JP2009514967A5

JP2009514967A5 -

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Publication number: JP2009514967A5
Application number: JP2008540147A
Authority: JP
Filing date: 2006-11-07
Publication date: 2009-12-24

Description

（本発明の背景）
哺乳動物のＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ遺伝子座（ｃｄｋｎ２ａ）は、２つの連結された腫瘍抑制タンパク質、サイクリン依存性キナーゼ抑制剤ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}及びＡＲＦ、並びにｐ５３の安定性の重要な調節因子をコードする。ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}及びＡＲＦをコードする２つのオープン・リーディング・フレームは、異なるプロモーター、及び共用エクソン２における代替リーディング・フレームに挿入する第一エクソンを有し、それによりこれら２つの細胞遺伝学的に連結された、しかし機能的には関連性のない、癌関連のタンパク質を生成する（Sharpless, Exp. Gerontol. 39, 1751-1759 (2004)）。ＩＮＫ４ａ／ＡＲＦ遺伝子座の欠失は、様々な悪性腫瘍で高い頻度で観察される（Rocco, J.W. et al., Exp. Cell Res. 264, 42-55 (2001)）。若いヒト及び齧歯動物の複数の組織では、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}は、実質的に検出できないが、一方でその発現は、年齢と共に劇的に増加する（Krishnamurthy, J. et al., J. Clin. Invest. 114, 1299-1307 (2004)）（Zindy, F., et al., Oncogene 15, 203-211 (1997)）。ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の高度発現は、多様な刺激（例えば、酸化的ストレス、癌遺伝子の活性化及びテロメアの短縮化）により誘発された複製老化を伴う細胞で観察されている（Campisi, J. Cellular, Trends Cell Biol. 11, S27-31 (2001)）。更に、多くのヒト細胞型は、複製老化を促進する培養状態の間に高いレベルのｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}発現をもたらし、そしてｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の不活性化により多くの培養した細胞型において老化を遅延させる又は無効にする（Campisi, J. Cellular, Trends Cell Biol. 11, S27-31 (2001)）。増加する証拠によって、老化が加齢と共に増大し、そして幹細胞の自己再生を含む幹細胞機能の低下が誘導されることが示唆される（Ogden, D.A. et al., Transplantation 22, 287-293 (1976)）、（Morrison, S.J., Wandycz, et al., Nat. Med. 2, 1011-1016 (1996)）、（Liang, Y., Van Zant, G. et al., Blood (2005)）。

若齢対高齢のｐ１６^{ＩＮＫ４ａ−／−}動物の連続移植能における差異は、著しかった。ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}発現が、恒常状態下の若齢ＨＳＣに見出せなかったので、若齢動物における影響は予期しないものであった。しかし、移植後の若齢マウス由来の骨髄をテストした場合、他のストレス状態下の他により見られるように、低いレベルのｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}発現が見られた（データは示さず）（Chkhotua, A.B. et al. Am. J. Kidney Dis. 41, 1303-1313 (2003)）（Chimenti, C. et al. Circ. Res. 93, 604-613 (2003)）。この場合のＨＳＣにおけるｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}欠損の有害な影響は、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}とＡＲＦの間の公知のプロモーターの競合によるかもしれないが、結果的にｐ１６^{ＩＮＫ４ａ} の欠損によりＡＲＦのわずかな増加をもたらした（Sharpless, et al. Oncogene 22, 5055-5059 (2003)）。ＡＲＦの発現は、ＨＳＣの死を著しく増加させることが示されている（Park, I.K. et al. Nature 423, 302-305 (2003)）。逆に、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}及びＡＲＦの２つの欠如又はＡＲＦ単独では、若齢動物の連続移植において何れの欠損ももたらさないことが示されている（Stepanova, L. et al. Blood (2005)）。現実に、二重に欠損の動物は、自己再生において僅かな増加を有する（Stepanova, L. et al. Blood (2005)）。ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}が存在しない状態での年齢に伴う自己再生が目立って改善されたことは、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の年齢依存性の増加により誘導される分子の事象が軽減することに起因しているという仮説を立てた。

Claims

ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤を含有してなる医薬組成物。
医薬組成物が、幹細胞の自己再生の維持又は促進するためのものである請求項１に記載の医薬組成物。
医薬組成物が、自己再生する幹細胞の量を増加させるためのものである請求項１又は２に記載の医薬組成物。
医薬組成物が、幹細胞の移植を増進するためのものである請求項１から３のいずれかに記載の医薬組成物。
幹細胞が、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}を発現する幹細胞である請求項２から４のいずれかに記載の医薬組成物。
医薬組成物が、血小板減少症、貧血症、リンパ球減少症、リンパ漏、リンパうっ滞、赤血球減少症、赤血球変性疾患、赤芽球減少症、白赤芽球症、赤血球崩壊、サラセミア、骨髄線維症、血小板減少症、播種性血管内凝固症（ＤＩＣ）、免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ＨＩＶ合併ＩＴＰ、骨髄異形成症、血小板性疾患（thrombocytotic disease）、血小板増加症、好中球減少症、骨髄異形成症候群、感染症、免疫不全症、リウマチ性関節炎、ループス、免疫抑制、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、自己免疫性甲状腺炎、強皮症及び炎症性腸疾患よりなる群から選ばれる疾病の治療又は予防用である請求項１から５のいずれかに記載の医薬組成物。
医薬組成物が、骨髄移植時に投与されるものである、請求項１から６のいずれかに記載の医薬組成物。
ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤が、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の発現を減少させるものである、請求項１から７のいずれかに記載の医薬組成物。
ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤が、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}ｍＲＮＡのレベルを不安定化する又は低減することのできる化合物、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}ｍＲＮＡの翻訳を低減することのできる化合物、並びにｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、ＤＮＡ結合／分化抑制因子（Ｉｄ又はＩｄ−１）、潜伏感染膜タンパク質（ＬＭＰ１）、へリックス・ループ・へリックス転写因子ＴＡＬ１／ＳＣＬ、ダイオキシン及びシクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）を高メチル化できる化合物よりなる群から選ばれる化合物である、請求項８に記載の医薬組成物。
ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤が、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の活性を低減するものである、請求項１から７のいずれかに記載の医薬組成物。
ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤が、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}抗体、並びにｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}、テロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、皮膚性ヒトパピローマ・ウイルス１６型（ＨＰＶ１６）Ｅ７タンパク質及びサイクリンＤ１を高メチル化できる化合物よりなる群から選ばれる、請求項１０に記載の医薬組成物。
医薬組成物が、対象から得られた幹細胞を包含する単離された細胞集団に接触させるものである請求項１から１１のいずれかに記載の医薬組成物。
細胞集団が、骨髄細胞又は造血幹細胞を含んでなる、請求項１２に記載の医薬組成物。
細胞集団が、Ｌｉｎ⁻、ｃＫｉｔ⁻及びＳｃａｌ^＋である、請求項１２又は１３に記載の医薬組成物。
幹細胞でｈｅｓ−１及びｇｆｉ−１の発現が増加する、請求項２から１４のいずれかに記載の医薬組成物。
請求項１から１５のいずれかに記載の医薬組成物を、幹細胞にエクスビボで接触させること、それにより幹細胞の自己再生を維持又は促進すること、の段階を含んでなる、
ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}を発現する幹細胞の自己再生を維持又は促進させる方法。
幹細胞が、骨髄由来の幹細胞又は造血幹細胞である、請求項１６に記載の方法。
幹細胞が、間葉、皮膚、神経、腸、肝臓、心臓、前立腺、乳腺、腎臓、膵臓、網膜及び肺の幹細胞よりなる群から選ばれる、請求項１６に記載の方法。
ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}を発現する幹細胞を包含する単離された細胞集団に、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤であると思われる薬剤を接触させること、及び
長期的に再増殖する細胞の総数の増加を検出すること、それにより幹細胞の自己再生を促進するｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤を特定すること、を含んでなる、
当該薬剤が幹細胞の自己再生を促進する、ｐ１６^{ＩＮＫ４ａ}の抑制剤であることをスクリーニングする方法。