JP2006508904A

JP2006508904A - βシート破壊ペプチド

Info

Publication number: JP2006508904A
Application number: JP2004518784A
Authority: JP
Inventors: ソト−ジャラ，クラウディオ; アデッシ，セリーヌ; ハラジー，セルジュ; リュクル，トーマス
Original assignee: アプライドリサーチシステムズエーアールエスホールディングナームロゼフェンノートシャップ
Priority date: 2002-07-08
Filing date: 2003-07-07
Publication date: 2006-03-16
Also published as: NO20050436L; NO20050436D0; CA2489754A1; WO2004005336A2; AU2003271745A1; EP1532170A2; IL166102A0; WO2004005336A3

Abstract

アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆などの疾患の治療および予防に有用な、βシート破壊活性を有するペプチドが提供される。

Description

本発明は、βシート破壊ペプチドの分野、特に、アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆などの疾患の治療におけるβシート破壊ペプチドの使用に関する。

アルツハイマー病（ＡＤ）は、１９０７年にバイエルンの精神科医アロイス・アルツハイマー（ＡｌｏｉｓＡｌｚｈｅｉｍｅｒ）によって初めて報告され、短期の記憶喪失から始まり、認知機能および行動の進行性の低下を特徴とする進行性神経疾患である。疾患の進行は、失見当識、判断、推理、注意、および会話の欠陥につながり、最終的に痴呆に至る。通常、疾患が経過すると、発症して４年〜１２年後に、ひどく衰弱して動けない状態になり死に至る。ＡＤは、６５歳超の人口の５〜１１％、８５歳超の人口の４７％もの多くの人を苦しめていると見積もられている。主に、ＡＤ患者に必要とされる大掛かりな介護のために、ＡＤの社会的管理費用は非常に高い。ＡＤの生理病理学の理解を目的とした不断の努力にもかかわらず、疾患の進行を大きく遅らせる治療法は現在ない。

病理学的には、ＡＤは犠牲者の脳に独特の病変が存在することを特徴とし、これは剖検時に明らかになる。これらの脳病変として、神経原線維変化（ＮＴＦ）と呼ばれる異常な細胞内微細線維および老人斑すなわちアミロイド斑に含まれるアミロイド形成タンパク質の細胞外沈着物が挙げられる。アミロイド沈着物はＡＤ患者の脳血管壁にも存在する。アミロイド斑の主なタンパク質成分は、β−アミロイドペプチド（Ａβ）と呼ばれる４．３キロダルトンのペプチドであることが確認されている¹。散在性のＡβ沈着物は正常な成人脳において頻繁に観察されるが、ＡＤ脳組織は、さらに密集した有芯のβアミロイド斑を特徴とする²。これらの観察は、Ａβの沈着がＡＤにおいて生じるニューロン破壊より前に起こり、ニューロン破壊の一因となることを示唆している³。Ａβが発病に直接役割を果たすさらなる裏づけとして、β−アミロイドが成熟ニューロン（培養およびインビボ）に対して毒性であることが示されている⁴。

大脳皮質および脳血管内の散在性のβ−アミロイド沈着物を特徴とする、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）の患者には、Ａβのアミノ酸置換につながる点変異があることが分かっている⁵。

Ａβはまた、アミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆⁶および拳闘家痴呆⁷にも関与している。

天然のＡβは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）と呼ばれる非常に大きなタンパク質からタンパク質分解されることによって生成される⁸。ＡＰＰ遺伝子は２１番染色体に位置する。これは、（２１番染色体のトリソミーにより引き起こされる）ダウン症候群の個体において早期に見られるβ−アミロイド沈着の説明となる⁹。

ＡＰＰのタンパク質分解により生じた天然のＡβは、カルボキシル末端の箇所に応じて長さが３９〜４３個のアミノ酸残基であり、異なる成分が混じっている。ＡＤ患者および正常成人の血液および脳脊髄液に含まれる最も優勢なＡβ循環形態はＡβ１−４０である¹⁰。しかしながら、Ａβ_1-42およびＡβ_1-43もβ−アミロイド斑に見られる¹¹。

Ａβの病原性はタンパク質コンホメーションの変化に起因するという多くの証拠が蓄積している¹²。アルツハイマー病、アミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆、およびＨＣＨＷＡ−Ｄにおける病態につながる重要な事象は、非病原性天然タンパク質の病原性形態への再折り畳みであると考えられている。再折り畳みは、タンパク質の一次構造を変えることなく二次構造および三次構造を変化させる。

アミロイドは、共通の構造モチーフ：βプリーツシートコンホメーションを有する線維凝集体に用いられる総称である¹³。これらの凝集体は、コンゴレッド染色後に緑色の複屈折光を発する能力および蛍光色素チオフラビン（Ｔｈｉｏｆｌａｖｉｎ）Ｓに結合する能力を含む特殊な染色性を示す¹⁴。これらの染色性は、β−アミロイド沈着物を検出するのに用いられるアッセイの基礎をなしている。

アルツハイマー病の治療および予防の１つのアプローチが、アミロイド形成に関与すると考えられる天然タンパク質配列とある程度の配列相同性を有するが、βプリーツシートコンホメーションの形成に好ましくない、またはβプリーツシートコンホメーションの形成を不安定にする１個以上のアミノ酸も有する短いペプチドを開発することであった¹⁵。このようなペプチドはβ−アミロイドの凝集を阻止し、それにより、その細胞傷害作用を阻止する。このアプローチはアルツハイマー病およびプリオン関連疾患において示唆されており^16、17、特に、以下に示すβシート破壊ペプチドにつながった。

米国特許第６，３１９，４９８号明細書（プリーシス・ファーマシューティカルズ（ＰｒａｅｃｉｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））はＡβに基づくβシート破壊ペプチドを提案し、アミノ末端ビオチン化ペプチドを例示している。米国特許第６，３０３，５６７号明細書（プリーシス・ファーマシューティカルズ）は、βシート破壊ペプチドとして、β−アミロイドペプチドに基づくが全てＤ−アミノ酸からなるペプチドを提案している。

β鎖会合を阻止するために、β鎖を形成するペプチドのβ鎖形成部分を含み、それ自体で標的β鎖と会合するペプチドも提案されている。ここで、ペプチドのβ鎖形成部分は少なくとも４個の連続したα−Ｌ−アミノ酸の配列を含み、これらのアミノ酸の全てが、ペプチドのβ鎖形成部分がβ鎖を形成するのを立体的に許容し、これらの少なくとも１つはＮα置換α−Ｌ−アミノ酸残基であり、任意の２個の連続したＮα置換α−Ｌ−アミノ酸残基は、奇数個の連続したＮα置換α−Ｌ−アミノ酸残基により分けられる¹⁸。あるいは、短いβ鎖とＮ−メチルアミノ酸を交互に含み、Ｎ−α−アセチル化アミノ酸を含む、または含まないペプチドも、線維形成を阻害するために開発されている¹⁹。

既知のβシート破壊ペプチドは価値のある情報を提供し、アルツハイマー病の治療に有用であり得るが、天然ペプチドが消化管、肝臓、および循環内で分解され、急速に代謝されるために、ペプチド薬の開発はかなり限られている。さらに、多くのアミロイド関連疾患の治療に望ましい作用部位は脳であり、他の多くの分子と同様にペプチドは血液脳関門を通り抜けるのが難しいことがある。脳自体もペプチド分子を分解するペプチダーゼで満たされている。

本発明の目的は、薬理学的特性が改善されたβシート破壊ペプチドを提供することである。

第１の態様において、本発明は、
一般式Ｉ：

（式中、
Ｒ¹は、Ｈおよび任意に置換されるＣ₂−Ｃ₆−アシル（好ましくは、アセチル）から選択され；
Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵は、独立して、Ｈおよび任意に置換されるＣ₁−Ｃ₆−アルキルから選択され、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵のうち少なくとも１つは、任意に置換されるＣ₁−Ｃ₆−アルキル（好ましくは、メチル）であり；
Ｒ⁶は、ＯＨおよびＮＲ⁷Ｒ⁸から選択され、Ｒ⁷およびＲ⁸は、独立して、Ｈおよび任意に置換されるＣ₁−Ｃ₆−アルキル（好ましくは、ＮＨ₂）である）の化合物；
ならびにその塩およびトリチウム化された誘導体を提供する。

第２の態様において、本発明は、医薬品として使用するための式Ｉの化合物を提供する。

第３の態様において、本発明は、式Ｉの化合物と薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む薬学的組成物を提供する。

第４の態様において、本発明は、アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆から選択される疾患または状態を治療または予防するための医薬品を調製するための式Ｉの化合物の使用を提供する。

第５の態様において、本発明は、アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆から選択される疾患または状態を治療または予防するための式Ｉの化合物の使用を提供する。

第６の態様において、本発明は、アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆を治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物を、治療を必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。

第７の態様において、本発明は、アミロイドおよびアミロイド様沈着物への異常なタンパク質の折り畳みに関連した疾患を治療するための医薬品を調製するための式Ｉの化合物の使用を提供する。

第８の態様において、本発明は、アミロイドおよびアミロイド様沈着物への異常なタンパク質の折り畳みに関連した疾患を治療するための式Ｉの化合物の使用を提供する。

第９の態様において、本発明は、アミロイドおよびアミロイド様沈着物への異常なタンパク質の折り畳みに関連した疾患を治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物を、治療を必要とする患者に投与することを含む方法を提供する。

本発明の化合物は、既知のβシート破壊ペプチドより薬理学的特性が改善されたβシート破壊ペプチドである。

βシート破壊活性は、例えば、サトウ（Ｓｏｔｏ）ら¹⁴により述べられたような、試験化合物がアミロイド線維形成を阻止する能力を測定するｉｎｖｉｔｒｏアッセイを用いて検出することができる。

アミロイド線維は細胞傷害性であり、アポトーシスにより細胞死を誘導する²⁰。本発明の化合物は、アミロイド線維により誘導される細胞死を阻止する能力について試験することができる。結果を実施例に報告する。

薬理学的特性が改善された化合物はｉｎｖｉｔｒｏ活性が増大した化合物と考えられる。ｉｎｖｉｔｒｏ活性の増大は、本明細書に記載のｉｎｖｉｔｒｏアッセイのいずれか、または両方（既知化合物と比較した、血漿および／もしくは脳ホモジネート中での安定性の増大、またはｉｎｖｉｖｏでのラット脳におけるアミロイド沈着を阻止する能力の増大）により測定される。「改善された」は、これらのパラメータのいずれか１つの増大、または２つ以上の増大を示す化合物を含む。好ましくは、改善は統計的に有意な改善であり、好ましくは、確率値が＜０．０５の改善である。結果の統計学的有意性を求める方法は周知であり、当該技術分野の文献および任意の適切な方法を使用することができる。

式Ｉの化合物の好ましい群において、Ｒ¹は、ホルミル、アセチル、プロピオノイル、およびブチロイルから選択される。特に好ましくは、Ｒ¹はアセチルである。

式Ｉの化合物の別の好ましい群において、Ｒ⁶はＮＨＭｅまたはＮＨ₂であり、特に好ましくは、ＮＨ₂である。

本発明の特定の実施態様は、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵がＨ、メチル、およびエチルから選択され、特に好ましくはＨおよびメチルであり、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵のうち少なくとも１つがメチルおよびエチルから選択され、好ましくはメチルである式Ｉの化合物を含む。

式Ｉの化合物の特に好ましい群において、Ｒ³はメチルであり、Ｒ²はＨであり、Ｒ⁴およびＲ⁵はＨ、メチルから選択される。

化合物の別の特に好ましい群において、Ｒ³はメチルであり、Ｒ²、Ｒ⁴、およびＲ⁵はＨである。

別の特に好ましい実施態様において、全てのα−炭素原子における立体化学配置はＬである。

本発明の化合物は塩として単離および精製されてもよい。このような塩は本発明の範囲内である。患者への投与のために、塩は薬学的に許容可能であることが望ましい。

「Ｃ₁−Ｃ₆−アルキル」は、１〜６個の炭素原子を有する一価の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基を意味する。この用語の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどの基である。

「Ｃ₁−Ｃ₅−アルキル」は、１〜５個の炭素原子を有する一価の分枝鎖または非分枝鎖アルキル基を意味する。この用語の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチルなどの基である。

「Ｃ₂−Ｃ₆−アシル」は基−Ｃ（Ｏ）Ｒを意味する。Ｒは「Ｃ₁−Ｃ₅−アルキル」基を含む。この用語の例は、ホルミル、アセチル、プロピオノイル、およびブチロイルなどの基である。

「薬学的に許容可能な塩」は、望ましい生物学的活性を保持する式Ｉの化合物の塩を意味する。このような塩の例として、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）を用いて形成された酸添加塩、ならびに有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモ酸（ｐａｍｏｉｃａｃｉｄ）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、およびポリガラクツロン酸）を用いて形成された塩が挙げられるが、これに限定されない。このような化合物はまた、当業者に周知の薬学的に許容可能な第４級塩として投与することもできる。第４級塩として、特に、式−ＮＲ，Ｒ’，Ｒ’’⁺Ｚ^-の第４級アンモニウム塩が挙げられる。式中、Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’は、独立して、水素、アルキル、またはベンジルであり、Ｚは、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、アルコキシド、トルエンスルホン酸イオン、メチルスルホン酸イオン、スルホン酸イオン、リン酸イオン、またはカルボン酸イオン（例えば、安息香酸イオン、コハク酸イオン、酢酸イオン、グリコール酸イオン、マレイン酸イオン、リンゴ酸イオン、フマル酸イオン、クエン酸イオン、酒石酸イオン、アスコルビン酸イオン、桂皮酸イオン、マンデル酸イオン、およびジフェニル酸イオン）を含む対イオンである。

本発明の化合物が医薬品として用いられる場合、一般的に、薬学的組成物の形で投与される。このような組成物は、医薬品分野で周知のやり方で調製することができ、少なくとも１つの活性化合物を含む。一般的に、本発明の化合物は薬学的に有効な量で投与される。一般的に、実際に投与される化合物の量は、治療される状態、選択された投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重篤度などを含む関連する状況を考慮して医師により決定される。

発明の薬学的組成物は、経口経路、直腸経路、経皮経路、くも膜下経路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路、および鼻腔内経路を含む様々な経路によって投与することができる。好ましくは、本発明の化合物は、皮下、筋肉内、または静脈内の注射または注入によって投与される。

本発明の好ましい実施態様において、本発明の化合物は、血液脳関門（「ＢＢＢ」）の通過を促進するペプチドまたはタンパク質である担体分子と融合される。ＣＮＳが疾患に関与する場合、これは、作用部位への分子の適切な標的化に役立つ。ＢＢＢを通過する薬物送達法は、浸透圧手段による、または生化学的にはブラジキニンなどの血管作用物質の使用によるＢＢＢの混乱を必要とする。ＢＢＢを通過する他の方法は、受動的拡散の使用および内因性の輸送系（グルコース担体およびアミノ酸担体などの担体を介する輸送体；受容体を介したインシュリンまたはトランスフェリンのトランスサイトーシス；吸着を介したトランスサイトーシスを含む）の使用を伴うことがある。ＢＢＢを通過する薬物送達法として、さらに、脳内移植が挙げられる。

目的の送達経路に応じて、化合物は注射用組成物または経口組成物として処方することができる。経口投与用の組成物は原薬液体溶液もしくは懸濁液または原薬粉末の形をとることができる。しかしながら、より一般的には、組成物は、正確な投薬を容易にするために単位剤形の形で提供される。用語「単位剤形」は、ヒト被験者および他の哺乳動物への単位投与に適した物理的に分かれている単位を意味する。それぞれの単位は、適切な薬学的賦形剤と共同して望ましい治療効果を生じるように計算された予め決められた量の活性物質を含む。一般的な単位剤形として、液体組成物の予め充填され予め測定されたアンプルもしくはシリンジ、または固体組成物の場合、丸剤、錠剤、カプセルなどが挙げられる。このような組成物において、本発明の化合物は、少ない方の成分（約０．１〜約５０重量％または好ましくは約１〜約４０重量％）であり、残りの成分は、望ましい剤形の形成に役立つ様々なビヒクルまたは担体および加工助剤である。

経口投与に適した液体剤形は、緩衝液、懸濁剤および分散剤、着色剤、フレーバーなどを含む適切な水性または非水性ビヒクルを含んでもよい。固体剤形は、例えば、以下の任意の成分：結合剤（例えば、結晶セルロース、トラガカントゴム、もしくはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンもしくはラクトース）；崩壊剤（例えば、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）、もしくはトウモロコシデンプン）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム）；流動促進剤（ｇｌｉｄａｎｔ）（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースもしくはサッカリン）；または着香剤（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、もしくはオレンジフレーバー）、あるいは類似の性質の化合物を含んでもよい。

注射用組成物は、一般的に、注射可能な滅菌した生理食塩水もしくはリン酸緩衝食塩水または当該技術分野で周知の他の注射可能な担体に基づいている。経口投与組成物または注射用組成物の前記の成分は単なる例示である。さらなる材料ならびに加工法などは当業者に周知である２１。本発明の化合物はまた、徐放性形態で、または徐放性薬物送達システムから投与することもできる。代表的な徐放性材料の説明も当業者に周知である^22、23、24。

本発明の化合物は、アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆の発症および進行に関連するＡβの凝集を阻止する。化合物の使用の好ましい方法において、化合物の投与は定期的な注射または注入によるものである。本発明の化合物の投与は、好ましくは、患者において任意の症状が検出される前に開始すべきであり、その後に継続すべきである。アルツハイマー病、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆を発症するリスクの高い患者として、これらの疾患の家族歴がある患者が挙げられる。

本発明のなおさらなる態様は式Ｉの化合物を調製するプロセスである。本発明の化合物は、以下の一般的な方法および手順を用いて、容易に入手可能な出発材料から調製することができる。代表的な、または好ましい実験条件（すなわち、反応温度、時間、試薬のモル、溶媒など）が示されている場合、特に指定のない限り、他の実験条件も使用できることが理解されるだろう。最適の反応条件は、使用される特定の反応物または溶媒によって変化することがあるが、当業者は、このような条件を日常的な最適化手順によって決定することができる。

本発明の化合物は、当業者に周知のペプチド合成法を用いて調製することができる²⁵。好ましい実施態様において、本発明の化合物は固相法を用いて合成される。

本発明の化合物に向かう好ましい経路をスキーム１に示し、特定の例を以下の実施例に示す。

略語：
以下の略語を下記の添付の実施例において使用する。
ｍｉｎ（分）、ｈｒ（時間）、ｇ（グラム）、ｍｇ（ミリグラム）、ｍｍｏｌ（ミリモル）、ｅｑ（当量）、ｍｌ（ミリリットル）、μｌ（マイクロリットル）、ｍｍ（ミリメートル）、ｎｍ（ナノメートル）、μｍ（マイクロメートル）、Å（オングストローム）、ｃｐｍ（カウント毎分）、Ｃｉ（キュリー）、ｉ．ｖ．（静脈内）、ＡＣＮ（アセトニトリル）、ＢＢＢ（血液脳関門）、ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ（ｏｘｃｙ）−ｔｒｉｓ−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＢＯＰ−Ｃｌ（塩化ビス（２−オキソ−３−オキサゾルジニル（ｏｘａｚｏｌｄｉｎｙｌ））ホスフィン酸）、Ｂｏｃ（ブトキシカルボニル）、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）、Ｃｂｚ（カルボキシベンジル）、ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＩＣ（ジイソプロピルカルボジイミド）、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノ−ピリジン）、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）、ＥＤＣ（塩酸塩１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジイミド）、ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）、Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）、ＨＡＴＵ（０−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸）、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ｒｔ（室温）、ＭＴＴ（臭化３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム）、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）、ＰｙＢＯＰ（ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノ−ホスホニウム）、ＰｙＢｒｏｐ（ヘキサフルオロリン酸ブロモ−ｔｒｉｓ−ピロリジノ−ホスホニウム）、ＴＢＴＵ（テトラフルオロホウ酸Ｏ−ベンゾトリアゾールイル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウム）、ＴＥＡ（トリエチルアミン）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）、ＴｈＴ（チオフラビンＴ）。

ペプチド配列中のＮ（Ｍｅ）は、アミノ酸のＮ原子上で分枝しているメチル基を意味する。

本発明の化合物の合成：
式Ｉの化合物は容易に入手可能な出発材料から調製することができる。合成経路の例を以下に説明する。

一般的なプロトコール：
一般式Ｉ（式中のＲ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵は前記で定義されている）のペンタペプチドの調製に好ましい経路をスキーム１に示す。
スキーム１：

好ましい実施態様において、式（Ｉ）のペプチドは、例えば、好ましいリンク−アミド（Ｒｉｎｋ−Ａｍｉｄｅ）樹脂を用いて固体支持体上で合成することができる。

一般的に、樹脂は、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、およびもう一度ＤＣＭで３回洗浄される。

ａ）樹脂脱保護ステップ：
樹脂からＦｍｏｃ保護基を除去するために、ＤＭＦに溶解したピペリジン溶液（２０〜５０％）を加える。このような溶液中で、樹脂を穏やかに３０分間〜１時間振盪する。排水後、樹脂を、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、およびもう一度ＤＣＭでそれぞれ３回洗浄する。

ｂ）結合ステップ：
Ｆｍｏｃ−アスパラギン酸（β−Ｏ−ｔ−ブチル）の溶液および樹脂を、１．５当量の結合試薬（例えば、ＰｙＢＯＰ、ＴＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＰｙＢｒｏｐ、ＢＯＰ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ、好ましくはＨＡＴＵ）および３当量の第３級塩基（例えば、ＮＭＰ、トリエチルアミン、ジイソプロピル−エチルアミン）または同様のｐＫａを有する任意の第３級塩基（好ましくは、ジイソプロピルエチルアミン）と共に振盪する。２５〜４０℃で２〜１５時間後、樹脂を排水し、ＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、およびもう一度ＤＣＭで３回洗浄する。

残りの４つのアミノ酸については、式（ＩＩ）の適切なＦｍｏｃ保護アミノ酸を用いて、前記と同じやり方で脱保護ステップおよび結合ステップ（スキームＩ、結合サイクル２〜５）を連続して行って、式（ＩＩＩ）の樹脂結合化合物を得る。

５回目のＦｍｏｃ−アミノ酸結合ステップの後、基Ｒ¹を以下のように導入する。

ｃ）Ｒ¹の導入：
脱保護ステップにおいてＦｍｏｃ部分を前記式（ＩＩＩ）の化合物から除去し、基Ｒ¹を導入する。

Ｒ¹が非置換アシル基である式Ｉの化合物の場合（スキーム２）、新たに調製した、ピリジンに溶解したＲ¹ＣＯＣｌ溶液（２０当量）を、樹脂結合化合物（式ＩＩＩの化合物）と共に２５〜４０℃で２〜２０時間振盪する（スキーム２）。切断ステップにまわす前に、樹脂をＤＣＭ、ＤＭＦ、ＴＨＦ、およびもう一度ＤＣＭで３回、徹底的に洗浄する。Ｒ¹部分が存在する、結果として生じた化合物を式（ＩＶ）と示す。

スキーム２：

ｄ）切断ステップ：
新たに調製した、ＤＣＭに溶解した９５％ＴＦＡ溶液を樹脂と共に室温で１〜４時間振盪する。これにより、化合物はＣ末端アミドとして樹脂から切断され、ＴＦＡ感受性保護基は除去される。溶液を集め、処理を２回繰り返す。溶液を集め、乾燥するまで蒸発させる。式（Ｉ）の粗化合物を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣで精製する。

トリチウム化プロトコール：
ステップ４において３，４−デヒドロ−プロリン残基を結合する以下の一般的なプロトコールに従って、式Ｉの化合物のトリチウム化された誘導体を調製することができる。

トリチウム化容器内で、デヒドロ−Ｐｒｏペプチド（２ｍｇ）を１０％パラジウム−炭酸カルシウム（１０ｍｇ）およびＤＭＦ（１ｍｌ）と混合する。混合物をトリチウムガス（５Ｃｉ）の下で３時間攪拌する。溶液を濾過し、エタノールを用いて乾燥するまで蒸発を繰り返すことによって不安定なトリチウムを除去する。

以下のシステム：水：アセトニトリル：ＴＦＡ勾配系を用いたバイダック（Ｖｙｄａｃ）Ｃ１８プロテインアンドペプチド（ＰｒｏｔｅｉｎａｎｄＰｅｐｔｉｄｅ）カラム（２５０×９．６ｍｍ）での高速液体クロマトグラフィーによって、粗反応混合物を精製した。検出は放射能検出器およびＵＶ検出器（２２０ｎｍ）によって行う。生成物を集め、乾燥するまで蒸発させ、調剤用溶離剤（ｄｉｓｐｅｎｓｉｎｇｅｌｕｅｎｔ）に再溶解する。

もう一方の精製は以下のように行う。プレップノバパック（ＰｒｅｐＮｏｖａ−Ｐａｋ）（登録商標）ＨＲＣ１８カラム６μｍ６０Å、４０×３０ｍｍ（１００ｍｇまで）または４０×３００ｍｍ（１ｇまで）を備える分取ＨＰＬＣウォーターズプレップ（ＷａｔｅｒｓＰｒｅｐ）ＬＣ４０００システム。精製は全て、ＭｅＣＮ／Ｈ₂Ｏ０．０９％ＴＦＡの勾配を用いて行った。

以下の基本要素：Ｆｍｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−（β−ＯｔＢｕ）−Ｌ−アスパラギン酸、Ｆｍｏｃ−Ｌ−ロイシン、Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリン、Ｆｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−フェニルアラニン、Ｆｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−（ＯｔＢｕ）−Ｌ−アスパラギン酸、Ｆｍｏｃ−Ｎ−Ｍｅ−Ｌ−ロイシンは、スイスのバケム（Ｂａｃｈｅｍ）から市販されている。

結合試薬は、スイスのノババイオケム（Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ）から市販されている。

一般的に、一般式（Ｉ）のペプチド誘導体は、標準的なペプチド合成法を用いて溶液中で、または固相において合成することができる。両アプローチとも、当業者に周知の一般的な結合試薬が用いられる。

一般的な、または好ましい実験条件（すなわち、反応温度、時間、試薬のモル、溶媒など）が示されている場合、特に指定のない限り、他の実験条件も使用できることが理解されるだろう。最適の反応条件は、使用される特定の反応物または溶媒によって変化することがあるが、当業者はこのような条件を理解するだろう。

実施例１〜７の化合物は本発明の好ましい実施態様である。実施例１〜６の化合物の構造を以下の表１に示す。

実施例１、２、３、４、５、および６の化合物は、スキーム１に示したプロトコールに従って合成することができる。

実施例７の化合物は実施例１のトリチウム化化合物を表している。これは、スキーム１に示したプロトコールに従い、ステップ４においてプロリンの代わりに３，４−デヒドロ−プロリンアミノ酸を使用して合成することができる。次いで、前記のトリチウム化プロトコールに従って、ペプチドをトリチウム化する。実施例７の化合物の比放射能は４２Ｃｉ／ｍｍｏｌであった。

実施例１〜７の化合物の質量を以下の表２に示す。

比較例８
以下の化合物は国際公開第０１／３４６３１号パンフレット（アクソニックス（ＡｘｏｎｙｘＩｎｃ．））に開示されており、参照化合物として含まれる。

実施例８：

実施例９：生物学的アッセイ
ペプチド安定性のｉｎｖｉｔｒｏアッセイ
本発明の化合物の安定性を参照化合物（実施例８）と比較してアッセイすることができる。

ペプチドを１μｇ／μｌの水溶液として調製した。ペプチド溶液２０μｌを、新鮮なヒト血漿または１０％ラット脳ホモジネート（ＰＢＳに溶解して調製）８０μｌで希釈した。結果として生じた溶液を３７℃で様々な時間インキュベートし、コンプリートプロテアーゼインヒビターカクテルを添加することによって反応を止めた。血漿および脳タンパク質の大部分を冷メタノール中で−２０℃で１時間沈殿させた（混合物／ＭｅＯＨ、４／５、ｖ／ｖ）（ペプチドは沈殿しなかった）。沈殿したタンパク質を遠心分離（１００００ｇ、１０分、４℃）によってペレット化した。ペプチドを含む上清を減圧下で５倍に濃縮し、逆相ＨＰＬＣによって分離した。インタクトなペプチドに対応するピーク面積を測定し、ＰＢＳでインキュベートした同等の試料と比較した。結果を表３に「ｔ_1/2ヒト血漿」および「ｔ_1/2ラット脳ホモジネート」と示す。この値は、実施例８の参照化合物について得られた値と比べて遜色がない。

活性のｉｎｖｉｔｒｏアッセイ
凝集線維形成を阻害する本発明の化合物の活性は、アミロイド線維に対して親和性を有するフルオロフォアの蛍光シグナル変化を追跡することによって試験することができる。

レビン（Ｌｅｖｉｎｅ）²⁶およびサトウ（Ｓｏｔｏ）ら²⁷により報告されたように、アミロイド線維に結合したチオフラビンＴ（ＴｈＴ）の蛍光発光によって、アミロイド形成を定量評価した。０．１ＭＴｒｉｓ、（ｐＨ７．４）に溶解して調製したＡβ１−４２（アルツハイマー脳のアミロイド斑に沈着するものと同じ配列を有する合成ペプチド）アリコート（濃度０．５ｍｇ／ｍｌ）を、様々な濃度の化合物の非存在下または存在下で、ロータリーシェーカーで穏やかに回旋しながら、３７℃で５日間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、５０ｍＭグリシン（ｐＨ９．２）および２μＭＴｈＴを最終体積２ｍｌで添加した。蛍光を、パーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）モデルＬＳ５０Ｂ蛍光分光計において励起４３５ｎｍおよび発光４８５ｎｍで測定した。この分析法²⁸を用いて、本発明の化合物により引き起こされる線維形成阻害のパーセントを計算することができる。結果を表４に示し、図１に図示する。値はアミロイド形成阻害のパーセントに対応し、実施例８の化合物の活性（１００％）と比較して表した。

活性の細胞アッセイ
アミロイド線維は細胞傷害性であり、アポトーシスによる細胞死を誘導する¹⁸。アミロイド形成を阻止する本発明の化合物の能力は、細胞アッセイにおいて細胞傷害性の阻害を測定することによって評価することができる。

０．１ＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．４）に溶解して調製したＡβ_1-42アリコート（濃度０．５ｍｇ／ｍｌ）を単独で、または様々な濃度の化合物の存在下で、ロータリーシェーカーで穏やかに回旋しながら、３７℃で３６時間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、Ａβの最終濃度が５．５μＭになるように、溶液のアリコートをＰＣ１２細胞の培地に添加した。細胞を２４時間インキュベートし、その後に、ＭＴＴキット（ロシュ、マンハイム、ドイツ（Ｒｏｃｈｅ，Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を用いて製造業者の説明書に従って、細胞生存率を評価した。表５に示した結果は、Ａβのみをインキュベートしたものに対するアミロイド細胞傷害性阻害のパーセントであり、実施例８の化合物の活性（１００％）と比較して表した。

血液脳関門透過試験
毛細血管枯渇（ｃａｐｉｌｌａｒｙｄｅｐｌｅｔｉｏｎ）実験によって、ＢＢＢを通過する本発明の化合物の能力を調べることができ、脳に透過するキネティクスを測定することができる。

ａ）毛細血管枯渇および血液ウォッシュアウト（ｂｌｏｏｄｗａｓｈｏｕｔ）
本発明の化合物の脳への透過を評価するために、毛細血管枯渇が用いられる。「ウォッシュアウト」ステップによって脳から血液が除去され、その結果、脳実質に存在する本発明の化合物の濃度を測定することができる。

毛細血管枯渇試験²⁷を雄ＣＤ−１マウス（２８〜３６ｇ）において行った。マウスを腹腔内ウレタン（４０％）で麻酔し、左頸静脈を暴露する。実施例１５のトリチウム標識ペプチドを静脈内注射する。動物を屠殺する前に、血液を頸動脈（群１）または下行大動脈（群２）から集める。血液を集めた後、群１のマウスを屠殺するか、または乳酸リンゲル液（７．１９ｇ／ｌＮａＣｌ、０．３ｇ／ｌＫＣＬ、０．２８ＣａＣｌ２、２．１ｇ／ｌＮａＨＣＯ₃、０．１６＋ｇ／ｌＫＨ₂ＰＯ₄、０．３７ｇ／ｌＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ、０．９９ｇ／ｌＤ−グルコース、１０ｇ／ｌウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）２０ｍｌを心臓の左心室に３０秒間注射することによって、血液を除去する（これにより脳血管内容物の９５％超が除去される）（血液脳ウォッシュアウト、群２）。

脳／血清比（μｌ／ｇ）は、以下の式：脳／血清比＝（ｃｐｍ／ｇ脳）／（ｃｐｍ／μｌ血清）によって評価される。大脳皮質を秤量し、生理学的緩衝液（１０ｍＭＨＥＰＥＳ、１４０ｍＭＮａＣｌ、４ｍＭＫＣｌ、２．８ｍＭＣａＣｌ₂、１ｍＭＭｇＳＯ₄、１ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄、および１０ｍＭＤ−グルコース、ｐＨ７．４）中でホモジナイズする。次いで、デキストラン溶液（２６％溶液１．６ｍｌ）をホモジネートに添加する。遠心分離（５，４００ｇ、１５分、４℃）の後、脳血管系（ペレット）および実質（上清）を分離し、それぞれの画分の放射能を測定する。

実施例１の放射性誘導体（実施例７の化合物）の静脈内注射の１０分後、放射能の７０％超が実質に回収された。血液ウォッシュアウトが行われた毛細血管画分または血液ウォッシュアウトが行われなかった毛細血管画分に関連した放射能のパーセントは、それぞれ、２４％および２９％である。これらのデータは、化合物１の大部分がＢＢＢを通過することを示している。さらに、これは、実施例１のペプチドが毛細血管の管腔表面に弱く結合し、内皮細胞に隔離されないことを証明している。

ｂ）血液脳関門透過試験：
本発明の化合物の脳への透過キネティクスは血液脳関門透過実験によって評価することができる。次いで、注射され、脳に見出されたペプチドのパーセントを計算することができる。

マウスを腹腔内ウレタン（４０％）で麻酔し、左頸静脈を暴露する。１％ＢＳＡおよび実施例７のトリチウム標識ペプチド（「放射性」）（１０００００ｃｐｍ／ｍｌのトリチウム放射性ペプチド）を含む乳酸リンゲル液（７．１９ｇ／ｌＮａＣｌ、０．３ｇ／ｌＫＣＬ、０．２８ＣａＣｌ２、２．１ｇ／ｌＮａＨＣＯ₃、０．１６＋ｇ／ｌＫＨ₂ＰＯ₄、０．３７ｇ／ｌＭｇＣｌ₂・６Ｈ₂Ｏ、０．９９ｇ／ｌＤ−グルコース、１０ｇ／ｌウシ血清アルブミン、ｐＨ７．４）０．２ｍｌを注射する。標識ペプチド注射後の様々な時点で、動脈血を右頸動脈から集める。血清を遠心分離（４８００ｇ、１０分、４℃）によって得る。動脈血を集めた後、マウスを断頭し、松果体および下垂体を除く全脳を採取し、秤量する。ＴＳ−２溶液（ＲＰＩ、マウントプロスペクト（ＭｏｕｎｔＰｒｏｓｐｅｃｔ）、イリノイ州）に４０℃で一晩溶解するステップを行った後に、脳および血清に含まれる放射能の量を測定する。総放射能の脳／血清比を注射後１分〜１２０分まで経時的に求めた。脳／血清比（μｌ／ｇ）は、以下の式：脳／血清比＝（ｃｐｍ／ｇ脳）／（ｃｐｍ／μｌ血清）によって評価される。

脳／血清比対時間を図示することによって、流入速度Ｋｉ（傾き）および分布容積（Ｙ切片）Ｖｉを得ることができる。流入速度（Ｋｉ、μｌ（血清）／ｇ（組織重量）−分）は、化合物が循環から脳に移動する速度を表す。分布容積（Ｖｉ、μｌ（血清）／ｇ（組織重量））は、時間０分で脳実質に分布している物質の見かけの体積である。結果を表６に示す。

放射性ペプチドのみを用いた流入速度（Ｋｉ）は３．５４±０．２９μｌ／ｇ−分であり、Ｙ切片は約５０μｌ／ｇであった（表４）。これは、実施例１の化合物が脳を透過することを示している。

脳１ｇ当たりの、実施例７の化合物の注射量に対する脳に取り込まれた量のパーセントを計算した（図２を参照のこと）。最大値は０．４６４％であり、注射の１．４分後に、この値の半分に達した。このデータは、実施例７の化合物が脳に急速に取り込まれたことを示唆している。

脳試料のＨＰＬＣ分析から、インタクトなペプチドの１２％が静脈内注射の２０分後に回収されたことが分かった。

注射された化合物の０．０６％超が、注射後２０分以内に脳においてインタクトな状態で回収された。

脳Ａβ沈着の動物モデルを用いたｉｎｖｉｖｏ試験
アミロイド沈着物形成を阻害する本発明の化合物の活性は、本発明のペプチドの存在下および非存在下で脳組織切片を抗Ａβ_1-42抗体で染色することによってｉｎｖｉｖｏで視覚化することができる。

雄フィッシャー（Ｆｉｓｃｈｅｒ）−３４４ラットは到着時、体重２５０〜３００ｇであり、３〜４ヶ月齢であった。動物をケージ１個につき２匹入れ、１２時間の明暗周期に維持し、試料および水を自由に与え、外科手術の前に新しい環境に２〜３週間慣れさせた。ペントバルビタールナトリウム（５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）麻酔の下で、外科手術を行った。動物を麻酔したら、硫酸アトロピン（０．４ｍｇ／ｋｇ）およびアンピシリンナトリウム塩（５０ｍｇ／ｋｇ）を皮下注射した。Ａβ_1-42をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、次いで、１６．７％ＤＭＳＯの濃度まで水で希釈した。インシザーバー（ｉｎｃｉｓｏｒｂａｒ）を両耳間ライン（ｉｎｔｅｒａｕｒａｌｌｉｎｅ）より３．３ｍｍ低くなるように設定したコプフ（Ｋｏｐｆ）定位固定装置を用いて、動物のそれぞれの扁桃体（ａｍｙｇｄａｌｅ）に５．０ｎｍｏｌのＡβ_1-42を両側注射した。ブレグマおよび頭蓋表面から測定された注射座標（ＡＰ−３．０、ＭＬ±４．６、ＤＶ−８．８）は、パキシノス（Ｐａｘｉｎｏｓ）およびワトソン（Ｗａｔｓｏｎ）のアトラスに基づいて経験的に求めた。体積３．０μｌの５．０ｎｍｏｌＡβ_1-42溶液を、ＣＭＡ／１００マイクロシリンジポンプを用いて６分間にわたって投与した（流速０．５μｌ／分）。注射後２分間、カニューレを置いたままにし、次いで、０．２ｍｍ引き抜き、３分間そのままの状態にし、５分後、カニューレをゆっくりと引き抜いた。外科手術の後、立直り反射が回復するまで、動物を温熱パッドの上に置いた。動物を実施例１の化合物および実施例８の化合物で処置した。０．９％ＮａＣｌに４．４ｍＭの濃度で溶解したペプチドを、７．５週間、週に４回、皮下注射（注射１回当たり０．５ｍｌ）した。動物を化合物で処置した後、過量のペントバルビタールナトリウム（１５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を大動脈を通して灌流させて屠殺した。組織学のために、脳の連続冠状切片（４０μｍ）を切り、エチレングリコール凍結防御物質の中に入れ、染色まで−２０℃で保存した。説明したように、組織切片を抗Ａβ_1-42抗体で染色した。アミロイド沈着物の大きさを求めるために、画像解析装置を使用した。これらのデータを、二元配置ＡＮＯＶＡ、続いて事後比較のためにニューマン−クール（Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌ）多重検定を行って解析した。

実施例１の化合物とビヒクルおよび比較例８の化合物の結果（写真）を図３Ａに示す。アミロイド面積を示す結果（グラフ）を図３Ｂに示す。実施例１の化合物がアミロイド面積を実質的に小さくすることは明らかである。

１セルコエ（Ｓｅｌｋｏｅ）、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２７５１９９７、６３０−６３１；
２マスターズ（Ｍａｓｔｅｒｓ），Ｃ．らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２１９８５、４２４５-４２４９；
３ダビーズ（Ｄａｖｉｅｓ），Ｌ．らＮｅｕｒｏｌｏｇｙ３８１９８８、１６８８−１６９３；
４コウォール（Ｋｏｗａｌｌ），Ｎ．Ｗ．らＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８１９９１、７２４７−７２５１；
５レビー（Ｌｅｖｙ），Ｅ．らサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２４８１９９０、１１２４−１１２６；
６マウリー（Ｍａｕｒｙ），Ｃ．Ｐ．ＬａｂＩｎｖｅｓｔ．７２１９９５、４−１６；
７ジョーダン（Ｊｏｒｄａｎ），Ｂ．Ｄ．Ｓｅｍｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２０２００１，７９−８５；
８カン（Ｋａｎｇ），Ｊ．らネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）３２５１９８７，７３３−；
９マン（Ｍａｎｎ），Ｄ．Ｍ；Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ１３１９８８，１２５−３７；
１０ショウジ（Ｓｈｏｊｉ），Ｍ．らサイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２５８１９９２，１２６−；
１１モリ（Ｍｏｒｉ），Ｈ．らＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７１９９２，１７０８２−；
１２サトウ（Ｓｏｔｏ）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７１９９９，４１２−４１８；
１３セルペル（Ｓｅｒｐｅｌｌ）らＣｅｌｌＭｏｌ．ＬｉｆｅＳｃｉ．５３１９９７，８７１−８８７；
１４サトウ（Ｓｏｔｏ），Ｃ．らＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０１９９５，３０６３−３０６７；
１５ウィスニエウスキー（Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ）らＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙＴｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ３０（４）２００２，５７４−５７８；
１６国際公開第９６/３９８３４号パンフレット（ニューヨーク大学）；
１７国際公開第０１/３４６３１号パンフレット（アクソニックス）；
１８国際公開第０１/０７４７３号パンフレット（ストット（Ｓｔｏｔｔ），Ｋ．）；
１９国際公開第０２/０７４９３１号パンフレットシカゴ大学；
２０ヤンクナー（Ｙａｎｋｎｅｒ），Ｂ．Ａ．；Ｎｅｕｒｏｎ１６１９９６，９２１−９３２；
２１ジェナロ（Ｇｅｎｎａｒｏ），Ａ．Ｒ．，ら，レミントンの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ），パート８；第１８版Ｅａｓｔｏｎ：ＴｈｅＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ，１９９５；
２２経口徐放製剤：設計および評価（ＯｒａｌＳｕｓｔａｉｎｅｄＲｅｌｅａｓｅＦｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ：ＤｅｓｉｇｎａｎｄＥｖａｌｕａｔｉｏｎ）；エイブラハム・ヤコビ（ＡｖｒａｈａｍＹａｃｏｂｉ），エバ・ハルペリン−ウァレガ（ＥｖａＨａｌｐｅｒｉｎ−Ｗａｌｅｇａ）（編）；第１版；ＰｅｒｇａｍｏｎＰｒｅｓｓ（１９８８年４月）；
２３徐放性注射用製品（Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ−ＲｅｌｅａｓｅＩｎｊｅｃｔａｂｌｅＰｒｏｄｕｃｔｓ）；ジュディー・セニョール（ＪｕｄｙＳｅｎｉｏｒ）（編）；ＩｎｔｅｒｐｈａｒｍＰｒｅｓｓ（２０００年７月）；
２４カプセル化および制御放出（ＥｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ）Ｄ．Ｒ．カルサ（Ｋａｒｓａ），Ｒ．Ａ．スティーブンソン（Ｓｔｅｐｈｅｎｓｏｎ）（編）ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ（１９９３年１２月）；
２５ペプチド合成の原理（ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓｏｆＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ）（ＳｐｒｉｎｇｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ）；ミクロス・ボダンスキー（ＭｉｋｌｏｓＢｏｄａｎｓｚｋｙ），ミルコス（Ｍｉｌｋｏｓ）；ボダンスキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ）；第２改定版；ＳｐｒｉｎｇｅｒＶｅｒｌａｇ；
２６レビン（Ｌｅｖｉｎｅ），Ｈ；Ｐｒｏｔｅｉｎｓｃｉｅｎｃｅ，２（３）１９９３，４０４−４１０；
２７トリグエロ（Ｔｒｉｇｕｅｒｏ），Ｄ．らＪ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．６１９９０，１８８２−１８８８；

線維形成アッセイを用いた本発明の化合物のｉｎｖｉｔｒｏ活性を示す。合成Ａβ_1-42のアミロイド線維形成の定量に基づくアッセイを用いて、化合物の活性をスクリーニングした。０．１ＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．４）に溶解したＡβ_1-42（１１０μＭ）を単独で、または１０倍モル過剰の各化合物の存在下で３７℃で５日間インキュベートした。その後に、実施例に記載のように、アミロイド線維の量をチオフラビンＴ蛍光法を用いて測定した。値は、アミロイド形成の阻害パーセントに対応し、実施例８の比較化合物の活性（１００％）と比較して表した。脳１ｇ当たりの、実施例７の化合物の注射量に対する取り込まれた量の％計算値対時間を表すグラフを示す。マウスに、１％ＢＳＡおよび実施例７のトリチウム標識ペプチド（「放射性」）（１０００００ｃｐｍ／ｍｌのトリチウム放射性ペプチド）を含む乳酸リンゲル液０．２ｍｌを注射した。脳アミロイドーシスのラットモデルにおける実施例１の化合物および実施例８の比較化合物のｉｎｖｉｖｏ活性を示す。代表的な画像から、ビヒクルで処置された動物群、実施例８の比較化合物で処置された動物群、および実施例１の化合物で処置された動物群の間で、アミロイドの大きさは異なることが分かる。免疫組織化学後の画像解析により概算された、異なる動物におけるアミロイド面積を示すグラフを示す。

Claims

一般式Ｉ：

（式中、
Ｒ¹はＨおよびＣ₂−Ｃ₆−アシルから選択され；
Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵は独立してＨおよびＣ₁−Ｃ₆−アルキルから選択され、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、およびＲ⁵のうち少なくとも１つはＣ₁−Ｃ₆−アルキルであり；
Ｒ⁶はＯＨおよびＮＲ⁷Ｒ⁸から選択され、Ｒ⁷およびＲ⁸は独立してＨおよびＣ₁−Ｃ₆−アルキルから選択される）の化合物；
ならびにその塩およびトリチウム化された誘導体。
Ｒ¹がＣ₂−Ｃ₆−アシルである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ¹がホルミル、アセチル、プロピオノイル、およびブチロイルから選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｒ¹がアセチルである、請求項１に記載の化合物。
全てのα−炭素原子における立体化学配置がＬである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ⁶がＮＲ⁷Ｒ⁸であり、Ｒ⁷およびＲ⁸が独立してＨおよびＣ₁−Ｃ₆−アルキルから選択され、全てのα−炭素原子における立体化学配置がＬである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ⁶がＮＨ₂である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
Ｒ²がＨであり；Ｒ⁴およびＲ⁵が独立してＨおよびメチルから選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
Ｒ³がメチルである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
Ｒ²、Ｒ⁴、およびＲ⁵がＨである、請求項９に記載の化合物。
Ｒ⁴およびＲ⁵がメチルであり；Ｒ²がＨである、請求項９に記載の化合物。
Ｒ⁵がメチルであり；Ｒ²およびＲ⁴がＨである、請求項９に記載の化合物。
Ｒ⁴がメチルであり；Ｒ²およびＲ⁵がＨである、請求項９に記載の化合物。
以下の群
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−ＮＨ₂
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−ＮＨ₂
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ａｓｐ−ＮＨ₂
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ａｓｐ−ＮＨ₂
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−ＮＨ₂
Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｎ（Ｍｅ）−Ａｓｐ−ＮＨ₂
Ａｃ−Ｌｅｕ−[³Ｈ]Ｐｒｏ−Ｎ（Ｍｅ）−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−ＮＨ₂
から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。
医薬品として使用するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。
請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤、または担体を含む、薬学的組成物。
アルツハイマー病、拳闘家痴呆（頭部外傷を含む）、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）、およびアミロイドアンギオパチーを伴う血管性痴呆から選択される疾患または状態を治療または予防するための医薬品を製造するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物の使用。
疾患がアルツハイマー病である、請求項１７に記載の使用。
アミロイドおよびアミロイド様沈着物への異常なタンパク質の折り畳みに関連した疾患を治療するための医薬品を調製するための、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物の使用。