JP2010121052A - 餡粕抽出エキスの抗氷核活性剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】餡粕を、熱水によって20〜40分間抽出した抽出エキスの、オリゴペプチドを含む、分子量3500以下の画分を含有する、抗氷核活性剤と、その製造方法。
【選択図】なし
Description
そば粕、ワイン粕、餡粕、カカオハカスを熱水等で抽出し、それぞれ100μlずつ準備した。これらの試料は、一般的な食品加工メーカーや酒造メーカーから入手したものである。これらの試料に濃度1mg/mlのヨウ化銀1mlを添加し、140rpmで20分攪拌した。
ΔT50(℃)=BlankT50−SampleT50
で求められる。各試料は、上記ワイン粕、餡粕、カカオハカスからの抽出エキスにヨウ化銀を添加してものであり、ブランクの試料はヨウ化銀のみからなるものである。
次に、濃度変化に伴う餡粕の抗氷核活性値の変化を確認した。抗氷核活性値の測定は、上記ミツワモデルK−1(山本テクニカル株式会社製)を用い、上述のようなValiの小滴凍結法によって行った。その測定結果を図1のグラフに示す。図1からも明らかなように、乾燥重量濃度の増加に伴って抗氷核活性値が増加することが確認できた。具体的には、乾燥重量濃度0.5mg/mlで抗氷核活性値0.8℃であり、乾燥重量濃度1.0mg/mlで抗氷核活性値1.4℃であり、乾燥重量濃度2.0mg/mlで抗氷核活性値2.0℃であり、乾燥重量濃度4.0mg/mlで抗氷核活性値2.6℃であり、乾燥重量濃度8.0mg/mlで抗氷核活性値3.0℃であった。
次に、餡粕エキスの抽出を行った。具体的には、先ず餡粕1gを準備し、これに蒸留水5mlを添加した後、その蒸留水を煮沸して餡粕エキスを抽出した。このような煮沸による抽出(熱水抽出)は30分間行った。このような煮沸による抽出後、抽出された餡粕エキスを凍結乾燥し、後述の実施例で用いる餡粕抽出試料とした。
次に、上記実施例3で得た餡粕抽出試料を水に溶解して乾燥重量濃度1.0mg/mlとし、その水溶液について透析による分画を行った。具体的には、上記餡粕抽出試料を限外濾過膜(分画分子量3500:Advantec社製)によって、分子量3500以上の画分と分子量3500以下の画分とに分画した。
上記餡粕抽出エキスの分子量3500以下の画分について、分光光度計を用いて紫外線吸収スペクトルを測定した。吸収スペクトルのチャートを図2に示す。図2からも明らかなように、波長200nmの近辺に吸収を示した。この吸収スペクトルの測定の結果から、分子量3500以下の画分に、タンパク質(ペプチド)が含有されていることが推測される。
上記実施例5の結果に基づき、上記餡粕抽出エキスの分子量3500以下の画分について、タンパク質、糖、ポリフェノールの定量分析を行った。定量分析の結果、タンパク質が223.78μg/ml、糖が140.78μg/ml、ポリフェノールが64.93μg/mlで含有されていることがわかった。
上記餡粕抽出エキスの分子量3500以下の画分について、さらにゲル濾過クロマトグラフィーによる分画を行った。担体にはセファデックスLH−20を用い、溶出液には50容量%のメタノールを用いた。また、カラムのサイズは、1.0cm×120cmのものを用い、流速は1.0ml/minとした。ゲル濾過クロマトグラフィーとしては、フラッシュクロマトグラフSYS16020(東京理科器械株式会社製)を用いた。
上記のようにゲル濾過クロマトグラフィーによる分画を行った後の試料について、液体クロマトグラフィーマススペクトル(LC−MS)を行った。LC−MSの質量分析装置としては、アブライド株式会社製のAPI−3000を用いた。また、LC−MSのHPLCとしては、Agilent社製の1100seriesを用いた。HPLCの移動相にはアセトニトリル/水を用い、カラムのサイズは4.6mm×150mmのものを用い、流速は1.0ml/minとした。
上記マススペクトルによる分子量分画を行った360近辺の画分のものについて、ニンヒドリン反応を行ったところ陽性を示した。また、上記360近辺の画分のものについて吸収スペクトルを測定したところ、215nmと285nmに吸収ピークが認められ、カルボン酸の存在が確認でき、上記360近辺の画分のものがペプチドであることが示唆された。さらに、BCA法を行ったところ、ペプチドの存在を確認することができた。BCA法は、上記実施例6と同様に行った。
Claims (6)
- 餡粕の抽出エキスを含有することを特徴とする抗氷核活性剤。
- 餡粕の抽出エキスが、熱水によって抽出されたエキスである請求項1記載の抗氷核活性剤。
- 餡粕の抽出エキスが、分子量3500以下の画分を含む請求項1又は2記載の抗氷核活性剤。
- 餡粕の抽出エキスの分子量3500以下の画分が、オリゴペプチドを含む請求項3記載の抗氷核活性剤。
- 餡粕を熱水によって抽出し、抽出されたエキスを含有させて製造することを特徴とする抗氷核活性剤の製造方法。
- 餡粕の熱水による抽出時間が20〜40分である請求項5記載の抗氷核活性剤の製造方法。
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Title |
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JPN6012024419; RORAT T.: 'Plant dehydrins - tissue location, structure and function' Cell. Mol. Biol. Lett. Vol.11, No.4, 2006, pp.536-556 * |
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