JP2009084215A

JP2009084215A - Inflammatory bowel disease prophylactic or therapeutic agent

Info

Publication number: JP2009084215A
Application number: JP2007256146A
Authority: JP
Inventors: Mamoru Tanaka; 守田中; Masahiko Tabata; 雅彦把田; Shitatsu Takahashi; 志達高橋
Original assignee: Miyarisan Pharmaceutical Co Ltd; Nippon Paper Chemicals Co Ltd
Current assignee: Miyarisan Pharmaceutical Co Ltd; Nippon Paper Chemicals Co Ltd
Priority date: 2007-09-28
Filing date: 2007-09-28
Publication date: 2009-04-23

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To find an inflammatory bowel disease prophylactic or therapeutic agent or an active ingredient for preventing the state of the disease from worsening, in other words, inhibiting a changeover from a remission period to an active period and preventing recrudescence and an inflammatory bowel disease prophylactic or therapeutic agent excellent in safety or taste as well as in the prophylactic or therapeutic effect on inflammatory bowel diseases without causing a load to a patient when used in dietetic therapy. <P>SOLUTION: The inflammatory bowel disease prophylactic or therapeutic agent has Clostridium butyricum and a cellooligosaccharide as active ingredients. <P>COPYRIGHT: (C)2009,JPO&INPIT

Description

本発明は、経口投与することにより、炎症性腸疾患を予防および、または、治療するための炎症性腸疾患予防・治療剤に関する。具体的には、酪酸菌とセロオリゴ糖とを有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防・治療剤に関するものである。 The present invention relates to a prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease for preventing and / or treating inflammatory bowel disease by oral administration. Specifically, the present invention relates to a prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease containing butyric acid bacteria and cellooligosaccharide as active ingredients.

炎症性腸疾患（ＩＢＤ：ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＢｏｗｅｌＤｉｓｅａｓｅ）は、潰瘍性大腸炎及びクローン病に代表される、大腸及び小腸の粘膜に慢性の炎症や潰瘍を引起こす原因不明の疾患の総称であり、厚生労働省より特定疾患に指定されている。１０〜２０歳代の若年者に多く発症し、病気は再燃と緩解を繰り返す。ここ１０年間で国内患者数が５倍と急増し、２００７年現在、国内患者数は１０万名を超えている。 Inflammatory bowel disease (IBD: Inflammatory Bowel Disease) is a general term for diseases of unknown cause that cause chronic inflammation and ulcers in the mucosa of the large and small intestines, represented by ulcerative colitis and Crohn's disease. It is designated as a more specific disease. It often occurs in young people in their 10s and 20s, and the disease repeats relapse and remission. Over the past 10 years, the number of domestic patients has increased fivefold, and as of 2007, the number of domestic patients has exceeded 100,000.

その原因は、腸内に棲む細菌のバランスが崩れたことが、大腸炎の発症や症状の進行に関わってくるのではないかという細菌説、人間の免疫機構が体の一部であるはずの大腸粘膜を敵と認識して攻撃し、破壊しているという自己免疫異常説が言われている。又、本疾患は北欧や米国の白人やユダヤ人に多いことから、食生活が関与しているという説や、ストレスが大きく関与している説など様々であるが、はっきりとした原因はわかっていない。 The cause is that the balance of bacteria in the intestines may be related to the onset of colitis and the progression of symptoms, the human immune mechanism should be part of the body There is an autoimmune theory that the mucosa of the large intestine is recognized as an enemy and attacking and destroying it. In addition, since this disease is common in Scandinavian and American whites and Jews, there are various theories, such as the theory that dietary habits are involved and the theory that stress is largely involved, but the exact cause is unknown. Absent.

炎症性腸疾患に対し、現在根本的な治療方法は確立されておらず、薬物療法（スルファサラジン、５−ＡＳＡ（メサラジン）のサルファ剤、プレドニゾロンを中心としたステロイド剤、アザチオプリンなどの免疫抑制剤などを病期に応じて段階的に使用）および栄養療法（完全静脈栄養療法、経腸栄養療法、食事療法）が用いられている。 For inflammatory bowel disease, there are currently no fundamental treatment methods available. Drug therapy (sulfasalazine, 5-ASA (mesalazine) sulfa drugs, steroids centered on prednisolone, immunosuppressants such as azathioprine, etc. Phased use according to stage) and nutritional therapy (complete parenteral nutrition, enteral nutrition, diet).

軽症の患者では５−ＡＳＡ製剤の飲み薬による治療が基本的なものになり、重症の患者や全身症状を伴う中等症例ではステロイドの大量療法や免疫抑制剤、その他新しい治療法を行うことになり、多くの場合急性期は入院治療が必要となる。 In mild patients, treatment with a 5-ASA drug is fundamental, and in severe cases and moderate cases with systemic symptoms, high-dose steroid therapy, immunosuppressants, and other new therapies will be used. Often, hospitalization is required during the acute phase.

５−ＡＳＡ製剤には従来から用いられてきたサラゾスルファピリジン（略号：ＳＡＳＰ、商品名：サラゾピリン）と最近発売されたメサラジン（商品名：ペンタサ）があるが、ＳＡＳＰによく見られる副作用としては、アレルギー症状、発疹、消化器症状、頭痛がある。 5-ASA preparations include salazosulfapyridine (abbreviation: SASP, trade name: salazopyrine) that has been used in the past and mesalazine (trade name: pentasa) that was recently released. , Allergic symptoms, rash, gastrointestinal symptoms, headache.

副腎皮質ステロイドは強力な炎症抑制作用を有し、５−ＡＳＡ製剤と並び潰瘍性大腸炎の治療の中心となっており、プレドニゾロンやベタメタゾンなどが主に使われている。潰瘍性大腸炎の治療においては内服、静脈内投与のほかに坐薬（商品名：リンデロン坐剤）や注腸（商品名：ステロネマ）も用いられる。さらに重症型や劇症型に対して周期的に大量のステロイドを静脈内投与するパルス療法や腸間膜動脈内注入療法なども行われている。副腎皮質ステロイドの主な副作用としては体重の増加、顔のむくみ、にきび、不眠などがあり、他に糖尿病、骨がもろくなる、感染症にかかりやすくなるなどの重篤な副作用がみられることがある。 Corticosteroids have a strong anti-inflammatory effect and are the center of treatment for ulcerative colitis along with 5-ASA preparations, and prednisolone and betamethasone are mainly used. In the treatment of ulcerative colitis, suppositories (trade name: Linderon suppository) and enemas (trade name: steronema) are used in addition to oral administration and intravenous administration. Furthermore, for severe and fulminant types, pulse therapy in which a large amount of steroid is intravenously administered periodically and mesenteric arterial infusion therapy are also performed. The main side effects of corticosteroids include weight gain, swelling of the face, acne, insomnia, and other serious side effects such as diabetes, fragility of bones, and susceptibility to infections. is there.

潰瘍性大腸炎は多くの免疫学的異常が認められることから、自己免疫性疾患であると考えられており、免疫の異常な働きを抑える免疫抑制剤を投与する治療法もある。アザチオプリン（商品名：イムラン）や６−ＭＰ（商品名：ロイケリン）という免疫抑制剤の少量投与を行う場合がある。 Since ulcerative colitis has many immunological abnormalities, it is considered to be an autoimmune disease, and there is a treatment method that administers an immunosuppressive agent that suppresses abnormal immunity. A small amount of an immunosuppressive agent such as azathioprine (trade name: Imran) or 6-MP (trade name: Leukerin) may be administered.

又、ＧＢＦ（発芽大麦から調製された食物繊維とたんぱく質を主成分とするもの）といった軽症〜中等症の潰瘍性大腸炎患者を対象にした病者用食品も販売されているが、不溶性のため患者への負荷が大きく、その効果も十分でない。 In addition, foods for patients such as GBF (food fiber and protein prepared from germinated barley) are used for patients with mild to moderate ulcerative colitis. The burden on the patient is large and the effect is not sufficient.

腸内発酵により生成される短鎖脂肪酸（ＳＣＦＡ）は腸管運動を活発にし、便秘などが改善する作用を有する。大腸の上皮細胞はＳＣＦＡの主要な構成成分である酢酸、プロピオン酸および酪酸を主要なエネルギー源として利用する。とりわけ酪酸は、細胞増殖に深くかかわっており、大腸粘膜の粘膜防御能の維持に中心的な役割を果たしている。酪酸はＴｈ１反応を抑え、炎症性腸疾患の治療効果を生むといった報告もある。 Short chain fatty acids (SCFA) produced by intestinal fermentation have an action of activating motility and improving constipation and the like. The epithelial cells of the large intestine use acetic acid, propionic acid and butyric acid, which are the main components of SCFA, as main energy sources. In particular, butyric acid is deeply involved in cell proliferation and plays a central role in maintaining the mucosal defense ability of the large intestine mucosa. There are reports that butyric acid suppresses the Th1 reaction and produces therapeutic effects on inflammatory bowel disease.

このため、腸内の酪酸濃度を上昇させる試みが数多くなされてきた。例えば、オリゴ糖の一種であるラクチトールを実験飼料に５％添加し、ラットに３週間摂取させたところ、盲腸内容物に含まれる酪酸の濃度が上昇したという報告（Ｙａｎａｈｉｒａ，Ｓ．ｅｔａｌ．：Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ，４１：８３−９４，１９９５（非特許文献１））があるが、酪酸濃度は十分ではない。 For this reason, many attempts have been made to increase the butyric acid concentration in the intestine. For example, when 5% of lactitol, which is an oligosaccharide, was added to the experimental feed and ingested by rats for 3 weeks, the concentration of butyric acid contained in the cecum contents increased (Yanahira, S. et al .: J. Nutr. Sci. Vitaminol, 41: 83-94, 1995 (Non-patent Document 1)), butyric acid concentration is not sufficient.

この様に、炎症性腸疾患に対して、現在さまざまな治療法の開発が進められているが、残念ながら、まだ根本的に治すことのできる治療法は発見されておらず、このため炎症性腸疾患を予防・治療することが大きな課題となっている。 In this way, various treatments are currently being developed for inflammatory bowel disease, but unfortunately, no cure that can be completely cured has yet been found. Prevention and treatment of bowel disease has become a major issue.

Ｙａｎａｈｉｒａ，Ｓ．ｅｔａｌ．：Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ，４１：８３−９４，１９９５Yanahira, S .; et al. : J.M. Nutr. Sci. Vitaminol, 41: 83-94, 1995.

本発明の目的は、炎症性腸疾患の予防・治療剤もしくは病態の悪化、即ち、緩解期から活動期への移行阻止、再燃を防止する有効成分を見出すことである。また、炎症性腸疾患の予防・治療効果と共に、安全性・嗜好性にも優れ、食事療法に用いた場合でも、患者への負担がかからないものを見出すことをも目的としている。 An object of the present invention is to find an active ingredient for preventing a prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease or a worsening of the disease state, that is, preventing the transition from the remission phase to the active phase and preventing relapse. Another object of the present invention is to find a product that is excellent in safety and palatability as well as preventing and treating inflammatory bowel disease, and that does not place a burden on patients even when used in diet therapy.

本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、数ある生菌剤の中でも酪酸を産生して整腸作用に優れる酪酸菌と、酪酸菌の基質となり酪酸産生を助長するセロオリゴ糖を共投与する事により、優れた炎症性腸疾患予防・治療効果が得られることを見出したものであり、これらを有効成分とする炎症性腸疾患予防・治療剤を提供するものである。 As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors have produced butyric acid that has excellent intestinal action by producing butyric acid among a number of viable bacterial agents, and cellooligosaccharide that serves as a substrate for butyric acid bacteria and promotes butyric acid production. The present inventors have found that an excellent inflammatory bowel disease prevention / treatment effect can be obtained by co-administration, and provide an inflammatory bowel disease prevention / treatment agent containing these as active ingredients.

すなわち本発明は、下記の〔１〕及び〔２〕を提供するものである。
〔１〕酪酸菌１重量部に対して、セロオリゴ糖を０．０５重量部以上１重量部未満の割合で含有することを特徴とする炎症性腸疾患予防・治療剤。
〔２〕酪酸菌がクロストリジウム・ブチリカムである〔１〕記載の炎症性腸疾患予防・治療剤。 That is, the present invention provides the following [1] and [2].
[1] A prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease comprising cellooligosaccharide in a proportion of 0.05 parts by weight or more and less than 1 part by weight with respect to 1 part by weight of butyric acid bacteria.
[2] The prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease according to [1], wherein the butyric acid bacterium is Clostridium butyricum.

本発明の炎症性腸疾患予防・治療剤をヒトに給与すれば、大腸部位での酪酸菌を増加させ酪酸含量を高めることが出来、腸管上皮細胞を健全な状態に維持することが出来る。その結果、炎症性腸疾患の予防・治療能が高まる事に加え、大腸癌や大腸疾患の予防にもつながり、健康の維持・増進をする事が出来る。また、有効成分のひとつであるセロオリゴ糖は天然物であり、ヒトに投与しても副作用はほとんどなく、安全性が高い。 If the prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease of the present invention is supplied to humans, butyric acid bacteria in the large intestine region can be increased to increase the butyric acid content, and intestinal epithelial cells can be maintained in a healthy state. As a result, the ability to prevent and treat inflammatory bowel disease is enhanced, and it also leads to prevention of colorectal cancer and colorectal disease, and can maintain and promote health. Cellooligosaccharide, which is one of the active ingredients, is a natural product and has almost no side effects even when administered to humans, and is highly safe.

本発明の炎症性腸疾患予防・治療剤は、プロバイオティクスとして酪酸菌を、プレバイオティクスとしてセロオリゴ糖を含有するものであり、腸管粘膜の健全な状態を維持する効果を有する。 The inflammatory bowel disease preventive / therapeutic agent of the present invention contains butyric acid bacteria as probiotics and cellooligosaccharides as prebiotics, and has an effect of maintaining a healthy state of the intestinal mucosa.

本発明の予防・治療剤の有効成分の第一は、酪酸菌である。一般に、プロバイオティクスとしては、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｕｓｐ．）、乳酸菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）、酪酸菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｕｂｕｔｙｒｉｃｕｍ）等が用いられている。乳幼児の腸内菌叢はビフィズス菌等の有用菌が優勢であるが、加齢と共に有用菌が減少し腐敗菌の割合が増加する。このため腐敗菌の抑制や有用菌の増加を目的に、ビフィズス菌や乳酸菌など多くの種類の生菌剤がプロバイオティクスとして用いられている。しかしながら、ビフィズス菌や乳酸菌は、経口摂取しても、胃液や胆汁などの酸に耐性がなく、生きたまま腸まで届くのはごくわずかに過ぎない。又、一部定着したとしても摂取を中止すれば、腸内菌叢はまた腐敗菌優勢のフローラに戻ってしまうといった問題もある。これに対し、酪酸菌は、好気下では芽胞を形成し、経口的に投与された後、胃内において、蛋白消化液ペプシンと胃酸による低ｐＨ環境とに暴露されるが、芽胞として抵抗性のある酪酸菌は死滅することなくここを通過し、十二指腸に到達する。そこでｐＨ中性付近まで上昇し、食物は各種の消化液により消化され、栄養に富んだ環境が作られた後、酪酸菌は発芽増殖の機会を得る。経口摂取しても、胃液や胆汁で消化されることもなく、胞子状態のまま大腸に届き、嫌気性の大腸内で発芽増殖して酪酸を産生することができる。 The first active ingredient of the preventive / therapeutic agent of the present invention is butyric acid bacteria. In general, bifidobacteria (Bifidobacterium sp.), Lactic acid bacteria (Lactobacillus sp.), Butyric acid (Clostridium butyricum), and the like are used as probiotics. Useful bacteria such as bifidobacteria are dominant in the intestinal flora of infants, but useful bacteria decrease and the proportion of spoilage bacteria increases with aging. For this reason, many types of viable bacteria such as bifidobacteria and lactic acid bacteria are used as probiotics for the purpose of suppressing spoilage bacteria and increasing useful bacteria. However, bifidobacteria and lactic acid bacteria are not resistant to acids such as gastric juice and bile even when ingested, and only a few reach the intestines alive. Moreover, even if a part of it is established, if the ingestion is stopped, the intestinal microflora also returns to a flora dominant to rot bacteria. In contrast, butyric acid bacteria form spores under aerobic conditions, and after oral administration, they are exposed to the low pH environment of protein digestive liquid pepsin and gastric acid in the stomach, but are resistant as spores. Butyric acid bacteria pass through here without being killed and reach the duodenum. There, the pH rises to near neutrality, food is digested by various digestive fluids, and after a nutrient-rich environment is created, butyric acid bacteria have an opportunity for germination and growth. Even if it is taken orally, it is not digested with gastric juice or bile and reaches the large intestine in the spore state, and it can germinate and grow in the anaerobic large intestine to produce butyric acid.

本発明で用いる酪酸菌は、偏性嫌気性の芽胞形成性であり、酪酸を生成する菌であればいかなる菌種でも良い。中でもクロストリジウム属が好ましく、とりわけブチリカム種が好ましい。更に好ましくは、クロストリジウム・ブチリカムＭＩＹＡＩＲＩ（ミヤイリ）株が良い。この菌株は、１９３３年に千葉医科大学衛生学教室（現千葉大学医学部）宮入近治博士により、ヒト腸管内より、腐敗菌に対して強い拮抗作用がある酪酸菌として報告された。本菌は腐敗菌をはじめとした種々の消化管病原体に対して拮抗作用を有し、ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａやＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ等の所謂腸内有用菌と共生することにより、整腸効果を発揮する。また、本菌は芽胞形成細菌であることから、製剤中における安定性および胃酸に対する抵抗性が乳酸菌群と比較し、高いことが報告されている。 The butyric acid bacterium used in the present invention is obligately anaerobic spore-forming, and any bacterial species may be used as long as it produces butyric acid. Among them, the genus Clostridium is preferable, and butyricum species are particularly preferable. More preferably, Clostridium butyricum MIYAIRI strain is good. This strain was reported as a butyric acid bacterium having a strong antagonistic action against spoilage bacteria in the human intestinal tract in 1933 by Dr. Koji Miyairi, Department of Hygiene, Chiba Medical University (now Chiba University School of Medicine). This bacterium has an antagonistic action against various gastrointestinal pathogens including spoilage bacteria, and exerts an intestinal regulating effect by symbiosis with so-called enteric useful bacteria such as Bifidobacterium and Lactobacillus. Moreover, since this bacterium is a spore-forming bacterium, it is reported that the stability in the preparation and the resistance to gastric acid are higher than those of the lactic acid bacteria group.

本発明において用いる酪酸菌としては、例えば、クロストリジウム・ブチリカムＮＩＰ１００６、クロストリジウム・ブチリカムＮＩＰ１０１５、クロストリジウム・ブチリカムＮＩＰ１０１７、クロストリジウム・ブチリカム・ミヤイリ５８８が挙げられ、中でも特に酪酸産生能が高いクロストリジウム・ブチリカム・ミヤイリ５８８（ＣＢＭ５８８）（ＦＥＲＭＢＰ−２７８９）が好ましい。クロストリジウム・ブチリカム・ミヤイリ５８８は、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所（日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５））［現在、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（〒３０５−８５６６日本国茨城県つくば市東１−１−１中央第６）に改称されている。］に、１９８１年（昭和５６年）５月１日付で寄託されており、その受託番号は、ＦＥＲＭＢＰ−２７８９である（昭和４７年５月１６日に寄託された微工研菌寄第−Ｐ１４６７号より移管）。 Examples of the butyric acid bacterium used in the present invention include Clostridium butyricum NIP1006, Clostridium butyricum NIP1015, Clostridium butyricum NIP1017, Clostridium butyricum Miyari 588, and among them, Clostridium butyricum Miyari 588, which has particularly high butyric acid production ability. CBM588) (FERM BP-2789) is preferred. Clostridium butyricum Miyairi 588 is the Institute of Microbial Technology, Institute of Industrial Technology, Ministry of International Trade and Industry (1-3 Higashi 1-chome, Tsukuba, Ibaraki, Japan) (currently, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology) It has been renamed the Biological Deposit Center (Central 1-1, Higashi 1-1-1 Tsukuba, Ibaraki, Japan 305-8586). ], Deposited on May 1, 1981 (Showa 56), and the accession number is FERM BP-2789 (Mikoken Bacteria deposited on May 16, 1972) P 1467 transferred).

本発明の炎症性腸疾患予防・治療剤においては、酪酸菌は、市販の生菌剤、例えばミヤリサン錠、ミヤＢＭ錠（いずれもミヤリサン製薬（株）製）などを用いても良いし、酪酸菌を適当な培地で液体培養した後、菌体を分離しそのまま用いてもよいし、乾燥して乾燥菌体として用いてもよい。市販の生菌剤を用いる場合は、含まれる酪酸菌の純度や含有量などを考慮し、下記の菌数が含まれるよう配合量を調整する。 In the preventive / therapeutic agent for inflammatory bowel disease of the present invention, the butyric acid bacterium may be a commercially available viable agent such as Miyarisan tablet, Miya BM tablet (both manufactured by Miyarisan Pharmaceutical Co., Ltd.), and butyric acid. After culturing bacteria in an appropriate medium, the cells may be separated and used as they are, or dried and used as dry cells. When using a commercially available viable agent, the blending amount is adjusted so that the following number of bacteria is included in consideration of the purity and content of butyric acid bacteria contained.

本発明の予防・治療剤においては、有効成分の第２としてセロオリゴ糖を用いる。
セロオリゴ糖は、フラクトオリゴ糖などに比べ、腸内の酪酸菌に特に選択的に資化され、酪酸菌の増殖に対し効果が大きいため、酪酸の生成量増加につながる。また、酸性下での安定性も高い。従って、本発明の予防・治療剤において、プレバイオティクスとして有効に作用する。 In the preventive / therapeutic agent of the present invention, cellooligosaccharide is used as the second active ingredient.
Cellooligosaccharides are particularly selectively assimilated by intestinal butyric acid bacteria and have a greater effect on the growth of butyric acid bacteria than fructooligosaccharides, leading to increased production of butyric acid. Moreover, the stability under acidic conditions is also high. Therefore, it effectively acts as a prebiotic in the preventive / therapeutic agent of the present invention.

本発明において、セロオリゴ糖は、グルコースが２糖以上β−１，４結合したオリゴ糖である。セロオリゴ糖は通常様々な重合度のオリゴ糖の混合物であるが、単一或いは特定の範囲の重合度のもののみに精製されたものであってもよい。前記オリゴ糖の中でも、本発明においては、グルコース重合度が２〜６のセロビオース、セロトリオース、セロテトロース、セロペンタオース、セロヘキサオースのうちの少なくとも１種を豊富に含むことが好ましく、特にセロビオース、セロトリオース、およびセロテトロースのうちの少なくとも１種を豊富に含むことが好ましく、さらに、セロビオースおよびセロトリオースのうちの少なくとも１種を豊富に含むことが好ましい。具体的には、グルコース重合度が２〜６のセロオリゴ糖の含有率が、５０重量％以上、特に８０重量％以上、中でも９０重量％以上であることが好ましい。そして更に、セロビオースの含有率が７０重量％以上、好ましくは８５重量％以上、より好ましくは９０％重量％以上、さらに好ましくは９５重量％以上であることが望ましい。尚、セロオリゴ糖の立体異性については特に問わないが、一般にＤ体であることが多い。 In the present invention, the cellooligosaccharide is an oligosaccharide in which 2 or more glucoses are linked by β-1,4. Cellooligosaccharides are usually a mixture of oligosaccharides having various degrees of polymerization, but may be purified to have a single degree or a specific degree of polymerization. Among the oligosaccharides, in the present invention, the oligosaccharide preferably contains abundantly at least one of cellobiose, cellotriose, cellotetrose, cellopentaose and cellohexaose having a degree of glucose polymerization of 2 to 6, particularly cellobiose and cellotriose. , And at least one of cellotetroses is preferably abundant, and at least one of cellobiose and cellotriose is preferably abundant. Specifically, the content of cellooligosaccharide having a glucose polymerization degree of 2 to 6 is preferably 50% by weight or more, particularly 80% by weight or more, and particularly preferably 90% by weight or more. Furthermore, it is desirable that the content of cellobiose is 70% by weight or more, preferably 85% by weight or more, more preferably 90% by weight or more, and further preferably 95% by weight or more. Incidentally, the stereoisomerism of the cellooligosaccharide is not particularly limited, but is generally D-form in many cases.

本発明で用いられるセロオリゴ糖は、公知の方法で製造することができる。例えば、化学的方法としては、発煙塩酸−濃硫酸によりセルロースを酸加水分解後、カーボンカラム等によりセロオリゴ糖を分画分取する方法（Ｍｉｌｌｅｒ，Ｇ．Ｌ，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＣｈｅｍｉｓｔｒｙＩＩＩ（ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ），１３４（１９６３））等が知られている。 The cellooligosaccharide used in the present invention can be produced by a known method. For example, as a chemical method, cellulose is acid hydrolyzed with fuming hydrochloric acid-concentrated sulfuric acid, and cellooligosaccharide is fractionated with a carbon column or the like (Miller, GL, Methods in Carbohydrate Chemistry III (Academic Press)). , 134 (1963)).

酵素的な方法としては、アモルファスなセルロースにセルビブリオ（Ｃｅｌｌｖｉｂｒｉｏ）属に属する微生物が生産するセルラーゼを作用させ、限外濾過反応器を組み合わせることにより生成物阻害を解除してセロオリゴ糖を生成させる方法（特開平１−２５６３９４号公報参照）、セルラーゼ中のβ−グルコシダーゼを選択的に除去したセルラーゼをセルロースに作用させて、セロオリゴ糖を製造する方法（特開平５−１１５２９３号公報参照）、湿潤状態の未晒しサルファイトパルプを原料にセルラーゼを作用させる系で限外濾過装置を組み合わせ、セロビオースを含むセロオリゴ糖を作る方法（特公平８−２３１２号公報参照）等が知られている。 As an enzymatic method, a cellulase produced by a microorganism belonging to the genus Cellvibrio is allowed to act on amorphous cellulose, and a cellooligosaccharide is produced by releasing product inhibition by combining an ultrafiltration reactor. (See JP-A-1-256394), a method for producing cellooligosaccharide by allowing cellulase from selectively removing β-glucosidase in cellulase to act on cellulose (see JP-A-5-115293), wet state A method of making cellooligosaccharides containing cellobiose by combining an ultrafiltration device in a system in which cellulase is allowed to act on unbleached sulfite pulp as a raw material (see Japanese Patent Publication No. 8-2312) is known.

又、糖質加リン酸分解酵素（セロデキストリンホスホリラーゼ）の逆反応を利用し、グルコース１リン酸をグルコース供与体として、セロビオースの存在下でセロオリゴ糖を製造する製法も知られている（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｖｏｌ．７７，Ｎｏ．３，２３９−２４２（１９９４））。 Also known is a production method for producing cellooligosaccharides in the presence of cellobiose using glucose monophosphate as a glucose donor by utilizing the reverse reaction of a carbohydrate phosphorolytic enzyme (cellodextrin phosphorylase) (Journal of Fermentation and Bioengineering, vol. 77, No. 3, 239-242 (1994)).

本発明の予防・治療剤におけるセロオリゴ糖としては、上記のいずれかの方法により製造されたもののほか、市販のもの（ＣＭＳＣｈｅｍｉｃａｌｓ社等）も用いることができる。本発明においては、セルロースをセルラーゼを用いてセロオリゴ糖に分解し、晶析工程などを経てグルコース重合度が２〜４のセロオリゴ糖の純度を高める方法が好適である。 As cellooligosaccharides in the preventive / therapeutic agent of the present invention, commercially available products (CMS Chemicals, etc.) can be used in addition to those produced by any of the methods described above. In the present invention, a method is preferred in which cellulose is decomposed into cellooligosaccharides using cellulase, and the purity of cellooligosaccharide having a glucose polymerization degree of 2 to 4 is increased through a crystallization step or the like.

さらに、セロオリゴ糖は、酪酸菌の基質になるだけでなく、その他にも特有の生理作用を有する。例えば、脂質代謝への影響については、セロビオースを添加した高蔗糖食でラットを４週間飼育したところ、対照群と比べて体脂肪率が低下し、総コレステロールや中性脂肪も低下することが報告されている（渡辺隆司，ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＣｏｍｍｕｎ．，５，９１（１９９８））。また、ブロイラーや産卵鶏にセロビオースを添加した飼料を与えることにより、脂肪酸合成酵素活性が抑制され、脂肪酸分解酵素活性が上昇することが報告されている（石田藍子、村上斉、山崎誠、大塚誠、眞許勝弘、本間秀彌、金井幸雄、高田良三、日本畜産学会第１０３回大会講演要旨集，５２（２００４）、石田藍子、大塚誠、勝俣昌也、高田良三、金井幸雄、日本畜産学会第１０４回大会講演要旨集，６９（２００５））。このように、セロビオースは、酪酸菌の基質となり、酪酸の生成に効果を発揮するのみでなく、それ自体も生体内の脂質代謝に好影響を及ぼし、生活習慣病予防に役立つと考えられている。本発明の予防・治療剤においてもこれらのセロビオース特有の優れた生理作用もあわせて発揮されるものと推測される。 Furthermore, cellooligosaccharides not only serve as a substrate for butyric acid bacteria, but also have other physiological functions. For example, regarding the effects on lipid metabolism, it was reported that when rats were raised for 4 weeks on a high sucrose diet supplemented with cellobiose, the body fat percentage decreased compared to the control group, and total cholesterol and triglycerides also decreased. (Takashi Watanabe, Cellulose Commun., 5, 91 (1998)). It has also been reported that feeding broilers and laying hens with cellobiose-added feed inhibits fatty acid synthase activity and increases fatty acid-degrading enzyme activity (Aiko Ishida, Hitoshi Murakami, Makoto Yamazaki, Makoto Otsuka) , Katsuhiro Tsuji, Hideaki Honma, Yukio Kanai, Ryozo Takada, Abstracts of the 103rd Annual Meeting of the Japanese Society of Animal Science, 52 (2004), Aiko Ishida, Makoto Otsuka, Masaya Katsumi, Ryozo Takada, Yukio Kanai, Japan Society of Animal Science 104th Annual Meeting Abstract, 69 (2005)). Thus, cellobiose is considered to be a substrate for butyric acid bacteria and not only exerts an effect on the production of butyric acid, but also has a positive effect on lipid metabolism in the living body and is useful for preventing lifestyle-related diseases. . The prophylactic / therapeutic agent of the present invention is also presumed to exhibit excellent physiological actions unique to these cellobioses.

また、本発明者らは、各種腸内細菌のうち、酪酸菌であるクロストリジウム属の細菌が良好にセロオリゴ糖を資化できること、特に、クロストリジウム・ブチリカムは良好にセロオリゴ糖を資化できるとともに、酪酸産生能も高いことを確認した。 Further, the present inventors have found that among various intestinal bacteria, bacteria of the genus Clostridium which are butyric acid bacteria can assimilate cellooligosaccharides well, in particular, Clostridium butyricum can assimilate cellooligosaccharides well, It was confirmed that the productivity was high.

実際にヒト糞便中において、セロオリゴ糖を添加した場合に選択的に酪酸菌が増殖するかどうか観察するために、糞便懸濁液を調製し、これにコーンスターチもしくはセロオリゴ糖を添加し酪酸菌を接種、培養した結果、セロオリゴ糖添加液は、対照のコーンスターチ添加液と比較して、ｐＨは顕著に低下し、酪酸菌が増殖していることが観察された。 In order to observe whether butyric acid bacteria grow selectively in human feces when cellooligosaccharide is added, a stool suspension is prepared, and then corn starch or cellooligosaccharide is added to inoculate butyric acid bacteria. As a result of culturing, it was observed that the cellooligosaccharide-added solution had a significantly lower pH and the butyric acid bacteria were growing than the control cornstarch added solution.

さらに、セロオリゴ糖を３日間自由に摂取させたラットに酪酸菌を投与し、その腸管内容物中の酪酸菌の菌数を調べたところ、セロオリゴ糖摂取ラットの方が非摂取ラットよりも腸内の酪酸菌の菌数の多いことが確認された。 Furthermore, when butyric acid bacteria were administered to rats that had been freely ingested with cellooligosaccharide for 3 days, and the number of butyric acid bacteria in the intestinal contents was examined, it was found that rats with cellooligosaccharide intestinal intestine were more enteric than rats without ingestion. It was confirmed that the number of butyric acid bacteria was high.

これらの実験結果は、消化管内においてセロオリゴ糖が常在腸内細菌により資化されず、併用した酪酸菌のみに選択的に資化されること、セロオリゴ糖と酪酸菌とを配合した組成物は、その菌数増大をもたらすことを示すものである。 These experimental results show that cellooligosaccharides are not assimilated by resident intestinal bacteria in the gastrointestinal tract, but are selectively assimilated only by the combined butyric acid bacteria. This indicates that the number of bacteria increases.

本発明の治療・予防剤は、炎症性腸疾患の予防や治療に有用である。腸としては胃・消化管であればすべて含まれる意味である。炎症性の疾患であればよく、その原因についてはウイルスなどの感染、外傷、免疫疾患等特に問わない。炎症性腸疾患の代表的なものとして潰瘍性大腸炎（大腸、盲腸、虫垂、結腸、直腸、結腸、肛門）、クローン病（小腸、大腸、直腸、胃、十二指腸など）などを挙げることができる。 The therapeutic / prophylactic agent of the present invention is useful for the prevention and treatment of inflammatory bowel disease. The intestines are meant to be included in the stomach and digestive tract. Any inflammatory disease may be used, and the cause thereof is not particularly limited such as infection such as a virus, trauma, and immune disease. Typical inflammatory bowel diseases include ulcerative colitis (colon, cecum, appendix, colon, rectum, colon, anus), Crohn's disease (small bowel, colon, rectum, stomach, duodenum, etc.), etc. .

本発明の予防・治療剤における酪酸菌およびセロオリゴ糖の配合量は、患者の年齢、疾患の症状に応じて、適宜、増減が可能である。 The amount of butyric acid bacteria and cellooligosaccharide in the preventive / therapeutic agent of the present invention can be appropriately increased or decreased depending on the age of the patient and the symptoms of the disease.

酪酸菌の量については、特別の制限はないが、典型的には、菌数として一日当たり１×１０^５〜１×１０^１０ＣＦＵ（コロニー形成単位）の範囲であり、好ましくは、１×１０^６〜１×１０^８ＣＦＵの範囲が適当である。この投与量を目安に、一日の投与回数との関係で、本発明の予防・治療剤中の酪酸菌量を適宜調整すればよい。 The amount of butyric acid bacteria is not particularly limited, but is typically in the range of 1 × 10 ⁵ to 1 × 10 ¹⁰ CFU (colony forming unit) per day, preferably 1 × 10 6 A range of ⁶ to 1 × 10 ⁸ CFU is suitable. Using this dose as a guide, the amount of butyric acid bacteria in the preventive / therapeutic agent of the present invention may be appropriately adjusted in relation to the number of administrations per day.

一方、セロオリゴ糖の配合量は、酪酸菌の基質となり、プレバイオティクスとして整腸作用を助長するために必要な量の範囲とすることができるが、セロオリゴ糖を過剰に摂取すると軟便を引き起こす可能性があることも考慮して定める必要がある。セロオリゴ糖の１日の最大摂取量は、体重１Ｋｇに対し、０．３６ｇ程度とした方が好ましい。通常、本発明の予防・治療剤においては、セロオリゴ糖は、本発明の炎症性腸疾患予防・治療剤においては、セロオリゴ糖は０．１〜３０重量％含有させることができ、好ましくは１．０〜１０重量％が適当である。 On the other hand, the amount of cellooligosaccharide becomes a substrate for butyric acid bacteria and can be within the range of the amount necessary to promote the intestinal regulation as prebiotics, but excessive consumption of cellooligosaccharide can cause loose stool It needs to be determined in consideration of the nature. The maximum daily intake of cellooligosaccharide is preferably about 0.36 g per 1 kg body weight. Usually, in the prophylactic / therapeutic agent of the present invention, the cellooligosaccharide can be contained in the inflammatory bowel disease prophylactic / therapeutic agent of the present invention in an amount of 0.1-30 wt%. 0 to 10% by weight is suitable.

本発明の予防・治療剤の投与方法は、１日、１回〜３回食後に服用することが好ましいが、適宜服用することも可能である。 The administration method of the prophylactic / therapeutic agent of the present invention is preferably taken after 1 to 3 times a day, but can be taken as appropriate.

本発明の予防・治療剤において、セロオリゴ糖と酪酸菌の配合比率（重量比）は、酪酸菌（乾燥菌末）１重量部に対して、セロオリゴ糖を０．０５重量部以上１重量部未満、好ましくは０．２重量部以上１重量部未満が適当である。酪酸菌とセロオリゴ糖の重量比が上記の範囲を満たさない場合、セロオリゴ糖と酪酸菌との併用効果を得ることができない。 In the prophylactic / therapeutic agent of the present invention, the mixing ratio (weight ratio) of cellooligosaccharide and butyric acid bacteria is 0.05 parts by weight or more and less than 1 part by weight of cellooligosaccharide to 1 part by weight of butyric acid bacteria (dried bacterial powder). The amount is preferably 0.2 parts by weight or more and less than 1 part by weight. When the weight ratio of butyric acid bacteria and cellooligosaccharide does not satisfy the above range, the combined use effect of cellooligosaccharide and butyric acid bacteria cannot be obtained.

本発明の予防・治療剤の製造は、例えば以下のような方法で行うことができる。
公知のＣＳ培地（特開昭５９−１８７７８４号公報参照）によって培養した酪酸菌を、遠心分離により固液分離し得た菌ペーストを乾燥し得た乾燥菌末に、セロオリゴ糖を添加し、練合機で均一になるまで練合する。次に真空乾燥を行う。真空乾燥の条件は、具体的には例えば、棚式真空乾燥機により５０℃下、５時間、１０ｍｍＨｇとすることができる。得られた乾燥物を粉砕機により粉砕して該組成物を得た。このようにして、乳白色で均質な細粒状でほとんど無味無臭の組成物を得ることができる。 The production of the preventive / therapeutic agent of the present invention can be carried out, for example, by the following method.
A cellooligosaccharide was added to the dried bacterial powder obtained by drying a bacterial paste obtained by solid-liquid separation of butyric acid bacteria cultured in a known CS medium (Japanese Patent Laid-Open No. 59-187784), and kneaded. Knead until uniform in the machine. Next, vacuum drying is performed. The conditions for vacuum drying can be specifically 10 mmHg at 50 ° C. for 5 hours with a shelf-type vacuum dryer, for example. The obtained dried product was pulverized by a pulverizer to obtain the composition. In this way, a milky white, homogeneous fine granular and almost tasteless and odorless composition can be obtained.

本発明の炎症性腸疾患予防・治療剤は、ヒトに適用することができる。また、幼児から高齢者まですべての年齢のヒトに制限なく用いることができると共に、健康状態、体格などについても特に制限はない。 The prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease of the present invention can be applied to humans. Moreover, it can be used without limitation for humans of all ages, from infants to the elderly, and there are no particular restrictions on health status, physique, and the like.

本発明の予防・治療剤の投与方法は特に限定されないが、酪酸菌とセロオリゴ糖を混合し、下記の剤形の具体例で説明するように、錠剤、タブレット等にして経口投与してもよいし、粉状又は顆粒状にして投与してもよい。また、酪酸菌とセロオリゴ糖を個別の粉末その他の製剤として、添加または投与時には同時に利用する形としても良い。 The method for administering the prophylactic / therapeutic agent of the present invention is not particularly limited, but it may be administered orally in the form of a tablet, tablet, etc., as described in the specific examples of dosage forms described below, by mixing butyric acid bacteria and cellooligosaccharide. However, it may be administered in the form of powder or granules. Alternatively, butyric acid bacteria and cellooligosaccharide may be used as individual powders or other preparations, which are used simultaneously during addition or administration.

本発明の炎症性腸疾患予防・治療剤として、酪酸菌および成分の粉末を製剤化せずに用いることができるが、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、エンテリックコーティング剤等に製剤化してもよい。希釈剤には、一般の医薬品製剤に使用される賦形剤、結合剤、崩壊剤等が用いられ、これに加えて着色剤、矯味剤、安定化剤、保存剤、滑沢剤等を添加しても良い。 As an agent for preventing or treating inflammatory bowel disease according to the present invention, butyric acid bacteria and component powders can be used without formulation, but powders, granules, fine granules, tablets, sugar-coated tablets, capsules, enteric It may be formulated into a coating agent or the like. Diluents include excipients, binders, disintegrants, etc. used in general pharmaceutical preparations. In addition, coloring agents, flavoring agents, stabilizers, preservatives, lubricants, etc. are added. You may do it.

以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention in detail, this invention is not limited to this.

［実施例１］大腸炎に対する酪酸菌及びセロビオースの効果
〔実験群〕
ラット（Ｗｉｓｔａｒ系８週齢オス（ＳＬＣ））をＡ群、Ｂ群、Ｃ群、ＢＴ群およびコントロール群の５つの実験群に分けた。
Ｃｏｎｔｒｏｌ群（６匹）：生理食塩水
ＢＴ群（４匹）：宮入菌乾燥菌末６０ｍｇ
Ａ群（４匹）：宮入菌乾燥菌末６０ｍｇ＋セロオリゴ糖１５ｍｇ
Ｂ群（４匹）：宮入菌乾燥菌末６０ｍｇ＋セロオリゴ糖６０ｍｇ
Ｃ群（４匹）：宮入菌乾燥菌末６０ｍｇ＋セロオリゴ糖１５０ｍｇ
尚、宮入菌乾燥菌末、セロオリゴ糖としては、下記のものを使用した。
・宮入菌乾燥菌末：クロストリジウム・ブチリカム・ミヤイリ５８８（ＦＥＲＭＢＰ−２７８９）、生菌数１×１０⁷／６０ｍｇ〜１×１０⁸／６０ｍｇ
・セロオリゴ糖：セロビオース９６重量％、グルコース２重量％およびセロトリオース２重量％からなるもの。 [Example 1] Effects of butyric acid bacteria and cellobiose on colitis [Experimental group]
Rats (Wistar 8 week old males (SLC)) were divided into five experimental groups: group A, group B, group C, group BT and control group.
Control group (6 animals): Physiological saline BT group (4 animals): Miyamybe bacteria dry 60 mg
Group A (4 animals): Miyairi bacteria dry bacteria powder 60mg + cellooligosaccharide 15mg
Group B (4 animals): Miyairibe dry powder 60mg + cellooligosaccharide 60mg
Group C (4 animals): Miyairibe dry powder 60 mg + cellooligosaccharide 150 mg
In addition, the following were used as dry powder of Miyairi-bacilli and cellooligosaccharides.
· Miyairi bacteria dried bacterial powder: Clostridium butyricum MIYAIRI 588 (FERM BP-2789), the number of viable bacteria ^{1 × 10 7 / 60mg~1 × 10} 8 / 60mg
Cellooligosaccharide: A composition comprising 96% by weight of cellobiose, 2% by weight of glucose and 2% by weight of cellotriose.

〔投与方法〕
ＢＴ群、Ａ群、Ｂ群、Ｃ群は、デキストラン硫酸ナトリウム（ＤＳＳ）投与前１週間から、上記組成の投与組成物を１匹／１回／日で１６日間投与した。Ｃｏｎｔｒｏｌ群は生理食塩水を同様に投与した。すべての実験区について、３％ＤＳＳ液を投与組成物の投与後７日目から、８日間自由飲水投与させ、大腸炎を誘発した。餌もすべての実験区において共通とし、マウス、ラット、ハムスター用の飼育繁殖用飼料ＣＬＥＡＲｏｄｅｎｔＤｉｅｔＣＥ−２（日本クレア）を自由摂取させた。解剖後、大腸の重量、長さ、ビラン面積を測定した。尚、ＣＬＥＡＲｏｄｅｎｔＤｉｅｔＣＥ−２の使用原材料は以下の通りである：大豆粕、ホワイトフィッシュミール、酵母、胚芽、大豆油、フスマ、脱脂米ヌカ、アルファルファミール、小麦粉、トウモロコシ、マイロ、ビタミン類、ミネラル類。
各実験区におけるそれぞれの結果を図１、図２、図３に示す。 [Method of administration]
In the BT group, the A group, the B group, and the C group, the administration composition having the above composition was administered for 16 days at 1 mouse once / day from 1 week before dextran sulfate sodium (DSS) administration. In the Control group, physiological saline was similarly administered. In all experimental groups, 3% DSS solution was given free drinking for 8 days from the 7th day after administration of the administration composition to induce colitis. The food was also common in all experimental groups, and the breeding and breeding feed CLEA Rodent Diet CE-2 (Claire Japan) for mice, rats and hamsters was freely ingested. After dissection, the weight, length, and villain area of the large intestine were measured. The raw materials used for CLEA Rodent Diet CE-2 are as follows: soybean meal, white fish meal, yeast, germ, soybean oil, bran, defatted rice bran, alfalfa meal, flour, corn, milo, vitamins, minerals Kind.
The respective results in each experimental section are shown in FIG. 1, FIG. 2, and FIG.

〔試験結果〕
各実験区を構成する個体の大腸の長さ、大腸の重さ、ビラン面積の測定結果は、下記のカッコ内に列挙する通りであった。また、各測定項目の、各実験区における平均値をグラフ化したものを図１、図２、図３に示す。〔Test results〕
The measurement results of the length of the large intestine, the weight of the large intestine, and the villan area of the individuals constituting each experimental group were as listed in parentheses below. Moreover, what plotted the average value in each experimental section of each measurement item in a graph is shown in FIG.1, FIG.2, FIG.3.

大腸の長さ（ｃｍ）（図１）
Ｃｏｎｔｒｏｌ群（１４．０，１６．０，１４．０，１６．０，１５．５，１７．０）
ＢＴ群（１６．０，１５．０，１６．５，１５．０）
Ａ群（１５．５，１７．０，１５．０，１７．０）
Ｂ群（１５．５，１４．０，１５．０，１７．５）
Ｃ群（１３．０，１６．５，１４．０，１４．０） Large intestine length (cm) (Figure 1)
Control group (14.0, 16.0, 14.0, 16.0, 15.5, 17.0)
BT group (16.0, 15.0, 16.5, 15.0)
Group A (15.5, 17.0, 15.0, 17.0)
Group B (15.5, 14.0, 15.0, 17.5)
Group C (13.0, 16.5, 14.0, 14.0)

大腸の重さ（ｇ）（図２）
Ｃｏｎｔｒｏｌ群（１．３０，１．６７，１．６９，１．９５，１．５９，２．２６）
ＢＴ群（１．６１，１．６５，１．７０，１．４０）
Ａ群（１．４７，２．０２，１．７２，１．５１）
Ｂ群（１．４４，１．６４，２．００，２．０９）
Ｃ群（１．９０，１．９５，１．４８，２．００） Large intestine weight (g) (Figure 2)
Control group (1.30, 1.67, 1.69, 1.95, 1.59, 2.26)
BT group (1.61, 1.65, 1.70, 1.40)
Group A (1.47, 2.02, 1.72, 1.51)
Group B (1.44, 1.64, 2.00, 2.09)
Group C (1.90, 1.95, 1.48, 2.00)

ビラン面積（ｃｍ²）（図３）
Ｃｏｎｔｒｏｌ群（９．７８，９．６９，１１．７６，１２．４３，６．７６，−．−）
ＢＴ群（７．３４，９．７８，９．３９，６．９８）
Ａ群（６．８３，６．５０，６．３９，９．０４）
Ｂ群（９．９７，８．６１，７．７７，１４．２６）
Ｃ群（６．３９，１３．９３，１６．４７，１０．１２） Erosion area (cm ²⁾ (Figure 3)
Control group (9.78, 9.69, 11.76, 12.43, 6.76,-.-)
BT group (7.34, 9.78, 9.39, 6.98)
Group A (6.83, 6.50, 6.39, 9.04)
Group B (9.97, 8.61, 7.77, 14.26)
Group C (6.39, 13.93, 16.47, 10.12)

一般に大腸に潰瘍が形成されると長さが縮み、重量が大きくなる。大腸の重量については、各群で有意差は見られなかったものの（図２）、大腸長さについては、Ａ群で増加傾向が見られた（図１）。ビラン面積は、Ａ群はＣｏｎｔｒｏｌ群と比較して有意に減少しており（ｐ＜０．０５）、また、他の実験群と比較して大幅に減少していた（図３）。このことから、酪酸菌（クロストリジウム・ブチリカム・ミヤイリ５８８）とセロオリゴ糖との所定の重量比での組み合わせが、大腸炎の予防、治療に有効であることが実証された。 In general, when an ulcer is formed in the large intestine, the length decreases and the weight increases. Although no significant difference was observed in each group regarding the weight of the large intestine (FIG. 2), an increasing tendency was observed in the A group regarding the length of the large intestine (FIG. 1). The villan area was significantly decreased in the A group compared to the Control group (p <0.05), and significantly decreased compared to the other experimental groups (FIG. 3). From this, it was demonstrated that the combination of butyric acid bacteria (Clostridial butyricum Miyari 588) and cellooligosaccharide at a predetermined weight ratio is effective for the prevention and treatment of colitis.

［参考例１］宮入菌のセロオリゴ糖資化性
宮入菌（酪酸菌）のセロオリゴ糖資化性について他の腸内細菌と比較した。
供試菌株は、宮入菌（ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｂｕｔｙｒｉｃｕｍＭＩＹＡＩＲＩ５８８（ＦＥＲＭＢＰ−２７８９））、枯草菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓＪＣＭ２４９９）、ビフィズス菌（ＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓＪＣＭ１２７５）、乳酸菌（ＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉＪＣＭ１１３４）の４菌株とした。 [Reference Example 1] Utilization of cellooligosaccharides of Miya-Iri bacteria The utilization of cellooligosaccharides of Miya-Iri bacteria (butyric acid bacteria) was compared with other enteric bacteria.
The test strains were Miyairi bacteria (Clostridium butyricum MIYAIRI 588 (FERM BP-2789)), Bacillus subtilis (JCM 2499), Bifidobacteria JCM1275, Bifidobacterium cLactobacillus JCM1275.

供試培地は、下記の基礎培地にセロオリゴ糖（セロビオース９６重量％、グルコース２重量％、セロトリオース２重量％）を１重量％添加しｐＨ７．０に調整したもの（ＰＹＣ培地）を用いた。 The test medium used was the following basal medium with 1% by weight of cellooligosaccharide (96% by weight of cellobiose, 2% by weight of glucose, 2% by weight of cellotriose) adjusted to pH 7.0 (PYC medium).

（基礎培地）ＰＹ培地
Ｐｅｐｔｏｎ０．５ｇ
Ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ０．５ｇ
Ｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ１．０ｇ
Ｓａｌｔｓｓｏｌｕｔｉｏｎ４．０ｍｌ
Ｄｉｓｔｉｌｌｅｄｗａｔｅｒ１００．０ｍｌ
Ｈｅｍｉｎｓｏｌｕｔｉｏｎ１．０ｍｌ
ＶｉｔａｍｉｎＫ₁ ０．０２ｍｌ
ＣｙｓｔｅｉｎｅＨＣｌ−Ｈ_２Ｏ０．０５ｇ (Basic medium) PY medium Pepton 0.5g
Trypticase 0.5g
Yeast extract 1.0g
Salts solution 4.0ml
Distilled water 100.0ml
Hemin solution 1.0ml
Vitamin K ₁ 0.02ml
Cysteine HCl-H ₂ O 0.05 g

前培養した各菌株を、初発菌数が約１０⁵ＣＦＵ／ｍｌとなるようにＰＹＣ培地に接種した。対照としてＰＹ培地に接種した。宮入菌、ビフィズス菌、乳酸菌は嫌気培養し、枯草菌は好気培養と嫌気培養をした。培養温度は３７℃とした。尚、各菌の前培養については、以下の通りである。宮入菌は、ＧＡＭｂｒｏｔｈに接種後、３７℃で６時間培養した。枯草菌、ビフィズス菌、乳酸菌は、ＧＡＭｂｒｏｔｈに接種後、３７℃で１６時間培養した。 Each pre-cultured strain was inoculated into a PYC medium so that the initial bacterial count was about 10 ⁵ CFU / ml. PY medium was inoculated as a control. The Miyairi, Bifidobacteria and lactic acid bacteria were anaerobically cultured, and Bacillus subtilis were aerobically and anaerobically cultured. The culture temperature was 37 ° C. In addition, about the preculture of each microbe, it is as follows. Miya inoculum was cultivated at 37 ° C. for 6 hours after inoculation into GAM broth. Bacillus subtilis, bifidobacteria and lactic acid bacteria were inoculated into GAM broth and cultured at 37 ° C. for 16 hours.

セロオリゴ糖を代謝したときに産生される有機酸の産生量によって各菌株の資化性を比較した。培養開始から０，６，１２，２４，４８時間後にサンプルを採取しＨＰＬＣによって有機酸を測定した。ＰＹＣ培地中の有機酸から同じ培養時間のＰＹ培地中の有機酸を引いたものを算出し、有機酸の産生量とした。表１に、それぞれ培養開始から一定時間（６時間、１２時間、２４時間、４８時間）後の各細菌による有機酸産生量（ｍＭ）を示した。 The assimilation of each strain was compared by the amount of organic acid produced when cellooligosaccharide was metabolized. Samples were taken 0, 6, 12, 24, and 48 hours after the start of the culture, and organic acids were measured by HPLC. The amount of organic acid produced was calculated by subtracting the organic acid in the PY medium at the same incubation time from the organic acid in the PYC medium. Table 1 shows the amount of organic acid produced (mM) by each bacterium after a certain period of time (6 hours, 12 hours, 24 hours, 48 hours) from the start of culture.

参考例２酪酸菌の難消化性オリゴ糖類利用能
酪酸菌のさまざまな難消化性オリゴ糖類の利用能を、ｉｎｖｉｔｒｏで検討した。 Reference Example 2 Utilization ability of indigestible oligosaccharides of butyric acid bacteria The utilization ability of various indigestible oligosaccharides of butyric acid bacteria was examined in vitro.

〔試験方法〕
下記の組成からなる培地に下記のオリゴ糖類を１種類１．０ｇ加えｐＨ７．２に調整し、滅菌してから使用した。〔Test method〕
1.0 g of the following oligosaccharides were added to a medium having the following composition, adjusted to pH 7.2, and sterilized before use.

（培地組成）
・バクトペプトン１．０g
・酵母エキス１．０ｇ
・Ｓａｌｔｓｓｏｌｕｔｉｏｎ４．０ｍｌ
・システイン０．０５ｇ
・水１００ｍｌ (Medium composition)
・ Bacto peptone 1.0g
・ Yeast extract 1.0g
・ Salts solution 4.0ml
・ Cysteine 0.05g
・ Water 100ml

（使用したオリゴ糖類）
・セロオリゴ糖（セロビオース９６重量％、グルコース２重量％、セロトリオース２重量％）
・フラクトオリゴ糖（和光純薬工業（株））
・ガラクトオリゴ糖（オリゴメイト；ヤクルト薬品工業(株)） (Oligosaccharides used)
Cellooligosaccharide (cellobiose 96% by weight, glucose 2% by weight, cellotriose 2% by weight)
・ Fructooligosaccharide (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
・ Galactooligosaccharide (Oligomate; Yakult Pharmaceutical Co., Ltd.)

〔試験方法〕
Ｃ．ｂｕｔｙｒｉｃｕｍＭＩＹＡＩＲＩ５８８（ＣＢＭ５８８）（ＦＥＲＭＢＰ−２７８９）のコロニーを、上記オリゴ糖類を加えた培地１０ｍｌに接種し３７℃４８時間嫌気培養した。培養は３回行った。そして、培養液を６０００ｒｐｍ１０分間遠心し、上清を０．５μｍのメンブレンフィルターで濾過した後、液体クロマトグラフィー（有機酸分析システム；島津製作所）で分析した。〔Test method〕
C. A colony of butyricum MIYAIRI 588 (CBM588) (FERM BP-2789) was inoculated into 10 ml of the medium to which the oligosaccharide was added, and anaerobically cultured at 37 ° C. for 48 hours. The culture was performed three times. Then, the culture solution was centrifuged at 6000 rpm for 10 minutes, and the supernatant was filtered through a 0.5 μm membrane filter and then analyzed by liquid chromatography (organic acid analysis system; Shimadzu Corporation).

〔結果〕
表２にＣＢＭ５８８が産生した有機酸濃度を示した。全ての培地でＣＢＭ５８８が増殖し有機酸を産生していた。また、有機酸の中では、フラクトオリゴ糖を添加した培地を除いてはどのオリゴ糖を添加した培地でも、酪酸が最も多く産生され、とりわけセロオリゴ糖が酪酸の産生量が一番多かった。〔result〕
Table 2 shows the concentration of organic acid produced by CBM588. CBM588 grew and produced organic acids in all media. In addition, among organic acids, butyric acid was most produced in any medium added with any oligosaccharide except for a medium containing fructooligosaccharide, and cellooligosaccharide produced the largest amount of butyric acid.

図４に、ＣＢＭ５８８が産生した有機酸の割合を示した。有機酸全体に占める酪酸産生量の割合は、フラクトオリゴ糖を添加した培地を除いてはどのオリゴ糖を添加した培地でも一番多く、中でもセロオリゴ糖が６０％近くと突出して多かった。 FIG. 4 shows the ratio of organic acids produced by CBM588. The ratio of the amount of butyric acid produced in the total organic acid was the highest in any medium added with any oligosaccharide except for the medium added with fructooligosaccharide, with cello-oligosaccharide protruding as close to 60%.

以上の結果から、ＣＢＭ５８８は、今回使用した全ての難消化性オリゴ糖類を炭素源として利用し代謝産物である有機酸を産生することができ、特にセロオリゴ糖を炭素源とすると、他のオリゴ糖を炭素源とするよりも酪酸を多く生産することが明らかとなった。 From the above results, CBM588 can produce all of the indigestible oligosaccharides used this time as a carbon source to produce organic acids that are metabolites. In particular, when cellooligosaccharide is used as a carbon source, other oligosaccharides can be produced. It was revealed that more butyric acid was produced than when using as a carbon source.

図１は、実施例１における各実験区の大腸の重量の平均値を示す図である。FIG. 1 is a graph showing the average value of the weight of the large intestine in each experimental group in Example 1. 図２は、実施例１における各実験区の大腸の長さの平均値を示す図である。FIG. 2 is a diagram showing an average value of the length of the large intestine in each experimental section in Example 1. 図３は、実施例１における各実験区の大腸のビラン面積の平均値を示す図である。FIG. 3 is a diagram showing the average value of the villain area of the large intestine in each experimental section in Example 1. 図４は、参考例２におけるＣＢＭ５８８の有機酸の産生割合を示す図である。4 is a graph showing the production rate of organic acid of CBM588 in Reference Example 2. FIG.

Claims

A prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease comprising cellooligosaccharide in a proportion of 0.05 to 1 part by weight per 1 part by weight of butyric acid bacteria.

The prophylactic / therapeutic agent for inflammatory bowel disease according to claim 1, wherein the butyric acid bacterium is Clostridium butyricum.