JP2006162489A - Manufacturing method of tissue microarray, and production kit thereof - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、医療における病理診断、研究などで使用されるティッシュマイクロアレイの作製方法及びその作製キットに関する。 The present invention relates to a method for producing a tissue microarray used for pathological diagnosis and research in medicine and a kit for producing the tissue microarray.
ティッシュマイクロアレイ(Tissue Microarray)は、多数の検体を一つのブロックに集約し、一度に多くの検体を検索できる非常に有用な技術である。例えば、0.6mm径の組織を1000検体、一つのブロックに集約可能である。 Tissue microarray is a very useful technology that aggregates many samples into one block and can search many samples at once. For example, a tissue having a diameter of 0.6 mm can be aggregated into 1000 samples and one block.
このティッシュマイクロアレイを作製するためには高度な技術を要するため、ティッシュマイクロアレイを容易に作製するための専用装置が開示されている(例えば、特許文献1)。この専用装置を用いたティッシュマイクロアレイの作製方法は、臓器のホルマリン固定パラフィンブロックをステージに固定し、臓器の目的とする部分に筒状刃の先端を移動して合わせ、その筒状刃で上記組織をくりぬき、続いて、組織抜き棒にて筒状刃から組織を抜き、予め上記筒状刃とほぼ同径の中空穴を複数形成した合成樹脂製のティッシュブロックを用意しておき、くりぬいた組織を包埋皿上に配置したティッシュブロックの中空穴に先端側が包埋皿上に突出するように埋め込み、包埋皿とティッシュブロックの間にパラフィン液を流し込んで充填・固化させる、というものである。
しかし、上記のような専用装置は高価であり、さらに合成樹脂製のティッシュブロックなどの高価な消耗品が必要であり、安価にティッシュマイクロアレイを作製することができないといった問題があった。 However, the dedicated apparatus as described above is expensive, and also requires expensive consumables such as a tissue block made of synthetic resin, and there is a problem that a tissue microarray cannot be manufactured at low cost.
そこで、本発明は上記問題点に鑑み、高価な専用装置や消耗品を用いることなく安価に、かつ高度な技術を必要とせずに誰でもティッシュマイクロアレイを作製することができる、ティッシュマイクロアレイの作製方法及びその作製キットを提供することを目的とする。 Therefore, in view of the above problems, the present invention provides a tissue microarray production method that allows anyone to produce a tissue microarray inexpensively without using expensive dedicated devices or consumables and without requiring advanced techniques. And it aims at providing the preparation kit.
本発明の請求項1記載のティッシュマイクロアレイの作製方法は、パラフィン包埋し複数の孔部を形成した支持ブロックを作製する支持ブロック作製工程と、パラフィン包埋した検体組織ブロックから前記孔部の形状に対応した形状の検体組織片を採取する検体組織片採取工程と、前記支持ブロックの孔部に前記検体組織片を挿入するとともに前記支持ブロックを加温してパラフィンを融解させ前記支持ブロックと前記検体組織片とを一体になじませたアレイブロックを作製するアレイブロック作製工程とを備えたことを特徴とする。 The method for producing a tissue microarray according to claim 1 of the present invention includes a support block production step of producing a support block embedded with paraffin and forming a plurality of holes, and a shape of the hole from the paraffin-embedded specimen tissue block. A sample tissue piece collecting step for collecting a sample tissue piece having a shape corresponding to the above, and inserting the sample tissue piece into the hole of the support block and heating the support block to melt paraffin, And an array block production process for producing an array block in which a specimen tissue piece is integrated.
本発明の請求項2記載のティッシュマイクロアレイの作製方法は、請求項1において、前記支持ブロックは、脂肪組織からなることを特徴とする。 The method for producing a tissue microarray according to claim 2 of the present invention is characterized in that, in claim 1, the support block is made of adipose tissue.
本発明の請求項3記載のティッシュマイクロアレイの作製方法は、請求項1において、前記支持ブロックは、ゲルからなることを特徴とする。 The method for producing a tissue microarray according to claim 3 of the present invention is characterized in that, in claim 1, the support block is made of a gel.
本発明の請求項4記載のティッシュマイクロアレイの作製方法は、請求項3において、前記ゲルはアガロースゲルであることを特徴とする。 The method for producing a tissue microarray according to claim 4 of the present invention is characterized in that, in claim 3, the gel is an agarose gel.
本発明の請求項5記載のティッシュマイクロアレイの作製キットは、支持ブロックに孔部を形成する孔部形成手段と、検体組織ブロックから前記孔部の形状に対応した形状の検体組織片を採取する採取手段と、前記支持ブロックを加温する加温手段とを備えたことを特徴とする。 The tissue microarray preparation kit according to claim 5 of the present invention includes a hole forming means for forming a hole in a support block, and a sample for collecting a sample tissue piece having a shape corresponding to the shape of the hole from the sample tissue block And heating means for heating the support block.
本発明の請求項6記載の支持ブロックは、ティッシュマイクロアレイを作製するための支持ブロックであって、パラフィン包埋され複数の孔部が形成されたゲルからなることを特徴とする。 The support block according to claim 6 of the present invention is a support block for producing a tissue microarray, and is characterized by being made of a gel embedded with paraffin and formed with a plurality of holes.
本発明の請求項7記載の支持ブロックは、請求項6において、前記ゲルはアガロースゲルであることを特徴とする。 The support block according to claim 7 of the present invention is characterized in that in claim 6, the gel is an agarose gel.
本発明の請求項1記載のティッシュマイクロアレイの作製方法によれば、高価な専用装置や消耗品を用いることなく安価に、かつ高度な技術を必要とせずに誰でもティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the method for producing a tissue microarray according to claim 1 of the present invention, anyone can produce a tissue microarray at a low cost without using an expensive dedicated device or consumables and without requiring an advanced technique. .
本発明の請求項2記載のティッシュマイクロアレイの作製方法によれば、支持ブロックは脂肪組織からなるので、例えば、不要になった廃棄物としての脂肪組織を使用して安価にティッシュマイクロアレイを作製することができる。また、脂肪組織は検体組織の染色時に染色されないので、検体組織のみ染色されたティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the method for producing a tissue microarray according to claim 2 of the present invention, since the support block is made of adipose tissue, for example, the tissue microarray is produced at low cost by using adipose tissue as waste that is no longer needed. Can do. In addition, since adipose tissue is not stained when the sample tissue is stained, a tissue microarray in which only the sample tissue is stained can be produced.
本発明の請求項3記載のティッシュマイクロアレイの作製方法によれば、支持ブロックはゲルからなるので、安価にティッシュマイクロアレイを作製することができる。また、ゲルは検体組織の染色時に染色されないので、検体組織のみ染色されたティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the method for producing a tissue microarray according to claim 3 of the present invention, since the support block is made of a gel, the tissue microarray can be produced at low cost. Further, since the gel is not stained when the specimen tissue is stained, a tissue microarray in which only the specimen tissue is stained can be produced.
本発明の請求項4記載のティッシュマイクロアレイの作製方法によれば、ゲルはアガロースゲルであるので、安価に確実にティッシュマイクロアレイを作製することができる。また、アガロースゲルは検体組織の染色時に染色されないので、検体組織のみ染色されたティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the method for producing a tissue microarray according to claim 4 of the present invention, since the gel is an agarose gel, the tissue microarray can be produced reliably at low cost. Further, since the agarose gel is not stained when the specimen tissue is stained, a tissue microarray in which only the specimen tissue is stained can be produced.
本発明の請求項5記載のティッシュマイクロアレイの作製キットによれば、高価な専用装置や消耗品を用いることなく安価に、かつ高度な技術を必要とせずに誰でもティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the tissue microarray production kit of claim 5 of the present invention, anyone can produce a tissue microarray at low cost without using an expensive dedicated device or consumables and without requiring advanced techniques. .
本発明の請求項6記載の支持ブロックによれば、パラフィン包埋され複数の孔部が形成されたゲルからなるので、高価な専用装置や消耗品を用いることなく安価に、かつ高度な技術を必要とせずに誰でもティッシュマイクロアレイを作製することができる。また、ゲルは検体組織の染色時に染色されないので、検体組織のみ染色されたティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the support block described in claim 6 of the present invention, since it is made of a gel embedded with paraffin and formed with a plurality of holes, it is possible to provide an inexpensive and advanced technique without using an expensive dedicated device or consumables. Anyone can make a tissue microarray without the need. Further, since the gel is not stained when the specimen tissue is stained, a tissue microarray in which only the specimen tissue is stained can be produced.
本発明の請求項7記載の支持ブロックによれば、ゲルはアガロースゲルであるので、安価に確実にティッシュマイクロアレイを作製することができる。また、アガロースゲルは検体組織の染色時に染色されないので、検体組織のみ染色されたティッシュマイクロアレイを作製することができる。 According to the support block of the seventh aspect of the present invention, since the gel is an agarose gel, a tissue microarray can be reliably produced at low cost. Further, since the agarose gel is not stained when the specimen tissue is stained, a tissue microarray in which only the specimen tissue is stained can be produced.
以下、本発明について詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
本発明のティッシュマイクロアレイの作製方法は、図1に示すように、パラフィン包埋し複数の孔部2を形成した支持ブロック1を作製する支持ブロック作製工程と、パラフィン包埋した検体組織ブロック3から孔部2の形状に対応した形状の検体組織片4を採取する検体組織片採取工程と、支持ブロック1の孔部2に検体組織片4を挿入するとともに支持ブロック1を加温してパラフィンを融解させ支持ブロック1と前記検体組織片4とを一体になじませたアレイブロック5を作製するアレイブロック作製工程とを備えたものである。 As shown in FIG. 1, the method for producing a tissue microarray of the present invention includes a support block production process for producing a support block 1 embedded in paraffin and forming a plurality of holes 2, and a specimen tissue block 3 embedded in paraffin. The specimen tissue piece collecting step for collecting the specimen tissue piece 4 having a shape corresponding to the shape of the hole 2, and the specimen tissue piece 4 is inserted into the hole 2 of the support block 1 and the support block 1 is heated to paraffin. And an array block manufacturing step for manufacturing an array block 5 in which the support block 1 and the specimen tissue piece 4 are integrated together.
また、本発明のティッシュマイクロアレイの作製キットは、支持ブロック1に孔部2を形成する孔部形成手段11と、検体組織ブロック3から孔部2の形状に対応した形状の検体組織片4を採取する採取手段21と、支持ブロック1を加温する加温手段31とを備えたものである。 Further, the tissue microarray preparation kit of the present invention collects the hole forming means 11 for forming the hole 2 in the support block 1 and the sample tissue piece 4 having a shape corresponding to the shape of the hole 2 from the sample tissue block 3. The collecting means 21 for heating and the heating means 31 for heating the support block 1 are provided.
支持ブロック作製工程において作製される支持ブロック1の材料としては、パラフィンの融解温度において固体であり、検体組織を染色する各種の染色法によって染色されないものが用いられる。また、容易に孔部2が形成でき、薄切片作製工程において容易に薄切して、薄切片としてのティッシュマイクロアレイ6が作製できるように、柔らかい材質であることが好ましい。 As the material of the support block 1 manufactured in the support block manufacturing process, a material that is solid at the melting temperature of paraffin and is not stained by various staining methods for staining the specimen tissue is used. Moreover, it is preferable that it is a soft material so that the hole part 2 can be formed easily and can be easily sliced in the thin-slice manufacturing process so that the tissue microarray 6 as a thin slice can be manufactured.
支持ブロック1の材料として、例えば、不要になった廃棄物としての脂肪組織を使用すれば、安価に、検体組織7のみ染色されたティッシュマイクロアレイ6を作製することができる。また、支持ブロックの材料としてゲルを使用した場合においても、安価に、背景が透明で検体組織のみ染色されたティッシュマイクロアレイ6を作製することができる。なお、支持ブロック1の材料として脂肪組織を用いた場合、背景が若干染色されたティッシュマイクロアレイ6が得られることがあるが、ゲルを用いれば背景が完全に透明で検体組織7のみ染色されたティッシュマイクロアレイ6を作製することができる。支持ブロック1の材料として用いられるゲルとしては、例えば、アガロースゲルが好適に用いられる。なお、支持ブロック1の材料はこれらに限定されず、寒天などの種々のゲルを用いてもよい。 If, for example, an adipose tissue as waste that is no longer necessary is used as the material of the support block 1, a tissue microarray 6 in which only the sample tissue 7 is stained can be produced at low cost. Further, even when gel is used as the material for the support block, the tissue microarray 6 in which the background is transparent and only the specimen tissue is stained can be produced at low cost. When adipose tissue is used as the material of the support block 1, a tissue microarray 6 with a slightly stained background may be obtained. However, when a gel is used, the background is completely transparent and only tissue 7 is stained. The microarray 6 can be produced. As a gel used as a material for the support block 1, for example, an agarose gel is preferably used. In addition, the material of the support block 1 is not limited to these, You may use various gels, such as agar.
支持ブロック作製工程においては、支持ブロック1の材料をパラフィン包埋し、孔部形成手段11を用いて、複数の孔部2を形成する。孔部形成手段11としては、例えば、先端を平らに加工した骨髄生検針などを用いることができる。孔部形成手段11として骨髄生検針を用いた場合、特別の器具を用意する必要がなく、パラフィン包埋した支持ブロック1の材料の複数箇所に骨髄生検針を挿すのみで略円柱形状の孔部2が形成でき、安価にかつ簡単に支持ブロック1を作製することができる。なお、骨髄生検針を用いたときの孔部2の径は1.5mm程度となるが、必要とされる孔部2の径に応じた専用の孔部形成手段11を用いてもよい。また、孔部2の径を小さくすることによって、一つの支持ブロック1に集約できる検体組織片4の数を多くすることが可能である。 In the support block manufacturing step, the material of the support block 1 is embedded in paraffin, and a plurality of holes 2 are formed using the hole forming means 11. As the hole forming means 11, for example, a bone marrow biopsy needle whose tip is processed flat can be used. When a bone marrow biopsy needle is used as the hole forming means 11, it is not necessary to prepare a special instrument, and a substantially cylindrical hole is simply inserted into a plurality of locations of the material of the support block 1 embedded in paraffin. 2 can be formed, and the support block 1 can be manufactured inexpensively and easily. The diameter of the hole 2 when using a bone marrow biopsy needle is about 1.5 mm, but a dedicated hole forming means 11 corresponding to the required diameter of the hole 2 may be used. In addition, by reducing the diameter of the hole 2, it is possible to increase the number of specimen tissue pieces 4 that can be collected in one support block 1.
検体組織片採取工程においては、採取手段21を用いて、パラフィン包埋した検体組織ブロック3から前記孔部2の形状に対応した形状の検体組織片4を採取する。採取手段21としては、例えば、先端を平らに加工した骨髄生検針などを用いることができる。採取手段21として骨髄生検針を用いた場合、特別の器具を用意する必要がなく、パラフィン包埋した検体組織ブロック3に骨髄生検針を挿すのみで検体組織片4が採取でき、また、孔部形成手段11と同じ骨髄生検針を用いれば確実に前記孔部2の形状に対応した略円柱形状の検体組織片4を採取することができるので、安価にかつ簡単に検体組織片4を採取することができる。なお、骨髄生検針を用いたときの検体組織片4の径は1.5mm程度となるが、必要とされる検体組織片4の径に応じた専用の採取手段21を用いてもよい。 In the sample tissue piece collecting step, the sample tissue piece 4 having a shape corresponding to the shape of the hole 2 is collected from the paraffin-embedded sample tissue block 3 by using the collecting means 21. As the collection means 21, for example, a bone marrow biopsy needle whose tip is processed flat can be used. When a bone marrow biopsy needle is used as the collecting means 21, it is not necessary to prepare a special instrument, and the specimen tissue piece 4 can be collected by simply inserting the bone marrow biopsy needle into the paraffin-embedded specimen tissue block 3, and the hole portion If the same bone marrow biopsy needle as that of the forming means 11 is used, the specimen tissue piece 4 having a substantially cylindrical shape corresponding to the shape of the hole 2 can be reliably obtained. Therefore, the specimen tissue piece 4 can be obtained easily and inexpensively. be able to. The diameter of the specimen tissue piece 4 when the bone marrow biopsy needle is used is about 1.5 mm, but a dedicated collecting means 21 corresponding to the required diameter of the specimen tissue piece 4 may be used.
アレイブロック作製工程においては、前記支持ブロック1の孔部2に前記検体組織片4を挿入するとともに、加温手段31を用いて、前記支持ブロック1を加温してパラフィンを融解させ、前記支持ブロック1と前記検体組織片4とを一体になじませる。加温手段31としては、パラフィンが融解する程度に加温できるものであればよく、例えば、ヒートプレートなどをもちいることができる。このアレイブロック作製工程において、検体組織片4は支持ブロック1の孔部2に支持されるため、パラフィンが融解しても検体組織片4が動くことがない。また、パラフィンを融解させて支持ブロック1と検体組織片4とを一体になじませることにより、薄切片作製工程における薄切時に支持ブロック1と検体組織片4が分離することなく、通常の検体組織ブロックと同様に取り扱うことができる。 In the array block manufacturing step, the specimen tissue piece 4 is inserted into the hole 2 of the support block 1 and the support block 1 is heated using the heating means 31 to melt the paraffin. The block 1 and the specimen tissue piece 4 are blended together. Any heating means 31 may be used as long as it can be heated to such an extent that paraffin is melted. For example, a heat plate or the like can be used. In this array block manufacturing process, the specimen tissue piece 4 is supported by the hole 2 of the support block 1, so that the specimen tissue piece 4 does not move even if the paraffin is melted. In addition, by melting the paraffin so that the support block 1 and the specimen tissue piece 4 are integrated with each other, the support block 1 and the specimen tissue piece 4 are not separated at the time of slicing in the thin slice preparation process, and the normal specimen tissue is separated. It can be handled in the same way as a block.
薄切片作製工程において、このように作製されたアレイブロック5を常法により薄切、染色することによって、染色された検体組織7が支持ブロック1の材料で支持された薄切片としてのティッシュマイクロアレイ6が得られる。 In the thin slice preparation step, the array block 5 thus prepared is sliced and stained by a conventional method, whereby the tissue microarray 6 as a thin slice in which the stained specimen tissue 7 is supported by the material of the support block 1. Is obtained.
以上のように、本発明のティッシュマイクロアレイの作製方法及びその作製キットによれば、高価な専用装置や消耗品を用いることなく安価に、かつ高度な技術を必要とせずに誰でもティッシュマイクロアレイを作製することができる。 As described above, according to the tissue microarray production method and production kit of the present invention, anyone can produce a tissue microarray at low cost without using an expensive dedicated device or consumables and without requiring advanced technology. can do.
以下、具体的な実施例を例にとって説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではなく、種々の変形実施が可能である。 Hereinafter, although a specific example is described as an example, the present invention is not limited to the following example, and various modifications can be made.
支持ブロックの材料として、脂肪組織を用いた。まず、脂肪組織をパラフィン包埋し、包埋皿に合う大きさに成形した。そして、この脂肪組織に必要な数の孔部を、孔部形成手段として骨髄生検針を用いて形成し、支持ブロックを作製した。 Adipose tissue was used as a material for the support block. First, the adipose tissue was embedded in paraffin and formed into a size suitable for the embedding dish. Then, the necessary number of holes in the adipose tissue were formed using a bone marrow biopsy needle as a hole forming means, and a support block was prepared.
つぎに、採取手段として上記孔部形成手段と同じ骨髄生検針を用いて、パラフィン包埋した複数の検体組織ブロックから、それぞれ検体組織片を採取した。 Next, using the same bone marrow biopsy needle as the hole forming means as the collecting means, specimen tissue pieces were respectively collected from a plurality of specimen tissue blocks embedded in paraffin.
そして、支持ブロックを包埋皿に載せ、さらに包埋皿を加熱手段としてのヒートプレートに載せ、支持ブロックを加温しながら孔部にそれぞれの検体組織片を挿入した。このとき、検体組織片が孔部の上端から下端まで位置するように、やや検体組織片を押し込むようにして挿入した。次第にパラフィンが融解して、支持ブロックと検体組織片が一体になじんだ。その後、通常の検体組織ブロックを作製するときと同様に、静かにパラフィンを追加することでアレイブロックが得られた。このアレイブロックを薄切してティッシュマイクロアレイを得た。なお、支持ブロックと検体組織片は完全に一体になっており、薄切時に支持ブロックと検体組織片が分離することはなかった。 Then, the support block was placed on an embedding dish, and the embedding dish was further placed on a heat plate as a heating means, and each specimen tissue piece was inserted into the hole while heating the support block. At this time, the specimen tissue piece was inserted so that the specimen tissue piece was positioned from the upper end to the lower end of the hole. Gradually, the paraffin melted and the support block and the specimen tissue piece became integrated. Thereafter, as in the case of preparing a normal specimen tissue block, an array block was obtained by gently adding paraffin. The array block was sliced to obtain a tissue microarray. Note that the support block and the specimen tissue piece were completely integrated, and the support block and the specimen tissue piece were not separated when sliced.
本実施例で得られたティッシュマイクロアレイの拡大画像を図2に示す。このように、本発明の方法によれば、特別な装置を用いることなく、簡単にティッシュマイクロアレイを作製することができた。 An enlarged image of the tissue microarray obtained in this example is shown in FIG. Thus, according to the method of the present invention, a tissue microarray could be easily produced without using a special apparatus.
支持ブロックの材料として、アガロースゲルを用いたほかは、上記実施例1と同様にティッシュマイクロアレイを作製した。アガロースゲルは柔らかいため、実施例1と比較して孔部の形成が容易であった。また、本実施例においては、図3に示すように、完全に背景が透明なティッシュマイクロアレイが得られた。 A tissue microarray was prepared in the same manner as in Example 1 except that agarose gel was used as the support block material. Since the agarose gel was soft, it was easier to form pores than in Example 1. In this example, as shown in FIG. 3, a tissue microarray with a completely transparent background was obtained.
1 支持ブロック
2 孔部
3 検体組織ブロック
4 検体組織片
5 アレイブロック
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Support block 2 Hole 3 Sample tissue block 4 Sample tissue piece 5 Array block
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