【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、被検試料中の低密度リポ蛋白中のトリグリセリドの定量方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）は血液中におけるトリグリセリド運搬の主役であり、ＬＤＬ−トリグリセリド（ＬＤＬ−Ｃ）の上昇が冠動脈硬化性疾患の重要な危険因子であることは以前より明らかとなっていた。一方、血中のＬＤＬ−Ｃが正常範囲であっても心筋梗塞を発症する例が数多く存在することも事実であり、最近ではＬＤＬ粒子の質の変化が重要視されるようになってきた（非特許文献１を参照）。
【０００３】
近年、小型で比重の重いsmall, dense ＬＤＬと冠動脈硬化性疾患の関係がクローズアップされ、正常サイズのＬＤＬを持つ症例に比べ発症率が３倍に達することが指摘されている。Small, dense ＬＤＬ粒子の特徴としては小型であることと粒子中のトリグリセリド量が正常のＬＤＬに比べ高いことである。よってＬＤＬ中のトリグリセリドを測定することによりSmall, dense ＬＤＬの存在量を推測できるので、ＬＤＬ中のトリグリセリドを簡便に測定し定量できることは臨床上有用である。
【０００４】
ＬＤＬ中のトリグリセリドの定量方法としては、分画とトリグリセリド定量の２つの操作から求める方法がある。
分画操作としては超遠心法、沈殿法、免疫反応を利用した方法等があるが、いずれの方法においても試料を遠心処理またはフィルター処理による操作が必要となる。定量としては分画により得られたＬＤＬを試料に用い、臨床検査の場で用いられている自動分析装置装置とＴＧ試薬により定量を行う方法があるが、いずれにせよ簡便性や経済性において普及しにくい方法である。
【非特許文献１】
芳野原他、「特集 高脂血症の治療 Small, dense LDL」、CURRENT THERAPY 1998, Vol.16, No.1, p.45-53
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、被検試料中のＬＤＬ中のトリグリセリドを簡便に定量する方法の提供を目的とする。具体的には、本発明は、第１工程でＬＤＬ以外のリポ蛋白中トリグリセリドを消去し、第２工程でＬＤＬ中のトリグリセリドを定量する方法の提供を目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本願発明者らは、ある種の界面活性剤とリポプロテインリパーゼを組み合わせて、被検試料に作用させることにより、被検試料中のＬＤＬ以外のリポ蛋白であるカイロミクロン（ＣＭ）、超低密度リポ蛋白（ＶＬＤＬ）、高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）中のトリグリセライドとの反応が起こりこれらのリポ蛋白が分解されることを見出した。本発明者らは第１工程で、ＬＤＬ以外のリポ蛋白を分解し、第２工程で残存するＬＤＬと反応する界面活性剤を添加しＬＤＬを分解しＬＤＬ中のトリグリセリドをリポプロテインリパーゼの作用により分解し生成した過酸化水素を定量することによりＬＤＬ中のトリグリセリドを定量し得ると考えた。さらに、鋭意検討を行い、第１工程の反応の結果生じるトリグリセリドの分解産物である過酸化水素が第２工程で検出されてしまうのを抑えるために過酸化水素を消去する反応系を組み込み、さらに第１工程にアルブミンを添加することで、第１工程の反応の残骸物を吸着し、第２工程における反応への干渉を回避できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、被検試料中のＬＤＬ以外のリポ蛋白中のトリグリセリドを消去する第１工程と、次いで、被検試料中に残存するＬＤＬ中のトリグリセリドを定量する第２工程とから成ることを特徴とする方法を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の方法は、第１工程及び第２工程から成り、第１工程では被検試料中のＬＤＬ以外のリポ蛋白中のトリグリセリドを消去し、続く第２工程では、被検試料中の残存トリグリセリドを定量する。ＬＤＬ以外のリポ蛋白にはＨＤＬ、ＶＬＤＬ及びＣＭがある。第１工程でＨＤＬ、ＶＬＤＬ及びＣＭ中のトリグリセリドが消去されているので、第２工程で定量されるトリグリセリドは、主として被検試料中のＬＤＬ中のトリグリセリドである。
【０００９】
本発明の方法に供される被検試料としては、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及びＣＭ等のリポ蛋白を含むかもしれない試料であればいずれのものでもよく、例えば、血液、血清、血漿等の体液やその希釈物を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
【００１０】
第１工程における「トリグリセリドを消去」とは、トリグリセリドを分解し、かつ、その分解産物が次の第２工程で検出されないようにすることを意味する。ＬＤＬ以外のリポ蛋白、すなわち、ＨＤＬ、ＶＬＤＬ、ＣＭ等に含まれるトリグリセリドを選択的に消去する方法としては以下の方法を挙げることができる。
【００１１】
すなわち、ＬＤＬ以外のリポ蛋白に作用する界面活性剤の存在下において、リポプロテインリパーゼ、グリセロールキナーゼおよびグリセロール３リン酸オキシダーゼを作用させ、生じた過酸化水素を消去する。
【００１２】
過酸化水素を消去する方法としては、カタラーゼを作用させて水と酸素に分解する方法、及びペルオキシダーゼを用いてフェノール系又はアニリン系水素供与体化合物と過酸化水素を反応させて無色キノンに転化する方法を挙げることができるが、いずれの方法を用いてもよく、さらにこれらの方法に限定されるものではない。
【００１３】
第１工程の反応液中のリポプロテインリパーゼ濃度は５０〜５００ ＩＵ／ｍＬ程度が好ましく、グリセロールキナーゼの濃度は０．３〜 ３．０ ＩＵ／ｍＬ程度が好ましく、グリセロール３リン酸オキシダーゼの濃度は２〜１５ ＩＵ／ｍＬ程度が好ましい。さらに、過酸化水素を水と酸素に分解する場合のカタラーゼの濃度は４０〜１００Ｕ／ｍＬ程度が好ましい。また、過酸化水素を無色キノンへ転化する場合のペルオキシダーゼの濃度は０．４〜１．０Ｕ／ｍＬが好ましく、この際に添加するフェノール系又はアニリン系水素供与体化合物の濃度としては０．４〜０．８ｍｍｏｌ／Ｌが好ましい。
【００１４】
第１工程で用いられる、ＬＤＬ以外のリポ蛋白に作用する界面活性剤の好ましい例として、ＨＬＢ値が１３以上１４以下であるポリアルキレンオキサイド誘導体を挙げることができる。誘導体の例としては高級アルコール縮合物、高級脂肪酸縮合物、高級脂肪酸アミド縮合物、高級アルキルアミン縮合物、高級アルキルメルカプタン縮合物、アルキルフェノール縮合物を挙げることができる。なお、界面活性剤のＨＬＢ算出方法は周知であり、例えば「新界面活性剤」、堀内博著、昭和６１年、三共出版に記載されている。
【００１５】
ＨＬＢ値が１３以上１４以下のポリアルキレンオキサイド誘導体の好ましい具体例としては、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンベンジルフェニルエーテル等でＨＬＢ値が１３以上１４以下の化合物を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
【００１６】
第１工程で用いられる上記界面活性剤の濃度は、０．１〜１０ｇ／Ｌ程度が好ましく、さらに好ましくは０．５〜５．０ｇ／Ｌ程度である。
第１工程は、ｐＨ５〜９の緩衝液中で行うことが好ましく、緩衝液としてはトリス、トリエタノールアミン、グットの緩衝液等のアミンを含む緩衝液が好ましい。特にグット緩衝液であるＢｉｓ−Ｔｒｉｓ、ＰＩＰＥＳ、ＭＯＰＳＯ、ＢＥＳ、ＨＥＰＥＳ及びＰＯＰＳＯが好ましく、緩衝液の濃度は１０〜５００ｍＭ程度が好ましい。
【００１７】
第１工程で、ＬＤＬとの反応を抑え、他のリポ蛋白の消去をさらに高めるために、反応液中に２価の金属イオンを含ませてもよい。２価の金属イオンとしては銅イオン、鉄イオン及びマグネシウムイオンを使用することができるが、特にマグネシウムイオンが好ましい。２価の金属イオンの濃度は５〜２００ｍＭ程度が好ましい。
第１工程の反応温度は３０〜４０℃程度が適当であり、３７℃が最も好ましい。また、反応時間は２〜１０分間程度でよい。
【００１８】
本発明の方法では、第１工程をアルブミンの存在下で行う。アルブミンの存在下で行うことにより、第工程の反応の結果生じる残骸物がアルブミンに吸着され、第２工程でこれらの残骸が反応に干渉することを防止できる。アルブミンは、アルブミンであれば何ら限定されるものではなく、血清アルブミン等の市販のアルブミンを好適に用いることができる。また、アルブミンの起源も何ら限定されるものではなく、ヒト、ウシ、ブタ、ウマ等いずれの動物であってもよく、特に、広く用いられているウシ血清アルブミンを好適に用いることができる。第１工程の反応溶液中の前記アルブミンの濃度は0.1〜5.0 ｇ／ｄＬが好ましく、0.3〜3.0ｇ／ｄＬがさらに好ましい。
【００１９】
第１工程において、界面活性剤、リポプロテインキナーゼ、グリセロールキナーゼおよびグリセロールからなるＬＤＬ以外のリポ蛋白に作用しこれらのリポ蛋白を分解する酵素、ならびにカタラーゼ等の過酸化水素を消去するための酵素は同時に添加してもよいし、また別々に添加してもよい。好適には、これらの試薬の総てを含む試薬を調製しておき、被検試料と混合する。
【００２０】
続く第２工程では、被検試料中の残存ＬＤＬ中のトリグリセリドを定量する。これは、例えば、少なくともＬＤＬに作用する界面活性剤を加え、第１工程で加え反応系に残っているリポプロテインリパーゼ、グリセロールキナーゼおよびグリセロール３リン酸オキシダーゼの作用により生じた過酸化水素を定量することにより行なうことができる。ここで、少なくともＬＤＬに作用する界面活性剤は、ＬＤＬのみに選択的に作用する界面活性剤でもよいし、全てのリポ蛋白に作用する界面活性剤であってもよい。
【００２１】
全てのリポ蛋白に作用する界面活性剤の好ましい例として、ＨＬＢ値が１１以上１３未満、好ましくは１２以上１３未満であるポリアルキレンオキサイド誘導体を挙げることができる。誘導体の例としては高級アルコール縮合物、高級脂肪酸縮合物、高級脂肪酸アミド縮合物、高級アルキルアミン縮合物、高級アルキルメルカプタン縮合物、アルキルフェノール縮合物を挙げることができる。
【００２２】
ＨＬＢ値が１１以上１３未満のポリアルキレンオキサイド誘導体の好ましい具体例として、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル等でＨＬＢ値が１１以上１３未満の化合物を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。
【００２３】
第２工程で用いられる界面活性剤の濃度は、０．１〜１００ｇ／Ｌ程度が好ましく、さらに好ましくは１〜５０ｇ／Ｌ程度である。
第２工程のその他の好ましい反応条件は、第１工程における好ましい反応条件と同様である。
【００２４】
生じた過酸化水素の定量は、過酸化水素存在下でペルオキシダーゼの作用により４−アミノアンチピリンとフェノール系又はアニリン系水素供与体化合物とを酸化縮合させ、生じた色素を定量すればよい。フェノール系又はアニリン系水素供与体化合物としては、例えば、５-ジメトキシアニリン（ＨＤＡＯＳ）、Ｎ-エチル-Ｎ-（３-メチルフェニル）-Ｎ’-サクシニルエチレンジアミン（ＥＭＳＥ）等が挙げられる。
【００２５】
以下、本発明の実施例に基づき具体的に説明する。もっとも本発明は下記実施例に限定されるものではない。
（試薬）
次の組成からなるＬＤＬトリグリセリド定量試薬を調製した。
【００２６】
（試料）
臨床検体１２例を準備した。
（測定方法）
試料各４μLに、あらかじめ３７℃に加温した第１試薬３００μLを混和し、３７℃で５分間反応させた後に、第２試薬１００μLを加え５分間反応させ６００ｎｍにおける吸光度を測定した。測定された吸光度から事前に測定していた既知濃度試料の吸光度と比較を行い、ＬＤＬトリグリセリド濃度を算出した。
【００２７】
比較対照として超遠心法でＬＤＬ分画を採取し、市販のトリグリセリド試薬（デンカ生研社製 FG-TG(S)試薬を使用）でＬＤＬ中のトリグリセリド濃度を求めた。なお、超遠心法は「新生化学実験法講座４ 脂質Ｉ 中性脂肪とリポタンパク質」、（株）東京化学同人出版に記載されている方法を実施した。
【００２８】
【表１】
(単位:mg/dL)
表１の結果より本法と超遠心法の良好な関係が確認できる。
【００２９】
【発明の効果】
本発明の方法により、ＬＤＬ中のトリグリセリドを遠心操作等を行うことなく簡便に定量することができる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for quantifying triglycerides in low density lipoprotein in a test sample.
[0002]
[Prior art]
Low density lipoprotein (LDL) is a major player in the transport of triglycerides in the blood, and it has been clear that elevated LDL-triglyceride (LDL-C) is an important risk factor for coronary sclerosis. On the other hand, it is also true that there are many cases of developing myocardial infarction even if the LDL-C in the blood is in the normal range, and recently, changes in the quality of LDL particles have come to be emphasized ( (Refer nonpatent literature 1).
[0003]
In recent years, the relationship between small and dense LDL, which is small and heavy, and coronary arteriosclerotic disease has been highlighted, and it has been pointed out that the incidence is tripled compared to cases with LDL of normal size. Small and dense LDL particles are characterized by small size and high triglyceride content in the particles compared to normal LDL. Therefore, since the abundance of Small and dense LDL can be estimated by measuring triglycerides in LDL, it is clinically useful to be able to easily measure and quantify triglycerides in LDL.
[0004]
As a method for quantifying triglycerides in LDL, there is a method of obtaining from two operations of fractionation and triglyceride quantification.
Examples of the fractionation operation include ultracentrifugation, precipitation, and a method using an immune reaction. In any of these methods, an operation by centrifugation or filter treatment of the sample is required. For quantification, LDL obtained by fractionation is used as a sample, and there is a method of performing quantification with an automatic analyzer and a TG reagent used in clinical examinations. It is a difficult method.
[Non-Patent Document 1]
Yoshinohara et al., “Special Feature: Treatment of Hyperlipidemia, Small, dense LDL”, CURRENT THERAPY 1998, Vol.16, No.1, p.45-53
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a method for easily quantifying triglycerides in LDL in a test sample. Specifically, an object of the present invention is to provide a method for eliminating triglycerides in lipoproteins other than LDL in the first step and quantifying triglycerides in LDL in the second step.
[0006]
[Means for Solving the Problems]
The inventors of the present application combine a certain kind of surfactant and lipoprotein lipase and act on a test sample, so that chylomicron (CM) which is a lipoprotein other than LDL in the test sample, ultra-low density It has been found that reaction with triglycerides in lipoprotein (VLDL) and high density lipoprotein (HDL) occurs and these lipoproteins are decomposed. In the first step, the present inventors decompose lipoproteins other than LDL, add a surfactant that reacts with the remaining LDL in the second step, decompose LDL, and triglyceride in LDL by the action of lipoprotein lipase. It was thought that triglycerides in LDL could be quantified by quantifying the hydrogen peroxide produced by decomposition. Furthermore, in order to prevent hydrogen peroxide, which is a decomposition product of triglyceride resulting from the reaction in the first step, from being detected in the second step, a reaction system for eliminating hydrogen peroxide is incorporated. It has been found that by adding albumin to the first step, the debris of the reaction in the first step can be adsorbed and interference with the reaction in the second step can be avoided, and the present invention has been completed.
[0007]
That is, the present invention comprises a first step of eliminating triglycerides in lipoproteins other than LDL in a test sample, and then a second step of quantifying triglycerides in LDL remaining in the test sample. A method is provided.
[0008]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The method of the present invention comprises a first step and a second step. In the first step, triglycerides in lipoproteins other than LDL in the test sample are eliminated, and in the subsequent second step, residual triglycerides in the test sample are erased. Quantify. Lipoproteins other than LDL include HDL, VLDL, and CM. Since triglycerides in HDL, VLDL and CM are eliminated in the first step, the triglycerides quantified in the second step are mainly triglycerides in LDL in the test sample.
[0009]
The test sample used in the method of the present invention may be any sample as long as it may contain lipoproteins such as HDL, LDL, VLDL, and CM, for example, body fluids such as blood, serum, and plasma. However, it is not limited to these.
[0010]
“Eliminating triglycerides” in the first step means decomposing triglycerides and preventing the degradation products from being detected in the next second step. Examples of a method for selectively eliminating triglycerides contained in lipoproteins other than LDL, that is, HDL, VLDL, CM, and the like include the following methods.
[0011]
That is, in the presence of a surfactant that acts on lipoproteins other than LDL, lipoprotein lipase, glycerol kinase, and glycerol triphosphate oxidase are allowed to act to eliminate the generated hydrogen peroxide.
[0012]
As a method of eliminating hydrogen peroxide, catalase is used to decompose it into water and oxygen, and peroxidase is used to react phenolic or aniline hydrogen donor compound with hydrogen peroxide to convert it into colorless quinone. Methods can be mentioned, but any method may be used, and the method is not limited to these methods.
[0013]
The concentration of lipoprotein lipase in the reaction solution in the first step is preferably about 50 to 500 IU / mL, the concentration of glycerol kinase is preferably about 0.3 to 3.0 IU / mL, and the concentration of glycerol triphosphate oxidase is About 2-15 IU / mL is preferable. Furthermore, the concentration of catalase when hydrogen peroxide is decomposed into water and oxygen is preferably about 40 to 100 U / mL. In addition, the concentration of peroxidase when converting hydrogen peroxide to colorless quinone is preferably 0.4 to 1.0 U / mL. The concentration of the phenolic or aniline hydrogen donor compound added at this time is 0.4. ~ 0.8 mmol / L is preferred.
[0014]
Preferable examples of the surfactant that acts on lipoproteins other than LDL used in the first step include polyalkylene oxide derivatives having an HLB value of 13 or more and 14 or less. Examples of the derivatives include higher alcohol condensates, higher fatty acid condensates, higher fatty acid amide condensates, higher alkylamine condensates, higher alkyl mercaptan condensates, and alkylphenol condensates. The method for calculating the HLB of the surfactant is well known, and is described in, for example, “New Surfactant”, Hiroshi Horiuchi, 1986, Sankyo Publishing.
[0015]
Preferable specific examples of polyalkylene oxide derivatives having an HLB value of 13 or more and 14 or less include polyoxyethylene lauryl ether, polyoxyethylene cetyl ether, polyoxyethylene oleyl ether, polyoxyethylene higher alcohol ether, polyoxyethylene octyl phenyl ether , Polyoxyethylene nonyl phenyl ether, polyoxyethylene benzyl phenyl ether and the like, and compounds having an HLB value of 13 or more and 14 or less can be exemplified, but the invention is not limited thereto.
[0016]
The concentration of the surfactant used in the first step is preferably about 0.1 to 10 g / L, more preferably about 0.5 to 5.0 g / L.
The first step is preferably performed in a buffer solution having a pH of 5 to 9, and the buffer solution is preferably a buffer solution containing an amine such as Tris, triethanolamine or Gut's buffer solution. In particular, Bis-Tris, PIPES, MOPSO, BES, HEPES and POPSO which are good buffer solutions are preferable, and the concentration of the buffer solution is preferably about 10 to 500 mM.
[0017]
In the first step, a divalent metal ion may be included in the reaction solution in order to suppress the reaction with LDL and further enhance elimination of other lipoproteins. Copper ions, iron ions, and magnesium ions can be used as the divalent metal ions, but magnesium ions are particularly preferable. The concentration of the divalent metal ion is preferably about 5 to 200 mM.
The reaction temperature in the first step is suitably about 30-40 ° C, most preferably 37 ° C. The reaction time may be about 2 to 10 minutes.
[0018]
In the method of the present invention, the first step is performed in the presence of albumin. By carrying out in the presence of albumin, debris resulting from the reaction in the first step is adsorbed on albumin, and these debris can be prevented from interfering with the reaction in the second step. The albumin is not limited as long as it is albumin, and commercially available albumin such as serum albumin can be suitably used. Moreover, the origin of albumin is not limited at all, and any animal such as human, bovine, porcine or equine may be used, and particularly widely used bovine serum albumin can be preferably used. The concentration of the albumin in the reaction solution in the first step is preferably 0.1 to 5.0 g / dL, and more preferably 0.3 to 3.0 g / dL.
[0019]
In the first step, an enzyme that acts on lipoproteins other than LDL consisting of a surfactant, lipoprotein kinase, glycerol kinase and glycerol to degrade these lipoproteins, and an enzyme for eliminating hydrogen peroxide such as catalase are: They may be added simultaneously or separately. Preferably, a reagent containing all of these reagents is prepared and mixed with the test sample.
[0020]
In the subsequent second step, the triglyceride in the remaining LDL in the test sample is quantified. This includes, for example, adding at least a surfactant that acts on LDL, and quantifying hydrogen peroxide generated by the action of lipoprotein lipase, glycerol kinase, and glycerol triphosphate oxidase remaining in the reaction system in the first step. Can be done. Here, the surfactant that acts at least on LDL may be a surfactant that acts selectively only on LDL, or a surfactant that acts on all lipoproteins.
[0021]
Preferable examples of surfactants that act on all lipoproteins include polyalkylene oxide derivatives having an HLB value of 11 or more and less than 13, preferably 12 or more and less than 13. Examples of the derivatives include higher alcohol condensates, higher fatty acid condensates, higher fatty acid amide condensates, higher alkylamine condensates, higher alkyl mercaptan condensates, and alkylphenol condensates.
[0022]
Preferred examples of polyalkylene oxide derivatives having an HLB value of 11 or more and less than 13 include polyoxyethylene lauryl ether, polyoxyethylene cetyl ether, polyoxyethylene oleyl ether, polyoxyethylene higher alcohol ether, polyoxyethylene octyl phenyl ether, Examples of the compound having an HLB value of 11 or more and less than 13 such as polyoxyethylene nonylphenyl ether are not limited thereto.
[0023]
The concentration of the surfactant used in the second step is preferably about 0.1 to 100 g / L, more preferably about 1 to 50 g / L.
Other preferable reaction conditions in the second step are the same as the preferable reaction conditions in the first step.
[0024]
The generated hydrogen peroxide may be quantified by oxidative condensation of 4-aminoantipyrine and a phenolic or aniline hydrogen donor compound by the action of peroxidase in the presence of hydrogen peroxide, and quantifying the resulting dye. Examples of the phenol-based or aniline-based hydrogen donor compound include 5-dimethoxyaniline (HDAOS), N-ethyl-N- (3-methylphenyl) -N′-succinylethylenediamine (EMSE), and the like.
[0025]
Hereinafter, the present invention will be described in detail based on examples. However, the present invention is not limited to the following examples.
(reagent)
An LDL triglyceride quantitative reagent having the following composition was prepared.
(sample)
Twelve clinical specimens were prepared.
(Measuring method)
300 μL of the first reagent pre-warmed to 37 ° C. was mixed with 4 μL of each sample and reacted at 37 ° C. for 5 minutes. Then, 100 μL of the second reagent was added and reacted for 5 minutes, and the absorbance at 600 nm was measured. The LDL triglyceride concentration was calculated by comparing the measured absorbance with the absorbance of a known concentration sample that had been measured in advance.
[0027]
As a comparative control, the LDL fraction was collected by ultracentrifugation, and the triglyceride concentration in LDL was determined with a commercially available triglyceride reagent (using FG-TG (S) reagent manufactured by Denka Seken). The ultracentrifugation was carried out by the method described in “Shinsei Kagaku Kogaku Koza Lecture 4 Lipid I Neutral Fat and Lipoprotein”, Tokyo Kagaku Doujin Publishing.
[0028]
[Table 1]
From the results in Table 1, a good relationship between this method and the ultracentrifugation method can be confirmed.
[0029]
【The invention's effect】
By the method of the present invention, triglycerides in LDL can be easily quantified without performing a centrifugal operation or the like.