JP2008164523A - Allergy diagnostic drug utilizing saliva - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定する技術に関する。より詳細には、本発明は、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥ、特に、特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥを測定する技術に関する。 The present invention relates to a technique for measuring IgE in a sample. More specifically, the present invention relates to a technique for measuring IgE specific for an antigen capable of binding to IgE, particularly IgE specific for a specific allergen.
生体に異物（抗原）が侵入すると、生体を異物から守るために、その異物を認識して排除しようとする免疫反応が生じる。この免疫反応は生体にとって不可欠な機構である。しかし、免疫反応が生体に対して種々のアレルギー性疾患を引き起こすことがある。 When a foreign substance (antigen) enters a living body, an immune reaction is generated that tries to recognize and remove the foreign body in order to protect the living body from the foreign body. This immune response is an essential mechanism for the living body. However, the immune reaction may cause various allergic diseases to the living body.
これまで、アレルギー性疾患の診断は、酵素結合免疫検定法（非特許文献１）、ラジノイムノアッセイなどを用いて血中のＩｇＥ量を定量する方法、抗原抗体反応系を用いてアレルゲンを検出する方法などが利用されてきた。しかし、これらの方法では患者の血液を必要とすることから、患者に大きな苦痛を与えるという欠点が存在する。さらに、採血を必要とすることから医療施設などでしか実施することができず、個人レベルで検査をすることはできなかった。しかし、アレルギー性疾患の患者が、個人のレベルで自己のアレルゲンを知っておくことは重要である。 Until now, allergic diseases have been diagnosed using enzyme-linked immunoassay (Non-patent Document 1), a method of quantifying the amount of IgE in blood using a radioimmunoassay, or the like, and detecting an allergen using an antigen-antibody reaction system. Methods have been used. However, these methods require the patient's blood and have the disadvantage of causing great pain to the patient. Furthermore, since blood collection is required, it can only be performed at medical facilities and the like and cannot be examined at the individual level. However, it is important for patients with allergic diseases to know their allergens at the individual level.
そこで、自己のアレルゲンを個人レベルで特定するための、安全で、かつ簡易な検査方法を確立することが必要とされている。
本発明の課題は、唾液中に微量に存在するＩｇＥを測定し、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a technique for measuring IgE present in a minute amount in saliva and detecting an allergic characteristic of a specific allergen.
上記の課題を解決するために、本発明者等は鋭意研究の結果、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥを測定する技術を用い、唾液中のＩｇＥ全量と特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥとを測定することによって、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術を見出し、本発明を完成させるに至ったものである。 In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors, as a result of diligent research, use a technique for measuring IgE specific for an antigen having the ability to bind to IgE, and are specific to the total amount of IgE in saliva and a specific allergen. By measuring specific IgE, a technique for detecting allergic characteristics of a specific allergen has been found, and the present invention has been completed.
上記目的を達成するために、本発明は、例えば、以下の手段を提供する。 In order to achieve the above object, the present invention provides, for example, the following means.
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するための基材を提供する。この基材は、表面上に固定化された、該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原を含む。 In one aspect, the present invention provides a substrate for measuring IgE in a sample. This substrate comprises an antigen having the ability to bind to the IgE immobilized on the surface.
１つの実施形態において、本発明の基材において使用される抗原は、ＩｇＥを認識する抗体である。 In one embodiment, the antigen used in the substrate of the invention is an antibody that recognizes IgE.
別の実施形態において、本発明の基材において使用されるＩｇＥを認識する抗体は、ヒト由来である。 In another embodiment, the antibody recognizing IgE used in the substrate of the present invention is human.
別の実施形態において、本発明の基材において使用される抗原は、アレルゲンである。 In another embodiment, the antigen used in the substrate of the present invention is an allergen.
好ましい実施形態において、本発明の基材において使用されるアレルゲンは、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニおよびケナガコナダニから選択されるダニ由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される植物由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウおよびスズメノヒエから選択される花粉アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される種子アレルゲン；ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトンおよびビール酵母から選択されるカビ・酵母由来アレルゲン；ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカおよびカイコから選択される昆虫由来アレルゲン；蛔虫、包虫およびアニサキスから選択される寄生虫由来アレルゲン；ネコ皮膚、イヌ上膚、ウマ皮膚、ウシ皮膚、イヌ皮膚、モルモット上皮、ハトのふん、ガチョウの羽毛、セキセイインコのふん、セキセイインコの羽毛、セキセイイン血清蛋白、ヤギ上皮、ヒツジ上皮、家兎上皮、ブタ上皮、ハムスター上皮、ニワトリ羽毛、アヒル羽毛ならびにラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキおよびホタテ由来のアレルゲンから選択される動物由来アレルゲン；卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカおよびゼラチンから選択される食餌性アレルゲン；綿および絹から選択される繊維性アレルゲン；ヒトインスリン、ゼラチン、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される薬品性アレルゲン；オオバコ種子、絹、イソシアネートＴＤＩ、イソシアネートＭＤＩ、イソシアネートＨＤＩ、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される職業性アレルゲン；およびハウスダストならびにこれらの混合物からなる群より選択される少なくとも１つの抗原である。 In a preferred embodiment, the allergen used in the substrate of the present invention is an allergen derived from a tick selected from the group of mite, mites, mites, mites, mites, and mites; cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, elm, Olives, walnuts, willows, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, ragweed, giant mugwort, mugwort, french chrysanthemum, dandelion, spatula, whitewood, cypress, cinnamon, nettle, canamgrass, ginkgo, moth , Barley, blue whale, reed, nagahagusa, konukagusa, seibanmonokoshi, wheat, oosumenoteppo, sparrow tree, rye, barley Oats, corn, rice, sesame, buckwheat, peas, soybeans, kidney beans, hazel, brazil nuts, almonds, tomatoes, carrots, oranges, potatoes, coconuts, strawberries, garlic, onions, apples, bamboo shoots, sweet potatoes, millet, millet Plant-derived allergens selected from: Japanese millet, kiwi, celery, parsley, melon, mustard, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin, ovomucoid, oyster, yam, watermelon and plantain , Maple, alder, birch, beech, juniper, oak, elm, olives, walnuts, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, giant grass, mugwort, mugwort, france Choco, dandelion, psyllium, white-spotted, gypsophila, duckweed, nettle, canamgras, hargaya, gossip, camouflage, broad-leafed pegs, barley, flowers, oak moths, reeds, nagahasa, konukagusa, seiban-no-koseo, tezo Allergens: Japanese cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, Japanese oak, elm, olives, walnuts, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, octopus, sagebrush, mugwort, french peony, dandelion, hera Shiroza, Dinosaur, Himesiba, Nettle, Kanamura, Hurghaya, Drosophila, Camogaya, Hirohoshokegusa, Hosomugi, Oagogaeri, Reed, Nagaha Rabbit, Cyprus, Seban monokoshi, Wheat, Prunus japonica, Vulgaris, Rye, Barley, Oat, Corn, Rice, Sesame, Buckwheat, Pea, Peanut, Soybean, Bean bean, Hazel, Brazil nut, Almond, Tomato, Carrot, Orange, Potato, coconut, strawberry, garlic, onion, apple, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, mackerel, kiwi, celery, parsley, melon, mustard, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin , Ovomucoid, Oyster, Yam, Watermelon and Psyllium seed allergens; Penicillium, Cladosporium, Aspergillus, Mucor, Candida, Alternaria, Helmindpo Um, Pityrosporum, Staphylococcus aureus enterotoxin A, Staphylococcus aureus enterotoxin B, Trichophyton and allergens from fungi and yeast selected from brewer's yeast; from bees, wasps, wasps, cockroaches, chironomids, moths, aedes and silkworms Insect-derived allergens selected; Parasite-derived allergens selected from helminths, worms and anisakis; cat skin, dog skin, horse skin, cow skin, dog skin, guinea pig epithelium, pigeon dung, goose feathers, budgerigar Parakeet dung, budgerigar feather, budgerigar serum protein, goat epithelium, sheep epithelium, rabbit epithelium, pig epithelium, hamster epithelium, chicken feather, duck feather and rat, mouse, cod, crab, shrimp, mussel, tuna , Salmon, mackerel, squid, ta , Horse mackerel, sardine, lobster, flounder, salmon roe, tarako, clams, oysters and scallops, allergens derived from animals; egg white, milk, cod, wheat, rye, barley, oats, corn, rice, sesame, buckwheat Pea, peanut, soybean, kidney bean, hazelnut, brazil nut, almond, crab, shrimp, tomato, pork, beef, carrot, orange, potato, coconut, mussel, tuna, salmon, strawberry, brewer's yeast, garlic, Onion, apple, mackerel, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, millet, squid, octopus, horse mackerel, sardine, yolk, α-lactalbumin, β-lactoglobulin, casein, gluten, lobster, cheese, molded cheese, cheddar cheese , Chicken, kiwi, cello , Parsley, melon, lamb, mustard, malt, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin, ovomucoid, flounder, salmon roe, clam, clam, oyster, scallop, yam, walnut, watermelon and Dietary allergen selected from gelatin; fibrous allergen selected from cotton and silk; human insulin, gelatin, tolylene diisocyanate (isocyanate TDI), diphenylmethane diisocyanate (isocyanate MDI), hexamethylene diisocyanate (isocyanate HDI), ethylene oxide Chemical allergens selected from phthalic anhydride, latex and formalin; psyllium seed, silk, isocyanate TDI, isocyanate MDI, isocyanate HD O, an occupational allergen selected from ethylene oxide, phthalic anhydride, latex and formalin; and at least one antigen selected from the group consisting of house dust and mixtures thereof.
他の実施形態において、本発明の基材において使用され得る基材は、樹脂、ガラス、セルロイドおよび紙からなる群より選択される材料を含む。 In other embodiments, the substrate that can be used in the substrate of the present invention comprises a material selected from the group consisting of resin, glass, celluloid and paper.
別の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するための診断用基材セットを提供する。この診断用基材セットは、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；
を含む。
In another aspect, the present invention provides a diagnostic substrate set for detecting allergic attributes to specific allergens in a subject. This diagnostic base set is
A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized; and A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized;
including.
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、前記特定のアレルゲンの前記被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質が決定される。 In one embodiment, in the diagnostic substrate set of the present invention, the ratio of the specific allergen to the IgE antibody of the subject is obtained, and the allergy to the specific allergen is determined using the ratio exceeding a certain ratio as an index. The characteristics are determined.
別の実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、特定のアレルゲンは、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニおよびケナガコナダニから選択されるダニ由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される植物由来アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウおよびスズメノヒエから選択される花粉アレルゲン；スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカおよびオオバコから選択される種子アレルゲン；ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトンおよびビール酵母から選択されるカビ・酵母由来アレルゲン；ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカおよびカイコから選択される昆虫由来アレルゲン；蛔虫、包虫およびアニサキスから選択される寄生虫由来アレルゲン；ネコ皮膚、イヌ上膚、ウマ皮膚、ウシ皮膚、イヌ皮膚、モルモット上皮、ハトのふん、ガチョウの羽毛、セキセイインコのふん、セキセイインコの羽毛、セキセイイン血清蛋白、ヤギ上皮、ヒツジ上皮、家兎上皮、ブタ上皮、ハムスター上皮、ニワトリ羽毛、アヒル羽毛ならびにラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキおよびホタテ由来のアレルゲンから選択される動物由来アレルゲン；卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカおよびゼラチンから選択される食餌性アレルゲン；綿および絹から選択される繊維性アレルゲン；ヒトインスリン、ゼラチン、イソシアネートＴＤＩ、イソシアネートＭＤＩ、イソシアネートＨＤＩ、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される薬品性アレルゲン；オオバコ種子、絹、イソシアネートＴＤＩ、イソシアネートＭＤＩ、イソシアネートＨＤＩ、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックスおよびホルマリンから選択される職業性アレルゲン；およびハウスダストならびにこれらの混合物からなる群より選択される。 In another embodiment, in the diagnostic substrate set of the present invention, the specific allergen is a mite-derived allergen selected from the group of mite, mites, mites, mites, mites and mites; cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, Quercus, elm, olive, walnut, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, giant grass, sagebrush, mugwort, france dandelion, dandelion, hera plantain, white-leaf, red-bellied grass, nettle, gypsum, moth Camellia, Broad-bellied Ragweed, Barley, Blue-tailed Wingtail, Reed, Nagahagusa, Konukagusa, Seiban Monokoshi, Wheat, Oosumenotepou, Suzumehioe, Rye, Barley Oats, corn, rice, sesame, buckwheat, peas, peanuts, soybeans, kidney beans, hazel, brazil nuts, almonds, tomatoes, carrots, oranges, potatoes, coconuts, strawberries, garlic, onions, apples, bamboo shoots, sweet potatoes, millet, Plant-derived allergen selected from millet, millet, kiwi, celery, parsley, melon, mustard, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin, ovomucoid, oyster, yam, watermelon and plantain; Japanese cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, Japanese oak, elm, olives, walnuts, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, red grass, mugwort, franc Selected from Giku, Dandelion, Psyllium, Shiroza, Achillinus, Himeiba, Nettle, Kanamura, Hurghaya, Syringa, Camouflage, Hiroshou nokegusa, Hosomugi, Oagogaeri, Ashi, Nagahagusa, Konukagoshi, Shirameochosos Allergens: Japanese cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, Japanese oak, elm, olives, walnuts, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, octopus, sagebrush, mugwort, french peony, dandelion, velvet Shiroza, Dinosaur, Himesiba, Nettle, Kanamura, Hurghaya, Drosophila, Camogaya, Hirohoshi nokegusa, Giant barley, Greater moth, Reed, Naga Rabbits, scallops, black-spotted wheat, wheat, barnyard grass, sparrows, rye, barley, oats, corn, rice, sesame, buckwheat, peas, peanuts, soybeans, kidney beans, hazel, brazil nuts, almonds, tomatoes, carrots, oranges, Potato, coconut, strawberry, garlic, onion, apple, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, mackerel, kiwi, celery, parsley, melon, mustard, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin , Ovomucoid, Oyster, Yam, Watermelon and Psyllium seed allergens; Penicillium, Cladosporium, Aspergillus, Mucor, Candida, Alternaria, Helmindos Mold, yeast-derived allergens selected from Li, Pityrosporum, Staphylococcus aureus enterotoxin A, Staphylococcus aureus enterotoxin B, trichophyton and brewer's yeast; from honeybees, wasps, wasps, cockroaches, chironomids, moths, jabuka and silkworm Insect-derived allergens selected; Parasite-derived allergens selected from helminths, worms and anisakis; cat skin, dog skin, horse skin, cow skin, dog skin, guinea pig epithelium, pigeon dung, goose feathers, budgerigar Parakeet dung, budgerigar feather, budgerigar serum protein, goat epithelium, sheep epithelium, rabbit epithelium, pig epithelium, hamster epithelium, chicken feather, duck feather and rat, mouse, cod, crab, shrimp, mussel, tuna , Salmon, mackerel, squid, Animal-derived allergens selected from allergens from sword, horse mackerel, sardine, lobster, flounder, salmon roe, clam, clams, oysters and scallops; egg white, milk, cod, wheat, rye, barley, oats, corn, rice, sesame, Buckwheat, pea, peanut, soybean, kidney bean, hazelnut, Brazil nut, almond, crab, shrimp, tomato, pork, beef, carrot, orange, potato, coconut, mussel, tuna, salmon, strawberry, brewer's yeast, garlic , Onion, apple, mackerel, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, millet, squid, octopus, horse mackerel, sardine, yolk, α-lactalbumin, β-lactoglobulin, casein, gluten, lobster, cheese, molded cheese, cheddar Cheese, chicken, kiwi, se Li, parsley, melon, lamb, mustard, malt, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin, ovomucoid, flounder, salmon roe, clam, clam, oyster, scallop, yam, walnut, watermelon A dietary allergen selected from and gelatin; a fibrous allergen selected from cotton and silk; a drug selected from human insulin, gelatin, isocyanate TDI, isocyanate MDI, isocyanate HDI, ethylene oxide, phthalic anhydride, latex and formalin An allergen selected from psyllium seed, silk, isocyanate TDI, isocyanate MDI, isocyanate HDI, ethylene oxide, phthalic anhydride, latex and formalin; And house dust and mixtures thereof.
他の局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ）該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原が固定化された基材；および
Ｂ）標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
In another aspect, the present invention provides a kit for measuring IgE in a sample. This kit
A) a substrate on which an antigen capable of binding to IgE is immobilized; and B) a labeled anti-IgE antibody.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、酵素性、蛍光性、放射性、発光性または発色性を有する。 In one embodiment, the label used in the kit of the present invention is enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent or chromogenic.
別の局面において、本発明は、被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
In another aspect, the present invention provides a kit for measuring the total amount of IgE in saliva in a subject. This kit
A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against IgE antibody of the subject is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
他の局面において、本発明は、被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
In another aspect, the present invention provides a kit for measuring specific allergen-specific IgE in saliva in a subject. This kit
A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
別の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキットを提供する。このキットは、
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む。
In another aspect, the present invention provides a kit for detecting allergic attributes to a particular allergen in a subject. This kit
A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized;
A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステムを提供する。このシステムは、
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材；
Ｂ）該ＩｇＥに対する標識された抗ＩｇＥ抗体；および
Ｃ）前記該標識の有無を調べる手段、を含む。
In one aspect, the present invention provides a system for measuring IgE in a sample. This system
A) a substrate on which an antigen having the ability to bind to IgE is immobilized;
B) a labeled anti-IgE antibody against the IgE; and C) means for examining the presence or absence of the label.
１つの実施形態において、本発明のシステムにおいて使用される標識の有無を調べる手段は、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法および凝集反応検定法からなる群より選択される方法を実現する手段である。 In one embodiment, means for determining the presence or absence of a label used in the system of the present invention include enzyme-linked immunoassay, radioimmunoassay, immunoprecipitation, fluorescence immunoassay, chemiluminescence assay, immunoblot and aggregation. Means for realizing a method selected from the group consisting of reaction assays.
１つの局面において、本発明は、唾液中のＩｇＥを測定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材を提供する工程；
Ｂ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｃ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｄ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出する工程
を包含する。
In one aspect, the present invention provides a method for measuring IgE in saliva. This method comprises the following steps:
A) providing a substrate on which an antigen having the ability to bind to IgE is immobilized;
B) contacting the substrate with the sample under conditions that form an antigen-IgE complex;
C) subjecting the substrate to conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds; and D) detecting the presence or absence of a label derived from the labeled anti-IgE antibody. The process of carrying out is included.
１つの実施形態において、本方法の前記Ｂ）工程では、前記基材と前記ＩｇＥとが、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内にわたり接触される。 In one embodiment, in the step B) of the present method, the base material and the IgE are contacted in the range of 4 ° C. to 45 ° C. for 1 hour or less.
別の実施形態において、本方法の前記Ｃ）工程では、前記抗原−ＩｇＥ複合体と、前記標識された抗ＩｇＥ抗体とが、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内にわたり反応される。 In another embodiment, in the step C) of the present method, the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody are reacted within a range of 4 ° C. to 45 ° C. for 1 hour.
別の実施形態において、本方法の前記標識の有無を検出する工程は、前記基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。 In another embodiment, the step of detecting the presence or absence of the label of the method comprises reacting the substrate with tetramethylbenzidine and measuring the absorbance at 450 nm.
１つの局面において、本発明は、被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：
Ａ）該被験体の唾液を提供する工程；
Ｂ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程；
Ｃ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程；
Ｄ）該基材と該唾液とを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｅ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｆ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出し、該特定のアレルゲンの該被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定する工程
を包含する。
In one aspect, the present invention provides a method for detecting a characteristic of a subject for a particular allergen. This method comprises the following steps:
A) providing the subject's saliva;
B) providing an IgE antibody substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized;
C) providing an allergen substrate on which the specific allergen is immobilized;
D) contacting the substrate with the saliva under conditions that form an antigen-IgE complex;
E) subjecting the substrate to conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds; and F) detecting the presence or absence of a label derived from the labeled anti-IgE antibody And determining the ratio of the specific allergen to the IgE antibody of the subject, and determining the allergic characteristics of the specific allergen using as an index that the ratio exceeds a certain ratio.
１つの局面において、本方法では、
前記被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材は：
Ｄ−１）該ＩｇＥ抗体基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−１）該ＩｇＥ抗体基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−１）該ＩｇＥ抗体基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供され、
前記特定のアレルゲンが固定化された基材は：
Ｄ−２）該アレルゲン基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−２）該アレルゲン基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−２）該アレルゲン基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供される。
In one aspect, the method includes:
The substrate on which the anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized is:
D-1) contacting the IgE antibody substrate with the saliva overnight at 4 ° C .;
E-1) a step of reacting the IgE antibody substrate with an anti-IgE antibody labeled with horseradish peroxidase at room temperature for 2 hours; and F-1) a reaction of the IgE antibody substrate with tetramethylbenzidine. To be subjected to a process of measuring absorbance at 450 nm,
The substrate on which the specific allergen is immobilized is:
D-2) contacting the allergen substrate with the saliva at 4 ° C. overnight;
E-2) reacting the allergen substrate with an anti-IgE antibody labeled with horseradish peroxidase at room temperature for 2 hours; and F-2) reacting the allergen substrate with tetramethylbenzidine. It is used for the process of measuring the absorbance at 450 nm.
別の実施形態において、本方法において使用される前記ＩｇＥ抗体基材と前記アレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体は、それぞれ別の標識で標識されている。 In another embodiment, the labeled anti-IgE antibody used in the reaction between the IgE antibody substrate and the allergen substrate used in the present method is labeled with a different label.
本発明によって、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥを測定する技術が提供される。本発明のＩｇＥを測定する技術は、従来の測定技術では測定することができなかった、唾液中に存在する微量のＩｇＥを測定することができる。従って、本発明の技術により、採血等を必要とせず、唾液を利用して簡便にＩｇＥを測定することが可能となった。この測定方法を用いた、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出する技術も、本発明によって初めて提供されるものである。 The present invention provides a technique for measuring IgE specific to an antigen capable of binding to IgE. The technique for measuring IgE of the present invention can measure a minute amount of IgE present in saliva, which could not be measured by conventional measurement techniques. Therefore, the technique of the present invention makes it possible to easily measure IgE using saliva without requiring blood collection or the like. The present invention also provides for the first time a technique for detecting allergic characteristics for a specific allergen using this measurement method.
以下、本発明を説明する。本明細書の全体にわたり、単数形の冠詞（例えば、英語の場合は「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」など）は、特に言及しない限り、その複数形の概念をも含むことが理解されるべきである。また、本明細書において使用される用語は、特に言及しない限り、当該分野で通常用いられる意味で用いられることが理解されるべきである。矛盾する場合、本明細書（定義を含めて）が優先する。 The present invention will be described below. Throughout this specification, singular articles (eg, “a”, “an”, “the”, etc. in the English language) are understood to include the concept of the plural unless specifically stated otherwise. Should be. In addition, it is to be understood that the terms used in the present specification are used in the meaning normally used in the art unless otherwise specified. In case of conflict, the present specification, including definitions, will control.
（用語の定義）
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
(Definition of terms)
Listed below are definitions of terms particularly used in the present specification.
本明細書において、「基材」は、抗原を支持するための材料を意味する。基材は、一定の強度を有する。本明細書において、基材は、樹脂、ガラス、セルロイドおよび紙からなる群より選択される材料を含み得る。 As used herein, “substrate” means a material for supporting an antigen. The substrate has a certain strength. As used herein, the substrate can include a material selected from the group consisting of resin, glass, celluloid, and paper.
本発明において使用され得る基材は、例えば、マイクロウェルであり得る。本発明において使用され得る基材は、抗原を支持することができれば、どのような基材であってもよい。なぜなら、抗原抗体反応ができさえすれば、標識の検出は可能であるからである。 The substrate that can be used in the present invention can be, for example, a microwell. The substrate that can be used in the present invention may be any substrate as long as it can support an antigen. This is because the label can be detected as long as the antigen-antibody reaction is possible.
本明細書において、「抗原」（ａｎｔｉｇｅｎ）とは、当該分野において用いられる最も広義の意味として定義され、抗体分子によって特異的に結合され得る任意の基質をいう。 As used herein, “antigen” is defined as the broadest meaning used in the art and refers to any substrate that can be specifically bound by an antibody molecule.
本明細書において、「ＩｇＥ」は、免疫グロブリン分子の一つをであり、分子量約１９００００の分子をいう。この用語はまた、「イムノグロブリンＥ」、「免疫グロブリンＥ」、「ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｅ」と交換可能に使用されうる。この用語は、アレルギー抗体とも称される。ＩｇＥは、アレルギーを起こす抗原（例えば、スギ、ダニ、卵、ハウスダストなど）との接触を繰り返すうちに体内に蓄積される。ＩｇＥの量が一定量を超えるとアレルギーを発症する。 In the present specification, “IgE” is one of immunoglobulin molecules and refers to a molecule having a molecular weight of about 190,000. The term may also be used interchangeably with “immunoglobulin E”, “immunoglobulin E”, “immunoglobulin E”. This term is also referred to as an allergic antibody. IgE accumulates in the body during repeated contact with allergic antigens (eg, cedar, mites, eggs, house dust, etc.). Allergies develop when the amount of IgE exceeds a certain amount.
本明細書において、「ＩｇＥ全量」は、対象とするサンプルに含まれるＩｇＥの全量をいう。 In this specification, “IgE total amount” refers to the total amount of IgE contained in a target sample.
本明細書において、「ＩｇＥ抗体基材」は、サンプル中のＩｇＥ全量を測定するための基材をいう。 As used herein, “IgE antibody substrate” refers to a substrate for measuring the total amount of IgE in a sample.
本明細書において、「ＩｇＥに結合する能力を有する」は、ＩｇＥと特異的に結合し得る能力を有する物質をいう。本明細書において、「ＩｇＥに結合する能力を有する抗原」は、ＩｇＥと特異的に結合し得る能力を有する抗原をいう。これらとしては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “having the ability to bind to IgE” refers to a substance having the ability to specifically bind to IgE. As used herein, “an antigen having the ability to bind to IgE” refers to an antigen having the ability to specifically bind to IgE. These include mite-derived allergens, plant-derived allergens, pollen allergens, seed allergens, fungal / yeast-derived allergens, insect-derived allergens, parasitic allergens, animal-derived allergens, dietary allergens, fibrous allergens, pharmaceutical allergens, occupations Examples include, but are not limited to, sex allergens and house dust.
本明細書において、「特異的に結合する」は、その物質またはその部分に対して、その物質またはその部分以外に対する特異性よりも高い特異性をもって結合することができる能力をいう。 As used herein, “specifically binds” refers to the ability to bind to a substance or part thereof with a specificity that is higher than the specificity to the substance or part other than the part.
本明細書において、「アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる抗原物質をいう。このアレルゲンが免疫応答を惹起する能力を「アレルゲン性」という。 As used herein, “allergen” refers to an antigenic substance that causes an allergic reaction. The ability of this allergen to elicit an immune response is called “allergenicity”.
本明細書において、「特定のアレルゲン」は、ＩｇＥ抗体の産生を誘導する抗原をいう。特定のアレルゲンとしては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。本発明において使用され得る特定のアレルゲンは、ＩｇＥ抗体の産生を誘導するかぎり、どのような物質であってもよい。なぜなら、人に対して、なんらかのアレルギー反応を引き起こす物質は、全て特定のアレルゲンとなりうるからである。 As used herein, “specific allergen” refers to an antigen that induces the production of IgE antibodies. Specific allergens include tick-derived allergens, plant-derived allergens, pollen allergens, seed allergens, mold / yeast-derived allergens, insect-derived allergens, parasite-derived allergens, animal-derived allergens, fiber allergens, pharmaceutical allergens , Occupational allergens, house dust, and the like. The specific allergen that can be used in the present invention may be any substance as long as it induces the production of IgE antibodies. This is because any substance that causes any allergic reaction to humans can be a specific allergen.
本発明において使用される「アレルゲン」としては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダスト等が挙げられるが、これらに限定されない。 The “allergen” used in the present invention includes mite-derived allergen, plant-derived allergen, pollen allergen, seed allergen, mold / yeast-derived allergen, insect-derived allergen, parasite-derived allergen, animal-derived allergen, dietary allergen, fiber Examples include, but are not limited to, sex allergens, chemical allergens, occupational allergens, and house dust.
本明細書において「ダニ由来アレルゲン」は、ダニに由来するアレルゲンをいう。これらとしては、例えば、ヤケヒョウヒダニ、コナヒョウヒダニ、アシブトコナダニ、サヤアシニクダニ、ケナガコナダニ等のダニに由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “tick-derived allergen” refers to an allergen derived from ticks. Examples of these include, but are not limited to, allergens derived from ticks, such as mushroom mites, mites mites, mite mites, mite mites, mites, etc.
本明細書において「植物由来アレルゲン」は、植物に由来するアレルゲンをいう。これらとしては、例えば、スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカ、オオバコ等の植物に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “plant-derived allergen” refers to an allergen derived from a plant. These include, for example, cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, konara, elm, olive, walnut, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, octopus, sagebrush, mugwort, french peony, Dandelion, Spider Plane, White Rosa, Red-billed Shrimp, Dwarf Shrimp, Nettle, Kanamura, Hurghaya, Gorilla, Camouflage, Hirohoshi Nokegusa, Giant Barley, Giant Waterflies, Reed, Nagahagusa, Giant Prunus, Oat Corn, rice, sesame, buckwheat, pea, peanut, soybean, kidney bean, hazel, brazil nut, almond, tomato, carrot, orange, potato, coconut Nuts, strawberry, garlic, onion, apple, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, millet, kiwi, celery, parsley, melon, mustard, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin, ovomucoid , Allergens derived from plants such as oysters, yams, watermelons, plantains, etc., but are not limited thereto.
本明細書において「花粉アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる花粉をいう。これらとしては、例えば、スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ等の花粉などが挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “pollen allergen” refers to pollen that causes an allergic reaction. These include, for example, cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, konara, elm, olive, walnut, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, octopus, sagebrush, mugwort, french peony, Dandelion, Hera plantain, White-eye, Giraffa, Giant squirrel, Nettle, Canarumula, Hurghaya, Gorilla, Camouflage, Hirohoshi nokegusa, Hosomugi, Oagogaeri, Ashi, Nagahagusa, Konukagusa, Seiban Monokozu, Pomegranate However, it is not limited to these.
本明細書において「種子アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる種子をいう。これらとしては、例えば、スギ、カエデ、ハンノキ、シラカンバ、ブナ、ビャクシン、コナラ、ニレ、オリーブ、クルミ、ヤナギ、マツ、アカシア、クワ、ヒノキ、ブタクサ、ブタクサモドキ、オオブタクサ、ニガヨモギ、ヨモギ、フランスギク、タンポポ、ヘラオオバコ、シロザ、アキノキリンソウ、ヒメスイバ、イラクサ、カナムグラ、ハルガヤ、ギョウギシバ、カモガヤ、ヒロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、アシ、ナガハグサ、コヌカグサ、セイバンモノコシ、コムギ、オオスズメノテッポウ、スズメノヒエ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミ、ブラジルナッツ、アーモンド、トマト、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、イチゴ、ニンニク、タマネギ、リンゴ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、マスタード、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カキ、ヤマイモ、スイカ、オオバコ等の植物の種子が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “seed allergen” refers to a seed that causes an allergic reaction. These include, for example, cedar, maple, alder, birch, beech, juniper, konara, elm, olive, walnut, willow, pine, acacia, mulberry, cypress, ragweed, ragweed, octopus, sagebrush, mugwort, french peony, Dandelion, Spider Plane, White Rosa, Red-billed Shrimp, Dwarf Shrimp, Nettle, Kanamura, Hurghaya, Gorilla, Camouflage, Hirohoshi Nokegusa, Giant Barley, Giant Waterflies, Reed, Nagahagusa, Giant Prunus, Oat Corn, rice, sesame, buckwheat, pea, peanut, soybean, kidney bean, hazel, brazil nut, almond, tomato, carrot, orange, potato, coconut Nuts, strawberry, garlic, onion, apple, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, millet, kiwi, celery, parsley, melon, mustard, mango, banana, cacao, pear, peach, avocado, grapefruit, spinach, pumpkin, ovomucoid , Seeds of plants such as oysters, yams, watermelons, psyllium, but are not limited thereto.
本明細書において「カビ・酵母由来アレルゲン」は、カビ・酵母に由来するアレルゲンをいう。これらとしては、例えば、ペニシリウム、クラドスポリウム、アスペルギルス、ムコール、カンジダ、アルテルナリア、ヘルミンドスポリウム、ピティロスポリウム（マラセチア）、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ、トリコフィトン、ビール酵母等のカビ・酵母に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。 In the present specification, “mold / yeast-derived allergen” refers to an allergen derived from mold / yeast. These include, for example, Penicillium, Cladosporium, Aspergillus, Mucor, Candida, Alternaria, Herminsporium, Pityrosporum (Malacethia), Staphylococcus aureus enterotoxin A, Staphylococcus aureus enterotoxin B, trichophyton, beer Examples include, but are not limited to, allergens derived from molds and yeasts such as yeast.
本明細書において「昆虫由来アレルゲン」は、昆虫に由来するアレルゲンをいう。これらとしては、ミツバチ、スズメバチ、アシナガバチ、ゴキブリ、ユスリカ、ガ、ヤブカ、カイコ等の昆虫に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “insect-derived allergen” refers to an allergen derived from an insect. These include, but are not limited to, allergens derived from insects such as bees, wasps, wasps, cockroaches, chironomids, moths, jabka and silkworms.
本明細書において「寄生虫由来アレルゲン」は、寄生虫に由来するアレルゲンをいう。例えば、蛔虫、包虫、アニサキス等の寄生虫に由来するアレルゲンが挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “parasite-derived allergen” refers to an allergen derived from a parasite. Examples thereof include, but are not limited to, allergens derived from parasites such as helminths, worms and anisakis.
本明細書において「動物由来アレルゲン」は、動物に由来するアレルゲンをいう。例えば、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、モルモット、ハト、ガチョウ、セキセイインコ、ヤギ、ヒツジ、家兎、ブタ、ハムスター、ニワトリ、アヒル、ラット、マウス、タラ、カニ、エビ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、サバ、イカ、タコ、アジ、イワシ、ロブスター、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ等の動物に由来するアレルゲン（例えば、上皮、皮膚、ふん、羽毛、血清蛋白）が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “animal-derived allergen” refers to an allergen derived from an animal. For example, cat, dog, horse, cow, guinea pig, pigeon, goose, budgerigar, goat, sheep, rabbit, pig, hamster, chicken, duck, rat, mouse, cod, crab, shrimp, mussel, tuna, salmon , Allergens derived from animals such as mackerel, squid, octopus, horse mackerel, sardines, lobster, flounder, salmon roe, tarako, clams, oysters, scallops, etc. (eg epithelium, skin, dung, feathers, serum proteins) It is not limited to these.
本明細書において「食餌性アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる食餌をいう。これらとしては、例えば、卵白、牛乳、タラ、コムギ、ライムギ、オオムギ、オートムギ、トウモロコシ、コメ、ゴマ、ソバ、エンドウ、ピーナッツ、ダイズ、インゲンマメ、ハシバミの実、ブラジルナッツ、アーモンド、カニ、エビ、トマト、豚肉、牛肉、ニンジン、オレンジ、ジャガイモ、ココナッツ、ムラサキガイ、マグロ、サケ、イチゴ、ビール酵母、ニンニク、タマネギ、リンゴ、サバ、タケノコ、サツマイモ、キビ、アワ、ヒエ、イカ、タコ、アジ、イワシ、黄卵、α−ラクトアルブミン、β−ラクトグロブリン、カゼイン、グルテン、ロブスター、チーズ、モールドチーズ、チェダーチーズ、鶏肉、キウイ、セロリ、パセリ、メロン、羊肉、マスタード、麦芽、マンゴ、バナナ、カカオ、洋ナシ、モモ、アボカド、グレープフルーツ、ホウレンソウ、カボチャ、オボムコイド、カレイ、イクラ、タラコ、アサリ、カキ、ホタテ、ヤマイモ、クルミ、スイカ、ゼラチン等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “dietary allergen” refers to a diet that causes an allergic reaction. These include, for example, egg white, milk, cod, wheat, rye, barley, oats, corn, rice, sesame, buckwheat, peas, peanuts, soybeans, kidney beans, hazelnuts, Brazil nuts, almonds, crabs, shrimps, tomatoes , Pork, beef, carrot, orange, potato, coconut, mussel, tuna, salmon, strawberry, beer yeast, garlic, onion, apple, mackerel, bamboo shoot, sweet potato, millet, millet, millet, squid, octopus, horse mackerel, sardine , Yolk, α-lactalbumin, β-lactoglobulin, casein, gluten, lobster, cheese, mold cheese, cheddar cheese, chicken, kiwi, celery, parsley, melon, mutton, mustard, malt, mango, banana, cacao, Pear, peach, avocado, grape full Examples include spinach, spinach, pumpkin, ovomucoid, flounder, salmon roe, taraco, clams, oysters, scallops, yams, walnuts, watermelons, gelatin, and the like, but are not limited thereto.
本明細書において「繊維性アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる繊維をいう。例えば、綿、絹等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “fibrous allergen” refers to a fiber that causes an allergic reaction. For example, cotton, silk and the like can be mentioned, but not limited thereto.
本明細書において「薬品性アレルゲン」は、アレルギー反応の原因となる薬品をいう。例えば、ヒトインスリン、ゼラチン、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ）、エチレンオキサイド、無水フタル酸、ラテックス、ホルマリン等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “chemical allergen” refers to a drug that causes an allergic reaction. Examples include, but are not limited to, human insulin, gelatin, tolylene diisocyanate (isocyanate TDI), diphenylmethane diisocyanate (isocyanate MDI), hexamethylene diisocyanate (isocyanate HDI), ethylene oxide, phthalic anhydride, latex, formalin, and the like. .
本明細書において「職業性アレルゲン」は、特定の職業においてアレルギー反応の原因となる物質をいう。これらとしては、例えば、オオバコ種子（これは、植物由来アレルゲンとしても分類され得る）、絹（これは、昆虫由来アレルゲンとしても分類され得る。）、トリレンジイソシアネート（イソシアネートＴＤＩ：これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ジフェニルメタンジイソシアネート（イソシアネートＭＤＩ：これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ヘキサメチレンジイソシアネート（イソシアネートＨＤＩ：これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、エチレンオキサイド（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、無水フタル酸（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ラテックス（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）、ホルマリン（これは、薬品性アレルゲンとしても分類され得る。）等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, “occupational allergen” refers to a substance that causes an allergic reaction in a specific occupation. These include, for example, psyllium seed (which can also be classified as a plant-derived allergen), silk (which can also be classified as an insect-derived allergen), tolylene diisocyanate (isocyanate TDI: this is a chemical property) Can also be classified as an allergen.), Diphenylmethane diisocyanate (isocyanate MDI: this can also be classified as a chemical allergen), hexamethylene diisocyanate (isocyanate HDI: it can also be classified as a chemical allergen), Ethylene oxide (which can also be classified as a chemical allergen), phthalic anhydride (which can also be classified as a chemical allergen), latex (which can also be classified as a chemical allergen) , Formalin (this is It may be classified as chemical allergens.) And the like include, but are not limited to.
本明細書において「ハウスダスト」は、家の中に存在する、塵、人の身体からでる垢、フケ、毛髪、ペットの毛、カビまたはダニの死骸またはフンなどの総称である。 In this specification, “house dust” is a general term for dust, dirt coming from the human body, dandruff, hair, pet hair, mold or mite carcass or dung, etc. present in the house.
本明細書において、「アレルゲン基材」は、基材を区別するときに使用され、アレルゲンが配置された基材をいう。 In the present specification, the “allergen substrate” is used when differentiating substrates, and refers to a substrate on which allergens are arranged.
本明細書において、「アレルギー特質」は、被験体が特定のアレルゲンに対してアレルギー反応を起こす性質をいう。特定のアレルゲンに対するアレルギー特質は、特定のアレルゲンの被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、この比率が一定比率を超えることを指標として決定することができる。 As used herein, “allergic characteristics” refers to the property of a subject to cause an allergic reaction to a specific allergen. The allergic characteristics for a specific allergen can be determined by determining the ratio of a specific allergen to IgE antibody in a subject and using this ratio as a parameter.
本明細書において、特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有するかどうかは、その特定のアレルゲンに対する被験体のＩｇＥ抗体の量を求め、その量が、高値の場合に、その特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有すると判定することができる。 In the present specification, whether or not allergic characteristics are possessed by a specific allergen is determined by determining the amount of IgE antibody of the subject against that specific allergen, and when that amount is high, It can be determined to have allergic characteristics.
本明細書において、用語「抗体」は、免疫原である抗原によって惹起された特異的なアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子をいう。抗体は、Ｂ細胞により生産され、血液、体液中に存在する。抗体は、抗原と特異的に反応するという特徴を有する。抗体は、抗原の呈示による刺激の結果としてではなく自然に存在する場合もあり得る。基本的には、抗体の分子構造は各２本の軽鎖と重鎖とから形成されるが、二量体、三量体、五量体としても存在し得る。これらとしては、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＧ等が挙げられるが、これらに限定されない。 As used herein, the term “antibody” refers to an immunoglobulin molecule having a specific amino acid sequence elicited by an antigen that is an immunogen. Antibodies are produced by B cells and are present in blood and body fluids. An antibody has the characteristic of reacting specifically with an antigen. The antibody may be present naturally rather than as a result of stimulation by presentation of the antigen. Basically, the molecular structure of an antibody is formed by two light chains and a heavy chain, but can also exist as a dimer, trimer, or pentamer. Examples of these include, but are not limited to, IgA, IgE, IgM, IgG, and the like.
本明細書において、「標識」は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＦＩＴＣ）など）、蛍光タンパク質（緑色蛍光タンパク質（Ｇｒｅｅｎ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ；ＧＦＰ）、（シアン色蛍光タンパク質（ｃｙａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ：ＣＦＰ）、黄色蛍光タンパク質（ｙｅｌｌｏｗ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ：ＹＦＰ）など）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。 In the present specification, the “label” can be imparted by, for example, enzymatic property, fluorescence property, radioactive property, luminescence property, color development property or the like. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, fluorescein isothiocyanate (FITC)), fluorescent proteins (green fluorescence) Protein (Green Fluorescent Protein; GFP), (Cyan Fluorescent Protein (CFP), Yellow Fluorescent Protein (YFP), etc.), and luminescent enzymes (for example, luciferase). It is not limited.
本発明において、標識の有無は、例えば、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法、凝集反応検定法などの方法により実現され得る。この標識の有無を検出する方法は、標識の有無を検出することができる限り、どのような方法であってもよい。好ましくは、この方法は、基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。このような標識の有無を検出する方法は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In the present invention, the presence or absence of a label can be realized by methods such as enzyme-linked immunoassay, radioimmunoassay, immunoprecipitation, fluorescence immunoassay, chemiluminescence assay, immunoblot method, and agglutination assay. The method for detecting the presence or absence of the label may be any method as long as the presence or absence of the label can be detected. Preferably, the method includes reacting the substrate with tetramethylbenzidine and measuring the absorbance at 450 nm. Methods for detecting the presence or absence of such labels are well known in the art and are described in detail herein.
本明細書において、用語「酵素結合免疫検定法」は、試料中に含まれる抗体または抗原の濃度を検出・定量する方法である。この用語はまた、Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ Ａｓｓａｙ（ＥＬＩＳＡ）、エライサまたはエライザとも呼ばれる。 In the present specification, the term “enzyme-linked immunoassay” is a method for detecting and quantifying the concentration of an antibody or antigen contained in a sample. This term is also referred to as Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA), Eliser or Eliza.
本明細書において、用語「ラジオイムノアッセイ（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ：ＲＩＡ）」は、放射線同位元素を用いて、抗体または抗原の濃度を測定する方法をいう。この方法は、放射免疫分析法、放射免疫測定法とも呼ばれる。 As used herein, the term “radioimmunoassay (RIA)” refers to a method of measuring the concentration of an antibody or antigen using a radioisotope. This method is also called radioimmunoassay or radioimmunoassay.
本明細書において、用語「免疫沈降法」は、可溶性の抗原と抗体が特異的に反応して不溶化し沈殿する反応を利用して抗原を検出・分離・精製する方法である。 In the present specification, the term “immunoprecipitation method” is a method for detecting, separating and purifying an antigen using a reaction in which a soluble antigen and an antibody specifically react to insolubilize and precipitate.
本明細書において、用語「蛍光免疫検定法」は、特定のタンパク質を抗体によって蛍光標識し、その検体に励起光を照射して、標識が発する蛍光を観察することで、目的のタンパク質を検出する方法である。 In this specification, the term “fluorescence immunoassay” refers to detecting a target protein by fluorescently labeling a specific protein with an antibody, irradiating the sample with excitation light, and observing the fluorescence emitted by the label. Is the method.
本明細書において、用語「化学発光検定法」は、特定のタンパク質を一次抗体により標識し、化学発光する酵素で標識した二次抗体を該一次抗体に結合させ、酵素反応による基質の発光・発色により目的のタンパク質を検出する方法である。 In this specification, the term “chemiluminescence assay” means that a specific protein is labeled with a primary antibody, a secondary antibody labeled with a chemiluminescent enzyme is bound to the primary antibody, and the luminescence / color development of a substrate by an enzymatic reaction is performed. This is a method for detecting a target protein.
本明細書において、用語「イムノブロット法」は、微量の特定のタンパク質を検出する方法の１つである。タンパク質試料をゲル電気泳動によって分画した後、分画されたタンパク質をニトロセルロース膜等に転写し、目的のタンパク質を抗体を用いて検出する方法である。 In this specification, the term “immunoblot method” is one of the methods for detecting a minute amount of a specific protein. In this method, a protein sample is fractionated by gel electrophoresis, and then the fractionated protein is transferred to a nitrocellulose membrane or the like, and the target protein is detected using an antibody.
本明細書において、用語「凝集反応検定法」は、抗血清試薬と試料から得た試料液をスライドグラス状で混ぜ合わせて、反応により塊が形成されるか否かを観察することで目的のタンパク質を検出する方法である。 In this specification, the term “agglutination test” is used to mix the antiserum reagent and the sample solution obtained from the sample in the form of a slide glass and observe whether or not a lump is formed by the reaction. This is a method for detecting a protein.
（好ましい実施形態の説明）
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでない。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。
(Description of Preferred Embodiment)
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described. The embodiments provided below are provided for a better understanding of the present invention, and the scope of the present invention should not be limited to the following description. Therefore, it is obvious that those skilled in the art can make appropriate modifications within the scope of the present invention with reference to the description in the present specification.
（サンプル中のＩｇＥを測定するための基材）
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するための基材を提供する。この基材は、表面上に固定化された、該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原を含み得る。
(Substrate for measuring IgE in sample)
In one aspect, the present invention provides a substrate for measuring IgE in a sample. The substrate can include an antigen that is immobilized on a surface and that has the ability to bind to the IgE.
１つの実施形態において、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、抗ヒトＩｇＥ抗体）であり得る。 In one embodiment, the antigen having the ability to bind to IgE can be an antibody that recognizes IgE, preferably an anti-human IgE antibody.
別の実施形態において、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。アレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。 In another embodiment, the antigen capable of binding to IgE can be an allergen. Examples of allergens include mite-derived allergens, plant-derived allergens, pollen allergens, seed allergens, mold / yeast-derived allergens, insect-derived allergens, parasitic allergens, animal-derived allergens, dietary allergens, fibrous allergens, and pharmaceutical allergens. , Occupational allergens, house dust, and the like.
１つの実施形態において、本発明の基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含んでいてもよい。 In one embodiment, the base material of the present invention may contain a resin, glass, celluloid, paper or the like as a material.
（診断用基材セット）
別の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するための診断用基材セットを提供する。この診断用基材セットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；およびＡ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材を含む。
(Diagnosis base material set)
In another aspect, the present invention provides a diagnostic substrate set for detecting allergic attributes to specific allergens in a subject. This diagnostic substrate set includes A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against IgE antibody of the subject is immobilized; and A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized.
好ましい実施形態において、被験体はヒトであり得る。 In a preferred embodiment, the subject can be a human.
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットにおいて使用される特定のアレルゲンとしては、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げれられるが、これらに限定されない。 In one embodiment, specific allergens used in the diagnostic substrate set of the present invention include mite-derived allergen, plant-derived allergen, pollen allergen, seed allergen, mold / yeast-derived allergen, insect-derived allergen, parasite Examples include, but are not limited to, derived allergens, animal allergens, dietary allergens, fibrous allergens, chemical allergens, occupational allergens, and house dust.
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等などの材料を含んでいてもよい。 In one embodiment, in the diagnostic base material set of the present invention, the base material may include a material such as resin, glass, celluloid, paper and the like.
１つの実施形態において、本発明の診断用基材セットでは、特定のアレルゲンの前記被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定することができる。特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有するかどうかは、その特定のアレルゲンに対する被験体のＩｇＥ抗体の量を求め、その量が、高値の場合に、その特定のアレルゲンに対してアレルギー特質を有すると判定することができる。 In one embodiment, in the diagnostic base material set of the present invention, the ratio of a specific allergen to the IgE antibody of the subject is determined, and the allergic characteristics of the specific allergen are determined using the ratio exceeding a certain ratio as an index. Can be determined. Whether or not a particular allergen has an allergic feature is determined by determining the amount of IgE antibody in a subject against that particular allergen and, if that amount is high, having an allergic feature for that particular allergen Can be determined.
（サンプル中のＩｇＥを測定するためのキット）
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、Ａ）該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原が固定化された基材；およびＢ）該ＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体を含みうる。
(Kit for measuring IgE in a sample)
In one aspect, the present invention provides a kit for measuring IgE in a sample. The kit may comprise A) a substrate on which an antigen capable of binding to IgE is immobilized; and B) a labeled anti-IgE antibody against the IgE.
１つの実施形態において、このＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、ヒト由来）であり得る。 In one embodiment, the antigen capable of binding to IgE can be an antibody that recognizes IgE, preferably from a human.
別の実施形態において、このＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。このアレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。 In another embodiment, the antigen capable of binding to IgE can be an allergen. Examples of allergens include mite-derived allergens, plant-derived allergens, pollen allergens, seed allergens, fungal / yeast-derived allergens, insect-derived allergens, parasite-derived allergens, animal-derived allergens, dietary allergens, medicinal properties Examples include, but are not limited to, allergens, occupational allergens, and house dust.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含みうる。 In one embodiment, the base material used in the kit of the present invention may include a resin, glass, celluloid, paper, or the like as a material.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In one embodiment, the label used in the kit of the present invention can be imparted, for example, by enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent, chromogenic, and the like. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, FITC, etc.), fluorescent proteins (GFP, CFP, YFP, etc.) ), Luminescent enzymes, such as, for example, luciferase, etc. Such labels are well known in the art and are described in detail herein.
（被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキット）
別の局面において、本発明は、被験体中の唾液中のＩｇＥ全量を測定するためのキットを提供する。このキットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；およびＢ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
が含まれ得る。
(Kit for measuring the total amount of IgE in saliva in a subject)
In another aspect, the present invention provides a kit for measuring the total amount of IgE in saliva in a subject. The kit can include A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against the subject's IgE antibody is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against the subject's IgE.
１つの実施形態において、被験体はヒトであり得る。 In one embodiment, the subject can be a human.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を含んでいてもよい。 In one embodiment, the substrate used in the kit of the present invention may contain resin, glass, celluloid, paper, and the like.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In one embodiment, the label used in the kit of the present invention can be imparted, for example, by enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent, chromogenic, and the like. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, FITC, etc.), fluorescent proteins (GFP, CFP, YFP, etc.) ), Luminescent enzymes, such as, for example, luciferase, etc. Such labels are well known in the art and are described in detail herein.
（被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキット）
他の局面において、本発明は、被験体中の唾液中の特定のアレルゲン特異的ＩｇＥを測定するためのキットを提供する。このキットは、Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；およびＢ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体を含み得る。
(Kit for measuring specific allergen-specific IgE in saliva in a subject)
In another aspect, the present invention provides a kit for measuring specific allergen-specific IgE in saliva in a subject. The kit may comprise A-2) a substrate on which the particular allergen is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
１つの実施形態において、被験体はヒトであり得る。 In one embodiment, the subject can be a human.
別の実施形態において、本発明のキットでは、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。このアレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。 In another embodiment, in the kit of the present invention, the antigen capable of binding to IgE can be an allergen. Examples of allergens include mite-derived allergens, plant-derived allergens, pollen allergens, seed allergens, fungal / yeast-derived allergens, insect-derived allergens, parasite-derived allergens, animal-derived allergens, dietary allergens, medicinal properties Examples include, but are not limited to, allergens, occupational allergens, and house dust.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を含んでいてもよい。 In one embodiment, the substrate used in the kit of the present invention may contain resin, glass, celluloid, paper, and the like.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In one embodiment, the label used in the kit of the present invention can be imparted, for example, by enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent, chromogenic, and the like. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, FITC, etc.), fluorescent proteins (GFP, CFP, YFP, etc.) ), Luminescent enzymes, such as, for example, luciferase, etc. Such labels are well known in the art and are described in detail herein.
（被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキット）
他の局面において、本発明は、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出するためのキットを提供する。このキットは、Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；およびＢ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体を含み得る。
(Kit for detecting allergic attributes to specific allergens in a subject)
In another aspect, the present invention provides a kit for detecting allergic attributes to a particular allergen in a subject. This kit includes A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized; A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized; and B-1) the subject. A labeled anti-IgE antibody against the IgE can be included.
１つの実施形態において、被験体はヒトであり得る。 In one embodiment, the subject can be a human.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用されるアレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどが挙げられるが、これらに限定されない。 In one embodiment, the allergen used in the kit of the present invention is, for example, a mite-derived allergen, a plant-derived allergen, a pollen allergen, a seed allergen, a mold / yeast-derived allergen, an insect-derived allergen, a parasite-derived allergen, an animal Examples include, but are not limited to, derived allergens, dietary allergens, fibrous allergens, chemical allergens, occupational allergens, and house dust.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含んでいてもよい。 In one embodiment, the substrate used in the kit of the present invention may contain a resin, glass, celluloid, paper or the like as a material.
１つの実施形態において、本発明のキットにおいて使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In one embodiment, the label used in the kit of the present invention can be imparted, for example, by enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent, chromogenic, and the like. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, FITC, etc.), fluorescent proteins (GFP, CFP, YFP, etc.) ), Luminescent enzymes, such as, for example, luciferase, etc. Such labels are well known in the art and are described in detail herein.
（サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステム）
１つの局面において、本発明は、サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステムを提供する。このシステムは、Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材；
Ｂ）該ＩｇＥに対する標識された抗ＩｇＥ抗体；およびＣ）前記該標識の有無を調べる手段、を含み得る。
(System for measuring IgE in samples)
In one aspect, the present invention provides a system for measuring IgE in a sample. This system comprises A) a substrate on which an antigen having the ability to bind to IgE is immobilized;
B) a labeled anti-IgE antibody against the IgE; and C) means for examining the presence or absence of the label.
１つの実施形態において、本発明のシステムにおいて使用される、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、抗ヒトＩｇＥ抗体）であり得る。 In one embodiment, the antigen having the ability to bind IgE used in the system of the present invention may be an antibody that recognizes IgE (preferably an anti-human IgE antibody).
別の実施形態において、このＩｇＥに結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。アレルゲンとしては、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどであり得るが、これらに限定されない。 In another embodiment, the antigen capable of binding to IgE can be an allergen. Examples of allergens include mite-derived allergens, plant-derived allergens, pollen allergens, seed allergens, mold / yeast-derived allergens, insect-derived allergens, parasitic allergens, animal-derived allergens, dietary allergens, fibrous allergens, and pharmaceutical allergens. , Occupational allergens, house dust, and the like.
１つの実施形態において、本発明のシステムにおいて使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含みうる。 In one embodiment, the substrate used in the system of the present invention may include resin, glass, celluloid, paper, or the like as a material.
別の実施形態において、本発明において使用される標識の有無を調べる手段は、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法および凝集反応検定法等からなる群より選択される方法を実現する手段であり得る。この標識の有無を調べる手段は、標識の有無を検出することができる限り、どのような手段であってもよい。このような標識の有無を調べる手段は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In another embodiment, means for examining the presence or absence of a label used in the present invention include enzyme-linked immunoassay, radioimmunoassay, immunoprecipitation, fluorescence immunoassay, chemiluminescence assay, immunoblot method and agglutination assay. It may be a means for realizing a method selected from the group consisting of laws and the like. The means for checking the presence or absence of the label may be any means as long as the presence or absence of the label can be detected. Means for examining the presence or absence of such labels are well known in the art and are described in detail herein.
（唾液中のＩｇＥを測定するための方法）
１つの局面において、本発明は、唾液中のＩｇＥを測定するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材を提供する工程；Ｂ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；Ｃ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；およびＤ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出する工程を包含する。
(Method for measuring IgE in saliva)
In one aspect, the present invention provides a method for measuring IgE in saliva. This method includes the following steps: A) providing a substrate on which an antigen having the ability to bind to IgE is immobilized; B) conditions under which the antigen-IgE complex forms the substrate and the sample. Contacting the substrate; C) subjecting the substrate to conditions under which the reaction of the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds; and D) derived from the labeled anti-IgE antibody Detecting the presence or absence of a label to be detected.
１つの実施形態において、本発明の方法では、ＩｇＥと結合する能力を有する抗原は、ＩｇＥを認識する抗体（好ましくは、抗ヒトＩｇＥ抗体）であり得る。 In one embodiment, in the method of the present invention, the antigen capable of binding to IgE can be an antibody that recognizes IgE (preferably an anti-human IgE antibody).
別の実施形態において、本発明の方法では、ＩｇＥと結合する能力を有する抗原は、アレルゲンであり得る。好ましくは、アレルゲンは、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどであり得るが、これらに限定されない。 In another embodiment, in the methods of the invention, the antigen having the ability to bind IgE can be an allergen. Preferably, the allergen is a mite-derived allergen, a plant-derived allergen, a pollen allergen, a seed allergen, a mold / yeast-derived allergen, an insect-derived allergen, a parasite-derived allergen, an animal-derived allergen, a dietary allergen, a pharmaceutical allergen , Occupational allergens, house dust, and the like.
１つの実施形態において、本発明の方法において使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等を材料として含みうる。 In one embodiment, the substrate used in the method of the present invention may include resin, glass, celluloid, paper, or the like as a material.
別の実施形態において、本方法のＢ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程では、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件と、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件は、４℃にて、一晩にわたる接触であり得る。 In another embodiment, in the step of B) contacting the substrate and the sample under conditions under which the antigen-IgE complex is formed, the conditions under which the antigen-IgE complex is formed, It can be within 1 hour in the range of ° C. More preferably, the conditions that form the antigen-IgE complex may be overnight contact at 4 ° C.
本方法において、Ｃ）基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程では、この条件は、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、この条件は、室温にて２時間にわたる反応であり得る。 In the present method, in the step in which C) the substrate is subjected to conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds, these conditions are in the range of 4 ° C. to 45 ° C. It can be within hours. More preferably, the conditions can be a reaction for 2 hours at room temperature.
１つの実施形態において、本方法において使用される標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In one embodiment, the label used in the method can be imparted, for example, by enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent, chromogenic, etc. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, FITC, etc.), fluorescent proteins (GFP, CFP, YFP, etc.) ), Luminescent enzymes, such as, for example, luciferase, etc. Such labels are well known in the art and are described in detail herein.
本発明の唾液中のＩｇＥを測定するための方法では、標識の有無を検出する工程は、例えば、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法、凝集反応検定法等により実現され得る。この標識の有無を検出する工程において使用される方法は、標識の有無を検出することができる限り、どのような方法であってもよい。好ましくは、標識の有無を検出する工程は、基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。このような標識の有無を検出する方法は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In the method for measuring IgE in saliva of the present invention, the step of detecting the presence or absence of a label is performed by, for example, enzyme-linked immunoassay, radioimmunoassay, immunoprecipitation, fluorescent immunoassay, chemiluminescence assay, immunoassay, It can be realized by blotting, agglutination assay or the like. The method used in the step of detecting the presence / absence of the label may be any method as long as the presence / absence of the label can be detected. Preferably, the step of detecting the presence or absence of the label includes reacting the substrate with tetramethylbenzidine and measuring the absorbance at 450 nm. Methods for detecting the presence or absence of such labels are well known in the art and are described in detail herein.
（被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法）
別の局面において、本発明は、被験体の特定のアレルゲンに対する特質を検出するための方法を提供する。この方法は、以下の工程：Ａ）該被験体の唾液を提供する工程；Ｂ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程；Ｃ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程；Ｄ）該基材と該唾液とを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；Ｅ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；およびＦ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出し、該特定のアレルゲンの該被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定する工程、を包含する。
(Method for detecting characteristics of a subject for a particular allergen)
In another aspect, the present invention provides a method for detecting a characteristic of a subject for a particular allergen. The method comprises the following steps: A) providing saliva of the subject; B) providing an IgE antibody substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized; C) the identification Providing an allergen substrate on which allergens are immobilized; D) contacting the substrate with the saliva under conditions under which an antigen-IgE complex is formed; E) providing the substrate with the antigen -A step of subjecting the IgE complex to a labeled anti-IgE antibody to undergo a reaction; and F) detecting the presence or absence of a label derived from the labeled anti-IgE antibody, and testing the specific allergen Determining the ratio of the body to IgE antibody, and determining the allergic characteristics of the specific allergen using as an index that the ratio exceeds a certain ratio.
１つの実施形態において、被験体はヒトがあってもよい。 In one embodiment, the subject may be a human.
別の実施形態において、本発明の方法において使用される特定のアレルゲンは、例えば、ダニ由来アレルゲン、植物由来アレルゲン、花粉アレルゲン、種子アレルゲン、カビ・酵母由来アレルゲン、昆虫由来アレルゲン、寄生虫由来アレルゲン、動物由来アレルゲン、食餌性アレルゲン、繊維性アレルゲン、薬品性アレルゲン、職業性アレルゲン、ハウスダストなどであり得るが、これらに限定されない。 In another embodiment, the specific allergen used in the method of the present invention is, for example, mite-derived allergen, plant-derived allergen, pollen allergen, seed allergen, mold / yeast-derived allergen, insect-derived allergen, parasite-derived allergen, It may be animal-derived allergen, dietary allergen, fibrous allergen, pharmaceutical allergen, occupational allergen, house dust and the like, but is not limited thereto.
１つの実施形態において、本方法において使用される基材は、樹脂、ガラス、セルロイド、紙等であり得るが、これらに限定されない。 In one embodiment, the substrate used in the method can be, but is not limited to, resin, glass, celluloid, paper, and the like.
１つの実施形態において、本発明のＢ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程では、この条件は、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、この条件は、４℃にて、一晩にわたる接触であり得る。 In one embodiment, in the step of B) providing an IgE antibody substrate on which an anti-IgE antibody against IgE antibody of the subject is immobilized, this condition is in the range of 4 ° C. to 45 ° C. It can be within hours. More preferably, this condition may be overnight contact at 4 ° C.
別の実施形態において、本発明のＣ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程では、抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件と、４℃〜４５℃の範囲で、１時間以内であり得る。より好ましくは、抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件は、室温にて２時間にわたる反応であり得る。 In another embodiment, in the step of C) providing the allergen substrate on which the specific allergen is immobilized, the conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds, It can be within 1 hour in the range of 4 ° C to 45 ° C. More preferably, the conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds can be a reaction over 2 hours at room temperature.
１つの実施形態において、抗ＩｇＥ抗体を標識した標識は、例えば、酵素性、蛍光性、放射性、発光性、発色性などにより付与され得る。標識としては、例えば、酵素性（例えば、セイヨウワサビぺルオキシダーゼ、アルカリフォスフォターゼ）、蛍光性（例えば、蛍光色素（ｃｙ３、ｃｙ５、ｃｙ７、ＦＩＴＣなど）、蛍光タンパク質（ＧＦＰ、ＣＦＰ、ＹＦＰなど）、発光酵素（例えば、ルシフェラーゼなど）が挙げられるが、これらに限定されない。このような標識は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In one embodiment, the label labeled with the anti-IgE antibody can be imparted, for example, by enzymatic, fluorescent, radioactive, luminescent, chromogenic, and the like. Examples of the label include enzymatic properties (eg, horseradish peroxidase, alkaline phosphatase), fluorescence (eg, fluorescent dyes (cy3, cy5, cy7, FITC, etc.), fluorescent proteins (GFP, CFP, YFP, etc.) ), Luminescent enzymes, such as, for example, luciferase, etc. Such labels are well known in the art and are described in detail herein.
本発明唾液中のＩｇＥを測定するための方法では、標識の有無を検出する工程は、例えば、酵素結合免疫検定法、ラジオイムノアッセイ、免疫沈降法、蛍光免疫検定法、化学発光検定法、イムノブロット法、凝集反応検定法等により実現され得る。この標識の有無を検出する工程において使用される方法は、標識の有無を検出することができる限り、どのような方法であってもよい。好ましくは、標識の有無を検出する工程は、基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定することを包含する。このような標識の有無を検出する方法は、当該分野において周知であり、本明細書において詳細に説明されている。 In the method for measuring IgE in saliva of the present invention, the step of detecting the presence or absence of a label is performed by, for example, enzyme-linked immunoassay, radioimmunoassay, immunoprecipitation, fluorescent immunoassay, chemiluminescence assay, immunoblot Or agglutination reaction assay. The method used in the step of detecting the presence / absence of the label may be any method as long as the presence / absence of the label can be detected. Preferably, the step of detecting the presence or absence of the label includes reacting the substrate with tetramethylbenzidine and measuring the absorbance at 450 nm. Methods for detecting the presence or absence of such labels are well known in the art and are described in detail herein.
好ましい実施形態において、本発明の方法では、前記被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材は：Ｄ−１）該ＩｇＥ抗体基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；Ｅ−１）該ＩｇＥ抗体基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；およびＦ−１）該ＩｇＥ抗体基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程に供され、前記特定のアレルゲンが固定化された基材は：Ｄ−２）該アレルゲン基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；Ｅ−２）該アレルゲン基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−２）該アレルゲン基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程に供される。
In a preferred embodiment, in the method of the present invention, the substrate on which the anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized is: D-1) The IgE antibody substrate and the saliva are overnight at 4 ° C. E-1) a step of reacting the IgE antibody substrate with an anti-IgE antibody labeled with horseradish peroxidase at room temperature for 2 hours; and F-1) the IgE antibody substrate and tetramethyl The substrate on which the specific allergen is immobilized by reacting with benzidine and measuring the absorbance at 450 nm is: D-2) Contacting the allergen substrate and the saliva overnight at 4 ° C. E-2) a step of reacting the allergen substrate with an anti-IgE antibody labeled with horseradish peroxidase at room temperature for 2 hours; and F-2) the allergen substrate and the antibody. Reacting the La methyl benzidine is subjected to the step of measuring the absorbance of 450nm.
他の実施形態において、本発明の方法において使用されるＩｇＥ抗体基材とアレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体は、それぞれ別の標識で標識されていてもよい。このような別の標識の組合わせは、本明細書において使用され得る標識のうち波長が異なる物質において、そのすべての組合わせが可能である。この実施形態では、ＩｇＥ全体を測定する標識とアレルゲンを測定する標識とについて異なる標識を用いることにより、一挙に複数のアレルゲンを求めることができる。 In another embodiment, the labeled anti-IgE antibody used in the reaction between the IgE antibody substrate and the allergen substrate used in the method of the present invention may be labeled with a different label. Such other label combinations are all possible combinations of the labels that can be used herein with different wavelengths. In this embodiment, a plurality of allergens can be obtained at once by using different labels for the label for measuring the whole IgE and the label for measuring the allergen.
以下、実施例により、本発明の構成をより詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。以下において使用した試薬類は、特に言及した場合を除いて、市販されているものを使用した。 Hereinafter, although an example explains the composition of the present invention in detail, the present invention is not limited to this. The reagents used in the following were commercially available unless otherwise specified.
（実施例１．唾液中のＩｇＥ全量の測定）
（ＩｇＥ全量を測定するための基材（ＩｇＥ抗体基材）の作製）
抗原として、抗ヒトＩｇＥ抗体（Ａｎｔｉ Ｈｕｍａｎ ＩｇＥ−ＨＲＰ（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いる。抗ヒトＩｇＥ抗体を、抗原希釈液（０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３（ｐＨ ９．５））で１μｇ／ｍｌに希釈する。この抗ヒトＩｇＥ抗体を１００μｌ／ウェルの密度で９６穴プレートに希釈し、４℃で一晩、インキュベートする。リン酸緩衝化生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）（ｐＨ ７．４）で３回洗浄する。ブロッキングバッファー（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３、５％Ｄ−ｓｏｌｂｉｔｏｌ（ｐＨ ７．４））を１ウェルあたり３５０μｌ添加し、室温で１時間反応させる。次いで、ブロッキングバッファーを除去し、このプレートを室温で一晩乾燥させて、ＩｇＥ抗体基材を作製する。
(Example 1. Measurement of total amount of IgE in saliva)
(Preparation of base material (IgE antibody base material) for measuring the total amount of IgE)
As an antigen, an anti-human IgE antibody (Anti Human IgE-HRP (KPL Cat. No. 074-1004) is used. Anti-human IgE antibody is diluted with an antigen diluent (0.1 M NaHCO3 (pH 9.5)) at 1 μg / This anti-human IgE antibody is diluted to a 96-well plate at a density of 100 μl / well and incubated overnight at 4 ° C. Phosphate buffered saline (PBS) (pH 7) 4.
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、被験体（社内ボランティアＮＫ 男性 ５０歳）から唾液を採取する。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））５０μｌを混合して、本実施例において作製したＩｇＥ抗体基材に入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）（ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で２００００倍に希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、ＩｇＥ抗体基材に添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社 Ｍｏｄｅｌ ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
(IgE measurement)
As a sample, saliva is collected from a subject (in-house volunteer NK male, 50 years old). The collected saliva (50 μl) and 50 μl of assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)) were mixed to prepare the IgE antibody substrate prepared in this example. And overnight at 4 °
本実施例において作製された基材を用いて、唾液サンプル中に含まれるＩｇＥの全量を測定することができる。 The total amount of IgE contained in the saliva sample can be measured using the base material produced in this example.
（比較例１．血清中のＩｇＥ全量の測定）
実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材をもちいる。
(Comparative Example 1. Measurement of total amount of IgE in serum)
The IgE antibody base material prepared in Example 1 is used.
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、実施例１と同じ被験体から血清を採取する。採取した血清と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））を混合して、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材に入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）（ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を、ＩｇＥ抗体基材に添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）を添加し、バイオラッド社 Ｍｏｄｅｌ ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
(IgE measurement)
As a sample, serum is collected from the same subject as in Example 1. The collected serum and assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)) are mixed and placed in the IgE antibody substrate prepared in Example 1, 4 React overnight at °
（実施例１と比較例１のまとめ）
実施例１および比較例１の結果から、サンプルとして唾液をもちいても、血清と同様にアレルゲンの測定が可能なことが確認できる。本実施例において作製されたＩｇＥ抗体基材は、唾液中に微量にしか存在しないＩｇＥ全量を測定することが可能であることが確認された。
(Summary of Example 1 and Comparative Example 1)
From the results of Example 1 and Comparative Example 1, it can be confirmed that allergens can be measured in the same manner as serum even when saliva is used as a sample. It was confirmed that the IgE antibody base material prepared in this example can measure the total amount of IgE present only in a minute amount in saliva.
（実施例２．サンプル中の特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥの測定）
（特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥを測定するための基材（アレルゲン基材）の作製）
抗原として、ニホンスギ、ダニ（ケナガコナダニ、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニ）、Ａｎｔｉ Ｈｕｍａｎ ＩｇＥ−ＨＲＰ（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いた。これらの抗原を、抗原希釈液（０．１Ｍ ＰＢＳ，０．０５％ＮａＮ３（ｐＨ ７．４））で、５０μｇ／ｍｌに希釈（１倍希釈、３倍希釈、１０倍希釈、３０倍希釈、１００倍希釈）した。コントロールとして、抗原を添加していない抗原希釈液を用いた。抗原を１００μｌ／ウェルの密度で９６穴プレートに希釈し、４℃で一晩、インキュベートした。リン酸緩衝化生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）（ｐＨ ７．４）で３回洗浄した。ブロッキングバッファー（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢＳ／０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＮａＮ３、５％Ｄ−ｓｏｌｂｉｔｏｌ（ｐＨ ７．４））を１ウェルあたり３５０μｌ添加し、室温で１時間反応させた。次いで、ブロッキングバッファーを除去し、このプレートを室温で一晩乾燥させて、アレルゲン基材を作製した。
(Example 2. Measurement of IgE specific to a specific allergen in a sample)
(Preparation of a base material (allergen base material) for measuring IgE specific to a specific allergen)
As the antigen, Japanese cedar, mites (Kanega mite, Kona leopard mite and Yake leopard mite), Anti Human IgE-HRP (KPL Cat. No. 074-1004) were used. These antigens were diluted to 50 μg / ml with an antigen dilution solution (0.1 M PBS, 0.05% NaN3 (pH 7.4)) (1-fold dilution, 3-fold dilution, 10-fold dilution, 30-fold dilution, 100-fold dilution). As a control, an antigen dilution without added antigen was used. Antigen was diluted in 96-well plates at a density of 100 μl / well and incubated overnight at 4 ° C. Washed 3 times with phosphate buffered saline (PBS) (pH 7.4). Blocking buffer (Dulbecco's PBS / 0.1% BSA, 0.05% NaN3, 5% D-sorbitol (pH 7.4)) was added in an amount of 350 μl per well and allowed to react at room temperature for 1 hour. The blocking buffer was then removed and the plate was dried overnight at room temperature to make an allergen substrate.
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、被験体（社内ボランティアＹＴ 男性 ２７歳および社内ボランティアＮＫ 男性 ５０歳）から唾液を採取した。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））５０μｌを混合して、本実施例において作製したアレルゲン基材に入れ、４℃にて一晩反応させた。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。次いで、ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で２００００倍に希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製した。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、アレルゲン基材に添加し、室温で２時間反応させた。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加して、室温で２０分間反応させた。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社 Ｍｏｄｅｌ ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定した。
(IgE measurement)
As a sample, saliva was collected from subjects (in-house volunteer YT male 27 years old and in-house volunteer NK male 50 years old). The collected saliva (50 μl) and 50 μl of assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)) were mixed, and the allergen substrate prepared in this example was used. The mixture was allowed to react overnight at 4 ° C. Washed 3 times with washing solution (0.9% Saline, 0.05% Tween 20). Subsequently, HRP-anti-human IgE antibody (KPL Cat. No. 074-1004) was diluted 20000 times with a sample dilution buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)). To prepare an HRP-anti-human IgE antibody solution. 100 μl of this HRP-anti-human IgE antibody solution was added to the allergen substrate and allowed to react at room temperature for 2 hours. The plate was washed three times with a washing solution, 100 μl of tetramethylbenzidine (TMB) was added as a chromogenic substrate, and the mixture was reacted at room temperature for 20 minutes. Next, 100 μl of a stop solution (2N—H 2 SO 4 ) was added, and the absorbance at OD 450 nm was measured using a Bio-Rad Model 680.
その結果、アレルゲンとしてケナガコナダニ、コナヒョウヒダニおよびヤケヒョウヒダニを用いた場合の吸光度は、アレルゲンを添加していないブランクの吸光度よりも高い値であった（表１および図１Ａ〜１Ｃを参照のこと。）。アレルゲンとしてニホンスギを添加した場合、希釈倍率が低いときの吸光度は、アレルゲンを添加していないブランクの吸光度よりも高い値であった（表１および図１Ｄを参照のこと。） As a result, the absorbance in the case of using the mite, mushroom mite, and mushroom mite as the allergen was higher than the absorbance of the blank to which no allergen was added (see Table 1 and FIGS. 1A to 1C). When Japanese cedar was added as an allergen, the absorbance at a low dilution rate was higher than the absorbance of the blank to which no allergen was added (see Table 1 and FIG. 1D).
（表１．アレルゲンを添加した場合の吸光度） (Table 1. Absorbance when allergen is added)
本実施例において作製された基材を用いて、唾液サンプル中に含まれる、特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥを測定することができた。抗原として、卵、ハウスダストを用いても同様の結果が確認できる。
Using the substrate prepared in this example, IgE specific to a specific allergen contained in a saliva sample could be measured. Similar results can be confirmed using eggs and house dust as the antigen.
（比較例２．特定のアレルゲンに特異的なＩｇＥの測定）
実施例２において作製したアレルゲン基材をもちいる。
(Comparative Example 2. Measurement of IgE specific to a specific allergen)
The allergen base material produced in Example 2 is used.
（ＩｇＥの測定）
サンプルとして、被験体から血清を採取する。採取した血清と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））を混合して、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材に入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）（ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を、ＩｇＥ抗体基材に添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）を添加し、バイオラッド社 Ｍｏｄｅｌ ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
(IgE measurement)
Serum is collected from the subject as a sample. The collected serum and assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)) are mixed and placed in the IgE antibody substrate prepared in Example 1, 4 React overnight at °
（実施例２と比較例２のまとめ）
実施例２および比較例２の結果から、サンプルとして唾液をもちいても、血清と同様にアレルゲンの測定が可能なことが確認できる。本実施例において作製されたＩｇＥ抗体基材は、唾液中に微量にしか存在しないＩｇＥ全量を測定することが可能であることが確認された。
(Summary of Example 2 and Comparative Example 2)
From the results of Example 2 and Comparative Example 2, it can be confirmed that allergens can be measured in the same manner as serum even when saliva is used as a sample. It was confirmed that the IgE antibody base material prepared in this example can measure the total amount of IgE present only in a minute amount in saliva.
（実施例３．唾液を用いた、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質の検出）
本実施例では、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材、および実施例２において作製したアレルゲン基材を用いる。
(Example 3. Detection of allergic characteristics against a specific allergen in a subject using saliva)
In this example, the IgE antibody substrate prepared in Example 1 and the allergen substrate prepared in Example 2 are used.
サンプルとして、被験体から唾液を採取する。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））５０μｌを混合して、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材のそれぞれに入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で２００００倍に希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材それぞれに添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社 Ｍｏｄｅｌ ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
Saliva is collected from the subject as a sample. The collected saliva (50 μl) is mixed with 50 μl of assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)), and each of the IgE antibody substrate and the allergen substrate is mixed. And overnight at 4 °
（アレルギー特質の検討）
アレルギー特質は、特定のアレルゲンの被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、この比率が一定比率を超えることを指標として決定することができる。
(Examination of allergic characteristics)
The allergic characteristics can be determined by obtaining a ratio of a specific allergen to IgE antibody of a subject and using this ratio as a parameter to exceed a certain ratio.
（比較例３．血清を用いた、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質の検出）
本比較例では、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材、および実施例２において作製したアレルゲン基材を用いる。
(Comparative Example 3. Detection of allergic characteristics for a specific allergen in a subject using serum)
In this comparative example, the IgE antibody base material prepared in Example 1 and the allergen base material prepared in Example 2 are used.
サンプルとして、被験体から血清を採取する。採取した血清と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））を混合して、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材のそれぞれに入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。次いで、ＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で希釈してＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。このＨＲＰ−抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材それぞれに添加し、室温で２時間反応させる。洗浄溶液にて３回洗浄し、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を添加して、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、バイオラッド社 Ｍｏｄｅｌ ６８０を用いてＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。
Serum is collected from the subject as a sample. The collected serum and the assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)) are mixed and placed in each of the IgE antibody substrate and the allergen substrate. React overnight at °
（アレルギー特質の検討）
アレルギー特質は、特定のアレルゲンの被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、この比率が一定比率を超えることを指標として決定することができる。
(Examination of allergic characteristics)
The allergic characteristics can be determined by obtaining a ratio of a specific allergen to IgE antibody of a subject and using this ratio as a parameter to exceed a certain ratio.
（実施例３および比較例３のまとめ）
実施例３および比較例３の結果から、サンプルとして唾液をもちいても、血清と同様の結果が確認できる。本方法によると、ＩｇＥが微量にしか存在しない唾液を用いて、被験体中の特定のアレルゲンに対するアレルギー特質が検出することが可能となる。
(Summary of Example 3 and Comparative Example 3)
From the results of Example 3 and Comparative Example 3, even if saliva is used as a sample, the same result as that of serum can be confirmed. According to this method, it is possible to detect allergic characteristics of a specific allergen in a subject using saliva in which only a small amount of IgE is present.
（実施例４．ＩｇＥ抗体基材とアレルゲン基材との反応に用いられる標識された抗ＩｇＥ抗体をそれぞれ別の標識で標識したときのＩｇＥ測定）
本実施例では、実施例１において作製したＩｇＥ抗体基材、および実施例２において作製したアレルゲン基材を用いる。
(Example 4. IgE measurement when labeled anti-IgE antibodies used for reaction of IgE antibody substrate and allergen substrate are labeled with different labels)
In this example, the IgE antibody substrate prepared in Example 1 and the allergen substrate prepared in Example 2 are used.
サンプルとして、被験体から唾液を採取する。採取した唾液（５０μｌ）と、アッセイバッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））５０μｌを混合して、ＩｇＥ抗体基材およびアレルゲン基材のそれぞれに入れ、４℃にて一晩反応させる。洗浄溶液（０．９％Ｓａｌｉｎｅ，０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄する。
Saliva is collected from the subject as a sample. The collected saliva (50 μl) is mixed with 50 μl of assay buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)), and each of the IgE antibody substrate and the allergen substrate is mixed. And overnight at 4 °
（ＩｇＥの測定）
ＩｇＥ抗体基材には、セイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いる。アレルゲン基材には、セイヨウワサビぺルオキシダーゼとは波長の異なる標識で標識した抗ヒトＩｇＥ抗体（ＫＰＬ Ｃａｔ．Ｎｏ．０７４−１００４）を用いる。これらの標識化抗ヒトＩｇＥ抗体を、サンプル希釈バッファー（０．１Ｍ ＰＢＳ、０．１％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０（ｐＨ ７．４））で２００００倍に希釈して、標識化抗ヒトＩｇＥ抗体溶液を調製する。各標識化抗ヒトＩｇＥ抗体溶液１００μｌを、各々のプレートに添加し、室温で２時間反応させる。次いで、洗浄溶液にて３回洗浄する。
(IgE measurement)
An anti-human IgE antibody (KPL Cat. No. 074-1004) labeled with horseradish peroxidase is used as the IgE antibody substrate. As the allergen substrate, an anti-human IgE antibody (KPL Cat. No. 074-1004) labeled with a label having a wavelength different from that of horseradish peroxidase is used. These labeled anti-human IgE antibodies were diluted 20000 times with a sample dilution buffer (0.1 M PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween 20 (pH 7.4)) to give labeled anti-human IgE. Prepare antibody solution. 100 μl of each labeled anti-human IgE antibody solution is added to each plate and allowed to react for 2 hours at room temperature. Then, it is washed 3 times with a washing solution.
ＩｇＥ抗体基材には、発色基質としてテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）１００μｌを添加する。この基材を、室温で２０分間反応させる。次いで、停止溶液（２Ｎ−Ｈ２ＳＯ４）１００μｌを添加し、ＯＤ４５０ｎｍの吸光度を測定する。 To the IgE antibody substrate, 100 μl of tetramethylbenzidine (TMB) is added as a chromogenic substrate. The substrate is allowed to react for 20 minutes at room temperature. Next, 100 μl of stop solution (2N—H 2 SO 4 ) is added, and the absorbance at OD 450 nm is measured.
アレルゲン基材に、基質を添加し、反応させる。次いで、停止溶液を添加し、吸光度を測定する。 A substrate is added to the allergen substrate and allowed to react. The stop solution is then added and the absorbance is measured.
その結果、ＩｇＥ全体を測定する標識とアレルゲンを測定する標識とについて異なる標識を用いて、一挙に複数のアレルゲンを求めることができる。 As a result, it is possible to obtain a plurality of allergens at once using different labels for the label for measuring the whole IgE and the label for measuring the allergen.
以上のように、本発明の好ましい実施形態を用いて本発明を例示してきたが、本発明は、特許請求の範囲によってのみその範囲が解釈されるべきであることが理解される。本明細書において引用した特許、特許出願および文献は、その内容自体が具体的に本明細書に記載されているのと同様にその内容が本明細書に対する参考として援用されるべきであることが理解される。 As mentioned above, although this invention has been illustrated using preferable embodiment of this invention, it is understood that the scope of this invention should be construed only by the claims. Patents, patent applications, and documents cited herein should be incorporated by reference in their entirety, as if the contents themselves were specifically described herein. Understood.
本発明は、唾液中に存在する、ＩｇＥに結合する能力を有する抗原に特異的なＩｇＥを測定ことができるという有用性を有する。従って、本発明は、唾液を用いて、特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を検出することができる有用性を提供する。 The present invention has the utility of being able to measure IgE specific for an antigen having the ability to bind to IgE present in saliva. Thus, the present invention provides the utility of using saliva to detect allergic attributes to specific allergens.
Claims (23)
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；
を含む、診断用基材セット。 A diagnostic substrate set for detecting allergic attributes to a particular allergen in a subject,
A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized; and A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized;
A diagnostic substrate set.
Ａ）該ＩｇＥに結合する能力を有する抗原が固定化された基材；および
Ｂ）標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。 A kit for measuring IgE in a sample,
A kit comprising: A) a substrate on which an antigen capable of binding to IgE is immobilized; and B) a labeled anti-IgE antibody.
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。 A kit for measuring the total amount of IgE in saliva in a subject,
A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against IgE antibody of the subject is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。 A kit for measuring specific allergen-specific IgE in saliva in a subject comprising:
A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
Ａ−１）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化された基材；
Ａ−２）該特定のアレルゲンが固定化された基材；および
Ｂ−１）該被験体のＩｇＥに対する、標識された抗ＩｇＥ抗体
を含む、キット。 A kit for detecting allergic attributes to a specific allergen in a subject,
A-1) a substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized;
A-2) a substrate on which the specific allergen is immobilized; and B-1) a labeled anti-IgE antibody against IgE of the subject.
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材；
Ｂ）該ＩｇＥに対する標識された抗ＩｇＥ抗体；および
Ｃ）前記該標識の有無を調べる手段、を含む、サンプル中のＩｇＥを測定するためのシステム。 A system for measuring IgE in a sample, comprising:
A) a substrate on which an antigen having the ability to bind to IgE is immobilized;
A system for measuring IgE in a sample, comprising: B) a labeled anti-IgE antibody against the IgE; and C) means for examining the presence or absence of the label.
Ａ）該ＩｇＥと結合する能力を有する抗原が固定化された基材を提供する工程；
Ｂ）該基材とサンプルとを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｃ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｄ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出する工程
を包含する、方法。 A method for measuring IgE in saliva comprising the following steps:
A) providing a substrate on which an antigen having the ability to bind to IgE is immobilized;
B) contacting the substrate with the sample under conditions that form an antigen-IgE complex;
C) subjecting the substrate to conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds; and D) detecting the presence or absence of a label derived from the labeled anti-IgE antibody. A method comprising the steps of:
Ａ）該被験体の唾液を提供する工程；
Ｂ）該被験体のＩｇＥ抗体に対する抗ＩｇＥ抗体が固定化されたＩｇＥ抗体基材を提供する工程；
Ｃ）該特定のアレルゲンが固定化されたアレルゲン基材を提供する工程；
Ｄ）該基材と該唾液とを、抗原−ＩｇＥ複合体が形成する条件下で接触させる工程；
Ｅ）該基材を、該抗原−ＩｇＥ複合体と標識された抗ＩｇＥ抗体との反応が進行する条件下に供する工程；および
Ｆ）該標識された抗ＩｇＥ抗体に由来する標識の有無を検出し、該特定のアレルゲンの該被験体のＩｇＥ抗体に対する比率を求め、該比率が一定比率を超えることを指標として、該特定のアレルゲンに対するアレルギー特質を決定する工程
を包含する、方法。 A method for detecting a characteristic of a subject for a particular allergen, the method comprising the following steps:
A) providing the subject's saliva;
B) providing an IgE antibody substrate on which an anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized;
C) providing an allergen substrate on which the specific allergen is immobilized;
D) contacting the substrate with the saliva under conditions that form an antigen-IgE complex;
E) subjecting the substrate to conditions under which the reaction between the antigen-IgE complex and the labeled anti-IgE antibody proceeds; and F) detecting the presence or absence of a label derived from the labeled anti-IgE antibody And determining a ratio of the specific allergen to the IgE antibody of the subject, and determining allergic characteristics to the specific allergen using the ratio exceeding a certain ratio as an index.
Ｄ−１）該ＩｇＥ抗体基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−１）該ＩｇＥ抗体基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−１）該ＩｇＥ抗体基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供され、
前記特定のアレルゲンが固定化された基材は：
Ｄ−２）該アレルゲン基材と前記唾液とを４℃で一晩にわたり接触させる工程；
Ｅ−２）該アレルゲン基材とセイヨウワサビぺルオキシダーゼで標識された抗ＩｇＥ抗体とを、室温で２時間反応させる工程；および
Ｆ−２）該アレルゲン基材とテトラメチルベンジジンとを反応させて４５０ｎｍの吸光度を測定する工程
に供される、請求項２１に記載の方法。 The substrate on which the anti-IgE antibody against the IgE antibody of the subject is immobilized is:
D-1) contacting the IgE antibody substrate with the saliva overnight at 4 ° C .;
E-1) reacting the IgE antibody substrate with horseradish peroxidase-labeled anti-IgE antibody at room temperature for 2 hours; and F-1) reacting the IgE antibody substrate with tetramethylbenzidine. To be subjected to a process of measuring absorbance at 450 nm,
The substrate on which the specific allergen is immobilized is:
D-2) contacting the allergen substrate with the saliva at 4 ° C. overnight;
E-2) reacting the allergen substrate with an anti-IgE antibody labeled with horseradish peroxidase at room temperature for 2 hours; and F-2) reacting the allergen substrate with tetramethylbenzidine. The method according to claim 21, which is subjected to a step of measuring absorbance at 450 nm.
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