JP2009107955A

JP2009107955A - Preventive-therapeutic agent for aneurysm comprising pyrazolone derivative

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Publication number: JP2009107955A
Application number: JP2007280160A
Authority: JP
Inventors: Nobuo Hashimoto; 信夫橋本; Taiji Kataoka; 大治片岡; Tomohiro Aoki; 友浩青木
Original assignee: Kyoto University; Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Current assignee: Kyoto University; Mitsubishi Tanabe Pharma Corp
Priority date: 2007-10-29
Filing date: 2007-10-29
Publication date: 2009-05-21

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new medicine for prevention and/or therapy of aneurysm. <P>SOLUTION: The medicine for prevention and/or therapy of aneurysm comprises, as an effective ingredient, a pyrazolone derivative, such as 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one, or a physiologically acceptable salt thereof, or a hydrate or a solvate thereof. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、ピラゾロン誘導体若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む動脈瘤の予防及び／又は治療のための医薬に関する。 The present invention relates to a medicament for preventing and / or treating an aneurysm comprising a pyrazolone derivative or a physiologically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof as an active ingredient.

脳動脈瘤は、一般人口の１〜５％に認められる一般的な疾患である。しかし、もし未破裂の状態で脳動脈瘤が発見されても、破裂の予防のためには開頭手術によるクリッピング術や血管内手術によるコイル塞栓術といった侵襲を伴う治療法しか存在しない。この大きな原因として、この脳動脈瘤に対して、その発生増大に関する詳細な機構が明らかでないことがあげられる。この点に関して、本発明者らは、先に開発した実験的誘発脳動脈瘤モデル動物を用いて脳動脈瘤発生増大機構の解析を行ってきた。その結果、脳動脈壁ではマクロファージを中心とする慢性炎症反応が生じており、これが脳動脈瘤形成に関与していることを示してきた（非特許文献１）。 Cerebral aneurysms are a common disease found in 1-5% of the general population. However, even if a cerebral aneurysm is found in an unruptured state, there are only treatments involving invasion such as clipping by craniotomy or coil embolization by endovascular surgery for prevention of rupture. A major cause of this is that the detailed mechanism relating to the increased occurrence of this cerebral aneurysm is not clear. In this regard, the present inventors have analyzed the mechanism for increasing the occurrence of cerebral aneurysm using the experimentally induced cerebral aneurysm model animal developed previously. As a result, a chronic inflammatory reaction centering on macrophages has occurred in the cerebral artery wall, and this has been shown to be involved in cerebral aneurysm formation (Non-patent Document 1).

一方、下記式（Ｉ）：
（式中、Ｒ¹は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ²は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ¹及びＲ²は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ³は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）で表されるピラゾロン誘導体については、医薬の用途として、脳機能正常化作用（特許文献１参照）、過酸化脂質生成抑制作用（特許文献２参照）、抗潰瘍作用（特許文献３参照）、血糖上昇抑制作用（特許文献４参照）等が知られている。 On the other hand, the following formula (I):
(In the formula, R ¹ represents a hydrogen atom, aryl, alkyl having 1 to 5 carbon atoms or alkoxycarbonylalkyl having 3 to 6 carbon atoms in total, and R ² represents a hydrogen atom, aryloxy, aryl mercapto, 1 to 1 carbon atoms. 5 represents alkyl or 1 to 3 hydroxyalkyl, or R ¹ and R ² together represent alkylene having 3 to 5 carbon atoms, R ³ represents a hydrogen atom, alkyl having 1 to 5 carbon atoms, carbon Cycloalkyl having 5 to 7 carbon atoms, hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, benzyl, naphthyl or phenyl, or alkoxy having 1 to 5 carbon atoms, hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, alkoxycarbonyl having 2 to 5 carbon atoms in total , Alkyl mercapto having 1 to 3 carbon atoms, alkylamino having 1 to 4 carbon atoms, dialkylamino having 2 to 8 carbon atoms in total, halogen atom, trifluoromethyl, carboxyl A pyrazolone derivative represented by the same or different 1 to 3 substituents selected from the group consisting of sil, cyano, hydroxyl group, nitro, amino, and acetamide. , Brain function normalizing action (see Patent Document 1), lipid peroxide production inhibitory action (see Patent Document 2), anti-ulcer action (see Patent Document 3), blood glucose elevation inhibiting action (see Patent Document 4), etc. ing.

また、上記式（Ｉ）の化合物のうち、３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンを有効成分とする製剤は、２００１年６月以来、脳保護剤（一般名「エダラボン」、商品名「ラジカット」：三菱ウェルファーマ株式会社製造・販売）として上市されている。この「エダラボン」は、活性酸素に対して高い反応性を有することが報告されている（非特許文献２；非特許文献３参照）。このように、エダラボンは活性酸素をはじめとする種々のフリーラジカルを消去することで、細胞障害などを防ぐ働きをするフリーラジカルスカベンジャーである。しかしながら、これまでのところ、エダラボンの動脈瘤に対する治療効果については報告がない。 In addition, among the compounds of the above formula (I), a preparation containing 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one as an active ingredient has been a brain protective agent (generic name “edaravone” since June 2001). The product name “Radicut” is manufactured and sold by Mitsubishi Pharma Corporation. This “edaravone” has been reported to be highly reactive with active oxygen (see Non-Patent Document 2; Non-Patent Document 3). Thus, edaravone is a free radical scavenger that works to prevent cell damage and the like by eliminating various free radicals including active oxygen. However, so far, there is no report on the therapeutic effect of edaravone on aneurysms.

特公平５−３１５２３号公報Japanese Patent Publication No. 5-31523 特公平５−３５１２８号公報Japanese Patent Publication No. 5-35128 特開平３−２１５４２５号公報Japanese Patent Laid-Open No. 3-215425 特開平３−２１５４２６号公報JP-A-3-215426 Tomohiro Aoki et al., Stroke, 38, 162-169, 2007Tomohiro Aoki et al., Stroke, 38, 162-169, 2007 Kawai, H., et al., J. Phamacol. Exp. Ther., 281(2), 921, 1997Kawai, H., et al., J. Phamacol. Exp. Ther., 281 (2), 921, 1997 Wu, TW. et al., Life Sci, 67(19), 2387, 2000Wu, TW. Et al., Life Sci, 67 (19), 2387, 2000

本発明の課題は、動脈瘤の予防及び／又は治療のための新規な医薬を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a novel medicament for preventing and / or treating an aneurysm.

本発明者らは、上記課題を解決することを目的として、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体を用いて、動脈瘤に対する作用について検討した。その結果、上記ピラゾロン誘導体の投与により、動脈瘤の発生又は増大を抑制できることを見出し、本発明を完成するに至った。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors examined an action on an aneurysm using a pyrazolone derivative represented by the formula (I). As a result, it has been found that the administration or administration of the pyrazolone derivative can suppress the occurrence or increase of aneurysm, and the present invention has been completed.

即ち、本発明によれば、下記式（Ｉ）：
（式中、Ｒ¹は水素原子、アリール、炭素数１〜５のアルキル又は総炭素数３〜６のアルコキシカルボニルアルキルを表し、Ｒ²は、水素原子、アリールオキシ、アリールメルカプト、炭素数１〜５のアルキル又は炭素数１〜３のヒドロキシアルキルを表し、あるいは、Ｒ¹及びＲ²は、共同して炭素数３〜５のアルキレンを表し、Ｒ³は水素原子、炭素数１〜５のアルキル、炭素数５〜７のシクロアルキル、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、ベンジル、ナフチル又はフェニル、又は炭素数１〜５のアルコキシ、炭素数１〜３のヒドロキシアルキル、総炭素数２〜５のアルコキシカルボニル、炭素数１〜３のアルキルメルカプト、炭素数１〜４のアルキルアミノ、総炭素数２〜８のジアルキルアミノ、ハロゲン原子、トリフルオロメチル、カルボキシル、シアノ、水酸基、ニトロ、アミノ、及びアセトアミドからなる群から選ばれる同一若しくは異なる１〜３個の置換基で置換されたフェニルを表す。）
で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含有する、動脈瘤の予防及び／又は治療のための医薬が提供される。 That is, according to the present invention, the following formula (I):
(In the formula, R ¹ represents a hydrogen atom, aryl, alkyl having 1 to 5 carbon atoms or alkoxycarbonylalkyl having 3 to 6 carbon atoms in total, and R ² represents a hydrogen atom, aryloxy, aryl mercapto, 1 to 1 carbon atoms. 5 represents alkyl or hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, or R ¹ and R ² together represent alkylene having 3 to 5 carbon atoms, R ³ represents a hydrogen atom, alkyl having 1 to 5 carbon atoms. , Cycloalkyl having 5 to 7 carbon atoms, hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, benzyl, naphthyl or phenyl, alkoxy having 1 to 5 carbon atoms, hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms in total Alkoxycarbonyl, alkyl mercapto having 1 to 3 carbon atoms, alkylamino having 1 to 4 carbon atoms, dialkylamino having 2 to 8 carbon atoms, halogen atom, trifluoromethyl, alkyl This represents phenyl substituted with 1 to 3 identical or different substituents selected from the group consisting of ruboxyl, cyano, hydroxyl, nitro, amino, and acetamide.
The pharmaceutical for the prevention and / or treatment of aneurysm which contains the pyrazolone derivative represented by these, its physiologically acceptable salt, or those hydrates or solvates as an active ingredient is provided.

好ましくは、本発明の医薬は、動脈瘤の発生又は増大を抑制するために使用される。
好ましくは、本発明の医薬は、動脈瘤の増大を抑制するために使用される。
好ましくは、動脈瘤は脳動脈瘤である。
好ましくは、式（Ｉ）で表されるピラゾロン誘導体は、３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オンである。 Preferably, the medicament of the present invention is used to suppress the occurrence or increase of an aneurysm.
Preferably, the medicament of the present invention is used for suppressing aneurysm growth.
Preferably, the aneurysm is a cerebral aneurysm.
Preferably, the pyrazolone derivative represented by formula (I) is 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one.

本発明の別の局面によれば、上記式（Ｉ）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳動物に投与する工程を含む、動脈瘤を予防及び／又は治療する方法が提供される。 According to another aspect of the present invention, a mammal including human including an effective amount of the pyrazolone derivative represented by the above formula (I) or a physiologically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof. A method of preventing and / or treating an aneurysm is provided, comprising the step of administering to an aneurysm.

本発明のさらに別の側面によれば、動脈瘤の予防及び／又は治療のための医薬の製造のための上記式（Ｉ）で表されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物の使用が提供される。 According to still another aspect of the present invention, a pyrazolone derivative represented by the above formula (I) or a physiologically acceptable salt thereof for the manufacture of a medicament for the prevention and / or treatment of aneurysms, or Use of such hydrates or solvates is provided.

本発明による動脈瘤の予防及び／又は治療のための医薬は、動脈瘤の発生又は増大を効果的に抑制することができる。 The medicament for the prevention and / or treatment of an aneurysm according to the present invention can effectively suppress the occurrence or increase of an aneurysm.

本発明による動脈瘤の予防及び／又は治療のための医薬（以下、本発明の医薬とも称する）は、式（Ｉ）で示されるピラゾロン誘導体若しくはその生理的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を有効成分として含む。 The medicament for the prevention and / or treatment of aneurysms according to the present invention (hereinafter also referred to as the medicament of the present invention) is a pyrazolone derivative represented by formula (I) or a physiologically acceptable salt thereof, or water thereof. A solvate or a solvate is included as an active ingredient.

式（Ｉ）で示される化合物は、互変異性により、以下の式（Ｉ'）又は（Ｉ”）で示される構造をもとりうる。本明細書の式（Ｉ）には、便宜上、互変異性体のうちの１つを示したが、当業者には下記の互変異性体の存在は自明である。本発明の医薬の有効成分としては、下記の式（Ｉ'）又は（Ｉ”）で表される化合物若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物を用いてもよい。 The compound represented by the formula (I) may have a structure represented by the following formula (I ′) or (I ″) due to tautomerism. The formula (I) in this specification includes tautomers for convenience. Although one of the sex forms is shown, it is obvious to those skilled in the art that the following tautomers exist. The active ingredient of the medicament of the present invention includes the following formula (I ′) or (I ″): Or a physiologically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof.

式（Ｉ）において、Ｒ¹の定義におけるアリール基は単環性又は多環性アリール基のいずれでもよい。例えば、フェニル基、ナフチル基などのほか、メチル基、ブチル基などのアルキル基、メトキシ基、ブトキシ基などのアルコキシ基、塩素原子などのハロゲン原子、又は水酸基等の置換基で置換されたフェニル基等が挙げられる。アリール部分を有する他の置換基（アリールオキシ基など）におけるアリール部分についても同様である。 In the formula (I), the aryl group in the definition of R ¹ may be either a monocyclic or polycyclic aryl group. For example, in addition to a phenyl group, a naphthyl group, etc., an alkyl group such as a methyl group or a butyl group, an alkoxy group such as a methoxy group or a butoxy group, a halogen atom such as a chlorine atom, or a phenyl group substituted with a substituent such as a hydroxyl group Etc. The same applies to the aryl moiety in other substituents having an aryl moiety (such as an aryloxy group).

Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³の定義における炭素数1〜5のアルキル基は直鎖状、分枝鎖状のいずれでもよい。例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec−ブチル基、tert−ブチル基、ペンチル基等が挙げられる。アルキル部分を有する他の置換基（アルコキシカルボニルアルキル基）におけるアルキル部分についても同様である。 The alkyl group having 1 to 5 carbon atoms in the definitions of R ¹ , R ² and R ³ may be either linear or branched. Examples thereof include a methyl group, an ethyl group, a propyl group, an isopropyl group, a butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, a tert-butyl group, and a pentyl group. The same applies to the alkyl moiety in other substituents (alkoxycarbonylalkyl group) having an alkyl moiety.

Ｒ¹の定義における総炭素数3〜6のアルコキシカルボニルアルキル基としては、メトキシカルボニルメチル基、エトキシカルボニルメチル基、プロポキシカルボニルメチル基、メトキシカルボニルエチル基、メトキシカルボニルプロピル基等が挙げられる。 Examples of the alkoxycarbonylalkyl group having 3 to 6 carbon atoms in total in the definition of R ¹ include a methoxycarbonylmethyl group, an ethoxycarbonylmethyl group, a propoxycarbonylmethyl group, a methoxycarbonylethyl group, and a methoxycarbonylpropyl group.

Ｒ¹及びＲ²の定義における炭素数３〜５のアルキレン基としては、トリメチレン基、テトラメチレン基、ペンタメチレン基、メチルトリメチレン基、エチルトリメチレン基、ジメチルトリメチレン基、メチルテトラメチレン基等が挙げられる。 Examples of the alkylene group having 3 to 5 carbon atoms in the definition of R ¹ and R ² include trimethylene group, tetramethylene group, pentamethylene group, methyltrimethylene group, ethyltrimethylene group, dimethyltrimethylene group, and methyltetramethylene group. Is mentioned.

Ｒ²の定義におけるアリールオキシ基としては、ｐ−メチルフェノキシ基、ｐ−メトキシフェノキシ基、ｐ−クロロフェノキシ基、ｐ−ヒドロキシフェノキシ基等が挙げられ、アリールメルカプト基としては、フェニルメルカプト基、ｐ−メチルフェニルメルカプト基、ｐ−メトキシフェニルメルカプト基、ｐ−クロロフェニルメルカプト基、ｐ−ヒドロキシフェニルメルカプト基等が挙げられる。 Examples of the aryloxy group in the definition of R ² include a p-methylphenoxy group, a p-methoxyphenoxy group, a p-chlorophenoxy group, a p-hydroxyphenoxy group, and the like, and examples of the aryl mercapto group include a phenyl mercapto group, p -Methylphenyl mercapto group, p-methoxyphenyl mercapto group, p-chlorophenyl mercapto group, p-hydroxyphenyl mercapto group and the like.

Ｒ²及びＲ³の定義における炭素数1〜3のヒドロキシアルキル基としては、ヒドロキシメチル基、2−ヒドロキシエチル基、3−ヒドロキシプロピル基等が挙げられる。Ｒ³の定義における炭素数5〜7のシクロアルキル基としては、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基等が挙げられる。 Examples of the hydroxyalkyl group having 1 to 3 carbon atoms in the definition of R ² and R ³ include a hydroxymethyl group, a 2-hydroxyethyl group, and a 3-hydroxypropyl group. Examples of the cycloalkyl group having 5 to 7 carbon atoms in the definition of R ³ include a cyclopentyl group, a cyclohexyl group, and a cycloheptyl group.

Ｒ³の定義において、フェニル基の置換基における炭素数1〜5のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ペンチルオキシ基等が挙げられ、総炭素数2〜5のアルコキシカルボニル基としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、ブトキシカルボニル基等が挙げられ、炭素数1〜3のアルキルメルカプト基としては、メチルメルカプト基、エチルメルカプト基、プロピルメルカプト基等が挙げられ、炭素数1〜4のアルキルアミノ基としては、メチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、ブチルアミノ基等が挙げられ、総炭素数2〜8のジアルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジプロピルアミノ基、ジブチルアミノ基等が挙げられる。 In the definition of R ³ , examples of the alkoxy group having 1 to 5 carbon atoms in the substituent of the phenyl group include a methoxy group, an ethoxy group, a propoxy group, an isopropoxy group, a butoxy group, a pentyloxy group, and the like. Examples of the 2-5 alkoxycarbonyl group include a methoxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, a propoxycarbonyl group, a butoxycarbonyl group and the like, and examples of the alkyl mercapto group having 1 to 3 carbon atoms include a methyl mercapto group, an ethyl mercapto group, Propyl mercapto group and the like, and examples of the alkylamino group having 1 to 4 carbon atoms include a methylamino group, an ethylamino group, a propylamino group, a butylamino group, and the like, and a dialkylamino group having a total carbon number of 2 to 8 As dimethylamino group, diethylamino group, dipropylamino group, dibutylamino Etc. The.

本発明の医薬の有効成分として好適に用いられる化合物（Ｉ）として、例えば、以下に示す化合物が挙げられる。
３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（２−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（３−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（３，４−ジメチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−エチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−プロピルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン； Examples of the compound (I) suitably used as the active ingredient of the medicament of the present invention include the compounds shown below.
3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (2-methylphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (3-methylphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (4-methylphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (3,4-dimethylphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
1- (4-ethylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (4-propylphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
1- (4-butylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3-trifluoromethylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;

１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ジメトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−エトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−プロポキシフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ジクロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン； 1- (4-trifluoromethylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (2-methoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3-methoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-methoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3,4-dimethoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-ethoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (4-propoxyphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
1- (4-butoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (2-chlorophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3-chlorophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-chlorophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3,4-dichlorophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;

１−（４−ブロモフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−フルオロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−クロロ−４−メチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−メチルメルカプトフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メチルメルカプトフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
４−（３−メチル−５−オキソ−２−ピラゾリン−１−イル）安息香酸；
１−（４−エトキシカルボニルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ニトロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−エチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−フェニル−３−プロピル−２−ピラゾリン−５−オン； 1- (4-bromophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-fluorophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3-chloro-4-methylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3-methylmercaptophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-methylmercaptophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
4- (3-methyl-5-oxo-2-pyrazolin-1-yl) benzoic acid;
1- (4-ethoxycarbonylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-nitrophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
3-ethyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
1-phenyl-3-propyl-2-pyrazolin-5-one;

１，３−ジフェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−フェニル−１−（ｐ−トリル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メトキシフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−クロロフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３，４−ジメチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
４−イソブチル−３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
４−（２−ヒドロキシエチル）−３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−４−フェノキシ−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−４−フェニルメルカプト−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン； 1,3-diphenyl-2-pyrazolin-5-one;
3-phenyl-1- (p-tolyl) -2-pyrazolin-5-one;
1- (4-methoxyphenyl) -3-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-chlorophenyl) -3-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
3,4-dimethyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
4-isobutyl-3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
4- (2-hydroxyethyl) -3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-4-phenoxy-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-4-phenylmercapto-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;

３，３'，４，５，６，７−ヘキサヒドロ−２−フェニル−２H−インダゾール−３−オン；
３−（エトキシカルボニルメチル）−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１，３−ジメチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−エチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−ブチル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−ヒドロキエチル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−シクロヘキシル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−ベンジル−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン； 3,3 ′, 4,5,6,7-hexahydro-2-phenyl-2H-indazol-3-one;
3- (ethoxycarbonylmethyl) -1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
1-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1,3-dimethyl-2-pyrazolin-5-one;
1-ethyl-3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1-butyl-3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (2-hydroxyethyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1-cyclohexyl-3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1-benzyl-3-methyl-2-pyrazolin-5-one;

１−（α−ナフチル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−メチル−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
３−メチル−１−（４−メチルフェニル）−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブトキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−クロロフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（２−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン； 1- (α-naphthyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1-methyl-3-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
3-methyl-1- (4-methylphenyl) -2-pyrazolin-5-one;
1- (4-butylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-methoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-butoxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-chlorophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-hydroxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3,4-dihydroxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (2-hydroxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3-hydroxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;

１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（３，４−ヒドロキシフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ヒドロキシフェニル）−３−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ヒドロキシメチルフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−アミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−メチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−エチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ブチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（４−ジメチルアミノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；
１−（アセトアミドフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン；及び
１−（４−シアノフェニル）−３−メチル−２−ピラゾリン−５−オン 1- (4-hydroxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (3,4-hydroxyphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-hydroxyphenyl) -3-phenyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-hydroxymethylphenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-aminophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-methylaminophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-ethylaminophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-butylaminophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (4-dimethylaminophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one;
1- (acetamidophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one; and 1- (4-cyanophenyl) -3-methyl-2-pyrazolin-5-one

本発明の医薬の有効成分としては、式（Ｉ）で表される遊離形態の化合物のほか、生理学的に許容される塩を用いてもよい。生理学的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、臭化水素塩、リン酸等の鉱酸との塩；メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、クエン酸、リンゴ酸、フマル酸等の有機酸との塩；ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩；マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩；アンモニア、エタノールアミン、２−アミノ−２−メチル−１−プロパノール等のアミンとの塩が挙げられる。
この他、生理的に許容されるものであれば塩の種類は特に限定されることはない。 As an active ingredient of the medicament of the present invention, a physiologically acceptable salt may be used in addition to the free form compound represented by the formula (I). Physiologically acceptable salts include salts with mineral acids such as hydrochloric acid, sulfuric acid, hydrobromide, phosphoric acid; methanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, acetic acid, oxalic acid, citric acid, malic acid, Salts with organic acids such as fumaric acid; salts with alkali metals such as sodium and potassium; salts with alkaline earth metals such as magnesium; ammonia, ethanolamine, 2-amino-2-methyl-1-propanol, etc. Examples include salts with amines.
In addition, the type of salt is not particularly limited as long as it is physiologically acceptable.

式（Ｉ）で表される化合物はいずれも公知の化合物であり、特公平５−３１５２３号公報などに記載された方法により当業者が容易に合成できる。 All of the compounds represented by the formula (I) are known compounds and can be easily synthesized by those skilled in the art by the method described in JP-B-5-31523.

本発明の医薬の投与量は特に限定されないが、式（Ｉ）で示される化合物を有効成分として用いる場合、通常は、式（Ｉ）で示される化合物の重量として一般に経口投与の場合には一日あたり0.1〜100mg/kg体重であり、非経口投与の場合には一日あたり0.1〜100mg/kg体重である。上記投与量は１日１回又は2〜3回に分けて投与するのが好ましく、年齢、病態、症状により適宜増減してもよい。 The dosage of the pharmaceutical agent of the present invention is not particularly limited, but when the compound represented by the formula (I) is used as an active ingredient, the weight of the compound represented by the formula (I) is generally one in the case of oral administration. 0.1-100 mg / kg body weight per day, and 0.1-100 mg / kg body weight per day for parenteral administration. The above dose is preferably administered once a day or divided into 2 to 3 times a day, and may be increased or decreased as appropriate according to age, disease state, and symptoms.

本発明の医薬としては、上記式（Ｉ）で表される化合物若しくはその生理学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくは溶媒和物をそのまま投与してもよいが、一般的には、有効成分である上記の物質と薬理学的及び製剤学的に許容される添加物を含む医薬組成物を調製して投与することが好ましい。 As the medicament of the present invention, the compound represented by the above formula (I) or a physiologically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof may be administered as it is. It is preferable to prepare and administer a pharmaceutical composition containing the above-mentioned substance as an active ingredient and a pharmacologically and pharmaceutically acceptable additive.

薬理学的及び製剤学的に許容しうる添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴射剤、及び粘着剤等を用いることができる。 Examples of pharmacologically and pharmaceutically acceptable additives include excipients, disintegrating agents or disintegrating aids, binders, lubricants, coating agents, dyes, diluents, bases, solubilizers or Solubilizers, tonicity agents, pH adjusters, stabilizers, propellants, adhesives, and the like can be used.

経口投与に適する医薬組成物には、添加物として、例えば、ブドウ糖、乳糖、Ｄ−マンニトール、デンプン、又は結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、デンプン、又はカルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤又は崩壊補助剤；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、又はゼラチン等の結合剤；ステアリン酸マグネシウム又はタルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロース、白糖、ポリエチレングリコール又は酸化チタン等のコーティング剤；ワセリン、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、ゼラチン、カオリン、グリセリン、精製水、又はハードファット等の基剤を用いることができる。 For pharmaceutical compositions suitable for oral administration, as additives, for example, excipients such as glucose, lactose, D-mannitol, starch or crystalline cellulose; disintegrants or disintegrations such as carboxymethylcellulose, starch or carboxymethylcellulose calcium Adjuvants; binders such as hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, or gelatin; lubricants such as magnesium stearate or talc; coating agents such as hydroxypropylmethylcellulose, sucrose, polyethylene glycol or titanium oxide; petrolatum, Bases such as liquid paraffin, polyethylene glycol, gelatin, kaolin, glycerin, purified water, or hard fat can be used.

注射あるいは点滴用に適する医薬組成物には、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型注射剤を構成しうる溶解剤又は溶解補助剤；ブドウ糖、塩化ナトリウム、Ｄ−マンニトール、グリセリン等の等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基又は有機塩基等のｐＨ調節剤等の添加物を用いることができる。 Pharmaceutical compositions suitable for injection or infusion include aqueous solutions such as distilled water for injection, physiological saline, propylene glycol, or solubilizers or solubilizers that can constitute soluble injections for use; glucose, sodium chloride, D -Additives such as isotonic agents such as mannitol and glycerin; pH adjusters such as inorganic acids, organic acids, inorganic bases and organic bases can be used.

本発明の医薬の形態は特に限定されず、当業者に利用可能な種々の形態をとることができる。経口投与に適する医薬として、例えば、固体の製剤用添加物を用いて錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤などを調製することができ、液状の製剤用添加物を用いてシロップ剤などを調製することができる。また、非経口投与に適する医薬として、注射剤、点滴剤、坐剤、経皮吸収剤などを調製することができる。なお、上記の式（Ｉ）の化合物を有効成分とする脳保護剤（点滴剤）が、すでに臨床において使用されているので（一般名「エダラボン」、商品名「ラジカット」：三菱ウェルファーマ株式会社製造・販売）、本発明の医薬において上記市販製剤をそのまま用いることができる。 The form of the medicament of the present invention is not particularly limited, and can take various forms that can be used by those skilled in the art. As pharmaceuticals suitable for oral administration, for example, tablets, capsules, powders, fine granules, granules, etc. can be prepared using solid pharmaceutical additives, and syrups using liquid pharmaceutical additives Etc. can be prepared. In addition, injections, infusions, suppositories, transdermal absorption agents, and the like can be prepared as medicaments suitable for parenteral administration. In addition, since a brain protective agent (instillation) containing the compound of the above formula (I) as an active ingredient has already been used in clinical practice (generic name “Edaravone”, trade name “Radicut”: manufactured by Mitsubishi Pharma Corporation) -Sales) The above-mentioned commercial preparation can be used as it is in the medicament of the present invention.

本発明の医薬の投与経路は特に限定されず、経口的又は非経口的に投与することができる。非経口投与の投与経路も特に限定されず、静脈内、動脈内に注射投与することができる。 The administration route of the medicament of the present invention is not particularly limited, and can be administered orally or parenterally. The administration route for parenteral administration is not particularly limited, and can be administered intravenously or intraarterially.

本発明の医薬の投与の対象としては、生体に発生する動脈瘤の全てが適用対象となる。動脈瘤は、発生部位、原因、または形状などにより分類されている。例えば、発生部位による分類としては、胸部大動脈瘤や腹部大動脈瘤などの大動脈瘤、脳動脈瘤や腎動脈瘤などの内臓動脈瘤、または末梢動脈に発生する末梢動脈瘤等が挙げられる。原因による分類としては、動脈硬化性動脈瘤、炎症性動脈瘤、先天性動脈瘤、外傷性動脈瘤、または感染性動脈瘤等が挙げられる。また、形状による分類としては、嚢状動脈瘤、または紡錘状動脈瘤等が挙げられる。本発明の医薬の適用対象となる動脈瘤は特に限定されないが、上記の中でも、脳動脈瘤に適用することが特に好ましい。 All of the aneurysms that occur in the living body are the targets of administration of the medicament of the present invention. Aneurysms are classified according to the site of occurrence, cause, or shape. For example, the classification according to the generation site includes aortic aneurysms such as thoracic aortic aneurysms and abdominal aortic aneurysms, visceral aneurysms such as cerebral aneurysms and renal aneurysms, or peripheral aneurysms generated in peripheral arteries. The classification by cause includes arteriosclerotic aneurysm, inflammatory aneurysm, congenital aneurysm, traumatic aneurysm, infectious aneurysm, and the like. Examples of classification by shape include saccular aneurysm or spindle-shaped aneurysm. The aneurysm to which the medicament of the present invention is applied is not particularly limited, but among the above, it is particularly preferable to apply to a cerebral aneurysm.

以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明は下記の実施例により限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention further more concretely, this invention is not limited by the following Example.

合成例：３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（以下、エダラボンと称す）の合成
エタノール５０ｍｌ中にアセト酢酸エチル１３．０ｇ及びフェニルヒドラジン１０．８ｇを加え、３時間還流攪拌した。反応液を放冷後、析出した結晶をろ取し、エタノールより再結晶して、表題の化合物１１．３ｇを無色結晶として得た。
収率６７％
融点１２７．５〜１２８．５℃ Synthesis Example: Synthesis of 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one (hereinafter referred to as edaravone) 13.0 g of ethyl acetoacetate and 10.8 g of phenylhydrazine were added to 50 ml of ethanol and stirred at reflux for 3 hours. did. After allowing the reaction solution to cool, the precipitated crystals were collected by filtration and recrystallized from ethanol to give 11.3 g of the title compound as colorless crystals.
Yield 67%
Melting point 127.5-128.5 ° C

試験例：
（１）方法
７週齢の雄ＳＤラットに対して脳動脈瘤誘発手術を行った。ペントバルビタール腹腔内投与による麻酔導入の後、左総頚動脈及び両側腎動脈後枝を１０−０ナイロン糸で閉塞する。覚醒後、８％塩分を含有する高塩分食負荷の元全身的高血圧を誘導し、脳動脈瘤を誘発した。ラットの血圧は、tail-cuff法にて測定した。 Test example:
(1) Method Cerebral aneurysm induction surgery was performed on 7-week-old male SD rats. After induction of anesthesia by intraperitoneal administration of pentobarbital, the left common carotid artery and posterior branch of bilateral renal artery are occluded with 10-0 nylon thread. After waking up, the systemic hypertension was induced with a high salt diet load containing 8% salt, and a cerebral aneurysm was induced. Rat blood pressure was measured by the tail-cuff method.

脳動脈瘤誘発手術直後から、エダラボン投与群では、一日あたり１００ｍｇ／ｋｇの持続混餌投与を行った。脳動脈瘤誘発手術３ヵ月後に、ラットを致死量のネンブタールにて死亡させた後、経心臓的にパラホルムアルデヒドを還流して固定を行った。その後、前大脳動脈・嗅動脈分岐部を摘出して凍結標本とした。薄片後、Elastica van Gieson（ＥＶＧ）染色を行い、光学顕微鏡下で脳動脈瘤形成を評価した（図２）。脳動脈瘤の評価は、脳動脈瘤の大きさ（ドームの最大縦径と最大横径の平均値）（図１のＡ）、内弾性板の変化（変化なしに０点、断裂に１点、消失に２点を与え定量化）（図１のＢ）、中膜の厚さ（図１のＣ）で行った。 Immediately after the cerebral aneurysm induction surgery, in the edaravone administration group, continuous diet administration of 100 mg / kg per day was performed. Three months after cerebral aneurysm induction surgery, the rats were killed with a lethal dose of Nembutal, and then fixed by refluxing paraformaldehyde transcardially. Thereafter, the anterior cerebral artery / olfactory artery bifurcation was removed and used as a frozen specimen. After slicing, Elastica van Gieson (EVG) staining was performed, and cerebral aneurysm formation was evaluated under an optical microscope (FIG. 2). Evaluation of the cerebral aneurysm is based on the size of the cerebral aneurysm (average of the maximum longitudinal diameter and maximum lateral diameter of the dome) (A in FIG. 1), change in the inner elastic plate (0 points without change, 1 point for tearing) , Giving two points for disappearance and quantification) (B in FIG. 1), and the thickness of the media (C in FIG. 1).

いくつかの切片は、免疫染色に供した。免疫染色は以下の通り行った。５％ロバ血清（Jackson Immuno Research）で切片をブロッキングした後、マウスモノクローナル抗ＣＤ６８抗体（HyCult Biotechnology）（１：５０に希釈）と室温で１時間インキュベートした。その後、蛍光標識二次抗体（FITC結合ロバ抗マウスＩｇＧ抗体）（Jackson Immuno Research）と室温で１時間インキュベートした。次いで、スライドをPERMAFLUOR(Immunotec)でカバーし、蛍光顕微鏡システム（BX51N-34-FL-1, オリンパス）で蛍光を測定した。免疫染色では、ＣＤ６８陽性細胞、すなわちマクロファージの脳動脈瘤壁への浸潤も確認した（図２）。 Some sections were subjected to immunostaining. Immunostaining was performed as follows. Sections were blocked with 5% donkey serum (Jackson Immuno Research) and then incubated with mouse monoclonal anti-CD68 antibody (HyCult Biotechnology) (1:50 dilution) for 1 hour at room temperature. Thereafter, the mixture was incubated with a fluorescently labeled secondary antibody (FITC-conjugated donkey anti-mouse IgG antibody) (Jackson Immuno Research) at room temperature for 1 hour. Next, the slide was covered with PERMAFLUOR (Immunotec), and fluorescence was measured with a fluorescence microscope system (BX51N-34-FL-1, Olympus). The immunostaining also confirmed the infiltration of CD68 positive cells, ie, macrophages into the cerebral aneurysm wall (FIG. 2).

エダラボンによる活性酸素除去効果を確認するために、未固定凍結標本によるＤＨＥ（dye hydroethidine）染色と、８−ＯＨｄＧ染色を行った（図３）。８−ＯＨｄＧ染色は、一次抗体としてマウスモノクローナル抗８−ヒドロキシ−２−デオキシグアノシン抗体（日本老化制御研究所）（１：５０に希釈）を用いて、ＣＤ６８に対する免疫染色の場合と同様の方法で行った。 In order to confirm the effect of removing active oxygen by edaravone, DHE (dye hydroethidine) staining and 8-OHdG staining with unfixed frozen specimens were performed (FIG. 3). 8-OHdG staining is performed using a mouse monoclonal anti-8-hydroxy-2-deoxyguanosine antibody (Japan Aging Control Laboratories) (diluted 1:50) as a primary antibody in the same manner as in immunostaining for CD68. went.

また、マクロファージ浸潤に関与する因子について、免疫染色を行った（図４）。免疫染色の方法は、一次抗体として、ラビットポリクローナル抗ＭＣＰ−１抗体（Santa Cruz）（１：５０に希釈）、ラビットポリクローナル抗ＶＣＡＭ−１抗体（Santa Cruz）（１：５０に希釈）、マウスモノクローナル抗ｐ６５抗体（Chemicom）（１：５０に希釈）、ラビットポリクローナル抗ＭＭＰ−２抗体（Santa Cruz）（１：５０に希釈）を使用し、二次抗体として、FITC結合ロバ抗ラビットＩｇＧ抗体、FITC結合ロバ抗ヤギＩｇＧ抗体、又はFITC又はCy3結合ロバ抗マウスＩｇＧ抗体（Jackson Immuno Research）を用いて、ＣＤ６８に対する免疫染色の場合と同様の方法で行った。 In addition, immunostaining was performed for factors involved in macrophage infiltration (FIG. 4). The immunostaining method includes a rabbit polyclonal anti-MCP-1 antibody (Santa Cruz) (diluted 1:50), a rabbit polyclonal anti-VCAM-1 antibody (Santa Cruz) (diluted 1:50), mouse monoclonal as primary antibodies. Anti-p65 antibody (Chemicom) (diluted 1:50), rabbit polyclonal anti-MMP-2 antibody (Santa Cruz) (diluted 1:50) was used as a secondary antibody, FITC-conjugated donkey anti-rabbit IgG antibody, FITC Using a combined donkey anti-goat IgG antibody, or FITC or Cy3-conjugated donkey anti-mouse IgG antibody (Jackson Immuno Research), the same method as in immunostaining for CD68 was performed.

さらに一部のラットでは、ウィリス輪を摘出し、そこからＲＮＡを抽出し逆転写を行った後、ＰＣＲを行った（図５）。ウィリス輪からの全ＲＮＡの抽出は、RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit (QIAGEN)を用いて取扱説明書に従って行った。300ngの全ＲＮＡを含む20μlの反応液を用いて、Sensiscript reverse transcriptase (QIAGEN)を用いてｃＤＮＡを合成した。1μlのｃＤＮＡ（15ngのＲＮＡに由来）を用いて各ＰＣＲを行った。ＰＣＲは、HotStar Taq polymerase (QIAGEN)を用いて行った。βアクチンを内部標準として用いた。使用したプライマーは以下の通りである。 Furthermore, in some rats, Willis rings were extracted, RNA was extracted therefrom, reverse transcription was performed, and PCR was then performed (FIG. 5). Extraction of total RNA from Willis rings was performed using RNeasy Fibrous Tissue Mini Kit (QIAGEN) according to the instruction manual. CDNA was synthesized using Sensiscript reverse transcriptase (QIAGEN) using 20 μl of a reaction solution containing 300 ng of total RNA. Each PCR was performed using 1 μl of cDNA (derived from 15 ng RNA). PCR was performed using HotStar Taq polymerase (QIAGEN). β-actin was used as an internal standard. The used primers are as follows.

ＭＣＰ−１：
５’−ｃｃｔｃｃａｃｃａｃｔａｔｇｃａｇｇｔｃｔｃ−３’（配列番号１）
５’−ａａｇｔｃｃｃｔｃａｃｃｃｔｃｃｃａａａｇ−３’ （配列番号２） MCP-1:
5'-cctccaccactatgcagtctc-3 '(SEQ ID NO: 1)
5′-aagtcccctccacctccccaaag-3 ′ (SEQ ID NO: 2)

ＶＣＡＭ−１：
５’−ｇｃｇａａｇｇａａａｃｔｇｇａｇａａｇａｃａ−３’ （配列番号３）
５’−ａｃａｃａｔｔａｇｇｇａｃｃｇｔｇｃａｇｔｔ−３’ （配列番号４） VCAM-1:
5′-gcgaaggaactggagagaca-3 ′ (SEQ ID NO: 3)
5'-acacattagggaccccgtgcagtt-3 '(SEQ ID NO: 4)

ＭＭＰ−２：
５’−ｃｔｇａｔａａｃｃｔｇｇａｔｇｃａｇｔｃｇｔ−３’ （配列番号５）
５’−ｃｃａｇｃｃａｇｔｃｃｇａｔｔｔｇａ−３’ （配列番号６） MMP-2:
5′-ctgataacctggagtcagtcgt-3 ′ (SEQ ID NO: 5)
5′-ccagccagtccgattga-3 ′ (SEQ ID NO: 6)

ＰＣＲの反応条件は、９５℃で１０分処理した後、９５℃で１５秒、５５℃で１５秒及び７２℃で３０秒のサイクルを４０サイクル行った。ＰＣＲ産物は、２％アガロースゲル電気泳動で分離した。 The PCR reaction was carried out at 95 ° C. for 10 minutes, followed by 40 cycles of 95 ° C. for 15 seconds, 55 ° C. for 15 seconds and 72 ° C. for 30 seconds. PCR products were separated by 2% agarose gel electrophoresis.

（２）結果
（ｉ）脳動脈瘤形成におけるエダラボンの効果の評価
エダラボン投与群では、非投与群に比較し有意に脳動脈瘤サイズが小さかった（未投与群：７１．２±２４．５μｍ、ｎ＝１１，投与群：３２．５±２０．７μｍ、ｎ＝１０、ｐ＜０．０１）（図１Ａ）。内弾性板スコアはエダラボン投与群で低値すなわち変化が少なかった（未投与群１．４７±０．５１、ｎ＝１１，投与群：１．２±０．４２、ｎ＝１０、ｐ＝００４３）（図１Ｂ）。内膜の厚さはエダラボン投与群で厚かった（未投与群０．４４±０．２０、ｎ＝１１，投与群：０．７５±０．１９、ｎ＝１０、ｐ＜０．０１）（図１Ｃ）。マクロファージ（ＣＤ６８陽性細胞）浸潤はエダラボン投与群で有意に低下していた（図２）。なお、エダラボン投与群と非投与群で血圧に差を認めなかった（図１Ｄ）。 (2) Results (i) Evaluation of the effect of edaravone on cerebral aneurysm formation In the edaravone administration group, the cerebral aneurysm size was significantly smaller than that in the non-administration group (unadministered group: 71.2 ± 24.5 μm, n = 11, administration group: 32.5 ± 20.7 μm, n = 10, p <0.01) (FIG. 1A). The internal elastic lamina score was low or not changed in the edaravone administration group (untreated group 1.47 ± 0.51, n = 11, administration group: 1.2 ± 0.42, n = 10, p = 0043) (FIG. 1B). The thickness of the intima was thicker in the edaravone administration group (non-administration group 0.44 ± 0.20, n = 11, administration group: 0.75 ± 0.19, n = 10, p <0.01) ( FIG. 1C). Macrophage (CD68 positive cell) infiltration was significantly reduced in the edaravone administration group (FIG. 2). In addition, there was no difference in blood pressure between the edaravone administration group and the non-administration group (FIG. 1D).

（ｉｉ）脳動脈瘤壁での活性酸素に対するエダラボンの効果
エダラボン投与群では、８−ＯＨｄＧ、ＤＨＥ染色にて明らかに活性酸素量、酸化ＤＮＡとも低下した（図３）。 (Ii) Effect of edaravone on active oxygen in cerebral aneurysm wall In the edaravone administration group, both the amount of active oxygen and oxidized DNA were clearly decreased by 8-OHdG and DHE staining (FIG. 3).

（ｉｉｉ）関連因子の発現
ＮＦκＢｐ６５サブユニット（ＤＮＡ結合型のみを認識する抗体を使用）、ＭＣＰ−１、ＶＣＡＭ−１およびＭＭＰといった脳動脈瘤形成とくにマクロファージ浸潤に関与する因子について免疫染色および定量ＰＣＲにて検討した。エダラボンによりこれらの因子が有意に低下していた（図４及び図５） (Iii) Expression of related factors Immunostaining and quantitative PCR for factors involved in cerebral aneurysm formation, particularly macrophage infiltration, such as NFκBp65 subunit (using an antibody that recognizes only DNA-binding type), MCP-1, VCAM-1 and MMP It examined in. These factors were significantly reduced by edaravone (FIGS. 4 and 5).

（３）まとめ
脳動脈瘤壁では、活性酸素が産生されていることが今回明らかとなった。エダラボンは産生された活性酸素を消去することにより、活性酸素により誘導される転写因子ＮＦκＢの低下を介して、ＭＣＰ−１、ＶＣＡＭ−１を低下させ、それによりマクロファージ浸潤の低下を起こし、最終的にマクロファージから産生されるＭＭＰを低下させ、脳動脈瘤壁の変性を予防しているものと考えられる。以上のことから、エダラボンは、動脈瘤の予防及び／又は治療のための医薬として有効であり、特に脳動脈瘤の増大抑制に有効である。 (3) Summary It became clear this time that active oxygen was produced in the cerebral aneurysm wall. Edaravone eliminates the produced active oxygen, thereby reducing MCP-1 and VCAM-1 through the reduction of the transcription factor NFκB induced by active oxygen, thereby causing a decrease in macrophage infiltration, and finally It is considered that the MMP produced from macrophages is lowered to prevent the degeneration of the cerebral aneurysm wall. From the above, edaravone is effective as a medicament for the prevention and / or treatment of aneurysms, and is particularly effective for suppressing the increase in cerebral aneurysms.

図１は、形成された脳動脈瘤の評価結果を示す。FIG. 1 shows the evaluation result of the formed cerebral aneurysm. 図２は、切片の免疫染色の結果を示す。FIG. 2 shows the results of immunostaining of the sections. 図３は、未固定凍結標本によるＤＨＥ染色と８−ＯＨｄＧ染色の結果を示す。FIG. 3 shows the results of DHE staining and 8-OHdG staining with unfixed frozen specimens. 図４は、マクロファージ浸潤に関与する因子についての免疫染色の結果を示す。FIG. 4 shows the results of immunostaining for factors involved in macrophage infiltration. 図５は、マクロファージ浸潤に関与する因子についての定量ＰＣＲの結果を示す。FIG. 5 shows the results of quantitative PCR for factors involved in macrophage infiltration.

Claims

The following formula (I):
(In the formula, R ¹ represents a hydrogen atom, aryl, alkyl having 1 to 5 carbon atoms or alkoxycarbonylalkyl having 3 to 6 carbon atoms in total, and R ² represents a hydrogen atom, aryloxy, aryl mercapto, 1 to 1 carbon atoms. 5 represents alkyl or hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, or R ¹ and R ² together represent alkylene having 3 to 5 carbon atoms, R ³ represents a hydrogen atom, alkyl having 1 to 5 carbon atoms. , Cycloalkyl having 5 to 7 carbon atoms, hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, benzyl, naphthyl or phenyl, alkoxy having 1 to 5 carbon atoms, hydroxyalkyl having 1 to 3 carbon atoms, 2 to 5 carbon atoms in total Alkoxycarbonyl, alkyl mercapto having 1 to 3 carbon atoms, alkylamino having 1 to 4 carbon atoms, dialkylamino having 2 to 8 carbon atoms, halogen atom, trifluoromethyl, alkyl This represents phenyl substituted with 1 to 3 identical or different substituents selected from the group consisting of ruboxyl, cyano, hydroxyl, nitro, amino, and acetamide.
Or a physiologically acceptable salt thereof, or a hydrate or solvate thereof as an active ingredient, for preventing and / or treating an aneurysm.

The medicament according to claim 1, which is used for suppressing the occurrence or increase of an aneurysm.

The medicament according to claim 1 or 2, which is used for suppressing an increase in aneurysm.

The medicament according to any one of claims 1 to 3, wherein the aneurysm is a cerebral aneurysm.

The pharmaceutical according to any one of claims 1 to 4, wherein the pyrazolone derivative represented by the formula (I) is 3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one.