JP2010051173A - 動物細胞培養用の再生培地添加剤とその製造方法 - Google Patents
動物細胞培養用の再生培地添加剤とその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010051173A JP2010051173A JP2008216293A JP2008216293A JP2010051173A JP 2010051173 A JP2010051173 A JP 2010051173A JP 2008216293 A JP2008216293 A JP 2008216293A JP 2008216293 A JP2008216293 A JP 2008216293A JP 2010051173 A JP2010051173 A JP 2010051173A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- culture medium
- waste liquid
- medium
- animal cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】マウスハイブリドーマを培養してモノクローナル抗体を産生した動物細胞培養用の培地からマウス抗体を分離除去して精製廃液を得る。精製廃液を高分子区分と低分子区分とに分離して、低分子区分に含まれる老廃物を除去する。得られた高分子区分に含まれる高分子物質を新たに動物細胞培養用の再生培地添加剤として利用する。再生培地添加剤を添加した動物細胞培養用の培地においても、高い生細胞密度を示し再利用が可能である。また、再生培地添加剤を添加したした方が、かえって抗体の収量を増加させた。
【選択図】 図2
Description
マウスハイブリドーマ2E3−0を市販の抗体生産培地ASF104(味の素株式会社製:商標)で3日間培養して120mlの培養液を回収した。マウスハイブリドーマ2E3−0は、マウスミエローマとトリニトロフェニル(TPN:ハプテン抗原の一種)に免疫されたマウスB細胞との細胞融合によって作成され、トリニトロフェニルと特異的に結合してマウスIgG1抗体を産生する。また、抗体生産培地ASF104は、基本培地とタンパク成分を主とする培地添加剤とからなる2剤タイプである。また培地添加剤にはタンパク成分にトランスフェリン5mg/lとインシュリン5mg/lの他α―CD−リノール酸が含有されたアルブミンフリータイプである。
精製廃液157mlを遠心式限外濾過ユニット(Millipore社製 商標名:Amicon Ultraー15)を用いて4500回転で、高分子区分(分子量5kD以上)の抽出液14mlと低分子区分(分子量5kD未満)の抽出液143mlをそれぞれ分離して回収した。なお、高分子区分の抽出液は、本操作によって培養液の状態と比較して12倍に濃縮されていることになる。
図1は、各生産段階で得られた溶液中のタンパクをSDS−PAGE(SDS−polyaclylamidegel electrophoresis)で分離した結果である。図1(a)は使用前の培地(ASF104)の結果を示し、トランスフェリンとインスリンの存在が確認される。図1(b)は培養後、抗体精製前の溶液の結果を示し、トランスフェリンとインスリンの両方の他、種々の物質が検出された。図1(c)は、高分子区分の抽出液の結果を示し、トランスフェリンの存在は確認できたが、その存在量はバンドの濃度から、使用前の3分の1程度であると推定される。
高分子区分の抽出液は、ASF104で12倍に希釈し再生培地添加剤として以下の試験を行った。
試験結果を図2に示した。添加剤を添加しなかった比較例1では細胞は死滅した。また、再生培地添加剤のみの比較例3では、細胞は生存したものの増殖はしなかった。また、添加剤の量が通常の1/3の比較例4では、培養68時間目における細胞数は比較例2の通常培地と比べて3割程度少なかった。一方、実施例1では、添加剤の量が1/3であるにもかかわらず、比較例2の通常培地と同等の細胞数を示した。以上の試験から、再生培地添加剤の添加により、高価な添加剤の使用量を1/3に大幅に減少できた。
実施例1及び比較例1〜4による試験(68時間培養)から抗体生産を評価した。その結果を表2に示す。モノクロナール抗体量は、実施例では通常培地の比較例2とほぼ同等の細胞増殖を示した。一方、培養によって生産されたモノクロナール抗体量は、比較例2よりも40%多い生産量を示した。なお、抗体比生産速度は次式で算出している。
Claims (5)
- 動物細胞培養用の培地からモノクローナル抗体を分離除去した精製廃液を、高分子区分と低分子区分とに分離して得られた該高分子区分に含まれる高分子物質からなる動物細胞培養用の再生培地添加剤。
- モノクローナル抗体がマウス抗体であることを特徴とする請求項1記載の動物細胞培養用の再生培地添加剤。
- 高分子物質が分子量500D以上の分子量を有する物質であることを特徴とする請求項1,2記載の動物細胞培養用の再生培地添加剤。
- 動物細胞培養用の培地によりモノクローナル抗体を産生し、該培地からモノクローナル抗体を分離除去して得られた精製廃液を、高分子区分と低分子区分とに分離し、得られた該高分子区分に含まれる高分子物質により動物細胞培養用の再生培地添加剤を製造する動物細胞培養用の再生培地添加剤の製造方法。
- 限外濾過法により精製廃液を高分子区分と低分子区分とに分離する請求項4記載の動物細胞培養用の再生培地添加剤の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008216293A JP2010051173A (ja) | 2008-08-26 | 2008-08-26 | 動物細胞培養用の再生培地添加剤とその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008216293A JP2010051173A (ja) | 2008-08-26 | 2008-08-26 | 動物細胞培養用の再生培地添加剤とその製造方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010051173A true JP2010051173A (ja) | 2010-03-11 |
Family
ID=42067768
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008216293A Pending JP2010051173A (ja) | 2008-08-26 | 2008-08-26 | 動物細胞培養用の再生培地添加剤とその製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2010051173A (ja) |
-
2008
- 2008-08-26 JP JP2008216293A patent/JP2010051173A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6013023338; 小川亜希子ら: '動物細胞培養への抗体精製後廃液の利用' 日本生物工学会大会講演要旨集 Vol.59, 20070802, pp.142 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2559308T3 (es) | Procedimiento mejorado para el cultivo de células | |
EP0066284B1 (en) | Culture medium and its use | |
WO2005014799A1 (en) | Conditioned cell culture medium, method to obtain the same and use of it for maintenance, proliferation and differentiation of mammalian cells | |
JP6425308B2 (ja) | 間葉系細胞を利用した巨核球、血小板及び/又はトロンボポエチンの製造方法 | |
JP5749930B2 (ja) | ペプチド含有動物細胞培養用培地 | |
JP2021113205A (ja) | 幹細胞培養および療法のための誘導培地および方法 | |
CN101903512A (zh) | 使用稳定的储存中间体制造生物产物的方法 | |
JP2017532046A (ja) | タンパク質産物の等電性プロファイルをシフトさせる方法およびその使用 | |
JPWO2014208100A6 (ja) | 間葉系細胞を利用した巨核球、血小板及び/又はトロンボポエチンの製造方法 | |
JP2016513478A (ja) | 細胞培養培地及び抗体を産生する方法 | |
JP6752776B2 (ja) | 銅イオン制御製造方法 | |
JP2019115372A (ja) | 細胞を培養する方法 | |
CN115397976A (zh) | 用多价药剂及其组合物扩增γδT细胞群的方法 | |
JP2010051173A (ja) | 動物細胞培養用の再生培地添加剤とその製造方法 | |
US5468635A (en) | In vitro method for stimulating cell growth by culturing cells in a serum-free culture medium comprising human lysozyme | |
ES2812923T3 (es) | Método para preparar una disolución acuosa que contiene medio de cultivo y agente quelante | |
JP2015027265A (ja) | 細胞培養用培地 | |
AU2003252890B2 (en) | A composition for the culture of cells, in particular animal cells or tissues, comprising polyethylene glycol | |
WO2008013809A1 (en) | Cell culture methods | |
CA2001108A1 (fr) | Medicaments contenant une interleukine-2 glycosylee | |
WO2024117199A1 (ja) | 組成物、細胞の生産方法、細胞、細胞の培養方法および組成物の生産方法 | |
JP6660635B2 (ja) | 細胞表面におけるc−MPL受容体の発現が促進された間葉系細胞の製造方法 | |
WO2007049567A1 (ja) | 物質の製造方法 | |
JP2024504397A (ja) | Car t細胞医薬品のための製剤および方法 | |
CN113684179A (zh) | 用于γδT的细胞扩增培养基、组合产品及其培养方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110406 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20110414 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130521 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130722 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130813 |