JP2006508047A - Methods and formulations for treating conditions associated with neovascularization - Google Patents
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Abstract
本発明は、細胞又は組織に有効量のスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグを送達することによって、組織内の新血管新生を阻害する方法を提供する。またここでは、被験体に有効量のスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグを投与することによって、内皮細胞の超増殖及び/又は新血管新生に関連する疾病を治療する方法を提供する。患者を治療するためのキットも同様に提供する。The present invention provides a method of inhibiting neovascularization in tissue by delivering an effective amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof to a cell or tissue. Also provided herein is a method of treating a disease associated with endothelial hyperproliferation and / or neovascularization by administering to a subject an effective amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof. provide. Kits for treating patients are also provided.
Description
(関連出願との相互参照)
本出願は、2002年8月5日に提出された米国仮出願番号60/401,130の米国特許法第119条(e)の下の利益を主張し、その内容はここに参照して本開示の中に組み込まれる。
(Cross-reference with related applications)
This application claims the benefit under 35 USC 119 (e) of US Provisional Application No. 60 / 401,130 filed on August 5, 2002, the contents of which are hereby incorporated by reference Incorporated into the disclosure.
本発明は薬剤の分野におけるものである。特に,病気の予防及び治療のための抗血管形成薬剤の分野に関する。 The present invention is in the field of medicine. In particular, it relates to the field of anti-angiogenic drugs for disease prevention and treatment.
血管形成(angiogenesis)は、新しい血管構造が既存の毛細管からの増殖によって生じる過程である。本過程において、内皮細胞が、この支持体の蛋白質分解酵素による劣化につれて基底膜から分離する。それから、これら細胞は親血管から移動し、分離し、そして新たに分化した血管組織を形成する(Risau,(1997)Nature386:671−674;Wilting他,(1995)Cell. Mol. Biol. Res. 41(4):219−232)。多様な異なる生物学的要因が血管形成の制御において機能していることがわかっている(Bussolino他、 (1997) Trends IN Biochem Sci 22(7):251−256; Folkman and d’Amore, (1996) Cell 87:1153−1155)。これらとしては、成長因子、細胞表面受容器、プロテアーゼ、プロテアーゼ阻害剤及び細胞外基質蛋白質のような多様な機能を有する蛋白質が挙げられる(Achen and Stacker、(1998)Int.J. Exp. Pathol. 79:255−265;Devalaraja and Richmond、 (1999) Trends in Pharmacol. Sci.20(4):151−156;Hanahan、 (1997) Science 277:48−50;Maisonpierre他、 (1997) Science 277:55−60;Sun他、 (1996) Cell 87:1171−1180;Sato他、 (1995) Nature 376:70−74;Mignatti and Rifkin、 (1996) Enzyme Protein 49:117−137;Pintucci他、 (1996) Semin Thromb Hemost 22(6)517−524;Vernon and Sage、 (1995) Am.j. Pathol. 147(4):873−883; Brooks他、 (1994) Science 264:569−571; Koch他.、 (1995) Nature 376:517−519)。血管形成過程の複雑性及びその進行を制御する因子の多様性が、in vivoの血管形成を制御する、医療的処置のための一連の有用な点を提供する。 Angiogenesis is the process by which new vasculature is created by growth from existing capillaries. In this process, endothelial cells separate from the basement membrane as the support degrades by proteolytic enzymes. These cells then migrate from the parent vessel, separate and form newly differentiated vascular tissue (Risau, (1997) Nature 386: 671-674; Wilting et al. (1995) Cell. Mol. Biol. Res. 41 (4): 219-232). A variety of different biological factors have been shown to function in the control of angiogenesis (Bussolino et al. (1997) Trends IN Biochem Sci 22 (7): 251-256; Folkman and d'Amore, (1996). ) Cell 87: 1153-1155). These include proteins with diverse functions such as growth factors, cell surface receptors, proteases, protease inhibitors and extracellular matrix proteins (Achen and Stacker, (1998) Int. J. Exp. Pathol. 79: 255-265; Devararaja and Richmond, (1999) Trends in Pharmacol. Sci. 20 (4): 151-156; Hanahan, (1997) Science 277: 48-50; Maisonpierre et al. -60; Sun et al. (1996) Cell 87: 1171-1180; Sato et al. (1995) Nature 376: 70-74; d Rifkin, (1996) Enzyme Protein 49: 117-137; Pintucci et al., (1996) Semin Thromb Hemost 22 (6) 517-524; Vernon and Sage, (1995) Am. j. Pathol. Brooks et al. (1994) Science 264: 569-571; Koch et al. (1995) Nature 376: 517-519). The complexity of the angiogenic process and the diversity of factors that control its progression provide a range of useful points for medical procedures that control angiogenesis in vivo.
血管形成は通常、胚発生の間、成長の間、そして傷の治癒や女性の生殖周期のような特別の場合において、注意深く制御された方法で生じる(Wilting and Christ、 (1996) Naturwissenschaften 83:153−164;Goodger and Rogers、 (1995) Microcirculation 2:329−343;Augustin他、 (1995) Am.j. Pathol. 147(2):339−351)。病的な血管形成の過程における重要なステップのうちのいくつかは、腫瘍成長および転移ガン、糖尿病性網膜症、慢性関節リウマチ、および乾癬のような他の炎症性の疾病を含む多くの人間の病気における中心的な役割を果たす(Folkman、 (1995) Nature Med.1(1):27−3 1;Polverini、 (1995) Rheumatology 38(2):103−112;Healy他、 (1998) Hum.Reprod.Update 4(5):736−396)。これらの場合、病気の進行は永続的且つ無秩序な血管形成により駆動される。例えば、関節リウマチにおいて、新しい毛細血管が関節を侵食し軟骨を破壊する。糖尿病性網膜症においては、網膜の毛細血管が硝子体を侵食し出血し失明を引き起こす。腫瘍成長及び転移は著しく血管形成依存である。ほとんどの主要な固形腫瘍は、成長が直径およそ1−2mmまで制限された、持続的無血管状態を経験する。このサイズまで、腫瘍細胞は受動拡散によって必要な酸素および栄養の供給を得ることができる。これらの微視的な腫瘍塊はついには血管形成のスイッチを入れることができ、周囲の血管を補充して、腫瘍塊に血管を通す毛細血管を発生し始め、これが腫瘍の持続的拡張及び悪性細胞の遠隔部への転移のための潜在力を与える。病的血管形成中に生じる生物学的事象の理解において重要な進歩が得られたが、生体内の血管形成を制御するのに役立つ有効な医薬合成物は現在存在しない。したがって、血管形成を制御することが可能な有効な治療法は、かなりの数の人間の疾病を緩和する可能性を持っている。 Angiogenesis usually occurs in a carefully controlled manner during embryonic development, during development, and in special cases such as wound healing and the female reproductive cycle (Wilting and Christ, (1996) Naturewissenschaffen 83: 153). Goodger and Rogers, (1995) Microcirculation 2: 329-343; Augustin et al. (1995) Am.j. Pathol.147 (2): 339-351). Some of the important steps in the process of pathological angiogenesis are those in many humans, including tumor growth and metastatic cancer, diabetic retinopathy, rheumatoid arthritis, and other inflammatory diseases such as psoriasis. Play a central role in disease (Folkman, (1995) Nature Med. 1 (1): 27-31; Polverini, (1995) Rheumatology 38 (2): 103-112; Healy et al., (1998) Hum. Reprod.Update 4 (5): 736-396). In these cases, disease progression is driven by permanent and unregulated angiogenesis. For example, in rheumatoid arthritis, new capillaries erode joints and destroy cartilage. In diabetic retinopathy, retinal capillaries erode the vitreous and bleed, causing blindness. Tumor growth and metastasis are markedly angiogenic. Most major solid tumors experience a persistent avascular condition with growth limited to approximately 1-2 mm in diameter. Up to this size, tumor cells can obtain the necessary oxygen and nutrient supply by passive diffusion. These microscopic tumor masses can finally switch on angiogenesis and begin to generate capillaries that replenish the surrounding blood vessels and pass the blood vessels through the tumor mass, which continues to expand and malignant Provides the potential for metastasis of cells to distant parts. Although significant progress has been made in understanding the biological events that occur during pathological angiogenesis, there are currently no effective pharmaceutical compositions that help control angiogenesis in vivo. Thus, effective therapies that can control angiogenesis have the potential to alleviate a significant number of human diseases.
伝統的に、医薬化合物は、所望の医薬性質のため合成化合物のスクリーニング及びその後のin vivoでの毒性及び有効性の試験によって開発されている。この方法で選ばれた化合物はしばしば生体内での副作用を有し、またこのアプローチでは、疾病治療のための効果的な血管形成阻害薬の開発に成功していない。更に最近、分子生物学の技術が血管形成阻害薬の開発に適用されている。実験モデルにおいて血管形成を制御する、アンギオスタチンのような血管形成の蛋白質阻害薬が発見されている。それにもかかわらず、そのような蛋白質治療は生産が高額であり、配合及び対象への送達が困難であることがわかっている。現在のところ、蛋白質血管形成阻害薬は未だ患者向けの治療薬へと開発が進んではいない。したがって、患者に安全に投与可能で且つ血管の内皮細胞の病的成長の阻害に効果的な治療薬の必要性が存在する。本発明はこの目的に有用な配合物及び方法を提供し、また関連する利点を提供する。 Traditionally, pharmaceutical compounds have been developed by screening synthetic compounds and subsequent in vivo toxicity and efficacy tests for the desired pharmaceutical properties. Compounds selected in this way often have in vivo side effects, and this approach has not succeeded in developing effective angiogenesis inhibitors for disease treatment. More recently, molecular biology techniques have been applied to the development of angiogenesis inhibitors. Protein inhibitors of angiogenesis, such as angiostatin, have been discovered that control angiogenesis in experimental models. Nevertheless, such protein therapies are expensive to produce and have proven difficult to formulate and deliver to subjects. At present, protein angiogenesis inhibitors have not yet been developed as therapeutic drugs for patients. Thus, there is a need for therapeutic agents that can be safely administered to patients and effective in inhibiting the pathological growth of vascular endothelial cells. The present invention provides formulations and methods useful for this purpose and provides related advantages.
出願人は、スルフォラファン及びその誘導体が内皮細胞の成長及び増殖並びに血管新生(vascularization)の過程を阻害することを見出した。こうして、本発明は、病的度合いまで分裂している特定の細胞においてまたは組織において内皮細胞の増殖を阻害する方法を提供する。この発明はまた、組織内の新血管新生(neovascularization)を阻害する方法を提供する。各々の方法は、前記細胞または組織に、有効量のスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグを送達することを必要とする。一側面において、前記方法は、癌の中で起きているような血管形成、新生血管新生または過度の細胞増殖を阻害するために知られている他の化合物、配合物または治療法と組み合わされる。そのような療法としては、これらに限定されないが、化学療法、放射線療法及び抗血管形成化合物の投薬が挙げられる。 Applicants have found that sulforaphane and its derivatives inhibit the process of endothelial cell growth and proliferation and vascularization. Thus, the present invention provides a method of inhibiting endothelial cell proliferation in specific cells or in tissues that are dividing to a pathological degree. The present invention also provides a method of inhibiting neovascularization in tissue. Each method entails delivering an effective amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof to the cell or tissue. In one aspect, the method is combined with other compounds, formulations or therapies known to inhibit angiogenesis, neovascularization or excessive cell proliferation as occurs in cancer. Such therapies include, but are not limited to, chemotherapy, radiation therapy and administration of anti-angiogenic compounds.
またここでは、内皮細胞の超増殖及び/又は新血管形成に関連する疾病を、有効量のスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグの被験体への投与によって治療する方法が提供される。一側面において、前記方法は、癌の中で起きているような血管形成、新生血管新生または過度の細胞増殖を阻害するために知られている他の化合物、配合物または治療法と組み合わされる。そのような療法としては、これらに限定されないが、化学療法、放射線療法及び抗血管形成化合物の投薬が挙げられる。患者を治療するためのキットも同様に提供される。 Also provided herein is a method of treating a disease associated with endothelial cell hyperproliferation and / or neovascularization by administering to a subject an effective amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof. Is done. In one aspect, the method is combined with other compounds, formulations or therapies known to inhibit angiogenesis, neovascularization or excessive cell proliferation as occurs in cancer. Such therapies include, but are not limited to, chemotherapy, radiation therapy and administration of anti-angiogenic compounds. Kits for treating patients are also provided.
さらに、スルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグと同一の、類似の又はより良い治療効果を有する新しい治療薬を毒呈するための選別法も提供される。前記選別法はスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグの抗増殖効果を前記薬と比較することを必要とする。 In addition, screening methods are provided for poisoning new therapeutic agents that have the same, similar or better therapeutic effects as sulforaphane or pharmaceutically acceptable derivatives, salts or prodrugs thereof. Said screening method involves comparing the antiproliferative effect of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof with said drug.
更にその上、新血管新生、血管形成、新生物又はがんを治療又は予防する化合物、配合物又は治療法の治療又は治療の利益を強化する方法も提供される。そのような治療としては、これらに限定されないが、化学療法、放射線療法及び抗血管形成化合物の投薬が挙げられる。 Furthermore, methods for enhancing the therapeutic or therapeutic benefit of a compound, formulation or therapy that treats or prevents neovascularization, angiogenesis, neoplasia or cancer are also provided. Such treatments include, but are not limited to, chemotherapy, radiation therapy and administration of anti-angiogenic compounds.
この開示の全体にわたって、様々な出版物、特許および公開された特許明細書が、識別する引用により参照される。これら出版物、特許及び公開特許公報の開示は、ここで、本発明に関連する技術水準をより完全に説明するために、参照して本開示中に組み込まれる。 Throughout this disclosure, various publications, patents and published patent specifications are referenced by identifying citations. The disclosures of these publications, patents and published patent publications are hereby incorporated by reference into the present disclosure in order to more fully describe the state of the art relating to the present invention.
本発明の実施は、他に明記されない場合、当業の技術の範囲内である(組換え技術を含む)分子生物学、微生物学、細胞生物学、生化学及び免疫学の従来技術を使用する。かかる技術は文献により完全に説明される。 The practice of the present invention uses conventional techniques of molecular biology, microbiology, cell biology, biochemistry and immunology that are within the skill of the art unless otherwise specified (including recombinant techniques). . Such techniques are explained fully in the literature.
定義
ここで用いられているように、特定の用語は以下に定義される意味を有することができる。
Definitions As used herein, certain terms may have the meanings defined below.
本明細書及びクレームに用いられるように、単数形「a」「an」及び「the」は、別な事項が文脈に明確記述されてない場合、複数の言及を含む。例えば、用語「細胞」は複数の細胞を含み、それらの混合物を含む。 As used in the specification and claims, the singular forms “a”, “an”, and “the” include plural references unless the context clearly dictates otherwise. For example, the term “cell” includes a plurality of cells and includes mixtures thereof.
ここに用いられるように、用語「有する」は、配合物及び方法が記述された要素を含むが、それ以外のものを除外しない、ということを意味するよう意図されている。「から本質的に成る」が、配合物及び方法を定義するために用いられるとき、その組み合わせに、いかなる本質的に重要な他の要素も含まないことを意味するのである。このように、ここで定義されるように該要素から本質的に成る配合物は、リン酸緩衝生理食塩水や防腐剤などのような、分離及び精製方法からの痕跡量の異物並びに医薬的に許容できるキャリアを除外しないであろう。「から成る」は痕跡量の他の成分及びこの発明の配合物を投与する実質的な方法工程以上のものを除外することを意味するのである。これら移行用語のそれぞれによって規定される実施の態様はこの発明の範囲内である。 As used herein, the term “comprising” is intended to mean that the formulations and methods include the elements described, but do not exclude others. “Consisting essentially of”, when used to define a formulation and method, means that the combination does not include any other essential elements. Thus, a formulation consisting essentially of the elements as defined herein contains trace amounts of foreign matter from pharmaceutical separation and purification methods, such as phosphate buffered saline and preservatives, and pharmaceutically. Will not exclude acceptable carriers. “Consisting of” means excluding more than trace steps of other ingredients and substantial method steps of administering the formulations of this invention. Embodiments defined by each of these transition terms are within the scope of this invention.
用語「単離される」は、成分、細胞その他であってその中において化合物が通常、実質的に付随するものから分離されることを意味する。 The term “isolated” means that the component, cell, etc., in which the compound is usually separated from substantially accompanying substances.
「被験体」又は「宿主」は、脊椎動物であり、好ましくは動物又は哺乳類であり、更に好ましくは人間の患者である。哺乳類としては、これらに限定されないが、マウス、サル、人間の患者、家畜、競技動物、及びペットが挙げられる。 A “subject” or “host” is a vertebrate, preferably an animal or mammal, and more preferably a human patient. Mammals include, but are not limited to, mice, monkeys, human patients, farm animals, sport animals, and pets.
同義的に単数又は複数形で用いられる用語「がん」「新生物」及び「腫瘍」は、細胞を宿主生物にとって病的なものにする悪性転換をした細胞をいう。原発性がん細胞(すなわち悪性転換の位置の近くから得られた細胞)は、容易に、充分確立している技術、特に組織学の検査により非癌細胞から区別することができる。がん細胞の定義は、ここに用いられたように、原発性がん細胞だけでなくがん細胞の原種に由来したいかなる細胞をも含む。これは転移されたがん細胞、およびがん細胞に由来した試験管培養および細胞株を含んでいる。通常、固形腫瘍として現れるがんの一種をいうとき、「臨床的に検知できる」腫瘍は、例えばCATスキャン、核磁気共鳴映像法(MRI)、X線、超音波あるいは触診のような処置によって腫瘍塊に基づいて検知できるものである。生化学又は免疫学の所見はこの定義を満たすには単独では不十分かもしれない。 The terms “cancer”, “neoplasm” and “tumor” used interchangeably in the singular or plural refer to cells that have undergone malignant transformation that renders the cell pathological to the host organism. Primary cancer cells (ie, cells obtained near the location of malignant transformation) can be easily distinguished from non-cancerous cells by well-established techniques, particularly histological examination. The definition of cancer cell, as used herein, includes not only primary cancer cells, but any cells derived from the original species of cancer cells. This includes metastasized cancer cells, and test tube cultures and cell lines derived from cancer cells. Normally, when referring to a type of cancer that appears as a solid tumor, a “clinically detectable” tumor is a tumor that has been treated by procedures such as CAT scan, nuclear magnetic resonance imaging (MRI), X-ray, ultrasound, or palpation. It can be detected based on the lump. Biochemical or immunological findings alone may not be sufficient to meet this definition.
ここに用いられるように、「阻害」は成長、内皮細胞の増殖、細胞分裂あるいは組織中の血管の形成を停止、遅延又は減速させることを意味する。阻害をモニタする方法としては、これらに限定されないが、内皮細胞増殖分析、血液量の決定による血管床の体積の測定、及び血管構造の密度の量的決定が挙げられる。培養物が細胞の混合物である場合、新血管新生は、血管形成要因、蛋白質分解酵素および内皮細胞特定細胞接着分子のような、内皮細胞の特定の標識を表す細胞の定量的測定によってモニタされる。 As used herein, “inhibit” means stopping, delaying or slowing growth, endothelial cell proliferation, cell division or the formation of blood vessels in a tissue. Methods for monitoring inhibition include, but are not limited to, endothelial cell proliferation analysis, measurement of vascular bed volume by determining blood volume, and quantitative determination of vascular structure density. When the culture is a mixture of cells, neovascularization is monitored by quantitative measurement of cells that represent specific markers of endothelial cells, such as angiogenic factors, proteolytic enzymes and endothelial cell specific cell adhesion molecules .
「配合物」は、活性剤と他の不活性な(例えば検出可能な薬剤又はラベル)又は免疫助成剤のような活性な化合物との組み合わせを意味する。 “Formulation” means a combination of an active agent with other inactive (eg, detectable agents or labels) or active compounds such as immunostimulants.
「医薬配合物」は、当該配合物を試験管内、生体内又は生体外での診断や治療の使用に適したものにする不活性又は活性キャリアーと活性剤の組み合わせを含むことを意図している。 A “pharmaceutical formulation” is intended to include an inert or active carrier and active agent combination that renders the formulation suitable for in vitro, in vivo or in vitro diagnostic or therapeutic use. .
ここに用いられるように、用語「医薬的に許容できるキャリアー」はリン酸緩衝生理食塩水溶液、水、および油/水あるいは水/油乳濁液のような乳濁液、といったような標準の医薬キャリアーおよび様々なタイプの湿潤剤のうちの何れかを包含する。
配合物はさらに安定剤及び防腐剤を含むことが可能である。
キャリアー、安定剤および免疫助成剤の例については、Martin, REMINGTON‘S PHARM. SD., 15TH ED. (Mack Publ. Co., Easton (1975))を参照すること。
As used herein, the term “pharmaceutically acceptable carrier” refers to standard pharmaceuticals such as phosphate buffered saline solution, water, and emulsions such as oil / water or water / oil emulsions. Includes any of a carrier and various types of wetting agents.
The formulation can further include stabilizers and preservatives.
For examples of carriers, stabilizers and immune aids, see Martin, REMINGTON'S PHARM. SD. , 15TH ED. (Mack Publ. Co., Easton (1975)).
「有効量」は有益な又は所望の結果をもたらすに充分な量である。例えば、治療の量は所望のの治療効果を達成するものである。この量は、疾病の発症あるいは病徴を防ぐために必要な量である予防的に有効な量と同一であるか異なっていてよい。有効量は、1以上の投与、塗布あるいは投薬で与薬することが可能である。 An “effective amount” is an amount sufficient to effect beneficial or desired results. For example, the amount of treatment is that which achieves the desired therapeutic effect. This amount may be the same or different from the prophylactically effective amount necessary to prevent the onset or symptom of the disease. An effective amount can be administered by one or more administrations, applications or dosages.
ここに用いられるように、他に明記されない場合、「スルフォラファン」はスルフォラファングルコシネート(SGS)を破壊してできたアグリコン生成物を意味するように意図され、それは、主としてアブラナ科の野菜(キャベツ、ブロッコリ、ブロッコリーの芽、メキャベツ、カリフラワー、カリフラワーの芽、チンゲン菜、緑葉カンラン、コラードの葉、キバナスズシロ、コールラビ、からし、カブ、赤いハツカダイコン、またオランダガラシ)中で見つかる。他に明記されない場合、その用語はスルフォラファンの誘導体、薬学的に許容できる塩類およびプロドラッグを含む。若いブロッコリーの芽及びカリフラワーの芽は、スルフォラファングリコシネート誘導体に特に富んでいる。スルフォラファングリコシネートはグリコシネートグルコラファニンとしても知られている。スルフォラファンは、C6H11NOS2の分子式および177.29ダルトンの分子量を有する。さらに、それは、4−メチルスルフィニルブチルイソチオシアネート及び(−)−1−イソチオシアナト−4(R)−(メチルスルフィニル)ブタンとしても知られる。グルタチオンS転移酵素及びキノン還元酵素のような過程II解毒酵素(ある発癌物質および他の有害親電子物質からの保護を提供する)を生じるその能力により、スルフォラファンが抗発がん性の性質を持っているかもしれないことが考えられる。 As used herein, unless otherwise specified, “sulforaphane” is intended to mean an aglycon product made by destroying sulforaphane glucosinate (SGS), which is primarily a cruciferous vegetable (cabbage). , Broccoli, broccoli sprouts, cabbage, cauliflower, cauliflower sprouts, pak choi, green leaf kanran, corrado leaves, yellow scallop, kohlrabi, mustard, turnip, red box radish, and Dutch pepper. Unless otherwise specified, the term includes derivatives of sulforaphane, pharmaceutically acceptable salts and prodrugs. Young broccoli sprouts and cauliflower sprouts are particularly rich in sulforaphane glycosinate derivatives. Sulforaphane glycosinate is also known as glycosinate glucoraphanin. Sulforaphane has a molecular formula of C 6 H 11 NOS 2 and a molecular weight of 177.29 daltons. It is also known as 4-methylsulfinylbutyl isothiocyanate and (−)-1-isothiocyanato-4 (R)-(methylsulfinyl) butane. Sulforaphane has anti-carcinogenic properties due to its ability to generate process II detoxification enzymes (providing protection from certain carcinogens and other harmful electrophiles) such as glutathione S-transferase and quinone reductase It may be possible.
本発明者は、スルフォラファンが内皮細胞成長を阻害し抗血管形成特性を有することを発見した。これらの発見に従って、この発明は、成長抑制する量のスルフォラファン又は薬学的に許容可能な誘導体、塩若しくはそのプロドラッグを細胞に送達することによって、内皮細胞の成長を阻害する方法を提供する。この発明は、さら抗血管導通の量のスルフォラファン又は薬学的に許容可能な誘導体、塩若しくはそのプロドラッグを組織に送達することによって組織における血管導通を阻害する方法を提供する。 The inventor has discovered that sulforaphane inhibits endothelial cell growth and has anti-angiogenic properties. In accordance with these discoveries, the present invention provides a method of inhibiting endothelial cell growth by delivering a growth-inhibiting amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof to the cell. The invention further provides a method of inhibiting vascular conduction in tissue by delivering to the tissue an anti-vascular conduction amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof.
この方法は生体外または生体内で実施可能である。生体外で実施された時、内皮細胞あるいは血管導通された組織が、例えばいかに例証されるように、当業者に周知の条件下で培養される。細胞及び/又は組織は確立した細胞株のものが可能であり、あるいは被験体から得られた生検サンプルから培養することが可能である。それから、スルフォラファン又は薬学的に許容可能な誘導体、塩若しくはそのプロドラッグは培地に加えられ、医薬配合物の成分として送達される。 This method can be performed in vitro or in vivo. When performed in vitro, endothelial cells or vascularly conductive tissue are cultured under conditions well known to those skilled in the art, for example, as illustrated. The cells and / or tissues can be from established cell lines or can be cultured from a biopsy sample obtained from a subject. Sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof is then added to the medium and delivered as a component of the pharmaceutical formulation.
ラセミ化合物のスルフォラファンの精製は以下に説明する。一側面においては、精製されたスルフォラファンはD体のみである。別の側面では、それはL体のみである。ラセミ化合物、D又はL体は各々市販されており、また、各々を単離する方法は当該技術において知られている。例えば、CHIRAL−AGP、CHIRAL−CBH及びCHIRAL−HAS、のようなHPLCのキラルカラムの使用がChrom Tech International(AB)から可能である。また、Perkins−ElmerはSulfadexキラル分離キットの下、キラル分離キットを販売している。 The purification of the racemic sulforaphane is described below. In one aspect, the purified sulforaphane is only D-form. In another aspect, it is L-only. Racemates, D or L form are each commercially available, and methods for isolating each are known in the art. For example, the use of HPLC chiral columns such as CHIRAL-AGP, CHIRAL-CBH and CHIRAL-HAS is possible from Chrom Tech International (AB). Perkins-Elmer also sells chiral separation kits under the Sulfadex chiral separation kit.
塩類の例としては以下のものが挙げられる:酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、へプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭酸塩、沃酸塩、2−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、蓚酸塩、パルモエート、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、琥珀酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩及びウンデカン酸塩。 Examples of salts include: acetate, adipate, alginate, aspartate, benzoate, benzenesulfonate, bisulfate, butyrate, citrate, camphorate, Camphor sulfonate, cyclopentane propionate, digluconate, dodecyl sulfate, ethane sulfonate, fumarate, flucoheptanoic acid, glycerophosphate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydrochloride , Odorate, iodide, 2-hydroxyethanesulfonate, lactate, maleate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, oxalate, palmoate, pectate Sulfate, phenylpropionate, picrate, pivalate, propionate, oxalate, tartrate, thiocyanate, tosylate and unde Down salt.
塩類の他の例としては、Na+、NH4 +およびNW4 +(ここでWはC1-4アルキル基である)のような適切な陽イオンと組み合わせた本発明の化合物の陰イオンが含まれる。治療の使用のために、本発明の化合物の塩類は医薬的に許容できるものであろう。しかしながら、医薬的に許容可能でない酸と塩基との塩類は、例えば医薬的に許容できる化合物の調製又は精製に利用を見出すことができる。 Other examples of salts include the anions of the compounds of the present invention in combination with a suitable cation such as Na + , NH 4 + and NW 4 + (where W is a C 1-4 alkyl group). included. For therapeutic use, the salts of the compounds of the invention will be pharmaceutically acceptable. However, salts of acids and bases that are not pharmaceutically acceptable may find use, for example, in the preparation or purification of pharmaceutically acceptable compounds.
すべての治療が各個人にとって有効だとは限らず、故に、各患者に対する効能を測定する試験管内分析は有利であろう。本方法は、スルフォラファン療法が内皮細胞の病的増殖と関係する個別の被験体固有の疾患を治療するかどうか判断するこれらの手段を提供する。かかるものの例はここに提供される。例えば、組織生検材料を患者から分離し、細胞の成長及び増殖に有効な条件下で、ここで規定されるような有効量の医薬配合物又は治療と接触させる。従来の処置、例えばここに説明されるCPAE分析、によって判定されるような病的細胞の成長の阻害によって、当該発明の配合物及び/又は治療が有効に患者を治療できるということが示される。 Not all treatments are effective for each individual, so an in vitro analysis that measures efficacy for each patient would be advantageous. The method provides these means for determining whether sulforaphane therapy treats an individual subject-specific disease associated with pathological proliferation of endothelial cells. Examples of such are provided here. For example, a tissue biopsy is separated from a patient and contacted with an effective amount of a pharmaceutical formulation or treatment as defined herein under conditions effective for cell growth and proliferation. Inhibition of pathological cell growth as determined by conventional treatments, such as the CPAE analysis described herein, indicates that the inventive formulations and / or therapies can effectively treat patients.
血管形成即ち新しい血管の形成は新しい血管が形成される根本的な過程である。それは、生殖発生および創傷治癒のような本質的な生理学の現象に関与する。通常状態の下では、血管形成は高度に規制される。しかしながら、多くの疾病が永続的且つ無秩序な血管形成によって活動する。関節リウマチにおいて、新しい毛細血管が関節を侵食し軟骨を破壊する。糖尿病性網膜症においては、網膜の毛細血管が硝子体を侵食し出血し失明を引き起こす。腫瘍成長及び転移は血管形成依存である。ほとんどの主要な固形腫瘍は、到達可能な最大サイズが直径で1−2mmである、無血管で一見成長を休止した状態を経験する。このサイズまで、腫瘍細胞は単純な受動拡散によって必要な酸素および栄養素を得ることが可能である。これらの微視的な腫瘍塊は、周囲の成熟した宿主血管の補充により、やがて血管形成のスイッチを入れて成長する新しい毛細血管を発生させ始め、最終的には、腫瘍塊を浸透することができ、それにより腫瘍塊の容赦ない拡大及び血行性転移の潜在力を同様に推進する。血管形成のスイッチは、最初に、「腫瘍血管形成因子」(TAF)と呼ばれる成長因子の腫瘍細胞による異所性生産及び合成が引き金となって起きるという仮説が立てられた。 Angiogenesis, or the formation of new blood vessels, is the fundamental process by which new blood vessels are formed. It is involved in essential physiological phenomena such as reproductive development and wound healing. Under normal conditions, angiogenesis is highly regulated. However, many diseases are activated by permanent and unregulated angiogenesis. In rheumatoid arthritis, new capillaries erode joints and destroy cartilage. In diabetic retinopathy, retinal capillaries erode the vitreous and bleed, causing blindness. Tumor growth and metastasis are angiogenesis dependent. Most major solid tumors experience an avascular, seemingly quiescent growth with a maximum reachable size of 1-2 mm in diameter. Up to this size, tumor cells can obtain the necessary oxygen and nutrients by simple passive diffusion. These microscopic tumor masses begin to generate new capillaries that grow by switching on angiogenesis and eventually penetrate the tumor mass by the replacement of surrounding mature host blood vessels. And thereby promote the relentless expansion of the tumor mass and the potential for hematogenous metastasis as well. The angiogenic switch was initially hypothesized to be triggered by ectopic production and synthesis by tumor cells of a growth factor called “tumor angiogenic factor” (TAF).
この発明は、さらに、被験体に治療上の有効量のスルフォラファン(ラセミ体、D−又はL−)あるいはこれらの1つ以上を含んでいる医薬配合物を投与することにより、被験体の中で病的新血管新生に関連した病気を治療する方法を提供する。この文脈の中で用いられるように、「治療する」ことは新血管新生の縮小と同様に病的な新血管新生に関連した病状も緩和することを意味する。斯かる状態の例としては、これらに限定されないが、関節炎の状態、新生血管に基づく皮膚病的状態、糖尿病性網膜症、カポジ肉腫、加齢黄斑変性症、末梢欠陥拡張症、緑内障、ケロイド、コーニカルな拒絶反応、創傷肉芽化(wound granularization)、血管線維腫、オスラー−ウェーバー症候群、心筋の血管形成、乾癬および硬皮症が挙げられる。典型的な関節炎の条件は、関節リウマチと骨関節炎から成るグループから選ばれる。がんと固形腫瘍の治療については、「治療する」ことは、腫瘍のための及び/又は成長のため腫瘍によって必要とされる栄養の不足をもたらす、血管の成長の阻害を含む。腫瘍及び腫瘤はサイズが減少し、恐らく、消えるであろう。関節炎の状態の治療のための投薬は、軟骨、特に関節における血管形成の減少をもたらし、またこれら領域における可動性及び柔軟性の増加をもたらすであろう。乾癬の治療については、投薬により、痂皮形成、剥落、皮膚の表面下に見える血管のような皮膚科学的病徴が縮小するであろう。糖尿病性網膜症では、活性分画の投薬により、網膜における外来性血管の形成が減少し遮蔽のない視覚がもたらされるだろう。カポジ肉腫の治療では、活性分画の投薬により、血管の成長及び/又はさらなる形成を阻害し、それによって、生じる病巣及び/又は腫瘍の形成を阻害するであろう。 The invention further provides in a subject by administering to a subject a therapeutically effective amount of sulforaphane (racemic, D- or L-) or a pharmaceutical formulation comprising one or more thereof. Methods of treating diseases associated with pathological neovascularization are provided. As used in this context, “treating” means relieving the pathology associated with pathological neovascularization as well as reducing neovascularization. Examples of such conditions include, but are not limited to, arthritic conditions, neovascular-based dermatologic conditions, diabetic retinopathy, Kaposi's sarcoma, age-related macular degeneration, peripheral defect dilatation, glaucoma, keloid, Conical rejection, wound granularization, angiofibroma, Osler-Weber syndrome, myocardial angiogenesis, psoriasis and scleroderma. Typical arthritic conditions are selected from the group consisting of rheumatoid arthritis and osteoarthritis. For the treatment of cancer and solid tumors, “treating” includes inhibition of blood vessel growth, resulting in a lack of nutrients needed for the tumor and / or for growth by the tumor. Tumors and masses will decrease in size and will probably disappear. Medications for the treatment of arthritic conditions will result in decreased angiogenesis in cartilage, particularly joints, and will increase mobility and flexibility in these areas. For the treatment of psoriasis, medication will reduce dermatological symptoms such as scab formation, flaking, and blood vessels visible below the surface of the skin. In diabetic retinopathy, administration of the active fraction will reduce the formation of extraneous blood vessels in the retina, resulting in unshielded vision. In the treatment of Kaposi's sarcoma, administration of the active fraction will inhibit blood vessel growth and / or further formation, thereby inhibiting the resulting lesion and / or tumor formation.
マウス、ラット又は人間の患者のような被験体に前記活性分画が投与される時、薬剤を医薬的に許容できるキャリアに加えて被験体に全身、経口、経皮又は局所投与することが可能である。治療のための量は経験的に決定することができ、治療される病変、治療される被験体、および治療法の中で使用される分画の形式の毒性に応じて変わるだろう。活性分画は、経口、静脈内、腹腔内あるいは経皮的に送達することが可能である。動物に送達されると、当該方法はさらに活性分画の効能を確認するのに有用である。 When the active fraction is administered to a subject such as a mouse, rat or human patient, the drug can be administered systemically, orally, transdermally or locally to the subject in addition to a pharmaceutically acceptable carrier. It is. The amount for treatment can be determined empirically and will vary depending on the lesion being treated, the subject being treated, and the toxicity of the fractional format used in the therapy. The active fraction can be delivered orally, intravenously, intraperitoneally or transdermally. Once delivered to an animal, the method is further useful to confirm the efficacy of the active fraction.
動物モデルの例として、ヌードマウス(Balb/c NCR nu/nu メス、Simonsen、Gilroy(カリフォルニア州))のグループに対し、各々、皮下に、ここに規定されるような約105から約109個の超増殖細胞の接種を行う。
移植片が定着されると、化合物は、例えば移植片周辺の皮下注射によって投与される。
移植片サイズの縮小を判定する測定は週に二度ノギスを使用して、二次元の中でなされる。
As an example of an animal model, a group of nude mice (Balb / c NCR nu / nu female, Simonsen, Gilroy, Calif.), Each of which is subcutaneously about 10 5 to about 10 9 as defined herein. Inoculate individual hyperproliferative cells.
Once the graft is established, the compound is administered, for example, by subcutaneous injection around the graft.
Measurements to determine graft size reduction are made in two dimensions using a caliper twice a week.
Jackson研究所(Maine)からのMRL/lprマウス(MRL/MpJ−Faslpr)は、関節炎の状態における効能をテスト又はモニターするのに有用である。積極的な治療の利益としては、動物の関節および後脚の腫れ物の縮小、並びにX線によってモニターすることができる軟骨劣化の低減が挙げられる。 MRL / lpr mice (MRL / MpJ-Fas lpr ) from Jackson Laboratories (Maine) are useful for testing or monitoring efficacy in arthritic conditions. The benefits of aggressive treatment include reduction of animal joint and hind limb swellings and reduction of cartilage degradation that can be monitored by x-ray.
ルイスラット(年齢8週、130−150g。Jackson研究所、Maine(アメリカ))のグループは牛のタイプII(BII)コラーゲンに免疫を有し、関節炎の状態を引き起こす。BIIは400μg/mlで0.1M酢酸に溶解する。それを、尾の付け根に、同体積のBIIおよびICFA(不完全なフロイントアジュバント)の20μg(100μl)の濃度の乳剤とともに経皮注入する。関節炎の状態が確立されると、4点基準の観察を、28日の期間の間、種種の肉体的病気に対して行う。適切なように、他の動物モデルも使用してよい。 A group of Lewis rats (age 8 weeks, 130-150 g. Jackson Laboratory, Maine, USA) is immune to bovine type II (BII) collagen and causes an arthritic condition. BII is dissolved in 0.1 M acetic acid at 400 μg / ml. It is injected transdermally at the base of the tail with an equal volume of BII and ICFA (incomplete Freund's adjuvant) at a concentration of 20 μg (100 μl). Once the arthritic condition is established, a 4-point observation is made for various physical illnesses for a period of 28 days. Other animal models may be used as appropriate.
生体内投与は、治療の道程全体に渡り連続的にあるいは断続的に、一回分において達成することが可能である。投与の最も有効な手段及び量を決定する方法は、当業者によく知られており、治療に使用された配合物、治療の目的、治療する標的細胞および治療される被験体に応じて様々であるだろう。単一又は複合の投与は、治療する内科医によって選択されている投与量レベルおよびパターンで実行することが可能である。適切な製剤投薬量及び薬剤の投与の方法は以下に見ることができる。 In vivo administration can be accomplished in a single dose, continuously or intermittently throughout the course of treatment. Methods of determining the most effective means and amount of administration are well known to those of skill in the art and will vary depending on the formulation used for treatment, the purpose of the treatment, the target cell being treated and the subject being treated. there will be. Single or multiple administrations can be carried out with the dose level and pattern being selected by the treating physician. Appropriate formulation dosages and methods of drug administration can be found below.
本発明の配合物及び医薬製剤は、医薬配合物中の有効成分のように、従来の処置に従い投与によって人間および他の動物を治療するために、薬剤および健康補助食品の製造において使用することが可能である。 The formulations and pharmaceutical formulations of the present invention can be used in the manufacture of pharmaceuticals and dietary supplements to treat humans and other animals by administration according to conventional treatments, such as active ingredients in pharmaceutical formulations. Is possible.
医薬配合物は、経口的に、経鼻的に、非経口的にあるいは吸入療法によって投与することができ、錠剤、舐剤、顆粒、カプセル、丸剤、アンプル、坐薬あるいはエアゾール型の形式をとることができる。さらに、それらは、水性又は非水性の希釈剤、シロップ、顆粒物、粉剤の中で有効成分の懸濁液、溶液及び乳濁液の形式をとってもよい。本発明の合成物に加えて、医薬配合物はまた、他の医薬的有効成分を含むことが可能である。 The pharmaceutical formulation can be administered orally, nasally, parenterally or by inhalation therapy and takes the form of a tablet, electuary, granule, capsule, pill, ampoule, suppository or aerosol type be able to. In addition, they may take the form of suspensions, solutions and emulsions of the active ingredient in aqueous or non-aqueous diluents, syrups, granules, powders. In addition to the compositions of the present invention, the pharmaceutical formulation can also include other pharmaceutically active ingredients.
特にまた、有効成分としてここにいう活性分画を、口、直腸、鼻、局所(経皮、エアゾール、頬及び舌下腺を含む)、膣、非経口(皮下、筋肉内、静脈内・皮内を含む)及び肺を含む任意の適切な経路によって治療のため投与してよい。受容者の状態および年齢、および治療されている疾病に応じて好ましい経路が異なるであろうこともまた良いであろう。 In particular, the active fraction mentioned here as an active ingredient is applied to the mouth, rectum, nose, topical (including transdermal, aerosol, buccal and sublingual glands), vagina, parenteral (subcutaneous, intramuscular, intravenous and skin). And may be administered for treatment by any suitable route, including the lung). It would also be good that the preferred route will vary depending on the condition and age of the recipient and the disease being treated.
方法が生体内で実施される場合、病的な内皮細胞成長あるいは新血管新生は被験体において阻害される。治療上の有効量のスルフォラファン(ラセミ化合物、D−又はL−)、又は、その薬学的に許容可能な誘導体、塩若しくはプロドラッグは、その意図した結果を引き出すのに有効な量被験体に送達される。この発明は、さらに、被験体に治療上有効な量あるいは成長抑制する量のスルフォラファン(ラセミ化合物、D−又はL−)又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグを投与することにより、被験体における病的な新血管新生に関連した病気を治療する方法を提供する。かかる状態としては、これらに限定されないが、関節炎の状態、新生血管に基づく皮膚病的状態、糖尿病性網膜症、再狭窄、カポジ肉腫、加齢黄斑変性症、毛細血管拡張症、緑内障、ケロイド、角膜移植拒絶、創傷肉芽化、血管線維腫、オスラー−ウェーバー症候群、心筋の血管形成、乾癬および硬皮症が挙げられる。典型的な関節炎の状態は、関節リウマチと骨関節炎から成るグループから選ばれる。 When the method is performed in vivo, pathological endothelial cell growth or neovascularization is inhibited in the subject. A therapeutically effective amount of sulforaphane (racemate, D- or L-), or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof, delivered to the subject in an amount effective to elicit its intended result Is done. The invention further comprises administering to a subject a therapeutically effective or growth-inhibiting amount of sulforaphane (racemic compound, D- or L-) or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof, Methods of treating a disease associated with pathological neovascularization in a subject are provided. Such conditions include, but are not limited to, arthritic conditions, neovascular dermatologic conditions, diabetic retinopathy, restenosis, Kaposi's sarcoma, age-related macular degeneration, telangiectasia, glaucoma, keloid, Examples include corneal transplant rejection, wound granulation, angiofibroma, Osler-Weber syndrome, myocardial angiogenesis, psoriasis and scleroderma. A typical arthritic condition is selected from the group consisting of rheumatoid arthritis and osteoarthritis.
スルフォラファンが、マウス、ラットあるいは人間の患者のような被験体に投与される場合、薬剤を医薬的に許容できるキャリアに加え、被験体に全身的、経口的、経皮的又は局所的に投与することが可能である。治療のための量は経験的に決定することができ、治療している病変、治療している被験体および治療される状態に応じて変わるであろう。 When sulforaphane is administered to a subject, such as a mouse, rat or human patient, the drug is added to the subject systemically, orally, transdermally or locally in addition to a pharmaceutically acceptable carrier. It is possible. The amount to treat can be determined empirically and will vary depending on the lesion being treated, the subject being treated and the condition being treated.
薬物成分は単独で投与することが可能だが、それを、上に規定されるように、少なくとも1つの有効成分をそれのための1つ以上の医薬的に許容できるキャリアー及び随意に他の治療薬剤と一緒に含む医薬製剤として提示することが好ましい。キャリアーはそれぞれ、製剤の他の成分と互換性をもち患者にとって有害でないという意味において「許容可能」でなければならない。 While the drug component can be administered alone, it is provided with at least one active ingredient as defined above, one or more pharmaceutically acceptable carriers for it and optionally other therapeutic agents. It is preferable to present it as a pharmaceutical formulation containing together. Each carrier must be “acceptable” in the sense of being compatible with the other ingredients of the formulation and not injurious to the patient.
製剤は、経口、直腸、鼻、局所(経皮、頬、舌下腺を含む)、膣、非経口(皮下、筋肉内、静脈内及び皮内)並びに肺の投与に適切なものを含む。その製剤は、ユニット投薬量形式で便利なように示してもよく、薬学技術において周知の任意の方法によって調製してもよい。かかる方法は、有効成分をキャリアに混合する工程を含み、それは1つ以上の副成分を構成する。一般に、製剤は、液体のキャリアーあるいは微細に分割された固体キャリアーを備えた有効成分あるいは両方を一様且つ密に混合し、そして必要ならば、製品を成型することにより調製される。 Formulations include those suitable for oral, rectal, nasal, topical (including transdermal, buccal, sublingual gland), vaginal, parenteral (subcutaneous, intramuscular, intravenous and intradermal) and pulmonary administration. The formulations may be conveniently presented in unit dosage form and may be prepared by any method well known in the pharmaceutical art. Such methods include the step of bringing into association the active ingredient with the carrier, which constitutes one or more accessory ingredients. In general, the formulations are prepared by uniformly and intimately bringing into association the active ingredient with liquid carriers or finely divided solid carriers or both, and then, if necessary, shaping the product.
経口投与に適した本発明の製剤は、所定量の有効成分を各々含んだカプセル、カシェ剤又は錠剤のような個単位として、粉剤または顆粒として、水性又は非水性の液体の溶液又は懸濁液として、あるいは水中油型乳濁液又は油中水型乳濁液として、提供してよい。有効成分も大型丸薬、舐剤あるいはペーストとして提供してよい。 The preparation of the present invention suitable for oral administration is an aqueous or non-aqueous liquid solution or suspension as individual units such as capsules, cachets or tablets each containing a predetermined amount of the active ingredient, as a powder or granules. Or as an oil-in-water emulsion or a water-in-oil emulsion. The active ingredient may also be provided as a large pill, electuary or paste.
錠剤は随意に1以上の副成分と共に、圧縮又は成型してよい。任意でバインダー(例えばポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルローズ)、潤滑性の不活性希釈剤、防腐剤、錠剤分解物質(例えばデンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム)、界面活性又は分散剤と混合した粉末や顆粒のような易流動状の有効成分を、適切な機械の中でを圧縮することにより圧縮された錠剤を調製して良い。適切な機械において、不活性薬品希釈剤で湿潤された粉末化合物の混合物を成型することにより、成型された錠剤を作成してよい。錠剤は、例えば、所望の放出プロフィールを与えるために様々な割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを使用して、錠剤中の有効成分の放出率を遅くする又は制御するように、任意で被覆又は刻み目を施してよく、また配合してよい。錠剤には、胃以外に腸の部分において放出するために腸溶コーティングを任意で与えてよい。 A tablet may be compressed or molded, optionally with one or more accessory ingredients. Optional binders (eg povidone, gelatin, hydroxypropyl methylcellulose), lubricating inert diluents, preservatives, tablet disintegrating substances (eg sodium starch glycolate, crosslinked povidone, crosslinked sodium carboxymethylcellulose), surfactants or dispersants Compressed tablets may be prepared by compressing free-flowing active ingredients such as powders and granules mixed with in a suitable machine. Molded tablets may be made by molding in a suitable machine a mixture of the powdered compound moistened with an inert chemical diluent. Tablets may be optionally coated or scored, for example, using hydroxypropyl methylcellulose at various ratios to provide the desired release profile, to slow or control the release rate of the active ingredient in the tablet. Well, you may mix. Tablets may optionally be provided with an enteric coating for release in the intestinal portion other than the stomach.
口内の局所投与に適した製剤は、たいてい蔗糖とアカシア又はトラガカントゴムといった風味付け基剤中に有効成分を有する舐剤、ゼラチンオ及びグリセリン又は蔗糖およびアカシアのような不活性基剤中に有効成分を有するトローチ、及び適切な液体キャリアー中に有効成分をする口内洗浄液、を含む。 Formulations suitable for topical administration in the mouth usually have the active ingredient in an inactive base such as sucrose and acacia or tragacanth gum and other flavoring bases, gelatino and glycerin or sucrose and acacia Including lozenges and mouthwashes that contain the active ingredients in a suitable liquid carrier.
本発明による局所投与用の医薬配合物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアゾールあるいは油として配合してよい。あるいは、製剤は、有効成分と、任意で1以上の添加薬又は希釈剤を浸漬された包帯又は絆創膏のような、傷当て又は包帯剤を含んでよい。 Pharmaceutical formulations for topical administration according to the invention may be formulated as ointments, creams, suspensions, lotions, powders, solutions, pastes, gels, sprays, aerosols or oils. Alternatively, the formulation may include a wound dressing or dressing, such as a bandage or bandage soaked with the active ingredient and optionally one or more additives or diluents.
目あるいは他の外側組織、例えば口や皮膚、の疾病については、製剤は、有効成分を含有する局所軟膏かクリームとして好ましく適用される。軟膏に配合する場合、薬物はパラフィン系又は水溶性軟膏基剤とともに使用してよい。あるいは、薬成分は、水中油型クリーム基剤を有するクリームの中に配合してよい。 For diseases of the eyes or other outer tissues such as mouth and skin, the formulations are preferably applied as topical ointments or creams containing the active ingredient. When formulated in an ointment, the drug may be used with a paraffinic or water-soluble ointment base. Alternatively, the medicinal component may be formulated in a cream having an oil-in-water cream base.
もし望むならば、クリーム基剤の水相は、例えば、約30%w/wの多価アルコール、即ちプロピレングリコール、ブタン−1,3−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセリンおよびポリエチレングリコールのような2つ以上の水酸基を有するアルコール及びそれらの混合物、を含んでよい。望ましくは局所製剤は、皮膚あるいは他の影響を受けた領域を介して薬成分の吸収あるいは浸透を増強する化合物を含有してよい。そのような皮膚の浸透エンハンサーの例としては、ジメチルスルホキシド及び関連する類似物質が挙げられる。 If desired, the aqueous phase of the cream base can contain, for example, about 30% w / w polyhydric alcohols such as propylene glycol, butane-1,3-diol, mannitol, sorbitol, glycerin and polyethylene glycol. Alcohols having one or more hydroxyl groups and mixtures thereof may be included. Desirably, the topical formulation may contain a compound that enhances absorption or penetration of the drug ingredient through the skin or other affected area. Examples of such skin penetration enhancers include dimethyl sulfoxide and related analogs.
この発明の乳剤の油相は、任意の知られた形でで既知の成分から構成されてよい。
この相は単に乳化剤(他にはエマルジェントとして知られている)を含んでもよいが、望ましくは脂肪若しくは油又は脂肪と油との両方と少なくとも1の乳化剤との混合物を有する。好ましくは、水性乳化剤は油性乳化剤と共に含まれ、安定剤の役割をする。
また、それは油と脂肪の両方を含むと好ましい。
ともに、安定剤を有する又は有さない乳化剤はいわゆる乳化蝋を構築し、また、油及び/又は脂肪と一緒の蝋は、クリーム製剤の油分散相を形成する、いわゆる乳化軟膏基剤を構築する。
The oil phase of the emulsions of this invention may be composed of known ingredients in any known manner.
This phase may simply comprise an emulsifier (otherwise known as an emulgent), but desirably comprises a fat or oil or a mixture of both fat and oil and at least one emulsifier. Preferably, the aqueous emulsifier is included with the oil emulsifier and serves as a stabilizer.
It is also preferred that it contains both oil and fat.
Together, emulsifiers with or without stabilizers build so-called emulsifying waxes, and waxes with oils and / or fats build so-called emulsifying ointment bases that form the oil-dispersed phase of cream formulations. .
本発明の製剤で使用するに適したエマルジェント及び乳化安定剤としては、トゥイーン60、スパン80、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、グリセリンモノステアリン酸塩およびラウリル硫酸ナトリウムが挙げられる。
Emulsions and emulsion stabilizers suitable for use in the formulations of the present invention include
医薬的乳濁薬剤の中で使用されるであろうほとんどの油の中への活性合成物の溶解度が非常に低いので、製剤に適した油又は脂肪の選択は所望の化粧特性の達成に基づく。したがって好ましくは、クリームは、チューブ又は他の容器からの漏出を回避するのに適した粘稠度を有する、油っぽくなく、汚れず、洗うことのできる製品であるべきである。ジイソアジピン酸塩、イソセチルステアリン酸塩、ココナッツ脂肪酸のプロピレングリコールジエステル、イソプロピルミリスチン酸塩、デシルオレイン酸塩、イソプロピルパルミチン酸塩、ブチルステアリン酸塩、2−エチルヘキシルパルミチン酸塩又はCrodamol CAPとして知られている分岐鎖エステルの混合物、のような直鎖あるいは分岐鎖の一又は二塩基アルキルエーテル二塩基のアルキル基のエステルが使用されてもよく、最後の3つが好ましいエステルである。これらは、単独であるいは要求される特性に応じた組み合わせの中で使用されてもよい。あるいは、白い柔軟なパラフィン、流動パラフィンあるいは他の鉱油のような高い融点の脂質を使用することが可能である。 The choice of oil or fat suitable for the formulation is based on achieving the desired cosmetic properties, since the solubility of the active compound in most oils that will be used in pharmaceutical emulsions is very low. . Preferably, therefore, the cream should be a non-greasy, non-staining and washable product with a consistency suitable to avoid leakage from tubes or other containers. Known as diisoadipate, isocetyl stearate, propylene glycol diester of coconut fatty acid, isopropyl myristate, decyl oleate, isopropyl palmitate, butyl stearate, 2-ethylhexyl palmitate or Crodamol CAP Linear or branched mono- or dibasic alkyl ether dibasic alkyl esters such as mixtures of branched esters may be used, the last three being the preferred esters. These may be used alone or in a combination depending on required characteristics. Alternatively, high melting point lipids such as white soft paraffin, liquid paraffin or other mineral oils can be used.
また、目への局所投与に適した製剤は、適切なキャリアー、特に有効成分のための水性溶剤、に有効成分が溶解又は懸濁された点眼薬を含む。直腸投与のための製剤は、例えばカカオバターやサリチル酸塩を有する適切な基剤を含んだ坐薬として提供してよい。 Formulations suitable for topical administration to the eye also include eye drops wherein the active ingredients are dissolved or suspended in suitable carriers, especially aqueous solvents for the active ingredients. Formulations for rectal administration may be presented as a suppository with a suitable base comprising for example cocoa butter or a salicylate.
膣投与に適した製剤は、プロドラッグ成分に加え、当技術において適切であると知られているようなキャリアーを含んでいるペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡あるいはスプレー製剤として提供してよい。 Formulations suitable for vaginal administration are provided as pessaries, tampons, creams, gels, pastes, foams or spray formulations containing carriers in addition to the prodrug ingredients as known in the art. Good.
キャリアーが固体である鼻投与に適した製剤は、例えば約20〜約500ミクロンの範囲の粒子径を有する粗粉末を含み、嗅ぎタバコを吸うように、即ち鼻に近づけた粉末の容器から鼻道を介して速やかに吸引することにより、投与される。例えば鼻腔用スプレー、点鼻、又はネビュライザーによるエアゾール投与のような投薬のためにキャリアーが液体である適切な製剤には、プロドラッグ成分の水溶液又は油性溶液が含まれる。 Formulations suitable for nasal administration in which the carrier is a solid include, for example, a coarse powder having a particle size in the range of about 20 to about 500 microns and nasal passages from a container of powder to snuff, ie close to the nose. Is administered by rapid aspiration through Suitable formulations in which the carrier is a liquid for administration such as aerosol administration by nasal spray, nasal spray or nebulizer include aqueous solutions or oily solutions of the prodrug component.
非経口投与に適した製剤には、酸化防止剤、緩衝液、制菌剤及び製剤を対象の受容者の血液と等張にする溶質を含んでよい水性及び非水性の等張無菌注入溶液;並びに懸濁化剤及び増粘剤と、血液成分若しくは1以上の器官への化合物を対象とするよう設計されているリポソーム又は他の微小粒子系と、を含んでよい水性及び非水性無菌懸濁液が含まれる。製剤は、例えばアンプルやガラス瓶といったユニットドーズ又はマルチドーズ封入容器に入って提供しても良いし、使用直前に、例えば注入用水のような無菌の液体キャリアーの追加だけが必要な、冷凍乾燥された(凍結乾燥された)状態で保存しても良い。即席の注入溶液および懸濁液は、無菌の粉末、顆粒、および以前に記述された種類の錠剤から調製してもよい。 Formulations suitable for parenteral administration include aqueous and non-aqueous isotonic sterile infusion solutions that may contain antioxidants, buffers, bactericides and solutes that render the formulation isotonic with the blood of the intended recipient; And aqueous and non-aqueous sterile suspensions that may include suspending and thickening agents and liposomes or other microparticle systems designed to target blood components or compounds to one or more organs Contains liquid. The formulation may be provided in unit dose or multi-dose enclosures, such as ampoules and glass bottles, or freeze-dried immediately before use, requiring only the addition of a sterile liquid carrier, such as water for injection. It may be stored in a (freeze-dried) state. Extemporaneous injection solutions and suspensions may be prepared from sterile powders, granules and tablets of the kind previously described.
好ましい単位量投薬製剤は1日分の量またはユニット、ここに上述されたような1日の副服用量、又は薬成分のその適切な分画を含んでいるものである。 Preferred unit dosage formulations are those containing a daily dose or unit, a daily sub-dose as described herein above, or an appropriate fraction thereof of the drug ingredient.
特に上に言及された成分に加えて、この発明の製剤が、問題の種類の製剤に関する当技術における従来の他の試剤を含んでよい、例えば経口投与に適したものが甘味料、増粘剤及び香料のようなさらなる試剤を含んでもよい、ということは理解されるはずである。 In addition to the ingredients specifically mentioned above, the formulations of this invention may contain other conventional agents in the art relating to the type of formulation in question, eg those suitable for oral administration are sweeteners, thickeners It should be understood that additional agents such as and perfumes may be included.
スルフォラファン(ラセミ化合物又は光学的に純粋な組成)、そのプレドラッグ、塩又は誘導体及びその配合物はまた、獣医学の製剤の形で使用するために供してよく、それは例えば当技術における従来の方法によって調製してよい。 Sulforaphane (racemic or optically pure composition), pre-drugs, salts or derivatives thereof and formulations thereof may also be provided for use in the form of veterinary preparations, for example, conventional methods in the art May be prepared by
本発明は、更に、新血管新生又は内皮細胞成長を阻害する治療薬をスクリーニングする方法を提供する。この選別は、
(a)前記薬を適切な細胞又は組織サンプルと接触させる工程と、
(b)前記適切な細胞又は組織サンプルの別のサンプルを治療上有効な量のスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグと接触させる工程と、
(c)前記工程(a)のサンプルの成長を前記工程(b)のサンプルの成長と比較する工程であって、前記工程(b)のサンプルと同じ又は類似する程度に成長を阻害する工程(a)のいずれの薬も新血管新生又は内皮細胞の成長を阻害する治療薬である工程を必要とする。
The present invention further provides methods for screening for therapeutic agents that inhibit neovascularization or endothelial cell growth. This selection is
(A) contacting the drug with a suitable cell or tissue sample;
(B) contacting another sample of the appropriate cell or tissue sample with a therapeutically effective amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof;
(C) a step of comparing the growth of the sample of the step (a) with the growth of the sample of the step (b), the step of inhibiting the growth to the same or similar degree as the sample of the step (b) Any drug of a) requires a step that is a therapeutic agent that inhibits neovascularization or endothelial cell growth.
また、本発明によって、被験体における病的新血管新生に関連する病状を治療するためのキットが提供される。このキットは、治療上有効な量のスルフォラファン(ラセミ体、(D)または(L))又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグと使用説明書とを含む。このキットは、がん及び固形腫瘍、関節炎の状態、新生血管に基づく皮膚病的状態、糖尿病性網膜症、カポジ肉腫、加齢黄斑変性症、再狭窄、毛細血管拡張症、緑内障、ケロイド、角膜移植拒絶反応、創傷肉芽化、血管線維腫、オスラーウェーバー症候群、心筋の血管形成、硬皮症、乾癬、関節リウマチ及び骨関節炎から成る群より選ばれる病状を治療するのに役立つ。 The present invention also provides a kit for treating a pathology associated with pathological neovascularization in a subject. The kit includes a therapeutically effective amount of sulforaphane (racemic, (D) or (L)) or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof and instructions for use. This kit includes cancer and solid tumors, arthritic conditions, neovascular dermatologic conditions, diabetic retinopathy, Kaposi's sarcoma, age-related macular degeneration, restenosis, telangiectasia, glaucoma, keloids, cornea It is useful for treating a medical condition selected from the group consisting of transplant rejection, wound granulation, angiofibroma, Osler-Weber syndrome, myocardial angiogenesis, scleroderma, psoriasis, rheumatoid arthritis and osteoarthritis.
以下の実施例は本発明を説明するが制限しないことを目的としている。 The following examples are intended to illustrate but not limit the invention.
実施例1
スルフォラファンの単離及び精製
スルフォラファンおよびスルフォラファンニトリルは、Matusheski他 (2001) J. Agric. Food Chem. 49:1867−1872に従いアブラナ科の種子から単離精製されている。(D,L)−スルフォラファンはKim, s. and Yi x., (1986) 3. Org. Chem 51:2613−2615に従い合成可能である。D−スルフォラファンはキラルクロマトグラフィーカラムを用いてラセミ混合物(D,L)−スルフォラファンから精製される。スルフォラファンは全てLKT Laboratories社から商業的に入手することが可能である。
Example 1
Isolation and purification of sulforaphane Sulforaphane and sulforaphane nitrile were prepared according to the method of Matusheski et al. Agric. Food Chem. 49: 1867-1872 isolated and purified from Brassicaceae seeds. (D, L) -sulforaphane is described in Kim, s. and Yi x. (1986) 3. Org. Chem 51: 2613-2615. D-sulforaphane is purified from the racemic mixture (D, L) -sulforaphane using a chiral chromatography column. All sulforaphanes are commercially available from LKT Laboratories.
実施例2
スルフォラファンによる内皮細胞阻害分析
内皮細胞分析:
Connally他(1986) Anal. Biochem. 152:136−4を修正した(Liang and Wong (2000) 血管形成:分子から統合的薬理学へ、Maradoudakis著, Kluwer Academic/Plenum. Publishers, New York) D.T. Connolly他 (1986) Anal. Biochem. 152:136−140 手順に従い分析を行った。American Type Culture Collection (ATCC)から得た CPAE(牛の心肺動脈内皮細胞)は、最小必須培地10Eにおいてほぼ95%のコンフルエンスまで成長した。細胞を、0.25%のトリプシン溶液を備えた組織培養フラスコから放出し、10000細胞/ウェルの密度で同じ培地中24ウェルの組織培養シャーレの中で平板培養した。シャーレを5.0%のCO2培養器中において37℃で8時間培養した後。分析サンプル群および対照群を加えた。再現性を保証するために100μL/ウェルで2つの異なるウェルにそれぞれのサンプルを搭載した。60時間サンプルとともに定温培養した後、培地を吸引し、そして、細胞の数を細胞の酸性ホスファターゼの比色定量測定に基づいて測定した。
Example 2
Endothelial cell inhibition analysis by sulforaphane Endothelial cell analysis:
Conallyly et al. (1986) Anal. Biochem. 152: 136-4 (Liang and Wong (2000) Angiogenesis: From molecular to integrative pharmacology, by Maraudodakis, Kluwer Academic / Plenum. Publishers, New York). T. T. et al. Connolly et al. (1986) Anal. Biochem. 152: 136-140 The analysis was performed according to the procedure. CPAE (Bovine Cardiopulmonary Endothelial Cells) obtained from the American Type Culture Collection (ATCC) grew to approximately 95% confluence in minimal essential medium 10E. Cells were released from tissue culture flasks with 0.25% trypsin solution and plated in 24-well tissue culture dishes in the same medium at a density of 10,000 cells / well. After the petri dish was cultured at 37 ° C. for 8 hours in a 5.0% CO 2 incubator. An analytical sample group and a control group were added. To ensure reproducibility, each sample was loaded into two different wells at 100 μL / well. After incubation for 60 hours with the sample, the medium was aspirated and the number of cells was determined based on a colorimetric measurement of cellular acid phosphatase.
結果と議論:
スルフォラファンの各エナンチオマーは内皮細胞成長を阻害する。内皮細胞分析の結果により、内皮細胞分析へのスルフォラファンの追加が内皮細胞成長を著しく阻害することを証明することが示される。分析において、L−スルフォラファン、D−スルフォラファン及びD,L−スルフォラファンが全て、6.25μg/mLの濃度で内皮細胞増殖の92%を超える阻害を発現した。これらの結果は、スルフォラファンが非常に有効な内皮細胞成長阻害剤であることを示す。 Each enantiomer of sulforaphane inhibits endothelial cell growth. The results of the endothelial cell analysis show that the addition of sulforaphane to the endothelial cell analysis demonstrates that it significantly inhibits endothelial cell growth. In the analysis, L-sulforaphane, D-sulforaphane and D, L-sulforaphan all expressed greater than 92% inhibition of endothelial cell proliferation at a concentration of 6.25 μg / mL. These results indicate that sulforaphane is a very effective endothelial cell growth inhibitor.
また、血管形成の阻害についての濃度依存性試験がL−スルフォラファン、D−スルフォラファン及びD,L−スルフォラファンについて行われ、図1に示された。非常に低い濃度でさえ、スルフォラファンが内皮細胞増殖の非常に強い阻害剤であることは、明らかである。 In addition, a concentration-dependent test for angiogenesis inhibition was performed on L-sulforaphane, D-sulforaphane and D, L-sulforaphane and is shown in FIG. It is clear that sulforaphane is a very strong inhibitor of endothelial cell proliferation even at very low concentrations.
実施例3
スルフォラファンによる種種のがん細胞株の阻害
がん細胞株
分析は下記の手順で行われた。使用されるがん細胞株、Lncap(前立腺)、SW480(大腸)およびHTB72(黒色腫)を、American Type Culture Collection(ATCC)から商業的に入手した。がん細胞は、25cm2フラスコにおいてそれぞれの培地中90%のコンフルエンスへ成長する。細胞はトリプシン処理され、計数され、1ml当たり10000細胞に希釈される。1mlの細胞を24ウェルの培養シャーレにそれぞれ加え、そして、細胞を、終夜付着させる。その後、試験サンプルは、50ulのH2O、PBS(リン酸緩衝生理食塩水)あるいは1X培地の何れかに様々な濃度で加えられます。対照試料を含んでいるウェルは、同体積の溶液を受ける。細胞を、37℃及び5%CO2で60時間成長させる。培地を各々からよく取り除いて、分析を始めるために細胞を1mlのPBSで一度すすぐ。その後、500μlの基剤溶液(100mM酢酸ナトリウム、pH5.5の0.2%トリトンX−100、1mg/mlのp−ニトロフェニルリン酸塩)を加える。シャーレを37℃で2時間培養する。その後、1mlの0.1M水酸化ナトリウムを加え、光学濃度をマイクロプレートリーダにより410nmで読みとる。
Example 3
Inhibition of various cancer cell lines by sulforaphane Cancer cell lines Analysis was performed as follows. The cancer cell lines used, Lncap (prostate), SW480 (large intestine) and HTB72 (melanoma) were obtained commercially from the American Type Culture Collection (ATCC). Cancer cells grow to 90% confluence in their respective media in 25 cm 2 flasks. Cells are trypsinized, counted and diluted to 10,000 cells per ml. 1 ml of cells is added to each 24-well culture dish and the cells are allowed to attach overnight. Test samples are then added at various concentrations to either 50 ul H 2 O, PBS (phosphate buffered saline) or 1X medium. Wells containing control samples receive the same volume of solution. Cells are grown for 60 hours at 37 ° C. and 5% CO 2 . Remove media well from each and rinse cells once with 1 ml PBS to begin analysis. Then 500 μl of base solution (100 mM sodium acetate, 0.2% Triton X-100, pH 5.5, 1 mg / ml p-nitrophenyl phosphate) is added. Incubate the petri dish at 37 ° C. for 2 hours. Thereafter, 1 ml of 0.1 M sodium hydroxide is added and the optical density is read at 410 nm with a microplate reader.
結果と議論
L−スルフォラファンによる様々ながん細胞株についての阻害分析の結果を表4〜6中で以下に示す。
我々はまた、L−スルフォラファンが、Lncap(前立腺癌細胞株)、SW480(大腸癌細胞系)及びHTB72(黒色腫細胞系)を含む多くのがん細胞株の増殖を阻害するだろうことを発見した。L−スルフォラファンは、極めて低濃度(6.25μg/ml)でこれらの細胞株の増殖を強力に阻害することを示した。それはLncap(前立腺癌細胞系)に対して特に有効に見えた。 We have also found that L-sulforaphane will inhibit the growth of many cancer cell lines including Lncap (prostate cancer cell line), SW480 (colon cancer cell line) and HTB72 (melanoma cell line). did. L-sulforaphane has been shown to potently inhibit the growth of these cell lines at very low concentrations (6.25 μg / ml). It appeared to be particularly effective against Lncap (prostate cancer cell line).
先述の発明は、明瞭な理解という目的のため、説明及び実施例によりかなり詳細に記述されたが、一定の変更および修正が行われるであろうことは当業者には明らかであるだろう。例えば、当業者に明らかなように、発明方法は、1以上の既知の抗腫瘍抗血管形成あるいは免疫増強の治療及び配合物(例えばサメ軟骨、チロスフィンゴシン、スフィンゴシン)と組み合わせることが可能である。したがって、発明の範囲は制限するように、明細書及び実施例により解釈されるべきではなく、添付のクレームによって規定される。 Although the foregoing invention has been described in considerable detail by way of illustration and example for purposes of clarity of understanding, it will be apparent to those skilled in the art that certain changes and modifications may be made. For example, as will be apparent to those skilled in the art, the inventive methods can be combined with one or more known anti-tumor anti-angiogenic or immune enhancing treatments and formulations (eg, shark cartilage, tyrosphingosine, sphingosine). Accordingly, the scope of the invention should not be construed as limiting the specification and examples, but is defined by the appended claims.
Claims (36)
a.前記薬を適切な細胞又は組織サンプルと接触させる工程と、
b.前記適切な細胞又は組織サンプルの別のサンプルを治療上有効な量のスルフォラファン又はその医薬的に許容できる誘導体、塩若しくはプロドラッグと接触させる工程と、
c.前記工程(a)のサンプルの成長を前記工程(b)のサンプルの成長と比較する工程であって、前記工程(b)のサンプルと同じ又は類似する程度に成長を阻害する工程(a)のいずれの薬も新血管新生又は内皮細胞の成長を阻害する治療薬である工程と、
を有する方法。 A method of screening for therapeutic agents that inhibit neovascularization or endothelial cell growth comprising:
a. Contacting the drug with a suitable cell or tissue sample;
b. Contacting another sample of the appropriate cell or tissue sample with a therapeutically effective amount of sulforaphane or a pharmaceutically acceptable derivative, salt or prodrug thereof;
c. Comparing the growth of the sample of step (a) with the growth of the sample of step (b), wherein the growth is inhibited to the same or similar degree as the sample of step (b). Any drug is a therapeutic agent that inhibits neovascularization or endothelial cell growth; and
Having a method.
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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KR20080045083A (en) * | 2005-04-29 | 2008-05-22 | 존스 홉킨스 유니버시티 | Methods of supressing uv light-induced skin carcinogenesis |
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JP2011500680A (en) * | 2007-10-16 | 2011-01-06 | ジョンズ・ホプキンス・ユニヴァーシティ | How to protect skin from radiation injury |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007515423A (en) * | 2003-12-22 | 2007-06-14 | アルコン,インコーポレイテッド | Drugs for the treatment of glaucomatous retinopathy and optic neuropathy |
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