JP2008545405A5

JP2008545405A5 -

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Publication number: JP2008545405A5
Application number: JP2008512951A
Authority: JP
Filing date: 2006-05-24
Publication date: 2009-07-16

Claims

Ｓｃａ１⁺細胞において遺伝子の発現を指示するプロモーターに機能的に結合されるヒト癌に関連する遺伝子異常によって作り出される及び／又は活性化される遺伝子を含むＤＮＡ構築物をそのゲノムに含有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物を含む、非ヒト動物固形腫瘍モデル。
前記固形腫瘍が間葉癌又は上皮癌である、請求項１記載の非ヒト動物モデル。
前記固形腫瘍が肉腫、癌腫、多発性骨髄腫又はリンパ腫である、請求項２記載の非ヒト動物モデル。
遺伝子異常により作り出される及び／又は活性化される前記遺伝子がＢＣＲ−ＡＢＬｐ２１０、ＢＣＲ−ＡＢＬｐ１９０、Ｓｌｕｇ（ＳＮＡＩ２）、Ｓｎａｉｌ、ＨＯＸ１１、ＲＨＯＭ２／ＬＭＯ−２、ＴＡＬ１、Ｍａｆ−Ｂ、ＦＧＦＲ、ｃ−ｍａｆ、ＭＭＳＥＴ、ＢＣＬ６、ＢＣＬ１０、ＭＡＬＴ１、ｃｙｃｌｉｎＤ１、ｃｙｃｌｉｎＤ３、ＳＣＬ、ＬＭＯ１、ＬＭＯ２、ＴＥＬ−ＡＭＬ１、Ｅ２Ａ−ＨＬＦ、Ｅ２Ａ−Ｐｂｘ１、ＴＥＬ−ＡＢＬ、ＡＭＬ１−ＥＴＯ、ＦＵＳ−ＤＤＩＴ３、ＥＷＳ−ＷＴ１、ＥＷＳＦＬＩ１、ＥＷＳＲ１−ＤＤＩＴ３、ＦＵＳ−ＡＴＦ１、ＦＵＳ−ＢＢＦ２Ｈ７、Ｋ−ＲＡＳｖ１２及びＮｏｔｃｈ１からなる群より選択される、請求項１〜３のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
Ｓｃａ１⁺細胞において遺伝子の発現を指示するプロモーターが、幹細胞区画でのみ活性であり、細胞が幹細胞の状態を越えて分化すると不活性である、請求項１〜４のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
プロモーターがｐＬｙ−６Ｅ．１プロモーター、Ｓｃａ１プロモーター、ｍｕｓａｓｈｉ−１プロモーター、ｍｕｓａｓｈｉ−２プロモーター、ｐＬｙ６Ａ遺伝子プロモーター、Ｔｍｔｓｐ遺伝子プロモーター、ｃ−ｋｉｔ遺伝子プロモーター、ＣＤ３４遺伝子プロモーター又はＴｈｙ１遺伝子プロモーターである、請求項５記載の非ヒト動物モデル。
遺伝子を活性化するためにリコンビナーゼが条件的に使用される条件系を使用する、請求項１〜６のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
リコンビナーゼがＣｒｅリコンビナーゼである、請求項７記載の非ヒト動物モデル。
前記活性化されうる遺伝子がＫＲＡＳｖ１２である、請求項１〜８のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
動物が肺腺癌又は肝癌を発症するＴ−ＡＬＬモデルである、請求項１〜９のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
活性化されうる遺伝子が、Ｒｈｏｍ２又はＨｏｘ１１である、請求項１０記載の非ヒト動物モデル。
動物が肺腺癌又は肝癌を発症するＢ細胞リンパ腫モデルである、請求項１〜１１のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
活性化されうる遺伝子がＢＣＬ６である、請求項１２記載の非ヒト動物モデル。
動物が肺腺癌（ＡＤＣ）、肝腺癌（ＡＤＣ）、線維性組織球腫、骨肉腫又はセルトリ細胞腫を発症するＣＭＬモデルである、請求項１〜１３のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
活性化されうる遺伝子がＢＣＲ−ＡＢＬ^p210である、請求項１４記載の非ヒト動物モデル。
多発性骨髄腫モデルである、請求項１〜１５のいずれか１項記載の非ヒト動物モデル。
活性化されうる遺伝子がＭａｆ−Ｂ、ＦＧＦ−Ｒ、ｃ−ｍａｆ及びＭＭＳＥＴからなる群より選択される、請求項１６記載の非ヒト動物モデル。
活性化されうる遺伝子がＭａｆ−Ｂである、請求項１６記載の非ヒト動物モデル。
癌幹細胞（ＣＳＣ）の実質的に純粋な培養物。
前記ＣＳＣがＳｃａ１⁺Ｌｉｎ−である、請求項１９記載の培養物。
前記ＣＳＣが癌、特に固形腫瘍を繁殖及び維持する潜在能力を有する、請求項２０記載の培養物。
請求項１〜１８のいずれか１項記載の動物モデルから単離される、請求項１９〜２１のいずれか１項記載の培養物。
選択的濃縮により請求項１〜１８のいずれか１項記載のトランスジェニックモデルからＳｃａ１⁺細胞を単離することを含む、請求項１９〜２２のいずれか１項記載の幹細胞の培養物を単離する方法。
培養中の癌幹細胞を少なくとも１つの選択される分化細胞型の細胞から産生される可溶化液の濃縮物に暴露し、濃縮物が、各々の分裂癌幹細胞が２つの同一の娘癌幹細胞を産生する対称有糸分裂か、又は非対称有糸分裂のいずれかを優先的に起こすことによって癌幹細胞を繁殖させることができることを含む、請求項１９〜２２のいずれか１項記載の幹細胞の培養物を繁殖させる方法。
以下：
・癌の過程を調査及び研究するため；
・ＣＳＣ個体群を同定、分類、単離、精製又は記述するため；
・被験者におけるヒト病理に関連する遺伝子異常によって作り出される及び／又は活性化される遺伝子の存在を検出するため；
・被験者においてヒト病理を発症する被験者の危険性又は素因を評価するため；
・被験者においてヒト病理のステージ又は重篤度を決定するため；
・被験者においてヒト病理を有する被験者に与えられる治療の効果をモニタリングするため；
・被験者においてヒト病理に罹患している被験者のために個別的な治療を設計するため；
・治療効果の治療的なモニタリング及び評価のため；
・ヒト臨床試験を設計するため及び臨床予後を予測するため；
・癌の診断、及び／又は癌播種のような癌進展の特別な過程及び影響の診断のため；
・個別化治療のための患者の選択のため；
・新たな将来の薬剤による薬剤再配置の確認のため；
・薬剤発見及び薬物動態指針のため；又は
・先行／早期癌検出のため及び臨床的再発の可能性を予測するため
のいずれか１つのための、請求項１〜１８のいずれか１項記載の非ヒト動物モデルの使用及び／又は請求項１９〜２２のいずれか１項記載のＣＳＣの培養物の使用。
被験者からの試料を請求項１９〜２２のいずれか１項記載のＣＳＣの存在のために試験することを含む、癌のために又は癌の素因に関して被験者をスクリーニングする方法。
ヒト固形腫瘍を治療する化合物を発見、スクリーニング、探索、同定、開発及び／若しくは評価する方法、又は薬剤を再配置する方法であって、候補化合物を、請求項１〜１８のいずれか１項記載の非ヒト動物モデルと、又は請求項１〜２２のいずれか１項記載のＣＳＣの培養物と接触させ、反応をモニタリングすることを含む方法。
ａ）候補作用物質の存在下でＣＳＣで発現される遺伝子の発現産物の発現レベルを検出すること；及び
ｂ）その発現レベルを候補作用物質の不在下での発現レベルと比較することを含み、発現の低減が、ＣＳＣで発現される遺伝子の発現産物の発現レベルを候補作用物質が調節したことを示す、請求項２７記載の方法。
固形腫瘍の発症に関連する遺伝子異常を有するトランスジェニック非ヒト哺乳動物の調製方法であって、
ａ）非ヒトトランスジェニック哺乳動物の受精卵母細胞に、Ｓｃａ１⁺細胞において遺伝子の発現を指示するプロモーターに機能的に結合される固形腫瘍の発症に関連する遺伝子異常によって作り出される及び／又は活性化される遺伝子を含むＤＮＡ構築物を導入すること；
ｂ）前記受精卵母細胞を、偽妊娠性の乳母に移植し、子孫を産生すること；及び
ｃ）前記子孫を分析すること、
を含む方法。
上記の請求項１記載のＤＮＡ構築物をマウスゲノムの確定した不活性座位内に導入することを含む、非ヒト動物モデルを生成する方法。
前記ＤＮＡ構築物がＥＳ細胞を介して相同組み換えにより導入される、請求項３０記載の方法。
前記ＤＮＡ構築物が、請求項５若しくは６記載のプロモーターを含む、及び／又は請求項７若しくは８記載のリコンビナーゼの使用を可能にする、請求項３０又は３１記載の方法。
請求項１９〜２１記載のＣＳＣに対して免疫反応を刺激する方法であって、
ａ）ＣＳＣの濃縮物個体群を得ること；
ｂ）個体群を処理して、細胞の分裂又は複製を防止すること；
ｃ）処置済み細胞を、癌及び／又はＣＳＣに対する免疫反応を誘発するのに有効な量で非ヒト動物被験者に与えること、
を含む方法。
請求項１９〜２２記載のＣＳＣの個体群を、ＣＳＣ標的及びバイオマーカーの供給源として遺伝子及びタンパク質発現パターンについて分析する方法。