JP2006168084A - Laminated coating film structure - Google Patents

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JP2006168084A JP2004362138A JP2004362138A JP2006168084A JP 2006168084 A JP2006168084 A JP 2006168084A JP 2004362138 A JP2004362138 A JP 2004362138A JP 2004362138 A JP2004362138 A JP 2004362138A JP 2006168084 A JP2006168084 A JP 2006168084A
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Hiroshi Yokoyama
博志 横山
Masahiko Yamanaka
雅彦 山中
Kentaro Watanabe
健太郎 渡邉
Tsunehiko Higuchi
恒彦 樋口
Shigeki Hirabayashi
茂樹 平林
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a laminated coating film structure capable of individually and concretely specifying the origin and history of a product by using nucleic acid subjected to information processing. <P>SOLUTION: A discrimination layer containing the nucleic acid subjected to information processing, which is equipped with a region having an arbitrary or known base sequence, is provided to the lower layer of a clear coating film layer. The nucleic acid subjected to information processing is added in an amount of 0.5-500 μg/m<SP>2</SP>as the amount per the unit surface area of an article to be coated and supported on fine particles with a mean particle size of 0.01-2 μm. The fine particles are added in a ratio of 0.5-50% with respect to the surface area of the article to be coated. <P>COPYRIGHT: (C)2006,JPO&NCIPI

Description

本発明は、積層塗膜構造に係り、更に詳細には、個別認証に利用できる情報化核酸を用いた積層塗膜構造に関する。   The present invention relates to a multilayer coating film structure, and more particularly to a multilayer coating film structure using an information nucleic acid that can be used for individual authentication.

従来から、個別認証には、ナンバープレート、紙幣などの透かし印刷、ICチップ及びクレジットカードの写真などが利用されている。しかし、これらの個別認証手段は、剥離、切断、消去などにより製品から除去できるという欠点があった。このため、製品から取り除くことのできない、即ち消失しない認証情報の開発が期待されていた。   Conventionally, for individual authentication, a license plate, watermark printing such as banknotes, an IC chip and a photo of a credit card are used. However, these individual authentication means have a drawback that they can be removed from the product by peeling, cutting, erasing or the like. For this reason, it has been expected to develop authentication information that cannot be removed from the product, that is, does not disappear.

一方、DNAは、元来全ての生物が保有し、それぞれの生物において、全ての遺伝情報を含む情報生体分子である。その多くは多数のタンパク質のアミノ酸配列に対応するものである。即ち、デオキシアデノシン(dA)、デオキシグアノシン(dG)、デオキシシトシン(dC)及びデオキシチミン(dT)がリン酸エステル結合を介し一定の方向性をもって結合して成り、その塩基数をn個とすると、その長さのDNAは4種類存在することになる。従って、例えばわずか16種類の塩基数でも約43億種類のそれぞれ区別できるDNAが存在し得る。現在では、数十塩基配列を有するDNAであれば、どのような配列のものでも任意に合成することができる。また、DNAは、ある程度以上の量があれば、自動配列読み取り装置(シーケンサー)で自動的にその配列を決定することができる。 On the other hand, DNA is an information biomolecule originally possessed by all living organisms and including all genetic information in each organism. Many of them correspond to the amino acid sequences of many proteins. That is, deoxyadenosine (dA), deoxyguanosine (dG), deoxycytosine (dC), and deoxythymine (dT) are bonded with a certain direction through a phosphate ester bond, and the number of bases is n. Thus, there are 4n types of DNA having that length. Thus, for example, there can be about 4.3 billion types of distinguishable DNAs with only 16 types of bases. At present, any DNA having a sequence of several tens of bases can be arbitrarily synthesized. In addition, if the amount of DNA exceeds a certain level, the sequence can be automatically determined by an automatic sequence reader (sequencer).

このような背景から、水不溶性媒体にDNAを含ませた偽造防止ラベルを製品に用いることにより、該DNAの存在・不存在を手掛かりにして、その製品の真偽を明らかにすることが提案されている(特許文献1参照)。
特開2004−159502号公報
From such a background, it has been proposed to use a forgery-preventing label in which DNA is contained in a water-insoluble medium in a product to clarify the authenticity of the product based on the presence or absence of the DNA. (See Patent Document 1).
JP 2004-159502 A

しかし、特許文献1に記載の技術は、基本的にはDNAと水不溶媒体の混合方法に係るものであり、製品の真偽確認方法としては、PCR法によるリボ核酸の増幅の有無を確認することにより、リボ核酸入りの対象製品を同定することが示されている。また、DNAの存在・不存在を検定指標とする真偽確認データは元より、DNAの配列を検定指標とし、同種製品であっても個々の製品毎の認証を可能とする、個別認証に関するデータは開示されていない。   However, the technique described in Patent Document 1 basically relates to a method of mixing DNA and a water non-solvent, and as a product authenticity confirmation method, the presence or absence of amplification of ribonucleic acid by the PCR method is confirmed. This indicates that the target product containing ribonucleic acid is identified. In addition, authenticity verification data that uses the presence / absence of DNA as a test index is data related to individual authentication that uses DNA sequence as a test index and enables authentication for each product even for the same type of product. Is not disclosed.

一方、車両など物品の盗難・損壊事件においては、事件現場に残された物品の塗料片から対象物品を早期に特定したいという要請がある。   On the other hand, in the case of theft / damage of articles such as vehicles, there is a demand for identifying the target article at an early stage from the paint piece of the article left on the scene of the incident.

本発明は、このような従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、情報化核酸を含有することにより、どのような出所・履歴の製品であるかを個別具体的に特定できる積層塗膜構造を提供することにある。   The present invention has been made in view of such problems of the prior art, and the object of the present invention is to individually identify the source / history product by containing information nucleic acid. It is providing the laminated coating film structure which can be specified concretely.

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、DNAに代表される核酸を一つの認証情報としてとらえ、積層塗膜構造中の情報化核酸を後から検出することにより、上記課題が解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to solve the above-mentioned problems, the present inventors considered a nucleic acid typified by DNA as one piece of authentication information, and later detects the information nucleic acid in the laminated coating film structure, The present inventors have found that the above problems can be solved and have completed the present invention.

本発明によれば、工業製品などの量産品であっても、含まれる情報化核酸の配列を決定することにより、対象となる製品を個別的に認証できる。   According to the present invention, even if it is a mass-produced product such as an industrial product, the target product can be individually authenticated by determining the sequence of the contained information nucleic acid.

以下、本発明の積層塗膜構造について詳細に説明する。なお、本明細書及び特許請求の範囲において、「%」は特記しない限り質量百分率を示す。   Hereinafter, the laminated coating film structure of the present invention will be described in detail. In the present specification and claims, “%” indicates a mass percentage unless otherwise specified.

本発明の積層塗膜構造は、クリヤー塗膜層の下層に、任意且つ既知の塩基配列を有する部位を備える情報化核酸を含有する識別層を有するものである。この識別層は、塗料の一種として容易に製品に塗布できるとともに、塗膜形成後は該製品から除去することが困難となるので、優れた個別認証手段として使用できる。   The laminated coating film structure of the present invention has an identification layer containing an information nucleic acid provided with a site having an arbitrary and known base sequence below the clear coating film layer. This identification layer can be easily applied to a product as a kind of paint, and it is difficult to remove it from the product after the coating film is formed, so that it can be used as an excellent individual authentication means.

ここで、上記情報化核酸とは、DNA(デオキシリボ核酸)、RNA(リボ核酸)及びこれらの誘導体をいい、天然型でも人工型でも良いが、使用環境が厳しい積層塗膜構造中に含めることを考慮すると、構造的に安定している人工型を使用するのが好ましい。人工型においては天然型には存在しない結合様式の(例えばヌクレオシド同士の結合がリン酸エステル結合だけでなくチオリン酸エステル結合のような非天然型を含むなどの)配列を形成できる。   Here, the above-mentioned information nucleic acid refers to DNA (deoxyribonucleic acid), RNA (ribonucleic acid) and derivatives thereof, which may be natural or artificial, but should be included in the laminated coating film structure where the usage environment is severe. In consideration, it is preferable to use an artificial mold that is structurally stable. In the artificial type, a sequence having a binding mode that does not exist in the natural type (for example, a linkage between nucleosides includes not only a phosphate ester bond but also a non-natural type such as a thiophosphate ester bond) can be formed.

また、上記情報化核酸において、塩基配列部位が任意であるとは、検出可能な塩基配列である限り無作為に選択され得ることを示し、塩基配列部位が既知であるとは、個別認証に用いられる塩基配列が予め把握されていることを示す。   In addition, in the above-mentioned information nucleic acid, that the base sequence site is arbitrary means that it can be randomly selected as long as it is a detectable base sequence, and that the base sequence site is known is used for individual authentication. It shows that the base sequence to be grasped in advance.

上記情報化核酸の大きさは、核酸全体における塩基数が200以下であることが好ましい。200を超えると合成の段階でごくわずかずつ未反応部位が生成し、塩基が欠けたものの含有量が増大し易い。より好ましくは100塩基程度であることが良い。 更に、上記塩基配列においてチミン同士が隣接しないことが好ましい。これより、チミンがダイマー化するのを抑制できる。   As for the size of the information nucleic acid, the number of bases in the whole nucleic acid is preferably 200 or less. When it exceeds 200, unreacted sites are generated little by little at the stage of synthesis, and the content of those lacking a base tends to increase. More preferably, it is about 100 bases. Furthermore, it is preferable that thymines are not adjacent to each other in the above base sequence. Thereby, it can suppress that thymine dimerizes.

また、上記情報化核酸は、OH基と反応する化合物と併用する場合や厳しい環境下で使用される場合の安定性を向上させる観点から、保護基により誘導化されていることが好ましい。具体的には、5´位、3´位のいずれか一方又は双方にある水酸基を、リン酸エステル基、アシル基、アルコキシカルボニル基、ベンジル基、置換ベンジル基及びアリル基などを用いて誘導化することができる。図1の(A)に天然型DNA、(B)に5´位を誘導化したDNAを示す。   In addition, the information nucleic acid is preferably derivatized with a protecting group from the viewpoint of improving stability when used in combination with a compound that reacts with an OH group or when used in a severe environment. Specifically, a hydroxyl group at one or both of the 5′-position and the 3′-position is derivatized with a phosphate ester group, an acyl group, an alkoxycarbonyl group, a benzyl group, a substituted benzyl group, an allyl group, or the like. can do. FIG. 1A shows natural DNA, and FIG. 1B shows DNA derivatized at the 5 ′ position.

更に、単離や精製の利便性を高める観点から、5´位の水酸基をビオチン又は蛍光分子により誘導化することが好ましい。具体的には、ビチオンを用いるとアビジンというタンパク質を結合したカラムに選択的に吸着され易くなる。一方、フルオレセインなどの蛍光分子を用いると核酸自体が蛍光をもつようになるため、感度よく検出でき精製等が容易になる。このように、単離や精製の利便性を高めると、個別認証が極めて容易になる。   Furthermore, from the viewpoint of enhancing the convenience of isolation and purification, it is preferable to derivatize the hydroxyl group at the 5 ′ position with biotin or a fluorescent molecule. Specifically, when vithion is used, it is easily adsorbed selectively on a column to which a protein called avidin is bound. On the other hand, when a fluorescent molecule such as fluorescein is used, the nucleic acid itself becomes fluorescent, so that it can be detected with high sensitivity and purification is facilitated. Thus, when the convenience of isolation and purification is increased, individual authentication becomes extremely easy.

なお、上記情報化核酸としてRNAを用いるときは、安定性を向上させる観点から2´位の水酸基を上記保護基により誘導化することもできる。   When RNA is used as the information nucleic acid, the 2′-position hydroxyl group can be derivatized with the protecting group from the viewpoint of improving stability.

また、上記情報化核酸は、積層塗膜構造の識別層中の含有量が少ない場合でも効率良く検出されるようにする観点から、上記塩基配列部位が該情報化核酸の増幅に用いられる部位であることが好ましい。かかる情報化核酸の増幅方法としては、相乗的に増幅させることのできるポリメラーゼ連鎖反応(PCR)が適宜採用できる。   Further, from the viewpoint of efficiently detecting the information nucleic acid even when the content in the identification layer of the laminated coating film structure is small, the base sequence site is a site used for amplification of the information nucleic acid. Preferably there is. As a method for amplifying such information nucleic acid, polymerase chain reaction (PCR) that can be amplified synergistically can be appropriately employed.

代表的には、情報化核酸が極微量であっても極度に増幅できるPCR法を採用することが望ましい。この方法では、例えば、DNAの末端数十塩基と相補的な塩基(プライマー)の存在下に温度制御を行いつつ耐熱性のDNAポリメラーゼを作用させると、元のDNAを倍増させることができる。これを例えば30回繰り返せば数億倍に増幅させることができる。この増幅により微量のサンプルからでもその配列を決定するのに十分な量を得ることができるようになり、ひいては配列に対応する情報から該情報化核酸が含まれていた製品(積層塗膜構造)の「身元」が判明することになる。   Typically, it is desirable to employ a PCR method that can be amplified extremely even if the information nucleic acid is extremely small. In this method, for example, when a thermostable DNA polymerase is allowed to act while controlling the temperature in the presence of a base (primer) complementary to several tens of bases of the DNA, the original DNA can be doubled. If this is repeated 30 times, for example, it can be amplified several hundred million times. This amplification makes it possible to obtain a sufficient amount to determine the sequence even from a very small amount of sample, and in turn the product containing the information nucleic acid from the information corresponding to the sequence (laminated coating film structure) Will be revealed.

また、このときは、上記増幅に用いられる部位として、両端にポリメラーゼ連鎖反応(PCR)に必要なプライマー対応部位を有することが好ましい。情報化核酸はプライマーを備えていなくても使用できるが、プライマーを備えることにより短時間で識別できるようになるからである。   In this case, it is preferable that the sites used for the amplification have primer-corresponding sites necessary for polymerase chain reaction (PCR) at both ends. This is because an information nucleic acid can be used without a primer, but it can be identified in a short time by providing a primer.

かかるプライマー対応部位について、塩基数の下限は5以上であることが好ましい。より好ましくは10以上であることが良い。塩基数が5未満では、区別できる核酸の数が減少し、特に多くの製品(積層塗膜構造)が混在するときは識別に時間がかかってしまう。一方、塩基数の上限は100以下であることが好ましい。塩基数が100を超えるといずれかの位置の塩基を欠いた副生成物の比率が高くなり、精製に手間がかかるか、場合によっては精製困難となってしまう。   For such a primer corresponding site, the lower limit of the number of bases is preferably 5 or more. More preferably, it is 10 or more. If the number of bases is less than 5, the number of nucleic acids that can be distinguished decreases, and when many products (laminated coating film structures) are mixed, it takes time to identify them. On the other hand, the upper limit of the number of bases is preferably 100 or less. When the number of bases exceeds 100, the ratio of by-products lacking a base at any position increases, and purification takes time, or in some cases, purification becomes difficult.

なお、情報化核酸としてRNAを用いるときは、逆転写酵素を用いて配列の相補的なDNAを得、このDNAを用いてPCR法を行うことができる。   In addition, when RNA is used as the information nucleic acid, DNA complementary to the sequence can be obtained using reverse transcriptase, and PCR can be performed using this DNA.

また、上記情報化核酸は、上記塩基配列部位の他に更に認証情報部位を有することが好ましい。このときは、より詳細な情報設定により個別認証を実行できる。   The information nucleic acid preferably further has an authentication information site in addition to the base sequence site. In this case, individual authentication can be executed by more detailed information setting.

例えば、図2に示すように、両端にプライマー対応部位を備えた情報化DNAであれば、中央にm個の塩基数の配列を置き(B1〜Bm)、この部分の配列情報を認証情報に対応させる。その両端には、それぞれl(エル)個、n個のプライマーに相補的な配列(X1〜Xl,P1〜Pn)を連結する。この部分が存在することにより初めてPCR法の採用が可能となる。情報化DNAはこの1本鎖のもの又はそれと相補的な配列のDNAと複合体を形成した2本鎖のものを情報素子として用いることができる。このプライマー対応部位の配列は、できるだけ相補的配列の結合が安定になり且つPCR法による増幅が円滑に進行するように工夫できる。   For example, as shown in FIG. 2, in the case of information-oriented DNA having primer-corresponding sites at both ends, a sequence with m bases is placed in the center (B1 to Bm), and the sequence information of this portion is used as authentication information. Make it correspond. At both ends, sequences (X1 to Xl, P1 to Pn) complementary to l (el) and n primers are ligated, respectively. The presence of this part makes it possible to adopt the PCR method for the first time. The information DNA can be used as an information element of this single-stranded DNA or a double-stranded DNA complexed with a complementary sequence of DNA. The sequence of the primer corresponding site can be devised so that the binding of complementary sequences is as stable as possible and amplification by the PCR method proceeds smoothly.

更に、積層塗膜構造の識別層において、情報化核酸の含有量は、被塗物の単位表面積あたりの量として0.5〜500μg/mにすることが、情報化核酸の検出精度及び識別層中への分散性などを良好とする観点から好適である。より好ましくは50〜100μg/m、特に好ましくは60〜80μg/mであることが良い。含有量が0.5μg/mより少ないと、識別層から情報化核酸を識別することが困難になり易い。500μg/mを超えると、識別層の上層であるクリヤー塗膜層の接着面積が低下して剥がれが生じ易くなる。 Furthermore, in the identification layer of the laminated coating film structure, the information nucleic acid content should be 0.5 to 500 μg / m 2 as the amount per unit surface area of the object to be coated. This is preferable from the viewpoint of improving the dispersibility in the layer. More preferably 50-100 [mu] g / m 2, it is good particularly preferably 60 to 80 [mu] g / m 2. When the content is less than 0.5 μg / m 2, it is difficult to identify the information nucleic acid from the identification layer. If it exceeds 500 μg / m 2 , the adhesion area of the clear coating layer, which is the upper layer of the identification layer, is reduced, and peeling tends to occur.

上記識別層の原料としては、水又は溶剤に情報化核酸を溶解又は分散させたものとすることができる。この原料には、情報化核酸の他に、例えば、有機顔料、無機顔料、分散剤及び硬化促進剤などの各種添加剤を適宜含有させることができる。   As the raw material of the identification layer, information nucleic acid can be dissolved or dispersed in water or a solvent. In addition to the information nucleic acid, this raw material can appropriately contain various additives such as organic pigments, inorganic pigments, dispersants, and curing accelerators.

また、上記情報化核酸は、単独で適用しても良いが、微粒子に担持することが好適である。これより、識別層の原料に含有させた情報化核酸が、同原料から流出するのを抑制でき、識別層の長寿命化を実現する。   The information nucleic acid may be applied alone, but is preferably carried on fine particles. As a result, it is possible to suppress the outflow of the information nucleic acid contained in the raw material of the identification layer from the raw material, thereby realizing a long life of the identification layer.

更に、上記微粒子の平均粒径は、0.01〜2μmであることが、情報化核酸の検出精度及び識別層原料への分散性などを良好とする観点から好適であり、より好ましくは0.02〜1μmであることが良い。この平均流径が0.01μmより小さいと検出精度が低下し易く、2μmより大きいと透明性が低下し易い。   Furthermore, the average particle size of the fine particles is preferably 0.01 to 2 μm from the viewpoint of improving the detection accuracy of the information nucleic acid and the dispersibility of the identification layer material, and more preferably, the average particle size is preferably 0.2. It is good that it is 02-1 micrometer. If the average flow diameter is smaller than 0.01 μm, the detection accuracy tends to be lowered, and if it is larger than 2 μm, the transparency tends to be lowered.

更にまた、上記微粒子の含有量は、被塗物の表面積に対して占める割合が0.5〜50%であることが、情報化核酸の検出精度及び識別層原料への分散性などを良好とする観点から好適である。より好ましくは5〜30%であり、特に好ましくは10〜20%であることが良い。含有量が0.5%より少ないと、サンプリングされた識別層中の微粒子の量が少な過ぎるために、検出の精度が低下する可能性がある。50%を超えると、識別層の上層であるクリヤー塗膜層の接着面積が低下して剥がれが生じ易くなる。   Furthermore, the content of the fine particles is preferably 0.5 to 50% of the surface area of the object to be coated, so that the detection accuracy of the information nucleic acid and the dispersibility in the identification layer material are good. It is suitable from a viewpoint to do. More preferably, it is 5 to 30%, and particularly preferably 10 to 20%. If the content is less than 0.5%, the amount of fine particles in the sampled identification layer is too small, and the detection accuracy may be reduced. If it exceeds 50%, the adhesion area of the clear coating layer, which is the upper layer of the identification layer, is lowered and peeling tends to occur.

上記微粒子としては、例えば、シリカや酸化亜鉛の他、酸化チタンや酸化モリブデン、酸化タングステン、チタン酸バリウムなどが好適に用いられる。また、上記微粒子は、滅菌蒸留水中に分散させて懸濁液となし、この懸濁液に上記情報化核酸をそのまま、あるいは当該情報化核酸を滅菌蒸留水に溶解させた情報化核酸水溶液を加え、乾燥することによって製造することができる。このとき、上記情報化核酸については、一部を水溶液とすることなくそのままの状態で加え、残部を水溶液の状態で加えるようにしても何ら差し支えない。   As the fine particles, for example, titanium oxide, molybdenum oxide, tungsten oxide, barium titanate and the like are preferably used in addition to silica and zinc oxide. The fine particles are dispersed in sterile distilled water to form a suspension, and the information nucleic acid is added to the suspension as it is or an information nucleic acid aqueous solution in which the information nucleic acid is dissolved in sterile distilled water is added. It can be manufactured by drying. At this time, a part of the information nucleic acid may be added as it is without forming an aqueous solution, and the rest may be added in the state of an aqueous solution.

また、このとき、上記懸濁液には、アルコール(例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、ノナノールなど)、エステル(例えば、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸プロピルなど)、ケトン(例えば、アセトン、ジメチルケトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトンなど)及び芳香族溶剤(トルエン、ヘキサン、シクロヘキサン、キシレンなど)の溶媒を更に添加することが望ましく、これによって上記微粒子の懸濁液中における分散性が向上すると共に、情報化核酸が添加された後の水分及び溶剤分の揮発が促進されることになる。   At this time, the suspension includes alcohol (eg, methanol, ethanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol, heptanol, octanol, nonanol, etc.), ester (eg, ethyl acetate, butyl acetate, propyl acetate, etc.) ), Ketones (for example, acetone, dimethyl ketone, methyl ethyl ketone, diethyl ketone, etc.) and aromatic solvents (toluene, hexane, cyclohexane, xylene, etc.) are preferably further added to the suspension of the fine particles. As well as improving dispersibility, the volatilization of water and solvent after the addition of the information nucleic acid is promoted.

なお、これら溶媒は1種のみに限定されず、2種以上の溶媒を併用することも可能である。また、これら溶媒は、情報化核酸と同時、あるいは情報化核酸を加えた後に添加しても、特に差し支えはない。   In addition, these solvents are not limited to only 1 type, It is also possible to use 2 or more types of solvents together. These solvents may be added at the same time as the information nucleic acid or after the information nucleic acid is added.

上記溶媒の添加量としては、アルコールの場合には、滅菌蒸留水/アルコールの容量比を1〜99の範囲とすることが好ましく、アルコール以外の溶媒の場合、即ちエステル、ケトン、芳香族溶剤の場合には、滅菌蒸留水/溶媒の容量比を1〜75の範囲とすることが好ましい。   As the amount of the solvent added, in the case of alcohol, the volume ratio of sterilized distilled water / alcohol is preferably in the range of 1 to 99. In the case of a solvent other than alcohol, that is, the ester, ketone, aromatic solvent In some cases, the volume ratio of sterile distilled water / solvent is preferably in the range of 1 to 75.

即ち、溶媒の添加量が少な過ぎると、溶媒添加による上記効果が十分に得られず、逆に多過ぎても、水との相溶性低下によって水が揮発せずに残り易くなり、上記効果が十分に得られないようになる傾向がある。   That is, if the addition amount of the solvent is too small, the above-mentioned effect due to the addition of the solvent cannot be obtained sufficiently, and conversely, even if it is too much, the water tends to remain without volatilization due to a decrease in compatibility with water. There is a tendency to become insufficient.

次に、本発明の積層塗膜構造について詳細に説明する。積層塗膜構造は、任意の基材上に配設し固化して成るものであって、例えば、図3に示すように、最下層の下塗り塗膜層1、中塗り塗膜層2、ベース層3と、識別層4及び最上層のクリヤー塗膜層5を備えており、クリヤー塗膜層5の下層である識別層4に、プライマー対応部位を備えた情報化DNAを含有させている。   Next, the laminated coating film structure of the present invention will be described in detail. The laminated coating film structure is formed on an arbitrary base material and solidified. For example, as shown in FIG. 3, the lowermost undercoat coating layer 1, the intermediate coating layer 2, and the base A layer 3, an identification layer 4, and an uppermost clear coating layer 5 are provided, and the identification layer 4, which is the lower layer of the clear coating layer 5, contains information DNA having a primer corresponding site.

また、識別層の膜厚としては、特に限定されるものではないが、20〜30μm程度とすることが情報化核酸の検出精度などの観点から好ましい。   Further, the thickness of the identification layer is not particularly limited, but is preferably about 20 to 30 μm from the viewpoint of the detection accuracy of the information nucleic acid.

なお、上記任意の基材としては、代表的には鉄、アルミニウム及び銅などの各種金属材、ポリプロピレン及びポリカーボネートなどの各種有機材、石英及びセラミックス(炭化カルシウム他)などの各種無機材が挙げられる。また、これらに積層塗膜構造を被覆する方法としては、公知慣用の方法が採用できる。例えば、はけ塗り法、吹付け法、静電塗装法、電着塗装法、更にはスパッタ法などが挙げられる。更に、上記識別層は、情報化核酸が検出できる範囲で被覆されていれば良く、基材の全体又は一部に被覆できる。   In addition, as said arbitrary base material, various inorganic materials, such as various metal materials, such as iron, aluminum, and copper, various organic materials, such as a polypropylene and a polycarbonate, quartz, and ceramics (calcium carbide etc.), are mentioned typically. . Moreover, as a method of coating these with a laminated coating film structure, a known and commonly used method can be employed. For example, a brush coating method, a spraying method, an electrostatic coating method, an electrodeposition coating method, and a sputtering method can be used. Further, the identification layer only needs to be coated in a range where the information nucleic acid can be detected, and can be coated on the whole or a part of the substrate.

以上説明した積層塗膜構造においては、識別層中の情報化核酸を検出することにより、個別認証を行うことができる。   In the laminated coating film structure described above, individual authentication can be performed by detecting the information nucleic acid in the identification layer.

このとき、塩基配列を決定するに当たり、識別層から抽出される該情報化核酸のデータと、該情報化核酸のデータを少なくとも含む情報化核酸データベースとを対比することが望ましい。予め把握された情報化核酸のデータベースと比較することにより製品認証にかかる時間を大幅に減らすことが可能となる。   At this time, in determining the base sequence, it is desirable to compare the information nucleic acid data extracted from the identification layer with the information nucleic acid database including at least the information nucleic acid data. The time required for product authentication can be significantly reduced by comparing with a database of information nucleic acids that has been grasped in advance.

かかるデータベースに蓄えられるデータとしては、例えば電気泳動時間やゲル濾過した際の移動距離(これは、情報化核酸自体をコントロールレーンに流せば足りる)などを挙げることができる。   Examples of data stored in such a database include electrophoresis time and movement distance when gel filtration is performed (this is sufficient if the information nucleic acid itself is allowed to flow in the control lane).

また、上記個別認証方法において、PCR法により情報化核酸を増幅させるに当たり、抽出された情報化核酸の溶液、PCR緩衝液、滅菌蒸留水、少なくとも1種のプライマー、2,3−ジデオキシヌクレオシド三リン酸(dNTP)及びポリメラーゼを混合し、(1)92〜95℃で2〜5分間加熱し、次いで、(2a)92〜95℃で30〜60秒間、(2b)20〜50℃で30〜60秒間、(2c)70〜80℃で30〜120秒間、の加熱サイクルを20〜50回繰り返し、しかる後、(3)70〜80℃で1〜10分間加熱処理することが好ましい。なお、情報化核酸の塩基配列の任意性を高めるという観点からはより2種のプライマーを用いることが好ましい。   In the individual authentication method, when the information nucleic acid is amplified by the PCR method, the extracted information nucleic acid solution, PCR buffer solution, sterile distilled water, at least one primer, 2,3-dideoxynucleoside triphosphate Acid (dNTP) and polymerase are mixed, (1) heated at 92-95 ° C. for 2-5 minutes, then (2a) at 92-95 ° C. for 30-60 seconds, (2b) at 20-50 ° C. for 30- It is preferable that the heating cycle of (2c) at 70 to 80 ° C. for 30 to 120 seconds is repeated 20 to 50 times for 60 seconds, and then (3) heat treatment is performed at 70 to 80 ° C. for 1 to 10 minutes. In addition, it is preferable to use two types of primers from the viewpoint of enhancing the arbitraryness of the base sequence of the information nucleic acid.

(1)において、94℃で5分が特に好ましい。92℃で2分より短いとDNAの2本差への分離が困難になり、95℃で5分より長いと、酵素が失活するからである。なお、識別層に含まれる情報化核酸が1本鎖である場合には不要である。   In (1), 5 minutes at 94 ° C. is particularly preferable. If it is shorter than 2 minutes at 92 ° C., it will be difficult to separate the DNA into two differences, and if it is longer than 5 minutes at 95 ° C., the enzyme will be inactivated. Note that this is unnecessary when the information nucleic acid contained in the identification layer is single-stranded.

また、(2a)において94℃で30秒が特に好ましい。92℃で30秒より短いと増幅率が低下し、95℃で60秒より長いと、酵素が失活する。   Further, in (2a), 30 seconds at 94 ° C. is particularly preferable. When the temperature is shorter than 30 seconds at 92 ° C., the amplification factor decreases, and when it is longer than 60 seconds at 95 ° C., the enzyme is inactivated.

更に、(2b)において40℃で30秒が特に好ましい。20℃で30秒より短いとプライマーとDNAの結合が困難になり、50℃で60秒より長いと、酵素が失活する。   Further, in (2b), 30 seconds at 40 ° C. is particularly preferable. When it is shorter than 30 seconds at 20 ° C., it becomes difficult to bind the primer and DNA, and when it is longer than 60 seconds at 50 ° C., the enzyme is inactivated.

また、(2c)において72℃で30秒が特に好ましい。70℃で30秒より短いと伸長が不十分になり、80℃で120秒より長いと酵素が失活する。   Further, in (2c), 30 seconds at 72 ° C. is particularly preferable. If it is shorter than 30 seconds at 70 ° C., the elongation becomes insufficient, and if it is longer than 120 seconds at 80 ° C., the enzyme is deactivated.

更に、(3)において72℃で7分が特に好ましい。70℃で1分より短いと伸長が不十分になり、80℃で10分より長いと時間の無駄になる。   Further, in (3), 7 minutes at 72 ° C. is particularly preferable. If it is shorter than 1 minute at 70 ° C., the elongation becomes insufficient, and if it is longer than 10 minutes at 80 ° C., time is wasted.

更にまた、加熱サイクル(2a)〜(2c)の繰り返しは、30回が特に好ましく、20回より少ないと増幅率が低下し、50回より多いと時間の無駄になる。   Furthermore, the repetition of the heating cycles (2a) to (2c) is particularly preferably 30 times. When the heating cycle is less than 20, the amplification factor decreases, and when it is more than 50, time is wasted.

図4に、上記個別認証方法の一実施形態のフロー図を示す。図示のように、S1において、積層塗膜構造の識別層から情報化DNAを抽出する。S2において、凍結乾燥により濃縮する。S3において、2種類のプライマーとポリメラーゼを加える。S4において、PCRを繰り返すことによりDNAを増幅する。S5において、残った余分なプライマーを一本鎖DNA開烈酵素により分解する。S6において、二本鎖である情報化DNAをゲル濾過で精製する。S7において、シーケンサーにより配列決定を行う。   FIG. 4 shows a flowchart of an embodiment of the individual authentication method. As shown in the figure, in S1, information DNA is extracted from the identification layer of the laminated coating film structure. In S2, it is concentrated by lyophilization. In S3, two kinds of primers and a polymerase are added. In S4, DNA is amplified by repeating PCR. In S5, the remaining excess primer is degraded by a single-stranded DNA cleavage enzyme. In S6, the double-stranded information DNA is purified by gel filtration. In S7, sequencing is performed by a sequencer.

ここで、S1においては、例えば識別層又は識別層を含む積層塗膜構造を粉末にして少量の水と混ぜればよいが、例えば情報化DNAを微粒子に担持させる際に化学的結合させた場合には、加水分解などすることにより効率良く抽出することができる。また、S2においては、例えば遠心エバポレーターを用いて濃縮してもよい。更に、S5においては、一本鎖DNA切断酵素として、例えばTaq DNA ポリメラーゼ、Tth DNAポリメラーゼ、Tfl DNAポリメラーゼ、Ventポリメラーゼ、Pfuポリメラーゼ、Bca BESTポリメラーゼ、KOD DNAポリメラーゼなどを使用できる。また、S6とS7との間に、更にS3及び4と同様の操作を繰り返して、目的のDNAを増幅させてもよい。S7においては、質量分析装置によって配列決定を行ってもよく、シーケンサーによる配列決定と組み合わせてもよい。   Here, in S1, for example, the identification layer or the laminated coating structure including the identification layer may be powdered and mixed with a small amount of water. For example, when the information DNA is chemically bonded to the fine particles, Can be extracted efficiently by hydrolysis or the like. Moreover, in S2, you may concentrate using a centrifugal evaporator, for example. Further, in S5, for example, Taq DNA polymerase, Tth DNA polymerase, Tfl DNA polymerase, Vent polymerase, Pfu polymerase, Bca BEST polymerase, KOD DNA polymerase and the like can be used as the single-stranded DNA cleaving enzyme. Further, the target DNA may be amplified between S6 and S7 by repeating the same operations as in S3 and S4. In S7, sequencing may be performed by a mass spectrometer, or may be combined with sequencing by a sequencer.

また、情報化核酸の単離や精製の利便性を高める観点から、5´位の水酸基をビオチン又は蛍光分子により誘導化することが好ましい。具体的には、ビチオンを用いるとアビジンというタンパク質を結合したカラムに選択的に吸着され易くなる。一方、フルオレセインなどの蛍光分子を用いると核酸自体が蛍光をもつようになるため、感度よく検出でき精製等が容易になる。このように、単離や精製の利便性を高めると、個別認証が極めて容易になる。   From the viewpoint of enhancing the convenience of isolation and purification of the information nucleic acid, it is preferable to derivatize the 5′-position hydroxyl group with biotin or a fluorescent molecule. Specifically, when vithion is used, it is easily adsorbed selectively on a column to which a protein called avidin is bound. On the other hand, when a fluorescent molecule such as fluorescein is used, the nucleic acid itself becomes fluorescent, so that it can be detected with high sensitivity and purification is facilitated. Thus, when the convenience of isolation and purification is increased, individual authentication becomes extremely easy.

更にまた、例えば5´位を硫黄に置換した場合には、水で抽出したものを更に金(Au)をコーティングした担体のカラムを通すことで容易に分離をすることができる。   Furthermore, for example, when the 5′-position is substituted with sulfur, it can be easily separated by passing the column extracted with water through a carrier column coated with gold (Au).

以下、本発明を実施例により更に詳述するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples, but the present invention is not limited to these examples.

1.プライマー対応部位を備えた情報化DNAの微粒子への固定化
(1)以下の粒径が異なる微粒子4gに、30%エタノール含有滅菌蒸留水を15mL加えて懸濁させた。
(2)情報化DNA10nmol(200μm)を滅菌蒸留水0.5mLに溶解し、これを上記の微粒子懸濁液に加えて充分に攪拌し、さらに、エタノール4mLを加えて攪拌した。
(3)プラスチック製の円形の皿に懸濁液を注ぎ、上部を通気性の良い紙又は布で覆って2日間自然乾燥させた。
(4)懸濁液がほぼ乾燥したものをデシケータに入れ、40℃の加熱下で減圧乾燥を行った。
(5)充分に乾燥した固体を、乳鉢等で砕いて微粉末にした。
1. Immobilization of informational DNA having primer-corresponding sites on microparticles (1) 15 mL of 30% ethanol-containing sterilized distilled water was added to and suspended in 4 g of microparticles having different particle sizes.
(2) 10 nmol (200 μm) of computerized DNA was dissolved in 0.5 mL of sterile distilled water, and this was added to the fine particle suspension and stirred sufficiently. Further, 4 mL of ethanol was added and stirred.
(3) The suspension was poured into a plastic circular dish, and the upper part was covered with air-permeable paper or cloth and allowed to air dry for 2 days.
(4) The suspension was almost dried and placed in a desiccator, and dried under reduced pressure under heating at 40 ° C.
(5) The sufficiently dried solid was crushed with a mortar or the like into a fine powder.

2.使用した微粒子
(1)平均粒径0.02μm:昭和電工(株)製 ZS−032(酸化亜鉛)
(2)平均粒径40μm:(株)マイクロン製 AW40−74(酸化アルミニウム)
(3)平均粒径60μm(株)マイクロン製 AW50−74(酸化アルミニウム)
2. Fine particles used (1) Average particle size: 0.02 μm: ZS-032 (Zinc oxide) manufactured by Showa Denko KK
(2) Average particle size of 40 μm: AW40-74 (aluminum oxide) manufactured by Micron Corporation
(3) AW50-74 (aluminum oxide) manufactured by Micron Corporation with an average particle size of 60 μm

3.プライマー対応部位を備えた情報化DNAを含有する塗布液(識別層の原料)の調整
0.4gのプライマー対応部位を備えた情報化DNAが固定化された微粒子を1000gの蒸留水に分散させた。
3. Preparation of coating solution (information material for identification layer) containing informational DNA with primer-corresponding sites 0.4 g of microparticles with immobilized informational DNA with primer-corresponding sites were dispersed in 1000 g of distilled water. .

4.積層塗膜の形成
リン酸亜鉛処理した厚み0.8mm、70mm×150mmのダル鋼板に、カチオン電着塗料(商品名「パワートップU600M」、日本ペイント社製カチオン型電着塗料)を、乾燥膜厚が20μmとなるように電着塗装した後、160℃で30分間焼き付けた。その後、日本油脂社製のグレーの中塗り(商品名:ハイエピコNo.500)を30μm塗装し、140℃で30分間焼き付けた。
4). Formation of multi-layer coating film Cathodic electrodeposition paint (trade name “Power Top U600M”, cation type electrodeposition paint manufactured by Nippon Paint Co., Ltd.) is dried on a dull steel plate with a thickness of 0.8 mm and 70 mm × 150 mm treated with zinc phosphate. After electrodeposition coating so that the thickness was 20 μm, baking was performed at 160 ° C. for 30 minutes. Thereafter, a gray intermediate coat (trade name: Hyepico No. 500) manufactured by Nippon Oil & Fats Co., Ltd. was applied at 30 μm and baked at 140 ° C. for 30 minutes.

次に、ベースコート(日本ペイント(株)製スーパーラックM180 BKH3)を塗装し、140℃で30分間焼き付けた後、プライマー対応部位を備えた情報化DNAが固定化された微粒子の分散液(識別層の原料)を10g塗布し、80℃で10分間焼き付けた。そして、クリヤー塗料(日本ペイント(株)製スーパーラック0−130 GN3)を塗装し、140℃で30分間焼き付けて、五層の積層塗膜構造を得た。   Next, a base coat (Superlac M180 BKH3 manufactured by Nippon Paint Co., Ltd.) is applied, baked at 140 ° C. for 30 minutes, and then a dispersion of fine particles on which information DNA having a primer corresponding site is immobilized (identification layer) 10 g) was baked at 80 ° C. for 10 minutes. Then, a clear paint (Superlac 0-130 GN3 manufactured by Nippon Paint Co., Ltd.) was applied and baked at 140 ° C. for 30 minutes to obtain a five-layer laminated coating structure.

得られた実施例1〜22の積層塗膜構造について、DNAの検出、耐湿性(付着性)、平滑性及び色一致性を以下のようにして評価した。   About the obtained laminated coating-film structure of Examples 1-22, the detection of DNA, moisture resistance (adhesiveness), smoothness, and color consistency were evaluated as follows.

<情報化DNAの検出>
(1)上記情報化核酸を含有する試験片をカッターを用いて、細かく裁断した。
(2)試験細片に滅菌蒸留水5mLを加え、マグネチックスターラーにより攪拌して、DNAを水層に抽出した。
(3)遠心機を用いて、試験細片と水層を分離し、水層を遠心エバポレータを用いて濃縮した。
(4)溶出回収したDNA溶液(5μL)、PCR buffer(5μL)、Taq polymerase(0.25μL)、滅菌蒸留水(24.75μL)、5μMのプライマー1(5μL)、5μMのプライマー2(5μL)、及び2mM dNTP(5μL)を混合した。
・プライマー1 …5´−TGCACGCACCGTGTACTC−3´
・プライマー2 …5´−CCGACCAACGTGTCCACT−3´
(5)94℃で5分間加熱後、[94℃で30秒→40℃で30秒→72℃で30秒]を30回繰り返した。
(6)72℃で7分処理後、4℃で保存した。
(7)1本鎖DNA開裂酵素(S1ヌクレアーゼ)を用いて、余分なプライマーを分解し、目的の2本鎖情報化DNAをゲル濾過で精製した。
(8)精製した情報化DNAに一種類のプライマー(プライマー1:5´−TGCACGCACCGTGTACTC−3´)及び蛍光標識した2,3−ジデオキシヌクレオシド三リン酸を混合した。
(9)上記工程(4)〜(6)と同様の操作を行った。
(10)ゲル濾過精製後、自動シーケンサーに供し、配列決定を行った。
表1及び表2に示すように、これらの工程を行い情報化DNAの検出を試みたところ、情報化DNAの識別が容易であったものを○、更にPCR処理が必要であったものを△とした。
<Detection of information DNA>
(1) The test piece containing the information nucleic acid was cut into pieces using a cutter.
(2) 5 mL of sterilized distilled water was added to the test strip and stirred with a magnetic stirrer to extract DNA into the aqueous layer.
(3) The test strip and the aqueous layer were separated using a centrifuge, and the aqueous layer was concentrated using a centrifugal evaporator.
(4) DNA solution (5 μL) eluted and collected, PCR buffer (5 μL), Taq polymerase (0.25 μL), sterile distilled water (24.75 μL), 5 μM primer 1 (5 μL), 5 μM primer 2 (5 μL) , And 2 mM dNTP (5 μL).
Primer 1 ... 5'-TGCACGCACCGTGTACTC-3 '
Primer 2 ... 5'-CCGACCAACGTGTCCACT-3 '
(5) After heating at 94 ° C. for 5 minutes, [94 ° C. for 30 seconds → 40 ° C. for 30 seconds → 72 ° C. for 30 seconds] was repeated 30 times.
(6) After being treated at 72 ° C for 7 minutes, it was stored at 4 ° C.
(7) Using a single-stranded DNA cleaving enzyme (S1 nuclease), the excess primer was decomposed, and the target double-stranded information DNA was purified by gel filtration.
(8) One kind of primer (primer 1: 5′-TGCACGCACCGTGTACTC-3 ′) and fluorescently labeled 2,3-dideoxynucleoside triphosphate were mixed with the purified information DNA.
(9) The same operations as in the above steps (4) to (6) were performed.
(10) After gel filtration purification, it was subjected to sequencing by using an automatic sequencer.
As shown in Tables 1 and 2, when these steps were performed and detection of informational DNA was attempted, it was found that identification of the informational DNA was easy, and that further PCR treatment was necessary. It was.

<耐湿性(付着性)の評価>
50℃、相対湿度95%の雰囲気中に500時間放置後に取り出し、密着力を確認した。密着力は、塗膜をカッターナイフ(JIS K 5400の7.2(2)(e)に規定)で塗膜素地に達する直交する縦横11本ずつの平行線を2mmの間隔で引き、正方形の碁盤目を形成した。碁盤目状の塗膜の上にセロハンテープ(JIS Z 1522に規定)を密着させ上方に一気に引き剥がし、100個の碁盤目中の塗膜の残った碁盤目の数を測定した。この結果を表1及び表2に示す。
<Evaluation of moisture resistance (adhesion)>
After leaving it in an atmosphere of 50 ° C. and relative humidity of 95% for 500 hours, it was taken out and checked for adhesion. The adhesion force is determined by drawing the parallel lines of 11 vertical and horizontal lines that reach the coating substrate with a cutter knife (specified in 7.2 (2) (e) of JIS K 5400) at intervals of 2 mm. A cross-cut was formed. A cellophane tape (specified in JIS Z 1522) was brought into close contact with the grid-like coating film and peeled upward at a stretch, and the number of grids remaining in the 100 grids was measured. The results are shown in Tables 1 and 2.

<平滑性(外観性)の評価>
表面の状態を目視にて判断し、表1及び表2に示すように、表面が良好であるものを○、表面があれているものを△、表面がかなりあれているものを×とした。
<Evaluation of smoothness (appearance)>
As shown in Tables 1 and 2, the state of the surface was visually judged, and as shown in Tables 1 and 2, the case where the surface was good was indicated by ◯, the case where the surface was rough, and the case where the surface was considerably bad as x.

<色一致性の評価>
識別層の無い以外は各実施例と同等の積層塗膜構造に比較して目視評価し、表1及び表2に示すように、同等であるものを○、若干白味があるものを△、白味があるものを×とした。
<Evaluation of color consistency>
Except for the absence of a discriminating layer, it was visually evaluated in comparison with the laminated coating film structure equivalent to each example. The thing with white taste was set as x.

Figure 2006168084
Figure 2006168084

Figure 2006168084
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表1及び表2から明らかなように、実施例1〜12の積層塗膜構造は、いずれも情報化DNAが良好に識別でき、また良好な外観及び良好な密着性を示している。言い換えれば、通常の塗装と同様の作業性で目的の外観が得られ、塗膜の識別が可能である。   As is clear from Tables 1 and 2, all of the laminated coating film structures of Examples 1 to 12 can be identified with good informational DNA, and have a good appearance and good adhesion. In other words, the desired appearance can be obtained with the same workability as normal coating, and the coating film can be identified.

これに対して、実施例13〜16の積層塗膜構造は、識別層における情報化DNAの含有量が本発明の好適範囲よりも少ないため、情報化DNAの識別性が低下する結果となり、実施例17〜22の積層塗膜構造は、情報化DNAの含有量、微粒子の粒径及び使用量のいずれかが本発明の好適範囲を逸脱しているため、情報化DNAの識別性、防湿性、平滑性及び色一致性のうちの少なくとも一つの低下が生じた。   On the other hand, the laminated coating film structures of Examples 13 to 16 resulted in a decrease in the discriminability of the information DNA because the content of the information DNA in the discrimination layer was less than the preferred range of the present invention. In the laminated coating film structures of Examples 17 to 22, any one of the content of information DNA, the particle size of fine particles, and the amount used deviates from the preferred range of the present invention. At least one of smoothness and color consistency occurred.

天然DNAとこの5´位を誘導化したDNAを示す構造式である。This is a structural formula showing natural DNA and DNA derived from this 5 'position. 認証情報部位に両端にプライマーを有する情報化核酸を示す概略図である。It is the schematic which shows the information nucleic acid which has a primer in both ends in an authentication information site | part. 識別層を含む積層塗膜構造の一例を示す断面概略図である。It is a cross-sectional schematic diagram which shows an example of the laminated coating film structure containing an identification layer. 個別認証方法の一例を示すフロー図である。It is a flowchart which shows an example of an individual authentication method.

符号の説明Explanation of symbols

1 下塗り塗膜層
2 中塗り塗膜層
3 ベースコート層
4 プライマーを備えた情報化DNA含有識別層
5 クリヤー塗膜層
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Undercoat coating film layer 2 Intermediate coating film layer 3 Basecoat layer 4 Information-ized DNA containing identification layer provided with primer 5 Clear coating film layer

Claims (6)

クリヤー塗膜層の下層に、任意且つ既知の塩基配列を有する部位を備える情報化核酸を含有する識別層を有することを特徴とする積層塗膜構造。   A laminated coating film structure comprising an identification layer containing an information nucleic acid provided with a site having an arbitrary and known base sequence, under the clear coating film layer. 上記識別層の情報化核酸の含有量が、0.5〜500μg/mであることを特徴とする請求項1に記載の積層塗膜構造。 2. The multilayer coating film structure according to claim 1, wherein the content of the information nucleic acid in the identification layer is 0.5 to 500 μg / m 2 . 上記情報化核酸が、微粒子に担持して成るものであることを特徴とする請求項1又は2に記載の積層塗膜構造。   The laminated coating film structure according to claim 1 or 2, wherein the information nucleic acid is carried on fine particles. 上記微粒子の平均粒径が、0.01〜2μmであることを特徴とする請求項3に記載の積層塗膜構造。   The multilayer coating film structure according to claim 3, wherein the average particle diameter of the fine particles is 0.01 to 2 μm. 上記微粒子の含有量が、被塗物の表面積に対して0.5〜50%の割合であることを特徴とする請求項3又は4に記載の積層塗膜構造。   The multilayer coating film structure according to claim 3 or 4, wherein the content of the fine particles is 0.5 to 50% of the surface area of the article to be coated. 上記識別層の原料が、水又は溶剤に情報化核酸を溶解又は分散させたものであることを特徴とする請求項1〜5のいずれか1つの項に記載の積層塗膜構造。   The laminated coating film structure according to any one of claims 1 to 5, wherein a material for the identification layer is obtained by dissolving or dispersing information nucleic acid in water or a solvent.
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