JP2006519586A - Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans antigen for diagnosis, treatment and monitoring of periodontal disease - Google Patents

Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans antigen for diagnosis, treatment and monitoring of periodontal disease Download PDF

Info

Publication number
JP2006519586A
JP2006519586A JP2004553443A JP2004553443A JP2006519586A JP 2006519586 A JP2006519586 A JP 2006519586A JP 2004553443 A JP2004553443 A JP 2004553443A JP 2004553443 A JP2004553443 A JP 2004553443A JP 2006519586 A JP2006519586 A JP 2006519586A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
sequence number
polynucleotide
sequence
periodontitis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2004553443A
Other languages
Japanese (ja)
Other versions
JP2006519586A5 (en
Inventor
ハンドフィールド，マーティン
ヒルマン，ジェフリー，ダニエル
プログルスク‐フォックス，アン
Original Assignee
ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/US2002/037235 external-priority patent/WO2003068146A2/en
Application filed by ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド filed Critical ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド
Priority claimed from PCT/US2003/032645 external-priority patent/WO2004045499A2/en
Publication of JP2006519586A publication Critical patent/JP2006519586A/en
Publication of JP2006519586A5 publication Critical patent/JP2006519586A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis

Abstract

アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病の検出、予防、改善、および治療のための、抗体、ポリペプチド、およびポリヌクレオチドが提供される。Antibodies, polypeptides, and polynucleotides for the detection, prevention, amelioration, and treatment of diseases caused by Actinobacillus actinomycetemcomitans are provided.

Description

政府の権利
本発明は国立保健研究所（National Institutes of Health）（国立歯／頭蓋顔面研究所（National Institute for Dental and Craniofacial Research、NIDCR））による助成金番号RO1 DE 13523下での政府の援助によるものである。政府は本発明において一定の権利を有する。 Government Rights This invention is supported by government support under grant number RO1 DE 13523 by the National Institutes of Health (National Institute for Dental and Craniofacial Research, NIDCR) Is. The government has certain rights in the invention.

技術分野
本発明はアクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス（Actinobacillus actinomycetemcomitans）に起因する疾病の診断、治療、予防、および改善のための方法および組成物を提供する。 TECHNICAL FIELD The present invention provides methods and compositions for diagnosis, treatment, prevention, and amelioration of diseases caused by Actinobacillus actinomycetemcomitans.

発明の背景
アクチノバチルス・アクチノミセテムコミタンス（Aa）は、早期発症型歯周炎（例えば、局所性および汎発性歯周炎、局所性および汎発性若年性歯周炎、および急速進行性または抗療性成人歯周炎等）の主要な原因微生物である。現在、これらの疾病の診断は、通常、疾病の発症後長時間を経て、支持する骨格および組織のかなりの損傷が起こってから、Ｘ線分析によってなされる。歯の喪失は破壊性歯周疾患の最も有害な影響である。米国の国民調査により、局所性若年性歯周炎の罹患率は0.53％、汎発性若年性歯周炎では0.13％であることが明かとなった（LoeおよびBrown、J. Periodontol. 62:608−616（1991））。多くの研究からの知見により、早期発症型疾患は他の先進国でも同様であり、発展途上国ではより頻度が高いという結論が裏付けてられている（LoeおよびBrown、J. Periodontol. 62:608−616（1991））。従って、早期発症型歯周炎、局所性および汎発性若年性歯周炎、および急速進行性または抗療性成人歯周炎の早期診断法が当該分野で必要とされている。更に、一般に成人集団の半数以上が罹患している非常に一般的な症状である、ある種の成人歯周炎は、Aaによって起こると考えられる。また、Aaは口腔外疾患、例えば心内膜炎、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎（vertebral osteomyelitis）を引き起こしうる。 BACKGROUND OF THE INVENTION Actinobacillus actinomycetemcomitans (Aa) is an early-onset periodontitis (eg, local and generalized periodontitis, local and generalized juvenile periodontitis, and rapid progression Sexual or refractory adult periodontitis). Currently, the diagnosis of these diseases is usually made by X-ray analysis after a significant amount of damage to the supporting skeleton and tissue occurs a long time after the onset of the disease. Tooth loss is the most detrimental effect of destructive periodontal disease. A US national survey found that prevalence of local juvenile periodontitis was 0.53%, and that of generalized juvenile periodontitis was 0.13% (Loe and Brown, J. Periodontol. 62: 608-616 (1991)). Findings from many studies support the conclusion that early-onset disease is similar in other developed countries and is more frequent in developing countries (Loe and Brown, J. Periodontol. 62: 608 -616 (1991)). Accordingly, there is a need in the art for early diagnosis of early onset periodontitis, local and generalized juvenile periodontitis, and rapidly progressive or refractory adult periodontitis. In addition, certain types of adult periodontitis, a very common symptom that typically affects more than half of the adult population, are thought to be caused by Aa. Aa can also cause extraoral diseases such as endocarditis, thyroid abscesses, urinary tract infections, brain abscesses, and vertebral osteomyelitis.

Aa誘導型歯周炎の治療には、抗生物質療法、外科療法、および機械的治療法があるが、予防の方法はない。テトラサイクリンは早期発症型歯周炎の治療に広範に使用されてきた。しかしながら、テトラサイクリンへの耐性を獲得する株の懸念、並びに他の病原微生物の過剰増殖の可能性が残っている。これらの疾病の発生があるとすれば、Aaの安全なワクチンが必要とされる。ワクチンは例えば多価ワクチンであってもよい。歯周疾患の制御は、最近注目されている全身性疾患（例えば虚血性心疾患）のリスク因子としての歯周感染症の役割の可能性の点からも非常に重要である。   Treatment of Aa-induced periodontitis includes antibiotic therapy, surgical therapy, and mechanical therapy, but there is no way to prevent it. Tetracycline has been widely used to treat early-onset periodontitis. However, strain concerns that acquire resistance to tetracycline, as well as the possibility of overgrowth of other pathogenic microorganisms remain. Given the occurrence of these diseases, a safe vaccine for Aa is needed. The vaccine may be, for example, a multivalent vaccine. Control of periodontal disease is also very important in view of the possibility of the role of periodontal infection as a risk factor for systemic diseases (for example, ischemic heart disease) that have recently attracted attention.

ほとんどの人はその歯垢の正常なメンバーとしてAaを有するが、これは通常、疾病の原因とならない。しかしながら、Aaが疾病の原因となる時、宿主は著しい免疫応答を開始し、これは当然無駄に終わるが、それはおそらく免疫応答が誤ったAa抗原に向けられるためである。最も好適な歯周疾患治療を提供するためには、正確な診断を行い、最適な治療を実施し、そして治療に対する患者の反応をモニタリングすることが必要である。   Most people have Aa as a normal member of their plaque, which usually does not cause disease. However, when Aa causes disease, the host initiates a significant immune response, which is naturally in vain, probably because the immune response is directed to the wrong Aa antigen. In order to provide the most suitable periodontal disease treatment, it is necessary to make an accurate diagnosis, to perform the optimal treatment, and to monitor the patient's response to the treatment.

現在、Aaの標準的な微生物学的試験は、歯垢中のAaの存在のみを検出するものであり、疾病の活性を特異的に同定するものではない。この理由から、これらの試験は、予測的な価値が低い。Aaは健康な個体の歯垢中にも一般的に見られるので、これらの試験の適用の有用性は、一定の疾病の臨床的兆候を示す人、例えば２５才未満の進行性付着器官（attachment）喪失および骨喪失患者、約２５−３５才の相対的に短時間で付着器官および骨が急速破壊される（急速進行性歯周炎）患者、および厳密な治療にも関わらず付着器官を喪失し続ける（抗療性歯周炎）患者に限定される。   Currently, standard microbiological tests for Aa detect only the presence of Aa in plaque and do not specifically identify the activity of the disease. For this reason, these tests are of low predictive value. Since Aa is also commonly found in the plaques of healthy individuals, the utility of applying these tests is useful for those who show clinical signs of certain diseases, such as progressive attachment organs under 25 years of age. ) Patients with loss and bone loss, patients with rapid destruction of adherent organs and bones (rapid progressive periodontitis) in a relatively short time of about 25-35 years, and loss of adherent organs despite strict treatment Limited to patients who continue to do (refractory periodontitis).

歯垢中のAaの存在を同定するためにDNAプローブ技術が開発されているが、この技術は歯垢群集の正常な一部分であるAaと実際の疾病過程に関与するAaを識別することができない。従って、これらのDNAプローブは疾病過程に関与するAaを同定しない。   DNA probe technology has been developed to identify the presence of Aa in plaque, but this technology cannot distinguish Aa that is a normal part of the plaque community from Aa that is involved in the actual disease process . Therefore, these DNA probes do not identify Aa involved in the disease process.

従って、Aaに起因する疾病の診断、モニタリング、治療、予防、または改善の方法が当該分野で必要とされている。   Therefore, there is a need in the art for methods of diagnosing, monitoring, treating, preventing, or ameliorating diseases caused by Aa.

発明の概要
本発明の目的は、Aaに起因する疾病の治療、改善、および予防のための方法および組成物を提供することである。本発明のこの目的および他の目的は、下記の態様の１またはそれ以上によって提供される。 SUMMARY OF THE INVENTION An object of the present invention is to provide methods and compositions for the treatment, amelioration, and prevention of diseases caused by Aa. This and other objects of the invention are provided by one or more of the following embodiments.

本発明の１つの態様は、以下からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸を含有する精製免疫原性ポリペプチドを提供する：配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号20、配列番号22、配列番号24、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46、配列番号48、配列番号50、配列番号52、配列番号54、配列番号56、配列番号58、配列番号60、配列番号62、配列番号64、配列番号66、配列番号68、配列番号70、配列番号72、配列番号74、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号82、配列番号84、配列番号86、配列番号88、配列番号90、配列番号92、配列番号94、配列番号96、配列番号98、配列番号100、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号107、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号114、配列番号116、配列番号118、配列番号120、配列番号122、配列番号124、配列番号126、配列番号128、配列番号130、配列番号132、配列番号134、配列番号,136、配列番号138、配列番号140、配列番号142、配列番号144、配列番号146、配列番号148、配列番号150、配列番号152、配列番号154、配列番号156、配列番号158、配列番号160、配列番号162、配列番号164、配列番号166、配列番号168、配列番号170、配列番号172、配列番号174、配列番号176、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号184、配列番号186、配列番号188、配列番号190、配列番号192、配列番号194、配列番号196、配列番号198、配列番号200、配列番号202、配列番号204、配列番号206、配列番号208、配列番号210、配列番号212、配列番号214、配列番号216、配列番号218、配列番号220、配列番号222、配列番号224、配列番号226、配列番号228、配列番号230、配列番号232、および配列番号234（“ポリペプチド配列番号”）。これらのポリペプチド配列のそれぞれを集合的に“ポリペプチド配列番号”と呼び、合わせて一群として表すが、これらの配列のそれぞれは、個別に考慮し特許請求することができる。   One aspect of the invention provides a purified immunogenic polypeptide containing at least 5 consecutive amino acids of an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6 , SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, sequence SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56 , SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, Sequence SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: No. 94, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112 , SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 134, Sequence SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 190, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 196, Sequence number 198, Sequence number 200, Sequence number 202, Sequence number 204, Sequence number 206, Sequence number 208, Sequence number 210, Sequence number 212, Sequence number 214, Sequence number 216, Sequence number 218, Sequence number 220, Sequence number 222, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 232, and SEQ ID NO: 234 ("polypeptide SEQ ID NO"). Each of these polypeptide sequences is collectively referred to as a “polypeptide SEQ ID NO” and collectively represented as a group, but each of these sequences can be individually considered and claimed.

本発明の別の態様は、“ポリペプチド配列番号”からなる群から選択されるアミノ酸配列を含有する精製ポリペプチドを提供する。   Another aspect of the invention provides a purified polypeptide comprising an amino acid sequence selected from the group consisting of “polypeptide SEQ ID NO”.

本発明の更に別の態様は、“ポリペプチド配列番号”をコードする配列を含有する精製ポリヌクレオチドを提供する。   Yet another aspect of the invention provides a purified polynucleotide containing a sequence encoding “polypeptide SEQ ID NO”.

本発明の更に別の態様は、以下からなる群から選択される配列の少なくとも約１５個の連続する核酸を含有する精製ポリヌクレオチドを提供する：配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号71、配列番号73、配列番号75、配列番号77、配列番号79、配列番号81、配列番号83、配列番号85、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号93、配列番号95、配列番号97、配列番号99、配列番号101、配列番号106、配列番号108、配列番号115、配列番号117、配列番号119、配列番号121、配列番号123、配列番号125、配列番号127、配列番号129、配列番号131、配列番号133、配列番号135、配列番号137、配列番号139、配列番号141、配列番号143、配列番号145、配列番号147、配列番号149、配列番号151、配列番号153、配列番号155、配列番号157、配列番号159、配列番号161、配列番号163、配列番号165、配列番号167、配列番号169、配列番号171、配列番号173、配列番号175、配列番号177、配列番号179、配列番号181、配列番号183、配列番号185、配列番号187、配列番号189、配列番号191、配列番号193、配列番号195、配列番号197、配列番号199、配列番号201、配列番号203、配列番号205、配列番号207、配列番号209、配列番号211、配列番号213、配列番号215、配列番号217、配列番号219、配列番号221、配列番号223、配列番号225、配列番号227、配列番号229,配列番号231、および配列番号233（“ポリヌクレオチド配列番号”）。これらのポリヌクレオチド配列のそれぞれを集合的に“ポリヌクレオチド配列番号”と呼び、合わせて一群として表すが、これらの配列はそれぞれ個別に考慮し特許請求することができる。   Yet another aspect of the invention provides a purified polynucleotide containing at least about 15 contiguous nucleic acids of a sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, sequence SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31 , SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 55 No. 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 81 , SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 93, sequence No. 95, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127 , SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 151, Sequence SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 177 , SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 201 SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 211, SEQ ID NO: 213, Sequence number 215, sequence number 217, sequence number 219, sequence number 221, sequence number 223, sequence number 225, sequence number 227, sequence number 229, sequence number 231 and sequence number 233 ("polynucleotide sequence number"). Each of these polynucleotide sequences is collectively referred to as a “polynucleotide sequence number” and collectively represented as a group, but each of these sequences can be individually considered and claimed.

本発明の別の態様は、“ポリヌクレオチド配列番号”のヌクレオチド配列またはそれらの縮重変異体を含有する精製ポリヌクレオチドを提供する。   Another aspect of the present invention provides a purified polynucleotide containing the nucleotide sequence of “polynucleotide SEQ ID NO” or a degenerate variant thereof.

本発明の別の態様は、発現制御配列に動作可能なように連結された“ポリヌクレオチド配列番号”を含有する発現ベクターを提供する。ベクターは培養細胞中に存在してもよい。   Another aspect of the invention provides an expression vector containing a “polynucleotide SEQ ID NO” operably linked to an expression control sequence. The vector may be present in cultured cells.

本発明の更に別の態様は、“ポリペプチド配列番号”のポリペプチドに特異的に結合する抗体またはそのフラグメントを提供する。抗体フラグメントは、例えばFabまたはF(ab')2フラグメントであってもよい。抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であってもよい。抗体は医薬的に許容されるキャリアーと共に医薬組成物中に存在してもよい。 Yet another aspect of the invention provides an antibody or fragment thereof that specifically binds to the polypeptide of “polypeptide SEQ ID NO”. The antibody fragment may be, for example, a Fab or F (ab ′) 2 fragment. The antibody may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody. The antibody may be present in a pharmaceutical composition with a pharmaceutically acceptable carrier.

本発明の更に別の態様は、A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病の治療、改善、または予防の方法を提供する。方法は本発明の抗体またはそのフラグメントを動物に投与することを含む。それによって、A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病を治療、改善、または予防する。A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病は以下からなる群から選択することができる：局所性思春期前歯周炎、汎発性思春期前歯周炎、局所性若年性歯周炎、汎発性若年性歯周炎、急速進行性成人歯周炎、抗療性成人歯周炎、心内膜炎（endiocarditis）、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎。   Yet another aspect of the present invention provides a method for treating, ameliorating or preventing a disease caused by A. actinomycetemcomitans. The method includes administering an antibody of the invention or fragment thereof to an animal. Thereby treating, ameliorating or preventing diseases caused by A. actinomycetemcomitans. The disease caused by A. actinomycetemcomitans can be selected from the group consisting of: local prepubertal periodontitis, generalized prepubertal periodontitis, local juvenile periodontitis, generalized Juvenile periodontitis, rapidly progressive adult periodontitis, refractory adult periodontitis, endiocarditis, thyroid abscess, urinary tract infection, brain abscess, and vertebral osteomyelitis.

本発明の更に別の態様は、試験サンプル中のA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原の存在を検出する方法を提供する。方法は、試験サンプルとA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原に特異的に結合する本発明の抗体を、抗体とA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原との間の免疫複合体の生成が可能な条件下で接触させ、そして免疫複合体を検出することを含む。免疫複合体の検出は、試験サンプル中のA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原の存在を示す。検出されるA.アクチノミセテムコミタンス抗原は、動物の感染の際にインビボで発現される抗原であってもよい。   Yet another aspect of the invention provides a method of detecting the presence of A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans antigen in a test sample. The method comprises combining a test sample with an antibody of the present invention that specifically binds to A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans antigen and A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans. Contacting under conditions that allow the generation of an immune complex between the antigen and detecting the immune complex. Detection of the immune complex indicates the presence of A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans antigen in the test sample. The A. actinomycetemcomitans antigen to be detected may be an antigen that is expressed in vivo upon infection of the animal.

本発明の別の態様は、本発明のポリペプチドを医薬的に許容されるキャリアーと共に含有する医薬組成物を提供する。   Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition comprising a polypeptide of the present invention together with a pharmaceutically acceptable carrier.

本発明の更に別の態様は、免疫応答を誘発する方法を提供する。方法は本発明のポリペプチドを動物に投与して免疫応答を誘発することを含む。   Yet another aspect of the invention provides a method of eliciting an immune response. The method includes administering an polypeptide of the invention to an animal to elicit an immune response.

本発明の更に別の態様は、A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病または感染の治療、予防、または改善の方法を提供する。方法は本発明のポリペプチドを動物に投与して疾病または感染を治療、予防、または改善することを含む。   Yet another aspect of the invention provides a method of treating, preventing or ameliorating a disease or infection caused by A. actinomycetemcomitans. The method includes administering a polypeptide of the invention to an animal to treat, prevent or ameliorate the disease or infection.

本発明の更に別の態様は、本発明のポリヌクレオチドおよび医薬的に許容されるキャリアーを含有する組成物を提供する。ポリヌクレオチドはDNAであってもよい。ポリヌクレオチドはプラスミド中に存在してもよい。   Yet another aspect of the invention provides a composition comprising a polynucleotide of the invention and a pharmaceutically acceptable carrier. The polynucleotide may be DNA. The polynucleotide may be present in a plasmid.

本発明の別の方法は、免疫応答を誘発する方法を提供し、方法は本発明の精製ポリヌクレオチドを動物に投与して免疫応答を誘発することを含む。本発明の更に別の態様は、A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病または感染の治療、予防、または改善の方法を提供する。方法は本発明の精製ポリヌクレオチドを動物に投与して疾病または感染を治療、予防、または改善することを含む。   Another method of the invention provides a method of eliciting an immune response, the method comprising administering a purified polynucleotide of the invention to an animal to elicit an immune response. Yet another aspect of the invention provides a method of treating, preventing or ameliorating a disease or infection caused by A. actinomycetemcomitans. The method includes administering the purified polynucleotide of the present invention to an animal to treat, prevent or ameliorate the disease or infection.

本発明の更に別の態様は、第１のA.アクチノミセテムコミタンス・ポリヌクレオチドの存在を同定する方法を提供する。この方法は、ハイブリダイゼーション条件下で第１のA.アクチノミセテムコミタンス・ポリヌクレオチドを含有する疑いのある試験サンプルを第２のポリヌクレオチドと接触させることを含み、ここで第２のポリヌクレオチドは本発明のポリヌクレオチドである。ハイブリダイズした第１および第２のポリヌクレオチドの複合体を検出する。ハイブリダイズした第１および第２ポリヌクレオチド複合体の存在は、試験サンプル中の第１のポリヌクレオチドの存在を示す。   Yet another aspect of the invention provides a method for identifying the presence of a first A. actinomycetemcomitans polynucleotide. The method includes contacting a test sample suspected of containing a first A. actinomycetemcomitans polynucleotide under hybridization conditions with a second polynucleotide, wherein the second polynucleotide Is a polynucleotide of the present invention. A complex of the hybridized first and second polynucleotides is detected. The presence of hybridized first and second polynucleotide complexes indicates the presence of the first polynucleotide in the test sample.

発明の詳細な説明
ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの同定法
微生物が疾病を誘発する能力にとって重要なヌクレオチド配列を同定する方法を、早期発症型歯周炎（例えば、局所性思春期前歯周炎、汎発性思春期前歯周炎、局所性若年性歯周炎、汎発性若年性歯周炎、急速進行性成人歯周炎、および抗療性成人歯周炎等）の主要な原因微生物であるAaに適用する。Aaはまた、心内膜炎、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎も引き起こしうる。本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチド配列を同定するのに使用される方法は、インビボ誘導型抗原法（in vivo induced antigen technology；IVIAT）と呼ばれる（Handfieldら、Trends Microbiol. 336:336−339 (2000)；国際特許公開WO 01/11081参照）。 Detailed Description of the Invention
Methods for Identifying Polynucleotides and Polypeptides Methods for identifying nucleotide sequences important for the ability of microorganisms to induce disease include early-onset periodontitis (eg, local prepubertal periodontitis, generalized prepubertal periodontal periodontium). It is applied to Aa which is a major causative microorganism of inflammation, local juvenile periodontitis, generalized juvenile periodontitis, rapidly progressive adult periodontitis, and refractory adult periodontitis. Aa can also cause endocarditis, thyroid abscess, urinary tract infection, brain abscess, and vertebral osteomyelitis. The method used to identify the polynucleotide and polypeptide sequences of the invention is referred to as in vivo induced antigen technology (IVIAT) (Handfield et al., Trends Microbiol. 336: 336-339 (2000). ); See International Patent Publication WO 01/11081).

簡単には、IVIATは、インビボおよびインビトロでAaによって発現されるAa抗原に対する抗体のサンプルを得、インビトロで増殖させたAaの細胞または細胞抽出物に抗体を吸収させることを含む。使用できる抗体のサンプルの例は、Aaに感染したことのある、または感染している患者由来の血清である。未吸収の抗体を単離し、これを使用してAa DNAの発現ライブラリーを探索する。反応性クローンを単離し、クローニングしたフラグメントの配列を確認する。   Briefly, IVIAT involves obtaining a sample of antibodies against Aa antigens expressed by Aa in vivo and in vitro, and absorbing the antibodies into cells or cell extracts of Aa grown in vitro. An example of a sample of an antibody that can be used is serum from a patient who has or has been infected with Aa. Unabsorbed antibodies are isolated and used to explore an Aa DNA expression library. Reactive clones are isolated and the sequence of the cloned fragment is confirmed.

IVIATを使用して、Aaが動物（特にヒト）において実際に疾病を引き起こすことに携わる場合にのみ発現されるAaのポリヌクレオチドを同定した。通常、感染の際にAaによる毒性遺伝子の刺激を引き起こす重要な環境シグナルは、細菌を実験室で増殖させた場合は見られない。従って、診断およびワクチン戦略のための最も優れた標的の多くは未知であった。IVIAT方法論を使用して、ヒト宿主におけるAaの増殖の際には特異的に刺激されるが、日常的な実験室での増殖の際には刺激されないポリヌクレオチドを同定した。これらのポリヌクレオチド、および対応するポリペプチドおよび抗体は、例えば感染の初期段階にある被験体の同定および治療への反応のモニタリングのためのAaの診断試験の開発、および疑いのある動物におけるAaに起因する疾病を予防または治療するためのワクチンまたは治療の開発に有用である。   IVIAT was used to identify Aa polynucleotides that are expressed only when Aa is actually involved in causing disease in animals (particularly humans). Normally, the important environmental signals that cause stimulation of virulence genes by Aa during infection are not seen when the bacteria are grown in the laboratory. Thus, many of the best targets for diagnostic and vaccine strategies were unknown. The IVIAT methodology was used to identify polynucleotides that are specifically stimulated during Aa growth in human hosts but not during routine laboratory growth. These polynucleotides, and corresponding polypeptides and antibodies, have been developed for example in the development of diagnostic tests for Aa for identification of subjects in the early stages of infection and monitoring response to therapy, and in Aa in suspected animals. It is useful in the development of vaccines or treatments for preventing or treating the resulting disease.

IVIATによって同定される抗原は、Aaに起因する疾病（例えば歯周疾患）に関して、予測的な価値が非常に高い。Aaの診断試験は、母親が歯周炎の病歴を有する小児をスクリーニングして、小児がその疾病に罹患しやすい傾向を有するかどうかを確認するような適用に有用でありうる。思春期前の歯周炎に関係することが知られている疾病には以下がある：パピヨン・ルフェーブル症候群（PLS）、低ホスファターゼ血症、好中球減少症、白血球付着欠損症（leukocyte adhesion deficiency；LAD）、チェディアック・ヒガシ症候群、ダウン症候群、白血病、ヒスチオサイトーシスＸ、早期発症型Ｉ型糖尿病、および先端疼痛症。これらの疾病を有する小児はAa試験の候補者である。更に、歯周炎の傾向がより低い他の思春期前小児にもAa診断試験は有益であり、これは、他の予測方法、または既知のリスク因子がないためである。   Antigens identified by IVIAT are of very high predictive value for diseases caused by Aa (eg periodontal disease). Aa diagnostic tests may be useful in applications where the mother screens children with a history of periodontitis to see if the child is prone to the disease. Diseases known to be associated with prepubertal periodontitis include the following: Papillon-Levable syndrome (PLS), hypophosphatemia, neutropenia, leukocyte adhesion deficiency LAD), Chediak Higashi Syndrome, Down's Syndrome, Leukemia, Histocytosis X, Early Onset Type I Diabetes, and Advanced Pain. Children with these diseases are candidates for Aa testing. In addition, other prepubertal children with a lower propensity for periodontitis are also beneficial for Aa diagnostic testing because there are no other predictive methods or known risk factors.

ポリペプチド
本発明の精製ポリペプチドは、完全長のポリペプチドまたはポリペプチドのフラグメントのいずれであってもよい。例えば本発明のポリペプチドのフラグメントは、本発明のポリペプチドの約５、１０、２５、５０、１００、または２００アミノ酸を含有してもよい。本発明のポリペプチドの例には以下に示すものがある：配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号20、配列番号22、配列番号24、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46、配列番号48、配列番号50、配列番号52、配列番号54、配列番号56、配列番号58、配列番号60、配列番号62、配列番号64、配列番号66、配列番号68、配列番号70、配列番号72、配列番号74、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号82、配列番号84、配列番号86、配列番号88、配列番号90、配列番号92、配列番号94、配列番号96、配列番号98、配列番号100、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号107、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号114、配列番号116、配列番号118、配列番号120、配列番号122、配列番号124、配列番号126、配列番号128、配列番号130、配列番号132、配列番号134、配列番号136、配列番号138、配列番号140、配列番号142、配列番号144、配列番号146、配列番号148、配列番号150、配列番号152、配列番号154、配列番号156、配列番号158、配列番号160、配列番号162、配列番号164、配列番号166、配列番号168、配列番号170、配列番号172、配列番号174、配列番号176、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号184、配列番号186、配列番号188、配列番号190、配列番号192、配列番号194、配列番号196、配列番号198、配列番号200、配列番号202、配列番号204、配列番号206、配列番号208、配列番号210、配列番号212、配列番号214、配列番号216、配列番号218、配列番号220、配列番号222、配列番号224、配列番号226、配列番号228、配列番号230、配列番号232、および配列番号234。これらのポリペプチドを“ポリペプチド配列番号”と呼ぶ。ポリペプチド配列番号に示すポリペプチド配列と少なくとも約７５、または約９０、９６、９８、もしくは９９％の同一性を示す相同アミノ酸配列もAaポリペプチドである。相同なアミノ酸配列は生体活性を保持し、すなわち生体機能的に同等である。 Polypeptides The purified polypeptide of the present invention may be a full-length polypeptide or a fragment of a polypeptide. For example, a fragment of the polypeptide of the present invention may contain about 5, 10, 25, 50, 100, or 200 amino acids of the polypeptide of the present invention. Examples of polypeptides of the invention include the following: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 92, Sequence number 94, sequence number 96, sequence number 98, sequence number 100, sequence number 102, sequence number 103, sequence number 104, sequence number 105, sequence SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126 , SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 150 SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 176 , SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 190, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 200 SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 208, SEQ ID NO: 210, SEQ ID NO: 212 SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 222, SEQ ID NO: 224, SEQ ID NO: 226, SEQ ID NO: 228, SEQ ID NO: 230, SEQ ID NO: 232, and SEQ ID NO: 234. These polypeptides are referred to as “polypeptide SEQ ID NOs”. Homologous amino acid sequences that exhibit at least about 75, or about 90, 96, 98, or 99% identity to the polypeptide sequence shown in the polypeptide SEQ ID NO are also Aa polypeptides. Homologous amino acid sequences retain biological activity, ie are biologically functionally equivalent.

配列同一性のパーセンテージは当該分野で認識される意味を持ち、２つのポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列間の同一性を測定するための多くの方法がある。例えば以下を参照されたい：Lesk編, Computational Molecular Biology, Oxford University Press, New York, (1988)；Smith編, Biocomputing: Informatics And Genome Projects, Academic Press, New York, (1993)；GriffinおよびGriffin編, Computer Analysis Of Sequence Data, Part I, Humana Press, New Jersey, (1994)；von Heinje, Sequence Analysis In Molecular Biology, Academic Press, (1987)；そして、GribskovおよびDevereux編, Sequence Analysis Primer, M Stockton Press, New York, (1991)。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドをアラインメントする方法は以下のようなコンピュータープログラムにコーディングされている：GCGプログラムパッケージ（Devereuxら, Nuc. Acids Res. 12:387 (1984)）、BLASTP、BLASTN、FASTA（Atschul ら, J. Molec. Biol. 215:403 (1990)）、およびBestfitプログラム（Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, WI 53711）（これはSmithおよびWatermanの局所相同性アルゴリズムを使用する（Adv. App. Math., 2:482−489 (1981)））。例えば、FASTAアルゴリズムを使用するコンピュータープログラムALIGNを、ギャップオープンペナルティー−１２、ギャップ伸長ペナルティー−２のアフィンギャップサーチと共に使用できる。   Percent sequence identity has an art-recognized meaning and there are many ways to measure identity between two polypeptide or polynucleotide sequences. For example, see: Lesk, Computational Molecular Biology, Oxford University Press, New York, (1988); Smith, Biocomputing: Informatics And Genome Projects, Academic Press, New York, (1993); Griffin and Griffin, Computer Analysis Of Sequence Data, Part I, Humana Press, New Jersey, (1994); von Heinje, Sequence Analysis In Molecular Biology, Academic Press, (1987); and Gribskov and Devereux, Sequence Analysis Primer, M Stockton Press, New York, (1991). Methods for aligning polynucleotides or polypeptides are coded in the following computer program: GCG program package (Devereux et al., Nuc. Acids Res. 12: 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, FASTA (Atschul et al. , J. Molec. Biol. 215: 403 (1990)) and the Bestfit program (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, 575 Science Drive, Madison, WI 53711) (this is Smith) And Waterman's local homology algorithm (Adv. App. Math., 2: 482-489 (1981))). For example, the computer program ALIGN using the FASTA algorithm can be used with an affine gap search of gap open penalty-12, gap extension penalty-2.

配列アラインメントプログラムを使用して、特定の配列が例えば参照配列と約９５％の同一性を有するかどうかを確認する場合、同一性のパーセンテージが参照ポリヌクレオチドの完全長にわたって計算されるように、そして同一性のギャップが参照ポリヌクレオチド中のヌクレオチド総数の５％までとなるように、パラメーターを設定する。   When using a sequence alignment program to determine whether a particular sequence has, for example, about 95% identity with a reference sequence, the percentage identity is calculated over the full length of the reference polynucleotide, and Parameters are set so that the identity gap is up to 5% of the total number of nucleotides in the reference polynucleotide.

ポリペプチド配列番号に示すポリペプチド変異体およびそのフラグメントも本発明に含まれる。変異体は、保存的置換および／または修飾においてのみ、ポリペプチド配列番号またはそのフラグメントと異なるポリペプチドであり、そのためポリペプチドの抗原性は元のポリペプチドと実質的に同じである。一般に変異体の同定は、本発明のポリペプチド配列の１つを修飾し、修飾されたポリペプチドの抗原性を、例えば免疫組織化学的アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）、ラジオイムノアッセイ（RIA）、またはウェスタンブロットアッセイを使用して評価することによって行うことができる。本発明のポリペプチドは少なくとも１、５、１０、２５、５０、または１００個の保存的アミノ酸置換を含むことができる。   Polypeptide variants shown in the polypeptide SEQ ID NO and fragments thereof are also included in the present invention. A variant is a polypeptide that differs from a polypeptide SEQ ID NO or fragment thereof only by conservative substitutions and / or modifications, so that the antigenicity of the polypeptide is substantially the same as the original polypeptide. In general, the identification of a variant involves modifying one of the polypeptide sequences of the invention and determining the antigenicity of the modified polypeptide, eg, immunohistochemical assay, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA). ), Or by evaluation using a Western blot assay. The polypeptides of the invention can contain at least 1, 5, 10, 25, 50, or 100 conservative amino acid substitutions.

保存的置換は、アミノ酸が同様の特性を有する別のアミノ酸で置換され、そのためペプチド化学分野の当業者によってポリペプチドの２次構造およびハイドロパシー特性が実質的に変化しないことが予期されるものである。一般に、以下のアミノ酸群は保存的変化を示す：（１）ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr；（２）cys、ser、tyr、thr；（３）val、ile、leu、met、ala、phe；（４）lys、arg、his；および（５）phe、tyr、trp、his。   A conservative substitution is one in which an amino acid is replaced with another amino acid having similar properties, so that one skilled in the art of peptide chemistry is expected to not substantially change the secondary structure and hydropathic properties of the polypeptide. is there. In general, the following amino acid groups show conservative changes: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser, thr; (2) cys, ser, tyr, thr; (3) val, ile, leu, met, ala, phe; (4) lys, arg, his; and (5) phe, tyr, trp, his.

変異体は更に（または代わりに）、例えばポリペプチドの抗原性、２次構造、およびハイドロパシー特性に最小限の影響しか与えないアミノ酸の欠失または添加によって修飾することもできる。例えばポリペプチドをタンパク質のN−末端でシグナル（またはリーダー）配列にコンジュゲートさせることができ、これは翻訳時に、または翻訳後にタンパク質を移動させる。また、ポリペプチドを、ポリペプチドの合成、精製、もしくは同定を容易にするため（例えばポリHis）、または固体支持体へのポリペプチドの結合を向上するために、リンカーまたは他の配列にコンジュゲートさせることもできる。例えばポリペプチドを免疫グロブリンのFc領域にコンジュゲートさせることができる。   Variants can also be (or alternatively) modified, for example, by deletions or additions of amino acids that have minimal effects on the antigenicity, secondary structure, and hydropathic properties of the polypeptide. For example, a polypeptide can be conjugated to a signal (or leader) sequence at the N-terminus of the protein, which moves the protein during or after translation. The polypeptide may also be conjugated to a linker or other sequence to facilitate synthesis, purification, or identification of the polypeptide (eg, poly-His), or to improve the binding of the polypeptide to a solid support. It can also be made. For example, the polypeptide can be conjugated to the Fc region of an immunoglobulin.

本発明のポリペプチドはポリペプチド配列番号に示すポリペプチドの少なくとも約５、１０、２５、５０、１００、または２００アミノ酸の生体機能的同等物を更に含んでもよい。ポリペプチドがアッセイ（例えば免疫組織化学的アッセイ、ELISA、RIA、またはウェスタンブロットアッセイ）において本発明のポリペプチドと実質的に同じように反応し、例えば元のポリペプチドの９０−１１０％の活性を有する場合、これは生物学的同等物である。ある態様では、アッセイは競合アッセイであり、ここでは、生物学的に同等であるポリペプチドは、本発明のポリペプチドの対応する反応性抗原または抗体への結合を約８０、９５、９９、または１００％低下させる能力を有する。   The polypeptides of the present invention may further comprise a biofunctional equivalent of at least about 5, 10, 25, 50, 100, or 200 amino acids of the polypeptide set forth in polypeptide SEQ ID NO. The polypeptide reacts in substantially the same manner as the polypeptide of the invention in an assay (eg, immunohistochemical assay, ELISA, RIA, or Western blot assay), eg, 90-110% of the activity of the original polypeptide. If so, this is a biological equivalent. In some embodiments, the assay is a competitive assay, wherein a bioequivalent polypeptide has a binding of a polypeptide of the invention to a corresponding reactive antigen or antibody of about 80, 95, 99, or Has the ability to reduce 100%.

本発明のポリペプチドは、Aaに対して反応性を有する抗体によって認識される抗原を含むことができる。抗原は１またはそれ以上のエピトープ（または抗原決定基）を含むことができる。エピトープは直鎖エピトープ、連続エピトープ（sequential epitope）、またはコンフォメーションエピトープであってもよい。本発明のポリペプチド内のエピトープはいくつかの方法によって同定できる。例えば米国特許第4,554,101号；JamesonおよびWolf, CABIOS 4:181−186 (1988)参照。例えば、本発明のポリペプチドを単離およびスクリーニングすることができる。合わせると全ポリペプチド配列を網羅するような一連の短鎖ペプチドを、タンパク分解による開裂によって調製することができる。例えば１００量体ポリペプチドフラグメントから出発して、ELISAで認識されるエピトープの存在について各フラグメントを試験できる。例えばELISAアッセイで、Aaポリペプチド（例えば１００量体ポリペプチドフラグメント）を固体支持体（例えばプラスチック製のマルチウェルプレートのウェル）に結合させる。抗体集団を標識し、固体支持体に添加し、非特異的吸収が阻害されるような条件下で未標識の抗原に結合させ、未結合の抗体および他のタンパク質を洗浄除去する。抗体結合を、例えば無色の基質を着色された反応生成物に変換する反応によって検出する。次いで、同定された１００量体から次第に小さくした重複するフラグメントを試験し、興味のエピトープのマッピングを行う。   The polypeptide of the present invention may include an antigen recognized by an antibody reactive to Aa. An antigen can contain one or more epitopes (or antigenic determinants). The epitope may be a linear epitope, a sequential epitope, or a conformational epitope. Epitopes within the polypeptides of the invention can be identified by several methods. See, for example, US Pat. No. 4,554,101; Jameson and Wolf, CABIOS 4: 181-186 (1988). For example, the polypeptides of the invention can be isolated and screened. A series of short peptides that together cover the entire polypeptide sequence can be prepared by proteolytic cleavage. For example, starting from a 100-mer polypeptide fragment, each fragment can be tested for the presence of an epitope recognized by ELISA. For example, in an ELISA assay, an Aa polypeptide (eg, a 100-mer polypeptide fragment) is bound to a solid support (eg, a well of a plastic multi-well plate). The antibody population is labeled and added to a solid support, allowed to bind to unlabeled antigen under conditions such that unspecific absorption is inhibited, and unbound antibody and other proteins are washed away. Antibody binding is detected, for example, by a reaction that converts a colorless substrate into a colored reaction product. The overlapping fragments, which are gradually reduced from the identified 100-mer, are then examined to map the epitope of interest.

本発明のポリペプチドは組換え技術によって生成することができる。本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを組換え発現ベクターに導入することができ、これを当業界で周知の技術を使用して好適な発現宿主細胞系で発現させることができる。種々の細菌、酵母、植物、哺乳動物、および昆虫発現系が当業界で利用されており、それらの発現系のいずれを使用してもよい。必要により、ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを、細胞を使用しない翻訳系において翻訳することができる。また、ポリペプチドは化学的に合成することもできる。   The polypeptides of the present invention can be produced by recombinant techniques. A polynucleotide encoding a polypeptide of the present invention can be introduced into a recombinant expression vector, which can be expressed in a suitable expression host cell system using techniques well known in the art. Various bacterial, yeast, plant, mammalian, and insect expression systems are utilized in the art, and any of these expression systems may be used. If necessary, the polynucleotide encoding the polypeptide can be translated in a translation system that does not use cells. Polypeptides can also be chemically synthesized.

必要により、ポリペプチドを融合タンパク質として生成することができ、これは他のアミノ酸配列（例えばアミノ酸リンカーまたはシグナル配列）、並びにタンパク質の精製に有用なリガンド（例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ヒスチジンタグ、およびブドウ球菌プロテインＡ（staphylococcal protein A））を含むこともできる。融合タンパク質中には２個以上の本発明のポリペプチドが存在してもよい。   If desired, the polypeptide can be produced as a fusion protein, which includes other amino acid sequences (eg, amino acid linkers or signal sequences), as well as ligands useful for protein purification (eg, glutathione-S-transferase, histidine tags, and Staphylococcal protein A (staphylococcal protein A)) can also be included. There may be more than one polypeptide of the invention in the fusion protein.

ポリヌクレオチド
本発明のポリヌクレオチドは、微生物ゲノム全体より少ないものを含有し、１本鎖または２本鎖のDNAまたはRNAであってもよい。ポリヌクレオチドは他の成分（例えばタンパク質および脂質）が含有されないように精製することができる。本発明のポリヌクレオチドは上記のポリペプチドをコードする。本発明のポリヌクレオチドは他のヌクレオチド配列、例えばリンカーをコードする配列、シグナル配列、異種シグナル配列、TMR転写停止配列、膜貫通ドメイン、またはタンパク質精製に有用なリガンド、例えばグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、ヒスチジンタグ、およびブドウ球菌プロテインＡを含むこともできる。 Polynucleotides The polynucleotides of the present invention contain less than the entire microbial genome and may be single-stranded or double-stranded DNA or RNA. The polynucleotide can be purified such that it does not contain other components (eg, proteins and lipids). The polynucleotide of the present invention encodes the above polypeptide. The polynucleotides of the present invention may comprise other nucleotide sequences, such as sequences encoding linkers, signal sequences, heterologous signal sequences, TMR transcription termination sequences, transmembrane domains, or ligands useful for protein purification, such as glutathione-S-transferase, histidine. Tags and staphylococcal protein A can also be included.

本発明のポリヌクレオチドは、配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号71、配列番号73、配列番号75、配列番号77、配列番号79、配列番号81、配列番号83、配列番号85、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号93、配列番号95、配列番号97、配列番号99、配列番号101、配列番号106、配列番号108、配列番号115、配列番号117、配列番号119、配列番号121、配列番号123、配列番号125、配列番号127、配列番号129、配列番号131、配列番号133、配列番号135、配列番号137、配列番号139、配列番号141、配列番号143、配列番号145、配列番号147、配列番号149、配列番号151、配列番号153、配列番号155、配列番号157、配列番号159、配列番号161、配列番号163、配列番号165、配列番号167、配列番号169、配列番号171、配列番号173、配列番号175、配列番号177、配列番号179、配列番号181、配列番号183、配列番号185、配列番号187、配列番号189、配列番号191、配列番号193、配列番号195、配列番号197、配列番号199、配列番号201、配列番号203、配列番号205、配列番号207、配列番号209、配列番号211、配列番号213、配列番号215、配列番号217、配列番号219、配列番号221、配列番号223、配列番号225、配列番号227、配列番号229、配列番号231、および配列番号233で示される。これらのポリヌクレオチドを“ポリヌクレオチド配列番号”と呼ぶ。   The polynucleotide of the present invention is SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21 , SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 45 SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 71 , SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 95 SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 145 , SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 169 NO.171, SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195 , SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 211, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 219, Sequence No. 221, SEQ ID No. 223, SEQ ID No. 225, SEQ ID No. 227, SEQ ID No. 229, SEQ ID No. 231 And SEQ ID NO: 233. These polynucleotides are referred to as “polynucleotide sequence numbers”.

本発明のポリペプチドをコードする縮重ヌクレオチド配列、並びにポリヌクレオチド配列番号 に示すヌクレオチド配列と少なくとも約７５％、または約９０、９６、９８、もしくは９９％の同一性を有する相同ヌクレオチド配列およびそれらの相補体も本発明のポリヌクレオチドである。配列同一性のパーセンテージを“ポリペプチド”の項に記載するように算出できる。縮重ヌクレオチド配列は、ポリペプチド配列番号に示すポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチドであるが、遺伝子コードの縮重により、ポリヌクレオチド配列番号に示される配列と核酸配列が異なる。相補DNA（cDNA）分子、種間相同体、および生体機能的AaポリペプチドをコードするAaポリヌクレオチドの変異体もAaポリヌクレオチドである。本発明のポリヌクレオチドはポリヌクレオチド配列番号に示す核酸配列の約５、１０、１５、５０、１００、または２００ヌクレオチドを含有することができる。   Degenerate nucleotide sequences encoding the polypeptides of the invention, and homologous nucleotide sequences having at least about 75%, or about 90, 96, 98, or 99% identity with the nucleotide sequence shown in polynucleotide SEQ ID NO: A complement is also a polynucleotide of the present invention. The percentage sequence identity can be calculated as described in the “Polypeptides” section. A degenerate nucleotide sequence is a polynucleotide that encodes the polypeptide shown in the polypeptide SEQ ID NO or a fragment thereof, but the nucleic acid sequence differs from the sequence shown in the polynucleotide SEQ ID NO due to the degeneracy of the genetic code. Aa polynucleotides that encode complementary DNA (cDNA) molecules, interspecies homologues, and biofunctional Aa polypeptides are also Aa polynucleotides. A polynucleotide of the invention can contain about 5, 10, 15, 50, 100, or 200 nucleotides of the nucleic acid sequence shown in the polynucleotide SEQ ID NO.

本発明のポリヌクレオチドは、例えば、感染した個体由来の生体サンプル、例えば歯垢、唾液、歯肉滲出液、痰、血液、血清、血漿、尿、便、脳脊髄液、羊水、創傷滲出液、または組織中に存在する核酸配列から単離できる。ポリヌクレオチドは、例えば自動合成装置を使用して、実験室で合成することもできる。PCRのような増幅法を使用して、ポリペプチドをコードするゲノムDNAまたはcDNAのいずれかからポリヌクレオチドを増幅することができる。   The polynucleotide of the present invention is, for example, a biological sample derived from an infected individual such as plaque, saliva, gingival exudate, sputum, blood, serum, plasma, urine, stool, cerebrospinal fluid, amniotic fluid, wound exudate, or It can be isolated from nucleic acid sequences present in tissue. Polynucleotides can also be synthesized in the laboratory, for example using an automated synthesizer. Amplification methods such as PCR can be used to amplify the polynucleotide from either genomic DNA or cDNA encoding the polypeptide.

本発明のポリヌクレオチドは天然に存在するポリペプチドのコーディング配列を含んでいてもよく、または天然には存在しない変更された配列をコードしてもよい。必要により、発現制御要素を含む発現ベクター中にポリヌクレオチドをクローニングすることができ、それらの要素には、例えば複製開始点、プロモーター、エンハンサー、または宿主細胞において本発明のポリヌクレオチドの発現を誘導する他の要素がある。発現ベクターは、例えばプラスミド（例えばpBR322、pUC、またはColE1）またはアデノウィルスベクター（例えばアデノウィルスII型ベクターまたはＶ型ベクター）であってもよい。必要により他のベクターを使用することができ、それらには、限定される訳ではないが、シンドビスウィルス、シミアンウィルス４０、アルファウィルスベクター、ポックスウィルスベクター、およびサイトメガロウィルスおよびレトロウィルスベクター、例えばマウス肉腫ウィルス、マウス乳腺癌ウィルス、マウスモロニー白血病ウィルス、およびラウス肉腫ウィルス等が含まれる。ミニクロモソーム、例えばMCおよびMC1、バクテリオファージ、ファージミド、人工酵母染色体、人工細菌染色体、ウィルス粒子、ウィルス様粒子、コスミド（λファージのcos部位を挿入したプラスミド）、およびレプリコン（細胞中でそれら独自の制御下で複製する能力を有する遺伝要素）を使用することもできる。   The polynucleotides of the invention may include coding sequences for naturally occurring polypeptides or may encode altered sequences that do not occur in nature. If necessary, the polynucleotide can be cloned into an expression vector containing expression control elements, which induce the expression of the polynucleotide of the present invention in, for example, an origin of replication, promoter, enhancer, or host cell. There are other elements. The expression vector may be, for example, a plasmid (eg, pBR322, pUC, or ColE1) or an adenovirus vector (eg, an adenovirus type II vector or type V vector). Other vectors can be used if desired, including, but not limited to, Sindbis virus, simian virus 40, alphavirus vectors, poxvirus vectors, and cytomegalovirus and retrovirus vectors, such as Examples include mouse sarcoma virus, mouse mammary adenocarcinoma virus, mouse moloney leukemia virus, and rous sarcoma virus. Minichromosomes such as MC and MC1, bacteriophages, phagemids, artificial yeast chromosomes, artificial bacterial chromosomes, virus particles, virus-like particles, cosmids (plasmids with the cos site of λ phage), and replicons (their unique in the cell) Genetic elements that have the ability to replicate under control) can also be used.

発現制御配列に動作可能なように連結されたポリヌクレオチドの調製および宿主細胞でのそれらの発現の方法は当該分野で周知である。例えば米国特許第4,366,246号を参照されたい。本発明のポリヌクレオチドは、ポリヌクレオチドの転写および／または翻訳を指示する１またはそれ以上の発現制御要素に隣接して配置されている場合、動作可能なように連結されている。   The preparation of polynucleotides operably linked to expression control sequences and methods for their expression in host cells are well known in the art. See, for example, US Pat. No. 4,366,246. A polynucleotide of the invention is operably linked when placed adjacent to one or more expression control elements that direct transcription and / or translation of the polynucleotide.

本発明のポリヌクレオチドを含有するベクターを、例えば細菌、酵母、昆虫、または哺乳動物細胞に形質転換し、本発明のポリペプチドを細胞培養液中で発現させ、そこから単離することができる。当該分野で可能な方法のいずれかを使用して、宿主細胞にポリヌクレオチドを導入することができる。これらには、限定されるわけではないが、裸の、またはカプセルに封入された核酸でのトランスフェクション、細胞融合、プロトプラスト融合、ウィルス感染、およびエレクトロポレーション等がある。   A vector containing the polynucleotide of the present invention can be transformed into, for example, bacterial, yeast, insect or mammalian cells, and the polypeptide of the present invention can be expressed in a cell culture medium and isolated therefrom. The polynucleotide can be introduced into the host cell using any of the methods possible in the art. These include, but are not limited to, transfection with nucleic acids that are naked or encapsulated, cell fusion, protoplast fusion, viral infection, and electroporation.

本発明のポリヌクレオチドを、例えばプローブまたはプライマー（例えばPCRプライマー）として使用し、サンプル（例えば生体サンプル）中のAaポリヌクレオチドの存在を検出することができる。それらのプローブおよびプライマーがAaポリヌクレオチド配列に特異的にハイブリダイズする能力により、それらを使用して所定のサンプル中の相補配列の存在を検出することが可能となる。本発明のポリヌクレオチドプローブおよびプライマーを、サンプル（例えば生体サンプル（例えば歯垢、唾液、歯肉滲出液、痰、血液、尿、便、脳脊髄液、羊水、創傷滲出液、または組織））中の相補配列にハイブリダイズさせることができる。サンプル由来のポリヌクレオチドを、例えばゲル電気泳動もしくは他のサイズ分離法に適用するか、またはサイズ分離を行わずに固定化することができる。ポリヌクレオチドプローブまたはプライマーを標識することができる。好適な標識、およびプローブおよびプライマーを標識する方法は当業界で周知であり、それらには、例えば、ニックトランスレーションまたはキナーゼによって導入する放射線標識、ビオチン標識、蛍光標識、化学発光標識、生物発光標識、金属キレート剤標識、および酵素標識がある。サンプル由来のポリヌクレオチドを、好適なストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件下でプローブまたはプライマーと接触させる。   The polynucleotides of the invention can be used, for example, as probes or primers (eg, PCR primers) to detect the presence of Aa polynucleotides in a sample (eg, a biological sample). The ability of these probes and primers to specifically hybridize to Aa polynucleotide sequences allows them to be used to detect the presence of complementary sequences in a given sample. The polynucleotide probes and primers of the present invention in a sample (eg, biological sample (eg, plaque, saliva, gingival exudate, sputum, blood, urine, stool, cerebrospinal fluid, amniotic fluid, wound exudate, or tissue)) It can be hybridized to a complementary sequence. The sample-derived polynucleotide can be applied, for example, to gel electrophoresis or other size separation methods, or can be immobilized without size separation. The polynucleotide probe or primer can be labeled. Suitable labels and methods for labeling probes and primers are well known in the art and include, for example, radiolabels introduced by nick translation or kinase, biotin labels, fluorescent labels, chemiluminescent labels, bioluminescent labels. There are metal chelator labels, and enzyme labels. The polynucleotide from the sample is contacted with a probe or primer under suitable stringency hybridization conditions.

用途によって、種々のハイブリダイゼーション条件を使用して、プローブまたはプライマーの標的配列に対する選択性を種々の程度にすることができる。高度の選択性を必要とする用途では、相対的にストリンジェントな条件（例えば低塩および／または高温条件、例えば約０．０２Ｍから約０．１５Ｍの塩濃度で、約５０℃から約７０℃の温度）が使用される。より低い選択性が必要とされる適用では、より低いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件を使用できる。例えば約０．１４Ｍから約０．９Ｍの塩濃度で約２０℃から約５５℃の温度範囲である。プローブまたはプライマーおよび試験サンプル由来の相補ポリヌクレオチドを含有するハイブリッド複合体の存在は、サンプル中のAaまたはAaポリヌクレオチド配列の存在を示す。   Depending on the application, various hybridization conditions can be used to vary the degree of selectivity of the probe or primer to the target sequence. For applications that require a high degree of selectivity, relatively stringent conditions (eg, low salt and / or high temperature conditions, eg, about 0.02M to about 0.15M salt concentration, about 50 ° C. to about 70 ° C. Temperature) is used. For applications where lower selectivity is required, lower stringency hybridization conditions can be used. For example, a temperature range of about 20 ° C. to about 55 ° C. with a salt concentration of about 0.14M to about 0.9M. The presence of a hybrid complex containing a probe or primer and a complementary polynucleotide from the test sample indicates the presence of Aa or Aa polynucleotide sequences in the sample.

抗体
本発明の抗体は、本発明のAaポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的かつ安定に結合する抗体分子である。本発明の抗体はポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、１本鎖抗体（scFv）、または抗体のフラグメントであってもよい。抗体のフラグメントは無傷の抗体の抗原結合部位または可変領域を含む無傷の抗体の一部であり、この部分は無傷の抗体のFc領域の定常領域重鎖ドメインを含まない。抗体フラグメントの例にはFab、Fab'、Fab'−SH、F(ab')2、およびFvフラグメントがある。 Antibodies The antibodies of the present invention are antibody molecules that specifically and stably bind to the Aa polypeptide of the present invention or a fragment thereof. The antibodies of the present invention may be polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, single chain antibodies (scFv), or antibody fragments. An antibody fragment is a portion of an intact antibody that contains the antigen-binding site or variable region of the intact antibody, and this portion does not contain the constant region heavy chain domain of the Fc region of the intact antibody. Examples of antibody fragments include Fab, Fab ′, Fab′-SH, F (ab ′) 2 and Fv fragments.

本発明の抗体は、例えばIgG、IgM、IgA、IgD、およびIgEを含むいずれのクラスの抗体であってもよい。抗体またはそのフラグメントは本発明のポリペプチドのエピトープに結合する。抗体は、好適な実験動物においてインビボで生成するか、または組換えDNA技術を使用してインビトロで生成できる。抗体を調製および特性決定する方法は当該分野で周知である。例えば以下を参照されたい：Methods Mol. Biol. 80:23−37 (1998)；Dean, Methods Mol. Biol. 32:361−79 (1994)；Baileg, Methods Mol. Biol. 32:381−88 (1994)；Gullick, Methods Mol. Biol. 32:389−99 (1994)；Drenckhahnら Methods Cell. Biol. 37:7−56 (1993)；Morrison, Ann. Rev. Immunol. 10:239−65 (1992)；Wrightら Crit. Rev. Immunol. 12:125−68(1992)。例えば、ポリクローナル抗体の生成は、本発明のポリペプチドを動物（例えばヒトもしくは他の霊長類、マウス、ラット、ウサギ、モルモット、ヤギ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ロバ、またはウマ）に投与することによって行ってもよい。免疫化した動物からの血清を回収し、例えば硫酸アンモニウムによる沈殿、次いでクロマトグラフィー（例えばアフィニティークロマトグラフィー）によって、抗体を血漿から精製する。ポリクローナル抗体を生成および加工する技術は当該分野で周知である。   The antibody of the present invention may be any class of antibody including, for example, IgG, IgM, IgA, IgD, and IgE. The antibody or fragment thereof binds to an epitope of the polypeptide of the invention. Antibodies can be generated in vivo in suitable laboratory animals or in vitro using recombinant DNA techniques. Methods for preparing and characterizing antibodies are well known in the art. For example, see: Methods Mol. Biol. 80: 23-37 (1998); Dean, Methods Mol. Biol. 32: 361-79 (1994); Baileg, Methods Mol. Biol. 32: 381-88 ( 1994); Gullick, Methods Mol. Biol. 32: 389-99 (1994); Drenckhahn et al. Methods Cell. Biol. 37: 7-56 (1993); Morrison, Ann. Rev. Immunol. 10: 239-65 (1992) Wright et al. Crit. Rev. Immunol. 12: 125-68 (1992). For example, production of polyclonal antibodies can be accomplished by administering a polypeptide of the invention to an animal (eg, a human or other primate, mouse, rat, rabbit, guinea pig, goat, pig, cow, sheep, donkey, or horse). You may go. Serum from the immunized animal is collected and the antibody is purified from plasma, for example, by precipitation with ammonium sulfate followed by chromatography (eg, affinity chromatography). Techniques for generating and processing polyclonal antibodies are well known in the art.

更に、本発明のポリペプチド上に存在するエピトープに対するモノクローナル抗体も容易に生成できる。例えば本発明のポリペプチドで免疫化した哺乳動物（例えばマウス）由来の正常Ｂ細胞を、例えばHAT感受性マウス骨髄腫細胞と融合させてハイブリドーマを生成することができる。Aa特異的抗体を生成するハイブリドーマは、RIAまたはELISAを使用して同定し、半流動寒天中でクローニングするか、または限界希釈によって単離することができる。Aa特異的抗体を生成するクローンを、更なるラウンドのスクリーニングによって単離する。モノクローナル抗体の特異性に関するスクリーニングは、標準的な技術、例えば本発明のポリペプチドをマイクロタイタープレートに結合させ、ELISAアッセイによってモノクローナル抗体の結合を測定することによって行うことができる。モノクローナル抗体の生成および加工の技術は当該分野で周知である。例えばKohlerおよびMilstein, Nature, 256:495 (1975)を参照されたい。モノクローナル抗体の特定のアイソタイプの調製は、異なるアイソタイプのモノクローナル抗体を分泌する親ハイブリドーマから直接、初めの融合体からの選択によって、または二次的に行うことができ、これは同胞選択法（sib selection technique）を使用してクラススイッチ変異体を単離することによって行う。Steplewskiら., P.N.A.S. U.S.A. 82:8653 1985；Spriaら, J. Immunolog. Meth. 74:307, 1984参照。本発明のモノクローナル抗体は組換えモノクローナル抗体であってもよい。例えば米国特許第4,474,893号；米国特許第4,816,567号参照。本発明の抗体は化学的に構築することもできる。例えば米国特許第4,676,980号参照。   In addition, monoclonal antibodies against epitopes present on the polypeptides of the invention can be readily generated. For example, normal B cells derived from a mammal (eg, mouse) immunized with the polypeptide of the present invention can be fused with, for example, HAT-sensitive mouse myeloma cells to produce hybridomas. Hybridomas producing Aa-specific antibodies can be identified using RIA or ELISA and cloned in semi-fluid agar or isolated by limiting dilution. Clones producing Aa-specific antibodies are isolated by a further round of screening. Screening for monoclonal antibody specificity can be done by standard techniques, eg, binding the polypeptide of the invention to a microtiter plate and measuring monoclonal antibody binding by ELISA assay. Techniques for generating and processing monoclonal antibodies are well known in the art. See, for example, Kohler and Milstein, Nature, 256: 495 (1975). Preparation of specific isotypes of monoclonal antibodies can be done directly from the parent hybridoma that secretes monoclonal antibodies of different isotypes, by selection from the original fusion, or secondary, which involves sib selection. technique) to isolate class switch mutants. See Steplewski et al., P.N.A.S. U.S.A. 82: 8653 1985; Spria et al., J. Immunolog. Meth. 74: 307, 1984. The monoclonal antibody of the present invention may be a recombinant monoclonal antibody. See, for example, US Pat. No. 4,474,893; US Pat. No. 4,816,567. The antibodies of the present invention can also be constructed chemically. See, for example, US Pat. No. 4,676,980.

本発明の抗体はキメラ（例えば米国特許第5,482,856号参照）、ヒト化（例えばJones ら, Nature 321:522 (1986)；Reichmannら, Nature 332:323 (1988)；Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593 (1992)参照）、またはヒト抗体であってもよい。ヒト抗体は、例えば直接不死化、ファージディスプレイ、トランスジェニックマウス、またはトリメラ（Trimera）法によって生成することができる。例えばReisenerら、Trends Biotechnol. 16:242−246 (1998)参照。   The antibodies of the present invention may be chimeric (see, eg, US Pat. No. 5,482,856), humanized (eg, Jones et al., Nature 321: 522 (1986); Reichmann et al., Nature 332: 323 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2: 593 (1992)), or a human antibody. Human antibodies can be generated, for example, by direct immortalization, phage display, transgenic mice, or the Trimera method. See, for example, Reisener et al., Trends Biotechnol. 16: 242-246 (1998).

Aa抗原に対する抗体（モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれも）は、サンプル（例えばAa感染したヒト由来の血清サンプル）中のAaまたはAa抗原の存在を検出するのに特に有用である。AaまたはAa抗原に関する免疫アッセイは１つの抗体、またはいくつかの抗体を利用することができる。AaまたはAa抗原に関する免疫アッセイは、例えば以下を使用することができる：Aaエピトープ（単数）に対するモノクローナル抗体（単数）、１つのAaポリペプチドのエピトープ（複数）に対するモノクローナル抗体（複数）の組み合わせ、異なるAaポリペプチド（複数）のエピトープ（複数）に対するモノクローナル抗体（複数）、同じAa抗原（単数）に対するポリクローナル抗体（複数）、異なるAa抗原（複数）に対するポリクローナル抗体（複数）、またはモノクローナルおよびポリクローナル抗体の組み合わせ。免疫アッセイのプロトコールは、例えば競合、直接反応、またはサンドイッチ型アッセイ（例えば標識した抗体を使用する）に基づくものであってもよい。本発明の抗体は、当該分野で周知の型の標識、例えば蛍光、化学発光、放射能、酵素、コロイド金属、放射性同位元素、および生体発光標識で標識することができる。   Antibodies against Aa antigens (both monoclonal and polyclonal antibodies) are particularly useful for detecting the presence of Aa or Aa antigens in a sample (eg, a serum sample from an Aa infected human). An immunoassay for Aa or Aa antigen can utilize one antibody or several antibodies. Immunoassays for Aa or Aa antigens can use, for example, the following: monoclonal antibody (s) against Aa epitope (s), combination of monoclonal antibody (s) against epitope (s) of one Aa polypeptide, different Of monoclonal antibody (s) against epitope (s) of Aa polypeptide (s), polyclonal antibody (s) against the same Aa antigen (s), polyclonal antibody (s) against different Aa antigen (s), or monoclonal and polyclonal antibodies combination. Immunoassay protocols may be based, for example, on competition, direct reaction, or sandwich-type assays (eg, using labeled antibodies). The antibodies of the present invention can be labeled with types of labels well known in the art, such as fluorescence, chemiluminescence, radioactivity, enzymes, colloidal metals, radioisotopes, and bioluminescent labels.

本発明の抗体またはそのフラグメントを支持体に結合させ、AaまたはAa抗原の存在を検出することができる。支持体には、例えばガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、およびマグネタイトがある。   The antibody of the present invention or a fragment thereof can be bound to a support and the presence of Aa or Aa antigen can be detected. Supports include, for example, glass, polystyrene, polypropylene, polyethylene, dextran, nylon, amylase, natural and modified cellulose, polyacrylamide, agarose, and magnetite.

本発明のポリクローナルまたはモノクローナル抗体は、更に免疫アフィニティーカラムによるAa生体またはAa抗原の単離に使用することができる。抗体がその免疫選択活性を保持するように、例えば吸収または共有結合によって固体支持体に抗体を固定化することができる。必要により、スペーサー基を含有させて、抗体の抗原結合部位を利用可能な状態に保持することができる。その後、固定化した抗体を使用してサンプル由来のAa生体またはAa抗原を結合させることができるが、それらのサンプルは例えば唾液、歯垢、歯肉滲出液、痰、血液、尿、便、脳脊髄液、羊水、創傷滲出液、または組織を含む生体サンプルである。結合したAa生体またはAa抗原を、カラムマトリクスから（例えばpH変化によって）回収する。   The polyclonal or monoclonal antibody of the present invention can be further used for isolation of Aa organisms or Aa antigens using an immunoaffinity column. The antibody can be immobilized to the solid support, for example by absorption or covalent bonding, so that the antibody retains its immunoselective activity. If necessary, a spacer group can be included to keep the antigen binding site of the antibody available. The immobilized antibody can then be used to bind Aa organisms or Aa antigens from the sample, such as saliva, plaque, gingival exudate, sputum, blood, urine, stool, cerebrospinal A biological sample containing fluid, amniotic fluid, wound exudate, or tissue. Bound Aa organisms or Aa antigens are recovered from the column matrix (eg, by pH change).

本発明の抗体を免疫局在化の研究に使用し、種々の細胞事象または生理学的状態の際の本発明のポリペプチドの存在および分布を分析することもできる。抗体を使用して、受動免疫に関係する分子の同定および非タンパク質抗原の生合成に関係する分子の同定を行うこともできる。それらの分子の同定はワクチンの開発に有用でありうる。本発明の抗体（例えばモノクローナル抗体および１本鎖抗体を含む）を使用して、Aaに起因する疾病の回復の経過をモニタリングすることができる。動物由来の試験サンプル中のAaタンパク質に対するAa抗体の増加または減少を測定することによって、障害を改善することを目的とする特定の治療計画が有効かどうかを確認することができる。抗体は、例えば直接結合アッセイ（例えばRIA、ELISA、またはウェスタンブロットアッセイ）を使用して検出および／または定量することができる。   The antibodies of the invention can also be used in immunolocalization studies to analyze the presence and distribution of the polypeptides of the invention during various cellular events or physiological conditions. Antibodies can also be used to identify molecules involved in passive immunity and molecules involved in the biosynthesis of non-protein antigens. Identification of these molecules can be useful in vaccine development. The course of recovery of disease caused by Aa can be monitored using the antibodies of the present invention (including, for example, monoclonal antibodies and single chain antibodies). By measuring the increase or decrease in Aa antibodies to Aa protein in a test sample from an animal, it can be confirmed whether a particular treatment plan aimed at ameliorating the disorder is effective. The antibody can be detected and / or quantified using, for example, a direct binding assay (eg, RIA, ELISA, or Western blot assay).

Aaに感染している疑いのある動物由来の試験サンプルを得ることにより、本発明の抗体をAa感染の診断法に使用することができる。試験サンプルを、抗体−抗原複合体（すなわち免疫複合体）の生成が可能な条件下で、本発明の抗体と接触させる。抗体−抗原複合体の量は、当該分野で周知の方法によって測定できる。コントロールサンプルで生成されたものよりレベルが高ければ、Aa感染を示している。あるいはまた、本発明のポリペプチドを試験サンプルと接触させることができる。陽性生体サンプル中のAa抗体は、好適な条件下で抗原−抗体複合体を生成する。抗体−抗原複合体の量は、当該分野で周知の方法によって測定できる。   By obtaining a test sample from an animal suspected of being infected with Aa, the antibody of the present invention can be used in a diagnostic method for Aa infection. A test sample is contacted with an antibody of the invention under conditions that allow the generation of antibody-antigen complexes (ie, immune complexes). The amount of antibody-antigen complex can be measured by methods well known in the art. A higher level than that produced in the control sample indicates Aa infection. Alternatively, the polypeptide of the present invention can be contacted with a test sample. Aa antibodies in positive biological samples produce antigen-antibody complexes under suitable conditions. The amount of antibody-antigen complex can be measured by methods well known in the art.

Aaに起因する疾病の治療、改善、または予防の方法
本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、および抗体を使用して、Aaに起因する疾病（例えば早期発症型歯周炎（例えば局所性および汎発性思春期前歯周炎、局所性および汎発性若年性歯周炎、および急速進行性または抗療性成人歯周炎、心内膜炎、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎を含む）を治療、改善、または予防することができる。 Methods for treating, ameliorating or preventing diseases caused by Aa Using the polypeptides, polynucleotides and antibodies of the present invention, diseases caused by Aa (eg, early-onset periodontitis (eg, local and generalized) Prepubertal periodontitis, local and generalized juvenile periodontitis, and rapidly progressive or refractory adult periodontitis, endocarditis, thyroid abscess, urinary tract infection, brain abscess, and spine Osteomyelitis) can be treated, ameliorated, or prevented.

例えば本発明のモノクローナル抗体のような抗体またはそのフラグメントを動物（例えばヒト）に投与することができる。本発明のある態様では、抗体またはそのフラグメントを、医薬的に許容されるキャリアーを含む医薬組成物で動物に投与する。医薬組成物は治療的有効量の抗体またはそのフラグメントを含有する。治療的有効量は、被験体においてAa感染の症状を改善する、またはAa生体の量を低減するのに有効な量である。   For example, an antibody such as a monoclonal antibody of the present invention or a fragment thereof can be administered to an animal (eg, a human). In certain embodiments of the invention, the antibody or fragment thereof is administered to an animal in a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutical composition contains a therapeutically effective amount of the antibody or fragment thereof. A therapeutically effective amount is an amount effective to ameliorate symptoms of Aa infection or reduce the amount of Aa organisms in a subject.

本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを使用して、宿主において免疫応答を誘発することができる。免疫原性ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、動物において免疫応答を誘導する能力のある本発明のポリペプチドまたはポリヌクレオチドである。本発明の免疫原性ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、動物の免疫系を感作するのに特に有用であり、その結果として免疫応答が起こり、これによってAa感染の影響が改善または予防される。動物モデルにおける免疫応答の誘発は、例えば最適な投与量または投与経路を決定するのに有用でありうる。免疫応答の誘発は、Aaに起因する疾病または感染を治療、予防、または改善するのにも有用でありうる。免疫応答には体液性免疫応答もしくは細胞介在型免疫応答、またはそれらの組み合わせがある。免疫応答は、例えばディフェンシンの生成の促進による、全身性宿主応答の促進を含んでもよい。   The polypeptides or polynucleotides of the present invention can be used to elicit an immune response in a host. An immunogenic polypeptide or polynucleotide is a polypeptide or polynucleotide of the invention capable of inducing an immune response in an animal. The immunogenic polypeptides or polynucleotides of the present invention are particularly useful for sensitizing an animal's immune system, resulting in an immune response that improves or prevents the effects of Aa infection. Induction of an immune response in an animal model can be useful, for example, to determine the optimal dose or route of administration. Inducing an immune response can also be useful for treating, preventing, or ameliorating a disease or infection caused by Aa. The immune response includes a humoral immune response or a cell-mediated immune response, or a combination thereof. The immune response may include promoting a systemic host response, eg, by promoting the production of defensins.

動物によるAaに対する抗体価の生成は、感染からの防御および感染のクリアランスに重要でありうる。ポリペプチドまたはポリヌクレオチドをデリバリーした後の抗体の検出および／または定量を使用して、抗体価の誘発に特に有効なエピトープを同定することができる。Aaに対する強い抗体反応に関与するエピトープは、異なる長さのAaポリペプチドに対する抗体を誘発させることによって同定できる。その後、特定のポリペプチドエピトープによって誘発される抗体を、例えばELISAアッセイを使用して試験し、いずれのポリペプチドが強い反応の生成に最も有効なエピトープを含有するかを確認できる。次いで、これらのエピトープまたはエピトープをコードするポリヌクレオチドを含有するポリペプチドまたは融合タンパク質を構築し、強い抗体反応を誘発するために使用できる。   Generation of antibody titers against Aa by animals can be important for protection from infection and clearance of infection. Detection and / or quantification of antibodies after delivery of a polypeptide or polynucleotide can be used to identify epitopes that are particularly effective in inducing antibody titers. Epitopes involved in strong antibody responses against Aa can be identified by eliciting antibodies against different lengths of Aa polypeptide. The antibodies elicited by a particular polypeptide epitope can then be tested, eg, using an ELISA assay, to determine which polypeptide contains the most effective epitope for producing a strong response. Polypeptides or fusion proteins containing these epitopes or polynucleotides encoding the epitopes can then be constructed and used to elicit strong antibody responses.

本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体を、哺乳動物（例えばマウス、ウサギ、モルモット、マカク、ヒヒ、チンパンジー、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ、ネコ）またはニワトリもしくはアヒルのような動物に投与して、インビボにおいて抗体を誘発することができる。ポリヌクレオチドの注射は構築および修飾の簡易化に実用上、有益である。更に、ポリヌクレオチドの注射によって、宿主におけるポリペプチドの合成が起こる。従って、ポリペプチドは天然の翻訳後修飾、構造、およびコンフォメーションで宿主免疫系に存在する。ポリヌクレオチドは“裸DNA”として被験体に送達することができる。   A polypeptide, polynucleotide, or antibody of the present invention can be administered to a mammal (eg, mouse, rabbit, guinea pig, macaque, baboon, chimpanzee, human, cow, sheep, pig, horse, dog, cat) or chicken or duck It can be administered to animals to elicit antibodies in vivo. Polynucleotide injection is practically beneficial for ease of construction and modification. In addition, the injection of the polynucleotide results in the synthesis of the polypeptide in the host. Thus, the polypeptide is present in the host immune system with natural post-translational modifications, structures, and conformations. A polynucleotide can be delivered to a subject as “naked DNA”.

ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または抗体の投与は当該分野で知られるいずれの方法によってもよく、例えば、筋肉内、静脈内、肺内、筋肉内、皮内、腹膜内、または皮下注射、エアロゾル、鼻腔内、輸液ポンプ、坐薬、粘膜、局所、および経口（生物学的弾道銃（biological ballistic gun；“遺伝子銃”）を使用する注射を含む）が挙げられる。ポリヌクレオチド、ポリペプチド、または抗体は経口投与のためのタンパク質キャリアーを伴うことができる。投与方法を併用して免疫応答を誘発することもできる。抗体を約０．５ｍｇから約２００ｍｇの日用量で投与することができる。本発明のある態様では、抗体を約２０から約１００mｇの日用量で投与する。   Administration of the polynucleotide, polypeptide, or antibody may be by any method known in the art, such as intramuscular, intravenous, intrapulmonary, intramuscular, intradermal, intraperitoneal, or subcutaneous injection, aerosol, nasal cavity Internal, infusion pumps, suppositories, mucosa, topical, and oral (including injection using a biological ballistic gun (“gene gun”)). The polynucleotide, polypeptide, or antibody can be accompanied by a protein carrier for oral administration. It is also possible to induce an immune response using a combination of administration methods. The antibody can be administered at a daily dose of about 0.5 mg to about 200 mg. In certain embodiments of the invention, the antibody is administered at a daily dose of about 20 to about 100 mg.

治療に使用するための医薬的に許容されるキャリアーおよび希釈剤は当該分野で周知であり、例えばレミントンの薬学（Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing 社 (A.R. Gennaro編 (1985)）に記載されている。キャリアーそのものは宿主に有害な抗体の生成を誘導すべきではない。それらのキャリアーには、限定されるわけではないが、大型で代謝が遅い巨大分子（例えばタンパク質、多糖、例えばラテックス機能性化セファロース、アガロース、セルロース、セルロースビーズなど）、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、重合アミノ酸（例えばポリグルタミン酸、ポリリジンなど）、アミノ酸コポリマー、ペプトイド、リピトイド、および不活性無毒性ウィルス粒子または細菌細胞等が含まれる。リポソーム、ヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、および生物接着性剤（bioadhesive）も本発明の組成物のキャリアーとして使用できる。   Pharmaceutically acceptable carriers and diluents for use in therapy are well known in the art and are described, for example, in Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing, Inc. (Edition AR Gennaro (1985)). The carriers themselves should not induce the production of antibodies harmful to the host, including but not limited to large, slowly metabolized macromolecules (eg proteins, polysaccharides such as latex functionalized sepharose , Agarose, cellulose, cellulose beads, etc.), polylactic acid, polyglycolic acid, polymerized amino acids (eg, polyglutamic acid, polylysine, etc.), amino acid copolymers, peptoids, lipidoids, and inactive non-toxic virus particles or bacterial cells. Liposome, hydrogel, cyclodextrin, life Sex nanocapsules, and bioadhesive agent (bioadhesive) can also be used as carriers of the compositions of the present invention.

医薬的に許容される塩も本発明の組成物に使用することができ、それらは例えば、金属塩（例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、または硫酸塩）、並びに有機酸の塩（例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、または安息香酸塩）である。特に有用なタンパク質基質は、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、サイログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキソイド、および当業者に周知の他のタンパク質である。本発明の組成物は液体または添加剤、例えば水、食塩水、リン酸バッファー液、リンガー液、ハンクス液、グルコース、グリセロール、デキストロース、マロデキストリン、エタノールなど（単独で、または組み合わせて）、並びに基質、例えば湿潤剤、乳化剤、浸透圧調整剤、界面活性剤、またはpH調整剤を含有することもできる。更なる活性剤、例えば殺菌剤を使用することもできる。   Pharmaceutically acceptable salts can also be used in the compositions of the present invention and include, for example, metal salts (eg, hydrochloride, hydrobromide, phosphate, or sulfate), as well as organic acids. Salts (eg acetate, propionate, malonate or benzoate). Particularly useful protein substrates are serum albumin, keyhole limpet hemocyanin, immunoglobulin molecules, thyroglobulin, ovalbumin, tetanus toxoid, and other proteins well known to those skilled in the art. The composition of the present invention may be a liquid or an additive such as water, saline, phosphate buffer, Ringer's solution, Hank's solution, glucose, glycerol, dextrose, malodextrin, ethanol, etc. (alone or in combination), as well as a substrate For example, wetting agents, emulsifiers, osmotic pressure adjusting agents, surfactants, or pH adjusting agents. Additional activators such as bactericides can also be used.

必要により、リンパ球に対する免疫原性提示を向上する共刺激分子（例えばB7−1またはB7−2）、またはサイトカイン（MIP1α、GM−CSF、IL−2、およびIL−12）を本発明の組成物に含有させることができる。必要により、アジュバントを組成物に含有させることもできる。アジュバントは特異的免疫応答を非特異に増加させるために使用できる物質である。一般に、本発明のアジュバントおよびポリペプチドは混合した後に免疫系に提示するか、または別々に、しかし動物の同じ部位に提示する。アジュバントは、例えば以下を含有することができる：オイルアジュバント（例えばフロイントの完全および不完全アジュバント）金属塩（例えばAlK(SO4)2；AlNa(SO4)2、AlNH4(SO4)、シリカ、アラム、Al(OH)3、およびCa3(PO4)2）、ポリヌクレオチド（すなわちPolyicおよびポリAU酸）、およびある種の天然物質（例えば結核菌（Mycobacterium tuberculosis）由来のワックスD、並びにコリネバクテリウム・パルヴム（Corynebacterium parvum）、百日咳菌（Bordetella pertussis）、およびブルセラ菌属のメンバーに見られる物質）。使用できるアジュバントには、限定される訳ではないが以下がある：MF59−0、水酸化アルミニウム、N−アセチル−ムラミール−L−トレオニル−D−イソグルタミン（thr−MDP）、N−アセチル−ノル−ムラミル−L−アラニル−D−イソグルタミン（CGP 11637、ノル−MDPとも呼ばれる)、N−アセチルムラミール−L−アラニル−D−イソグルタミニル−L−アラニン−2−(1'−2'−ジパルミトイル−sn−グリセロ−3−ヒドロキシホスホリルオキシ)−エチルアミン（CGP 19835A、MTP−PEと呼ばれる）、およびRIBIで、細菌から抽出された３つの成分、モノホスホリルリピッドA、トレハロースジミコレート、および細胞壁骨格（MPL+TDM+CWS）を2%スクアレン／ツイーン80エマルジョンに混合して含有するもの。 Optionally, costimulatory molecules (eg B7-1 or B7-2) or cytokines (MIP1α, GM-CSF, IL-2, and IL-12) that enhance immunogenic presentation to lymphocytes are compositions of the invention Can be included in the product. If necessary, an adjuvant can be contained in the composition. An adjuvant is a substance that can be used to nonspecifically increase a specific immune response. In general, the adjuvants and polypeptides of the invention are presented to the immune system after mixing or presented separately but at the same site in the animal. Adjuvants can include, for example: oil adjuvants (eg, Freund's complete and incomplete adjuvants) metal salts (eg, AlK (SO 4 ) 2 ; AlNa (SO 4 ) 2 , AlNH 4 (SO 4 ), silica , Alum, Al (OH) 3 , and Ca 3 (PO 4 ) 2 ), polynucleotides (ie Polyic and poly AU acids), and certain natural substances (eg, wax D from Mycobacterium tuberculosis), and Corynebacterium parvum, Bordetella pertussis, and a member of the genus Brucella). Adjuvants that can be used include, but are not limited to: MF59-0, aluminum hydroxide, N-acetyl-muramyl-L-threonyl-D-isoglutamine (thr-MDP), N-acetyl-nor -Muramyl-L-alanyl-D-isoglutamine (CGP 11637, also called nor-MDP), N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isoglutaminyl-L-alanine-2- (1'-2'-di Palmitoyl-sn-glycero-3-hydroxyphosphoryloxy) -ethylamine (CGP 19835A, called MTP-PE), and RIBI, three components extracted from bacteria, monophosphoryl lipid A, trehalose dimycolate, and cell wall skeleton (MPL + TDM + CWS) mixed with 2% squalene / Tween 80 emulsion.

本発明の組成物は、経口錠剤、バッカル錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、オブラート、注射用製剤、マウスウォッシュ、歯磨き粉などに調製することができる。それらの組成物および製剤中の１またはそれ以上の本発明のポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体のパーセンテージは単位重量の0.１%から60%で様々でありうる。   The composition of the present invention can be prepared into oral tablets, buccal tablets, troches, capsules, elixirs, suspensions, syrups, wafers, injectable preparations, mouthwashes, toothpastes and the like. The percentage of one or more polypeptides, polynucleotides, or antibodies of the present invention in their compositions and formulations can vary from 0.1% to 60% of the unit weight.

ポリペプチドまたはポリヌクレオチドの投与によって動物における免疫応答を誘発することができ、これは少なくとも１週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、またはそれ以上の間持続する。必要により、初期注射後１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、１年、またはそれ以上の時点でポリペプチドまたはポリヌクレオチドを１回以上追加注射し、動物における免疫応答を保持することができる。必要により、共刺激分子またはアジュバントを組成物の前、後、または共に与えてもよい。   Administration of the polypeptide or polynucleotide can elicit an immune response in the animal that lasts for at least 1 week, 1 month, 3 months, 6 months, 1 year, or longer. If necessary, one or more additional injections of the polypeptide or polynucleotide can be made at one, three, six, one year, or longer after the initial injection to maintain an immune response in the animal. If desired, costimulatory molecules or adjuvants may be given before, after, or together with the composition.

ポリペプチド、ポリヌクレオチド、またはそれらを組み合わせたものを含有する本発明の組成物を、使用される特定の組成物に適合する方法で、ELISA等により検出される免疫応答を誘発するのに有効な量で投与する。ポリヌクレオチドを大型哺乳動物（例えばヒヒ、チンパンジー、またはヒト）に、1ng/kg、10ng/kg、100ng/kg、1000ng/kg、0.001mg/kg、0.1mg/kg、または0.5 mg/kgの用量で筋肉内注射することができる。ポリペプチドを大型哺乳動物（例えばヒト）に、0.01、0.05、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、5、または10mg/kgの用量で筋肉内注射することができる。   A composition of the invention containing a polypeptide, polynucleotide, or a combination thereof is effective to elicit an immune response that is detected by ELISA or the like in a manner that is compatible with the particular composition used. Administer by volume. A polynucleotide is administered to a large mammal (eg, baboon, chimpanzee, or human) at a dose of 1 ng / kg, 10 ng / kg, 100 ng / kg, 1000 ng / kg, 0.001 mg / kg, 0.1 mg / kg, or 0.5 mg / kg. Can be injected intramuscularly. Polypeptides can be injected intramuscularly into large mammals (eg, humans) at doses of 0.01, 0.05, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 5, or 10 mg / kg.

ポリペプチド、ポリヌクレオチド、もしくは抗体、またはその組み合わせをAaに感染していない動物、またはAa感染した動物のいずれにも投与できる。組成物中のポリヌクレオチド、ポリペプチド、または抗体の特定の用量は多くの因子に依存し、それらには、限定されるわけではないが、組成物を投与する哺乳動物の種、年齢、性別、併用する医薬品、一般的な状態、および組成物の投与方法等が含まれる。本発明の組成物の有効量は、日常的な実験のみを用いることにより容易に決定できる。   Polypeptides, polynucleotides, or antibodies, or combinations thereof can be administered to any animal not infected with Aa or animals infected with Aa. The particular dose of polynucleotide, polypeptide or antibody in the composition will depend on many factors, including but not limited to the species, age, sex, These include pharmaceuticals used in combination, general conditions, and methods of administration of the composition. An effective amount of the composition of the present invention can be readily determined by using only routine experimentation.

本発明の方法に使用する原料はキットの形態であってもよい。キットは方法に使用される１またはそれ以上の要素を含むことができる。例えば、キットは容器内に本発明の抗体を含み、別の容器内にAaポリペプチドを含むことができる。キットおよび容器にラベルを付け、キットは容器内の要素の使用説明書を含む。キットの成分は、例えば液体または凍結乾燥した形態であってもよい。   The raw material used in the method of the present invention may be in the form of a kit. The kit can include one or more elements used in the method. For example, a kit can contain an antibody of the invention in a container and an Aa polypeptide in a separate container. Label the kit and container, and the kit includes instructions for using the elements in the container. The components of the kit may be in liquid or lyophilized form, for example.

本明細書に引用する全ての文献は、参照により本明細書に組み込まれる。

All documents cited herein are hereby incorporated by reference.

【配列表】

Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
[Sequence Listing]
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586
Figure 2006519586

Claims (27)

以下からなる群から選択されるアミノ酸配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸を含有する精製免疫原性ポリペプチド：配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号20、配列番号22、配列番号24、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46、配列番号48、配列番号50、配列番号52、配列番号54、配列番号56、配列番号58、配列番号60、配列番号62、配列番号64、配列番号66、配列番号68、配列番号70、配列番号72、配列番号74、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号82、配列番号84、配列番号86、配列番号88、配列番号90、配列番号92、配列番号94、配列番号96、配列番号98、配列番号100、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号107、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号114、配列番号116、配列番号118、配列番号120、配列番号122、配列番号124、配列番号126、配列番号128、配列番号130、配列番号132、配列番号134、配列番号136、配列番号138、配列番号140、配列番号142、配列番号144、配列番号146、配列番号148、配列番号150、配列番号152、配列番号154、配列番号156、配列番号158、配列番号160、配列番号162、配列番号164、配列番号166、配列番号168、配列番号170、配列番号172、配列番号174、配列番号176、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号184、配列番号186、配列番号188、配列番号190、配列番号192、配列番号194、配列番号196、配列番号198、配列番号200、配列番号202、配列番号204、配列番号206、配列番号208、配列番号210、配列番号212、配列番号214、配列番号216、配列番号218、配列番号220、配列番号222、および配列番号224。   A purified immunogenic polypeptide containing at least 5 consecutive amino acids of an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, Sequence number 38, sequence number 40, sequence number 42, sequence number 44, sequence number 46, sequence number 48, sequence number 50, sequence number 52, sequence number 54, sequence number 56, sequence number 58, sequence number 60, sequence number 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, Sequence number 88, sequence number 90, sequence number 92, sequence number 94, sequence number 96, sequence number 98, sequence SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116 , SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 140, Sequence SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 148, SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 166 , SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 190, Sequence No. 192, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 198, SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 202 SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 208, SEQ ID NO: 210, SEQ ID NO: 212, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 222, and SEQ ID NO: 224. 以下からなる群から選択されるアミノ酸配列を含有する精製ポリペプチド：配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号14、配列番号16、配列番号18、配列番号20、配列番号22、配列番号24、配列番号26、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号38、配列番号40、配列番号42、配列番号44、配列番号46、配列番号48、配列番号50、配列番号52、配列番号54、配列番号56、配列番号58、配列番号60、配列番号62、配列番号64、配列番号66、配列番号68、配列番号70、配列番号72、配列番号74、配列番号76、配列番号78、配列番号80、配列番号82、配列番号84、配列番号86、配列番号88、配列番号90、配列番号92、配列番号94、配列番号96、配列番号98、配列番号100、配列番号102、配列番号103、配列番号104、配列番号105、配列番号107、配列番号109、配列番号110、配列番号111、配列番号112、配列番号113、配列番号114、配列番号116、配列番号118、配列番号120、配列番号122、配列番号124、配列番号126、配列番号128、配列番号130、配列番号132、配列番号134、配列番号136、配列番号138、配列番号140、配列番号142、配列番号144、配列番号146、配列番号148、配列番号150、配列番号152、配列番号154、配列番号156、配列番号158、配列番号160、配列番号162、配列番号164、配列番号166、配列番号168、配列番号170、配列番号172、配列番号174、配列番号176、配列番号178、配列番号180、配列番号182、配列番号184、配列番号186、配列番号188、配列番号190、配列番号192、配列番号194、配列番号196、配列番号198、配列番号200、配列番号202、配列番号204、配列番号206、配列番号208、配列番号210、配列番号212、配列番号214、配列番号216、配列番号218、配列番号220、配列番号222、および配列番号224。   A purified polypeptide containing an amino acid sequence selected from the group consisting of: SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, sequence SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 42 , SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 66 SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 92 , SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104 , SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 118, SEQ ID NO: 120, SEQ ID NO: 122, Sequence SEQ ID NO: 124, SEQ ID NO: 126, SEQ ID NO: 128, SEQ ID NO: 130, SEQ ID NO: 132, SEQ ID NO: 134, SEQ ID NO: 136, SEQ ID NO: 138, SEQ ID NO: 140, SEQ ID NO: 142, SEQ ID NO: 144, SEQ ID NO: 146, SEQ ID NO: 148 , SEQ ID NO: 150, SEQ ID NO: 152, SEQ ID NO: 154, SEQ ID NO: 156, SEQ ID NO: 158, SEQ ID NO: 160, SEQ ID NO: 162, SEQ ID NO: 164, SEQ ID NO: 166, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 172 SEQ ID NO: 174, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 178, SEQ ID NO: 180, SEQ ID NO: 182, SEQ ID NO: 184, SEQ ID NO: 186, SEQ ID NO: 188, SEQ ID NO: 190, SEQ ID NO: 192, SEQ ID NO: 194, SEQ ID NO: 196, SEQ ID NO: 198 , SEQ ID NO: 200, SEQ ID NO: 202, SEQ ID NO: 204, SEQ ID NO: 206, SEQ ID NO: 208, sequence Issue 210, SEQ ID NO: 212, SEQ ID NO: 214, SEQ ID NO: 216, SEQ ID NO: 218, SEQ ID NO: 220, SEQ ID NO: 222, and SEQ ID NO: 224. 請求項１記載のポリペプチドをコードする配列を含有する精製ポリヌクレオチド。   A purified polynucleotide comprising a sequence encoding the polypeptide of claim 1. 以下からなる群から選択される配列の少なくとも約１５個の連続した核酸を含有する精製ポリヌクレオチド、またはその縮重変異体：配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号71、配列番号73、配列番号75、配列番号77、配列番号79、配列番号81、配列番号83、配列番号85、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号93、配列番号95、配列番号97、配列番号99、配列番号101、配列番号106、配列番号108、配列番号115、配列番号117、配列番号119、配列番号121、配列番号123、配列番号125、配列番号127、配列番号129、配列番号131、配列番号133、配列番号135、配列番号137、配列番号139、配列番号141、配列番号143、配列番号145、配列番号147、配列番号149、配列番号151、配列番号153、配列番号155、配列番号157、配列番号159、配列番号161、配列番号163、配列番号165、配列番号167、配列番号169、配列番号171、配列番号173、配列番号175、配列番号177、配列番号179、配列番号181、配列番号183、配列番号185、配列番号187、配列番号189、配列番号191、配列番号193、配列番号195、配列番号197、配列番号199、配列番号201、配列番号203、配列番号205、配列番号207、配列番号209、配列番号211、配列番号213、配列番号215、配列番号217、配列番号219、配列番号221、および配列番号223。   A purified polynucleotide containing at least about 15 contiguous nucleic acids of a sequence selected from the group consisting of: or a degenerate variant thereof: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: No. 97, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129 , SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137, SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 153 NO.155, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: 163, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 179 , SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 187, SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 203 SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 211, SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 215, Column number 217, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 221, and SEQ ID NO: 223. 以下のヌクレオチド配列を含有する精製ポリヌクレオチド、またはその縮重変異体：配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65、配列番号67、配列番号69、配列番号71、配列番号73、配列番号75、配列番号77、配列番号79、配列番号81、配列番号83、配列番号85、配列番号87、配列番号89、配列番号91、配列番号93、配列番号95、配列番号97、配列番号99、配列番号101、配列番号106、配列番号108、配列番号115、配列番号117、配列番号119、配列番号121、配列番号123、配列番号125、配列番号127、配列番号129、配列番号131、配列番号133、配列番号135、配列番号137、配列番号139、配列番号141、配列番号143、配列番号145、配列番号147、配列番号149、配列番号151、配列番号153、配列番号155、配列番号157、配列番号159、配列番号161、配列番号163、配列番号165、配列番号167、配列番号169、配列番号171、配列番号173、配列番号175、配列番号177、配列番号179、配列番号181、配列番号183、配列番号185、配列番号187、配列番号189、配列番号191、配列番号193、配列番号195、配列番号197、配列番号199、配列番号201、配列番号203、配列番号205、配列番号207、配列番号209、配列番号211、配列番号213、配列番号215、配列番号217、配列番号219、配列番号221、および配列番号223。   A purified polynucleotide containing the following nucleotide sequence, or a degenerate variant thereof: SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 15, Sequence number 17, sequence number 19, sequence number 21, sequence number 23, sequence number 25, sequence number 27, sequence number 29, sequence number 31, sequence number 33, sequence number 35, sequence number 37, sequence number 39, sequence number 41, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 65, Sequence number 67, sequence number 69, sequence number 71, sequence number 73, sequence number 75, sequence number 77, sequence number 79, sequence number 81, sequence number 83, sequence number 85, sequence number 87, sequence number 89, sequence number 91, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 119, SEQ ID NO: 121, SEQ ID NO: 123, SEQ ID NO: 125, SEQ ID NO: 127, SEQ ID NO: 129, SEQ ID NO: 131, SEQ ID NO: 133, SEQ ID NO: 135, SEQ ID NO: 137 , SEQ ID NO: 139, SEQ ID NO: 141, SEQ ID NO: 143, SEQ ID NO: 145, SEQ ID NO: 147, SEQ ID NO: 149, SEQ ID NO: 151, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 155, SEQ ID NO: 157, SEQ ID NO: 159, SEQ ID NO: 161, SEQ ID NO: NO.163, SEQ ID NO: 165, SEQ ID NO: 167, SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 171, SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 175, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 179, SEQ ID NO: 181, SEQ ID NO: 183, SEQ ID NO: 185, SEQ ID NO: 187 , SEQ ID NO: 189, SEQ ID NO: 191, SEQ ID NO: 193, SEQ ID NO: 195, SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 199, SEQ ID NO: 201, SEQ ID NO: 203, SEQ ID NO: 205, SEQ ID NO: 207, SEQ ID NO: 209, SEQ ID NO: 211, Sequence SEQ ID NO: 213, SEQ ID NO: 215, SEQ ID NO: 217, SEQ ID NO: 219, SEQ ID NO: 221, and SEQ ID NO: Number 223. 発現制御配列に動作可能なように連結された請求項４記載のポリヌクレオチドを含有する発現ベクター。   An expression vector comprising the polynucleotide of claim 4 operably linked to an expression control sequence. 請求項６記載のベクターを含有する培養細胞。   A cultured cell containing the vector according to claim 6. ポリヌクレオチドが発現制御配列に動作可能なように連結されている、請求項４記載のポリヌクレオチドを含有する培養細胞。   The cultured cell containing the polynucleotide of claim 4, wherein the polynucleotide is operably linked to an expression control sequence. 請求項１記載のポリペプチドに特異的に結合する抗体またはそのフラグメント。   An antibody or fragment thereof that specifically binds to the polypeptide of claim 1. フラグメントがFabおよびF(ab')2からなる群から選択される、請求項９記載の抗体またはそのフラグメント。 The antibody or fragment thereof according to claim 9, wherein the fragment is selected from the group consisting of Fab and F (ab ') 2 . 抗体がモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体である、請求項９記載の抗体。   The antibody according to claim 9, wherein the antibody is a monoclonal antibody or a polyclonal antibody. 請求項９記載の抗体および医薬的に許容されるキャリアーを含有する組成物。   A composition comprising the antibody of claim 9 and a pharmaceutically acceptable carrier. A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病を治療、改善、または予防する方法であって、請求項９記載の抗体またはそのフラグメントを動物に投与し、それによってA.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病を治療、改善、または予防することを含む上記方法。   A method for treating, ameliorating or preventing a disease caused by A. actinomycetemcomitans, comprising administering the antibody or fragment thereof according to claim 9 to an animal, thereby causing the disease caused by A. actinomycetemcomitans. The method comprising treating, ameliorating, or preventing a disease that occurs. 疾病が局所性思春期前歯周炎、汎発性思春期前歯周炎、局所性若年性歯周炎、汎発性若年性歯周炎、急速進行性成人歯周炎、抗療性成人歯周炎、心内膜炎、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎からなる群から選択される、請求項１３記載の方法。   Disease is local prepubertal periodontitis, generalized prepubertal periodontitis, local juvenile periodontitis, generalized juvenile periodontitis, rapidly progressive adult periodontitis, refractory adult periodontitis 14. The method of claim 13, selected from the group consisting of inflammation, endocarditis, thyroid abscess, urinary tract infection, brain abscess, and vertebral osteomyelitis. 試験サンプル中のA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原の存在を検出する方法であって、
試験サンプルを、A.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原に特異的に結合する請求項９記載の抗体と、抗体とA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原との間の免疫複合体の生成が可能な条件下で接触させ；そして
免疫複合体を検出する、
ことを含み、ここで、免疫複合体の検出は試験サンプル中のA.アクチノミセテムコミタンスまたはA.アクチノミセテムコミタンス抗原の存在を示す、上記方法。 A method for detecting the presence of A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans antigen in a test sample, comprising:
10. The antibody of claim 9, wherein the test sample specifically binds to A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans antigen, and the antibody and A. actinomycetemcomitans or A. Contacting under conditions that allow the formation of an immune complex between the tantalum antigen; and detecting the immune complex;
Wherein the detection of the immune complex indicates the presence of A. actinomycetemcomitans or A. actinomycetemcomitans antigen in the test sample. A.アクチノミセテムコミタンス抗原が動物感染の際にインビボで発現される、請求項１５記載の方法。   16. The method of claim 15, wherein the A. actinomycetemcomitans antigen is expressed in vivo upon animal infection. 請求項１記載のポリペプチドおよび医薬的に許容されるキャリアーを含有する医薬組成物。   A pharmaceutical composition comprising the polypeptide of claim 1 and a pharmaceutically acceptable carrier. 動物に請求項１記載の精製ポリペプチドを投与して免疫応答を誘発することを含む、免疫応答を誘発する方法。   A method for inducing an immune response comprising administering to the animal a purified polypeptide according to claim 1 to elicit an immune response. A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病または感染を治療、予防、または改善する方法であって、請求項１記載の精製ポリペプチドを動物に投与して疾病または感染を治療、予防、または改善することを含む上記方法。   A. A method for treating, preventing or ameliorating a disease or infection caused by Actinomycetemcomitans, wherein the purified polypeptide according to claim 1 is administered to an animal to treat, prevent or ameliorate the disease or infection. The above method comprising: 疾病が、局所性思春期前歯周炎、汎発性思春期前歯周炎、局所性若年性歯周炎、汎発性若年性歯周炎、急速進行性成人歯周炎、抗療性成人歯周炎、心内膜炎、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎からなる群から選択される、請求項１９記載の方法。   Disease is local prepubertal periodontitis, generalized prepubertal periodontitis, local juvenile periodontitis, generalized juvenile periodontitis, rapidly progressive adult periodontitis, refractory adult tooth 20. The method of claim 19, wherein the method is selected from the group consisting of peritonitis, endocarditis, thyroid abscess, urinary tract infection, brain abscess, and vertebral osteomyelitis. 請求項４記載のポリヌクレオチドおよび医薬的に許容されるキャリアーを含有する組成物。   A composition comprising the polynucleotide of claim 4 and a pharmaceutically acceptable carrier. ポリヌクレオチドがDNAである、請求項２１記載の組成物。   24. The composition of claim 21, wherein the polynucleotide is DNA. ポリヌクレオチドがプラスミド中に存在する、請求項２１記載の組成物。   24. The composition of claim 21, wherein the polynucleotide is present in a plasmid. 請求項４記載の精製ポリヌクレオチドを動物に投与して免疫応答を誘発することを含む、免疫応答を誘発する方法。   A method of inducing an immune response comprising administering the purified polynucleotide of claim 4 to an animal to elicit an immune response. A.アクチノミセテムコミタンスに起因する疾病または感染を治療、予防、または改善する方法であって、請求項４記載の精製ポリヌクレオチドを動物に投与して、疾病または感染を治療、予防、または改善する上記方法。   A. A method for treating, preventing or ameliorating a disease or infection caused by Actinomycetemcomitans, wherein the purified polynucleotide according to claim 4 is administered to an animal to treat, prevent or prevent the disease or infection. The above method to improve. 疾病が局所性思春期前歯周炎、汎発性思春期前歯周炎、局所性若年性歯周炎、汎発性若年性歯周炎、急速進行性成人歯周炎、抗療性成人歯周炎、心内膜炎、甲状腺膿瘍、尿路感染症、脳膿瘍、および椎骨髄炎からなる群から選択される、請求項２５記載の方法。   Disease is local prepubertal periodontitis, generalized prepubertal periodontitis, local juvenile periodontitis, generalized juvenile periodontitis, rapidly progressive adult periodontitis, refractory adult periodontitis 26. The method of claim 25, selected from the group consisting of inflammation, endocarditis, thyroid abscess, urinary tract infection, brain abscess, and vertebral osteomyelitis. 試験サンプル中の第１のA.アクチノミセテムコミタンス・ポリヌクレオチドの存在を同定する方法であって、
第１のポリヌクレオチドを含有する疑いのある試験サンプルを第２のポリヌクレオチドとハイブリダイゼーション条件下で接触させ、ここで、第２のポリヌクレオチドは請求項４記載のポリヌクレオチドであり；そして
ハイブリダイズした第１および第２のポリヌクレオチドの複合体を検出する、
ことを含み、ここで、ハイブリダイズした第１および第２のポリヌクレオチドの存在は試験サンプル中の第１のポリヌクレオチドの存在を示す、上記方法。


A method for identifying the presence of a first A. actinomycetemcomitans polynucleotide in a test sample comprising:
A test sample suspected of containing a first polynucleotide is contacted with a second polynucleotide under hybridization conditions, wherein the second polynucleotide is the polynucleotide of claim 4; and hybridizes Detecting a complex of the first and second polynucleotides,
Wherein the presence of hybridized first and second polynucleotides indicates the presence of the first polynucleotide in the test sample.


JP2004553443A 2002-11-20 2003-10-15 Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans antigen for diagnosis, treatment and monitoring of periodontal disease Pending JP2006519586A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/US2002/037235 WO2003068146A2 (en) 2001-11-28 2002-11-20 Identification of actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases
PCT/US2003/032645 WO2004045499A2 (en) 2002-11-20 2003-10-15 Identification of actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2006519586A true JP2006519586A (en) 2006-08-31
JP2006519586A5 JP2006519586A5 (en) 2006-11-30

Family

ID=36991146

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2004553443A Pending JP2006519586A (en) 2002-11-20 2003-10-15 Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans antigen for diagnosis, treatment and monitoring of periodontal disease

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2006519586A (en)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001011081A2 (en) * 1999-08-06 2001-02-15 Ivigene Corporation Microbial polynucleotides expressed during infection of a host
WO2002077183A2 (en) * 2001-03-21 2002-10-03 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
WO2003068146A2 (en) * 2001-11-28 2003-08-21 University Of Florida Identification of actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001011081A2 (en) * 1999-08-06 2001-02-15 Ivigene Corporation Microbial polynucleotides expressed during infection of a host
WO2002077183A2 (en) * 2001-03-21 2002-10-03 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
WO2003068146A2 (en) * 2001-11-28 2003-08-21 University Of Florida Identification of actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
INFECT.IMMUN.,2001,69(9),P.5925-30, JPN6009039387, ISSN: 0001386397 *
MICROBIOL.IMMUNOL.,2001,45(10),P.721-7, JPN6009039385, ISSN: 0001386396 *
TRENDS MICROBIOL.,2000,8(7),P.336-9, JPN6009039383, ISSN: 0001386395 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6688767B2 (en) Compositions and methods for detecting antibodies specific for Anaplasma phagocytofilm (Aph) and Anaplasma platys (Apl)
JP2015071607A (en) Methods and compositions for detection of ehrlichia chaffeensis (vlpt)
JP2007529195A (en) Identification of Porphyromonas gingivalis toxic polynucleotides for diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal disease
US8420340B2 (en) Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases
US10022458B2 (en) Animal model protocol, diagnostic, therapeutic and vaccine against digital dermatitis
WO2004045499A2 (en) Identification of actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases
JP2006519586A (en) Identification of Actinobacillus actinomycetemcomitans antigen for diagnosis, treatment and monitoring of periodontal disease
US7838259B2 (en) Genes of Porphyromonas gingivalis W83 involved in invasion of human cells
AU2003284869A1 (en) Identification of actinobacillus actinomycetemcomitans antigens for use in the diagnosis, treatment, and monitoring of periodontal diseases

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20061013

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20061013

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20090804

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20100105