JP2006141229A - Method for producing functional food material utilizing scallop - Google Patents

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大介 葛西
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for producing a functional food material utilizing scallop, which comprises producing a high value-added processed product from scallop internal organ to make efficient use of the scallop internal organ. <P>SOLUTION: The method for producing the functional food material utilizing scallop comprises adding serine proteinase to the scallop internal organ to obtain soluble hydrolyzate, again adding serine proteinase to the soluble hydrolyzate to obtain resynthesis peptide. <P>COPYRIGHT: (C)2006,JPO&NCIPI

Description

本発明はホタテガイを利用した機能性食材の製造方法に関し、詳しくはホタテガイの内臓から抽出したタンパク質からプラステイン(酵素的再合成ペプチド)を製造して機能性食材とする製造方法に関するものである。   The present invention relates to a method for producing a functional food material using scallops, and more particularly to a method for producing a functional food material by producing plastein (enzymatic re-synthetic peptide) from a protein extracted from the scallop viscera.

従来、ホタテガイの内臓、特に俗称であるホタテウロには栄養成分が含まれているので、これを食品、飼料などの原料として利用する方法が開発されている。   Conventionally, since the scallop viscera, particularly the popular name scallop uro, contains a nutrient component, a method of using this as a raw material for food, feed and the like has been developed.

ところが、ホタテガイの内臓を食品、飼料などに利用するにしても、その価格が安価で、しかも、製造コストがかかっていた。
かかる、ホタテガイの内臓を高付加価値の機能性食材として製造できれば、水産廃棄物であるホタテガイの内臓の有効利用ができると共に、付加価値の高い加工品が提供できる。
特開2004−97939号公報 特開平9−271327号公報
However, even if the scallop viscera is used for food, feed, etc., the price is low and the manufacturing cost is high.
If such scallop viscera can be produced as a high-value-added functional food, scallop viscera, which is a marine waste product, can be used effectively and processed products with high added value can be provided.
JP 2004-97939 A JP-A-9-271327

そこで、本発明は、ホタテガイの内臓から、高付加価値の加工品を製造し、ホタテガイの内臓の有効利用が図られるホタテガイを利用した機能性食材の製造方法を提供する事を目的とする。   Then, an object of this invention is to provide the manufacturing method of a functional foodstuff using the scallop which manufactures a high value-added processed product from the scallop's internal organs, and the scallop internal organs are used effectively.

本発明に係るホタテガイを利用した機能性食材の製造方法は、ホタテガイの内臓に、セリンプロテイナーゼを添加して可溶性加水分解物とし、この可溶性加水分解物に再度、セリンプロテイナーゼを添加して再合成ペプチドを得ることを特徴とする。
可溶性加水分解物に再度、セリンプロテイナーゼを添加する際には、基質濃度を25乃至35%、pH6.0乃至8.0、酵素添加量を基質溶液に対して0.1乃至1.0%とすることが好ましい。
セリンプロテイナーゼは、サブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼとすることが好ましい。
The method for producing a functional food material using scallops according to the present invention comprises adding a serine proteinase to a scallop viscera to obtain a soluble hydrolyzate, and adding a serine proteinase to the soluble hydrolyzate again to re-synthesize the peptide. It is characterized by obtaining.
When serine proteinase is added again to the soluble hydrolyzate, it is preferable that the substrate concentration is 25 to 35%, the pH is 6.0 to 8.0, and the enzyme addition amount is 0.1 to 1.0% with respect to the substrate solution.
The serine proteinase is preferably an alkaline protease having subtilisin as a main enzyme component.

ホタテガイの内臓に、セリンプロテイナーゼを添加して可溶性加水分解物とし、この可溶性加水分解物に再度、セリンプロテイナーゼを添加すると再合成ペプチドが得られる。   When a serine proteinase is added to the scallop viscera to form a soluble hydrolysate, and the serine proteinase is added to the soluble hydrolyzate again, a re-synthetic peptide is obtained.

このホタテガイの内臓から製造できた酵素的再合成ペプチドであるプラステインは、加水分解物とは違う構成アミノ酸組成と分子量分布を有し、ほとんどがペプチド態アミノ酸であり、抗酸化効果がある。   Plastain, an enzymatically re-synthesized peptide produced from the scallop viscera, has a constituent amino acid composition and molecular weight distribution different from the hydrolyzate, and most are peptide amino acids and have an antioxidant effect.

また、このプラステインは無味無臭で、食品の加工、貯蔵及び加熱調理等に安定であることが確認されており、このことは熱に弱いトコフェロールや化学合成された酸化防止剤との代替使用が可能で、天然系食材であることから、安全・安心という現在の消費者ニーズにも合致し幅広い用途への利用ができる。   This plastain is tasteless and odorless and has been confirmed to be stable in food processing, storage and cooking, etc. This means that it can be used as an alternative to heat-sensitive tocopherols or chemically synthesized antioxidants. It is possible and can be used in a wide range of applications that meet the current consumer needs for safety and security.

未利用資源である水産廃棄物のホタテガイの内臓を単なる飼料、肥料や調味料などの安価な製品とするのではなく、プラステイン作成技術を用いて付加価値の高い機能性食材として活用でき、コスト面で難航する資源リサイクルにとって、廃棄物処理されているホタテウロから付加価値の高い製品が生み出せれば、これまで廃棄処理に費用をかけていたものが逆に利益を生むものに変えることができるため、多大な経済効果を図ることができる。   The scallop viscera, which is an unused resource, is not just a cheap product such as feed, fertilizer, seasoning, etc. For resource recycling that is difficult in terms of surface, if high value-added products can be produced from scallops that are being treated as waste, what was previously spent on disposal can be turned into profitable A great economic effect can be achieved.

本発明に係る一実施例を図面1乃至6に基づき説明する。
最初に、原料となるホタテガイの内臓につき説明する。ホタテガイの内臓としては、俗称ホタテウロを原料として使用する。
An embodiment according to the present invention will be described with reference to FIGS.
First, the internal organs of scallops that are raw materials will be explained. As the internal organs of scallop, scallopuro is used as a raw material.

この原料をチョッパー(大道産業製OMC‐22B)にて粗砕し、さらにマスコロイダー(増幸産業製セレンディピターMCKA6‐3)にてペースト状に微粒摩砕して、試験に供した。   This raw material was coarsely crushed with a chopper (OMC-22B, manufactured by Daido Sangyo), and then finely ground into a paste with a mascolloider (Serendipiter MCKA6-3, manufactured by Masuko Sangyo), and used for the test.

そして、セリンプロテイナーゼを添加するが、本実施例では、セリンプロテイナーゼであるサブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼを添加して可溶性加水分解物とする。
この酵素としてはalcalase2.4L(ノボザイムズ)を用い、ホタテウロに等量の加水を行ない、未加熱のまま原料タンパク質あたり2.0%添加して55℃、24時間反応させ、反応終了後90℃、30min.の加熱を行なって酵素を失活させた。この反応条件は酵素メーカーのテクニカルデータ−に従った。
なお、上記実施例では、セリンプロテイナーゼとして、サブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼを添加しているが、これに限られず、例えば、トリプシン、キモトリプシンを添加しても良い。
Then, serine proteinase is added. In this example, alkaline protease containing subtilisin, which is a serine proteinase, as a main enzyme component is added to obtain a soluble hydrolyzate.
As this enzyme, alcalase 2.4L (Novozymes) is used, and an equal amount of water is added to scallops, and 2.0% per raw protein is added unheated and reacted at 55 ° C. for 24 hours. After completion of the reaction, 90 ° C. 30 min. The enzyme was inactivated by heating. The reaction conditions followed the technical data of the enzyme manufacturer.
In the above embodiment, alkaline protease containing subtilisin as a main enzyme component is added as a serine proteinase. However, the present invention is not limited thereto, and for example, trypsin or chymotrypsin may be added.

失活した反応液を遠心分離(5℃、10000rpm、10min.)に供し、上清を採取し、ろ過助剤(セライトNo.545)を用いて吸引ろ過後、ろ液を得た。   The deactivated reaction solution was subjected to centrifugation (5 ° C., 10000 rpm, 10 min.), And the supernatant was collected and subjected to suction filtration using a filter aid (Celite No. 545) to obtain a filtrate.

このろ液である可溶性加水分解物に再度、セリンプロテイナーゼを添加する。
このセリンプロテイナーゼとしては、サブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼを添加するが、ろ液はフリーズドライ(FD)にて乾燥粉末化した。
このフリーズドライ(FD)にて乾燥粉末化したホタテウロの加水分解物を30%となるように加水を行ない基質溶液を調整した。
なお、基質溶液を30%となる様に加水して調整しているが、25%から35%であれば良い。また、この基質溶液の濃度はpH6.0から8.0が好ましい。
Serine proteinase is added again to the soluble hydrolyzate which is the filtrate.
As this serine proteinase, alkaline protease containing subtilisin as a main enzyme component was added, and the filtrate was dried and powdered by freeze drying (FD).
The hydrolyzate of scallop urine dried and powdered by freeze drying (FD) was watered to 30% to prepare a substrate solution.
The substrate solution is adjusted by adding water to 30%, but it may be 25% to 35%. The concentration of the substrate solution is preferably pH 6.0 to 8.0.

これにalcalase2.4L(ノボザイムズ)を基質溶液あたり1.0%添加し55℃、24時間反応させ、反応終了後90℃、30min.の加熱を行なって酵素を失活させた。
なお、前記では、サブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼであるalcalase2.4L(ノボザイムズ)を基質溶液あたり1.0%添加しているが、0.1乃至1.0%であれば良い。
また、セリンプロテイナーゼとしては、サブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼを添加しているが、これに限られず、例えば、トリプシン、キモトリプシンを添加しても良い。
そして、反応液を透析チューブ(MWCO1000)に投入し、適時外薬を交換して3日間透析を行ない、得られた内液をプラステイン溶液とした。
To this, alcalase 2.4L (Novozymes) was added at 1.0% per substrate solution and reacted at 55 ° C. for 24 hours. After completion of the reaction, 90 ° C., 30 min. The enzyme was inactivated by heating.
In the above, alcalase 2.4L (Novozymes), which is an alkaline protease containing subtilisin as a main enzyme component, is added at 1.0% per substrate solution, but it may be 0.1 to 1.0%.
In addition, as the serine proteinase, alkaline protease containing subtilisin as a main enzyme component is added, but is not limited thereto, and for example, trypsin or chymotrypsin may be added.
Then, the reaction solution was poured into a dialysis tube (MWCO1000), dialyzed for 3 days while exchanging the external medicine in a timely manner, and the obtained internal solution was used as a plastein solution.

次に、プラステインの性状につき説明する。
得られたプラステイン溶液を粉末化し、10%TCA溶液で遊離アミノ酸を抽出するとともに、別途6N塩酸で150℃、1時間の酸加水分解を行って構成アミノ酸とし、各々のろ液をフェニルイソチオシアネート(PITC)と反応させてフェニルチオカルモバイル(PTC)誘導体を作成し、逆相系カラム(TOSOTsk−gelODS−80Ts25cm+15cm)を用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分析を行ない、遊離アミノ酸量と構成アミノ酸量を測定した。
Next, the properties of plastein will be described.
The obtained plastein solution is pulverized and free amino acids are extracted with a 10% TCA solution, and separately hydrolyzed with 6N hydrochloric acid at 150 ° C. for 1 hour to obtain constituent amino acids, and each filtrate is phenylisothiocyanate. (PITC) is reacted to prepare a phenylthiocarmobile (PTC) derivative, which is analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) using a reverse phase column (TOSOTsk-gelODS-80Ts25cm + 15cm). The amount of amino acid was measured.

この結果からプラステイン中の遊離アミノ酸とペプチド態アミノ酸(=構成アミノ酸−遊離アミノ酸)の存在比を計算した。
遊離アミノ酸およびペプチド態アミノ酸の存在比は、ホタテ加水分解物では、遊離アミノ酸は43.69%、ペプチド態アミノ酸は56.31%で、ホタテプラステインでは、遊離アミノ酸は2.65%、ペプチド態アミノ酸は97.35%となった。
From this result, the abundance ratio of free amino acids and peptide amino acids (= constituent amino acids-free amino acids) in plastein was calculated.
The abundance ratio of free amino acids and peptide amino acids is 43.69% for free amino acids and 56.31% for peptide amino acids in scallop hydrolyzate, 2.65% for free amino acids in scallop plastein, The amino acid was 97.35%.

この結果、プラステイン作成前の加水分解物は遊離アミノ酸とペプチド態アミノ酸が約50%ずつ存在していたのに対し、作成されたプラステインは遊離アミノ酸がほとんど存在せず、ペプチド態アミノ酸のみが存在していることが明らかになった。このことは、プラステイン合成と精製が高効率で行なわれたことを示している。   As a result, the hydrolyzate before the preparation of plastein had about 50% free amino acids and peptide amino acids, whereas the prepared plastein had almost no free amino acids and only peptide amino acids. It became clear that it existed. This indicates that the plasticine synthesis and purification were performed with high efficiency.

次に、構成アミノ酸組成につき調べる。
構成アミノ酸組成は前項の方法で測定した結果を用いて組成比を算出した。
原料となる加水分解物とプラステインの構成アミノ酸組成を比較してみると、その組成比に明確な違いが見られ、プラステインでは、Asp、Glu、Ser、His、Thr、Pro、Lysが増加しており、逆にGly、Ala、Tyr、Val、Met、Ile、Leu、Pheが減少していた(図1参照)。
Next, the constituent amino acid composition is examined.
The compositional amino acid composition was calculated by using the result measured by the method described in the previous section.
Comparing the constituent amino acid composition of the hydrolyzate as a raw material and Plastain, there is a clear difference in the composition ratio. In Plastain, Asp, Glu, Ser, His, Thr, Pro, and Lys increase. Conversely, Gly, Ala, Tyr, Val, Met, Ile, Leu, and Phe decreased (see FIG. 1).

このことは、プラステイン作成において特定アミノ酸濃縮、もしくは除去が可能である事を示しており、ホタテをベースとしていくつかのタンパク質原料を複合して基質を調整する事によりアミノ酸組成を意図的に改質できる可能性を示している。   This indicates that specific amino acids can be concentrated or removed in the preparation of plastein, and the amino acid composition is modified intentionally by adjusting the substrate by combining several protein raw materials based on scallops. It shows the possibility of quality.

次に、分子量分布につき調べる。得られたプラステイン溶液をゲルろ過カラム(TOSOTsk−gelG−3000PW 25cm)を用いた高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で分子量分布を調べる。   Next, the molecular weight distribution is examined. The molecular weight distribution of the obtained plastein solution is examined by high performance liquid chromatography (HPLC) using a gel filtration column (TOSOTsk-gelG-3000PW 25 cm).

原料となる加水分解物では分子量約1800以下に多種のピークが認められたが、プラステインでは約2500付近の極大ピークに収束していた(図2,3参照)。
このことは、プラステインの精製により低分子のアミノ酸が除去された事に加え、分子量1000以下の低分子のペプチド態アミノ酸がほぼ1つの分子量の高分子ペプチドに再合成されたことを示しており、加水分解物とプラステインがそれぞれ違った機能性を有する可能性が示された。
In the hydrolyzate used as a raw material, various peaks were observed at a molecular weight of about 1800 or less, but in Plastain, it converged to a maximum peak around 2500 (see Figs. 2 and 3).
This indicates that in addition to the removal of low molecular weight amino acids by purification of plastein, low molecular weight peptide amino acids with a molecular weight of 1000 or less were re-synthesized into high molecular weight peptides of approximately one molecular weight. It was shown that hydrolyzate and plastein may have different functions.

次に、ホタテガイプラステインの機能性につき説明する。
最初に、油脂に対する抗酸化性につき説明する。
得られたプラステイン溶液の機能性を評価するため、食品中の油脂に対する酸化防止剤としての効果を検討した。
Next, the functionality of scallop plastein will be described.
First, the antioxidant property against fats and oils will be described.
In order to evaluate the functionality of the obtained plastein solution, the effect as an antioxidant for fats and oils in food was examined.

すなわち、図4に示した反応液を調整し、プラステイン溶液の乾燥粉末のほか、対照としてアルブミン、トコフェロールを各々添加し、40℃で暗所保存し、この反応液中のリノール酸の自動酸化の経日変化を過酸化物価(POV)、チオバルビツール酸(TBA)値を測定して比較した。
POVはロダン鉄(チオシアナ−ト)法を用いて500nmのときの吸光度を、TBA値は2‐チオバルビツール酸法を用いて532nmのときの吸光度を分光光度計で測定した。
That is, the reaction solution shown in FIG. 4 was prepared, albumin and tocopherol were added as controls in addition to the dry powder of plastein solution, respectively, and stored in the dark at 40 ° C. The auto-oxidation of linoleic acid in this reaction solution The changes over time were measured by comparing the peroxide value (POV) and thiobarbituric acid (TBA) values.
The absorbance at 500 nm was measured with a rhodan iron (thiocyanate) method for POV, and the absorbance at 532 nm was measured with a 2-thiobarbituric acid method for a TBA value with a spectrophotometer.

この結果、指標として検討した抗酸化剤としてのトコフェロールはPOV,TBAともに著しい抗酸化能を示し、市販されている抗酸化剤として優れた効果を有していた。
逆に、標準タンパク質としてのアルブミンはPOV、TBAともにコントロールと同様の挙動を示し、通常のタンパク質には抗酸化効果がないことを示した。
As a result, tocopherol as an antioxidant studied as an indicator showed remarkable antioxidant ability for both POV and TBA, and had an excellent effect as a commercially available antioxidant.
On the contrary, albumin as a standard protein showed the same behavior as the control for both POV and TBA, indicating that the normal protein has no antioxidant effect.

これに対し、原料である加水分解物はPOV、TBAともコントロールと同等かやや劣っている事が示され、加水分解物のままでは抗酸化効果がないことが示されたが、プラステインにおいてはTBAではコントロールと差がなかったが、POVではコントロールよりも明らかに強い抗酸化効果を示した(図5,6参照)。   On the other hand, it was shown that the hydrolyzate as a raw material is equivalent to or slightly inferior to POV and TBA, and it was shown that the hydrolyzate has no antioxidant effect. TBA did not differ from the control, but POV showed a significantly stronger antioxidant effect than the control (see FIGS. 5 and 6).

このことは、ホタテウロを原料にプラステインを作成することで抗酸化能を有する合成ペプチドが生成したことを示しており、機能性食材としての可能性
が有ることを示した。
This indicates that a synthetic peptide having antioxidative ability was produced by preparing plastein from scallopuro as a raw material, indicating that it has potential as a functional food.

このホタテガイの内臓であるホタテウロから製造できた酵素的再合成ペプチドであるプラステインは、加水分解物とは違う構成アミノ酸組成と分子量分布を有し、ほとんどがペプチド態アミノ酸であり、抗酸化効果がある。   Plastain, an enzymatically re-synthesized peptide produced from scallop scallop visceral scallop, has a different composition amino acid composition and molecular weight distribution from the hydrolyzate, and is mostly a peptide amino acid with an antioxidant effect. is there.

また、このプラステインは無味無臭で、食品の加工、貯蔵及び加熱調理等に安定であることが確認されており、このことは熱に弱いトコフェロールや化学合成された酸化防止剤との代替使用が可能で、天然系食材であることから、安全・安心という現在の消費者ニーズにも合致し幅広い用途への利用ができる。   This plastain is tasteless and odorless and has been confirmed to be stable in food processing, storage and cooking, etc. This means that it can be used as an alternative to heat-sensitive tocopherols or chemically synthesized antioxidants. It is possible and can be used in a wide range of applications that meet the current consumer needs for safety and security.

未利用資源である水産廃棄物のホタテガイの内臓であるホタテウロを単なる飼料、肥料や調味料などの安価な製品とするのではなく、プラステイン作成技術を用いて付加価値の高い機能性食材として活用でき、コスト面で難航する資源リサイクルにとって、廃棄物処理されているホタテウロから付加価値の高い製品が生み出せれば、これまで廃棄処理に費用をかけていたものが逆に利益を生むものに変えることができるため、多大な経済効果を図ることができる。   Utilize scallops, which are the internal organs of scallops, an unused resource, as simple foods, fertilizers, seasonings, and other high-value-added functional foods using plastein creation technology For resource recycling that is difficult and difficult in terms of cost, if high value-added products can be produced from scallops that have been treated as waste, what was previously spent on disposal can be turned into a profitable one Therefore, a great economic effect can be achieved.

加水分解物およびプラステインの構成アミノ酸組成を示す説明図。Explanatory drawing which shows the constituent amino acid composition of a hydrolyzate and a plastein. 加水分解物の分子量分布を示す説明図。Explanatory drawing which shows the molecular weight distribution of a hydrolyzate. プラステインの分子量分布を示す説明図。Explanatory drawing which shows the molecular weight distribution of plastein. 抗酸化性試験用反応液の組成を示す説明図。Explanatory drawing which shows the composition of the reaction liquid for antioxidant test. プラステインの抗酸化能(POV)を示す説明図Explanatory diagram showing the antioxidant capacity (POV) of plastein プラステインの抗酸化能(TBA)を示す説明図。Explanatory drawing which shows the antioxidant ability (TBA) of plastein.

Claims (3)

ホタテガイの内臓に、セリンプロテイナーゼを添加して可溶性加水分解物とし、この可溶性加水分解物に再度、セリンプロテイナーゼを添加して再合成ペプチドを得ることを特徴とするホタテガイを利用した機能性食材の製造方法。 Production of functional foods using scallops, characterized in that serine proteinase is added to the scallop viscera to form a soluble hydrolyzate, and serine proteinase is added again to the soluble hydrolyzate to obtain a re-synthetic peptide. Method. 可溶性加水分解物に再度、セリンプロテイナーゼを添加する際には、基質濃度を25乃至35%、pH6.0乃至8.0、酵素添加量を基質溶液に対して0.1乃至1.0%とすることを特徴とする請求項1記載のホタテガイを利用した機能性食材の製造方法。 When the serine proteinase is added again to the soluble hydrolyzate, the substrate concentration is 25 to 35%, the pH is 6.0 to 8.0, and the enzyme addition amount is 0.1 to 1.0% with respect to the substrate solution. The manufacturing method of the functional foodstuff using the scallop of Claim 1. セリンプロテイナーゼは、サブティリシン(subtilisin)を主要な酵素成分とするアルカリプロテアーゼであることを特徴とする請求項1、2記載のホタテガイを利用した機能性食材の製造方法。 The method for producing a functional food material using scallops according to claim 1 or 2, wherein the serine proteinase is an alkaline protease containing subtilisin as a main enzyme component.
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