JP2010142235A5 - - Google Patents
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Claims (18)
- 候補化合物をスクリーニングして、内因性ヒトＴＤＡＧ８受容体を含む細胞内のｃＡＭＰを減少させるための薬学的作用因子を同定する方法であって、該方法は：
（ａ）該候補化合物を、リガンド依存性の活性なｈＴＤＡＧ８受容体を含む宿主細胞または宿主細胞の膜と接触させる工程；および
（ｂ）該化合物が該受容体の機能性を阻害する能力を測定する工程
を包含し、ここで、該方法は、該受容体の反作用薬を同定する工程を包含する、方法。 - 前記リガンド依存性の活性なｈＴＤＡＧ８受容体が、配列番号８２のアミノ酸２２５位に対応するアミノ酸位置にイソロイシン以外のアミノ酸を含む非内因性の構成的に活性なｈＴＤＡＧ８受容体である、請求項１に記載の方法。
- 前記イソロイシン以外のアミノ酸がリシンである、請求項２に記載の方法。
- 前記宿主細胞が発現ベクターを含み、該発現ベクターは、Ｇタンパク質共役型受容体をコードするポリヌクレオチドを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が哺乳動物宿主細胞である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記宿主細胞が酵母宿主細胞である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
- 前記スクリーニングがｃＡＭＰを検出することを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
- ｃＡＭＰの検出が抗ｃＡＭＰ抗体を使用するＥＬＩＳＡを含む、請求項７に記載の方法。
- 前記細胞が、レポーター遺伝子に作動可能に連結された複数のｃＡＭＰ応答要素を含むレポーター系を含む、請求項７に記載の方法。
- 前記方法が前記反作用薬を提供することをさらに包含する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
- 前記方法は、前記候補化合物が前記受容体に結合することを確認することをさらに包含する、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
- 前記方法は、前記反作用薬を医薬として処方することをさらに包含する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
- 前記リガンド依存性の活性なｈＴＤＡＧ８受容体が、配列番号８２を含む内因性の構成的に活性なｈＴＤＡＧ８受容体である、請求項１または４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記リガンド依存性の活性なｈＴＤＡＧ８受容体が、配列番号８２を含む内因性の構成的に活性なｈＴＤＡＧ８受容体であり、ここで、配列番号８２のアミノ酸配列は、以下：
（ｉ）配列番号８２のアミノ酸４３位でのアラニンによるプロリンの置換；
（ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸９７位でのアスパラギンによるリシンの置換；および
（ｉｉｉ）配列番号８２のアミノ酸１３０位でのフェニルアラニンによるイソロイシンの置換；
からなる群より選択される１以上の置換を含む、請求項１または４〜１２のいずれか１項に記載の方法。 - 前記リガンド依存性の活性なｈＴＤＡＧ８受容体が、特異的プライマー配列番号７９および配列番号８０を使用してヒトＤＮＡサンプルでＰＣＲを行うことによって入手可能な核酸配列を含むポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列を含む内因性の構成的に活性なｈＴＤＡＧ８受容体である、請求項１または４〜１２のいずれか１項に記載の方法。
- 前記リガンド依存性の活性なｈＴＤＡＧ８受容体が、必要に応じて以下：
（ｉ）配列番号８２のアミノ酸４３位でのアラニンによるプロリンの置換；
（ｉｉ）配列番号８２のアミノ酸９７位でのアスパラギンによるリシンの置換；および
（ｉｉｉ）配列番号８２のアミノ酸１３０位でのフェニルアラニンによるイソロイシンの置換；
からなる群より選択される１以上の置換を含む配列番号８２を含む非内因性の構成的に活性なｈＴＤＡＧ８受容体であり；
ここで、配列番号８２のアミノ酸配列は、配列番号８２のアミノ酸２２５位でのイソロイシン以外のアミノ酸によるイソロイシンの置換を有する、請求項２に記載の方法。 - 前記イロソイシン以外のアミノ酸がリシンである、請求項１６に記載の方法。
- 前記内因性の構成的に活性な受容体が配列番号１３４を含む受容体である、請求項１６〜１７のいずれか１項に記載の方法。
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