JP2008513423A - 放射性標識インスリン - Google Patents

Abstract

【課題】 インスリン放射性標識法並びに新規放射性標識インスリン造影剤の提供。
【解決手段】 本発明は、インビボ造影剤に関するものであり、具体的には、式（ＩＩＩ）の放射性標識インスリン誘導体、その製造方法及びそれらのインビボイメージング法における使用に関する。
【化１】

式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であって、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、Ｙは水素、アルキル又はアリール置換基であり、Ｒ^＊は、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴでの検出に適した放射性標識部分である。
【選択図】なし

Description

本発明は、広義にはインビボ造影剤に関するものであり、具体的には放射性標識インスリン及びその製造方法に関する。放射性標識インスリンは、単一光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）又は陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）を用いた画像診断並びに生体内でのインスリン受容体及びそのリガンドとの相互作用の研究に用途を有する。

インスリンは、膵臓β細胞で産生されるポリペプチドホルモンである。インスリンは炭水化物及び脂質の代謝を調整し、タンパク質合成に影響を与える。最近の文献（Ｎｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ， １４ Ａｕｇ ２００４，ｐ３４）には、細胞のエネルギーレベルが細胞の成長及び増殖に影響し、インスリン受容体に対して選択的な造影剤が癌のイメージング及び診断に有用性を有する可能性があることが示唆されている。インスリンは、５１アミノ酸残基からなる活性二量体である。天然インスリン（ヒト、ウシ又はブタ由来）、組換えインスリン及び半合成ヒトインスリンが糖尿病の管理に常用されている。放射性標識インスリン（例えば放射性ヨウ素標識を導入したインスリン）は当技術分野で公知であり、例えばインスリン代謝の研究並びにインビボ受容体結合実験に使用されている。放射性標識生理活性ペプチドを画像診断及び研究用イメージングに応用することは、核医学の分野で重要性を増しつつある。半減期約１１０分の^１８Ｆは多数のイメージング研究及び画像診断に好まれる陽電子放出核種である。^１８Ｆは、^１８Ｆ標識生成物が生理活性を保持するように、迅速かつ効率的に生理活性ペプチドに導入する必要がある。^１８Ｆ標識インスリンに関する報文（Ｓｈａｉ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （１９８９），２８，４８０１−６）では、ヒトインスリンのＢ_１位を標識するため４−（フルオロメチル）ベンゾイルシントンを用いている。しかし、この放射合成法は複雑で時間がかかる。そこで、別のインスリン放射性標識法（^１８Ｆ標識法を含む）並びに新規放射性標識インスリン造影剤（^１８Ｆ標識したものを含む）に対するニーズが存在する。
ＯＲＷＡＮＴ， Ｒ．， Ｎｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ， １４ Ａｕｇ ２００４，ｐ３４ Ｓｈａｉ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （１９８９），２８，４８０１−６

そこで、本発明の一態様では、以下の式（Ｉ）の化合物を式（ＩＩ）の化合物と反応させて式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得ることを含んでなる放射性標識法を提供する。

式中、Ｒ１はＲ２と部位特異的に反応する官能基である。Ｒ１は、第一級アミン、第二級アミンアミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドのようなアンモニア誘導体であって、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノオキシ基であり、
Ｒ２は、アルデヒド基、ケトン基、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン又はジオール若しくはＮ末端セリン残基のような官能基であって、酸化剤を用いてアルデヒド又はケトンへと迅速かつ効率的に酸化できるものであり、
Ｒ^＊はＳＰＥＣＴ又はＰＥＴでの検出に適した放射性標識部分である。

式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であって、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、Ｙは水素、アルキル又はアリール置換基であり、Ｒ^＊は式（ＩＩ）の化合物で定義した通りである。

この反応は適当な溶媒中、例えばｐＨ域２〜１１、好適には３〜１１、さらに好適には３〜６の水性緩衝液中で、５〜８０℃の穏和な温度、好ましくは室温で実施できる。

式（Ｉ）及び（ＩＩ）の化合物のリンカー基は各々独立にＣ_１−６０ヒドロカルビル基、好適にはＣ_１−３０ヒドロカルビル基であり、酸素又は窒素のような１〜３０個のヘテロ原子、好適には１〜１０個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよい。好適なリンカー基としては、アルキル、アルケニル、アルキニル鎖、芳香族、ポリ芳香族及びヘテロ芳香族環、さらにエチレングリコール、アミノ酸又は炭水化物サブユニットを含むポリマーが挙げられる。

「ヒドロカルビル基」という用語は、炭素と水素からなる有機置換基をいい、かかる基は、飽和、不飽和又は芳香族部分を含んでいてもよい。

式（Ｉ）の化合物及び本発明の関連する態様におけるＲ１は、好ましくは−ＮＨＮＨ_２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２及び−ＯＮＨ_２から選択され、好ましくはＯＮＨ_２である。

式（ＩＩ）の化合物及び本発明の関連する態様におけるＲ２は、好ましくは−ＣＨＯ、＞Ｃ＝Ｏ、ＣＨ（ＯＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−）のような−ＣＨ（−Ｏ−Ｃ_１−４アルキル−Ｏ−）並びにＣＨ（ＯＣＨ_３）_２のようなＣＨ（ＯＣ_１−４アルキル）_２から選択され、好ましい態様ではＲ２は−ＣＨＯである。

好適には、Ｒ２アルデヒドは１，２−ジオール又は１，２アミノアルコール基を含む前駆体官能化ベクターのインサイツ酸化によって生成させる。例えば、後者は、Ｗａｈｌ他のＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｓ． ３７， ６８６１ （１９９６）に記載のアミノ酸Ｆｍｏｃ−Ｄｐｒ（Ｂｏｃ−Ｓｅｒ）−ＯＨを用いた合成でペプチド配列に直接挿入することができる。式（ＩＩ）の化合物のＲ２基の生成に使用し得る好適な酸化剤としては、過ヨウ素酸塩、過ヨウ素酸、パラ過ヨウ素酸、メタ過ヨウ素酸ナトリウム及びメタ過ヨウ素酸カリウムが挙げられる。

Ｒ^＊は、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴでの検出に適した放射性標識部分であって、好ましくは^１８Ｆ、放射性ヨウ素（^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ又は^１３１Ｉ）、^７５Ｂｒ又は［^１１Ｃ］Ｃ_１−６アルキルアミンのような^１１Ｃ含有基であり、最も好ましくは^１８Ｆである。

式（ＩＩＩ）の化合物及び本発明の関連する態様におけるＹは好ましくは水素、Ｃ_１−６アルキル（メチルなど）又はフェニルである。

本発明の一態様では、式（ＩＩ）の化合物は次の式（ＩＩａ）のものである。

式中、ｍは０〜１０の整数であり、ｎは０〜２０の整数であり、Ｙは水素、Ｃ_１−６アルキル（メチルなど）又はフェニルである。好ましくは、式（ＩＩａ）の化合物におけるｍは０であり、ｎは０であり、Ｙは水素であり、式（ＩＩａ）の化合物は４−［^１８Ｆ］フルオロベンズアルデヒドとなる。

本発明の一態様では、式（Ｉ）の化合物は次の式（Ｉａ）のものである。

式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であって、好ましくは−Ｏ−である。

式（Ｉ）及び（Ｉａ）の化合物における好ましいリンカーとしては、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１−２０アルキル）−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ_２−及び−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ_１−２０アルキル）−が挙げられる。

そこで、好ましい態様では、本発明は、以下の式（Ｉａ）の化合物を式（ＩＩａ）の化合物と反応させて式（ＩＩＩａ）の化合物を得ることを含んでなる放射性標識法を提供する。

式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であって、好ましくは−Ｏ−である。

式中、ｍは０〜１０の整数（好ましくは０）であり、ｎは０〜２０の整数（好ましくは０）であり、Ｙは水素、Ｃ_１−６アルキル（メチルなど）又はフェニルである（Ｙは好ましくは水素である）。

式中、Ｘは式（Ｉａ）の化合物で定義した通りであり、ｍ及びｎは式（ＩＩａ）の化合物で定義した通りである。

別の態様では、本発明は、以下の式（Ｉｂ）の化合物を式（ＩＩｂ）の化合物と反応させて式（ＩＩＩｂ）の化合物を得ることを含んでなる放射性標識法を提供する。

式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩ）、（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）の化合物のリンカー基は、放射性フッ素化反応の効率を最大限にするとともに、得られる式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）のコンジュゲートにおける好ましい排泄特性など、良好なインビボ薬物動態が得られるように選択される。親油性及び／又は電荷の種々異なるリンカー基を使用することによって、必要とされるイメージングに適合するようにペプチドのインビボ薬物動態を大きく変化させることができる。例えば、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）、（ＩＩＩｂ）のコンジュゲートを腎排泄によって身体から除去することが望まれる場合には親水性リンカーを使用し、肝胆道排泄による除去が望ましい場合には疎水性リンカーを使用する。ポリエチレングリコール部分を含むリンカーは血液クリアランスを遅らせることが判明しており、状況によっては望ましい。

式（Ｉ）、（Ｉａ）、（Ｉｂ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）及び（ＩＩＩｂ）の化合物において、インスリンはヒト、ウシ、ブタインスリンとし得るが、好適にはヒトインスリンであり、天然、組換え又は合成のいずれのものでもよい。或いは、インスリンは、例えば米国特許第５６５６７２２号、ドイツ特許３８３７８２５号、国際公開第９５／０７９３１号、欧州特許出願公開第３８３４７２号又はＪ Ｂｒａｎｇｅ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ ３３３（１９８８），６７９に記載されているような天然インスリン類似体であってもよい。

式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合物は、ペプチド合成の常法、例えばＡｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ． ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．； “Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”； ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ： Ｏｘｆｏｒｄ， １９８９に記載の固相ペプチド合成で製造できる。式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の化合物へのＲ１基の導入は、修飾してもインスリンの結合特性に影響を与えないペプチドの遊離第一級アミンの反応によって達成できる。官能基Ｒ１は、好ましくは、ペプチドアミン官能基と活性化カルボン酸との反応によって形成される安定なアミド結合の形成によって導入され、ペプチドの合成時又は合成後に導入される。当業者には自明であろうが、式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の化合物にＲ１を導入する際に、インスリンの所定の官能基を保護する必要があることがある。適当な保護及び脱保護法は、例えば“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”， Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ． Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒ Ｇ． Ｍ． Ｗｕｔｓ， ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．に記載されている。リンカー及びＲ１基の付加によって修飾し得る特に有用な保護インスリン中間体の一つは、Ａ_１，Ｂ_２９−ジＢｏｃ−インスリンであり、これはＳｈａｉ ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （１９８９），２８，４８０１−６に記載の方法で製造することができる。Ｂｏｃ（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）保護基は、放射性フッ素化反応前に例えばトリフルオロ酢酸のような酸による加水分解によって除去することができる。

別の態様では、本発明は、上記で定義した式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の化合物及びその保護誘導体を提供する。好ましい式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合物は、インスリンがヒトインスリンであるものである。式（Ｉ）、（Ｉａ）及び（Ｉｂ）の化合物は、ＰＥＴ造影剤の合成用の前駆体として並びに診断に用途を有し、例えば、上記の方法による放射性フッ化のための準備が整ったキットとして提供し得る。

Ｒ^＊が^１８Ｆである式（ＩＩ）、（ＩＩａ）及び（ＩＩｂ）の化合物は、国際公開第２００４／０８０４９２号に記載の通り製造することができる。Ｒ^＊が放射性ヨウ素である式（ＩＩ）の化合物は、対応トリアルキルスズ前駆体から放射性ヨウ素塩との反応によって製造でき、好適には、例えば過酢酸のような酸の存在下、アルカリ金属のヨウ化物（例えばヨウ化ナトリウム）との反応で製造できる。Ｒ^＊が^１１Ｃアルキルアミン基のような^１１Ｃ含有基である式（ＩＩ）の化合物は、例えば対応する第一級アミンの^１１Ｃアルキル化によって製造できる。かかる^１１Ｃ標識法の詳細な総説は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｅｄ． Ｍ．Ｊ． Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｃ．Ｓ． Ｒｅｄｖａｎｌｙ（２００３， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ）のＡｎｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ “Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ^１１Ｃ−Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”に見出すことができる。

別の態様では、本発明は、上記で定義した式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートを提供する。式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の好ましい化合物はインスリンがヒトインスリンであるものである。

本発明は、上記で定義した一般式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物の有効量（例えばインビボＰＥＴイメージングでの使用に有効な量）を、１種以上の薬学的に許容される補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる放射性医薬組成物も提供する。

本発明の好ましい実施形態は、医療用、特にＳＰＥＣＴ又はＰＥＴによるイメージング、好適にはインスリンが関係する疾患（例えば心筋インスリン抵抗性、心肥大、高血圧、癌及びＩＩ型糖尿病）のインビボイメージング又は診断に使用するための、上記で定義した一般式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物に関する。

式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートは、ＳＰＥＣＴ又はＰＥＴイメージングのため、所望の信号が得られる十分な量で患者に投与すればよく、典型的な放射性核種投与量は体重７０ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍＣｉ、好ましくは０．１〜５０ｍＣｉで通常十分である。

したがって、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートは、当業者の技術常識に属する方法で、生理学的に許容される担体又は賦形剤を用いて投与用に製剤化すればよい。例えば、上記化合物は、薬学的に許容される賦形剤を適宜添加して、水性媒体に懸濁又は溶解し、次いで得られた溶液又は懸濁液を滅菌すればよい。

本発明は、別の態様では、放射性医薬品をヒト又は動物の身体に投与してヒト又は動物の身体の少なくとも一部分の画像を生成させるインビボイメージング（好適にはＳＰＥＣＴ又はＰＥＴ、好ましくはインスリンが関係する疾患のイメージング）法に用いられる放射性医薬品の製造における、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートの使用を提供する。

本発明は、さらに別の態様では、放射性医薬品をヒト又は動物の身体（例えば脈管系）に投与して放射性医薬品が分配された身体の少なくとも一部分の画像をＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いて生成させる身体の画像生成方法であって、該放射性医薬品が式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートを含む、方法を提供する。

本発明は、さらに別の態様では、インスリンに関連した病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートを身体に投与し、上記コンジュゲートの取り込みを検出し、任意ではあるが好ましくは、上記投与と検出を、例えば上記薬剤による治療の前後途中に繰り返すことを含んでなる方法を提供する。

本発明のさらに別の実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩａ）又は（ＩＩｂ）の補欠分子族と式（Ｉ）、（Ｉａ）又は（Ｉｂ）の化合物を含む、放射性フッ素化トレーサー調製用キットを提供する。

以下の実施例によって本発明を例示するが、実施例では以下の略語を用いる。

ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＵＶ：紫外線
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＢＯＣ：ｔ−ブトキシカルボニル
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド。

アミノオキシ複合を用いた ^１８ Ｆ−Ｂ _１ 修飾インスリンの調製
実験
材料
Ａ_１，Ｂ_２９−ジ−ＢＯＣ−インスリンは、ヒト組換えインスリン（Ｓｉｇｍａ社）を用いてＳｈａｉ他の方法［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８（１９８９）４８０１］で調製される。ＢＯＣ−アミノオキシ酢酸はＦｌｕｋａ社から入手される。（４−アザ−１，２，３−ベンゾトリアゾール−３−イルオキシ）−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸（ＰｙＡＯＰ）、４−フルオロベンズアルデヒド、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、無水アセトニトリル及び無水ジメチルスルホキシドはＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから入手される。

Ｂ _１ −ＢＯＣ−アミノオキシ−アセチル−Ａ _１ ，Ｂ _２９ −ジ−ＢＯＣ−インスリン（中間体１、スキーム１）の調製
分取用ＨＰＬＣ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ｐｒｅｐ． Ｃ１８；溶媒Ａ＝水（０．１％ＴＦＡ）、溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）、
流速５ｍｌ／分、勾配：３０分間で３０〜６０％Ｂ、ＵＶ検出波長２１４ｎｍ。

分析用ＨＰＬＣ
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８；溶媒Ａ＝水（０．１％ＴＦＡ）、溶媒Ｂ＝ＭｅＣＮ（０．１％ＴＦＡ）、
流速１ｍｌ／分、勾配：２０分間で２５〜８０％Ｂ、ＵＶ検出波長２１４及び２５４ｎｍ。

調製
ＤＭＦ中のＡ_１，Ｂ_２９−ジ−ＢＯＣ−インスリン（１０ｍｇ、１．７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ中のＢＯＣ−アミノオキシ酢酸（１．３ｍｇ、６．６μｍｏｌ）、ＰｙＡＯＰ（３．４ｍｇ、６．６μｍｏｌ）及びＮＭＭ（１．３ｍｇ、１．５μｌ、１３μｍｏｌ）の溶液に添加する。４時間後、ＤＭＦを減圧下で蒸発させ、粗生成物を分取用ＨＰＬＣを用いて精製する（収量５．３ｍｇ、５１％）。

Ｂ _１ −（４−フルオロ−ベンジリデンアミノオキシ）−アセチル−インスリン（化合物１、スキーム１）の調製
ＢＯＣ保護インスリン誘導体（中間体１、５ｍｇ）に、ＴＦＡ／５％水（０．２ｍｌ）溶液を添加する。室温で１分間放置した後、液相を窒素気流で蒸発させる。残渣を酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ４．０、０．５ｍＭ）に溶解し、１当量の４−フルオロベンズアルデヒドと反応させる。生成物を分取用ＨＰＬＣで精製し、ＬＣ−ＭＳで特性決定する。

Ｂ _１ −（４−［ ^１８ Ｆ］フルオロ−ベンジリデンアミノオキシ）−アセチル−インスリン（化合物２、スキーム３）の調製
［ ^１８ Ｆ］フルオロベンズアルデヒド
［^１８Ｆ］フルオロベンズアルデヒドをＳ．Ｍ．Ｈａｋａ他の方法［Ｊ． Ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｃｐｄ． ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ． ２７（１９８９）８２３］で調製する。簡潔に述べると、サイクロトロンから１９ＭｅＶの陽子ビームとターゲット材料としての濃縮［^１８Ｏ］Ｈ_２Ｏ（３０％）との^１８Ｏ（ｐ，ｎ）^１８Ｆ反応を用いて^１８Ｆ−フッ素を得る。照射したターゲット水（３７０ＭＢｑ、１０ｍＣｉ、１ｍｌ）を、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）（１０ｍｇ）と炭酸カリウム（１ｍｇ）とアセトニトリル（０．８ｍｌ）の混合物に添加する。混合物を窒素気流下で１００℃に加熱する。溶剤除去後、アセトニトリル（０．５ｍｌ）を添加し、再び蒸発させる。このステップを２回繰返す。

無水［^１８Ｆ］ＫＦ−クリプテートが入ったバイアルを室温に冷却し、無水ＤＭＳＯ（０．２ｍｌ）中の４−トリメチルアンモニウムベンズアルデヒドトリフルオロメチルスルホネート（１ｍｇ）の溶液を添加する。混合物を９０℃で１５分間加熱し、室温に冷却する。

結合工程
酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ４．０、５ｍＭ、０．１ｍｌ）中の脱保護アミノオキシ−インスリン（前述、１〜２当量）の溶液を添加した後、７０℃で１０分間加熱する。反応混合物をＨＰＬＣ移動相（０．２ｍｌ、２０％Ｂ）で奪活し、分取用ＨＰＬＣで精製する。

（ＢＯＣ−アミノオキシ−アセチルアミン）−ヘキサン酸（化合物３、スキーム２）の調製
Ｎ−スクシンイミジルＢＯＣ−３−（アミノオキシ）アセテートを、ＢＯＣ−３−（アミノオキシ）酢酸からＳ．Ｄｅｒｏｏ他の方法［Ｔｅｔｒ． Ｌｅｔｔ． ４４（２００３）８３７９］で得る。Ｎ−スクシンイミジルエステルを、７−アミノヘプタン酸（１．１当量）及びジイソプロピルエチルアミン（３当量）と、ジクロロメタン中で１６時間室温で反応させる。カップリング反応生成物（化合物３）をシリカでのフラッシュクロマトグラフィーで精製する。

Ｂ _１ −（ＢＯＣ−アミノオキシ−アセチルアミン）−ヘキサノイル−Ａ _１ ，Ｂ _２９ −ジ−ＢＯＣ−インスリン（化合物４、スキーム２）の調製
アミノオキシリンカーのカップリングを、Ｂ１−ＢＯＣ−アミノオキシ−Ａ_１，Ｂ_２９−ジ−ＢＯＣ−インスリン（中間体１）について記載した通り実施する。

Ｂ _１ −（４−フルオロ−ベンジリデンアミノオキシ−アセチルアミン）−ヘキサノイル−インスリン（化合物５、スキーム２）の調製
インスリン前駆体のＢＯＣ保護基の除去とその後の４−フルオロベンズアルデヒドとのカップリングを、化合物１について記載した通り実施する。

Ｂ _１ −（４−［ ^１８ Ｆ］フルオロ−ベンジリデンアミノオキシ−アセチルアミン）−ヘキサノイル−インスリン（化合物６、スキーム３）の調製
化合物４及び［^１８Ｆ］−４−フルオロベンズアルデヒドからの化合物６の放射合成を、化合物２の調製について記載した通り実施する。

Claims (17)

1. 以下の式（Ｉ）の化合物を式（ＩＩ）の化合物と反応させて式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得ることを含んでなる放射性標識方法。
   

   

   

   式中、Ｒ１はＲ２と部位特異的に反応する官能基であって、Ｒ１は、第一級アミン、第二級アミンアミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドのようなアンモニア誘導体であって、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノオキシ基であり、
   Ｒ２は、アルデヒド基、ケトン基、アセタールのような保護アルデヒド、ケタールのような保護ケトン又はジオール若しくはＮ末端セリン残基のような官能基であって、酸化剤を用いてアルデヒド又はケトンへと迅速かつ効率的に酸化できるものであり、
   Ｒ^＊はＳＰＥＣＴ又はＰＥＴでの検出に適した放射性標識部分である。
   

   

   式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であって、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、Ｙは水素、アルキル又はアリール置換基であり、Ｒ^＊は式（ＩＩ）の化合物で定義した通りである。
2. Ｒ^＊が^１８Ｆ、放射性ヨウ素（^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ又は^１３１Ｉ）、^７５Ｂｒ又は［^１１Ｃ］Ｃ_１−６アルキルアミンのような^１１Ｃ含有基である、請求項１記載の方法。
3. Ｒ^＊が^１８Ｆである、請求項１又は請求項２記載の方法。
4. 以下の式（Ｉａ）の化合物を式（ＩＩａ）の化合物と反応させて式（ＩＩＩａ）の化合物を得ることを含んでなる放射性標識方法。
   

   

   式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であって、好ましくは−Ｏ−である。
   

   

   式中、ｍは０〜１０の整数であり、ｎは０〜２０の整数であり、Ｙは水素、Ｃ_１−６アルキル又はフェニルである。
   

   

   式中、Ｘは式（Ｉａ）の化合物で定義した通りであり、ｍ及びｎは式（ＩＩａ）の化合物で定義した通りである。
5. 以下の式（Ｉｂ）の化合物を式（ＩＩｂ）の化合物と反応させて式（ＩＩＩｂ）の化合物を得る、請求項４記載の方法。
   

   

   

   
6. 次の式（ＩＩＩ）の化合物。
   

   

   式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＮＨＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＳＮＨ−であって、好ましくは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、Ｙは水素、アルキル又はアリール置換基であり、Ｒ^＊はＳＰＥＣＴ又はＰＥＴでの検出に適した放射性標識部分である。
7. Ｒ^＊が^１８Ｆ、放射性ヨウ素（^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ又は^１３１Ｉ）、^７５Ｂｒ又は［^１１Ｃ］Ｃ_１−６アルキルアミンのような^１１Ｃ含有基であって、好ましくは^１８Ｆである、請求項６記載の化合物。
8. 当該化合物が次の式（ＩＩＩａ）のものである、請求項６又は請求項７記載の化合物。
   

   

   式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−であり、ｍは、０〜１０の整数であり、ｎは０〜２０の整数である。
9. 当該化合物が次の式（ＩＩＩｂ）のものである、請求項６乃至請求項８のいずれか１項記載の化合物
   

   
10. 次の式（Ｉ）の化合物。
    

    

    式中、Ｒ１は、第一級アミン、第二級アミンアミン、ヒドロキシルアミン、ヒドラジン、ヒドラジド、アミノオキシ、フェニルヒドラジン、セミカルバジド又はチオセミカルバジドのようなアンモニア誘導体であって、好ましくはヒドラジン、ヒドラジド又はアミノオキシ基である。
11. 次の式（Ｉａ）の化合物。
    

    

    式中、Ｘは−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−又は−Ｏ−である。
12. 当該化合物が次の式（Ｉｂ）のものである、請求項１０又は請求項１１記載の化合物。
    

    
13. 請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物の有効量を、１種以上の薬学的に許容される補助剤、賦形剤又は希釈剤と共に含んでなる放射性医薬組成物。
14. 医療用の、請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の一般式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の化合物。
15. インスリンが関係する疾患の画像を生成させるインビトロイメージング法（好適にはＳＰＥＣＴ又はＰＥＴ）に用いられる放射性医薬品の製造における、請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートの使用。
16. 放射性医薬品をヒト又は動物の身体（例えば脈管系）に投与して放射性医薬品が分配された身体の少なくとも一部分の画像をＳＰＥＣＴ又はＰＥＴを用いて生成させる身体の画像生成方法であって、該放射性医薬品が請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートを含む、方法。
17. インスリンに関連した病態に対処するための薬剤によるヒト又は動物の身体の治療効果をモニターする方法であって、請求項６乃至請求項９のいずれか１項記載の式（ＩＩＩ）、（ＩＩＩａ）又は（ＩＩＩｂ）の放射性標識コンジュゲートを身体に投与し、上記コンジュゲートの取り込みを検出し、任意ではあるが好ましくは、上記投与と検出を繰り返すことを含んでなる方法。