresponding substrate by an enzymatic reaction. There,
At least a reaction chamber and an adjacent surface for constituting the reaction chamber, a reagent is attached to at least a part of the surface, and the reagent measures dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample A reagent for performing an enzymatic reaction for measuring a specific substance in a sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or a corresponding substrate by the enzymatic reaction, and a liquid fluid sample By supplying it to the reaction chamber and bringing it into contact with the surface to which the reagent is attached, the attached reagent is dissolved in the liquid fluid sample and mixed with the liquid fluid sample, and the enzyme reaction with dehydrogenase or the corresponding substrate and reagent is liquid. And a test instrument for measuring dehydrogenase or a corresponding substrate or a specific substance in the liquid fluid sample.
本発明によれば、試料中に含まれるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質をドライケミストリーの技術により正確に測定できる。また、本発明によれば、試料中に含まれるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を可視部の吸光度で測定するにもかかわらず、補酵素として、チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰとＮＡＤまたはＮＡＤＰの両方を用いてドライケミストリーの技術により、測定対象が高濃度領域でも、検量線のブランクを小さくすることができ、測定対象を簡単かつ正確に測定できる。 According to the present invention, dehydrogenase or a corresponding substrate contained in a sample can be accurately measured by a dry chemistry technique. In addition, according to the present invention, although the dehydrogenase or the corresponding substrate contained in the sample is measured by the absorbance in the visible region, it can be dried using both thio-NAD or thio-NADP and NAD or NADP as a coenzyme. With the chemistry technique, the blank of the calibration curve can be made small even when the measurement target is a high concentration region, and the measurement target can be measured easily and accurately.
１ 第１プレート
２ 第２プレート
３ 第３プレート
４ 第４プレート
７ 反応室
８ 流路
Ａ 液状流体試料
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 1st plate 2 2nd plate 3 3rd plate 4 4th plate 7 Reaction chamber 8 Flow path A Liquid fluid sample
本発明の測定方法は、ドライケミストリーの技術によるものである。なお、本明細書においては、ドライケミストリーとは、特定の化学反応又は酵素反応を起こす試薬が乾燥状態で用意されていて、そこに液体状の検体が添加されると、検体中の水分を溶媒として、試薬が含まれているマトリックスの中で反応が進行するものをいうものとする。
そのための検査器具としては、例えば、少なくとも反応室と、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するための試薬が付着・乾燥された面（例えば支持体で構成される面またはフィルム面）とを有していればよく、その他として、例えば、試料供給部と、前記供給部に供給された試料を前記反応室までの移送するための流路を備えていることが好ましい。試薬は、反応室を構成する面に付着されているのが好ましい。このような装置を用いて、液状流体試料を検査器具に導入することにより、付着された試薬を液体としての試料により溶解させて試料と混合し、デヒドロゲナーゼ酵素反応を反応室中で液状にて行い、その試料中のデヒドロゲナーゼ又は対応する基質、又は特定物質を測定できる。この場合、付着された試薬を試料で溶解させるため、液状試薬で試料を測定する場合に比べ、試料は、試薬に対し多量に使うため、ブランクの上昇を起こしやすくその結果測定範囲が著しく狭くなる。そのため、この場合、本発明の測定方法が特に好適である。
The measurement method of the present invention is based on the dry chemistry technique. In this specification, dry chemistry means that a reagent that causes a specific chemical reaction or enzyme reaction is prepared in a dry state, and when a liquid sample is added thereto, the moisture in the sample is removed as a solvent. As used herein, the reaction proceeds in a matrix containing a reagent.
As an inspection instrument for that purpose, for example, it has at least a reaction chamber and a surface to which a reagent for measuring dehydrogenase or a corresponding substrate is attached and dried (for example, a surface constituted by a support or a film surface). In addition, for example, it is preferable that a sample supply unit and a flow channel for transferring the sample supplied to the supply unit to the reaction chamber are provided. The reagent is preferably attached to the surface constituting the reaction chamber. Using such an apparatus, a liquid fluid sample is introduced into a test instrument, so that the attached reagent is dissolved in the sample as a liquid and mixed with the sample, and the dehydrogenase enzyme reaction is performed in liquid form in the reaction chamber. The dehydrogenase or the corresponding substrate or the specific substance in the sample can be measured. In this case, since the attached reagent is dissolved in the sample, the sample is used in a large amount compared to the case of measuring the sample with a liquid reagent. . Therefore, in this case, the measurement method of the present invention is particularly suitable.
このような検査器具を用いる、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する液状流体試料中の特定物質を測定する本発明の方法においては、用いる検査器具が少なくとも反応室とその反応室を構成するための隣接する面を有し、その面の少なくとも一部に試薬が付着されており、かつ、試薬が、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するための酵素反応を行うための試薬であり、かつ、液状流体試料を反応室に供給し面と接触させることにより、付着された試薬を溶解させて液状流体試料と混合し、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質および試薬によるデヒドロゲナーゼ酵素反応を液状で行い、その液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または特定物質を測定できる。 Using such a test instrument, a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample or a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or a corresponding substrate by an enzymatic reaction is measured. In the method, the test instrument to be used has at least a reaction chamber and an adjacent surface for constituting the reaction chamber, the reagent is attached to at least a part of the surface, and the reagent is contained in the liquid fluid sample. A reagent for performing an enzyme reaction for measuring a dehydrogenase or a corresponding substrate of the liquid fluid sample, and supplying the liquid fluid sample to the reaction chamber and bringing it into contact with the surface, thereby dissolving the attached reagent and the liquid fluid sample And the dehydrogenase enzymatic reaction with dehydrogenase or corresponding substrate and reagent in liquid form, and the liquid fluid Dehydrogenase or the corresponding substrate in postal or specific substances can be measured.
例えば、用いる検査器具が、液状流体試料を供給するための供給部、検査器具内に設けられ、液状流体試料を試薬と反応させる反応室、供給部に供給された液状流体試料を反応室までの移送するための流路を備え、流路および反応室は、通気性があり且つ非通液状性の多孔性膜を介して検査器具外部と接続されており、反応室は、第１の平面およびこれに対向する第２の平面、第１の平面および第２の平面それぞれに接し、第１の平面と第２の平面との間に空間を形成する第３の面で形成されており、流路と反応室とは、第３の面に連結孔が形成されることにより、連結されており、平面の少なくとも一つの面に試薬が付着させられており、供給部に供給された液状流体試料を供給部に設けられた加圧部によって加圧して、反応室内に移送すること、検査器具であることが好ましい。
試薬の付着が、第１の平面および前記第２の平面に、異なる試薬が付着させられていてもよい。
For example, a test instrument to be used is provided in a supply unit for supplying a liquid fluid sample, a test chamber, a reaction chamber for reacting the liquid fluid sample with a reagent, and a liquid fluid sample supplied to the supply unit to the reaction chamber. A flow path for transporting, the flow path and the reaction chamber being connected to the outside of the test instrument through a porous membrane that is air permeable and impermeable to liquid, and the reaction chamber includes a first plane and The second plane, the first plane, and the second plane that face each other are formed on a third plane that forms a space between the first plane and the second plane. The channel and the reaction chamber are connected by forming a connection hole on the third surface, the reagent is attached to at least one surface of the plane, and the liquid fluid sample supplied to the supply unit Is pressurized by the pressurization unit provided in the supply unit and transferred to the reaction chamber It is preferably a test instrument.
Different reagents may be attached to the first plane and the second plane.
本発明に用いられる液状流体試料としては、血清、血漿、尿等の生体試料、またはそれらのモデルサンプルが好ましい。
本発明の測定対象は、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質であり、また、酵素反応により中間的または最終的にデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を発生させることができる液状流体試料中の特定物質である。
本発明においては、デヒドロゲナーゼ酵素反応を行う際、補酵素としてチオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰおよびＮＡＤまたはＮＡＤＰの両方を反応させるのが好ましい。チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰとＮＡＤまたはＮＡＤＰとの組み合せはいずれでもよいが、チオＮＡＤとＮＡＤとの組み合せ、あるいはチオＮＡＤＰとＮＡＤＰとの組み合せが好ましい。
以下、チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰを、チオＮＡＤ（Ｐ）と略記することがある。また、ＮＡＤまたはＮＡＤＰを、ＮＡＤ（Ｐ）と略記することがある。
本発明においては、チオＮＡＤとはチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを意味し、チオＮＡＤＰとはチオニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートを意味する。また、ＮＡＤとはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを意味し、ＮＡＤＰとはニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートを意味する。
本明細書において、チオＮＡＤＨ、チオＮＡＤＰＨ、ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨとは、補酵素の還元型、すなわち、それぞれ、チオＮＡＤ、チオＮＡＤＰ、ＮＡＤ、ＮＡＤＰの還元型を意味する。以下、チオＮＡＤＨまたはチオＮＡＤＰＨを、チオＮＡＤ（Ｐ）Ｈと略記することがある。また、ＮＡＤＨまたはＮＡＤＰＨを、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈと略記することがある。
The liquid fluid sample used in the present invention is preferably a biological sample such as serum, plasma, urine, or a model sample thereof.
The measurement object of the present invention is a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample, and a specific substance in the liquid fluid sample that can generate dehydrogenase or a corresponding substrate intermediately or finally by an enzymatic reaction. is there.
In the present invention, it is preferable to react both thio-NAD or thio-NADP and NAD or NADP as a coenzyme when performing the dehydrogenase enzyme reaction. Any combination of thio-NAD or thio-NADP and NAD or NADP may be used, but a combination of thio-NAD and NAD or a combination of thio-NADP and NADP is preferred.
Hereinafter, thio NAD or thio NADP may be abbreviated as thio NAD (P). NAD or NADP may be abbreviated as NAD (P).
In the present invention, thioNAD means thionicotinamide adenine dinucleotide, and thioNADP means thionicotinamide adenine dinucleotide phosphate. NAD means nicotinamide adenine dinucleotide, and NADP means nicotinamide adenine dinucleotide phosphate.
In the present specification, thio-NADH, thio-NADPH, NADH, and NADPH mean reduced forms of coenzymes, that is, reduced forms of thio-NAD, thio-NADP, NAD, and NADP, respectively. Hereinafter, thioNADH or thioNADPH may be abbreviated as thioNAD (P) H. NADH or NADPH may be abbreviated as NAD (P) H.
本発明においては、チオＮＡＤ（Ｐ）とＮＡＤ（Ｐ）とを、前記検査器具における反応室を構成する、第１の平面およびこれに対向する第２の平面のいずれかの面に付着させて用いるのが好ましい。用いるＮＡＤ（Ｐ）の量は、特に限定しないが、用いるチオＮＡＤ（Ｐ）の量の０．５倍モル数以上が好ましく、１．５〜３０倍モル数がさらに好ましく、３．０〜２０倍モル数が最も好ましい。ＮＡＤ（Ｐ）の量が少なすぎると検量線の直線性が維持しにくいこともあり、また、ブランク低下が不十分なときもある。一方、ＮＡＤ（Ｐ）の量が大きすぎると検量線の直線の傾きが小さくなることがあり、正確に測定対象を測定できにくいことがある。
本発明においては、補酵素としてチオＮＡＤ（Ｐ）及びＮＡＤ（Ｐ）の両方を用いてデヒドロゲナーゼ反応させ、生成するチオＮＡＤ（Ｐ）Ｈに由来する吸光度の増加を測定することができる。吸光度を測定するための波長は、３９５〜４１５ｎｍの範囲が好ましい。
本発明において、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質としては、例えば、現在、臨床検査業界で測定対象となっている補酵素としてＮＡＤ（Ｐ）やチオＮＡＤ（Ｐ）を用いてデヒドロゲナーゼ酵素反応により測定できるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質であれば特に限定されない。この場合、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質は、液状流体試料中に当初から存在しているデヒドロゲナーゼまたは対応する基質でもよい。また、液状流体試料中の特定物質を測定するためその特定物質を酵素反応させることにより中間的または最終的に発生されたデヒドロゲナーゼまたは対応する基質でもよく、この場合、発生されたデヒドロゲナーゼまたは対応する基質に依存して、結果的に、特定物質を測定することができる。
In the present invention, thio NAD (P) and NAD (P) are attached to one of the first plane and the second plane opposite to the first plane, which constitute the reaction chamber in the inspection instrument. It is preferable to use it. The amount of NAD (P) to be used is not particularly limited, but is preferably 0.5 times the number of moles of thio NAD (P) to be used, more preferably 1.5 to 30 times the number of moles, and 3.0 to 20 The mole number is most preferred. If the amount of NAD (P) is too small, the linearity of the calibration curve may be difficult to maintain, and the blank reduction may be insufficient. On the other hand, if the amount of NAD (P) is too large, the slope of the straight line of the calibration curve may be small, and it may be difficult to accurately measure the measurement target.
In the present invention, an increase in absorbance derived from thio-NAD (P) H produced by dehydrogenase reaction using both thio-NAD (P) and NAD (P) as coenzymes can be measured. The wavelength for measuring the absorbance is preferably in the range of 395 to 415 nm.
In the present invention, the dehydrogenase or the corresponding substrate includes, for example, a dehydrogenase that can be measured by a dehydrogenase enzymatic reaction using NAD (P) or thioNAD (P) as a coenzyme that is currently measured in the clinical laboratory industry. There is no particular limitation as long as it is a corresponding substrate. In this case, the dehydrogenase or corresponding substrate may be a dehydrogenase or corresponding substrate that is originally present in the liquid fluid sample. Further, it may be a dehydrogenase or a corresponding substrate generated intermediately or finally by enzymatic reaction of the specific substance to measure a specific substance in a liquid fluid sample. In this case, the generated dehydrogenase or the corresponding substrate may be used. As a result, a specific substance can be measured.
このような方法に用いられるデヒドロゲナーゼと基質との組み合わせとしては、例えば、乳酸デヒドロゲナーゼと乳酸、グルタミン酸デヒドロゲナーゼとグルタミン酸、アルコールデヒドロゲナーゼとアルコール、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼとグリセロール−３−リン酸、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼとグルコース−６−リン酸等を例示できる。この場合、その組み合わせのいずれか一方を測定するため、他の一方を、補酵素とともにデヒドロゲナーゼ酵素反応をさせるための試薬として用いることができる。本発明においては、試料に高濃度で存在する測定対象が好適である。
デヒドロゲナーゼまたは対応する基質として、液状流体試料中の特定物質を測定するため液状流体試料中の特定物質を酵素反応させることにより中間的または最終的に発生されたデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を用いる場合、例えば、デヒドロゲナーゼがグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼであり、対応する基質がグルコース−６−リン酸である場合を例示できる。その場合、例えば、特定物質として尿素（なお、尿素は慣習的に尿素窒素としても測定できる）を測定することができる。この場合、例えば、第一の酵素反応として、試料中の尿素に、試薬由来のＡＴＰ、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオンとウレアアミドリアーゼとを作用させてＡＤＰを発生させ、次いで、第二の酵素反応として、そのＡＤＰに、試薬由来のヘキソキナーゼを作用させてグルコース−６-リン酸を発生させ、次いで、生成するグルコース−６-リン酸（対応する基質）に、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（デヒドロゲナーゼ）とチオＮＡＤ（Ｐ）とＮＡＤ（Ｐ）とを作用させデヒドロゲナーゼ酵素反応をさせることにより、生成するチオＮＡＤ（Ｐ）Ｈの量に依存した吸光度の上昇から、生成するグルコース−６-リン酸（対応する基質）を測定することができ、それに基づいて結果的に、試料中の特定物質を測定することができる。このとき、ヘキソキナーゼとしては、ＡＤＰ依存性ヘキソキナーゼが好ましい。
この例を反応式で示すと以下のようになる。
Examples of combinations of dehydrogenase and substrate used in such a method include lactate dehydrogenase and lactic acid, glutamate dehydrogenase and glutamate, alcohol dehydrogenase and alcohol, glycerol-3-phosphate dehydrogenase and glycerol-3-phosphate, glucose- Examples thereof include 6-phosphate dehydrogenase and glucose-6-phosphate. In this case, in order to measure either one of the combinations, the other one can be used as a reagent for causing a dehydrogenase enzyme reaction together with a coenzyme. In the present invention, a measurement object that exists in a sample at a high concentration is suitable.
When using a dehydrogenase or corresponding substrate generated intermediately or finally by enzymatic reaction of a specific substance in a liquid fluid sample as a dehydrogenase or corresponding substrate, for example, to measure a specific substance in the liquid fluid sample, for example An example where the dehydrogenase is glucose-6-phosphate dehydrogenase and the corresponding substrate is glucose-6-phosphate can be exemplified. In this case, for example, urea can be measured as a specific substance (note that urea can also be conventionally measured as urea nitrogen). In this case, for example, as a first enzyme reaction, ADP, magnesium ion, potassium ion, hydrogen carbonate ion and urea amide lyase are reacted with urea in the sample to generate ADP, and then the second As an enzymatic reaction of the above, the reagent-derived hexokinase is allowed to act on the ADP to generate glucose-6-phosphate, and then the resulting glucose-6-phosphate (corresponding substrate) is converted to glucose-6-phosphate. By reacting dehydrogenase (dehydrogenase), thio-NAD (P) and NAD (P) to cause a dehydrogenase enzyme reaction, glucose-6 produced from the increase in absorbance depending on the amount of thio-NAD (P) H produced. -Phosphate (corresponding substrate) can be measured, and as a result, specific substances in the sample are measured It is possible. In this case, ADP-dependent hexokinase is preferable as the hexokinase.
This example is shown in the reaction formula as follows.
本発明において、測定対象としてデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するときには、例えば、第一試薬として、デヒドロゲナーゼと対応する基質のうち測定対象以外の成分を必須成分とし、それ以外に、必要により緩衝剤、界面活性剤等の他の成分を含ませたものを用いることができる。このような第一試薬は、前記検査器具における反応室を構成する、第１の平面およびこれに対向する第２の平面のいずれかの面に付着させて用いるのが好ましい。第二試薬として、チオＮＡＤ（Ｐ）とＮＡＤ（Ｐ）を必須成分とし、それ以外に、緩衝剤、界面活性剤等の他の成分を含ませたものを用いることができる。このような第二試薬は、前記検査器具における反応室を構成する、第１の平面およびこれに対向する第２の平面のうち、第一試薬を付着させた面以外の面に付着させて用いるのが好ましい。
この場合、具体的な測定対象として、グルコース−６−リン酸を測定するときは、例えば、第一試薬として、デヒドロゲナーゼとしてグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを必須成分とし、第二試薬としてチオＮＡＤ（Ｐ）とＮＡＤ（Ｐ）を必須成分とし、その他として、第一試薬及び第二試薬には、緩衝剤、界面活性剤等の他の成分を含ませることができる。このような第一試薬と第二試薬とを用い、測定対象として、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するときは、例えば、次のように行うことができる。液状流体試料を、前記検査器具における、試料を供給するための供給部に導入し、液状流体試料を、移送するための前記流路を通して前記反応室へ導き、液状流体試料中に、反応室を構成する第１の平面およびこれに対向する第２の平面のいずれかにそれぞれ付着した第一試薬と第二試薬とを溶解させて、０．５〜１５分酵素反応を行い、酵素反応後に、反応室に透過光を照射して、得られる反応液の吸光度を４０５ｎｍで測定する。あらかじめ作成した検量線との測定値との比較により、試料中の測定対象の濃度を測定できる。
In the present invention, when measuring a dehydrogenase or a corresponding substrate as a measurement target, for example, as a first reagent, a component other than the measurement target among the substrate corresponding to the dehydrogenase is an essential component, and in addition to that, if necessary, a buffer, Those containing other components such as a surfactant can be used. Such a first reagent is preferably used by adhering to either one of the first plane and the second plane opposite to the reaction chamber in the inspection instrument. As the second reagent, those containing thio NAD (P) and NAD (P) as essential components and other components such as a buffer and a surfactant can be used. Such a second reagent is used by adhering to a surface other than the surface to which the first reagent is adhered, of the first plane and the second plane opposite to the first plane constituting the reaction chamber in the inspection instrument. Is preferred.
In this case, when measuring glucose-6-phosphate as a specific measurement object, for example, as a first reagent, glucose-6-phosphate dehydrogenase is an essential component as a dehydrogenase, and thio-NAD ( P) and NAD (P) are essential components, and other components such as a buffering agent and a surfactant can be included in the first reagent and the second reagent. When such a 1st reagent and a 2nd reagent are used and a dehydrogenase or a corresponding substrate is measured as a measuring object, it can carry out as follows, for example. A liquid fluid sample is introduced into a supply section for supplying the sample in the inspection instrument, and the liquid fluid sample is guided to the reaction chamber through the flow path for transporting, and the reaction chamber is placed in the liquid fluid sample. The first reagent and the second reagent adhering to each of the first plane and the second plane opposite to the first plane are dissolved, and the enzyme reaction is performed for 0.5 to 15 minutes. After the enzyme reaction, The reaction chamber is irradiated with transmitted light, and the absorbance of the resulting reaction solution is measured at 405 nm. The concentration of the measurement target in the sample can be measured by comparing the measured value with a calibration curve prepared in advance.
本発明において、測定対象として特定物質を測定するときには、例えば、第一試薬には、必須成分として特定物質から酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質に誘導するための成分、及びそのデヒドロゲナーゼと対応する基質のうち誘導されたもの以外の成分を含ませ、それ以外に、必要により緩衝剤、界面活性剤等の他の成分を含ませることができる。このような第一試薬は、前記検査器具における反応室を構成する、第１の平面およびこれに対向する第２の平面のいずれかの面に付着させて用いるのが好ましい。第二試薬は、チオＮＡＤ（Ｐ）とＮＡＤ（Ｐ）を必須成分とし、それ以外に、緩衝剤、界面活性剤等の他の成分を含ませることができる。このような第二試薬は、前記検査器具における反応室を構成する、第１の平面およびこれに対向する第２の平面のうち、第一試薬を付着させた面以外の面に付着させて用いるのが好ましい。
この場合、具体的な測定対象の特定物質として尿素を測定するときは、例えば、第一試薬として、尿素（すなわち特定物質）から酵素反応によりグルコース−６−リン酸（すなわち対応する基質）に誘導する成分として、尿素からＡＤＰを生成するための第一酵素反応誘導成分（すなわち、ウレアアミドリアーゼ、ＡＴＰ、Ｍｇ２＋、Ｋ+、ＨＣＯ3 −）、ＡＤＰからグルコース−６−リン酸（すなわち対応する基質）を生成するための第二酵素反応誘導成分（すなわち、グルコース、ヘキソキナーゼ）、試薬成分のデヒドロゲナーゼとしてグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを含んでいるものを用いることができる。第二試薬は、チオＮＡＤ（Ｐ）とＮＡＤ（Ｐ）の両方を必須成分とする。それ以外に、第一試薬および第二試薬には、緩衝剤、界面活性剤等の他の成分を含ませたものを用いることができる。
このような第一試薬と第二試薬とを用い、測定対象として、特定物質を測定するときは、例えば、次のように行うことができる。特定物質を含む液状流体試料を、前記検査器具における、試料を供給するための供給部に導入し、液状流体試料を、移送するための前記流路を通して前記反応室へ導き、液状流体試料中に、反応室を構成する第１の平面およびこれに対向する第２の平面のいずれかにそれぞれ付着した第一試薬と第二試薬とを溶解させて、０．５〜１５分酵素反応を行い、酵素反応後に、反応室に透過光を照射して、得られる反応液の吸光度を４０５ｎｍで測定する。あらかじめ作成した検量線との測定値との比較により、試料中の特定物質の濃度を測定できる。
In the present invention, when measuring a specific substance as a measurement target, for example, the first reagent includes, as essential components, a component for deriving dehydrogenase or a corresponding substrate from the specific substance by an enzymatic reaction, and a substrate corresponding to the dehydrogenase. Among these, components other than those derived may be included, and other components such as buffering agents and surfactants may be included as necessary. Such a first reagent is preferably used by adhering to either one of the first plane and the second plane opposite to the reaction chamber in the inspection instrument. The second reagent contains thio-NAD (P) and NAD (P) as essential components, and in addition, other components such as a buffer and a surfactant can be included. Such a second reagent is used by adhering to a surface other than the surface to which the first reagent is adhered, of the first plane and the second plane opposite to the first plane constituting the reaction chamber in the inspection instrument. Is preferred.
In this case, when measuring urea as a specific specific substance to be measured, for example, as a first reagent, it is induced from urea (that is, a specific substance) to glucose-6-phosphate (that is, a corresponding substrate) by an enzymatic reaction. As a component to be used, a first enzyme reaction-inducing component for producing ADP from urea (that is, urea amide lyase, ATP, Mg 2+ , K + , HCO 3 − ), ADP to glucose-6-phosphate (that is, a corresponding one) A second enzyme reaction-inducing component (i.e., glucose, hexokinase) for producing a substrate), and a reagent component containing glucose-6-phosphate dehydrogenase as a dehydrogenase can be used. The second reagent contains both thio-NAD (P) and NAD (P) as essential components. In addition, the first reagent and the second reagent may include those containing other components such as a buffer and a surfactant.
When such a first reagent and a second reagent are used and a specific substance is measured as a measurement target, for example, it can be performed as follows. A liquid fluid sample containing a specific substance is introduced into a supply unit for supplying the sample in the inspection instrument, and the liquid fluid sample is guided to the reaction chamber through the flow path for transporting, and is introduced into the liquid fluid sample. The first reagent and the second reagent adhering to each of the first plane constituting the reaction chamber and the second plane facing the first chamber are dissolved, and the enzyme reaction is performed for 0.5 to 15 minutes, After the enzyme reaction, the reaction chamber is irradiated with transmitted light, and the absorbance of the resulting reaction solution is measured at 405 nm. The concentration of a specific substance in a sample can be measured by comparison with a measurement value prepared in advance with a calibration curve.
以下に、図面に基づいて、本発明の測定方法およびそれに用いる検査器具について、更に詳細に説明する。
本発明にかかる検査器具の好ましい一実施形態として検査器具１００を図面に基づいて説明する。図１に検査器具１００の縦断面図を、図２に血液検査器具１００の分解斜視図を示す。検査器具１００は、図２に示すように、上下方向に積層された４つの第１〜第４プレート１〜４を備えている。最上層側の第１プレート１には、円形の検体供給口１１が形成されている。検体供給口１１の上部周囲には堰１２が設けられている。この堰１２には、有底円筒形状の栓体５が着脱可能に設けられている。
Below, based on drawing, the measuring method of this invention and the test | inspection instrument used therewith are demonstrated in detail.
As a preferred embodiment of an inspection instrument according to the present invention, an inspection instrument 100 will be described with reference to the drawings. FIG. 1 is a longitudinal sectional view of the test instrument 100, and FIG. 2 is an exploded perspective view of the blood test instrument 100. As shown in FIG. As shown in FIG. 2, the inspection instrument 100 includes four first to fourth plates 1 to 4 stacked in the vertical direction. A circular specimen supply port 11 is formed in the first plate 1 on the uppermost layer side. A weir 12 is provided around the upper portion of the sample supply port 11. The dam 12 is provided with a bottomed cylindrical plug 5 that is detachable.
第１プレート１の下方に配置する第２プレート２には、供給口１１との対向部位に円形状の凹入部２０が設けられている。凹入部２０の内部には円形状の複数のリブ２１が同芯状および放射状に形成されている（図１参照）。リブ２１は、血球を分離除去する非対称孔径膜からなる血球分離膜６を支持する。 The second plate 2 disposed below the first plate 1 is provided with a circular recessed portion 20 at a portion facing the supply port 11. A plurality of circular ribs 21 are formed concentrically and radially inside the recessed portion 20 (see FIG. 1). The rib 21 supports the blood cell separation membrane 6 made of an asymmetric pore membrane that separates and removes blood cells.
第２プレートには、リブ２１の中心部に上下方向に延びる貫通孔８１が形成されている（図１参照）。第３プレート３は、所定距離離れた位置に２つの円形の貫通部７１、８２を有している。貫通部７１、８２間は、直線状の貫通溝８３で連結されている（図１参照）。貫通部８２は、第２プレート２と重ね合わせた状態で、貫通孔８１とほぼ同心の位置に設けられる。貫通孔８１、貫通部８２及び溝８３により後述するように、液状流体試料Ａを反応室７へ導く流路８（液状流体Ａの移送用流路）が形成される。 In the second plate, a through hole 81 extending in the vertical direction is formed at the center of the rib 21 (see FIG. 1). The third plate 3 has two circular through portions 71 and 82 at positions separated by a predetermined distance. Between the penetration parts 71 and 82, it connects with the linear penetration groove | channel 83 (refer FIG. 1). The through portion 82 is provided at a position substantially concentric with the through hole 81 in a state of being superimposed on the second plate 2. As will be described later, a flow path 8 (flow path for transferring the liquid fluid A) that leads the liquid fluid sample A to the reaction chamber 7 is formed by the through hole 81, the through portion 82, and the groove 83.
また、第２プレート２のうち、第３プレート３と接する面には、貫通部７１に対向する位置には、貫通孔が形成された両面テープ２ｂが貼り付けられている。これにより、第２プレート側には有底状の有底部７２が形成される。また、第４プレート４のうち、第３プレート３と接する面には、貫通部７１に対向する位置には、貫通孔が形成された両面テープ４ｂが貼り付けられている。これにより、第４プレート側には有底状の有底部７３が形成される。この有底部７２，７３，および貫通部７１によって、液状流体試料Ａの反応室７が構成される。 In addition, a double-sided tape 2 b in which a through hole is formed is attached to a surface of the second plate 2 that is in contact with the third plate 3 at a position facing the through portion 71. Thereby, a bottomed bottomed portion 72 is formed on the second plate side. In addition, a double-sided tape 4 b in which a through hole is formed is attached to a surface of the fourth plate 4 in contact with the third plate 3 at a position facing the through portion 71. Thereby, a bottomed bottomed portion 73 is formed on the fourth plate side. The bottomed portions 72 and 73 and the penetration portion 71 constitute a reaction chamber 7 for the liquid fluid sample A.
測定室７について、図３を用いて説明する。反応室７の第１底面１７１および、第１底面１７１に対向する第２底面１７２には異なる試薬、すなわち、前記した第一試薬および第二試薬がそれぞれ所定量塗布されている。これにより、有底部７２，７３は所定量の試薬で満たされる。試薬は塗布後に乾燥させればよい。 The measurement chamber 7 will be described with reference to FIG. Different amounts of different reagents, that is, the first reagent and the second reagent described above, are respectively applied to the first bottom surface 171 and the second bottom surface 172 facing the first bottom surface 171 of the reaction chamber 7. Thereby, the bottomed portions 72 and 73 are filled with a predetermined amount of reagent. The reagent may be dried after application.
第１プレート１と第２プレート２は、接着剤ａを介して、第２プレート２〜第４プレート４は、両面テープ２ｂ、４ｂにて、積層状態にて一体化される。また、血球分離膜６は、接着剤ａにより、前記第１プレート１および第２プレート２と固定される。 The first plate 1 and the second plate 2 are integrated in a laminated state by the double-sided tapes 2b and 4b, with the second plate 4 to the fourth plate 4 being interposed through the adhesive a. The blood cell separation membrane 6 is fixed to the first plate 1 and the second plate 2 with an adhesive a.
実際の測定方法について簡単に説明する。図１に示すように、検体供給口１１から液状流体試料Ａを供給する。そして、栓体５を液状流体試料供給口１１に被せ、指で加圧する（図示せず）。これにより、反応室７や流路８内の空気が、第３プレートから外部に排出されて、液状流体試料Ａが反応室７内に送り込まれる。反応室７の第１底面１７１および第２底面１７２には、それぞれ異なる試薬が塗布されており、反応室７の側面１７３の孔１７５から反応室７の空間に、液状流体試料Ａが搬送されると、液状流体試料Ａと２種類の試薬との反応が開始する。一つの空間内で２種類の試薬とまとめて混合されるので、均一に混合される。 An actual measurement method will be briefly described. As shown in FIG. 1, the liquid fluid sample A is supplied from the specimen supply port 11. Then, the stopper 5 is put on the liquid fluid sample supply port 11 and pressurized with a finger (not shown). Thereby, the air in the reaction chamber 7 and the flow path 8 is discharged from the third plate to the outside, and the liquid fluid sample A is sent into the reaction chamber 7. Different reagents are respectively applied to the first bottom surface 171 and the second bottom surface 172 of the reaction chamber 7, and the liquid fluid sample A is transferred from the hole 175 of the side surface 173 of the reaction chamber 7 to the space of the reaction chamber 7. Then, the reaction between the liquid fluid sample A and the two types of reagents starts. Since two types of reagents are mixed together in one space, they are mixed uniformly.
測定室７での液状流体試料Ａの測定は、透過光を用いた光学測定が採用できる。透過光を用いる光学測定は、前記第２〜第４プレート２〜４の全体を光透過性のある樹脂で形成し、前記反応室７で試薬と液状流体試料Ａにより反応を行わせて、第４プレート４の下方から第２プレート２に向かってたとえば、波長４０５ｎｍの透過光Ｂを照射し、前記反応室７での透過光Ｂの吸収により測定すればよい。 The measurement of the liquid fluid sample A in the measurement chamber 7 can employ optical measurement using transmitted light. In the optical measurement using transmitted light, the whole of the second to fourth plates 2 to 4 are formed of a light-transmitting resin, and the reaction is performed with the reagent and the liquid fluid sample A in the reaction chamber 7. For example, the measurement may be performed by irradiating the second plate 2 with the transmitted light B having a wavelength of 405 nm from below the four plates 4 and absorbing the transmitted light B in the reaction chamber 7.
以下、本発明を実施例を用いて更に詳細に説明するが、本発明はこれらの例によって限定されるものではない。
実施例１から４
ドライケミストリー法による尿素窒素の測定
試料中の特定物質としての尿素窒素を測定するために、第一の酵素反応として、試料中の尿素窒素に、試薬由来のＡＴＰ、マグネシウムイオン、カリウムイオン、炭酸水素イオンとウレアアミドリアーゼとを作用させてＡＤＰを発生させ、次いで、第二の酵素反応として、そのＡＤＰに、試薬由来のヘキソキナーゼを作用させてグルコース−６-リン酸を発生させ、次いで、生成するグルコース−６-リン酸（対応する基質）に、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（デヒドロゲナーゼ）とチオＮＡＤとＮＡＤとを作用させて、生成するチオＮＡＤＨの量に依存した吸光度の上昇から、生成するグルコース−６-リン酸（対応する基質）を測定することにより、試料中の特定物質としての尿素窒素を測定した。また、チオＮＡＤを単独で用いて同様の測定も行った。
EXAMPLES Hereinafter, although this invention is demonstrated further in detail using an Example, this invention is not limited by these examples.
Examples 1 to 4
Measurement of urea nitrogen by dry chemistry method In order to measure urea nitrogen as a specific substance in a sample, as a first enzyme reaction, urea nitrogen in the sample is converted to reagent-derived ATP, magnesium ion, potassium ion, hydrogen carbonate. An ion and urea amide lyase are allowed to act to generate ADP, and then, as a second enzyme reaction, reagent-derived hexokinase is allowed to act on the ADP to generate glucose-6-phosphate, which is then generated. Glucose-6-phosphate (corresponding substrate) is made to react with glucose-6-phosphate dehydrogenase (dehydrogenase), thioNAD and NAD, and is generated from an increase in absorbance depending on the amount of thioNADH produced. By measuring glucose-6-phosphate (corresponding substrate), urea nitrogen as a specific substance in the sample It was measured. Moreover, the same measurement was also performed using thio NAD alone.
１．方法
ウレアアミドリアーゼ、ヘキソキナーゼ、およびグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼを用いた尿素窒素測定系において、補酵素としてチオＮＡＤとＮＡＤを混合した測定系（実施例１、２および３）、およびチオＮＡＤを単独として用いた測定系（実施例４）を実施した。試料、および試薬は以下の通りである。また、チオＮＡＤとＮＡＤの使用量は表１に示す。
試料：
尿素窒素として４０ｍｇ／ｄＬとなる様に尿素溶液を調製し、各濃度に生理食塩水で適宜希釈した。
1. Method In a urea nitrogen measurement system using urea amidolyase, hexokinase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase, a measurement system (Examples 1, 2 and 3) in which thio NAD and NAD are mixed as a coenzyme, and thio NAD The measurement system (Example 4) used alone was carried out. Samples and reagents are as follows. The amounts of thio NAD and NAD used are shown in Table 1.
Sample :
A urea solution was prepared so as to be 40 mg / dL as urea nitrogen, and diluted appropriately with physiological saline to each concentration.
第一試薬：
第一試薬が、以下のような濃度になるように成分を調整した。
１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（２−[４−（２−ヒドロキシエチル）−１−
ピペラジニル]エタンスルフォン酸）
ｐＨ７．５
４００ｍＭ Ｄ−グルコース
２００ｍＭ 酢酸マグネシウム・四水和物
２００ｍＭ 炭酸水素カリウム
１００ｍＭ ＡＴＰ・２Ｎａ（アデノシン三リン酸・二ナトリウム）
１％ 界面活性剤
１％ ソルビトール
４０ＫＵ／ ヘキソキナーゼ
２０ＫＵ／Ｌ ウレアアミドリアーゼ
２０ＫＵ／Ｌ グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ
第二試薬：
第二試薬のＭＥＳ、界面活性剤は以下のような濃度になるように成分調整した。
２０ｍＭ ＭＥＳ ｐＨ６．０
ｘｍＭ チオＮＡＤ
ｙｍＭ ＮＡＤ
１％ 界面活性剤
１％ ソルビトール
First reagent :
The components were adjusted so that the first reagent had the following concentration.
100 mM HEPES (2- [4- (2-hydroxyethyl) -1-
Piperazinyl] ethanesulfonic acid)
pH 7.5
400 mM D-glucose 200 mM magnesium acetate tetrahydrate 200 mM potassium bicarbonate 100 mM ATP · 2Na (adenosine triphosphate · disodium)
1% Surfactant 1% Sorbitol 40KU / Hexokinase 20KU / L Urea amidolyase 20KU / L Glucose-6-phosphate dehydrogenase
Second reagent :
The components of the second reagent MES and surfactant were adjusted so as to have the following concentrations.
20 mM MES pH 6.0
xmM Thio NAD
ymM NAD
1% Surfactant 1% Sorbitol
第二試薬のチオＮＡＤとＮＡＤの添加量は表１に示す。また、実施例４では上記の第二試薬組成からＮＡＤを除きチオＮＡＤ単独で用いた。 The amounts of thio NAD and NAD added as the second reagent are shown in Table 1. In Example 4, thio-NAD alone was used except for NAD from the second reagent composition.
測定方法：
検査器具は、図１から３に示したように、液状流体試料を供給するための供給部、検査器具内に設けられ、液状流体試料を試薬と反応させる反応室、供給部に供給された液状流体試料を反応室までの移送するための流路を持つものを用いた。
上記の通り調製した試薬は、反応室の面を構成する上下のＰＥＴシート（透明面を有する）に、第一試薬は０．３７５μＬ、第二試薬は０．５μＬとなるように各々塗布し乾燥した。乾燥後、第一試薬、および第二試薬が塗布されたシートは、液状流体試料流路を含むシートをはさみ貼り合わせた。液状流体試料は反応セル体積２．５容中に１容となるように導入し、試薬を溶解させた。具体的には、液状流体試料を供給部から導入後、通路を経由して、反応室に送り込み、その液状流体試料で試薬を溶解させ、その混合液を７分間、３７℃で発色反応させた。試薬が塗布された透明部分に対して波長４０５ｎｍで測光し、発色反応後の吸光度を求めた。
Measuring method :
As shown in FIGS. 1 to 3, the inspection instrument is provided in a supply unit for supplying a liquid fluid sample, a reaction chamber for reacting the liquid fluid sample with a reagent, and a liquid supplied to the supply unit. A fluid sample having a flow path for transferring the fluid sample to the reaction chamber was used.
The reagents prepared as described above were applied to the upper and lower PET sheets (having a transparent surface) constituting the surface of the reaction chamber so that the first reagent was 0.375 μL and the second reagent was 0.5 μL, and dried. did. After drying, the sheet coated with the first reagent and the second reagent was bonded with a sheet containing the liquid fluid sample channel sandwiched therebetween. The liquid fluid sample was introduced so as to be 1 volume in 2.5 volumes of the reaction cell, and the reagent was dissolved. Specifically, after the liquid fluid sample is introduced from the supply section, it is sent to the reaction chamber via the passage, the reagent is dissolved in the liquid fluid sample, and the mixture is subjected to a color reaction at 37 ° C. for 7 minutes. . The transparent portion on which the reagent was applied was measured at a wavelength of 405 nm, and the absorbance after the color reaction was determined.
２．結果
得られた結果を表２に示す。
2. Results The results obtained are shown in Table 2.
表２の結果から、チオＮＡＤ単独での試薬組成よりも、チオＮＡＤおよびＮＡＤを混合した組成ではＮＡＤの割合が増加するに従って相関係数が良好となり、良好な直線性が得られることが判った。 From the results of Table 2, it was found that the correlation coefficient became better as the ratio of NAD increased in the composition in which thio-NAD and NAD were mixed than in the reagent composition with thio-NAD alone, and good linearity was obtained. .
本発明によれば、試料中に含まれるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質をドライケミストリーの技術により正確に測定できる。また、本発明によれば、試料中に含まれるデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を可視部の吸光度で測定するにもかかわらず、補酵素として、チオＮＡＤまたはチオＮＡＤＰとＮＡＤまたはＮＡＤＰの両方を用いてドライケミストリーの技術により、測定対象が高濃度領域でも、検量線のブランクを小さくすることができ、測定対象を簡単かつ正確に測定できる。 According to the present invention, dehydrogenase or a corresponding substrate contained in a sample can be accurately measured by a dry chemistry technique. In addition, according to the present invention, although the dehydrogenase or the corresponding substrate contained in the sample is measured by the absorbance in the visible region, it can be dried using both thio-NAD or thio-NADP and NAD or NADP as a coenzyme. With the chemistry technique, the blank of the calibration curve can be made small even when the measurement target is a high concentration region, and the measurement target can be measured easily and accurately.
Claims (13)
用いる検査器具が、少なくとも反応室とその反応室を構成するための隣接する面を有し、その面の少なくとも一部に試薬が付着されており、かつ、試薬が、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するための酵素反応を行うための試薬、あるいは、酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する液状流体試料中の特定物質を測定するための試薬であり、かつ、液状流体試料を反応室に供給し、試薬が付着された面と接触させることにより、付着された試薬を液状流体試料中に溶解させて液状流体試料と混合し、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質と試薬による酵素反応を液状で行い、その液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または特定物質を測定する、測定方法。 A method for measuring a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample, or a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or a corresponding substrate by an enzymatic reaction, the liquid fluid sample and a reagent Is a measurement method using an inspection instrument that reacts with
The test instrument to be used has at least a reaction chamber and an adjacent surface for constituting the reaction chamber, a reagent is attached to at least a part of the surface, and the reagent is a dehydrogenase in a liquid fluid sample or A reagent for performing an enzymatic reaction to measure the corresponding substrate, or a reagent for measuring a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or the corresponding substrate by the enzymatic reaction And supplying the liquid fluid sample to the reaction chamber and bringing it into contact with the surface on which the reagent is attached, so that the attached reagent is dissolved in the liquid fluid sample and mixed with the liquid fluid sample, and dehydrogenase or a corresponding substrate Enzyme reaction is performed in liquid form with the reagent, and dehydrogenase or the corresponding substrate or specific substance in the liquid sample is measured. Method.
液状流体試料を供給するための供給部；検査器具内に設けられ、液状流体試料を試薬と反応させる反応室；および供給部に供給された液状流体試料を反応室までの移送するための流路を備え、
流路および反応室は、通気性があり且つ非通液状性の多孔性膜を介して検査器具外部と接続されており、
反応室は、第１の平面およびこれに対向する第２の平面、第１の平面および第２の平面それぞれに接し、第１の平面と第２の平面との間に空間を形成する第３の面で形成されており、
流路と反応室とは、第３の面に連結孔が形成されることにより、連結されており、
平面の少なくとも一つの面に試薬が付着されており、
供給部に供給された液状流体試料を供給部に設けられた加圧部によって加圧して、反応室内に移送する、検査器具である、請求項１に記載の測定方法。 The inspection instrument used is
A supply unit for supplying the liquid fluid sample; a reaction chamber provided in the test instrument for reacting the liquid fluid sample with the reagent; and a flow path for transferring the liquid fluid sample supplied to the supply unit to the reaction chamber With
The flow path and the reaction chamber are connected to the outside of the inspection instrument through a porous film that is air permeable and impermeable to liquid,
The reaction chamber is in contact with the first plane and the second plane opposite to the first plane, the first plane, and the second plane, and forms a space between the first plane and the second plane. Is formed on the surface,
The flow path and the reaction chamber are connected by forming a connection hole in the third surface,
The reagent is attached to at least one surface of the plane,
The measurement method according to claim 1, wherein the liquid fluid sample supplied to the supply unit is pressurized by a pressurization unit provided in the supply unit, and is transferred into the reaction chamber.
少なくとも反応室とその反応室を構成するための隣接する面を有し、その面の少なくとも一部に試薬が付着されており、かつ、試薬が、液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を測定するための酵素反応を行うための試薬、あるいは、酵素反応によりデヒドロゲナーゼまたは対応する基質を中間的または最終的に発生する試料中の特定物質を測定するための試薬であり、かつ、液状流体試料を反応室に供給し、試薬が付着された面と接触させることにより、付着された試薬を液状流体試料中に溶解させて液状流体試料と混合し、デヒドロゲナーゼまたは対応する基質および試薬による酵素反応を液状で行い、その液状流体試料中のデヒドロゲナーゼまたは対応する基質、または特定物質を測定するための、検査器具。 A test instrument for measuring a dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample, or a specific substance in a liquid fluid sample that intermediately or ultimately generates a dehydrogenase or a corresponding substrate by an enzymatic reaction,
At least a reaction chamber and an adjacent surface for constituting the reaction chamber, a reagent is attached to at least a part of the surface, and the reagent measures dehydrogenase or a corresponding substrate in a liquid fluid sample A reagent for performing an enzymatic reaction for measuring a specific substance in a sample that intermediately or finally generates dehydrogenase or a corresponding substrate by the enzymatic reaction, and a liquid fluid sample By supplying it to the reaction chamber and bringing it into contact with the surface to which the reagent is attached, the attached reagent is dissolved in the liquid fluid sample and mixed with the liquid fluid sample, and the enzyme reaction with dehydrogenase or the corresponding substrate and reagent is liquid. A test instrument for measuring dehydrogenase or corresponding substrate or specific substance in a liquid fluid sample.
流路および反応室は、通気性があり且つ非通液状性の多孔性膜を介して検査器具外部と接続されており、
反応室は、第１の平面およびこれに対向する第２の平面、第１の平面および第２の平面それぞれに接し、第１の平面と第２の平面との間に空間を形成する第３の面で形成されており、
流路と反応室とは、第３の面に連結孔が形成されることにより、連結されており、
平面の少なくとも一つの面に試薬が付着されており、
供給部に供給された液状流体試料を供給部に設けられた加圧部によって加圧して、反応室内に移送する、検査器具である、請求項１２に記載の検査器具。 A supply section for supplying the liquid fluid sample; a reaction chamber provided in the test instrument for reacting the liquid fluid sample with the reagent; and a flow path for transferring the liquid fluid sample supplied to the supply section to the reaction chamber. Prepared,
The flow path and the reaction chamber are connected to the outside of the inspection instrument through a porous film that is air permeable and impermeable to liquid,
The reaction chamber is in contact with the first plane and the second plane opposite to the first plane, the first plane, and the second plane, and forms a space between the first plane and the second plane. Is formed on the surface,
The flow path and the reaction chamber are connected by forming a connection hole in the third surface,
The reagent is attached to at least one surface of the plane,
The inspection instrument according to claim 12, which is an inspection instrument that pressurizes the liquid fluid sample supplied to the supply unit by a pressurization unit provided in the supply unit and transfers the sample to the reaction chamber.
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60141299A (en) * | 1983-12-28 | 1985-07-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Determination of activity of dehydrogenase |
| JPH04335898A (en) * | 1991-05-14 | 1992-11-24 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Highly sensitive determination method of d-glucose6-phosphoric acid and composition for determination |
| JPH10225300A (en) * | 1997-02-14 | 1998-08-25 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Highly sensitive determination of glucose or adp |
| JP2000236874A (en) * | 1998-12-25 | 2000-09-05 | Internatl Reagents Corp | Stabilization of enzyme and stabilized assaying reagent |
| JP2001103996A (en) * | 1997-09-30 | 2001-04-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | Method for determining bicarbonate ion in liquid and dry type analytical element |
| JP2007248101A (en) * | 2006-03-14 | 2007-09-27 | Ttm:Kk | Inspection instrument of liquid fluid and inspection method using it |
| JP2009124981A (en) * | 2007-11-22 | 2009-06-11 | Nitto Boseki Co Ltd | Method for measuring phosphoric acid |
-
2009
- 2009-07-28 JP JP2009175408A patent/JP2011024513A/en active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60141299A (en) * | 1983-12-28 | 1985-07-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Determination of activity of dehydrogenase |
| JPH04335898A (en) * | 1991-05-14 | 1992-11-24 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Highly sensitive determination method of d-glucose6-phosphoric acid and composition for determination |
| JPH10225300A (en) * | 1997-02-14 | 1998-08-25 | Asahi Chem Ind Co Ltd | Highly sensitive determination of glucose or adp |
| JP2001103996A (en) * | 1997-09-30 | 2001-04-17 | Fuji Photo Film Co Ltd | Method for determining bicarbonate ion in liquid and dry type analytical element |
| JP2000236874A (en) * | 1998-12-25 | 2000-09-05 | Internatl Reagents Corp | Stabilization of enzyme and stabilized assaying reagent |
| JP2007248101A (en) * | 2006-03-14 | 2007-09-27 | Ttm:Kk | Inspection instrument of liquid fluid and inspection method using it |
| JP2009124981A (en) * | 2007-11-22 | 2009-06-11 | Nitto Boseki Co Ltd | Method for measuring phosphoric acid |
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