JP2005531308A

JP2005531308A - 顆粒の安定化

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Publication number: JP2005531308A
Application number: JP2004516525A
Authority: JP
Inventors: シモンセン，オーレ; クエールマルクッセン，エリク; レイェル，ハンネ; カースガールド，スウェン; ヘンゲルカリセン，トマス; イサークイェルゲンセン，クリスチャン
Original assignee: ノボザイムスアクティーゼルスカブ
Priority date: 2002-07-01
Filing date: 2003-07-01
Publication date: 2005-10-20
Also published as: EP1517981A2; CN1656205A; WO2004003188A2; AU2003243926A8; WO2004003188A3; AU2003243926A1

Abstract

本発明は、核マトリックスおよび1層以上のコーティングを含む顆粒に関する。その時核マトリックスは下記を含む：活性化合物、合成高分子、ここに添加高分子の量は核マトリックスの0.1〜10重量%、ならびに1種以上の抗酸化剤および/または還元剤、ここに抗酸化剤および還元剤の量はマトリックスの0.2〜5重量%。該活性化合物は、酵素、たとえばサビナーゼである。該合成高分子は、PVP、PVAおよびそれらの共重合体からなる群から選ばれるポリビニルポリマーである。好ましい抗酸化剤は、チオ硫酸ナトリウムである。

Description

本発明は、活性化合物たとえば酵素を含む顆粒の、合成高分子および抗酸化剤または還元剤の添加による安定化に関する。本発明は、さらに前記顆粒の製造法およびその使用法に関する。

活性化合物を乾燥固体粒子または顆粒に取り込み、そしてそれにより活性化合物を不活性化から保護しおよび/または活性化合物から環境を保護することは、当業界で知られている。環境中の攻撃的な物質により引き起こされる不活性化に対して活性化合物を保護するために、活性含有粒子中に安定化剤を組み込むこともさらに当業界で知られている。
乾燥顆粒中の活性化合物の安定化に関する既知の先行技術には、酵素ならびに還元剤および抗酸化剤からなる群から選ばれる1種以上の安定化剤を含む酵素含有粒状化製品を開示している米国特許5,858,952が含まれる。

米国特許5,972,669は、乾燥酵素調製品の加工および貯蔵安定性を改良するための方法を開示している。このために無機塩たとえばMgSO₄を酵素含有溶液に溶解し、次いでたとえば噴霧乾燥を用いて乾燥する。
WO 91/17235は、酵素および酵素保護剤を含む顆粒を開示している。

酵素顆粒を調製するように活性化合物を粒子に処方する理由には、活性化合物をある用途に使用する瞬間まで、周囲の潜在的に不都合な環境から活性化合物を隔離して保護することが含まれる。
特に酵素を含む顆粒に対して、洗剤中の不都合な漂白成分は、安定性の問題を生じ得る。周囲環境の高い湿度は、酵素含有顆粒に対する安定性の問題を生じるもう一つのパラメーターである。

不都合な成分の存在下および非存在下との組合せで、高湿度および低湿度の両方で安定な、酵素のような活性化合物を含む顆粒を得るのは、容易では無い。
我々は改良酵素顆粒に対する研究で、合成高分子たとえばPVPおよび抗酸化剤または還元剤たとえばチオ硫酸ソーダの組合せが、特定の量でマトリックス中に混合した時に、上述の不都合な環境中で活性成分を安定化し、および顆粒中の活性化合物の安定性を著しく改善することを、驚いたことに見出した。
本発明の一つの目的は、活性化合物の安定性に関して、活性化合物の固体処方を改善することである。我々はそのような改良処方の研究で、多糖類たとえば澱粉を、上述の安定化活性化合物を含むマトリックスに添加することにより、顆粒の安定性をさらに改善することも見出した。

それ故本発明は、最初の展望で核マトリックスおよび1層以上のコーティングを含む顆粒を提供する。ここに核マトリックスは下記を含む：
1. 活性化合物、
2. 合成高分子、ここに添加される高分子の量は核マトリックスの0.1〜10重量%、
3. 抗酸化剤および還元剤の群から選ばれる1以上の成分、ここに抗酸化剤および還元剤の量は核マトリックスの0.2〜5重量%。
核マトリックスはさらに多糖類を含み、多糖類の量はマトリックスの2重量%より多い。
本発明はまた、顆粒および顆粒を含む組成物の調製法をも提供する。

化学的または物理的因子が安定性を減少するので、顆粒に含まれる活性化合物の安定性は、貯蔵時の周囲の環境により影響される。洗剤の処方で、漂白剤のような洗剤処方剤は、酵素のような活性成分の活性を破壊する。
湿度もまた酵素顆粒のような活性化合物を含む顆粒の安定性に関して重要な因子である。特に高湿度は安定性に負に作用する。
今までのところ、高湿度および低湿度の両方で、ならびに漂白剤のような不都合な化合物の存在下および非存在下の環境で、安定な活性化合物を含む顆粒は報告されていない。

活性化合物、合成高分子および抗酸化剤または還元剤を特定の量で含む核マトリックスが活性化合物の安定性を著しく改善し、高湿度および低湿度の両方で、ならびに漂白剤のような不都合な化合物の存在下および非存在下の環境で、改善することを驚いたことに見出した。
PVPのような合成高分子は、顆粒たとえば酵素顆粒を含む活性化合物の安定性を、特に高湿度で不都合でない環境、たとえば漂白剤の存在しない環境下で、改善することが見出されている。チオ硫酸ソーダのような還元剤または抗酸化剤は、顆粒を含む活性化合物、たとえば酵素含有顆粒の安定性を、特に漂白剤のような不都合な化合物の存在下および低湿度環境で、改善することが見出されている。

それ故、マトリックス中の活性化合物をPVPのような合成高分子およびチオ硫酸ソーダのような還元剤または抗酸化剤と一緒に混合することにより、活性化合物の安定性が著しく改善される活性化合物を調製することが可能である。顆粒処方成分のこの組合せにより、本発明の顆粒中の活性化合物が安定化される異なる環境範囲が著しく広がる。
多糖類は不都合な/不都合でない、および低湿度/高湿度環境のあらゆる組合せで、活性化合物の安定性を改善することを我々はさらに見出した。

さらにMgSO₄を上述の核マトリックスに添加することにより、活性化合物の安定性がさらに改善することも見出した。
本発明の顆粒について我々が見出したさらなる改善策は、塩の層で顆粒をコーティングすることである。塩の層は、たとえそれが非常に薄くても、核マトリックス中の抗酸化剤または還元剤の寿命を延ばすと考えられている。
本発明の顆粒は、酵素核マトリックス、随意に塩のコーティングであろう1層以上のコーティングおよび保護コーティングを含む。

定義
術語「%RH」は本文を通じて使用されており、本発明の関連で該術語は、空気の相対湿度として理解されるべきである。100%RHは、ある一定の温度で水分で飽和した空気であり、%RHは空気の湿分飽和度の百分率を反映する。
高湿度とは、65%RHより高い湿度を意味する。
低湿度とは、65%RHより低い湿度を意味する。
術語「マトリックス」は、活性化合物を含む混合物として理解されるべきである。「核マトリックス」は、顆粒の全均一核を構成しまたは予備成形された不活性核に適用される混合物を構成する。

核
本発明の核マトリックスは下記の成分を含む：
a. 活性化合物、
b. 合成高分子、ここに添加される高分子量は核マトリックスの0.1〜10重量%、
c. 抗酸化剤および還元剤の群から選ばれる1以上の成分、ここに抗酸化剤および還元剤の量は、核マトリックスの0.2〜5重量%。
本発明の特定の具体例において、マトリックスはさらに多糖類を含み、ここに多糖類の量は、マトリックスの2重量%より多い。

活性化合物
本発明の活性化合物は、顆粒を取り巻く環境から隔離されるという利益を受けている、いずれかの活性成分または活性成分の混合物であろう。術語「活性」は、プロセスで本発明の顆粒に適用して、顆粒から放出される際にプロセスを改善する目的にかなう全ての化合物を包含することを意味する。適切な活性化合物は、不活性化の対象および/または本発明の組成物中で他の成分に不活性化を引き起こすものである。活性化合物は、核マトリックス中にばらばらの個体粒子として分散して存在するであろう。

活性化合物は、無機性または有機性であろう。特に活性化合物は、微生物から得られる化合物のような、周囲環境に通常非常に敏感な活性生物化合物であろう。より特定的には活性化合物は、ペプチドまたはポリペプチドあるいは蛋白質である。最も特定的には、活性化合物は酵素のような蛋白質である。
本発明に関連して酵素は、如何なる酵素または異なる酵素の組合せであろう。従って、「酵素」が言及される時には、一般的には1種以上の酵素の組合せを含むと理解すべきである。

酵素の変異体（たとえば組替え技術により産生された）は、術語「酵素」の意味の中に含まれると理解すべきである。そのような酵素変異体の例は、たとえばEP 251,446(Genencor)、WO 91/00345(Novo Nordisk)、EP 525,610(Solvay)およびWO 94/02618(Gist-Brocades NV)に開示されている。
特許請求範囲を含む本発明の明細書において使用した酵素分類は、国際生化学・分子生物学連合の命名法委員会の勧告案(1992)に従っている（Academic Press, Inc., 1992）。

従って本発明の顆粒に適切に組み込まれるであろう酵素の型は、オキシドレダクターゼ(EC 1.-.-.-)、トランスフェラーゼ(EC 2.-.-.-)、ヒドロラーゼ(EC 3.-.-.-)、リアーゼ(EC 4.-.-.-)、イソメラーゼ(EC 5.-.-.-)およびリガーゼ(EC 6.-.-.-)である。
本発明に関連して好ましいオキシドレダクターゼは、ペルオキシダーゼ(EC 1.11.1)、ラッカーゼ(EC 1.10.3.2)、およびグルコースオキシダーゼ(EC 1.1.3.4)である。商業的に入手可能なオキシドレダクターゼ(EC 1.-.-.-)の例は、Gluzyme^TM (Novozymes A/Sから入手できる酵素)である。

さらなるオキシドレダクターゼは、他の供給者から入手できる。好ましいトランスフェラーゼは、下記の何れかの亜綱のトランスフェラーゼである：
a) 1炭素群を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.1)、
b) アルデヒドまたはケトン残基を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.2);アシルトランスフェラーゼ(EC 2.3)、
c) グルコシルトランスフェラーゼ(EC 2.4)、
d) メチル基以外のアルキルまたはアリール基を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.5)、および
e) 窒素含有基を転移するトランスフェラーゼ(EC 2.6)。

本発明に関連する最も好ましい型のトランスフェラーゼは、トランスグルタミナーゼ(蛋白質-グルタミンγ-グルタミルトランスフェラーゼ、EC 2.3.2.13)である。
適切なトランスグルタミナーゼのさらなる例は、WO 96/06931に記載されている(Novo Nordisk A/S)。
本発明に関連して好ましいヒドロラーゼは、カルボキシエステルヒドロラーゼ(EC 3.1.1.-)たとえばリパーゼ(EC 3.1.1.3)、フィターゼ(EC 3.1.3.-) たとえば3-フィターゼ(EC 3.1.3.8)および6-フィターゼ(EC 3.1.3.26)、グリコシダーゼ(EC 3.2、ここで「カルボヒドラーゼ」として示される群に属す)たとえばα-アミラーゼ(EC 3.2.1.1)、ペプチダーゼ(EC 3.4、プロテアーゼとしても知られる)、および他のカルボニルヒドロラーゼである。

本文脈において、術語「カルボヒドラーゼ」は、特に5-および6-員環構造の炭水化物鎖（たとえば澱粉またはセルロース）を分解できる酵素（たとえばグリコシダーゼ、EC 3.2）のみならず、炭水化物、たとえばD-グルコースのような6員環構造をD-フラクトースのような5員環構造へ異性化できる酵素を示すためにも使われる。

関連するカルボヒドラーゼは下記を含む（括弧内はEC番号）：α-アミラーゼ(EC 3.2.1.1)、β-アミラーゼ(EC 3.2.1.2)、グルカン1,4-α-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.3)、エンド-1,4-β-グルカナーゼ(セルラーゼ、EC 3.2.1.4)、エンド-1,3(4)-β-グルカナーゼ(EC 3.2.1.6)、エンド-1,4-β-キシラナーゼ(EC 3.2.1.8)、デキストラナーゼ(EC 3.2.1.11)、キチナーゼ(EC 3.2.1.14)、ポリガラクツロナーゼ(EC 3.2.1.15)、リゾチーム(EC 3.2.1.17)、β-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.21)、α-ガラクトシダーゼ(EC 3.2.1.22)、β-ガラクトシダーゼ(EC 3.2.1.23)、アミロ-1,6-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.33)、キシラン1,4-β-キシロシダーゼ(EC 3.2.1.37)、グルカンエンド-1,3-β-D-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.39)、α-デキストリンエンド-1,6-α-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.41)、スクロースα-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.48)、グルカンエンド-1,3-α-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.59)、グルカン-1,4-β-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.74)、グルカンエンド-1,6-β-グルコシダーゼ(EC 3.2.1.75)、アラビナンエンド-1,5-α-L-アラビノシダーゼ(EC 3.2.1.99)、ラクターゼ(EC 3.2.1.108)、キトサナーゼ(EC 3.2.1.132)、およびキシロースイソメラーゼ(EC 5.3.1.5)。

商業的に入手可能なプロテアーゼ(ペプチダーゼ)の例は、Kannase^TM、Everlase^TM、Esperase^TM、Alcalase^TM、Neutrase^TM、Durazym^TM、Savinase^TM、Pyrase^TM、Pancreatic Trypsin NOVO(PTN)、Bio-Feed^TM ProおよびClear-Lens^TM Proを含む(全てNovozymes A/S, Bagsvaerd, Denmarkから入手可能)。
他の商業的に入手可能なプロテアーゼは、Maxatase^TM、Maxacal^TM、Maxapem^TM、Opticlean^TM、およびPurafect^TMを含む (Genencor International Inc.またはGist-Brocadesから入手可能)。

商業的に入手可能なリパーゼの例は、Lipoprime^TM、Lipolase^TM、Lipolase^TM Ultra、Lipozyme^TM、Palatase^TM、Novozyme^TM 435、およびLecitase^TMを含む(全てNovozymes A/Sから入手可能)。
他の商業的に入手可能なリパーゼの例は、Lumafast^TM(Genencor International Inc.からのPseudomaonas mendocinaリパーゼ)、Lipomax^TM (Gist-Brocades/ Genencor International Inc.からのPs.pseudoalcaligenesリパーゼ)、およびSolvay EnzymesからのBacillus sp.リパーゼを含む。さらなるリパーゼは、他の供給者から入手可能である。

商業的に入手可能なカルボヒドラーゼの例は、Alpha-Gal^TM、Bio-Feed^TM Alpha、Bio-Feed^TM Beta、Bio-Feed^TM Plus、Novozyme^TM 188、Celluclast^TM、Cellsoft^TM、Ceremyl^TM、Citrozym^TM、Denimax^TM、Dezyme^TM、Dextrozyme^TM、Finizym^TM、Fungamyl^TM、Gamanase^TM、Glucanex^TM、Lactozym^TM、Maltogenase^TM、Pentopan^TM、Pectinex^TM、Promozyme^TM、Pulpzyme^TM、Novamyl^TM、Termamyl^TM、AMG^TM (Amyloglucosidase Novo)、Maltogenase^TM、Sweetzyme^TMおよびAquazym^TMを含む(すべてNovozymes A/Sから入手可能)。さらなるカルボヒドラーゼは、他の供給者から入手可能である。

合成高分子
合成高分子により、骨格鎖が合成的に重合された高分子を意味する。
本発明の適切な合成高分子は、特にポリビニルピロリドン(PVP)、ポリビニルアルコール(PVA)、ポリビニルアセテート、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリスルホネート、ポリカルボキシレート、およびこれらの共重合体、特に水溶性高分子または共重合体を含む。
本発明の特定の具体例において、合成高分子はビニルポリマーである。
本発明の好ましい具体例において、合成高分子はPVPまたはその共重合体、たとえばPVP/ビニルアセテート共重合体である。

ポリビニルピロリドンを使用する場合には、分子量1,000g/mol〜1,500,000 g/molの高分子が好ましい。良好な安定性のために好ましい分子量は、1.000,000 g/mol未満、たとえば800,000g/mol未満、殊に200,000g/mol未満、最も好ましくは100,000g/mol未満である。我々が一般的に好んで使用する分子量は、5,000 g/molより大きい、特に10,000g/molより大きい、より特定的に20,000g/molより大きい、たとえば25,000 g/molより大きい。
本発明のマトリックス中に使用する合成高分子の量は、特に0.1〜10%、より特定的には0.2〜5重量%、よりさらに特定的には0.5〜3重量%、最も特定的には1〜2.5重量%である。

合成高分子のあるものは吸湿性を有し、もしマトリックスに使用する量が多すぎると顆粒の安定性に悪影響をもたらす。またもし大量の合成高分子を添加すると、粘度が高くなりすぎてプロセス条件に悪影響を与える。一方合成高分子の量が少なすぎると、安定化効果は見られない。さらに合成高分子は、他の顆粒化物質に比較して高価なので、必要量を可能な限り低くしたい。これらの議論から、マトリックスに添加する合成高分子の量は、安定性を最適化するためのバランスである。

抗酸化剤および還元剤
本発明の適切な抗酸化剤および還元剤の例は、アルカリ金属およびアルカリ土類金属の塩、亜硫酸塩、チオ亜硫酸塩、チオ硫酸塩、エリソルビン酸塩、クエン酸塩、イソプロピルクエン酸塩およびアスコルビン酸塩または相当する酸、珪酸塩、炭酸塩または重炭酸塩、燐酸塩および亜硝酸塩であり、他の適切な物質は、メチオニン、グリシン、プロピルガリウム酸塩、3級ブチルヒドロキノン、トコフェロール、チオジプロピオン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン(BHT)、ブチル化ヒドロキシアニソール(BHA)、またはタンニン酸である。殊にチオ硫酸塩、たとえばチオ硫酸ナトリウムは適切である。本発明のマトリックスに使用する抗酸化剤および還元剤の量は、マトリックスの重量に対して、特に0.2〜5重量%、より特定的には0.5〜4重量%、より一層特定的には1〜3重量%、最も特定的には1〜2重量%である。

抗酸化剤および還元剤の添加量が核マトリックスの0.2重量%未満では、顕著な安定化効果は見られず、また5%を超えるとその安定化効果に幾つかの点で悪影響を与える：抗酸化剤および/または還元剤のあるものは、高湿度環境で悪影響を与える吸湿性を有する。さらにある塩は、不快臭を有し、余り大量に使用すると臭いが最終製品に悪影響を与える。さらに顆粒を製造する際の核マトリックスの調製は、核マトリックス中により均一な混合物を得るため2つの化合物を溶解状態で得るために、液体たとえば酵素濃縮物と一緒に、合成高分子および抗酸化剤および/または還元剤を混合することを含むであろう。もし抗酸化剤または還元剤の量が多すぎると、合成高分子の沈殿が見られる。
もし調製中に抗酸化剤または還元剤が、たとえば酵素を含む液体に添加されるなら、抗酸化剤または還元剤の溶解度がもう一つの制限因子となり得る。

多糖類
本発明の多糖類は、非改質の天然由来の多糖類または改質した天然由来の多糖類であろう。
適切な多糖類は、セルロース、ペクチン、デキストリン、および澱粉を含む。澱粉は水に溶解性または不溶性である。
本発明の特定の具体例において、多糖類は澱粉である。本発明の特定の具体例において、多糖類は不溶性の澱粉である。

広範囲の植物源からの天然由来の澱粉は、本発明に関連して適切である(本質的に澱粉として、または改質澱粉のための出発点として)、および関連する澱粉は下記のものからの澱粉を含む：米、玉蜀黍、小麦、ジャガイモ、燕麦、キャッサバ、サゴ椰子、ユカ、大麦、サツマイモ、ソルガム、ヤム、粟、蕎麦、葛、タロイモ、アメリカサトイモ、およびたとえば小麦粉の形であろう。
キャッサバ澱粉は、本発明に関連する好ましい澱粉に属し、この関連で、キャッサバおよびキャッサバ澱粉は、タピオカ、マニオク、マンジオカ、およびイモノキを含む種々の同義語で知られていることが言及されるであろう。

本発明との関連で採用された、術語「改質澱粉」は、ある種の少なくとも部分的な化学修飾、酵素改変、および/または物理的または物理化学的改変を受け、そうして「親」澱粉に比べて変更された性質を一般に示す、天然由来の澱粉を示す。
本発明のマトリックスに使用される多糖類の量は、マトリックスの重量に対して、特に2重量%より多い、より特定的に2〜75重量%、より一層特定的に2〜50重量%、より一層特定的に5〜30重量%、最も特定的に10〜20重量%である。
多糖類の量が余り多すぎると、顆粒の剛性に悪影響を与える多孔性顆粒を生じ、これにより塵埃数値に悪影響を与えるであろう。

本発明のマトリックスに使用される澱粉の量は、マトリックスの重量に対して、特に2重量%より多い、より特定的には5重量%より多い。
本発明のマトリックスに使用される澱粉の量は、マトリックスの重量に対して、特に2〜30重量%、より特定的には2〜20重量%、最も特定的には5〜15重量%である。
マトリックスへの合成高分子または多糖類の添加に対する代替または補給物として、同様な安定化効果を有する他の有望な候補は、不活性蛋白質、たとえばカゼイン、アルブミンおよびゼラチンならびにジャガイモ、米、玉蜀黍、コーンスチープリカー、小麦、大豆からの蛋白質源であることを見出した。

マトリックスに対する多糖類および/または蛋白質の添加は、酵素発酵培養液および/または酵素回収スラッジの形においてであろう、しかし酵素発酵培養液および/または酵素回収スラッジはまた多糖類および/または蛋白質に加えて添加されるであろう。酵素発酵培養液および/または酵素回収スラッジは、夫々典型的に酵素の発酵工程および引き続く酵素の回収工程からの残渣である。本発明の特定の具体例において、核マトリックスは不活性な蛋白質を含み、それは酵素発酵培養液および/または回収スラッジの形で添加されるであろう。

本発明の好ましい具体例において、核マトリックスは下記の成分を含む：
a. 活性化合物、
b. 合成高分子、ここに添加される高分子の量は、マトリックス重量の0.1〜10%、
c. 1種以上の抗酸化剤および/または還元剤、ここに抗酸化剤および/または還元剤の量は、マトリックス重量の0.2〜5%、
d. 多糖類、ここに多糖類の量は、マトリックス重量の2%より多い。
本発明の特定の具体例において、合成高分子はPVPであり、抗酸化剤はチオ硫酸ナトリウムであり、および多糖類は澱粉である。
我々はさらに本発明のマトリックスに可溶性無機塩を添加することにより、顆粒を含む上記の活性化合物はより安定になることを見出した。

無機塩
マトリックスはさらに可溶性無機塩を含むであろう、この時に前記無機塩は、亜鉛、マグネシウムおよびカルシウムの群から選ばれる2価の陽イオン、特に硫酸マグネシウムおよび硫酸亜鉛、を含む。2価の陽イオンが好まれるのは、それらが最善の貯蔵性および加工安定性を提供するからである。硫酸塩が陰イオンとして好まれるのは、それが最善の乾燥収率を提供するからである。本発明の特定の具体例において、塩は硫酸マグネシウムである。
「コーティング」（下記）の節で言及される塩もまた使用されるであろう。
本発明のマトリックスで使用される塩の量は、特に1〜70重量%であり、より特定的には2〜30重量%であり、さらに特定的には2〜10重量%である。

補助マトリックス成分
マトリックスはさらに補助マトリックス成分として、既知の通常の核物質、たとえば結合剤、溶剤、充填剤などを含むであろう。これらはWO 89/08694、 WO 89/08696、 EP 270608 B1および/または WO 00/01793に記載されている。通常のコーティング剤の他の例は、下記に見られるであろう：米国特許4,106,991、EP 170360、EP 304332、EP 304331、EP 458849、EP 458845、WO 97/39116、WO 92/12645A、WO 87/07292、WO 91/06638、WO 92/13030、WO 93/07260、WO 93/07263、WO 96/38527、WO 96/16151、WO 97/23606、米国特許5,324,649、米国特許4,689,297、EP 206417、EP 193829、DE 4333215、DE4322229 A、DD 263790、日本特許61162185 A、および/または日本特許58179492。使用される他の酵素安定剤は、硼酸およびテトラ硼酸ナトリウムであろう。

本発明の特定の具体例において、本発明の核マトリックスは、ここに参照文献として取り込まれているWO 01/25412の概念と一緒に使用されている。
核マトリックスは、予備成形された核に随意にコーティングされるであろう。

予備成形核
担体核、プラシーボ核（活性化合物を含まない核）または種とも呼ばれる予備成形された核は、活性化合物を含む混合物がその上に層状に積み重ねられる不活性粒子である。予備成形核は、無機塩、砂糖、糖アルコール、小有機分子たとえば有機酸または塩、鉱物たとえば粘土もしくは珪酸塩またはこれらの2種以上の組合せを含むであろう。
本発明の特定の具体例において、核は活性化合物を含む混合物を予備成形核
に接触させることにより調製されるであろう。

コーティング
顆粒は、1層以上のコーティングを含むであろう。コーティングは、1μ〜1,500μの厚みであろう。特定の具体例において、コーティングは30μより厚く、より特定的な具体例においてコーティングは50μより厚く、最も特定的な具体例においてコーティングは75μより厚い。特定の具体例において、コーティングは1000μより薄く、より特定的な具体例においてコーティングは500μより薄く、さらにより特定的な具体例においてコーティングは250μより薄く、最も特定的な具体例においてコーティングは150μより薄い。
驚くべきことに我々は、薄い塩のコーティングでもその適用により顆粒の安定性は増加し、塩コーティングの付加により抗酸化剤の寿命は長くなることを見出した。特定の具体例において、顆粒は薄い塩のコーティングを含む。

塩コーティング
2〜5μの厚みの塩コーティングは、安定性を顕著に改善する。本発明の特定の具体例において、塩コーティングは、マトリックスおよび塩コーティング重量の2〜30%を含む。より特定的な具体例において、塩の量は、マトリックスおよび塩コーティング重量の3〜10%を含む。
塩コーティングは、安定性以外の理由、たとえば保護および保全性のために、厚いコーティングであろう。

本発明の特定の具体例において、塩コーティングの厚みは、1〜1000μである。本発明のより特定的な具体例において、塩コーティングの厚みは、2〜100μである。本発明のさらにより特定的な具体例において、塩コーティングの厚みは、3〜20μである。
特定の具体例において、塩コーティングは500μより薄い。より特定的な具体例において塩コーティングは250μより薄い。本発明のさらにより特定的な具体例において塩コーティングは100μより薄い。本発明のさらにより特定的な具体例において塩コーティングは80μより薄い。本発明のより特定的な具体例において塩コーティングは50μより薄い。最も特定的な具体例において塩コーティングは30μより薄い。

塩コーティングは、1種以上の塩を含む。塩は無機塩であろう、たとえば硫酸塩、亜硫酸塩、燐酸塩、亜燐酸塩、硝酸塩、塩化物または炭酸塩あるいは簡単な有機酸（炭素数10未満、たとえば炭素数6以下）の塩、たとえばクエン酸塩、マロン酸塩もしくは酢酸塩である。これらの塩における陽イオンの例は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属、ただしアンモニウムイオンまたは最初の遷移系列の金属イオン、たとえばナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、亜鉛またはアルミニウムである。

陰イオンの例は、塩化物、臭化物、沃化物、硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、燐酸塩、1塩基リン酸塩、2塩基リン酸塩、次亜燐酸塩、2水素ピロ燐酸塩、テトラ硼酸塩、硼酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、メタ珪酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、琥珀酸塩、乳酸塩、蟻酸塩、酢酸塩、酪酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、アスコルビン酸塩またはグルコン酸塩を含む。特に硫酸塩、亜硫酸塩、燐酸塩、亜燐酸塩、硝酸塩、塩化物または炭酸塩あるいは簡単な有機酸の塩、たとえばクエン酸塩、マロン酸塩もしくは酢酸塩のアルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩が使用されるであろう。特定な例は、Na₂HPO₄、Na₃PO₄、(NH₄)H₂PO₄、KH₂PO₄、Na₂SO₄、K₂SO₄、KHSO₄、ZnSO₄、MgSO₄、CuSO₄、Mg(NO₃)₂、(NH₄)₂SO₄、硼酸ナトリウム、酢酸マグネシウムおよびクエン酸ナトリウムを含む。

塩はまた水和塩でもあろう、すなわち結晶化の結合水を有する結晶性塩水和物、たとえばWO 99/32595に記載のものである。水和塩の例は、硫酸マグネシウム7水塩(MgSO₄(7H₂O))、硫酸亜鉛7水塩(ZnSO₄(7H₂O))、硫酸銅5水塩CuSO₄(5H₂O))、第2燐酸ナトリウム7水塩Na₂HPO₄(7H₂O))、硝酸マグネシウム6水塩Mg(NO₃)₂(6H₂O))、硼酸ナトリウム10水塩、クエン酸ナトリウム2水塩および酢酸マグネシウム4水塩を含む。

追加的コーティング
マトリックスおよび随意に塩コーティングを含む顆粒は、顆粒の性質をさらに改善するために1層以上のコーティング層でさらにコーティングするであろう。たとえばWO 89/08695、WO 270 608 B1 および/またはWO 00/01793に記載されているコーティングのような、当業界に知られている通常のコーティングおよび方法が適切に使用されるであろう。通常のコーティング物質の他の例は下記に見出されるであろう：米国特許4,106,991、EP 170360、EP 304332、EP 304331、EP 458849、EP 458845、WO 97/39116、WO 92/12645A、WO 89/08695、WO 89/08694、WO 87/07292、WO 91/06638、WO 92/13030、WO 93/07260、WO 93/07263、WO 96/38527、WO 96/16151、WO 97/23606、米国特許5,324,649、米国特許4,689,297、EP 206417、EP193829、DE 4344215、DE 4322229 A、DD 263790、日本特許61162185 Aおよび/または日本特許58179492。

コーティングは、結合剤、繊維、塩、水不溶性鉱物、顔料、染料、酵素安定剤またはこれらの組合せおよび「核」節で上述した如何なる造粒物質からも選ばれる物質を含むであろう。

不都合な化合物
本発明において、不都合な化合物は活性化合物の活性を減少することを見出される化合物である。不都合な化合物の例は、漂白剤、アルカリ成分、陰イオン界面活性剤、金属錯化剤（たとえばビルダー）であり得るが、これらに限定されるものではない。

顆粒の調製
本発明はさらに、下記の工程を含む顆粒調製プロセスを包含する：
a. 活性化合物、核マトリックス重量の0.1〜10%の量の合成高分子、および核マトリックス重量の0.2〜5%の量の抗酸化剤および還元剤からなる群から選ばれる成分、を含む核マトリックスの調製、
b. ならびに、前記核マトリックスに1層以上のコーティングを施すこと。
顆粒は、当業界で既知の下記を含む酵素造粒方法により調製されるであろう：ミキサー造粒、流動層コーティング、プリリング、ディスク造粒、パン-ドラムコーティング、噴霧乾燥、押し出し、流動層噴霧乾燥、ハイシア凝塊、球状化またはこれらの技術の組合せ。

核マトリックスの調製
核マトリックス粒子を調製する方法は、既知の酵素造粒製剤技術、たとえば噴霧乾燥、流動層、流動層噴霧乾燥、ミキサー造粒、パン-ドラムプロセスおよび押し出しを含む。他の関連する核粒子は、層状製品、吸収製品、ペレット製品、プリリング製品である。核は、造粒後随意に乾燥されるであろう。

下記の酵素造粒製剤技術は、顆粒の調製に使用されるであろう：
噴霧乾燥製品は、液体の酵素含有溶液により調製されるであろう。ここに溶液は、噴霧乾燥塔に霧化され、小滴を生成する。小滴は、乾燥塔を下降中に乾燥して、酵素含有粒子物質を生成する。非常に小さな粒子はこのように製造される（Michael S. Showell(編);粉末洗剤；界面活性剤科学シリーズ；1998;vol.71;page140-142;Marcel Dekker）。

層状製品は、予備成形した不活性な核粒子の周りに層として酵素をコーティングする製品を含む。この時に酵素含有溶液は、典型的に予備成形された核粒子が流動する流動層装置内に霧化され、酵素含有溶液は核粒子に付着、乾燥して、核粒子の表面に乾燥酵素の層を残す。もし望ましい寸法の有用な核粒子が見付れば、望みの寸法の粒子はこの様に得られる。この型の製品は、たとえばWO 97/23606に記載されている。
吸収された核粒子の調製中に、酵素は、核の周りに層として酵素をコーティングするよりは、むしろ核におよび/または核の表面に吸収される。このようなプロセスは、WO 97/39116に記載されている。

押し出しまたはペレット製品は、酵素含有ペーストがペレットに圧搾されるかまたは圧力下小さな開孔を通して押し出され、粒子に切断され、次いで乾燥されて調製されるであろう。そのような粒子が通常かなりの寸法を有するのは、押し出し開孔（通常ボーリング孔を有する板）製作用の材料が、押し出し開孔を通しての許容できる圧力降下を制限するためである。また小孔を使用した際の非常に高い押し出し圧力が、酵素ペーストの熱生成を増加するので、酵素に有害である（Michael S. Showell(編);粉末洗剤；界面活性剤科学シリーズ；1998;vol.71;page140-142;Marcel Dekker）。本発明の特定の具体例において、合成高分子および/または多糖類および/または蛋白質源および/または抗酸化剤は、液体たとえば酵素濃縮物または酵素培養液と共に混合され、次に押し出される。

プリリング製品は、酵素粉末が融解ワックス中に懸濁され、その懸濁物がたとえば回転ディスク霧化機を通して、冷却室に噴霧され、そこで滴が急速に固化する製品を含む（Michael S. Showell(編);粉末洗剤；界面活性剤科学シリーズ；1998;vol.71;page140-142;Marcel Dekker）。得られた製品は、酵素が表面に濃縮する代わりに不活性物質全体に均一に分布している。米国特許4,016,040および米国特許4,713,245もまた、この技術に関する文書である。

ミキサー造粒製品は、酵素含有液を通常の造粒成分の乾燥粉末組成物に添加する製品を含む。適切な比率の液体および粉末を混合し、液体の湿分が乾燥粉末に吸収されるにつれ、乾燥粉末の成分は付着、凝塊を始め、粒子が成長し、酵素を含む粒子化物を形成する。そのようなプロセスが米国特許4,106,991 (NOVO NORDISK)および関連文書EP 170360 B1 (NOVO NORDISK)、EP 304332 B1 (NOVO NORDISK)、EP 304331 (NOVO NORDISK)、WO 90/09440 (NOVO NORDISK)およびWO 90/09428 (NOVO NORDISK)に記載されている。種々のハイシアミキサーが造粒機として使用できる、本プロセスの特定の製品において、種々の酵素、充填剤および結合剤などからなる粒子化物が、いわゆるT-粒子化物を与えるために粒子を補強するためにセルロース繊維と混合される。補強された粒子は、より頑丈で、酵素の塵の放出量が減る。

粘弾性液体核粒子を調製する方法は、WO 02/28991に記載の方法を含み、ここに参照文献として取り込まれている。
本発明の特定の具体例において、合成高分子および/または多糖類および/または蛋白質源および/または抗酸化剤は、液体たとえば酵素濃縮物または発酵培養液と共に混合され、次にコーティング室、たとえば流動層、多段流動層、微細粒子の循環を随意に有する流動噴霧乾燥機、の中の予備成形された核に霧化される。

塩コーティングの調製法
塩コーティングは、流動層または流動層噴霧乾燥機で顆粒に霧化することにより、活性化合物を含むマトリックスを含む顆粒に適用されるであろう。塩コーティングは、真空ミキサー、糖衣錠型コーター（パン-ドラムコーター）、種子のコーティング用装置、回転底を含む装置（eks, Roto Glatt）、CF造粒機（Freund）、torbed加工機（Gauda）、またはOmnitex(Nara)のような回転流動層加工機にさらに適用されるであろう。

塩の層を適用後、顆粒は随意に乾燥されるであろう。塩をコーティングされた顆粒の乾燥は、当業界で入手可能な如何なる乾燥方法、たとえば噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥、流動層乾燥、パン-ドラムコーティングおよびマイクロ波乾燥、によっても達成できる。塩コーティング顆粒の乾燥は、たとえば流動層、流動層噴霧乾燥機（FSD）、または多段階乾燥機（MSD）の使用を含む造粒方法と組み合わせることも出来る。

追加的コーティングの調製法
当業界に知られている通常のコーティングおよび方法は適切に使用されるであろう。たとえばデンマーク特許PA 2002 00473、WO 89/08695,270 608 B1、および/またはWO 00/01793に記載されたコーティングである。通常のコーティング材料の他の例は下記に見出されるであろう：米国特許4,106,991、EP 170360、EP 304332、EP 304331、EP458849、EP458845、WO 97/39116、WO 92/ 12645A、WO 89/08695、WO 89/08694、WO 87/07292、WO 91/06638、WO 92/13030、WO 93/07260、WO 93/07263、WO 96/38527、WO 96/16151、WO 97/23606、WO 01/ 25412、WO 02/20746、WO 02/28369、米国特許5879920、米国特許 5,324,649、米国特許4,689,297、米国特許6,348,442、EP 206417、EP 193829、DE 4344215、DE4322229 A、DE 263790、日本特許61162185 Aおよび/または日本特許58179492。
コーティングは、「核マトリックスの調製法」および「塩コーティングの調製法」の節で前述したと同様な方法で調製されるであろう。

コーティング粒子を含む組成物およびその適用
本発明は、また本発明の顆粒を含む組成物にも関する。組成物は如何なる組成物でもあろうが、特に適切な組成物は、洗浄用組成物、繊物加工用組成物、皮革加工用組成物、パルプまたは紙加工用組成物、食品および飲料組成物、動物飼料組成物、製薬組成物およびパーソナルケア組成物である。

洗浄用組成物は、洗剤および抗菌組成物を含む。繊物加工用組成物は、酵素漂白剤および/または繊物たとえばデニムのストーンウオッシング用組成物を含む。食品および飲料組成物は、ワイン、油脂、柑橘およびジュース製品、澱粉および砂糖製品、アルコールおよび/または醸造製品、大豆製品およびパン小麦粉または生地を製造する産業で使用される酵素組成物を含む。
本発明は、繊維、皮革、パルプ、紙、食品、飲料、硬い表面および人または動物の身体の処理のための使用をも包含する。顆粒はまた人または動物の身体の治療用医薬品の製造にも使用されるであろう。

洗剤
本発明のコーティング粒子は洗剤組成物に添加され、その成分になるであろう。
本発明の洗剤組成物はたとえばしみの付いた布の前処理もしくは布柔軟剤組成物用に適切な洗浄添加組成物を含む手または機械洗濯用の洗濯洗剤組成物、または一般家庭での硬い表面の洗浄操作に使用するための洗剤組成物、あるいは手もしくは機械での皿洗い操作用組成物として処方されるであろう。

特定の観点で、本発明は本発明のコーティング粒子を含む洗剤添加物を提供する。洗剤添加物と同ように洗剤組成物は、1種以上の他の酵素、たとえばプロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、たとえばラッカーゼ、および/またはペロキシダーゼを含むであろう。
一般に選ばれた酵素の性質は、選ばれた洗剤と適合すべきである（すなわちpH最適、他の酵素および非酵素処方成分との適合性、など）および酵素は有効量で存在すべきである。

プロテアーゼ：適切なプロテアーゼは、動物、植物または微生物由来のものを含む。微生物由来のものが好ましい。化学修飾または蛋白質改変突然変異体が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼまたは金属酵素、好ましくはアルカリ性微生物プロテアーゼもしくはトリプシンようプロテアーゼであろう。アルカリ性プロテアーゼの例は、スブチリシン、特にBacillusから誘導されたもの、たとえばsubtilisin Novo、subtilisin Carlsberg、subtilisin 309、subtilisin 147およびsubtilisin 168(WO 89/06279に記載)である。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（たとえば豚または牛由来の）およびWO 89/06270およびWO 94/25583に記載のFusariumプロテアーゼである。

有用なプロテアーゼの例は、WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116およびWO 98/34946に記載の変異株であり、殊に下記の1箇所以上の位置に置換を有する変異株である：27、36、57、76、87、97、101、104、120、123、167、170、194、206、218、222、224、235および274。
好ましい商業的に入手可能なプロテアーゼ酵素は下記を含む：EVERLASE^TM、OVOZYME^TM、SAVOZYME^TM、ALCALASE^TM、SAVINASE^TM、PRIMASE^TM、DURALASE^TM、ESPERASE^TM、AND KANNASE^TM (Novozymes A/S)、MAXATASE^TM、MAXACAL^TM、MAXAPEM^TM、PROPERASE^TM、PURAFECT^TM、PURAFECT OXP^TM、FN2^TM、およびFN3^TM、FN4^TM(Genencor International Inc.)。

リパーゼ：適切なリパーゼは、細菌または菌糸由来のものを含む。化学修飾または蛋白質改変突然変異体を含む。有用なリパーゼの例は、下記のものからのリパーゼを含む：Humicola(同義語Thermomyces)から、たとえばEP 258 068およびEP 305 216に記載のH. lanuginosa (T.lanuginosus)から、またはWO 96/13580に記載のH.insolensから、Pseudomonasリパーゼ、たとえばP. alcaligenesまたはP. pseudoalcaligenes(EP 218 272)、P. cepacia (EP 331 376)、P. stutzeri (GB 1,372,034)、P. fluorescens、Pseudomonas sp. strain SD705 (WO 95/06720およびWO 96/27002)、P. wisconsinesis (WO 96/12012)、Bacillus リパーゼ、たとえばB. subtilis (Dartois et al.(1993), Biochemica et Biophysica Acta, 1131, 253-360)、B. stearothermophilus (日本特許64/744992)またはB. pumilus (WO 91/16422)。

他の例は、下記に記載のようなリパーゼ変異株である：WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407 225、EP 260 105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/03744、WO 94/ 25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079、およびWO 97/07202。
好ましい商業的に入手可能なリパーゼ酵素は、LIPOLASE^TMおよびLIPOLASE ULTRA^TM(Novozymes A/S)を含む。
アミラーゼ：適切なアミラーゼ(αおよび/またはβ)は、細菌または菌糸由来のものを含む。化学修飾または蛋白質改変突然変異体を含む。アミラーゼはたとえばBacillus、たとえばGB 1,296,839により詳細に記載されているB. licheniformisの特定の株から得られるα-アミラーゼを含む。

有用なアミラーゼの例は、WO 94/02597、WO 94/18314、WO 96/23873、およびWO 97/43424に記載の変異株であり、殊に下記の1箇所以上の位置に置換を有する変異株である：15、23、105、106、124、128、133、154、156、181、188、190、197、202、208、209、243、264、304、305、391、408および444。
商業的に入手可能なアミラーゼは、DURAMYL^TM、TERMAMYL^TM、FUNGAMYL^TMおよびBAN^TM（Novozymes A/S）、RAPIDASE^TM、PURASTAR^TMおよびPURASTAR OXAM^TM (Genencor International Inc.)である。

セルラーゼ：適切なセルラーゼは、細菌または菌糸由来のものを含む。化学修飾または蛋白質改変突然変異体を含む。適切なセルラーゼの例は、下記のものからのセルラーゼを含む：米国特許4,435,307、米国特許5,648,263、米国特許5,691,178、米国特許5,776,757およびWO 89/09259に記載のgenera Bacillus、Pseudomonas、 Humicola、 Fusarium、Thielavia、AcremoniumたとえばHumicola insolensから産生したfungal cellulases、Myceliophthora thermophilaおよび Fusarium oxysporumである。

特に適切なセルラーゼは、カラーケア便益を有するアルカリ性または中性セルラーゼである。そのようなセルラーゼの例は、EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940に記載のセルラーゼである。他の例は、WO 94/07998、EP 0 531 315、米国特許5,457,046、米国特許5,686,593、米国特許5,763,254、WO 95/24471、WO 98/12307およびPCT/DK98/00299に記載のセルラーゼ変異体である。
商業的に入手可能なセルラーゼは、CELLUZYME^TM、およびCAREZYME^TM (Novo- zymes A/S)、CLAZINASE^TM、およびPURADAX HA^TM (Genencor International Inc.)、ならびにKAO500(B)^TM (Kao Corporation)を含む。

ペルオキシダーゼ/オキシダーゼ：適切なペルオキシダーゼ/オキシダーゼは、工場、細菌または菌糸由来のものを含む。化学修飾または蛋白質改変突然変異体を含む。有用なペルオキシダーゼの例は、CoprinusからたとえばC. cinereus、およびWO 93/24618、WO 95/10602、WO 98/15257に記載のようなそれらの変異株からのペルオキシダーゼを含む。
商業的に入手可能なペルオキシダーゼは、GUARDZYME^TM (Novozymes A/S)を含む。

マンナーゼ：適切なマンナーゼは、MANNAWAY^TM (Novozymes A/S)を含む。
洗剤酵素は1種以上の酵素を含む単独の添加物を添加することにより、またはこれらの酵素を全て含む複合添加物を添加することにより洗剤組成物に含まれるであろう。本発明の洗剤添加物、すなわち単独の添加物または複合添加物は、異なる酵素を含む本発明の1個以上の粒子を含むように処方されるであろう。
本発明の洗剤組成物は、いずれかの便利な乾燥形、たとえば棒、錠剤、粉、顆粒またはペースト、であろう。それはまた液体洗剤、特に非水液体洗剤であろう。

洗剤組成物は、半極性を含む非イオン性および/または陰イオン性および/または陽イオン性および/または双性イオン性であろう1種以上の界面活性剤を含む。界面活性剤は、典型的に重量で0.1〜60%のレベルで存在する。
ここに含まれた時に、洗剤は通常約1％から約40%の陰イオン界面活性剤、たとえば直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、α-オレフィンスルホン酸塩、アルキル硫酸塩(脂肪族アルコール硫酸塩)、アルコールエトキシ硫酸塩、2級アルカンスルホン酸塩、α-スルホ脂肪族酸メチルエステル、アルキル-またはアルケニル琥珀酸または石鹸を含む。

ここに含まれた時に、洗剤は通常約0.2％から約40%の非イオン性界面活性剤、たとえばアルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシル化脂肪属酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪属酸アミド、またはグルコサミンのN-アシルN-アルキル誘導体(「グルカミド」)を含む。
洗剤は、0〜65%の洗剤ビルダーまたは錯化剤、たとえばゼオライト、2燐酸塩、3燐酸塩、亜燐酸塩、炭酸塩、クエン酸塩、ニトリロ3酢酸、エチレンジアミン4酢酸、ジエチレントリアミン5酢酸、アルキル-もしくはアルケニル琥珀酸、可溶性珪酸塩もしくは層状珪酸塩(たとえばヘキストからのSKS-6)を含む。

洗剤は1種以上の高分子を含むであろう。例は、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリ(ビニルピリジン-N-オキシド)、ポリビニルイミダゾール、ポリカルボキシレートたとえばポリアクリレート、マレイン酸/アクリル酸共重合体およびラウリルメタクリレート/アクリル酸共重合体である。
洗剤は、漂白系を含むであろう。これは過硼酸塩または過炭酸塩のようなH₂O₂源を含むであろうし、それはテトラアセチルエチレンジアミンまたはノナノイルオキシベンゼンスルホネートのような過酸-形成漂白活性剤と一緒にされるであろう。代替的に、漂白系は、たとえばアミド、イミド、またはスルホン型のペルオキシ酸を含むであろう。

本発明の洗剤組成物の酵素は、通常の安定化剤、たとえばポリオール、たとえばポリプロピレングリコールもしくはグリセロール、砂糖もしくは糖アルコール、乳酸、硼酸または硼酸誘導体、たとえば芳香族硼酸エステル、あるいはフェニル硼酸誘導体たとえば4-ホルミルフェニル硼酸、を用いて安定化されるであろう。および組成物は、たとえばWO 92/19709およびWO 92/19708に記載された如く処方されるであろう。
洗剤はまた、他の通常の洗剤成分、たとえば粘土、発泡剤、抑泡剤、防食剤、土壌懸濁剤、抗再汚染剤、染料、殺菌剤、光沢剤、向水性物質、変色防止剤、または香料を含む布柔軟仕上げ剤を含むであろう。

洗剤組成物中に、酵素はどれも、洗濯液1リットル当たり0.01〜100mgの酵素蛋白質に相当する量で、好ましくは洗濯液1リットル当たり0.05〜5mgの酵素蛋白質、特に洗濯液1リットル当たり0.1〜1mgの酵素蛋白質、を添加されるであろうと現在考えられている。
本発明の酵素は、ここに参照文献として組み込まれているWO 97/07202に開示されている洗剤処方で追加的に取り入れられるであろう。

例1．コーティング無しのプロテアーゼ粒状化物(SAVINASE ^TM )の製造
下記（全ての百分率は、乾燥顆粒の%として与えられる）から調製される粉末組成物を、Lodige混合機で混合し、プロテア−ゼ(SANIVASE^TM)限外濾過物と共に噴霧した。その時、例示した如く5%の砂糖および安定剤を溶解した。
10% 繊維性セルロース(Arbocel BC 200)
8% カオリン
5% デキストリン(Avedex)
例示の如き安定化剤成分
硫酸ナトリウム微粉(100%迄)

湿った混合物を、米国特許No.4,106,991の例1に記載の如く、成形、造粒した。粒状化物を次に流動層で乾燥した。
異なる粉末洗剤中および異なる条件下での酵素粒状化物の安定性を、2%の製造粒状化物を洗剤に添加し、開口ビーカーに入れた試料を人工気候室で貯蔵して測定した。

安定性設計：
I. 漂白剤含有粉末洗剤中35℃/55% RH(低湿度)で4週間
II. 漂白剤含有粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で2週間
III. 漂白剤を含まない粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で4週間

本例は、PVPが高湿度環境で如何に安定性を増加するかを例証する。

例2．
顆粒を、例1の如く調製した。

本例は、チオ硫酸ナトリウムが低湿度および漂白剤含有環境下で、如何に安定性を増加するかを例証する。

例3．
顆粒を、例1の如く調製した。

本例は、米澱粉のような多糖類が高および低湿度環境ならびに漂白剤を含有および含有しない環境下で、如何に安定性を増加するかを例証する。

例4．
顆粒を例1に記載の如く調製し、次に流動層で5%硫酸ナトリウムにてコーティングした（28%硫酸ナトリウム、1%デキストリン、および4%の2酸化チタンで構成される水溶液を粒状化物に噴霧して）。粒状化物を、WO 97/39116の例18に示された如くさらにワックスでコーティングした。最後に顆粒を3%Sepifilmにて流動層でコーティングした（Seppic社からの15%Sepifilm LP030水溶液を粒状化物に噴霧して）。

安定性設計：
IV. 漂白剤含有粉末洗剤中35℃/55% RH(低湿度)で8週間
V. 漂白剤含有粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で2週間
VI. 漂白剤を含まない粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で12週間

本例は、追加的な薄い塩コーティングでさえ安定性を通常改善することを例証する。

例5．
顆粒を、例1の如く調製したが、硫酸ナトリウムの代わりに充填剤として微粉砕MgSO₄・7H₂Oを使用し、次に流動層で5%硫酸ナトリウムにてコーティングした（28%硫酸ナトリウム、1%デキストリン、および4%の2酸化チタンで構成される水溶液を粒状化物に噴霧して）。粒状化物をWO 97/39116の例18にある如くワックスでコーティングした。最後に粒状化物を3%Sepifilmにて流動層でコーティングした（Seppic社からの15%Sepifilm LP030水溶液を粒状化物に噴霧して）。

本例は、MgSO₄ が安定性を通常さらに増加できることを例証する。

例6．
顆粒を、例1の如く調製したが、Luviskol VA64 (BASF社製60/40ビニルピロリドン/ビニルアセテート共重合体）を合成高分子として使用した。
安定性設計：
I. 漂白剤含有粉末洗剤中35℃/55% RH(低湿度)で4週間
II. 漂白剤含有粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で2週間
III. 漂白剤を含まない粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で4週間

本例は、VA64共重合体も有効な安定化剤であることを例証する。

例7．
顆粒を、例4の如く調製したが（すなわち5%の塩コーティングで）、最後のSepfilimを使用せず、米澱粉および玉蜀黍澱粉の両方を使用した。
安定性設計：
VII. 漂白剤含有粉末洗剤中35℃/55% RH(低湿度)で12週間

本例は、米以外の他の澱粉も使用できることを例証する。

例8．
顆粒は、異なる酵素の型を用いて、例7の如く調製した(すなわちSepfilimを使用せず、5%の塩コーティングで)。
安定性設計：
VIII.漂白剤を含有しない粉末洗剤中37℃/70% RH(高湿度)で8週間

これは、安定化系が異なる酵素の型に対して有効であることを例証する。

Claims

核マトリックスおよび1層以上のコーティングを含む顆粒であって、該核マトリックスが、
a. 活性化合物、
b. 合成高分子、ここに添加される高分子の量は核マトリックスの0.1〜10重量%,
c. 抗酸化剤および還元剤の群から選ばれる1以上の成分、ここに抗酸化剤および還元剤の量は核マトリックスの0.2〜5重量%である、
を含むことを特徴とする顆粒。
前記核マトリックスが多糖類をさらに含み、そして前記多糖類の量が核マトリックスの2重量%より多い、請求項1に記載の顆粒。
前記核マトリックス中の合成高分子の量が1〜2重量%である請求項1に記載の顆粒。
前記核マトリックス中の抗酸化剤および還元剤の量が1〜3重量%である請求項1に記載の顆粒。
前記活性化合物が酵素である請求項1に記載の顆粒。
前期合成高分子がPVP、PVAおよびそれらの共重合体からなる群から選ばれるポリビニルポリマーである請求項1に記載の顆粒。
前記抗酸化剤または還元剤がチオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、チオジプロピオン酸、エリソルベート、アスコルベートまたはメチオニンの群から選ばれる請求項1に記載の顆粒。
前期合成高分子がPVPでありおよび前記抗酸化剤がチオ硫酸ナトリウムである請求項1に記載の顆粒。
前記核マトリックス中の前記多糖類の量が2〜75重量%である請求項2に記載の顆粒。
前記多糖類が澱粉である請求項2に記載の顆粒。
前記核マトリックスが予備成形された核上にコーティングされる請求項１〜10のいずれか１項に記載の顆粒。
硫酸マグネシウムまたは水和硫酸マグネシウムをさらに含む請求項１〜11のいずれか１項に記載の顆粒。
添加される硫酸マグネシウムの量が前記核マトリックスの1〜70重量%である請求項12に記載の顆粒。
前記顆粒が塩の層でコーティングされる請求項１〜13のいずれか１項に記載の顆粒。
前記塩の層が前記核マトリックスおよび塩の層の2〜30重量％を構成する請求項14に記載の顆粒。
前記塩の層が前記核マトリックスおよび塩の層の3〜10重量％を構成する請求項14に記載の顆粒。
前記塩の層が2〜100μの厚みを有する請求項14に記載の顆粒。
保護コーティングをさらに含む請求項１〜17のいずれか１項に記載の顆粒。
顆粒の調製方法であって、
a. 活性化合物、核マトリックスの重量の0.1〜10%量の合成高分子、ならびに核マトリックスの重量の0.2〜5%量の酸化剤および還元剤からなる群から選ばれる成分を含む核マトリックスを調製し、
b. 前記核マトリックスに1層以上のコーティングを施す、
工程を含むことを特徴とする方法。
前記顆粒がミキサー、流動層、流動層噴霧乾燥機、噴霧乾燥機または押し出し機にて調製される請求項19に記載の方法。
前記顆粒が乾燥される請求項19に記載の方法。
請求項1〜21のいずれか１項に記載の顆粒のいずれかを含む組成物。
組成物が洗浄用組成物、織物加工用組成物、皮革加工用組成物、パルプまたは紙加工用組成物、食品および飲料組成物、動物飼料組成物、パーソナルケア組成物および製薬組成物から選ばれることを特徴とする請求項22に記載の組成物。
前記食品組成物がパン焼き用小麦粉である請求項23に記載の食品組成物。
前記組成物がパン生地である請求項23に記載の食品組成物。
前記組成物が洗剤である請求項23に記載の洗浄用組成物。
硬い表面、織物、皮革、パルプ、紙、食品、飲料、および人または動物の身体から選ばれる物体の処理のための、請求項1〜26のいずれか１項に記載の顆粒および組成物の使用法。