JP2006187291A - 移植および炎症または血栓症状態の遺伝子治療 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】内皮細胞にATPジホスホヒドロラーゼまたはそれらの酸化耐性類似体をコードするDNAを挿入し、細胞活性化条件下で機能的ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するタンパク質、例えば、ヒトCD39タンパク質をその細胞から発現させることを含んでなる方法。対応する細胞、組織、または器官、ヒト以外のトランスジェニック哺乳動物または体細胞組換え哺乳動物、医薬組成物および人工静脈内器官装置に利用することができる。
【選択図】なし
Description
本発明は、遺伝子治療および組織および器官移植の分野における改良を提供するものである。広義の態様では、本発明は内皮細胞の遺伝子修飾に関し、炎症または他の活性化刺激対する内皮細胞の感受性を低くするものである。
血栓塞栓現象は、様々なアテローム硬化症および血栓症状態、例えば、急性心筋梗塞、慢性不安定アンギナ、一過性脳虚血発作、頸動脈内膜切除、末梢血管疾患、再狭窄、および/または血管形成術後またはカテーテルまたはシャントなどの心臓血管用装置の吻合後の血栓症を含む多くの血管疾病に含まれる。その他関連するのは子癇前症、並びに、様々な形態の脈管炎、例えば、高安病およびリウマチ性脈管炎である。重要なのは、同種または異種移植の分野では、移植片の脈管系での血栓形成が移植された組織および器官の生存能に影響を与える深刻な問題であるということである。
この度、細胞活性化条件下での血小板凝集の調節および阻害が内皮細胞によるエクト(ecto)ATP−ジホスホヒドロラーゼ活性の維持に大きく依存していることが分かった。より具体的には、免疫または炎症刺激に応答する内皮細胞(以下“EC”)の活性化は該細胞の表面上でのADP−加水分解活性の低減または損失を導くこと、更には、このADP−加水分解活性の低減または損失の結果、内皮細胞表面に対する血小板接着および血小板凝集が起こり、最終的には血栓形成に至ることが分かった。
特に、ECが活性化剤なしで血小板活性化を阻害する能力のある細胞結合ATP−ジホスホヒドロラーゼ活性を発現できること、およびECの活性化を増進する条件下(例えば、TNFα/補体への暴露および異種移植片の超急性拒絶反応/再環流傷害/酸化的侵襲)でエクトATP−ジホスホヒドロラーゼ活性の低減または損失があり、その結果、血小板凝集に対する感受性を増大した細胞環境を生むことが観察された。
ことからなる。
図1: エクト−ADPアーゼの調節:エクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性に対するヒトγTNFαの阻害効果を示す棒グラフ:
■=TLC nmol ADP/100万細胞/分;
□=LeBel/Fiske μmolホスフェート/時/mg細胞タンパク質[実施例1(c)]。γTNFα=組換え腫瘍壊死因子α。
図2: LWB(ラインウィーバー・バーク)エクトADPアーゼ(酵素速度論の二重逆数プロット):これは、静止期のおよびサイトカイン媒介PAECの速度論を示す。
■=対照;□=TNF
[実施例1(d)]。
図3: 酸化的侵襲および細胞活性化によるエクトADPアーゼ活性の阻害(HOOH 5μM/エクトADPアーゼ):PAECに対するエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性の過酸化物およびサイトカイン媒介損失を示す棒グラフ[実施例2(a)]。BME=β−メルカプトエタノール。
図4: エクトADPアーゼ活性に対するβ−メルカプトエタノールの保護効果:β−メルカプトエタノール(BME)がPAECに対するエクトATP−ジホスホヒドロラーゼ活性のサイトカイン−媒介損失を保護することを示す棒グラフ。[実施例2(b)]。BME=β−メルカプトエタノール。
図5: エクトADPアーゼ調節の動態:TNFαおよび酸化剤によりエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ調節の動態を示す棒グラフ:(グラフ上の順序で)■=対照;□=XO/X;■=HOOH;■=TNF
[実施例2(c)]。XO/X=キサンチンオキシダーゼ/キサンチン;HOOH=過酸化水素。
図6: 抗酸化剤によるエクトADPアーゼ活性の調節:抗酸化剤で処理した活性化PAECのエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性のプロット[実施例3]。SOD=スーパーオキシドジスムターゼ;Cat=カタラーゼ。
図7: 再環流傷害:インビボでの再環流時間の関数として、精製ラット糸球体におけるエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性を示す棒グラフ[実施例5]。Isch=虚血時間(分);Reperf=再環流時間(分)。
図8: CVFの効果:虚血状態、次いで再環流状態にさせたラット糸球体のコブラ毒因子(CVF)での前処理の効果を示す棒グラフ。
図9: CD39のノーザン分析:TNFα刺激後のHUVECは、CD39に対するmRNAのレベルを減じることを示す[実施例7]。hEC=HUVEC=ヒト臍静脈内皮細胞;TNF=組換え腫瘍壊死因子。
図10: pCDNA3/CD39でのCOS−7細胞の一過性トランスフェクション:非−トランスフェクションCOS−7細胞およびCD39 cDNAでトランスフェクションしたCOS−7細胞のFACS分析。CD39に対するmoAB(=モノクローナル抗体)による分析。アイソタイプ対照を同時に使用。細胞をヒトCD39に対するmoAB(正確)で染色した。
図11: CD39−トランスフェクションCOS−7細胞のエクトADPアーゼ活性:CD39 cDNAでトランスフェクションしたCOS−7細胞の細胞全体溶解物は、特異的Ca++エクト−ADPアーゼ活性を発現する(基質=200μM ADP)。第1の棒:対照;第2の棒:空のベクター;第3の棒:CD39ベクター。
図12: CD39でトランスフェクションしたCOS−7細胞の精製膜のエクトADPアーゼ活性:活性は主に細胞膜に局在した。第1の棒:対照COS細胞;第2の棒:空のベクターでトランスフェクションしたCOS細胞;第3の棒:CD39ベクターでトランスフェクションしたCOS細胞。
図13: 血小板凝集アッセイ:CD39による血小板凝集の阻害;5μM ADPおよびCOS−7細胞膜抽出物(27.4μgタンパク質)でのPRPの凝集。CD39−トランスフェクション細胞由来のCOS−7細胞膜抽出物はADP5μMにより誘導される血小板凝集を効果的に阻害し、CD39/エクトADPアーゼタンパク質の機能的潜在能力を確立する。
図14: ヒトCD39ヌクレオチドおよびアミノ酸配列(J.Immunol.153(8)[1994]3577から)(=配列番号1)。
“移植(片)"、"移植"、または"(内)移植"は、互換的に使用され、レシピエントへの移植のためにドナーから得る生物学的物質およびかかる生物学的物質をレシピエント内に配置する行為を表す。
ATPジホスホヒドロラーゼ類は、ATPからADPないしAMPへの連続加リン酸分解(即ち、ホスフェート基の除去)を触媒するタンパク質ファミリーからなる。一般に、このクラスのタンパク質は、ヌクレオシドジーまたはトリホスフェートに対する特異性は示さず;Ca2+またはMg2+により活性化される。ADPをAMPへ、同じく、ATPを、ADPを介してAMPへ変換することにより、これらの酵素は、血小板凝集を阻害または逆転する。最終生成物であるAMPは、5'ヌクレオチダーゼの基質であり、アデノシンを作り、重要な血小板抗アクチベーターおよび血管拡張神経薬である。
(i)発現ライブラリーを利用して、入手可能な抗体を用いてATPジホスホヒドロラーゼをコードするcDNAを含むコロニーを検出する;および
(ii)正確なcDNAエレメントを得るために、入手しておいたアミノ酸配列に対応する所定のオリゴマーを利用する。例えば、LinおよびGuidotti、上記およびCheung等、上記参照。
(a)ドナー細胞、またはそれらの前駆細胞を、それらにATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するタンパク質をコードするDNAを導入することにより、修飾し;
(b)そのように修飾したドナー細胞、組織、または器官をレシピエントに移植し、ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを発現させ、それによってレシピエントの細胞表面での血小板凝集を低減または阻害する、
ことからなる。
下記実施例は、単なる例示説明であって、本発明を限定するものではない。
異種静止期ブタ動脈内皮細胞(PAEC)は、血漿異種反応性抗体および補体の不在下で、標準血小板アゴニストに対するヒト血小板活性化応答に対し阻害効果を発揮する。
インビトロ系においてヒト血小板活性化を阻害する因子は、細胞に結合しており、細胞培養上清中には見られない。この細胞結合因子は、単層、ビーズ培養物または細胞懸濁液において、PAECの存在下、ADP(2−10μM)、コラーゲン(2−10μg/ml)および低濃度のトロンビン(<1U/ml)に対するヒト血小板応答を完全に遮断する。
プロスタサイクリン代謝、トロンボモジュリン(トロンビン中和による)およびNOの重要性は、幾つかの方法により評価されており、このPAECにより行われる血小板活性化の阻害には重要でないことが示されている。
実施した実験シテスムにおいて、PAECと関連するヒト血小板応答に対するADP−β−S(加水分解不可能なADPの類似体であるので、エクト−ADPアーゼによって分解されない)の非阻害性効果が論証できることからして、阻害性内皮細胞結合因子をエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ(アピラーゼ)と同定する。
インビトロにおける標準的ヒト組換えによるPAECの活性化により、血小板活性化を受け入れる環境の発生に伴い、30ないし60分以内でEC抗凝集性表現型の迅速な損失が生じる。
内皮細胞エクト−ATPジホスホヒドロラーゼは、EC活性化応答により顕著に調節される。
エクト−ATPジホスホヒドロラーゼの動態:14C−ADPの異化作用により測定したところ、PAECエクト−ATPジホスホヒドロラーゼVmaxは、1×106細胞/分当たり変換されたADP50−55nmolのオーダーである(Kmおよそ200μM)。これらの数字は、他の方法[A.J.Marcus等、J.Clin.Invest.88(1991)1690-1696;E.L.Gordon等、J.Biol.Chem.261(1986)15496-15507]により測定されるヒト臍静脈ECおよび前記のブタECについて記載されたものに一致する。
内皮細胞は、10および50ng/mlのTNFαにより活性化された場合、インキュベーション60分後にエクト−ADPアーゼ活性を失う。図1は、生化学的方法(D.LeBel等、上記)と14C−ADPないしAMPの細胞分解のTLC測定(A.J.Marcus等、上記)により測定した、4時間での酵素活性レベルを示す。一旦、ECが活性化されると、この阻害可能能力が損失するので血小板活性化が起こり得る。この阻害活性は、主に、PAECにて発現されるエクト−ATPジホスホヒドロラーゼに関連する。
無傷細胞の活性化後のPAECエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ動態もまた、TLCにより測定した:Vmax15nmolADP/1×106細胞/分(Km70μM)。逆数プロットは、非拮抗的阻害プロセスを示している。この新規観測結果は、酵素−基質複合体(但し、遊離酵素自身ではない)に結合する阻害因子または基質結合とは独立して酵素触媒機能を乱す阻害プロセスのいずれかに一致している(図2)。
HOOHと共にPAECをカタラーゼ活性なしで活性化内皮細胞により産生される可能性のある5μMおよび10μMの濃度でインキュベーションすると、次のサイトカインによる細胞活性化で観察される場合に匹敵する、かつ非付加的なエクト−ATPジホスホヒドロラーゼの活性に対して顕著な効果をもつ。図3は、4時間インキュベーション後、5μM HOOH処理後の酵素活性の損失を表す。
インビトロにおける、TNFなどのサイトカイン類での活性化に続くPAECによるHOOHの産生は、約0.015nmoles/分/106細胞のオーダーであることを測定した。
従って、エクト−ATPジホスホヒドロラーゼは、PAECのサイトカイン活性化により促進される酸化プロセスに感受性であり得る。PAEC中の酵素系である内因性キサンチンオキシダーゼおよびその他、例えば、NADPHオキシダーゼは、細胞活性化後に有意なレベルの反応性酸素中間体を同化し、これらは、膜結合エクト酵素に対して絶大な効果を持つ。
酸化的侵襲を誘導する薬剤に対する逆方向の形式では、マイクロモル濃度で強力な還元剤であるβ−メルカプトエタノールが酵素活性を保護する。このこともまた、内皮細胞がサイトカインにより活性化される状況を支持するものである(図4)。
PAECにおけるエクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性の損失は、インビトロでのTNFα活性化、続く、HOOH(過酸化水素、5μM)およびキサンチンオキシダーゼ/キサンチン(XO/X、キサンチン200μMと典型的には、ホスフェートフリーのキサンチンオキシダーゼ100mU/mlの組み合わせ)による内皮細胞のインキュベーションおよび摂動(perturbation)の結果として表される。XO/Xは、過酸化物およびスーパーオキシドラジカルの両方により細胞およびそれらの膜タンパク質および脂質に酸化的損傷を引き起こす。鉄の存在下では、毒性ヒドロキシルラジカルが形成される。酸素ラジカルに暴露した後の酵素活性の後期減少に注目されたい(図5)。
同様の試験システムにSOD/カタラーゼを追加した抗酸化剤戦略は、活性化プロセス後の内皮細胞エクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性の維持を保護することが示されている。スーパーオキシドジスムターゼ(ウシ赤血球由来のCu−Zn形態)は、酸素ラジカルを除去するものであり、330U/mlの濃度で使用した。カタラーゼはHOOHを分解するものであり、ウシ肝臓由来の調製物を1000U/mlの最終濃度で使用した。
亜鉛は、細胞膜上で多様な効果を有するが、本明細書にその可能性が示されているように、サイトカイン摂動後のブタ内皮完全性をインビトロで維持することが既に示されている濃度で強力な抗酸化剤としても働き得る。これらのシステムに追加することにより、同様に、内皮細胞エクト−ATPジホスホヒドロラーゼ活性の維持が保護されるようである(図6)。
内皮細胞エクト−ATPジホスホヒドロラーゼの直接酸化は、細胞活性化設定における内皮細胞−血小板相互作用の調整を担うものである。
精製タンパク質における上記と同様の実験を行い、更にタンパク質分解修飾を伴うか、または伴わない酸化後の活性の直接損失を評価する[Rivett,Curr.Top.Cell Requl.28(1986)291]。
図7は、インビボで60分の温虚血時間(warm ischaemic time)および更に5、15、30および60分の温再環流(warm reperfusion)後の活性の損失を表している。インビボで30分の再環流後の活性の損失に注目されたい。ATPジホスホヒドロラーゼ活性における初期増加は、インビボで損傷内皮に結合した白血球接着を表し得る。
図8は、ラットをコブラ毒素因子(CVF)で前処理して動物から補体を涸渇することによってもまた、酸化的侵襲の誘導を伴う全身的補体活性化損傷を生じ、糸球体を虚血させ、次いで30分間再環流した場合に、結果としてATPジホスホヒドロラーゼ活性の損失を増すことを表している。
ヒト臍静脈内皮細胞(HUVEC)をTNFα(最終濃度10ng/ml)と共に2、6および24時間インキュベーションした。細胞をホスフェート緩衝液で2回洗浄し、RNAを精製し、ノーザンブロットにより分析した。1ウェル当たり計10ugのRNAをTAE−アガロースゲル(TAE=トリス/酢酸/EDTA緩衝液)にのせた。電気泳動を40mAで2時間行った。RNAを電荷修飾ナイロン膜に移し、UV−架橋させた。プラスミドDNAから切断したCD39 cDNAフラグメント(pCDNA3−CD39)を無作為六量体標識法(random hexamer labeling method)により2×109cpm/μgDNAの比活性まで[α32P]−dCTPで標識した。Stratagene社の迅速ハイブリダイゼーションプロトコールを用いて、プレハイブリダイゼーション、ハイブリダイゼーション、洗浄、および膜ストリッピングを行った。0.1−xクエン酸ナトリウム食塩水(SSC)/0.1%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)中、60℃で最終洗浄した。ブロットを−80℃で1日、スクリーンを補力しながらコダックXAR−2フィルムに露光した。図9に示した結果は、ECを6時間以上ないし24時間TNFα刺激した後にCD39/エクト−ADPアーゼ mRNAレベルが著しく減少したことを示している。
CD39 cDNAでトランスフェクションしたCOS−7細胞は、FACS分析により測定したところ、免疫学的に同定されたCD39を発現する(図10)。
COS−7細胞の全細胞溶解物(図11)および膜調製物(図12)は、空のベクターまたは対照COS−7細胞に比べ、COS−7細胞をCD39ベクターでトランスフェクションした場合のみ有意な活性を示す。エクト−ADPアーゼ活性の評価は、Ca++−依存性条件下、200μM ADPの加水分解により測定した。
CD39 cDNAでトランスフェクションしたCOS−7細胞の膜調製物は、インビトロでADPに対する血小板凝集物を首尾よく排除した(図13)。
(1) 一般的情報:
(i) 特許出願人:
(A) 名称:サンド・リミテッド
(B) 通り:リヒトシュトラーセ35
(C) 市:バーゼル
(E) 国:スイス連邦
(F) 郵便番号(ZIP):CH−4002
(G) 電話:61−324 5269
(H) ファックス:61−322 7532
(A) 名称:ニュー・イングランド・ディーコネス・ホスピタル・コーポ レーション
(B) 通り:ピルグリム・ロード185
(C) 市:ボストン
(D) 州:マサチューセッツ
(E) 国:アメリカ合衆国
(F) 郵便番号(ZIP):02215
(A) 名称:バッハ,フリッツ・エイチ
(B) 通り:ブロッサム・レーン8
(C) 市:ボストン、マンチェスター−バイ−ザ−シー
(D) 州:マサチューセッツ
(E) 国:アメリカ合衆国
(F) 郵便番号(ZIP):01966
(A) 名称:ロブソン,サイモン
(B) 通り:ロングウッド・アベニュー45,アパートメント705
(C) 市:ブルックリン
(D) 州:マサチューセッツ
(E) 国:アメリカ合衆国
(F) 郵便番号(ZIP):02146
(ii) 発明の名称:移植および炎症または血栓症状態の遺伝子治療
(iii) 配列の数:1
(iv) コンピューター解読書式:
(A) 媒体型:フロッピー・ディスク
(B) コンピューター:IBM PCコンパティブル
(C) オペレーティング・システム: PC−DOS/MS−DOS
(D) ソフトウエア:
(v)本出願データ:
出願番号:WO PCT/EP96/.....
(vi)優先権出願データ:
(A)出願番号:US 08/410371
(B)出願日:1995年3月24日
(A)出願番号:US .....
(B)出願日:1996年2月12日
(i) 配列の特徴
(A) 長さ:1818塩基対
(B) 型:核酸
(C) 鎖の数:一本鎖
(D) トポロジー:直鎖状
(ii) 配列の種類:mRNA
(iii) ハイポセティカル:NO
(iii) アンチセンス:NO
(vi) 起源:ヒト MP−1 B リンパ芽球細胞系列
(A)生物名:ホモ・サピエンス
(x) 公開常情報:
C.R.Maliszewski等、J.Immunol.153(8)(1994)3574-3583(3577頁図2)
(xi) 配列:配列番号1:
Claims (41)
- 細胞活性化条件下でATP−ジホスホヒドロラーゼの活性を有するポリペプチドをコードする異種DNAをその細胞中に含んでなる、ヒト以外のトランスジェニック哺乳動物または体細胞組換え哺乳動物。
- 異種DNAがその内皮細胞中に含有される、請求の範囲第1項に記載の哺乳動物。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第1項に記載の哺乳動物。
- ブタである請求の範囲第3項に記載の哺乳動物。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質の酸化耐性類似体を含む、請求の範囲第4項に記載の哺乳動物。
- ドナーとして同種または異種の移植片レシピエントにおいて、細胞活性化条件下、血小板抑制有効レベルでATP−ジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを発現できるように修飾したドナー哺乳類動物種の細胞、またはその細胞を含む組織または器官。
- 内皮細胞である、請求の範囲第6項に記載の細胞、または請求の範囲第6項に記載の細胞を含む組織または器官。
- ヒトの、請求の範囲第7項に記載の細胞、組織または器官。
- ブタの、請求の範囲第7項に記載の細胞、組織または器官。
- 細胞活性化条件下でATP−ジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種DNAを発現できる、内皮細胞、またはその細胞を含む組織または器官。
- 哺乳動物細胞を遺伝子的に修飾して、それらの炎症または免疫学的刺激および血小板凝集に対する感受性を低くさせるためのベクター構築物であって、細胞活性化または酸化的侵襲条件下、DNAの転写を開始する能力のあるプロモーターの制御下でATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを含む、ベクター構築物。
- コードされるポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第11項に記載のベクター構築物。
- コードされるポリペプチドが誘導的プロモーターの制御下にある、請求の範囲第11項に記載のベクター構築物。
- 医薬的に許容され得る担体中に、ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有する組換えポリペプチドまたはそれらの医薬的に許容され得る塩、またはそれらの酸化耐性類似体を含む、血小板凝集−阻害活性を有する医薬組成物。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第14項に記載の医薬組成物。
- 組換えATPジホスホヒドロラーゼまたはそれらの酸化耐性類似体を塗布しておいた合成の生物学的適合性物質を含んでなる人工静脈内器官装置。
- 哺乳動物細胞を遺伝子的に修飾して、それらの炎症または免疫学的刺激および血小板接着に対する感受性を低くさせる方法であって、細胞活性化条件下で、ATPジホスホヒドロラーゼの活性を有するポリペプチドを安定に発現する能力をかかる細胞に与えることを含んでなる、方法。
- 哺乳動物細胞を遺伝子的に修飾して、それらが血小板凝集を阻害できるようにさせる方法であって、その細胞またはそれらの前駆細胞にATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを挿入し、そして、細胞活性化条件下でそのポリペプチドを血小板凝集抑制有効レベルでその細胞から発現させることを含んでなる、方法。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第17または18項に記載の方法。
- ポリペプチドが実質的に酸化耐性である、請求の範囲第17または18項に記載の方法。
- ポリペプチドが誘導的プロモーターと作動可能に結合している、請求の範囲第17または18項に記載の方法。
- 治療を必要とする哺乳動物対象において、血小板凝集を制御し、それによって血栓症状態を予防または軽減する方法であって、血小板媒介活性化に対して感受性である対象の細胞を、それらに、ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドをコードするDNAを挿入することにより遺伝子的に修飾し、そして、そのポリペプチドを血小板凝集抑制有効レベルでその細胞から発現させることを含んでなる、方法。
- 細胞が内皮細胞である、請求の範囲第22項に記載の方法。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質である、請求の範囲第22項に記載の方法。
- 対象がヒトである、請求の範囲第22項に記載の方法。
- ポリペプチドが実質的に酸化耐性である、請求の範囲第22項に記載の方法。
- ドナー同種または異種細胞、またはかかる細胞を含む移植可能組織または器官を、それらの細胞または組織または器官がその血液または血漿中で活性化刺激に対して感受性である哺乳動物レシピエントに移植する方法であって:
(a)かかるドナー細胞またはそれらの前駆細胞を、それらに、ATPジホスホヒドロラーゼの活性を有するポリペプチドまたはそれらの酸化耐性類似体をコードするDNAをプロモーターと作動的に結合して挿入することにより遺伝子的に修飾し;さらに
(b)得られた修飾ドナー細胞、組織、または器官をレシピエントに移植し、得られた修飾細胞または組織または器官から、ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有するポリペプチドを血小板凝集抑制有効レベルで発現させる、
ことからなる、方法。 - 細胞が内皮細胞である、請求の範囲第27項に記載の方法。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第27項に記載の方法。
- レシピエントがヒトである、請求の範囲第29項に記載の方法。
- ポリペプチドが実質的に酸化耐性である、請求の範囲第27項に記載の方法。
- ドナーがレシピエントに関して異種である、請求の範囲第30項に記載の方法。
- ドナー細胞、組織または器官がブタである、請求の範囲第30項に記載の方法。
- 哺乳動物対象において血小板凝集を制御し、それによって血栓症異常を処置する方法であって、医薬的に許容され得る担体中、ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有する組換えポリペプチドまたはそれらの医薬的に許容され得る塩を血小板凝集を阻害するのに有効な量、対象に投与することを含んでなる、方法。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第34項に記載の方法。
- 対象がヒトである、請求の範囲第34項に記載の方法。
- 血小板凝集を低減する薬物の製造における、ATPジホスホヒドロラーゼ活性を有する組換えポリペプチドまたはそれらの医薬的に許容され得る塩、またはそれらの酸化耐性類似体の使用。
- ポリペプチドがヒトCD39タンパク質を含む、請求の範囲第37項に記載の使用。
- 天然のATP−ジホスホヒドロラーゼ活性を有し、実質的に酸化耐性である、ヒトCD39タンパク質のペプチド類似体。
- 可溶性である、請求の範囲第39項に記載のペプチド類似体。
- 実質的に膜スパンニングドメインのない、請求の範囲第40項に記載のペプチド類似体。
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