JP2008547035A - ネイティブゲル電気泳動用の液体状タンパク質マーカー - Google Patents
ネイティブゲル電気泳動用の液体状タンパク質マーカー Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008547035A JP2008547035A JP2008519489A JP2008519489A JP2008547035A JP 2008547035 A JP2008547035 A JP 2008547035A JP 2008519489 A JP2008519489 A JP 2008519489A JP 2008519489 A JP2008519489 A JP 2008519489A JP 2008547035 A JP2008547035 A JP 2008547035A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecular weight
- liquid
- marker set
- proteins
- weight marker
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/24—Extraction; Separation; Purification by electrochemical means
- C07K1/26—Electrophoresis
Abstract
Description
2005年10月7日に出願された本特許出願は、米国特許法§119(e)に従い、米国特許仮出願第60/694816号(2005年6月27日出願)及び第601724668号の優先権を主張し、それらの全開示内容が本発明に援用される。
本発明は広義には生体分子の分離に関し、具体的には生体分子の電気泳動分離用のスタンダードに関する。
最近のプロテオミクスに関する研究の急増により、新しく同定されたタンパク質の特性を解析し、タンパク質−タンパク質相互作用を研究するプロテオミクス研究領域の早期の発展に寄与するための、より多くのツールに対するニーズを生み出した。ネイティブ電気泳動は、この研究領域の研究者を支援するツールの1つである。他に類のない解像度電気泳動能力と組み合わせた、未変性タンパク質の形態及びタンパク質の複雑な四次構造を維持する能力により、この技術はタンパク質−タンパク質相互作用の分析のための強力なツールである。従来のネイティブ電気泳動は、トリス−グリシンシステムを使用した高いpH条件であるため、高pH条件感受性のタンパク質に悪影響を与えるおそれがあり、ゆえに未変性タンパク質分析でもごく限られた範囲でのみ適用されていた。より広い適用性を有し、中性付近での操作pHを特徴とする技術はSchaegger及びvon Jagow(1991)により開発され、ブルーネイティブ ポリアクリルアミドゲル電気泳動(Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis)(BN PAGE)と名づけられた。
本発明は、ネイティブ電気泳動のタンパク質分子量マーカーセットであって、当該分子量マーカーのセットが、異なる分子量を有する2つ以上のタンパク質の液状混合物である、上記セットの提供に関する。好ましい実施態様では、本発明のタンパク質分子量マーカーセットは、22℃の条件で、液状で少なくとも2ヵ月間安定である。若干の好ましい実施態様では、本発明のタンパク質分子量マーカーセットは、4℃の条件で、液状で少なくとも3ヵ月間安定である。若干の好ましい実施態様では、本発明のタンパク質分子量マーカーセットは、−20℃で凍結させた液体の状態で少なくとも1年安定である。若干の好ましい実施態様では、本発明のタンパク質分子量マーカーセットは、−20℃で凍結させた液体の状態で少なくとも3年間安定である。
定義
以下の説明では、組み換えDNA技術及びタンパク質化学の分野において使用する多くの用語が広範囲に使用される。かかる用語の範囲を含めた、本明細書及び特許請求の範囲を明確にかつ一貫して理解するために、以下の通り定義する。
本発明は、ネイティブゲル電気泳動用のタンパク質分子量マーカーセットであって、未変性タンパク質分子量マーカーセットが、異なる分子量を有する2つ以上の液状のタンパク質の混合物である当該セットの提供に関する。「液体状」という用語は、タンパク質のセットが溶液状態であることを意味するが、タンパク質分子量マーカーセットは凍結溶液として提供してもよい。異なる分子量を有する2つ以上のタンパク質の混合物は、非変性(ネイティブ)ゲルにおけるそれらの移動度が、それらの分子量と相関する態様で選択される。すなわち、ネイティブ分子量マーカーの全てのタンパク質セットでは、当該タンパク質セットはそれらの分子量の逆の順序の移動度を示し、すなわち、タンパク質セット中のより小さい分子量のタンパク質の移動度は、より大きな分子量のタンパク質よりも単位時間あたりで大きな移動距離を示す。好ましくは、非変性ゲル上の液状の未変性タンパク質マーカー中に含まれる少なくとも2つのタンパク質の移動度はそれらの分子量の関数であり、すなわち、ネイティブゲル電気泳動における液状の未変性タンパク質マーカーのセット中に含まれるタンパク質の移動度は分子量に対して(又は分子量の関数(例えば分子量の対数)として)プロットすることができ、また移動度対分子量の曲線及びその曲線を表す式は、0.9超好ましくは0.95超、より好ましくは0.97、0.98又は0.99超のR2値を有する態様で作成することができる。
液体状ネイティブ分子量マーカーセットは、所定の温度で所定の期間にわたり、1ロットのマーカーセットのアリコートの貯蔵後、当該マーカーセットを、以前試験したときに安定であるとされた他のロットのマーカーセットと共に、互いに隣接するレーンにおいてゲル電気泳動を行ったとき、+/−0.02のRf(滞留係数(Retardation Factor))単位の許容範囲内で、試験ロットのマーカーバンドのRf(移動度)と、以前安定であると判断されたロットの同じマーカーバンドが一致する態様として安定である(Rf単位は、個々のタンパク質の移動距離を、全ての移動距離で除した数値である)。
好ましくは、液体状ネイティブ分子量マーカーセットは、所定の温度で所定の期間にわたる貯蔵後、マーカーセットをゲル電気泳動にかけ、ゲルを染色し、更にスキャンして画像解析(デンシトメーター)を実施したとき、マーカー以外のいかなるバンドの強度(ピーク高)も、2つの隣接するマーカーバンドの弱い方(ピーク高が小さい方)の強度に対して20%以下である態様として安定である。
好ましくは、液体状ネイティブ分子量マーカーセットは、所定の温度で所定の期間にわたる貯蔵後、マーカーセットをゲル電気泳動にかけ、ゲルを染色し、マーカーセットの視覚による試験を行った場合に、これらの基準から安定であると判断された過去のロットの液体状ネイティブマーカーの性能と比較したときに、パフォーマンス(例えばバンド鋭さ)において他のいかなる顕著な相違も見出せない態様として安定である。
ネイティブゲル電気泳動の間、本発明の分子量マーカーセット中のタンパク質は、それらのネイティブにおける分子量の関数である速度で移動する。すなわち、本発明の未変性タンパク質液体マーカーを使用して、同じ電気泳動にかけられたタンパク質複合体又はタンパク質のネイティブにおける分子量を、サンプルのタンパク質マーカー及びタンパク質の移動距離を使用して推定することができる。例えば、電気泳動中にサンプルタンパク質が移動した距離を、電気泳動中に1つ以上のマーカータンパク質が移動した距離と比較して、サンプルタンパク質の相対的なサイズを測定することができる。他の例では、セットに含まれるタンパク質の分子量(又は分子量の関数)は、ネイティブゲルによる液体状タンパク質マーカーセットの電気泳動により得られたそれらの移動距離の直接的又は間接的な関数としてプロットすることができる。例えば、セットに含まれるタンパク質の分子量の対数を、ネイティブゲルによる液体状タンパク質マーカーセットの電気泳動により得られたそれらの移動距離の直接的又は間接的な関数としてプロットすることができる。得られる曲線を使用して、同じゲルのその移動距離から、サンプルタンパク質の推定分子量を測定することができる。一例を挙げると、タンパク質分子量マーカーセットの各タンパク質の分子量の対数は、移動距離の関数としてプロットすることができ、1つ以上のサンプルタンパク質又はタンパク質複合体のネイティブにおける分子量は、得られるネイティブにおける分子量マーカー曲線及び同じゲルで電気泳動させた1つ以上のサンプルタンパク質又はタンパク質複合体の移動距離を使用して推定することができる。
本発明は、未変性タンパク質分子量マーカーセット用のタンパク質であって、1)4℃で少なくとも1ヶ月間の安定性を示し、2)−20℃で少なくとも1年間の安定性を示し、及び3)トリス−グリシン及びブルーネイティブゲルシステムで電気泳動したときにシャープ(非拡散)なバンド解像度を示すタンパク質の提供に関する。当該タンパク質には、ウシ血清から単離したIgM、ウマの脾臓から単離したアポフェリチン、B−フィコエリトリン、ブタの心臓から単離した乳酸デヒドロゲナーゼ、ウシ血清アルブミン、及びダイズトリプシン阻害剤を含有することが確認されている。ネイティブの形態のこれらのタンパク質の分子量を表1に示す。
表1:液体状未変性マーカーセットのタンパク成分
液体状ネイティブマーカーセットはキットとして販売してもよく、当該キットは2つ以上のタンパク質を含有する液体状混合物としての未変性タンパク質分子量マーカーを含む少なくとも1つのチューブ又はバイアルを有する。チューブ又はバイアルには、5μL〜5mLの液体ネイティブマーカー(例えば10μL〜2.5mL、例えば25μL〜1mL又は100μL〜500μL)が含まれていてもよい。
本発明の具体的態様は、商品流通を利用して販売される商品である液体状未変性タンパク質マーカーセットの提供に関する。商品は通常、ラベルを付与し及び/又はキットとして販売される。液体状未変性タンパク質マーカーセットは、供給業者(例えば営利を目的とする事業体)により顧客に販売される。好ましい態様の商品は、レディー・トゥー・ユース(ready−to−use)型の市販用の調製物であり、溶液中の未変性タンパク質スタンダードセットに含まれる少なくとも2つのタンパク質が凍結状態若しくは液体状態で商業的供給業者からユーザに提供される。市販用の分子量マーカーセットは、適当な緩衝液中に適当な濃度で調製してもよく、特に少なくとも一部の液体状タンパク質分子量マーカーセットがゲルに直接ロードできる態様が好ましい。
以下の濃度で、表1に示したタンパク質を含有する液体状未変性タンパク質マーカーセットを調製した。1mg/mLのIgM、0.4mg/mLのアポフェリチン、0.32mg/mLのB−フィコエリトリン、0.3mg/mLの乳酸デヒドロゲナーゼ、0.2mg/mLのBSA及び0.5mg/mLのダイズトリプシン阻害剤。液体状ネイティブマーカーセット(LNM)を、3つの異なるゲルシステムにより電気泳動させた。それぞれ、マーカー調製物(50mMのBisTris/HCl(pH7.0)、50mMのNaCl、10%w/vグリセロール、0.001%のポンソーS)を5μLずつゲルに直接ロードした。図1Aは、異なるゲルシステムで電気泳動し、クーマシー(登録商標)G−250色素(Colloidal Blue Staining Kit、Invitrogen、カールズバッド、CA)で染色した液体状ネイティブマーカーセットを示す。最も左のレーンは、マーカーセットを4−16%のブルーネイティブアクリルアミドゲルで電気泳動させたときの結果を示す。中間のレーンは、マーカーセットを3−12%のブルーネイティブアクリルアミドゲルで電気泳動させたときの結果を示す。ブルーネイティブゲルの場合、50mMのビストリス、50mMのトリシンを含む緩衝液を用い、90分間、150V(一定)で電気泳動を行った。最も右のレーンは、約9.3の操作pHにてマーカーを4−12%のトリスグリシンゲルで電気泳動させたときの結果を示す。トリスグリシンゲルの場合、25mMのトリス、192mMのグリシンを含む緩衝液を用い、111分間、125V(一定)で電気泳動を行った。
実施例1と同様に調製した液体状未変性タンパク質マーカーセット(LNM)を、市販のマーカーセット(凍結乾燥形態で顧客に提供される「HMWマーカー」)と一緒に、3−12%のブルーネイティブ(BN)ゲルで電気泳動させた。得られたHMWマーカーからのタンパク質におけるMW対Rfの対数プロット線、及び液体ネイティブマーカー(非染色)未変性タンパク質スタンダードを図3に示す。スタンダード曲線は最適な二次多項式として作成した。HMWマーカー曲線の方程式は以下の通りである。y=1.7281x2+0.864x+3.1126;LNMセットの方程式は以下の通りである。y=0.1309x2−2.2903x+3.7427。市販のマーカーセットのR二乗値は0.9746であった。実施例1のLNMセットのR二乗値は0.994であった。
3−12%及び4−16%のブルーネイティブゲルを用い、実施例1にて説明した本発明の新規な液体状ネイティブマーカーのロットを、実施例1に記載の組成を有する、以前に試験を通過したLNMのロットと隣りあわせで電気泳動(1レーン当り5μL)させた。Colloidal Blue Stainingキットによる染色後、ゲルを300dpiのtiff画像としてスキャンし、色及びグレイスケール画像として保存した。画像分析(デンシトメトリ)を実施し、移動(Rf)及びピーク高の値を、サンプルレーンで検出されるすべてのバンドに関してTotalLabソフトウェアにより算出した。LNMのためのQC仕様を、以下のように規定した:
移動:新規ロットのマーカーバンドのRfが、隣接するレーンにロードした、以前に試験を通過したロットのマーカーバンドにおけるRf単位と、許容度+/−0.02Rfで一致すること、
マイナーなバンド:いかなる非マーカーバンドのピーク高も、それに隣接する2つのマーカーバンドのピーク高の小さい方に対して20%以下であること、
視覚:以前に試験を通過したロット比較し、新規なロットの視覚試験で、いかなる顕著なパフォーマンスの相違も見られないこと。
Claims (90)
- 異なる分子量を有し、ネイティブの立体構造を有する、少なくとも2つのタンパク質を含有する溶液を含み、
非変性ゲルにおけるマーカーセットのタンパク質の移動度がそれらの分子量の関数であり、液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットのタンパク質が−20℃で少なくとも1ヶ月間安定である、
ネイティブ電気泳動用の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。 - 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが商品である、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットがレディー・トゥー・ユース(ready−to−use)型の市販調製物である、請求項2記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質が、溶液中で4℃で少なくとも1ヶ月間安定である、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質が、溶液中で−20℃で少なくとも1年間安定である、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがプロテアーゼ阻害剤である、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記プロテアーゼ阻害剤がトリプシン阻害剤である、請求項6記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記プロテアーゼ阻害剤がダイズトリプシン阻害剤である、請求項7記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが少なくとも1つの発色団又は少なくとも1つのフルオロフォアを含む、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが1つの発色団を含む、請求項9記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも1つのタンパク質がフィコシアニン、アロフィコシアニン又はフィコエリトリンである、請求項10記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも1つのタンパク質がB−フィコエリトリンである、請求項11記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが、700kDa超の天然の分子量を有する、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがアポフェリチンである、請求項13記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記アポフェリチンがウマ由来のアポフェリチンである、請求項14記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが、少なくとも1MDaの分子量を有する、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがIgMである、請求項16記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- IgMがウシ血清由来のIgMである、請求項17記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが乳酸デヒドロゲナーゼである、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 乳酸デヒドロゲナーゼがブタ由来の乳酸デヒドロゲナーゼである、請求項19記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがウシ血清アルブミン(BSA)である、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 異なる分子量を有する少なくとも3つのタンパク質を含む、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 異なる分子量を有する少なくとも4つのタンパク質を含む、請求項22記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 異なる分子量を有する少なくとも5つのタンパク質を含む、請求項23記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 異なる分子量を有する少なくとも6つのタンパク質を含む、請求項24記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- IgM、アポフェリチン、B−フィコエリトリン、乳酸デヒドロゲナーゼ、BSA及びダイズトリプシン阻害剤を含む、請求項25記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが、4℃で少なくとも1ヶ月の貯蔵寿命を示す、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記溶液が抗菌剤を含む、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 前記溶液が変性作用を有する界面活性剤以外の界面活性剤を含む、請求項1記載の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット。
- 異なる分子量を有し、ネイティブの立体構造を有する少なくとも2つのタンパク質を含有する溶液を含む液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを含む容器であって、非変性ゲルにおける前記少なくとも2つのタンパク質の移動度がそれらの分子量の関数であり、前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが4℃で少なくとも1ヶ月間安定である、容器、および、
液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット及び/又は少なくとも1つのネイティブゲル試薬を含む第二容器であって、前記少なくとも1つのネイティブゲル試薬が、クーマシーG−250色素、非変性サンプル緩衝液、変性作用を有さない界面活性剤、又は事前成型非変性ゲルである、第二容器
を含む、キット。 - 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット中の前記少なくとも2つのタンパク質の各々が、0.05mg/mL〜2mg/mLの濃度で存在する、請求項30記載のキット。
- 液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを含む少なくとも2つの容器を含む、請求項30記載のキット。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが3つ以上の容器により提供される、請求項32記載のキット。
- 異なる容器により提供される2つ以上の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを含み、前記2つ以上の液体状のタンパク質分子量マーカーセットの各々が異なるタンパク質のセットを含む、請求項33記載のキット。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを含む容器と事前成型非変性ゲルとを含む、請求項30記載のキット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがプロテアーゼ阻害剤である、請求項30記載のキット。
- 前記プロテアーゼ阻害剤がトリプシン阻害剤である、請求項36記載のキット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが発色団を含む、請求項30記載のキット。
- 前記少なくとも1つのタンパク質がB−フィコエリトリンである、請求項38記載のキット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが少なくとも1MDaの分子量を有する、請求項30記載のキット。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがIgMである、請求項40記載のキット。
- ネイティブ条件下で少なくとも1つのタンパク質の推定分子量若しくは相対分子量を測定する方法であって、
タンパク質を含むサンプルと、少なくとも2つのタンパク質の溶液を含有する液体状タンパク質分子量マーカーセットを含むサンプルとをネイティブゲルにアプライする段階(前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセット中のタンパク質は4℃で少なくとも1ヶ月間安定である)と、
ネイティブゲルにおいて前記サンプル及び前記液体状タンパク質分子量マーカーを電気泳動させる段階と、
前記サンプル中の1つ以上のタンパク質の移動を、液体状タンパク質分子量マーカーセット中の1つ以上のタンパク質と比較し、それによりネイティブ条件下で少なくとも1つのタンパク質の推定分子量若しくは相対分子量を測定する段階と
を含む、方法。 - 前記サンプル中の1つ以上のタンパク質の移動距離を、液体状タンパク質分子量マーカーセット中の2つ以上のタンパク質のうちの少なくとも2つの移動距離と比較して、前記1つ以上のタンパク質の推定分子量若しくは相対分子量を測定する、請求項42記載の方法。
- 前記サンプルが、非変性ゲルにおける、液体状タンパク質分子量マーカーセットとは別のウェル又はローディングゾーンにロードされる、請求項42記載の方法。
- レディー・トゥー・ユース(ready−to−use)型の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを提供し、可溶化又は更なる希釈を行わずに前記ネイティブゲルに直接アプライする、請求項42記載の方法。
- 前記アプライ段階の前に、顧客に前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーを凍結形態又は解凍された液状形態で出荷することを更に含む、請求項42記載の方法。
- 前記アプライ段階の前に、4℃で1ヵ月間液体状未変性タンパク質分子量セットを保存することを更に含む、請求項42記載の方法。
- ネイティブゲルへのアプライが、ネイティブのトリスグリシンゲルへのアプライ、ネイティブのトリス酢酸ゲルへのアプライ、又はブルーネイティブゲルへのアプライである、請求項42記載の方法。
- ネイティブゲルに、タンパク質を含有するサンプル、及び、異なる分子量を有する少なくとも3つのタンパク質の溶液を含む液体状タンパク質分子量マーカーセットを含有するサンプルをアプライすることを含む、請求項42記載の方法。
- ネイティブゲルに、タンパク質を含有するサンプル、及び、異なる分子量を有する少なくとも4つのタンパク質の溶液を含む液体状タンパク質分子量マーカーセットを含有するサンプルをアプライすることを含む、請求項42記載の方法。
- ネイティブゲルに、タンパク質を含有するサンプル、及び、異なる分子量を有する少なくとも5つのタンパク質の溶液を含む液体状タンパク質分子量マーカーセットを含有するサンプルをアプライすることを含む、請求項42記載の方法。
- ネイティブゲルに、タンパク質を含有するサンプル、及び、異なる分子量を有する少なくとも6つのタンパク質の溶液を含む液体状タンパク質分子量マーカーセットを含有するサンプルをアプライすることを含む、請求項42記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがプロテアーゼ阻害剤である、請求項42記載の方法。
- 前記プロテアーゼ阻害剤がトリプシン阻害剤である、請求項53記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが発色団を含む、請求項42記載の方法。
- 前記少なくとも1つのタンパク質がB−フィコエリトリンである、請求項55記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが、少なくとも1MDaの分子量を有する、請求項42記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがIgMである、請求項57記載の方法。
- 未変性タンパク質分子量スタンダードを販売することによって収入を得る方法であって、
a)異なる分子量を有し、ネイティブの立体構造を有する少なくとも2つのタンパク質を含有する溶液を含む、ネイティブ電気泳動用の液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを顧客に提供すること
を含む、方法。 - 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが4℃で少なくとも1ヶ月間安定である、請求項59記載の方法。
- b)前記顧客に、
前記液体状タンパク質分子量マーカーセット中の前記2つ以上のタンパク質の分子量、又は、
インターネットアクセスによって利用可能な、前記液体状タンパク質分子量マーカーセット中の前記2つ以上のタンパク質の分子量を提供するウェブサイトのワールドワイドウェブアドレス、
のうちの少なくとも1つが記載されている説明書を提供することと、
c)液体状タンパク質分子量マーカーセットの提供と引きかえに顧客から収入を受けることと
を更に含む、請求項59記載の方法。 - 前記顧客にウェブサイトを提供することを更に含み、前記顧客が前記ウェブサイトにアクセスすることにより前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを注文できる、請求項61記載の方法。
- 少なくとも2つのタンパク質を含有する溶液を含む液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを購入するための購入機能を顧客に提供することを含み、前記購入機能が液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを購入するために使用される、
収入を得る方法。 - 液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを購入することを更に含む、請求項63記載の方法。
- 前記提供が、購入機能及び液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットのいずれか又はその両方の供給業者により実施される、請求項63記載の方法。
- 前記顧客が、液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを購入するために購入機能を使用する、請求項63記載の方法。
- 前記購入機能が、電話システム及び/又はコンピュータに基づくシステムにより提供される、請求項66記載の方法。
- 前記購入機能がインターネットに基づくシステムにより提供される、請求項66記載の方法。
- 前記購入機能が非変性ゲルを購入するために更に使用される、請求項63記載の方法。
- 前記購入機能がクーマシーブルー染色液を購入するために更に使用される、請求項63記載の方法。
- 少なくとも2つのタンパク質を含有する溶液を含む液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを販売することを含む、収入を得る方法。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが、4℃で少なくとも1ヶ月の貯蔵寿命を示す、請求項71記載の方法。
- 対価を得るために顧客に、少なくとも2つのタンパク質を含有する溶液を含む液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットを販売することを含む、収入を得る方法。
- 前記対価が金銭である、請求項73記載の方法。
- 前記液体状タンパク質分子量マーカーセットが異なる分子量を有する少なくとも3つのタンパク質を含有する溶液を含む、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記液体状タンパク質分子量マーカーセットが異なる分子量を有する少なくとも4つのタンパク質を含有する溶液を含む、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記液体状タンパク質分子量マーカーセットが異なる分子量を有する少なくとも5つのタンパク質を含有する溶液を含む、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記液体状タンパク質分子量マーカーセットが異なる分子量を有する少なくとも6つのタンパク質を含有する溶液を含む、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがプロテアーゼ阻害剤である、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記プロテアーゼ阻害剤がトリプシン阻害剤である、請求項80記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが発色団を含む、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記少なくとも1つのタンパク質がB−フィコエリトリンである、請求項81記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つが、少なくとも1MDaの分子量を有する、請求項59、63、71又は73のいずれか1項記載の方法。
- 前記少なくとも2つのタンパク質の少なくとも1つがIgMである、請求項83記載の方法。
- 2つ以上のタンパク質を含有する溶液、及び、商品が液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットであることを示すラベルを含む、商品。
- 顧客に配送される、請求項85記載の商品。
- 4℃で少なくとも1ヶ月の貯蔵寿命を示す、請求項85記載の商品。
- 4℃で少なくとも1ヶ月の貯蔵寿命を示す、請求項85記載の商品。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットが、−20℃で少なくとも1年間安定である、請求項85記載の商品。
- 前記液体状未変性タンパク質分子量マーカーセットがレディー・トゥー・ユース(ready−to−use)型の調製物である、請求項85記載の商品。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US69481605P | 2005-06-27 | 2005-06-27 | |
US72466805P | 2005-10-07 | 2005-10-07 | |
PCT/US2006/025001 WO2007002676A2 (en) | 2005-06-27 | 2006-06-27 | Liquid protein markers for native gel electrophoresis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008547035A true JP2008547035A (ja) | 2008-12-25 |
Family
ID=37595981
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008519489A Pending JP2008547035A (ja) | 2005-06-27 | 2006-06-27 | ネイティブゲル電気泳動用の液体状タンパク質マーカー |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20070026479A1 (ja) |
EP (1) | EP1898938A4 (ja) |
JP (1) | JP2008547035A (ja) |
WO (1) | WO2007002676A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014042150A1 (ja) | 2012-09-13 | 2014-03-20 | 深江化成株式会社 | 保存方法及び保存容器 |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL2167951T3 (pl) * | 2007-06-20 | 2013-03-29 | Becton Dickinson Co | Metoda FFE wykorzystująca medium rozdzielające zawierające lotny bufor |
CN102648415A (zh) * | 2009-08-25 | 2012-08-22 | 生命技术公司 | 定量荧光蛋白标准品 |
GB201012417D0 (en) * | 2010-07-23 | 2010-09-08 | Cambridge Entpr Ltd | Capilary electrophoresis of carbohydrates |
WO2012149180A2 (en) | 2011-04-26 | 2012-11-01 | Life Technologies Corporation | Fluorescent tracking dye |
CN112767996B (zh) * | 2021-01-14 | 2022-11-15 | 吉林农业大学 | 一种辅助判定高凝胶性大豆分离蛋白数学模型的建立方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0753589A (ja) * | 1993-08-18 | 1995-02-28 | Fujitsu Ltd | 分子量マーカーの形成方法 |
US6265551B1 (en) * | 1995-06-01 | 2001-07-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Form of dipeptidylpeptidase IV (CD26) found in human serum, antibodies thereto, and uses thereof |
US20050103629A1 (en) * | 2003-10-07 | 2005-05-19 | Tom Diller | Isoelectric focusing gels and methods of use thereof |
JP2005530487A (ja) * | 2002-02-28 | 2005-10-13 | アンティジェニクス インコーポレーテッド | ストレスタンパク質のオリゴマー化に基づく方法および生成物 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4575452A (en) * | 1984-09-21 | 1986-03-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Kit for silver staining proteins and nucleic acids |
US4857474A (en) * | 1985-03-29 | 1989-08-15 | Research Corporation | Phycoerythrins useful in fluorescent conjugates |
US4844786A (en) * | 1987-02-26 | 1989-07-04 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Means for electrophoresis |
US5112952A (en) * | 1990-09-28 | 1992-05-12 | Pierce Chemical Company | Composition and method for isolation and purification of Immunoglobulin M |
US5985565A (en) * | 1996-10-09 | 1999-11-16 | Temple University-Of The Commonwealth System Of Higher Education | Chronic fatigue syndrome diagnosis |
US7153403B2 (en) * | 2002-04-19 | 2006-12-26 | Pagegel, Inc. | Protein market pellets and method of making and using the same |
EP1652925B1 (en) * | 2003-07-15 | 2010-12-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | IgM PRODUCTION BY TRANSFORMED CELLS AND METHODS FOR QUANTIFYING SAID IgM PRODUCTION |
WO2006004752A1 (en) * | 2004-06-29 | 2006-01-12 | The Cbr Institute For Biomedical Research, Inc. | Gelling electrophoresis loading buffer |
-
2006
- 2006-06-27 JP JP2008519489A patent/JP2008547035A/ja active Pending
- 2006-06-27 US US11/475,260 patent/US20070026479A1/en not_active Abandoned
- 2006-06-27 WO PCT/US2006/025001 patent/WO2007002676A2/en active Application Filing
- 2006-06-27 EP EP06774116A patent/EP1898938A4/en not_active Withdrawn
-
2014
- 2014-10-16 US US14/516,315 patent/US20150204815A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0753589A (ja) * | 1993-08-18 | 1995-02-28 | Fujitsu Ltd | 分子量マーカーの形成方法 |
US6265551B1 (en) * | 1995-06-01 | 2001-07-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Form of dipeptidylpeptidase IV (CD26) found in human serum, antibodies thereto, and uses thereof |
JP2005530487A (ja) * | 2002-02-28 | 2005-10-13 | アンティジェニクス インコーポレーテッド | ストレスタンパク質のオリゴマー化に基づく方法および生成物 |
US20050103629A1 (en) * | 2003-10-07 | 2005-05-19 | Tom Diller | Isoelectric focusing gels and methods of use thereof |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2014042150A1 (ja) | 2012-09-13 | 2014-03-20 | 深江化成株式会社 | 保存方法及び保存容器 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20070026479A1 (en) | 2007-02-01 |
EP1898938A4 (en) | 2010-01-27 |
US20150204815A1 (en) | 2015-07-23 |
EP1898938A2 (en) | 2008-03-19 |
WO2007002676A2 (en) | 2007-01-04 |
WO2007002676A3 (en) | 2007-06-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20150204815A1 (en) | Liquid protein markers for native gel electrophoresis | |
Dunbar | Two-dimensional electrophoresis and immunological techniques | |
Haslbeck et al. | Hsp42 is the general small heat shock protein in the cytosol of Saccharomyces cerevisiae | |
Krohn | The colorimetric detection and quantitation of total protein | |
Lopez | Two-dimensional electrophoresis in proteome expression analysis | |
Boivin et al. | Optimization of protein purification and characterization using Thermofluor screens | |
Iakoucheva et al. | Aberrant mobility phenomena of the DNA repair protein XPA | |
Sharp et al. | Analysis of protein solvent accessible surfaces by photochemical oxidation and mass spectrometry | |
Albani | Origin of tryptophan fluorescence lifetimes. Part 2: Fluorescence lifetimes origin of tryptophan in proteins | |
He et al. | Detection of IgG aggregation by a high throughput method based on extrinsic fluorescence | |
Pande et al. | Deamidation of human γS-crystallin increases attractive protein interactions: implications for cataract | |
Yount et al. | Visualization and identification of fatty acylated proteins using chemical reporters | |
Dyballa et al. | Fast and sensitive coomassie staining in quantitative proteomics | |
Haas | Ensemble FRET methods in studies of intrinsically disordered proteins | |
Moffatt et al. | Approaches towards the quantitative analysis of peptides and proteins by reversed-phase high-performance liquid chromatography in the absence of a pure reference sample | |
Taha et al. | Good's buffer ionic liquids as relevant phase‐forming components of self‐buffered aqueous biphasic systems | |
Suo et al. | The basis of asymmetry in the SecA: SecB complex | |
Wingfield | Use of protein folding reagents | |
Iwura et al. | Intermolecular interactions and conformation of antibody dimers present in IgG1 biopharmaceuticals | |
Ray et al. | FRAP and FRET Investigation of α-Synuclein Fibrillization via Liquid-Liquid Phase Separation In Vitro and in HeLa Cells | |
US20080145885A1 (en) | Proteome Standards for Mass Spectrometry | |
Suzuki et al. | Design and synthesis of a novel fluorescent protein probe for easy and rapid electrophoretic gel staining by using a commonly available UV‐based fluorescent imaging system | |
Rigden et al. | Polyanionic inhibitors of phosphoglycerate mutase: combined structural and biochemical analysis | |
Fatima et al. | Effect of polyethylene glycols on the function and structure of thiol proteases | |
Kern et al. | Characterization of a folding intermediate from HIV‐1 ribonuclease H |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090421 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110824 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20111122 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20111130 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20120502 |