JP2009538147A5 - - Google Patents
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Description
本発明はまた、以下の項目を提供する。
（項目１）
内毒素レベルの低下したプラスミドＤＮＡの作製方法であって、
ａ）多重欠失株細菌において上記プラスミドＤＮＡを増殖させるステップと、
ｂ）上記多重欠失株細菌を溶解して溶解物を生成するステップと、
ｃ）上記溶解物から上記プラスミドＤＮＡを単離して、単離プラスミドＤＮＡを形成するステップと、
ｄ）上記単離プラスミドＤＮＡを精製するステップと
を含む方法。
（項目２）
上記多重欠失株細菌が大腸菌多重欠失株である、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記大腸菌多重欠失株が機能的ｍｓｂＢ遺伝子を欠如している、項目２に記載の方法。
（項目４）
上記大腸菌株が最小培地中で原栄養性である、項目３に記載の方法。
（項目５）
上記多重欠失株が、リポ多糖の産生に関与する１種または複数種の遺伝子を欠如している、項目１に記載の方法。
（項目６）
上記大腸菌多重欠失株が、腸内共通抗原の産生に関与する１種または複数種の遺伝子を欠如している、項目２に記載の方法。
（項目７）
上記プラスミドＤＮＡが、内毒素除去剤でプラスミドＤＮＡを精製する前に、内毒素を２００ＥＵ／ｍｇＤＮＡ未満含有する、項目１に記載の方法。
（項目８）
上記プラスミドＤＮＡが、内毒素除去剤で上記プラスミドＤＮＡを精製する前に、内毒素を５０ＥＵ／ｍｇＤＮＡ未満含有する、項目１に記載の方法。
（項目９）
上記プラスミドＤＮＡが、内毒素除去剤でプラスミドＤＮＡを精製する前に、内毒素を０．１ＥＵ／ｍｇＤＮＡ未満含有する、項目１に記載の方法。
（項目１０）
リポ多糖の産生に関連した１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌多重欠失株。
（項目１１）
腸内共通抗原の産生に関与する１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌多重欠失株。
（項目１２）
機能的ｍｓｂＢ遺伝子を欠如している大腸菌多重欠失株。
（項目１３）
リポ多糖の産生に必要な１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌。
（項目１４）
腸内共通抗原の産生に必要な１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌。
（項目１５）
項目１に記載の方法によって調製されたプラスミドＤＮＡ。
（項目１６）
上記プラスミドＤＮＡが、上記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも５％低下した内毒素レベルを含有する、項目１５に記載のプラスミドＤＮＡ。
（項目１７）
上記プラスミドＤＮＡが、上記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも５０％低下した内毒素レベルを含有する、項目１５に記載のプラスミドＤＮＡ。
（項目１８）
上記プラスミドＤＮＡが、上記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも９５％低下した内毒素レベルを含有する、項目１５に記載のプラスミドＤＮＡ。
（項目１９）
プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約１００Ｕ／ｍｇ未満である細菌産生プラスミドＤＮＡ。
（項目２０）
プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約５ＥＵ／ｍｇ未満である、項目１９に記載の細菌産生プラスミドＤＮＡ。
（項目２１）
プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約０．２ＥＵ／ｍｇ未満である、項目１９に記載の細菌産生プラスミドＤＮＡ。
本発明のこれらおよび他の実施形態を、本明細書の下記にさらに詳細に説明する。
（項目１）
内毒素レベルの低下したプラスミドＤＮＡの作製方法であって、
ａ）多重欠失株細菌において上記プラスミドＤＮＡを増殖させるステップと、
ｂ）上記多重欠失株細菌を溶解して溶解物を生成するステップと、
ｃ）上記溶解物から上記プラスミドＤＮＡを単離して、単離プラスミドＤＮＡを形成するステップと、
ｄ）上記単離プラスミドＤＮＡを精製するステップと
を含む方法。
（項目２）
上記多重欠失株細菌が大腸菌多重欠失株である、項目１に記載の方法。
（項目３）
上記大腸菌多重欠失株が機能的ｍｓｂＢ遺伝子を欠如している、項目２に記載の方法。
（項目４）
上記大腸菌株が最小培地中で原栄養性である、項目３に記載の方法。
（項目５）
上記多重欠失株が、リポ多糖の産生に関与する１種または複数種の遺伝子を欠如している、項目１に記載の方法。
（項目６）
上記大腸菌多重欠失株が、腸内共通抗原の産生に関与する１種または複数種の遺伝子を欠如している、項目２に記載の方法。
（項目７）
上記プラスミドＤＮＡが、内毒素除去剤でプラスミドＤＮＡを精製する前に、内毒素を２００ＥＵ／ｍｇＤＮＡ未満含有する、項目１に記載の方法。
（項目８）
上記プラスミドＤＮＡが、内毒素除去剤で上記プラスミドＤＮＡを精製する前に、内毒素を５０ＥＵ／ｍｇＤＮＡ未満含有する、項目１に記載の方法。
（項目９）
上記プラスミドＤＮＡが、内毒素除去剤でプラスミドＤＮＡを精製する前に、内毒素を０．１ＥＵ／ｍｇＤＮＡ未満含有する、項目１に記載の方法。
（項目１０）
リポ多糖の産生に関連した１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌多重欠失株。
（項目１１）
腸内共通抗原の産生に関与する１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌多重欠失株。
（項目１２）
機能的ｍｓｂＢ遺伝子を欠如している大腸菌多重欠失株。
（項目１３）
リポ多糖の産生に必要な１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌。
（項目１４）
腸内共通抗原の産生に必要な１種または複数種の遺伝子を欠如している大腸菌。
（項目１５）
項目１に記載の方法によって調製されたプラスミドＤＮＡ。
（項目１６）
上記プラスミドＤＮＡが、上記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも５％低下した内毒素レベルを含有する、項目１５に記載のプラスミドＤＮＡ。
（項目１７）
上記プラスミドＤＮＡが、上記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも５０％低下した内毒素レベルを含有する、項目１５に記載のプラスミドＤＮＡ。
（項目１８）
上記プラスミドＤＮＡが、上記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも９５％低下した内毒素レベルを含有する、項目１５に記載のプラスミドＤＮＡ。
（項目１９）
プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約１００Ｕ／ｍｇ未満である細菌産生プラスミドＤＮＡ。
（項目２０）
プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約５ＥＵ／ｍｇ未満である、項目１９に記載の細菌産生プラスミドＤＮＡ。
（項目２１）
プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約０．２ＥＵ／ｍｇ未満である、項目１９に記載の細菌産生プラスミドＤＮＡ。
本発明のこれらおよび他の実施形態を、本明細書の下記にさらに詳細に説明する。
Claims (11)
- （ａ）リポ多糖の産生に関与する１種または複数種の遺伝子；および
（ｂ）腸内共通抗原の産生に関与する１種または複数種の遺伝子
が欠失されている、大腸菌多重欠失株。 - 機能的ｍｓｂＢ遺伝子が欠失されている、請求項１に記載の大腸菌多重欠失株。
- （ａ）リポ多糖の産生に関連した１種または複数種の遺伝子；および
（ｂ）腸内共通抗原の産生に関与する１種または複数種の遺伝子
が欠失されている大腸菌。 - 機能的ｍｓｂＢ遺伝子を欠如している、請求項３に記載の大腸菌多重欠失株。
- 内毒素レベルの低下したプラスミドＤＮＡの作製方法であって、
ａ）請求項１、２、３または４のいずれか１項に記載の多重欠失株細菌において前記プラスミドＤＮＡを増殖させるステップと、
ｂ）前記多重欠失株細菌を溶解して溶解物を生成するステップと、
ｃ）前記溶解物から前記プラスミドＤＮＡを単離して、単離プラスミドＤＮＡを形成するステップと、
ｄ）前記単離プラスミドＤＮＡを精製するステップと
を含む方法。 - 前記多重欠失株細菌が請求項１または２に記載のものである、請求項５に記載の方法。
- 前記大腸菌株が最小培地中で原栄養性である、請求項５に記載の方法。
- 内毒素除去剤での前記プラスミドＤＮＡの精製前に、前記プラスミドＤＮＡはＤＮＡ１ｍｇ当たり２００ＥＵ未満の内毒素を含み、好ましくは内毒素除去剤での前記プラスミドＤＮＡの精製前にＤＮＡ１ｍｇ当たり５０ＥＵ未満の内毒素を含み、より好ましくはＤＮＡ１ｍｇ当たり０．１ＥＵ未満の内毒素を含む、請求項５に記載の方法。
- 請求項５に記載の方法によって調製されたプラスミドＤＮＡ。
- 前記プラスミドＤＮＡが、前記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも５％低下した内毒素レベルを有し、好ましくは、前記多重欠失株細菌と同種の非多重欠失株細菌で増殖させた、その他の点では類似しているプラスミドＤＮＡと比較して、少なくとも５０％低下した内毒素レベルを有し、より好ましくは、少なくとも９５％低下した内毒素レベルを有する、請求項９に記載のプラスミドＤＮＡ。
- プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約１００Ｕ／ｍｇ未満である細菌産生プラスミドＤＮＡであって、好ましくは、前記プラスミドＤＮＡと任意の内毒素除去剤との任意の接触の前に、内毒素濃度が約５ＥＵ／ｍｇ未満であり、より好ましくは内毒素濃度が約０．２ＥＵ／ｍｇ未満である、細菌産生プラスミドＤＮＡ。
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