JP2006254759A - Ｔｈ２−タイプサイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法 - Google Patents
Ｔｈ２−タイプサイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】花粉症や気管支喘息等のアレルギーは、Ｔリンパ球や好酸球を中心とした炎症細胞の鼻や気管支の粘膜への浸潤による慢性炎症性疾患である。そのため、治療の中心はステロイド剤、抗アレルギー剤であり、さらには、炎症細胞が産生するサイトカインの産生抑制剤が用いられる。しかしこれらは対症療法であり、根治的療法ではない。
【解決手段】患者の血液よりＣＤ３陽性Ｔリンパ球を分離し、培地中でこのＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に、転写因子ＮＦ−ＡＴが結合するＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡを移入することを特徴とする花粉症、気管支喘息等のアレルギー患者におけるＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法。
【解決手段】患者の血液よりＣＤ３陽性Ｔリンパ球を分離し、培地中でこのＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に、転写因子ＮＦ−ＡＴが結合するＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡを移入することを特徴とする花粉症、気管支喘息等のアレルギー患者におけるＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法。
Description
本発明は、花粉症、気管支喘息等のアレルギー患者におけるＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法に関する。
ヒトリンパ球をサイトカインを含有する無血清培地で培養することによって癌細胞に対する傷害活性を高める方法が知られている（例えば、特許文献１参照。）。
特公平７−１０２１３１号公報
花粉症、気管支喘息等のアレルギー患者に対する遺伝子治療は、気道局所へ点鼻や吸入等によって遺伝子を移入させてアレルギー反応を抑制しても、遺伝子がＤＮＡ分解酵素により容易に分解されてしまうために遺伝子治療の効果が得られないものであった。
花粉症や気管支喘息等のアレルギーは、Ｔリンパ球や好酸球を中心とした炎症細胞の鼻や気管支の粘膜への浸潤による慢性炎症性疾患である。そのため、治療の中心はステロイド剤、抗アレルギー剤であり、さらには、炎症細胞が産生するサイトカインの産生抑制剤が用いられる。しかしこれらは薬効は１２時間程度であり、満足のいくものではないという問題がある。
花粉症や気管支喘息等のアレルギーは、Ｔリンパ球や好酸球を中心とした炎症細胞の鼻や気管支の粘膜への浸潤による慢性炎症性疾患である。そのため、治療の中心はステロイド剤、抗アレルギー剤であり、さらには、炎症細胞が産生するサイトカインの産生抑制剤が用いられる。しかしこれらは薬効は１２時間程度であり、満足のいくものではないという問題がある。
本発明は、転写因子ＮＦ−ＡＴによるＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球を製造することを目的とする。
そこで本発明者等は、花粉症や気管支喘息等のアレルギー疾患において、ＩＬ−５、ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＴＮＦ−αといったＴｈ２−タイプ サイトカインに着目し、これを抑制することにより副作用のない治療が可能であることを突き止めた。
さらに、このＴｈ２−タイプ サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を開始させる転写因子は、ＧＡＴＡ−３やＮＦ−ＡＴ等の転写因子の中のＮＦ−ＡＴであることを突き止めた。
さらに、このＴｈ２−タイプ サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を開始させる転写因子は、ＧＡＴＡ−３やＮＦ−ＡＴ等の転写因子の中のＮＦ−ＡＴであることを突き止めた。
また、この転写因子ＮＦ−ＡＴがＤＮＡに結合する塩基配列部分を有するＤＮＡオリゴプローブを、Ｔリンパ球内に移入することにより、核内外のＮＦ−ＡＴを結合捕捉し、これによってこのＴリンパ球のＤＮＡ上に存在するプロモータ部とＮＦ−ＡＴとの結合を阻害し、Ｔｈ２−タイプ サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を抑制しうると推測した。
そこで、本発明は、花粉症や気管支喘息等のアレルギー患者から採取した感作リンパ球であるＣＤ３陽性Ｔリンパ球を分離し、培地中でこのＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に、転写因子ＮＦ−ＡＴと結合するＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡを移入することを特徴とする。
本発明は、このヒトリンパ球を患者に戻すことによってアレルゲンに感作されたリンパ球は２度目以降のアレルゲン暴露により速やかに局所に集積するというリンパ球の特性を利用してＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を長期にわたって抑制して症状の発生をなくすことができることになる。
本発明の実施例を説明する。
本実施例では花粉症患者の例で説明するが、アトピー性気管支喘息等のアレルギー患者においても同様である。
花粉患者の静脈より５０ｍｌ全血採取し、ＣＤ３陽性Ｔリンパ球を分離する。
このＣＤ３陽性Ｔリンパ球をＲＰＭＩ１６４０培地で満たされた培養皿内に播種し、予め作成してある転写因子ＮＦ−ＡＴが結合するＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡを、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社登録商標）等のいわゆるｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎツールを用いて３７°Ｃ、５％ＣＯ２の条件下で上記ＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に６時間かけて移入してＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球とした。
本実施例では花粉症患者の例で説明するが、アトピー性気管支喘息等のアレルギー患者においても同様である。
花粉患者の静脈より５０ｍｌ全血採取し、ＣＤ３陽性Ｔリンパ球を分離する。
このＣＤ３陽性Ｔリンパ球をＲＰＭＩ１６４０培地で満たされた培養皿内に播種し、予め作成してある転写因子ＮＦ−ＡＴが結合するＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡを、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社登録商標）等のいわゆるｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎツールを用いて３７°Ｃ、５％ＣＯ２の条件下で上記ＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に６時間かけて移入してＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球とした。
移入後、このＣＤ３陽性Ｔリンパ球を、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ（ＧＩＢＣＯ社製）で洗浄した。
このヒトリンパ球を前に採血した患者の静脈内へ約５０ｍｌの生理食塩水と共に注射して戻す。
これによって、抗原に感作されたリンパ球は２度目以降の抗原暴露により速やかに集積するリンパ球の性質によって患部に集積させることができ、長期にわたって効果的でしかも安定的に治療を行うことができる。
よって、上記した推測の如く、この転写因子ＮＦ−ＡＴがＤＮＡに結合する塩基配列部分を有するＤＮＡオリゴプローブを、患者から採取したＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に移入することにより、核内外のＮＦ−ＡＴを結合捕捉し、これによってこのＣＤ３陽性Ｔリンパ球のＤＮＡ上に存在するプロモータ部とＮＦ−ＡＴとの結合を阻害し、Ｔｈ２−タイプ サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を抑制することを確認した。
このヒトリンパ球を前に採血した患者の静脈内へ約５０ｍｌの生理食塩水と共に注射して戻す。
これによって、抗原に感作されたリンパ球は２度目以降の抗原暴露により速やかに集積するリンパ球の性質によって患部に集積させることができ、長期にわたって効果的でしかも安定的に治療を行うことができる。
よって、上記した推測の如く、この転写因子ＮＦ−ＡＴがＤＮＡに結合する塩基配列部分を有するＤＮＡオリゴプローブを、患者から採取したＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に移入することにより、核内外のＮＦ−ＡＴを結合捕捉し、これによってこのＣＤ３陽性Ｔリンパ球のＤＮＡ上に存在するプロモータ部とＮＦ−ＡＴとの結合を阻害し、Ｔｈ２−タイプ サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を抑制することを確認した。
以上説明した如く、（１）リンパ球のなかのＣＤ３陽性Ｔリンパ球と確定し、（２）転写因子をＮＦ−ＡＴと確定し、（３）ｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡをＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡに確定するというこれら３つの要素を確定すると共にそれらの要素の組合せを決定したことによって、花粉症や気管支喘息等のアレルギー疾患の遺伝子治療を可能にした。
Claims (1)
- 花粉症、気管支喘息等のアレルギー患者の血液よりＣＤ３陽性Ｔリンパ球を分離し、培地中でこのＣＤ３陽性Ｔリンパ球内に、転写因子ＮＦ−ＡＴが結合するＤＮＡ配列ＧＧＡＡＡＡを含むｒｉｂｂｏｎ ｓｈａｐｅｄ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｄｅｃｏｙ ＤＮＡを移入することを特徴とするＴｈ２−タイプ サイトカインの産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法。
Priority Applications (1)
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| JP2005075098A JP4775838B2 (ja) | 2005-03-16 | 2005-03-16 | Ｔｈ２−タイプサイトカイン中のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３の産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP2005075098A JP4775838B2 (ja) | 2005-03-16 | 2005-03-16 | Ｔｈ２−タイプサイトカイン中のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３の産生を抑制するヒトリンパ球の製造方法 |
Publications (2)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003090788A1 (fr) * | 2002-04-24 | 2003-11-06 | Ginkgo Biomedical Research Institute Co., Ltd. | Leurre destine au traitement et/ou a la prevention d'une maladie allergique associee a la cytokine th2, proteine mutante gata3 et compositions medicinales contenant celle-ci |
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2005
- 2005-03-16 JP JP2005075098A patent/JP4775838B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| WO2003090788A1 (fr) * | 2002-04-24 | 2003-11-06 | Ginkgo Biomedical Research Institute Co., Ltd. | Leurre destine au traitement et/ou a la prevention d'une maladie allergique associee a la cytokine th2, proteine mutante gata3 et compositions medicinales contenant celle-ci |
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