JP2008526183A - ユーカリプツス・ウロフィラ(Eucalyptusurophylla)の形質転換および選択 - Google Patents
ユーカリプツス・ウロフィラ(Eucalyptusurophylla)の形質転換および選択 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2008526183A JP2008526183A JP2007540378A JP2007540378A JP2008526183A JP 2008526183 A JP2008526183 A JP 2008526183A JP 2007540378 A JP2007540378 A JP 2007540378A JP 2007540378 A JP2007540378 A JP 2007540378A JP 2008526183 A JP2008526183 A JP 2008526183A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- graft
- eucalyptus
- plant
- medium
- agrobacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
- C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
Abstract
Description
本発明は、木の細胞に外来性遺伝子を形質転換させ、かつそこから安定に形質転換された木を再生するための遺伝子型に非依存的な方法に関する。特に、本発明は、木の移植片からトランスジェニック植物を形質転換および発生するためのアグロバクテリウム媒介遺伝子形質移入方法を教示する。本明細書に記載される形質転換プロセスは、細胞分裂を刺激する前培養培地、およびシュート発生を加速するシュート生成培地を利用する。この形質転換プロセスから生成される植物が提供される。特に、本発明は、形質転換効率、ならびに選抜されかつ扱いにくいクローンからのシュート再生を増加させるための方法を提供する。本発明はまた、植物、特に森林樹を選択および再生するための培地、方法、およびプラスミドに関する。
2005年6月22日提出の米国特許出願第11/158,342号、および2004年11月5日提出の米国一部継続出願第10/981,742号。
植物の遺伝子操作は、商業的に重要な植物種の改善のための大きな潜在能力を提供してきた。近年、木の遺伝子操作が勢いを増し、パルプ産業および材木産業において特定の適用を見い出している。モミジバフウ(Sullivan and Lagrinini 1993)、ヨーロッパカラマツ(Huang et al. 1991)、ユリノキ(Wilde et al. 1992)、および多くのポプラ種(Minocha et al. 1986, Fillatti et al. 1988, De Block 1990,Brasileiro et al. 1992, Tsai et al. 1994)などの種のための、いくつかの確立された木の形質転換系が存在している。ポプラ属の種は木の遺伝子操作のためのモデル系として働く(Kim et al. 1997)。昆虫耐性および除草剤耐性などの種々の形質が、これらの種に操作されてきた(Klopfenstein et al. 1993, De Block 1990)。従って、木の種を遺伝子操作するための潜在能力は、商業的に重要な木の種(ユーカリ(ユーカリ属)を含む)にとって大きい。
本発明において、E.グランディスxE.ウロフィラ(E. urophylla)の移植片の少なくとも1つの細胞を外来性DNAで形質転換するための方法が意図され、この方法は、(i)アグロバクテリウムのインデューサーを含む培地上で木の移植片を前培養する段階;(ii)この外来性DNAを有する形質転換ベクターを含むアグロバクテリウム株にこの移植片を曝露する段階;(iii)形質転換された移植片を選択し、ここで、この外来性DNAがこの形質転換された移植片の少なくとも1つの細胞に移される段階;および(iv)この形質転換された移植片を再生して完全な植物を産生する段階を含む。好ましくは、アグロバクテリウムのインデューサーはアセトシリンゴンであり、このアセトシリンゴンの濃度は約10から約400mg/lまでである。また好ましくは、アセトシリンゴンの濃度は約5から約200mg/lまでであり、培地はさらにオーキシンおよび/またはサイトカイニンを含む。
本発明の遺伝子型に非依存性の木の形質転換方法は、選抜した遺伝子型を形質転換することで得られる、形質転換効率の低さを解消する。最も広範な局面において、本方法は、形質転換効率、ならびに扱いにくい種およびハイブリッドの木の移植片からのシュート再生を増加させることに関する。一つの局面において、本方法は、E.グランディス(E. grandis)xE. ウロフィラ(E. urophylla)のような、扱いにくい種およびハイブリッドの形質転換および再生効率の増加を提供する。形質転換効率の増加は、細胞分裂を刺激する培地上で移植片を前培養することによって果たされる。形質転換された移植片のシュートの再生頻度は、シュート再生を促進する培地上で移植片を培養することによって改善される。
実施例1-植物材料
全優良クローンを、マゼンタボックス(Magenta box)中でシュートの塊として維持し、4〜6週間毎にサブクローニングした。シュートの塊を、必要に応じて分け、保存培養として維持した。他に注記されない限り、全ての培養を、遮光した、寒色の蛍光下で、30〜40μE/m2/sの光強度で、16時間の光時間で増殖させた。成長室の温度は21℃である。選択したユーカリプツス・ドゥニークローンを別として、葉移植片を、全ての選択したクローンについて使用した。
以下の6つの構築物を、形質転換実験のために使用した:pWVZ20、pWVR133、pWVR31、pARB1001、pWVK192、およびp35SGUSIN。バイナリプラスミドpWVZ20は、T-DNAボーダー間に植物プロモーターによって駆動される除草剤耐性遺伝子、および構成的プロモーターによって駆動されるβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子を含む。バイナリプラスミドpWVR133は同じ除草剤耐性遺伝子構築物を含むが、GUS遺伝子はイントロンを含み、アクチンプロモーターによって駆動される。pWVR133のGUS発現は植物細胞のみで起こり、細菌細胞では起こらない。バイナリプラスミドpWVR31は、ユビキチン11プロモーターによって駆動されるイントロンを含むGUS遺伝子、およびユビキチン10プロモーター下にネオマイシンホスホトランスフェラーゼII遺伝子(NPTII)を有する。pWVK192は、pWVR31とおなじ選択可能なマーカー遺伝子からなるが、イントロンを含むGUS遺伝子は、良く発達した植物の木部および再生期において発現するプロモーターによって駆動される。p35SGUSINは、GUS遺伝子が35Sプロモーターによって駆動され、NPTII遺伝子がノパリンシンターゼプロモーター(NOSプロモーター)によって駆動される以外は、pWVR31と同じマーカー遺伝子からなる。
を用いて、PCRでpART27(Gleave、1992)から増幅させた。1.0kb ColE1断片をBamHIおよびBclIで消化して精製し、trfA遺伝子末端とT-DNAのレフトボーダー(LB)との間、pARB310BのBclIサイトに連結させた。これによりpAGF50が産生され、アグロバクテリウムで複製を続けながらも、大腸菌中に多コピー数のプラスミドが提供された。UBQ3プロモーターに加えてNPTIIコード領域のほとんどを除去するために、pAGF50をAscIおよびNcoIで消化し、得られた5.7kb断片をゲル精製した。NPTIIコード領域の5'末端に結合されたUBQ10プロモーターを有する1.9kb断片を、AscIおよびNcoIで消化でpWVR3から放出させ、ゲル精製し、pAGF50断片に連結させて、pARB1000を産生した。このプラスミドにSUBIN::GUSIN::NOSTERレポーターカセットを加えてさらに改変した。SUBINは、5'-UTRおよびイントロンをコードするゲノムDNAを含むP.ラディアータ(P. radiata)からのユビキチンプロモーター、米国特許第6,380,459号のSEQ ID NO: 2を指す。GUSINは、potato tuberin遺伝子(Vancanneyt et al., 1990)からのβグルクロニダーゼコード領域およびイントロンを指す。DraI消化によりレポーターカセットをpARB494から除去し、pARB1000のSmaIサイトに連結し、pARB1001を産生した。
pWVZ20、PWVR133、pWVR31、pWVK192、pARB1001、またはp35SGUSINのいずれか一つを含むアグロバクテリウムを、YEP培地(10g/l酵母抽出物、10g/lペプトン、および50mg/l NaCl、pH 7.0〜7.2)上で3日間成長させた。プレートから単一コロニーを選択し、100mg/l カナマイシンおよび50mg/l リファンピシンを有する20〜50mlの液体YEP培地中で成長させた。培養物を、28℃および150rpmにて、振盪インキュベーター中で一晩インキュベートした。約0.6〜1.1のODを有する一晩培養物を、3000gで20分間、卓上遠心分離機で遠心分離し、アグロバクテリウム誘導培地またはAIM(5g/lグルコース、250μMアセトシリンゴン、2mMリン酸緩衝液、および0.05M MES、pH 5.8を有するWPM塩)で再懸濁した。pARB1001ならびにクローン530および736による実験では、より低い光学濃度の0.4を標的とした。感染前に、培養物を28℃で25分間インキュベートした。感染前および感染後に、細菌濃度を測定した。
Euc維持培地上で維持したユーカリプツス保存培養を、移植片の供給源として使用した。葉、葉柄、節間組織、花組織、および胚形成組織を形質転換に使用できるが、以下の実施例では葉、葉柄、および節間組織移植片を用いた。その豊富さから、最も一般的に用いられた移植片は葉移植片であった。葉柄または節間移植片は、健康に根付いた植物からであった。健康かつ新たに開いた葉は、維持培地上のシュートの塊からであった。傷ついた細胞の数を増やすために、葉の先端部分をハサミまたは鉗子で取り除いた。移植片を前培養培地(表2)上に置き、葉移植片については背軸面を下にした。前培養培地は、アグロバクテリウム形質転換前に植物移植片が培養される栄養培地である。具体的には、本発明の前培養培地は形質転換効率および植物再生を増加する。本発明の前培養培地はアセトシリンゴンを含むが、他のアグロバクテリウムインデューサーを用いても良い。表2の前培養培地が、好ましい前培養培地であるが、他の塩培地、例えばMS培地(Murashige and Skoog、1962)、改変木本植物培地(WPM)、またはルポワヴレ培地を用いても良い。本発明において植物移植片は、表2に記載の前培養培地上で、暗所にて1日間または4日間前培養される。必要ではないが、本発明の前培養培地は上昇したレベルのオーキシンを含む。加えて、植物移植片を、アグロバクテリウム形質転換の1日〜6日前から前培養培地上で培養しても良い。
誘導アグロバクテリウム培養を、実施例3に記載のとおり調製し、培養物をピペットで各移植片上に滴下した。全ての切り口が細菌溶液で覆われていることを保証するために、十分なアグロバクテリウム培養物を滴下した。あるいは移植片を、真空浸透、floral dip法、およびその他のアグロバクテリウム媒介形質転換方法によって形質転換しても良い。形質転換に続いて、アグロバクテリウム培養物で覆われた移植片を、3日間または4日間の共培養のために暗所に置いた。あるいは、移植片をアグロバクテリウムと光条件下で共培養しても良い。加えて、移植片をアグロバクテリウムと光条件下または暗所条件下で2〜10日間、好ましくは3日間共培養しても良い。共培養に続いて、移植片を、400mg/lチメンチンを有するEuc再生培地(表3)に移した。移植片を洗浄する必要はない。移植片を選択培地に移す前に、この培地上で4日間培養した。本実施例において、選択培地はチメンチンおよび除草剤選択剤の両方を補充したEuc再生培地である。
選択によって残ったシュートの塊を、選択のために除草剤または抗生物質のいずれかを含み、アグロバクテリウム対照のためにチメンチンを含むEuc再生培地上に維持し、シュートが増殖しかつ最初に伸長するまで、3週間毎に移した。pWVR133およびpWVK192による形質転換実験のために、再生シュートからの葉および茎組織を、シュートが発生するとすぐ、GUS発現について染色した。pWVZ20による形質転換実験のために、再生シュートからの葉および茎組織を、シュートがさらに発達し、残渣のアグロバクテリウムを含まないときに、GUS発現について染色した。
アグロバクテリウム感染の頻度をモニターし、かつ選択されたシュートが逸出植物またはキメラではないことを保証するために、GUS染色を行った。pARB1001での形質転換実験のために、培養物を形質転換の4日後に染色した。pWVR133、pWVR31、pWVK192、およびp35SGUSINでの形質転換実験のために、再生シュートからの葉および茎組織を、シュートが発生するとすぐ、GUS発現について染色した。pWVZ20での形質転換実験のために、再生シュートからの葉および茎組織を、シュートがさらに発達し、残渣のアグロバクテリウムを含まないときに、GUS発現について染色した。GUS活性を測定するために、100mMリン酸緩衝液(pH7.0)、0.05%ジメチルスルホキシド、0.05%トリトンX-100、10mMEDTA、0.5mMフェロシアン化カリウム、および1.5mg/ml 5-ブロモ-4-クロロ-3-インドリル-β-D-グルクロニド(X-gluc)を含む基質中で移植片をインキュベートした。37℃で一晩インキュベートする前に、移植片を10分間真空に供した。一晩のインキュベーションに続いて、GUS焦点を数えた。以下の表6に示すとおり、本発明の方法は、WO00/12715の方法よりも高い感染率を提供する。
本実施例は、シュート質量の増加を促進することによって、シュート再生プロセスを加速するためのアミノ酸およびビタミン混合物(表3を参照)の使用を示す。E.グランディスxE.ウロフィラクローン530および736の葉移植片を、実施例1に記載されているように調製し、アグロバクテリウム接種材料を、実施例4に従って調製した。葉移植片を、実施例5に記載されているように接種し、3日間共培養した。共培養に続き、葉移植片を収集し、マゼンタボックスあたり10片で、アミノ酸混合物を含む培地上に置いた。4週間目に、外来性のシュートを形成する移植片の頻度として、初期の器官形成を評価し、シュート原基、小さなシュート、およびカルスを有する塊の大きさを測定した。表7に示すように、本発明の再生培地はE.グランディスxE.ウロフィラのシュートの発達を促進する。
本実施例は、形質転換に好ましい移植片のスクリーニング方法を示す。葉、葉柄、および茎の移植片を、0.5mg/l BAを有するWPM上で成長する選抜されたE.グランディスxウロフィラクローンIPB3植物から単離した。葉移植片を若い先端または葉腋のシュートから取り、主脈に沿って長さおよび幅約4〜6mmの長方形片に切除した。葉柄または節間はシュートの上半分からで、4〜6mmの切片に切った。pWVR133を有するアグロバクテリウム株GV2260を、実施例3に記載されているように調製した。収集した移植片を、ユーカリプツス再生培地上で暗所にて4日間インキュベートした。アグロバクテリウム培養物を移植片に滴下し、同じ培地上で暗所にて3日間、移植片と同時培養した。次に移植片をアグロバクテリウムたまりから取り出し、400mg/lチメンチンを補充したEuc再生培地に4日間移した。再生培地に移した後、移植片をGUS発現について染色した。表8に示すとおり、葉および葉柄移植片は節間移植片よりも感染に敏感に反応した。
本実施例は、二つのアグロバクテリウム株GV2260およびEHA105による葉または節間移植片のいずれかの感染を比較する。前培養および共培養培地は、250μM ASおよび2mg/l IAAにおける、IAAとしての上昇したオーキシン量(対 通常の再生培地では0.1mg/l NAA)の組み合わせを有する再生培地である。前培養および共培養培地は、250μM ASおよび2mg/l IAAにおける、IAAとしての上昇したオーキシン量の組み合わせを有する再生培地である。本実施例で用いられたプラスミドはpWVR31である。幅約1〜2mmの葉移植片を、これまでの実施例に記載されているように、前培養、共培養、および回収に用いた。下記表9に示すとおり、ボックスで培養された移植片は、プレートで培養された移植片と同様の頻度で感染するが、EHA105を用いた場合、ボックス中での感染はより多数のGUS焦点を生じ得る。
RNAqueous(商標)-96キットを用いて、製造業者の指示に従い、野生型および形質転換E.グランディスxE.ウロフィラの葉およびシュート組織からRNAを単離した。簡単に述べると、0.1〜1.5mgの組織を300μlの溶解/結合緩衝液に懸濁し、プラスチック乳棒で細かな粉になるまで粉砕した。試料を最高速度で3分間遠心分離し、上清を新たなプレートに移した。300μl(1x v/v)の64%エタノールを上清に加え、試料を簡単にボルテックスした。次いで試料を1850gにて2分間遠心分離した。遠心分離に続いて、任意でDNA分解酵素処理段階を行った。各試料に対して、フィルターパッドの中心に5μlのDNA分解酵素+35μlのDNA分解酵素緩衝液を加え、試料を室温にて20分間インキュベートした。20分間のインキュベーションの後、600mlの洗浄バッファーAを各試料に加え、試料を最高速度で2分間遠心分離した。遠心分離に続き、上清を捨て、600μlの洗浄バッファーBを各試料のフィルターパッドに加えた。最高速度で2分間遠心分離した後、上清を捨て、600μlの洗浄バッファーC/Dを各フィルターパッドに加えた。試料を最高速度で2分間遠心分離し、上清を捨てた。洗浄バッファーC/Dでの二度目のすすぎの後、50μlのRNA溶出溶液を加え、試料を最高速度で2〜3分間遠心分離した。RNA溶出段階を繰り返し、溶出したRNA試料を-80℃でさらなる使用まで保存した。
ALS除草剤耐性遺伝子の存在および発現を測定するため、RT-PCRを行った。全RNAを、E.グランディスxE.ウロフィラ植物の形質転換および野生型試料から、実施例12に記載されているように単離した。RNAの単離および定量化に続き、Ready to Go RT-PCRキット(Pharmacia)で、製造業者の指示に従ってRT-PCRを行った。一般的には、5μlの全RNA(約20ng RNA)を、1μlオリゴdTn、1μl 3μM ALSフォワードプライマー、1μl 3μM ALSリバースプライマー、および42μlの水を含む、45μlのRT-PCR反応混合物に加えた。
サイクル1: 95℃で5分間
55℃で1分間
72℃で1分間
サイクル2〜30: 95℃で1分間
55℃で1分間
72℃で1分間
サイクル31: 95℃で1分間
55℃で1分間
72℃で10分間
本実施例は、遺伝子導入系の試料における除草剤耐性遺伝子の存在および発現を示す。実施例11に記載されているように、各推定上の遺伝子導入系の葉および茎組織からRNAを単離した。特に、形質転換E.グランディス、E.グランディスxウロフィラ、およびE.カマデュレンシス系からRNAを単離した。加えて、野生型E.グランディス、E.グランディスxウロフィラ、およびE.カマデュレンシス植物からRNAを単離した。各系について、除草剤耐性遺伝子の存在および発現を評価するためのRT-PCRに5μlのRNA試料を用いた。製造業者の指示に従い、Ready to Go RT-PCRキット(Pharmacia)で、RT-PCRを行った。簡単に述べると、各5μlのRNA調製物を、オリゴ(dT)nおよび除草剤耐性遺伝子プライマーを含む別々のRT-PCR反応に加えた。RT-PCRに続いて、エチジウムブロマイドで染色したアガロースゲル上で、増幅産物を可視化した。
Claims (21)
- 以下の段階を含む、E.グランディス(E. grandis)xE.ウロフィラ(E. urophylla)の移植片の少なくとも1つの細胞を外来性DNAで形質転換するための方法:
(i)アグロバクテリウムのインデューサーを含む前培養培地上で木の移植片を培養する段階;
(ii)外来性DNAを有する形質転換ベクターを含むアグロバクテリウム株に該移植片を曝露する段階;
(iii)形質転換された移植片を選択する段階であって、該外来性DNAが形質転換された移植片の少なくとも1つの細胞に移される段階;および
(iv)該形質転換された移植片を再生して完全な植物を産生する段階。 - アグロバクテリウムのインデューサーが、アセトシリンゴンである、請求項1記載の方法。
- アセトシリンゴンの濃度が、約10〜約400mg/lである、請求項2記載の方法。
- アセトシリンゴンの濃度が、約5〜約200mg/lである、請求項3記載の方法。
- 培地が、さらにオーキシンを含む、請求項1記載の方法。
- 培地が、さらにサイトカイニンを含む、請求項1記載の方法。
- 移植片が、暗所で約1〜約6日間前培養される、請求項1記載の方法。
- 移植片が、約4日間前培養される、請求項1記載の方法。
- オーキシンが、NAA、2,4-D、IBA、およびIAAからなる群より選択される、請求項5記載の方法。
- NAA、2,4-D、IBA、およびIAAのいずれか1つの濃度範囲が、約0.1〜約10mg/lである、請求項9記載の方法。
- 濃度範囲が、約0.2〜約5mg/lである、請求項10記載の方法。
- 濃度範囲が、約0.2〜約3mg/lである、請求項11記載の方法。
- サイトカイニンが、ゼアチン、カイネチン、およびBAからなる群より選択される、請求項6記載の方法。
- ゼアチン、カイネチン、およびBAのいずれか1つの濃度範囲が、約0.25〜約15mg/lである、請求項13記載の方法。
- 濃度範囲が、約1〜約10mg/lである、請求項14記載の方法。
- 濃度範囲が、約1〜約6mg/lである、請求項15記載の方法。
- 移植片が葉、葉柄、節間組織、花組織、または胚形成組織の少なくとも1つである、請求項1記載の方法。
- 組織が、齢または発生段階に非依存的に選択される、請求項1記載の方法。
- 遺伝子型に非依存性である、請求項1記載の方法。
- 形質転換された移植片の全ての細胞が、外来性DNAを含む、請求項1記載の方法。
- 以下の段階を含む、非キメラE.グランディスxE.ウロフィラ木を産生するための方法:
(i)アグロバクテリウムのインデューサーを含む培地上でE.グランディスxE.ウロフィラ移植片を前培養する段階;
(ii)植物細胞に遺伝子を移すことが可能であるベクターを宿すアグロバクテリウム株に該移植片を曝露する段階;
(iii)形質転換した移植片を選択する段階;および
(iv)該移植片を成長させて非キメラ木を産生する段階。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US10/981,742 US20060101536A1 (en) | 2004-11-05 | 2004-11-05 | Eucalyptus urophylla transformation and regeneration |
US10/981,742 | 2004-11-05 | ||
US11/158,342 | 2005-06-22 | ||
US11/158,342 US20060101537A1 (en) | 2004-11-05 | 2005-06-22 | Eucalyptus urophylla transformation and selection |
PCT/US2005/039520 WO2006052554A2 (en) | 2004-11-05 | 2005-11-03 | Eucalyptus urophylla transformation and selection |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008526183A true JP2008526183A (ja) | 2008-07-24 |
JP4928461B2 JP4928461B2 (ja) | 2012-05-09 |
Family
ID=36317911
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007540378A Expired - Fee Related JP4928461B2 (ja) | 2004-11-05 | 2005-11-03 | ユーカリプツス・ウロフィラ(Eucalyptusurophylla)の形質転換および選択 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20060101536A1 (ja) |
JP (1) | JP4928461B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0517531A2 (ja) |
IL (1) | IL182777A0 (ja) |
ZA (1) | ZA200703527B (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060101536A1 (en) * | 2004-11-05 | 2006-05-11 | Arborgen, Llc | Eucalyptus urophylla transformation and regeneration |
CN109380049B (zh) * | 2018-10-26 | 2021-07-27 | 国家林业局桉树研究开发中心 | 一种结合长短周期经营的桉树复合栽培方法 |
CN113965358B (zh) * | 2021-09-28 | 2023-04-28 | 石河子大学 | 综合能源系统网络安全检测方法及系统 |
CN116286964A (zh) * | 2023-02-10 | 2023-06-23 | 中国林业科学研究院热带林业研究所 | 一种尾巨桉dh3213的遗传转化方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998037212A1 (en) * | 1997-02-20 | 1998-08-27 | Plant Genetic Systems, N.V. | Improved transformation method for plants |
WO2000012715A1 (en) * | 1998-08-29 | 2000-03-09 | Advanced Technologies (Cambridge) Limited | Modification of plant fibres |
JP2000300274A (ja) * | 1999-04-23 | 2000-10-31 | Mitsubishi Paper Mills Ltd | 4−クマル酸:CoAリガーゼのcDNA、該cDNAを用いて作製した遺伝子及び該遺伝子を導入した形質転換植物 |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5821126A (en) * | 1986-11-19 | 1998-10-13 | The Regents Of The University Of California | Method for clonal propagation of gymnosperms by somatic polyembryogenesis |
US5563061A (en) * | 1989-03-09 | 1996-10-08 | Weyerhaeuser Company | Method for reproducing conifers by somatic embryogenesis using a maltose enriched maintenance medium |
US5236841A (en) * | 1989-03-09 | 1993-08-17 | Gupta Pramod K | Method for reproducing conifers by somatic embryogenesis using stepwise hormone adjustment |
US5034326A (en) * | 1989-10-23 | 1991-07-23 | Weyerhaeuser Company | Method for reproducing coniferous plants by somatic embryogenesis using adsorbent materials in the development stage media |
US5041382A (en) * | 1989-03-09 | 1991-08-20 | Weyerhaeuser Company | High concentration enrichment of conifer embryonal cells |
US5036007A (en) * | 1989-03-09 | 1991-07-30 | Weyerhaeuser Company | Method for reproducing coniferous plants by somatic embryogenesis using abscisic acid and osmotic potential variation |
US5034323A (en) * | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
US5231020A (en) * | 1989-03-30 | 1993-07-27 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
US5767366A (en) * | 1991-02-19 | 1998-06-16 | Louisiana State University Board Of Supervisors, A Governing Body Of Louisiana State University Agricultural And Mechanical College | Mutant acetolactate synthase gene from Ararbidopsis thaliana for conferring imidazolinone resistance to crop plants |
US5610051A (en) * | 1991-06-18 | 1997-03-11 | Westvaco Corporation | Method for production of coniferous isogenic cell lines |
JPH07508163A (ja) * | 1992-04-01 | 1995-09-14 | ユニオン・キャンプ・コーポレーション | イチイ属の体細胞胚形成の誘導及びそれからのタキサン環含有アルカロイドの生産 |
US5850032A (en) * | 1992-04-01 | 1998-12-15 | Union Camp Corporation | Method for production of plant biological products in precocious neomorphic embryoids |
US5413930A (en) * | 1993-10-21 | 1995-05-09 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis |
US5506136A (en) * | 1993-10-21 | 1996-04-09 | Westvaco Corporation | Method for regeneration of coniferous plants by somatic embryogenesis |
US5491090A (en) * | 1994-02-09 | 1996-02-13 | Westvaco Corporation | Embryogenic coniferous liquid suspension cultures |
US5534434A (en) * | 1995-06-02 | 1996-07-09 | Westvaco Corporation | Basal nutrient medium for in vitro cultures of loblolly pines |
US5534433A (en) * | 1995-06-02 | 1996-07-09 | Westvaco Corporation | Basal nutrient medium for in vitro cultures of loblolly pines |
US5962769A (en) * | 1995-06-07 | 1999-10-05 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Induction of male sterility in plants by expression of high levels of avidin |
DE19722602C2 (de) * | 1997-05-30 | 2001-03-29 | Lenze Gmbh & Co Kg Aerzen | Wärmeableitendes Gehäuse zur Aufnahme von elektrischen oder elektronischen Bauteilen |
BR9815746B1 (pt) * | 1998-03-17 | 2011-03-09 | processos de desenvolvimento e maturação de embriões somáticos. | |
US6518485B1 (en) * | 1998-06-04 | 2003-02-11 | Westvaco Corporation | Particle-mediated conifer transformation |
US6603061B1 (en) * | 1999-07-29 | 2003-08-05 | Monsanto Company | Agrobacterium-mediated plant transformation method |
US6525319B2 (en) * | 2000-12-15 | 2003-02-25 | Midwest Research Institute | Use of a region of the visible and near infrared spectrum to predict mechanical properties of wet wood and standing trees |
US6606568B2 (en) * | 2000-06-28 | 2003-08-12 | Midwest Research Institute | Method for predicting dry mechanical properties from wet wood and standing trees |
US6995016B2 (en) * | 2000-08-17 | 2006-02-07 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of Agriculture And Agri-Food | Process for inducing direct somatic embryogenesis in immature scutella cells of pooideae, and rapidly regenerating fertile plants |
NZ525633A (en) * | 2000-10-10 | 2005-07-29 | Meadwestvaco Corp | Enhanced selection of genetically modified pine embryogenic tissue |
US6646185B2 (en) * | 2001-11-15 | 2003-11-11 | Korea Kumho Petrochemical Co., Ltd. | Genetic transformation method for zoysiagrass |
US20060101536A1 (en) * | 2004-11-05 | 2006-05-11 | Arborgen, Llc | Eucalyptus urophylla transformation and regeneration |
-
2004
- 2004-11-05 US US10/981,742 patent/US20060101536A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-06-22 US US11/158,342 patent/US20060101537A1/en not_active Abandoned
- 2005-11-03 BR BRPI0517531-3A patent/BRPI0517531A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2005-11-03 JP JP2007540378A patent/JP4928461B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-04-25 IL IL182777A patent/IL182777A0/en unknown
- 2007-05-02 ZA ZA200703527A patent/ZA200703527B/xx unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998037212A1 (en) * | 1997-02-20 | 1998-08-27 | Plant Genetic Systems, N.V. | Improved transformation method for plants |
WO2000012715A1 (en) * | 1998-08-29 | 2000-03-09 | Advanced Technologies (Cambridge) Limited | Modification of plant fibres |
JP2000300274A (ja) * | 1999-04-23 | 2000-10-31 | Mitsubishi Paper Mills Ltd | 4−クマル酸:CoAリガーゼのcDNA、該cDNAを用いて作製した遺伝子及び該遺伝子を導入した形質転換植物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20060101536A1 (en) | 2006-05-11 |
IL182777A0 (en) | 2007-08-19 |
BRPI0517531A2 (pt) | 2008-12-16 |
ZA200703527B (en) | 2009-09-30 |
US20060101537A1 (en) | 2006-05-11 |
JP4928461B2 (ja) | 2012-05-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Cao et al. | Cut–dip–budding delivery system enables genetic modifications in plants without tissue culture | |
Levee et al. | Stable genetic transformation of white pine (Pinus strobus L.) after cocultivation of embryogenic tissues with Agrobacterium tumefaciens | |
JP2012115266A (ja) | 植物の形質転換および選択 | |
US20120137390A1 (en) | Materials and methods for regeneration and transformation of trees | |
Alvarez et al. | Stable Agrobacterium-mediated transformation of maritime pine based on kanamycin selection | |
Ge et al. | Efficient genotype‐independent cotton genetic transformation and genome editing | |
Liu et al. | Etiolation ofRoyal Gala'apple (Malus× domestica Borkh.) shoots promotes high-frequency shoot organogenesis and enhanced,-glucuronidase expression from stem internodes | |
CN107002030B (zh) | 使用土壤杆菌来转化植物细胞或植物组织的方法、转基因植物、转基因细胞或转基因组织、培养基及转化植物细胞或组织的方法的应用 | |
Song et al. | Stable and efficient agrobacterium-mediated genetic transformation of larch using embryogenic callus | |
US6255559B1 (en) | Methods for producing genetically modified plants, genetically modified plants, plant materials and plant products produced thereby | |
JP4928461B2 (ja) | ユーカリプツス・ウロフィラ(Eucalyptusurophylla)の形質転換および選択 | |
WO2015099674A1 (en) | Sugarcane regeneration and transformation methods | |
EP0582603A4 (en) | Carnation plants and methods for their transformation and propagation | |
Wang et al. | Adventitious bud regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated genetic transformation of Eucalyptus urophylla× E. tereticornis interspecific hybrid | |
WO2006052554A2 (en) | Eucalyptus urophylla transformation and selection | |
Wang et al. | Improvement of Agrobacterium-mediated transformation and rooting of black cherry | |
JP2002525062A (ja) | 遺伝的に改変された植物の作成方法並びにこれにより生産された遺伝的改変植物、植物性材料及び植物製品 | |
Moyal Ben Zvi et al. | Agrobacterium-mediated transformation of gypsophila (Gypsophila paniculata L.) | |
NL2035132B1 (en) | GENETIC TRANSFORMATION METHOD OF E. UROPHYLLA x E. GRANDIS DH3213 | |
Jia et al. | Two Agrobacterium-mediated transformation protocols of white Clover (Trifolium repens) through the callus system | |
Mollel et al. | Preliminary examination of factors affecting Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of marula, Sclerocarya birrea subsp. caffra (Anacardiacease) | |
US20050086714A1 (en) | Eucalyptus transformation method | |
MXPA05013189A (es) | Transformacion y selección de plantas |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20081021 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110623 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110916 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110927 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111221 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120126 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120210 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150217 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150217 Year of fee payment: 3 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150217 Year of fee payment: 3 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |