JP2009516196A - アッセイにおける非特異的結合の低減 - Google Patents
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Abstract
Description
医薬及び臨床化学の分野において、生理学的反応性種、例えば細胞、タンパク質、酵素、補因子、核酸、基質、抗原、抗体などの多くの研究及び決定が、特異的結合対メンバー又は標識などを含む抱合体を使用して行われる。特異的結合対メンバーの結合を含む種々のアッセイ技術が知られている。これらのアッセイ技術は、一般的にはアッセイの検出部分で使用される標識も含む。
本発明の一実施態様は、サンプル中の検体の決定のための結合アッセイにおける非特異的結合を低減するための方法であって、結合アッセイを行うための試薬のうちの1つが多糖類を含む固体支持体を含む方法である。この方法は、結合アッセイを行うためのアッ
セイ媒体に、多糖類に連結されたタンパク質を含む可溶性化合物を含有させることを含む。
のタンパク質-多糖類抱合体である。
-CH2(CH2)mCR’-NR-タンパク質
を有し、式中、mは0〜約5の整数であり、R及びR’は水素、低級アルキル、及びアリールからなる群より独立して選択されるか、又はR及びR’は一緒になって二重結合を形成する。
上述のように、一局面において、サンプル中の検体の決定のための結合アッセイにおける非特異的結合を低減するための方法が提供され、この方法において結合アッセイを行うための試薬のうちの1つが多糖類を含む固体支持体を含む。この方法は、結合アッセイを行うためのアッセイ媒体に、多糖類に連結されたタンパク質を含む可溶性化合物を含有させることを含む。
典型的な可溶性化合物の特定の実施態様が、限定ではなく説明として次に考察される。
-CH2(CH2)mCHR’-NR-タンパク質
[式中、R及びR’は、水素、低級アルキル、アリールなどからなる群より独立して選択されるか、又はR及びR’は、一緒になってCHとNとの間に二重結合(すなわち、-CH2(CH2)mCH=N-)を形成し得、そしてここでmは0〜約5、約1〜約5、約1〜約4、約1〜約3、約1〜約2の整数であり、そしてここで窒素はタンパク質のアミノ酸からの窒素である]の連結基である。
-CH2(CH2)mCH2-NR-CH2(CH2)pCH2-
[式中、m及びpは独立して0〜約5、約1〜約5、約1〜約4、約1〜約3、約1〜約2の整数であり、そしてRは、水素、低級アルキル、アリールなどからなる群より選択される]の連結基である。いくつかの実施態様において、連結基Lは、末端アルデヒド基を含む多糖類上の連結基とタンパク質分子の窒素基、例えば、タンパク質分子のアミノ酸残基の窒素基の反応により形成される。従って、上記の連結基の-NR-CH2(CH2)pCH2-部分は、タンパク質のアミノ酸残基、例えばリジン由来であり得る(この場合連結基は-NR-CH2(CH2)2CH2-CH(COOH)NH-を含み、多糖類抱合体は、多糖類-CH2(CH2)3CH2-NR-CH2(CH2)2CH2-CH(COOH)NH-タンパク質などである。いくつかの実施態様において、タンパク質分子は、アルブミン及びガンマ-グロブリンからなる群より選択される。
-CH2(CH2)mCH2-NR-CHR’(CH2)pCO-
[式中、m及びpは独立して、0〜約5、約1〜約5、約1〜約4、約1〜約3、約1〜約2の整数であり、そしてR及びR’は、水素、低級アルキル、アリールなどからなる群より独立して選択される]の連結基である。いくつかの実施態様において、連結基Lは、末端アルデヒド基を含む多糖類上の連結基とタンパク質分子の窒素基、例えばタンパク質分子のアミノ酸残基の窒素基の反応により形成される。従って、上記の連結基の-NR-CHR’(CH2)pCO-部分は、タンパク質のアミノ酸残基、例えばタンパク質のN-末端アミノ酸などに由来し得る。いくつかの実施態様において、タンパク質分子は、アルブミン及びガンマ-グロブリンからなる群より選択される。
1つのアプローチでは、多糖類を適切なアルキル化剤、例えば、エピクロロヒドリン又はジビニルスルホンと反応させて、エポキシド又はビニルスルホンアミン反応性官能基を導入する。
上述のように、上で考察した可溶性タンパク質-多糖類化合物又は抱合体は、検体についての結合アッセイにおいて利用することができる。このアッセイ方法は、通常、検体を含有することが疑われるサンプルを含み、これはアッセイを行うための試薬とアッセイ媒体中で混合される。このような試薬は、多糖類を含む支持体又は固相を含み、そしてさらにsbpメンバーを含み得る。他のアッセイ試薬は、固体支持体上のsbpメンバーが検体、検体類似物、上記の試薬のうちの1つが結合している他の支持体、sbpメンバーの結合パートナーなどではない場合に、検体の結合パートナーを含み得る。試薬の1つ又はそれ以上は、試薬の少なくとも1つが標識され得るシグナル生成系の一部であり得る。試薬は、サンプル中の検体の存在又は量に関して標識からシグナルが得られるように選択される。アッセイは、アッセイ化合物又は生成物のいずれかの分離なしか(均一系)、分離して(不均一系)行うことができる。固体支持体が利用されるので、アッセイは通常不均一系であるが、このような試薬を使用する均一系形式が公知である。
上述の材料及び方法の特定の実施態様の例の説明にさらに進む前に、上で使用される多数の用語を定義する。
低級アルキル - 1〜5個の炭素原子を含有するアルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、イソブチル、ペンチル、イソペンチルなどを含む。
高級アルキル - 6個より多い炭素原子を含有するアルキル、通常6〜20個の炭素原子、例えば、ヘキシル、ヘプチル、オクチルなどを含む。
アリール - 1個の原子の除去により芳香族炭化水素から誘導され、かつ1つ又はそれ以上の芳香族環、通常1〜4つの芳香族環を含有するる有機ラジカル、例えば、フェニル(ベンゼンより)、ナフチル(ナフタレンより)など、例えば、フェニル、ナフチル、フェナントリル。
アルコキシ - 酸素原子により分子の残りの部分に結合したアルキルラジカル、例えば、メトキシ、エトキシなど。
アリールオキシ - 酸素原子により分子の残りの部分に結合したアリールラジカル、例えば、フェノキシ、ナフトキシなど、例えば、m-メトキシフェニル。
アラルコキシ - 酸素原子により分子の残りの部分に結合したアラルキルラジカル、例えば、ベンゾキシ、1-ナフチルエトキシなど。
ヒドロキシル基と反応する官能基を有するアルキル化剤 - 通常中性又はイオン化したヒドロキシル基の求核性によりヒドロキシル基と反応性の官能基を有する化合物、例えば、オキシラニルラジカル、脱離基(例えばハライド(ブロミド、クロリド、ヨージド)を含むアルキルラジカル; アリールスルホネート; アルキルスルホネート; アリールサルフェート; アルキルサルフェート; トシレート; アクリル酸誘導体、例えばアクリルアミド; ビニルスルホン;など。
検体 - 検出されるべき化合物又は組成物。検体は特異的結合対(sbp)のメンバーからなり得、そしてリガンド(通常一価(モノエピトープ(monoepitopic))であり、通常ハプテン性である)であり得、そして単一の化合物又は少なくとも1つの共有エピトープ部位又は決定基を共有する複数の化合物である。
〜1,000の分子量である。検体としては、薬物、代謝産物、殺虫剤、汚染物質などが挙げられる。代表的な検体としては、限定ではなく例として、(i) アルカロイド、例えばモルヒネアルカロイド、[これには、モルヒネ、コデイン、ヘロイン、デキストロメトルファン、それらの誘導体及び代謝産物が含まれる]; コカインアルカロイド、[これにはコカイン及びベンジルエクゴニン、それらの誘導体及び代謝産物が含まれる]; エルゴットアルカロイド、[これにはリセルグ酸のジエチルアミドが含まれる]; ステロイドアルカロイド; イミナゾイル(iminazoyl)アルカロイド; キナゾリンアルカロイド; イソキノリンアルカロイド; キノリンアルカロイド、[これにはキニン及びキニジンが含まれる]; ジテルペンアルカロイド、それらの誘導体及び代謝産物; (ii) ステロイド、[これにはエストロゲン、アンドロゲン、アンドレオコルチカル(andreocortical)ステロイド、胆汁酸、強心配糖体及びアグリコン、[これにはジゴキシン及びジゴキシゲニンが含まれる]、サポニン及びサポゲニン、それらの誘導体及び代謝産物が含まれる]; ステロイド模倣物質、例えばジエチルスチルベストロール; (iii) 5〜6の環員を有するラクタム、[これにはバルビツール酸塩、例えば、フェノバルビタール及びセコバルビタール、ジフェニルヒダントイン、プリミドン、エトスクシミド、及びそれらの代謝産物が含まれる]; (iv) 2〜3個の炭素原子のアルキルを有するアミノアルキルベンゼン、[これには、アンフェタミンが含まれる]; カテコールアミン、[これにはエフェドリン、L-ドパ、エピネフリンが含まれる]; ナルセイン; パパベリン; 及び上記のものの代謝産物; (v) ベンゾ複素環[これには、オキサゼパム、クロルプロマジン、テグレトール、それらの誘導体及び代謝産物が含まれる]、アゼピン、ジアゼピン及びフェノチアジンである複素環式環; (vi) プリン、[これにはテオフィリン、カフェイン、それらの代謝産物及び誘導体が含まれる]; (vii) マリファナから誘導される薬物、[これにはカンナビノール及びテトラヒドロカナビノールが含まれる]; (viii) ホルモン、例えばチロキシン、コルチゾール、トリヨードチロニン、テストステロン、エストラジオール、エストロン、プロゲステロン、ポリペプチド(例えば、アンギオテンシン、LHRH)、及び免疫抑制剤(例えばシクロスポリン、FK506、ミコフェノール酸(MPA))など; (ix) ビタミン類、例えばA、B(例えばB12)、C、D、E及びK、葉酸、チアミン; (x) プロスタグランジン、[ヒドロキシル化及び不飽和の程度及び部位が異なる]; (xi) 三環系抗うつ剤、[これにはイミプラミン、デスメチルイミプラミン(dismethylimipramine)、アミトリプチリン、ノルトリプチリン、プロトリプチリン、トリミプラミン、クロミプラミン(chlomipramine)、ドキセピン、及びディスメチルドキセピン(dismethyldoxepin)が含まれる]; (xii) 抗新生物薬、[これにはメトトレキサートが含まれる]; (xiii) 抗生物質、[これにはペニシリン、クロロマイセチン、アクチノマイセチン(actinomycetin)、テトラサイクリン、テラマイシン、代謝産物及び誘導体が含まれる]; (xiv) ヌクレオシド及びヌクレオチド、[これには、ATP、NAD、FMN、アデノシン、グアノシン、チミジン、及びシチジン(それらの適切な糖及びホスフェート置換基を有する)が含まれる]; (xv) メタドン、メプロバメート、セロトニン、メペリジン、リドカイン、プロカインアミド、アセチルプロカインアミド、プロプラノロール、グリセオフルビン、バルプロ酸、ブチロフェノン、抗ヒスタミン剤、クロラムフェニコール、抗コリン薬(例えばアトロピン)、それらの代謝産物及び誘導体を含む種々雑多な個々の薬物; (xvi) スペルミン、ガラクトース、フェニルピルビン酸、及びポルフィリン1型(porphyrin Type 1)を含む、疾患状態に関連する代謝産物; (xvii) アミノグリコシド、例えばゲンタマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、及びアミカシン; 並びに(xviii) 殺虫剤、例えばポリハロゲン化ビフェニル、リン酸エステル、チオホスフェート、カルバメート、ポリハロゲン化スルフェンアミド、それらの代謝産物及び誘導体が挙げられる。
ハプテン - 対応する抗体に特異的に結合し得るが、それ自体は抗体の製造のための免疫原(又は抗原)として作用しない化合物。ハプテンを認識する抗体は、免疫原性(又は抗原性)担体に連結されたハプテンから構成される化合物に対して製造することができる。ハプテンはリガンドのサブセットである。
検体の量の測定 - 定量的、半定量的、及び定性的な方法に加え、検体を測定するための他の全ての方法が、検体の量を測定する方法とみなされる。例えば、検体を含有することが疑われるサンプル中の検体の存在又は不在を単に検出するだけの方法は、本発明の範囲内に包含されるとみなされる。用語「検出(すること)」及び「決定(すること)」、さらに測定することに関する他の一般的な同義語が、本発明の範囲内に意図される。
略号:
EDTA - エチレンジアミン四酢酸
CTNI - トロピーニン C
HAMA - ヒト抗マウス抗体
BSA - ウシ血清アルブミン
MES - 2-モルホリノエタンスルホン酸
PBS - 生理的pH及びイオン強度のリン酸緩衝化生理食塩水
CMO - カルボキシメトキシアミン
CV - 変動係数
HEPES buffer - HEPES緩衝液
kDa - キロダルトン
NSB - 非特異的結合
薬品:
他に示されていなければ、全ての薬品はSigma-Aldrich Company (St. Louis MO)から購入した。HAMA遮断剤はRoche Diagnostics Corporation (Roche Applied Science、Indianapolis IN)及びScantibodies Laboratory、Inc. 9336 Abraham Way Santee、CA 92071 USAから購入した。抱合反応に使用したBSAのグレードは「脂肪酸非含有」BSAとして知られるものである。
地方血液銀行からのサンプルをスクリーニングして、それらがトロポニンアッセイで応答を生じるか否かを決定した。トロポニン試験で陽性の結果を出したドナーサンプルはいずれも偽陽性と見なされた。陽性応答を示した全てのサンプルを少なくとも1つの市販の参照方法で試験することによりこれを確認した。本明細書において報告される結果について、試験結果を、Dade Behring DIMENSION Rxl(登録商標)トロポニン(CTNI)試験を使用して確認した。偽陽性サンプルをさらに、偽陽性の既知の原因についてスクリーニングした。偽陽性結果の主要な根本原因は、マウス抗体に結合するヒト抗体、「HAMA」(ヒト抗マウス抗体)として知られる妨害であった。サンプルがHAMA妨害を有するか否かを決定するために使用されるスクリーニング方法は、既知のHAMA結合剤(ブロック剤としても知られる)(Roche and Scantibodiesから市販されている)を加えることからなる。陽性応答を生じるサンプルがHAMA結合剤をそのサンプルに加えた場合に正常になる場合、そのサンプルはHAMAに起因する偽陽性であると見なされる。いくつかのサンプルはHAMA結合剤の添加によって修正されなかった。これらを以下の実施例に記載される試験において使用した。
「Quantitation of Cardiac Markers by LOCITM Technology」、R. Bauer、et al.、(Clinical Chemistry 2004; 50(6 supplement): A5)に記載されるCTNIについてのアッセイを、候補遮断剤化合物の評価のために使用した。このアッセイを行うための試薬は、一重項酸素と接触した場合に発光する抗体被覆アクセプターラテックス(アクセプタービーズ)、ビオチン化抗体、及びラテックス粒子に溶解される光増感剤色素により吸収される波長の光を照射された場合に一重項酸素を生成するストレプトアビジン被覆ドナーラテックスからなる。ドナーラテックスのストレプトアビジンは、アルデヒド連結基を有するデキストランのスペーサーを通してラテックス粒子に結合された。アクセプタービーズの場合、アミノデキストラン及びデキストランアルデヒドの組み合わせから生じる連結基又はスペーサーを通して抗体を粒子に結合した。両方のラテックス試薬について、タンパク質の連結後に残っている過剰のアルデヒド基をカルボキシメトキシアミンと反応させてアルデヒドをクエンチした。
可溶性タンパク質-多糖類抱合体の合成
パートA: デキストランアルデヒドの合成
100グラム(100 g)の100-200 kDa デキストランを、窒素パージを備えた1L丸底フラスコ中、0.5gのEDTAを含有する400 mLの脱イオン水に撹拌しながらゆうくりと加えた。この混合物に、40gのNaOHを加え、続いて15mLの2-(4-クロロブチル)-1.3-ジオキソランを加えた。この混合物を90°に加熱し、そして撹拌しながらその温度で24時間保持した。この時点で、250mLの水を加え、そして混合物を氷浴を使用して室温まで冷却した。次いでゆっくりと12N HClを撹拌しながら加えることによりpHを6.0-6.5に調整した。次いでこの混合物を、10,000ダルトンの分子量カットオフを有する中空糸ダイアフィルトレーションカートリッジを使用するダイアフィルトレーション(diafiltration)により精製した。合計60 Lの脱イオン水をこの過程で交換した。中間体ジオキソランをダイアフィルトレーション装置から取り出し、そして体積を1200 mLに調整した。
ダイアフィルトレーションシステムから生成物を取り出した後、その濃度を約50 mg/mLに調整し、次いで0.69 mg/mLのリン酸一ナトリウム一水和物及び0.71 mg/mLの無水リン酸二ナトリウムを加えることによりpH 7.0に緩衝化した。固体含量を45.9 mg/mLと決定した。
同じ手順を500 kDa デキストランに使用してデキストランアルデヒドのより高分子量物を製造した。
パートAに記載されるものと同じ全体の合成スキームを、デキストランアルデヒド対タンパク質の比、デキストランアルデヒドの分子量、及びタンパク質の種類が異なる、一連の異なる抱合体に使用した。候補可溶性抱合体の組成を同定するために使用される命名は: xxmwtDexal-タンパク質yymg/100mgのデキストランアルデヒドである。例えば、100-200-dexal-BSA-30は、100部のデキストランアルデヒド対30部のBSAの比でBSAと抱合された100-200 kDaのデキストランから製造されたデキストランアルデヒドを用いて製造される生成物である。
カルボキシメトキシルアミンヘミ塩酸塩の1M溶液1mLを、2.18 mL中100 mgの100-200 kDa デキストランアルデヒドの溶液に加え、そしてこの混合物を37℃で2時間インキュベートした。次いでこれを6000-8000の分子量カットオフの透析バッグに入れ、1Lの脱イオン水に対して透析し、これを3回交換した。交換の間の持続時間は3-4時間であった。最後の4回目の交換は1LのpH 6.0 50 mM MES緩衝液に対して行った。
異なるアミンで改変されたデキストランアルデヒドを製造するための方法は、本質的に同じであり、種々のアミンを種々の濃度で使用する。以下の表1は、使用した量及びアミンを列挙する。
免疫測定法試験
パートA: トロポニンについてのアッセイにおけるインサイチュで形成されたデキストラン及びデキストランアルデヒド/BSA抱合体の比較遮断活性
デキストランアルデヒドは、タンパク質と反応してアルデヒド官能基とタンパク質のリジンアミノ基との間でSchiff塩基を形成し、それにより抱合体を生じる。この反応は、5 mg/mLの500 kDa デキストランアルデヒドをCTNI FLEX(登録商標)容器(1mg/mL 100-200 KDa デキストランを含むpH 7.2 HEPES緩衝液中50 mg/mLのBSAを含有する)のビオチン化抗体試薬に加えることにより達成される。両方のキャリブレータ(Cal 0は0 ng/mlのトロポニンを表し、そしてCal 8.3は8.3 ng/mlトロポニンを表す)及び複合偽陽性サンプル(NSB 1-29と同定される)に対するアッセイの応答に対する添加の影響を以下の表2に示す。
以下の実施例において見られるように、インサイチュの抱合体(これは他の実験ではコントロールとして使用された)を用いた結果は、実施するごとに変動した。これは、それが形成するSchiff塩基が不安定であり、自発的に解離及び再結合するということに起因し得る。可溶性抱合体のインサイチュ形成について、デキストランアルデヒドは、最初のアッセイ試薬の前にサンプルに添加されるか、又は最初に患者サンプルと混合される試薬に加えられるべきである。インサイチュ抱合体が試薬中で形成される場合、試薬は、タンパク質(例えばBSAなど)を少なくとも0.5 mg/mL、少なくとも1 mg/mL、少なくとも1.5 mg/mL、少なくとも2.0 mg/mLなどの濃度で含有するべきである。
一連の誘導体を、本発明の実施態様の可溶性デキストラン-タンパク質抱合体に対するデキストラン及び官能基化デキストランの遮断活性を比較するために試験した。
デキストランアルデヒドの低分子量アミン誘導体の試験を、これらをサンプルに1 mg/mLの濃度で加えることにより行った。デキストランアルデヒド添加剤の場合には、混合物を、サンプルの血清タンパク質と反応するための時間をとるために試験前に30分放置した。比較アッセイ結果を以下の表6に示す:
この場合、試験添加剤を、ビオチン化抗体試薬に5mg/mLの濃度で加えた。試験結果を以下の表7に示す:
Claims (32)
- 検体を含有することが疑われるサンプル中の該検体の存在及び/又は量を決定するための方法であって、
(a) 該サンプル、第一の多糖類に連結したタンパク質を含む可溶性化合物、及び該検体を検出するための試薬を組み合わせて提供する工程(ここで該試薬のうち少なくとも1つが第二の多糖類を含む固体支持体を含む)、
(b) 該試薬の1つ又はそれ以上に対して該検体が結合するための条件下で該組み合わせをインキュベートする工程、並びに
(c) 該試薬の1つ又はそれ以上への該検体の結合の存在及び/又は量を検出し、該結合の存在及び/又は量を該サンプル中の該検体の存在及び/又は量と関連づける工程、
を含む、上記方法。 - 可溶性化合物が中性電荷又は負電荷を有する、請求項1に記載の方法。
- 検体を検出するための試薬の少なくとももう1つが固体支持体を含む、請求項1に記載の方法。
- 試薬の少なくとももう1つが、第二の多糖類を含む固体支持体を含む、請求項3に記載の方法。
- 第一の多糖類及び第二の多糖類が同じである、請求項1に記載の方法。
- 可溶性化合物の親和性結合挙動が、支持体上の第二の多糖類の親和性結合挙動より大きい、請求項1に記載の方法。
- サンプル及び可溶性化合物が、組み合わせを形成する前に一緒に混合される、請求項1に記載の方法。
- 可溶性化合物及び固体支持体が、組み合わせを形成する前に一緒に混合される、請求項1に記載の方法。
- 多糖類がデキストラン又はデキストラン誘導体である、請求項1に記載の方法。
- タンパク質が血清タンパク質である、請求項1に記載の方法。
- 血清タンパク質がアルブミンまたはガンマグロブリンである、請求項10に記載の方法。
- 固体支持体が粒子を含む、請求項1に記載の方法。
- 第二の多糖類が固体支持体に連結され、そして特異的結合対のメンバーが該第二の多糖類に連結される、請求項1に記載の方法。
- サンプル中の検体の決定のための結合アッセイにおける非特異的結合を低減するための方法であって、ここで該結合アッセイを行うための試薬のうちの1つが、第二の多糖類を含む固体支持体を含み、該方法が該結合アッセイを行うためのアッセイ媒体に、第一の多糖類に連結されたタンパク質を含む可溶性化合物を含める工程を含む、上記方法。
- 可溶性化合物が中性電荷又は負電荷を有する、請求項14に記載の方法。
- 可溶性化合物の親和性結合挙動が、支持体上の第二の多糖類の親和性結合挙動よりも大きい、請求項14に記載の方法。
- サンプル及び可溶性化合物が、組み合わせを形成する前に一緒に混合される、請求項14に記載の方法。
- 可溶性化合物及び固体支持体が、組み合わせを形成する前に一緒に混合される、請求項14に記載の方法。
- 第一の多糖類がデキストラン又はデキストラン誘導体である、請求項14に記載の方法。
- タンパク質が血清タンパク質である、請求項14に記載の方法。
- 血清タンパク質がアルブミン又はガンマグロブリンである、請求項20に記載の方法。
- 固体支持体が粒子を含む、請求項14に記載の方法。
- 第二の多糖類が固体支持体に連結され、そして特異的結合対のメンバーが該第二の多糖類に連結される、請求項14に記載の方法。
- 第一の多糖類及び第二の多糖類が同じである、請求項14に記載の方法。
- 第一の多糖類及び第二の多糖類が同じ単糖ポリマーサブユニットを含むが、分子量が異なる、請求項14に記載の方法。
- 第一の多糖類の分子量が、第二の多糖類の分子量より大きい、請求項25に記載の方法。
- タンパク質及び多糖類が、請求項13に記載の固体支持体に連結された第二の多糖類に特異的結合対のメンバーを連結するために使用される連結と、実質的に同じ化学構造を有する連結で互いに連結される、タンパク質及び多糖類の可溶性抱合体を含む組成物。
- 連結がホモロジーにより異なる、請求項25に記載の組成物。
- 繰り返し単糖単位を含み、式:
Lが連結基でありかつAがタンパク質である場合、
L-Aが式:
-CH2(CH2)mCR'-NR-タンパク質
(式中、mは0〜約5の整数であり、R及びR'は、水素、低級アルキル、及びアリールからなる群より独立して選択されるか、又はR及びR'は一緒になって二重結合を形成し得る)を有する]
である、タンパク質−多糖類抱合体。 - Lが連結基である場合、
Lは式:
-CH2(CH2)mCH2-NR-CH2(CH2)pCH2-
[式中、m及びpは独立して0〜約5の整数であり、Rは水素、低級アルキル、及びアリールからなる群より選択される]を有するか、又は
Lは式:
-CH2(CH2)mCH2-NR-CHR'(CH2)pCO-
[式中、m及びpは独立して0〜約5の整数であり、そしてR及びR'は水素、低級アルキル及びアリールからなる群より独立して選択される]を有する、
請求項29に記載のタンパク質−多糖類抱合体。 - タンパク質分子が、アルブミン及びガンマグロブリンからなる群より選択される、請求項29に記載のタンパク質−多糖類抱合体。
- 多糖類がデキストラン又はデキストラン誘導体である、請求項29に記載のタンパク質−多糖類抱合体。
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