JP2008222701A - Fermented product for preventing and treating obesity, fermented product for preventing diabetes, fermented food for preventing and treating obesity and food for preventing diabetes - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、肥満予防及び治療用発酵物、糖尿病予防用発酵物、肥満予防及び治療用発酵食品および糖尿病予防用食品に係り、更に詳細には、１−デオキシノジリマイシンを含有する機能性発酵物と、これを適用した肥満予防及び治療用機能性食品及び糖尿病予防用食品に関する。 The present invention relates to a fermented product for preventing and treating obesity, a fermented product for preventing diabetes, a fermented food for preventing and treating obesity, and a food for preventing diabetes, and more specifically, a functional fermented product containing 1-deoxynojirimycin. And a functional food for obesity prevention and treatment and a food for diabetes prevention to which the same is applied.
α−グルコシダーゼは小腸に存在する酵素であり、二糖類やオリゴ糖類を、消化吸収される状態である単糖類まで分解する役割を果たす、糖類の消化には重要な酵素である。このようなα−グルコシダーゼは、炭水化物摂取後の血糖値を上昇させるために、一次的な役割を果たす。従って、小腸のα−グルコシダーゼの活性を阻害することによって、食後の血糖値を効率的にコントロールすることができる。特に、第２型糖尿病には、重要な治療法の一つである。実際にα−グルコシダーゼ阻害剤は、医薬品として既に糖尿病の治療に用いられている。α−グルコシダーゼ阻害剤を過量投与した場合、二糖類やオリゴ糖類は大部分分解されず、大腸で腸内微生物によって代謝されるので、糖の吸収が制限され、結果的にカロリーカット（Ｃａｌｏｒｉｅ ｃｕｔ）の効果をもたらす。しかし、このような治療薬は、日常の食品に使用することはできない。 α-Glucosidase is an enzyme present in the small intestine, and is an important enzyme for digestion of saccharides, which plays a role in decomposing disaccharides and oligosaccharides into monosaccharides that are digested and absorbed. Such α-glucosidase plays a primary role in increasing blood glucose level after carbohydrate intake. Therefore, by inhibiting the activity of α-glucosidase in the small intestine, the postprandial blood glucose level can be efficiently controlled. In particular, it is one of the important treatments for type 2 diabetes. In fact, α-glucosidase inhibitors are already used as a pharmaceutical for the treatment of diabetes. When an α-glucosidase inhibitor is overdosed, disaccharides and oligosaccharides are mostly not decomposed and metabolized by intestinal microorganisms in the large intestine, so that absorption of sugar is limited, resulting in a calorie cut. Bring about the effect. However, such therapeutic agents cannot be used in everyday foods.
天然の食品成分中のα−グルコシダーゼ阻害剤に関しては、これまでにいくつかの報告がある。その中で、１−デオキシノジリマイシンを有効成分とする桑属中のアルカロイド（特開平９−１４０３５１号公報）が食品として一番広く使われている。 There have been several reports on α-glucosidase inhibitors in natural food ingredients. Among them, alkaloids in the genus Mulberry (Japanese Patent Laid-Open No. 9-14351) containing 1-deoxynojirimycin as an active ingredient are most widely used as foods.
α−グルコシダーゼ阻害剤を活性成分とした血糖降下効果を有する清麹醤（チョングッチャン）と関連する技術としては、大韓民国公開特許公報第２００５−００７１１０１Ａ号に開示されている。この技術では、血糖降下活性を有する成分をアピゲニンと規定し、清麹醤発酵物をそのままでは使わずに、抽出物の形態で利用している。更に、発酵によりアピゲニンが生成されるという点を証明しておらず、アピゲニンは通常的に植物体に存在するＦｌａｖｏｎｏｉｄ系化合物の一つであって、清麹醤発酵が生ずる前から大豆の中に存在した可能性がある。 A technique related to Chong-guk-chan having a hypoglycemic effect using an α-glucosidase inhibitor as an active ingredient is disclosed in Korean Patent Publication No. 2005-0071101A. In this technique, a component having hypoglycemic activity is defined as apigenin, and a neat soy fermented product is not used as it is, but is used in the form of an extract. Furthermore, it has not proved that apigenin is produced by fermentation, and apigenin is one of the Flavonoid compounds that are usually present in plants, and it is contained in soybean before neat soy fermentation occurs. It may have existed.
１−デオキシノジリマイシンは、血糖降下用医薬品原料として注目されているので、工業的な生産に関する多くの試みが行われてきた。例えば、特公平８−５８５８号公報、特許第３１６２１２３号公報等では、１−デオキシノジリマイシン及び誘導体の有機合成を方法として提示している。また、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓまたはＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ菌株を利用して１−デオキシノジリマイシンを生産する方法は、既に学術報告（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９８４、２８０−２８４、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３、６７０７−６７１６、Ｊ．Ｆｅｒｍｅｎｔ．Ｂｉｏｅｎｇ．１９９５、３９１−３９４）に開示されている。しかしながら、有機合成や微生物による生産は、すべて医薬品原料の工業的生産のためのものであって、食品に適用することができない。 Since 1-deoxynojirimycin has attracted attention as a pharmaceutical raw material for hypoglycemia, many attempts have been made on industrial production. For example, Japanese Patent Publication No. 8-5858 and Japanese Patent No. 3162123 disclose organic synthesis of 1-deoxynojirimycin and derivatives as a method. In addition, a method for producing 1-deoxynojirimycin using Bacillus subtilis or Streptomyces strains has already been reported in an academic report (Appl. Env. Microbiol. 1984, 280-284, Tetrahedron 1993, 6707-6716, J. Ferment. Bioeng. 1995, 391-394). However, organic synthesis and production by microorganisms are all for industrial production of pharmaceutical raw materials and cannot be applied to food.
１−デオキシノジリマイシンの他の供給源としては、桑の葉が挙げられる。桑の葉は、そのまま食品に適用することができるが、服量が多くて食品としての限界があるため、桑の葉の抽出物形態に加工して、血糖降下または抗肥満食品組成物として応用されて来た（例えば、特開２００２−５１７３５号公報、特開２００４−１９４６３５号公報、特開平１０−２６５３９７号公報、特開２０００−２１９６３２号公報、特開平９−１４０３５１号公報、特開２００１−１０３９２８号公報）。以上の文献に挙げられた桑の葉抽出物を食品に利用する場合には、その他食餌成分との組成物であるので、有効成分の抽出による追加費用の増加及び適用食品の制限等があり、特に清麹醤のような発酵食品への適用には限界がある。 Other sources of 1-deoxynojirimycin include mulberry leaves. Mulberry leaves can be applied to foods as they are, but because they have large doses and have limitations as foods, they can be processed into mulberry leaf extract forms and applied as hypoglycemic or anti-obesity food compositions (For example, JP 2002-51735 A, JP 2004-194635 A, JP 10-265597 A, JP 2000-219632 A, JP 9-140351 A, JP 2001 -103928). When using the mulberry leaf extract listed in the above literature for food, because it is a composition with other dietary ingredients, there is an increase in additional costs due to extraction of active ingredients and restrictions on applicable foods, In particular, there is a limit to application to fermented foods such as neat soy sauce.
前述の通り、桑の葉に含有されている１−デオキシノジリマイシンのような糖類似アルカロイドには、血糖値の改善またはカロリーカットの効果があるが、これを日常の食品へ利用する場合、食品適用性及び呈味の点で制限がある。桑の葉に含有されている１−デオキシノジリマイシンは、食品として主に桑茶または桑エキス等のような簡単な形に加工される。即ち、１−デオキシノジリマイシンのような有効物質を、食べやすくて慣れている形態の食品として供給する必要がある。 As described above, sugar-like alkaloids such as 1-deoxynojirimycin contained in mulberry leaves have an effect of improving blood glucose level or reducing calorie. There are limitations in terms of applicability and taste. 1-deoxynojirimycin contained in mulberry leaves is processed into a simple form such as mulberry tea or mulberry extract as a food. That is, it is necessary to supply an effective substance such as 1-deoxynojirimycin as a form of food that is easy to eat and is used to.
一方、一部のバチルスサブチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）菌株が１−デオキシノジリマイシンを生産することは、既に学術報告（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９８４、２８０−２８４、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３、６７０７−６７１６）に開示されている。バチルスサブチルスは、韓国、日本等の国で大豆を利用した発酵食品、すなわち、清麹醤、納豆等の主発酵菌として、伝統的に利用されて来た。 On the other hand, it is already disclosed in an academic report (Appl. Env. Microbiol. 1984, 280-284, Tetrahedron 1993, 6707-6716) that some Bacillus subtilis strains produce 1-deoxynojirimycin. Has been. Bacillus subtilis has traditionally been used as a fermented food using soybean in countries such as Korea and Japan, ie, main fermenting bacteria such as neat soy sauce and natto.
しかし、上記の１−デオキシノジリマイシンを生産するバチルスサブチルス菌株を利用した培養は、医薬品原料としての１−デオキシノジリマイシン生産のためのものであって、合成培地あるいは工業用培地を使用するため食品原料として利用できないばかりでなく、これを食品加工に適用した例は未だ存在しない。 However, the culture using the Bacillus subtilis strain that produces 1-deoxynojirimycin is for producing 1-deoxynojirimycin as a pharmaceutical raw material, and uses a synthetic medium or an industrial medium. Not only can it not be used as a food ingredient, but there is no example of applying it to food processing.
そこで、本発明は、このような問題に鑑みてなされたもので、その目的は、１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含み、血糖降下及びカロリーカット効果を奏することが可能な、新規かつ改良された肥満予防及び治療用発酵物、糖尿病予防用発酵物、肥満予防及び治療用発酵食品および糖尿病予防用食品を提供することにある。 Therefore, the present invention has been made in view of such problems, and the object thereof is novel and improved, which includes 1-deoxynojirimycin as an active ingredient and can exert a hypoglycemic and calorie-cutting effect. Another object is to provide a fermented product for obesity prevention and treatment, a fermented product for diabetes prevention, a fermented food for obesity prevention and treatment, and a food for diabetes prevention.
本発明者らは、上記のような問題点を解決するために発酵食品を鋭意研究した結果、韓国の伝統的大豆発酵食品である清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＤＣ−１５、大韓民国特許登録第０７０８２８６号）がα−グルコシダーゼ阻害剤を多量生産することを見出し、上記α−グルコシダーゼ阻害剤として１−デオキシノジリマイシンを確認し、これを食品に適用して本発明を完成するに至った。 As a result of intensive research on fermented foods to solve the above-mentioned problems, the present inventors have found that Bacillus subtilis DC-15 (Bacillus subtilis DC) isolated from the Korean traditional soybean fermented food, Kiyoto Soy -15, Korean Patent Registration No. 0708286) found that α-glucosidase inhibitors were produced in large quantities, 1-deoxynojirimycin was confirmed as the α-glucosidase inhibitor, and this was applied to foods to produce the present invention. It came to be completed.
すなわち、上記課題を解決するために、本発明のある観点によれば、バチルスサブチルス菌株によって発酵された発酵物であって、１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む肥満予防用発酵物及び肥満治療用発酵物が提供される。 That is, in order to solve the above-described problems, according to one aspect of the present invention, a fermented product fermented by a Bacillus subtilis strain, which contains 1-deoxynojirimycin as an active ingredient, and obesity A therapeutic fermented product is provided.
また、上記課題を解決するために、本発明の別の観点によれば、バチルスサブチルス菌株によって発酵された発酵物であって、１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む糖尿病予防用発酵物が提供される。 Moreover, in order to solve the said subject, according to another viewpoint of this invention, it is the fermented material fermented by the Bacillus subtilis strain | stump | stock, Comprising: 1-deoxynojirimycin fermented material for diabetes prevention is included as an active ingredient. Provided.
前記バチルスサブチルス菌株の発酵物は、大豆、牛乳及びそれらの加工物からなる群から選ばれた１種または２種以上の混合物からなるものであってもよい。 The fermented product of the Bacillus subtilis strain may be one or a mixture of two or more selected from the group consisting of soybeans, milk and processed products thereof.
前記バチルスサブチルス菌株は、清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５菌株（ＫＣＴＣ １０７６３ＢＰ）であってもよい。 The Bacillus subtilis strain may be a Bacillus subtilis DC-15 strain (KCTC 10963BP) isolated from Kiyoto Soy.
上記課題を解決するために、本発明の更に別の観点によれば、上記発酵物を含む肥満予防用発酵食品および肥満治療用発酵食品が提供される。 In order to solve the above problems, according to still another aspect of the present invention, there is provided a fermented food for preventing obesity and a fermented food for treating obesity containing the fermented product.
上記課題を解決するために、本発明の更に別の観点によれば、上記発酵物を含む糖尿病予防用発酵食品が提供される。 In order to solve the above problems, according to still another aspect of the present invention, there is provided a fermented food for preventing diabetes containing the fermented product.
上述のように、本発明による発酵物は、１−デオキシノジリマイシンを含有し、これを様々な形態の食品に製造して摂取する場合、食後血糖の上昇を抑制することが可能であり、糖尿病の予防に効果がある。また、本発明による発酵物の摂取することで体重減量効果があることが確認でき、肥満予防及び治療効果を期待することができる。 As described above, the fermented product according to the present invention contains 1-deoxynojirimycin, and when it is produced and consumed in various forms of food, it is possible to suppress an increase in postprandial blood glucose, and diabetes. It is effective for prevention. Moreover, it can confirm that there exists a weight-loss effect by ingesting the fermented material by this invention, and can anticipate the obesity prevention and treatment effect.
このような本発明の発酵物は、肥満予防及び治療用食品、糖尿病予防用食品として有用なものである。 Such a fermented product of the present invention is useful as a food for preventing and treating obesity and a food for preventing diabetes.
以下に添付図面を参照しながら、本発明の好適な実施の形態について詳細に説明する。なお、本明細書及び図面において、実質的に同一の機能構成を有する構成要素については、同一の符号を付することにより重複説明を省略する。 Exemplary embodiments of the present invention will be described below in detail with reference to the accompanying drawings. In addition, in this specification and drawing, about the component which has the substantially same function structure, duplication description is abbreviate | omitted by attaching | subjecting the same code | symbol.
本発明は、清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５菌株（ＫＣＴＣ １０７６３ＢＰ）によって発酵されるものであって、１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む肥満予防発酵物及び肥満治療用発酵物を含む。 The present invention is fermented by Bacillus subtilis DC-15 strain (KCTC 10963BP) isolated from Kiyoto Soy, which contains 1-deoxynojirimycin as an active ingredient and a fermented product for obesity treatment including.
また、本発明は、上記発酵物を含む肥満予防用発酵食品及び肥満治療用発酵食品を含む。 Moreover, this invention contains the fermented food for obesity prevention containing the said fermented material, and the fermented food for obesity treatment.
また、本発明は、清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５菌株（ＫＣＴＣ １０７６３ＢＰ）によって発酵されたものであって、１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む糖尿病予防用発酵物を含む。 Moreover, this invention fermented by the Bacillus subtilis DC-15 strain (KCTC 10963BP) isolate | separated from the neat soy sauce, Comprising: 1-deoxynojirimycin As an active ingredient, the fermented material for diabetes prevention is included.
更に、本発明は、上記発酵物を含む糖尿病予防用食品を含む。 Furthermore, this invention contains the food for diabetes prevention containing the said fermented material.
以下、本発明の一実施形態について詳細に説明すると、次の通りである。 Hereinafter, an embodiment of the present invention will be described in detail as follows.
本実施形態は、清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５菌株によって発酵されたものであって、１−デオキシノジリマイシンを有効成分とする発酵物により糖質の消化吸収を抑制して、肥満予防及び肥満治療効果を得ることができ、血糖降下効果による糖尿病の予防効果を得ることができる発酵物に関する。また、この発酵物を適用した肥満予防及び治療効果を有し、糖尿病の予防効果を有する機能性食品に関するものである。 This embodiment is fermented by Bacillus subtilis DC-15 strain isolated from neat soy sauce, suppressing digestion and absorption of carbohydrates by a fermented product containing 1-deoxynojirimycin as an active ingredient, The present invention relates to a fermented product capable of obtaining obesity prevention and obesity treatment effects, and obtaining a diabetes prevention effect due to a hypoglycemic effect. Further, the present invention relates to a functional food having obesity prevention and treatment effects to which the fermented product is applied and having a diabetes prevention effect.
本発明者らは、韓国の伝統的大豆発酵食品である清麹醤から分離した新たな菌株バチルスサブチルスＤＣ−１５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ＤＣ−１５、ＫＣＴＣ １０７６３ＢＰ）がα−グルコシダーゼの阻害剤を大量生産する能力を保有し、上記バチルスサブチルスＤＣ−１５によって発酵された発酵物には、α−グルコシダーゼの阻害剤として１−デオキシノジリマイシンを含むことを確認した。 The present inventors have found that a new strain of Bacillus subtilis var. DC-15 (KCTC 10863BP) isolated from the Korean traditional soybean fermented food, Kiyo-sho, has an inhibitor of α-glucosidase. It was confirmed that the fermentation product possessing the ability to mass-produce and fermented with Bacillus subtilis DC-15 contained 1-deoxynojirimycin as an inhibitor of α-glucosidase.
上記の分離した菌株は、長い間食用として使われていて安全性が立証された清麹醤から得られたものであり、上記菌株が生産するα−グルコシダーゼ阻害剤は、適量、適正な方法で機能性食品に添加して使用することが可能である。 The isolated strain is obtained from neat soy sauce that has been used for food for a long time and has been proven to be safe, and the α-glucosidase inhibitor produced by the strain can be used in an appropriate amount and in an appropriate manner. It can be used by adding to functional foods.
上記のバチルスサブチルスＤＣ−１５は、大韓民国特許登録第０７０８２８６号に記載された方法によって、製造することが可能である。 The Bacillus subtilis DC-15 can be manufactured by the method described in Korean Patent Registration No. 0708286.
本発明において提示しているα−グルコシダーゼ阻害剤である１−デオキシノジリマイシンは、全てのバチルス菌株が生産するものではなく、一部の菌株でのみ生産が確認されている。また、本発明において提示する方法は、Ｌ−Ｂｒｏｔｈや大豆のように、互いに異なる培地造成でその生産量の差はあるものの、α−グルコシダーゼ阻害剤を生産している。特に、培養時間が経過することによって、α−グルコシダーゼ阻害剤の生産量は変化があり、牛乳を始めとして例えば脱脂粉乳、チーズ等の加工品と、大豆を始めとして例えば脱脂大豆等の加工品及び最小培地等の多様な培地で活性を示すため、α−グルコシダーゼ阻害剤が培養原料物起源のものでないことが明確である。 The 1-deoxynojirimycin, which is an α-glucosidase inhibitor presented in the present invention, is not produced by all Bacillus strains, but production is confirmed only in some strains. In addition, the method presented in the present invention produces an α-glucosidase inhibitor, such as L-Broth and soybean, although there is a difference in the amount of production between different medium preparations. In particular, as the culturing time elapses, the production amount of the α-glucosidase inhibitor changes, such as milk and processed products such as skim milk powder and cheese, and soybeans and other processed products such as defatted soybean and It is clear that the α-glucosidase inhibitor is not from a culture raw material because it shows activity in various media such as minimal media.
本実施形態において、１−デオキシノジリマイシンを始めとするα−グルコシダーゼ阻害剤は、上記の清麹醤菌であるバチルスサブチルスＤＣ−１５の培養物又はその抽出物を用いることができる。本実施形態では、１−デオキシノジリマイシンを純粋な形態で分離する必要はなく、１−デオキシノジリマイシンを含有する発酵物それ自体の形態で、あるいは乾燥粉砕物や抽出物の形で用いても良いことは勿論である。 In the present embodiment, the α-glucosidase inhibitor including 1-deoxynojirimycin may be a culture of Bacillus subtilis DC-15, which is the above-mentioned neat soy sauce, or an extract thereof. In this embodiment, it is not necessary to separate 1-deoxynojirimycin in a pure form, and it may be used in the form of a fermentation product itself containing 1-deoxynojirimycin, or in the form of a dry pulverized product or an extract. Of course it is good.
本実施形態に係る発酵物は、培地として、大豆、牛乳及びそれらの加工物からなる群から選択された１種または２種以上の混合物を用い、上記のバチルスサブチルスＤＣ−１５を分株発酵させて得ることができる。上記した大豆、牛乳及びそれらの加工物に限定されるものではないが、具体的には、例えば、牛乳、脱脂粉乳及びチーズ等と大豆、脱脂大豆等を単独または混合して用いることができる。 The fermented product according to the present embodiment uses, as a medium, one or a mixture of two or more selected from the group consisting of soybeans, milk, and processed products thereof, and uses the Bacillus subtilis DC-15 as a stock fermentation. Can be obtained. Although not limited to the above-described soybeans, milk and processed products thereof, specifically, for example, milk, skim milk powder, cheese, etc., soybeans, defatted soybeans and the like can be used alone or in combination.
例えば、１−デオキシノジリマイシンを含有する清麹醤抽出物を得るためには、清麹醤に水を加えて抽出する。抽出の原料に使用するものは限定されるものではなく、脱脂大豆、牛乳、脱脂粉乳、チーズ等又はそれらの混合物の培養物も使用することができる。また、これらの乾燥物を粉砕機で粉砕した粉末を、使用することもできる。 For example, in order to obtain a neat soy extract containing 1-deoxynojirimycin, water is added to the neat soy extract. What is used for the raw material of extraction is not limited, The culture | cultivation of skim soybean, milk, skim milk powder, cheese, etc. or those mixtures can also be used. Moreover, the powder which grind | pulverized these dry substances with the grinder can also be used.
上述の本実施形態に係る清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５菌株（ＫＣＴＣ １０７６３ＢＰ）によって発酵されたものであり、１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む発酵物は、肥満予防及び治療用発酵物として使用することができ、糖尿病予防用組成物として使用することもできる。 A fermented product that has been fermented by Bacillus subtilis DC-15 strain (KCTC 10963BP) isolated from Kiyoto soy according to the above-described embodiment and containing 1-deoxynojirimycin as an active ingredient is obesity prevention and treatment It can be used as a fermented product, and can also be used as a composition for preventing diabetes.
１−デオキシノジリマイシンは、発酵組成物の中にα−グルコシダーゼ阻害活性が１×１０３ｕｎｉｔ／ｍｌの範囲となるように含まれる場合に、本発明の目的とする効果を達成するのにより好ましい。 1-deoxynojirimycin is more preferable for achieving the intended effect of the present invention when the α-glucosidase inhibitory activity is included in the fermentation composition so as to be in the range of 1 × 10 3 units / ml. .
また、上記の発酵物は、多様な肥満予防及び治療用食品、糖尿病予防用食品として使用することができる。 Moreover, said fermented material can be used as various foods for prevention and treatment of obesity and foods for preventing diabetes.
上記の発酵物は、食餌繊維、例えばポリデキストロス、キチン、キトサン、ゼラチン等の賦形剤とともに噴霧乾燥して得られる粉末又は顆粒状に成型しても使用できるが、タブレットまたはカプセル状にしても使用できる。上記した本実施形態に係る発酵物を食品に適用する場合、食品では特定の食品群と指定することではないが、例えば、ラーメン、即席めん、カップめん、即席みそ汁などの即席食品、チーズ、乳飲料、乳酸菌飲料などの乳製品、醤油、味噌、ソース類などの調味料、即席お茶漬けのり、イミテーションチーズ等に１−デオキシノジリマイシンを含有する清麹醤菌の培養物を加えることにより調製することができる。この場合、当業者であれば、様々な種類の添加剤を適当な含量の範囲内で加えることが可能である。 The above fermented product can be used by forming into a powder or granule obtained by spray-drying with excipients such as dietary fiber such as polydextros, chitin, chitosan, gelatin, etc. Can also be used. When the fermented product according to the present embodiment described above is applied to food, it is not specified as a specific food group in food, but for example, instant food such as ramen, instant noodle, cup noodle, instant miso soup, cheese, milk drink Dairy products such as lactic acid bacteria beverages, seasonings such as soy sauce, miso, sauces, instant tea pickles, imitation cheese etc. can be prepared by adding a culture of neat soy sauce containing 1-deoxynojirimycin it can. In this case, a person skilled in the art can add various types of additives within an appropriate content range.
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 Hereinafter, the present invention will be specifically described by way of examples, but the present invention is not limited thereto.
（本実施例で使用した菌株）
本実施例で使用した菌株は、通常的なバチルス属菌株とは異なり、α−グルコシダーゼ阻害剤を大量生産する特性を示すものであって、「バチルスサブチルスＤＣ−１５」（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｖａｒ．ＤＣ−１５）と命名し、便宜上上記の菌株の名称を「バチルス属ＤＣ−１５」（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ． ＤＣ−１５）として、２００５年１月１８日付で韓国生命工学研究院の遺伝子銀行（ＫＣＴＣ、大田広域市儒城区魚隠洞５２に所在）にＫＣＴＣ １０７６３ＢＰの受託番号で寄託した。
(Strain used in this example)
The strain used in this example is different from the usual strains of the genus Bacillus, and has a characteristic of mass-producing an α-glucosidase inhibitor, and is represented by “Bacillus subtilis var. DC”. -15), and for convenience, the name of the above strain was designated as “Bacillus sp. DC-15” (Bacillus sp. DC-15) on January 18, 2005 at the Korea Biotechnology Institute's Genetic Bank (KCTC, Daejeon). Deposited with KCTC 10773BP accession number at the location of 52, Uogaku-dong, Enjo-gu, wide-area city.
（実施例１：大豆発酵物の製造）
原料大豆を洗浄後、室温で水に１６時間浸漬後、蒸煮釜で２ｋｇ／ｃｍ２、達圧３０分蒸煮した。これに、参照例で提示するバチルスサブチルスＤＣ−１５（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ＤＣ−１５）希釈液を蒸煮大豆１ｇ当たり清麹醤菌が１０３個となるように散布した後、５０ｇ用ＰＳＰ容器に充填し、細穴あきビニール皮膜で覆った。この容器を３０℃の恒温器で２４〜４８時間発酵させた。
(Example 1: Production of fermented soybeans)
The raw soybeans were washed, immersed in water at room temperature for 16 hours, and then steamed in a steaming pot at 2 kg / cm 2 and a pressure of 30 minutes. After spraying the diluted solution of Bacillus subtilis DC-15 shown in the reference example to 10 3 neat soy sauce per 1 g of steamed soybean, it is filled into a PSP container for 50 g. And covered with a fine hole perforated vinyl film. This container was fermented for 24 to 48 hours with a 30 ° C. incubator.
（実施例２：大豆発酵乾燥粉末の製造）
上記の大豆発酵物を凍結乾燥、噴霧乾燥、熱風乾燥など通常の多様な方法で乾燥して、大豆発酵粉末を得た。
(Example 2: Production of soybean fermented dry powder)
The soybean fermented product was dried by various usual methods such as freeze drying, spray drying, hot air drying, etc. to obtain soybean fermented powder.
（実験例１：有効成分の確認）
実試例２で噴霧乾燥して得た大豆発酵乾燥粉末１００ｇに蒸留水１リットルを加えて撹拌しながら４℃で１０時間抽出した後、沈殿物を遠心分離により除去した。得られた上澄液をＤｏｗｅｘ×５０×４（Ｈ＋型）のカラムを通し、蒸留水で十分に洗浄して酸中性部を除去した後、０．５ＮのＮＨ４ＯＨ液で塩基成分を溶出した。この溶出部を減圧濃縮してＬＣ−ＭＳで分析した結果、ＨＰＬＣのクロマトグラムと質量分析のデータが標準品の１−デオキシノジリマイシンのそれと一致することが確認された。
(Experimental example 1: confirmation of active ingredient)
1 liter of distilled water was added to 100 g of dried soybean fermented powder obtained by spray drying in Example 2, and the mixture was extracted with stirring at 4 ° C. for 10 hours, and then the precipitate was removed by centrifugation. The obtained supernatant was passed through a Dowex × 50 × 4 (H + type) column, washed thoroughly with distilled water to remove the acid neutral part, and then the basic component was removed with 0.5 N NH 4 OH solution. Eluted. The eluate was concentrated under reduced pressure and analyzed by LC-MS. As a result, it was confirmed that the HPLC chromatogram and the mass spectrometry data were consistent with those of the standard 1-deoxynojirimycin.
（実験例２：大豆発酵物と桑の葉のα−グルコシダーゼ阻害活性の比較）
実試例１で得られた大豆発酵物を加圧滅菌してα−グルコシダーゼ及びプロテアーゼなどの酵素を失活させた後、大豆発酵物１０ｇに１０倍量の５０ｍＭリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）を加えてホモジナイザー（ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ）で破砕した後、４℃で１０時間振とう抽出した。これを遠心分離して得た上澄液から、α−グルコシダーゼ阻害剤の活性を測定した。１Ｍリン酸緩衝溶液（ｐＨ７．０）５０μＬ、豚小腸起源α−グルコシダーゼ酵素液５０μＬ、適当に希釈した実試例１の大豆発酵抽出物５０μＬを混合して３７℃で３分間予備加温した後、０．０７５％麦芽糖溶液５００μＬを加えて反応させた。３０分間反応後、湯で５分間加熱して反応を停止させた。反応液に生成されたブドウ糖をブドウ糖定量用キットで反応させて、５００ｎｍで吸光度を測定した。大豆発酵抽出物の代わりに水を加えて反応させたものを、空試料（Ｂｌａｎｋ）として次の＜式１＞によって阻害率を求めた。
(Experimental example 2: Comparison of α-glucosidase inhibitory activity between fermented soybeans and mulberry leaves)
The soybean fermented product obtained in Example 1 was autoclaved to inactivate enzymes such as α-glucosidase and protease, and then 10 times the amount of 50 mM phosphate buffer solution (pH 7.0) to 10 g of the soy fermented product. ) Was added and crushed with a homogenizer, followed by extraction with shaking at 4 ° C. for 10 hours. The activity of the α-glucosidase inhibitor was measured from the supernatant obtained by centrifugation. After mixing 50 μL of 1 M phosphate buffer solution (pH 7.0), 50 μL of porcine small intestine origin α-glucosidase enzyme solution and 50 μL of appropriately diluted soybean fermented extract of Example 1 and preheating at 37 ° C. for 3 minutes Then, 500 μL of 0.075% maltose solution was added and allowed to react. After reacting for 30 minutes, the reaction was stopped by heating with hot water for 5 minutes. Glucose produced in the reaction solution was reacted with a glucose determination kit, and the absorbance was measured at 500 nm. Inhibition rate was determined by the following <Formula 1> as an empty sample (Blank) obtained by reacting with water instead of the fermented soybean extract.
阻害率（％）＝（（Ａ−Ｂ）／Ａ）×１００ ・・・（式１） Inhibition rate (%) = ((A−B) / A) × 100 (Formula 1)
上記の式１において、ＡはＢｌａｎｋの吸光度、Ｂは試料の吸光度である。 In the above formula 1, A is the absorbance of the blank, and B is the absorbance of the sample.
上記の＜表１＞は、大豆発酵物及び桑の葉のα−グルコシダーゼ阻害活性の分布を示したものであり、１ユニット（ｕｎｉｔ）は、α−グルコシダーゼを１％阻害する活性を意味する。上記＜表１＞によれば、本実施例に係る大豆発酵物は、培養時間によってα−グルコシダーゼ阻害活性が高くなることが認められ、乾燥粉末の場合、活性がより高いことが認められた。また、培養時間が２４時間より長くなる場合には、桑の葉よりも高いα−グルコシダーゼ阻害活性を示すことが認められた。 <Table 1> above shows the distribution of α-glucosidase inhibitory activity of soybean fermented products and mulberry leaves, and 1 unit means the activity of inhibiting α-glucosidase by 1%. According to the above <Table 1>, it was recognized that the soybean fermented product according to the present example has higher α-glucosidase inhibitory activity depending on the culture time, and in the case of a dry powder, it was recognized that the activity was higher. Moreover, when culture | cultivation time became longer than 24 hours, it was recognized that (alpha)-glucosidase inhibitory activity higher than a mulberry leaf is shown.
上記の結果から、本実施例に係る発酵物は、発酵物それ自体、乾燥粉末などの多様な形態に製造してもα−グルコシダーゼ阻害活性が高く示されることが認められた。これに対し、市販清麹醤では、α−グルコシダーゼ阻害活性が得られなかった。 From the above results, it was confirmed that the fermented product according to the present example showed high α-glucosidase inhibitory activity even when the fermented product itself was produced in various forms such as a dry powder. In contrast, α-glucosidase inhibitory activity was not obtained with commercial neat soy sauce.
（実験例３：大豆発酵物摂取による血糖値の変化測定）
薬物を服用していない健康な男性に、測定前日の午後９時以降の食事を制限し、翌朝に実施例１で得た生大豆発酵物３０ｇを食べた１０分後に砂糖４０ｇを摂取させた。３０分後に、簡易血糖測定器（ファインテスト、インフォピア）を用いて血糖値を測定した。その結果を、次の＜表２＞に示す。
(Experimental example 3: Measurement of changes in blood glucose level due to intake of fermented soybeans)
A healthy man who did not take the drug was restricted from eating after 9 pm the day before the measurement, and the next morning 10 minutes after eating 30 g of the raw soybean fermented product obtained in Example 1, 40 g of sugar was ingested. After 30 minutes, the blood glucose level was measured using a simple blood glucose meter (Fine Test, Infopia). The results are shown in the following <Table 2>.
上記の＜表２＞は、実試例１の大豆発酵物摂取による血糖値の変化を示したものであり、対照群に比較して大豆発酵物を摂取した場合、血糖値の上昇抑制効果が認められた。 <Table 2> above shows the change in blood glucose level due to the intake of soybean fermented product of Example 1, and when the soybean fermented product is ingested compared to the control group, the effect of suppressing the increase in blood glucose level is shown. Admitted.
（実験例４：大豆発酵乾燥粉末摂取による体重変化の測定）
実試例２で得た１−デオキシノジリマイシン含有大豆発酵乾燥粉末２５０ｍｇを、カプセルに充填した。対照群は、実験例２で使用した市販清麹醤の粉末２５０ｍｇをカプセルに充填した。この試料を、健康な２０代成人女性３０人による体重減量試験に供した。すなわち、毎食事１０分前にカプセル５錠を服用後、普段と同じ量の食事をしながら朝９時に体重を測定した。体重変化の結果を図１及び２に示す。
(Experimental example 4: Measurement of body weight change by intake of fermented soybean powder)
The capsules were filled with 250 mg of 1-deoxynojirimycin-containing fermented soybean fermented powder obtained in Example 2. In the control group, 250 mg of commercial neat soy powder used in Experimental Example 2 was filled into capsules. This sample was subjected to a weight loss test by 30 healthy adult women in their 20s. That is, after taking 5 capsules 10 minutes before each meal, the body weight was measured at 9:00 am while eating the same amount of meal as usual. The results of changes in body weight are shown in FIGS.
図１及び２によれば、市販清麹醤粉末を摂取した場合（図２）に比べて、本実施例に係る大豆発酵乾燥粉末を摂取した場合（図１）の方が、体重減量の変化が大きいことが認められた。 According to FIGS. 1 and 2, the weight loss is more when the soybean fermented dry powder according to the present example is consumed (FIG. 1) than when the commercially available neat soy powder is consumed (FIG. 2). Was found to be large.
（実施例３：大豆発酵粉末を加えたラーメンの製造）
小麦粉１００質量部に実施例２で得た１−デオキシノジリマイシン含有大豆発酵乾燥粉末２質量部（ラーメン１）及び３質量部（ラーメン２）を配合して、ラーメンを常法によって製造した。このように製造したラーメンでは、清麹醤独特の臭いは感じられなかった。
(Example 3: Production of ramen with added soybean fermented powder)
100 parts by weight of wheat flour was mixed with 2 parts by weight (ramen 1) and 3 parts by weight (ramen 2) of 1-deoxynojirimycin-containing soybean fermented dry powder obtained in Example 2 to produce ramen by a conventional method. The ramen produced in this way did not feel the peculiar smell of neat and soy sauce.
（実験例５：大豆発酵粉末を加えたラーメンのα−グルコシダーゼ阻害活性の測定）
上記の実施例３によって製造されたラーメンのα−グルコシダーゼ阻害活性を、実験例２の方法により測定した。その結果を、次の＜表３＞に示す。
(Experimental example 5: Measurement of α-glucosidase inhibitory activity of ramen added with soybean fermented powder)
The α-glucosidase inhibitory activity of the ramen produced in Example 3 was measured by the method of Experimental Example 2. The results are shown in the following <Table 3>.
上記の＜表３＞によれば、ラーメンに製造した後α−グルコシダーゼ阻害活性は、変化がないことが認められた。 According to <Table 3> above, it was confirmed that the α-glucosidase inhibitory activity was not changed after the ramen was produced.
（実験例６：大豆発酵乾燥粉末含有ラーメン摂取による血糖値の変化測定）
実試例３で製造したラーメン１を、健康な成人男性に摂取させた後、血糖値の変化を観察した。すなわち、試験前日の午後９時より絶食した被験者に、実施例３のラーメン１を経口負荷させた後、簡易血糖測定器（ファインテスト、インフォピア）を用いて経時的に血糖値を測定した。対照群は、同じ方法で製造した一般ラーメンを、経口負荷させた。得られた血糖値の変化を、次の図３に示す。
(Experimental example 6: Measurement of change in blood glucose level by intake of ramen containing soybean fermented dry powder)
After the ramen 1 produced in Example 3 was ingested by a healthy adult male, the change in blood glucose level was observed. That is, the subject who fasted from 9:00 pm the day before the test was orally loaded with the ramen 1 of Example 3, and then the blood glucose level was measured over time using a simple blood glucose meter (Fine Test, Infopia). The control group was orally loaded with general ramen produced by the same method. The resulting change in blood glucose level is shown in FIG.
図３によれば、本発明の実施例３のラーメン１を摂取した場合、血糖値の上昇が抑えられることが認められた。 According to FIG. 3, when the ramen 1 of Example 3 of this invention was ingested, it was recognized that the raise of a blood glucose level is suppressed.
（実施例４：多様な培地を使用した事例の検討）
本発明の応用範囲を広げる目的で、培地に使用する原料として、大豆の他に脱脂大豆、牛乳、脱脂粉乳、チーズなどを用いて１−デオキシノジリマイシンの生産を検討した。
(Example 4: Examination of examples using various culture media)
For the purpose of expanding the application range of the present invention, the production of 1-deoxynojirimycin was examined using defatted soybean, milk, skimmed milk powder, cheese, etc. in addition to soybean as a raw material used in the medium.
培養条件は、液体振とう以外は、実施例１と同一である。その結果は、＜表４＞、＜表５＞及び＜表６＞に示すように、牛乳または脱脂粉乳を発酵主剤にした場合、高いα−グルコシダーゼ阻害活性を示してチーズのような発酵乳製品に適用出来ることが判明した。 The culture conditions are the same as in Example 1 except for liquid shaking. As a result, as shown in <Table 4>, <Table 5>, and <Table 6>, when milk or skim milk powder is used as a fermentation main ingredient, fermented milk products such as cheese exhibiting high α-glucosidase inhibitory activity. It became clear that it was applicable to.
上記の＜表４＞は、脱脂粉乳と脱脂大豆粉及びそれらの混合物を培地に使用した食品用α−グルコシダーゼ阻害剤の生産可能性を示したものである。 <Table 4> above shows the possibility of producing an α-glucosidase inhibitor for foods using skim milk powder, defatted soybean powder, and a mixture thereof as a medium.
上記の＜表５＞は、牛乳と脱脂大豆粉及びそれらの混合物を培地に使用した食品用α−グルコシダーゼ阻害剤の生産可能性を示したものである <Table 5> above shows the possibility of producing an α-glucosidase inhibitor for foods using milk, defatted soybean flour and a mixture thereof as a medium.
上記の＜表６＞は、チーズと脱脂大豆粉及びそれらの混合物を培地に使用した食品用α−グルコシダーゼ阻害剤の生産可能性を示したものである <Table 6> above shows the possibility of producing an α-glucosidase inhibitor for foods using cheese, defatted soybean flour and a mixture thereof as a medium.
（実施例５：機能性チーズの製造）
プロセスチーズ２０質量部に上記実試例４で発酵した培養物を噴霧乾燥したものを２質量部配合して、機能性チーズを製造した。培養物の添加によるチーズの風味への影響は、なかった。
(Example 5: Production of functional cheese)
Functional cheese was produced by blending 20 parts by mass of processed cheese with 2 parts by mass of the spray-dried culture fermented in Example 4 described above. The addition of the culture had no effect on the cheese flavor.
（実施例６：機能性発酵乳の製造）
発酵乳１００質量部に、実施例２で得た大豆発酵乾燥粉末１〜２質量部配合して、機能性発酵乳を製造した。このように製造した機能性発酵乳は、清麹醤独特の臭いは感じられなかった。上記の機能性発酵乳の製造後十日間α−グルコシダーゼ阻害活性の変化はなかった。
(Example 6: Production of functional fermented milk)
Functional fermented milk was manufactured by blending 100 parts by mass of fermented milk with 1 to 2 parts by mass of dried soybean fermented powder obtained in Example 2. The functional fermented milk produced in this way did not feel the peculiar smell of neat soy sauce. There was no change in the α-glucosidase inhibitory activity for 10 days after the production of the functional fermented milk.
以上、説明したように、本発明は、バチルスサブチルスＤＣ−１５によって発酵された清麹醤から分離した１−デオキシノジリマイシンを有効成分として血糖降下及びカロリーカット効果を奏する発酵物を提供する。 As described above, the present invention provides a fermented product that exerts a hypoglycemic effect and a calorie-cutting effect using 1-deoxynojirimycin isolated from neat soy sauce fermented with Bacillus subtilis DC-15 as an active ingredient.
また、本発明は、上記の発酵物を含む肥満予防及び治療用食品と糖尿病予防用食品等を提供する。 Moreover, this invention provides the food for obesity prevention and treatment containing the said fermented material, the food for diabetes prevention, etc.
以上、添付図面を参照しながら本発明の好適な実施形態について説明したが、本発明はかかる例に限定されないことは言うまでもない。当業者であれば、特許請求の範囲に記載された範疇内において、各種の変更例または修正例に想到し得ることは明らかであり、それらについても当然に本発明の技術的範囲に属するものと了解される。 As mentioned above, although preferred embodiment of this invention was described referring an accompanying drawing, it cannot be overemphasized that this invention is not limited to this example. It will be apparent to those skilled in the art that various changes and modifications can be made within the scope of the claims, and these are naturally within the technical scope of the present invention. Understood.
Claims (6)
１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む
ことを特徴とする、肥満予防及び治療用発酵物。 A fermented product fermented by a Bacillus subtilis strain,
A fermented product for preventing and treating obesity, comprising 1-deoxynojirimycin as an active ingredient.
１−デオキシノジリマイシンを有効成分として含む
ことを特徴とする、糖尿病予防用発酵物。 A fermented product fermented by a Bacillus subtilis strain,
A fermented product for preventing diabetes, comprising 1-deoxynojirimycin as an active ingredient.
大豆、牛乳及びそれらの加工物からなる群から選ばれた１種または２種以上の混合物からなるものである
ことを特徴とする、請求項１または２に記載の発酵物。 Fermented product of the Bacillus subtilis strain,
The fermented product according to claim 1 or 2, wherein the fermented product is one or a mixture of two or more selected from the group consisting of soybeans, milk and processed products thereof.
清麹醤から分離したバチルスサブチルスＤＣ−１５菌株（ＫＣＴＣ １０７６３ＢＰ）である
ことを特徴とする、請求項１または２に記載の発酵物。 The Bacillus subtilis strain is
The fermented product according to claim 1 or 2, wherein the fermented product is Bacillus subtilis DC-15 strain (KCTC 10963BP) isolated from neat soy sauce.
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