JP2005510204A - ヘアレス蛋白質発現を阻害するための核酸及びその使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
ヘアレスマウス(異なる皮膚科学的な実験に頻繁に用いられる被験者)は、分娩後(postpartum)の14日齢に始まり、上部眼瞼から尾部へと進行する毛髪の損失により特徴づけられる。このプロセスは、3週齢までに完了し、この時点でマウスは完全に裸になり、そして毛髪は再び成長することはない(Panteleyev et al. 1998b)。この表現型は、プロウイルスの統合、そして結果として生じるマウス・ヘアレス遺伝子における異常スプライシングから生じる。遺伝性の変異によるマウス・ヘアレス遺伝子の発現の欠如により、毛髪の完全なる損失〔無毛症(atrichia)として知られる〕を生じる。他の変異が他のマウス・ヘアレスアレレ、およびそのヒトでの対応物において同定されており、基本的に類似する表現型を生じる(Ahmad et al. 1998a; Ahmad et al. 1998b; Panteleyev et al. 1998a)。これらの研究は、毛嚢(hair follicle)におけるヘアレス発現が毛周期(hair cycling)、特に休止相(catagen phase)への移行に必要であることを実証した。
遺伝子治療は、おそらく現代医科学の最も注目される技術である。変異遺伝子を正常な遺伝子で置換する技術は、多くの疾患に関して決定的な療法を提供できる。しかしながら、新たな遺伝子の導入により治療することができない状態(conditions)(遺伝性および後天性も同様)が存在する。多くのケースにおいて、既に存在している遺伝子の切除(ablation)が期待されるであろう。多くの優性の遺伝性疾患において、変異遺伝子のノックアウトの成功は理論的には疾患の治癒に十分である。いくつかの他のケースにおいて、正常に機能している野生型遺伝子の排除が、治療上の遺伝子ターゲッティングのために必要であろう。
(a)定義されたコンセンサス配列でmRNAを切断する触媒性ドメイン;
(b)前記触媒性ドメインの5’端(5'end)に近接(contiguous with)する結合ドメイン;および
(c)前記触媒性ドメインの3’端に近接する結合ドメイン;を含み、
この分子中で前記結合ドメインは、切断が望まれる前記ヘアレス蛋白質mRNA内の定義されたコンセンサス配列に隣接(flanking)している2つの領域と相補的である故に該領域とハイブリダイズし、且つこの分子中で各結合ドメインは少なくとも4残基の長さであり且つ両結合ドメインは少なくとも8残基の連結全体長(combined total length)を有する。
的に切断する触媒性リボ核酸分子(catalytic ribonucleic acid molecule)を提供し、該分子は:
(a)定義されたコンセンサス配列でmRNAを切断する触媒性ドメイン;
(b)前記触媒性ドメインの5’端に近接する結合ドメイン;および
(c)前記触媒性ドメインの3’端に近接する結合ドメイン;を含み、
この分子中で前記結合ドメインは、切断が望まれる前記ヘアレス蛋白質mRNA内の定義されたコンセンサス配列に隣接(flanking)している2つの領域と相補的である故に該領域とハイブリダイズし、且つこの分子中で各結合ドメインは、少なくとも4残基の長さであり且つ両結合ドメインは少なくとも8残基の連結全体長を有する。
(a)プロモータと作動可能に連結したヒト・ヘアレス蛋白質をコードしているヌクレオチド配列が安定的に統合されており、このことにより前記ヌクレオチド配列が発現され;および
(b)発現可能な内在性のヘアレス蛋白質をコードしている核酸配列を欠如している。
本明細書中に使用されるように、そして他に記載がなければ、次ぎの用語のそれぞれは以下に記載される定義を有する。
本発明に使用できるリポソームの例には下記のものが含まれる、即ち:
(1)セルフェクチン(CellFectin)、陽イオン性脂質 N, NI, NII, NIII-テトラメチル -N, NI, NII, NIII−テトラパルミチル−スペルミンおよびジオレオイル・ホスファチジルエタノールアミン(DOPE)(GIBCO BRL)の1: 1.5 (M/M)リポソーム製剤;
(2)サイトフェクチンGSV(Cytofectin GSV)、陽イオン性脂質およびDOPE(Glen Research)の2: 1 (M/M) リポソーム製剤;
(3)DOTAP (N- [1- (2, 3-ジオレオイルオキシ)-N, N, N-トリメチル−アンモニウムメチルサルフェート)(Boehringer Manheim);並びに
(4)リポフェクタミン(Lipofectamine)、ポリ陽イオン性脂質 DOSPAおよび中性脂質DOPE (GIBCO BRL)の3:1(M/M)リポソーム製剤。
これらは、結合剤〔例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、他のセルロース系材料(cellulosic materials)およびスターチ〕、希釈剤〔例えば、ラクトースおよび他の糖類、スターチ、リン酸二カルシウム(dicalcium phosphate)およびセルロース系材料〕、崩壊剤(例えば、スターチポリマーおよびセルロース系材料)および潤滑剤(例えば、ステアレートおよびタルク)などの賦形剤を含有できる。
「A」はアデニン(Adenine)を意味している;「bp」は塩基対を意味している;「C」はシトシン(Cytosine)を意味している;「DNA」はデオキシリボ核酸を意味している;「G」はグアニン(Guanine)を意味している;「mRNA」はメッセンジャーリボ核酸を意味している;「RNA」はリボ核酸を意味している;「RT-PCR」は逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応を意味している;「RY」はプリン:ピリミジン(プリン:ピリミジン)を意味している;「T」はチミン(Thymine)を意味している;および「U」はウラシル(Uracil)を意味している。
(a)定義されたコンセンサス配列でmRNAを切断する触媒性ドメイン;
(b)前記触媒性ドメインの5’端に近接する結合ドメイン;および
(c)前記触媒性ドメインの3’端に近接する結合ドメイン;を含み、
この分子中で前記結合ドメインは切断が望まれる前記ヘアレス蛋白質mRNA内の定義されたコンセンサス配列に隣接している2つの領域と相補的である故に該領域とハイブリダイズし、且つこの分子中で各結合ドメインは少なくとも4残基の長さであり且つ両結合ドメインは少なくとも8残基の連結全体長を有する。好適な態様において、各々の結合ドメインは7残基の長さであり、且つ両方の結合ドメインは14残基の連結全体長を有する。
(a) cccatggggctagctacaacgagcagtcc (配列番号2);
(b) cggcccaggctagctacaacgaggtgcag (配列番号3);
(c) ctcaggaggctagctacaacgagcccctc (配列番号4);
(d) gggagcaggctagctacaacgagtccttg (配列番号5);
(e) ctccccaggctagctacaacgatctgggg (配列番号6);
(f) cagccagggctagctacaacgatgacctt (配列番号7);
(g) cagcggaggctagctacaacgagggtaag (配列番号8);
(h) cgcagaaggctagctacaacgagccagcg (配列番号9);
(i) tgcggggggctagctacaacgacaggggc (配列番号10);
(j) aggggtgggctagctacaacgaggggtca (配列番号11);
(k) cccggagggctagctacaacgaataccca (配列番号12);
(1) gcctaagggctagctacaacgatgaaggc (配列番号13);
(m) gcaaggaggctagctacaacgatctgctg (配列番号14);
(n) gttcccaggctagctacaacgacgcctgg (配列番号15);および
(o) cagctggggctagctacaacgaacccaag (配列番号16)、
からなる群から選択される配列を有する。
(a)定義されたコンセンサス配列でmRNAを切断する触媒性ドメイン;
(b)前記触媒性ドメインの5’端に近接する結合ドメイン;および
(c)前記触媒性ドメインの3’端に近接する結合ドメイン;を含み、
この分子中で前記結合ドメインは切断が望まれる前記ヘアレス蛋白質mRNA内の定義されたコンセンサス配列に隣接している2つの領域と相補的である故に該領域とハイブリダイズし、且つこの分子中で各結合ドメインは少なくとも4残基の長さであり且つ両結合ドメインは少なくとも8残基の連結全体長を有する。
(a) cggccggcgggcgagctgatgagtccgtgaggacgaaacacgcgttctcc cgctct (配列番号20);
(b) gagtctggggtgctcagctgatgagtccgtgaggacgaaacacgcccctc caaaaagg (配列番号21);
(c) ttgctgcccagccagttctgatgagtccgtgaggacgaaacaccttcctc tccccatt (配列番号22);
(d) gctctgggggcaggccactgatgagtccgtgaggacgaaacacactaggt agggtggc (配列番号23);
(e) atgaacaaggcctggggctgatgagtccgtgaggacgaaacacaagcggg ccaggagg (配列番号24);および
(f) tcgcctggcccagcccactgatgagtccgtgaggacgaaacacgttgcca agagtatg (配列番号25)、
からなる群から選択される配列を有している。
(a)プロモータと作動可能に連結したヒト・ヘアレス蛋白質をコードしているヌクレオチド配列が安定的に統合されており、このことにより前記ヌクレオチド配列が発現され;および
(b)発現可能な内在性のヘアレス蛋白質をコードしている核酸配列を欠如している。
[緒 言]
触媒性核酸技術は、配列特異的な様式でmRNAを標的とするために使用され、従って細胞または組織の発現パターンを変化させるため広く使用される。mRNAターゲッティングのゴールは通例は遺伝性疾患に関する遺伝子治療を念頭においた変異体mRNAの切断であるが、ある種の例では野生型遺伝子のターゲッティングが治療上使用できる。
《デオキシ−リボザイム設計およびインビトロ試験》
マウス・ヘアレスmRNAをターゲットするために、一連のデオキシ−リボザイムを、前記mRNA配列におけるコンセンサス切断サイト5'-RY-3'に基づいて設計した(GenBank Accession# : AF039196) (Ahmad et al. 1998a)。RNAフォールディングソフトウェアRNADRaw 2.1による前記mRNAのオープンループ上に局在する潜在的な切断サイトのみが標的とされた(Matzura and Wennborg 1996)。デオキシ−リボザイム設計には以前に記載された構造(Santoro and Joyce 1997; Santoro and Joyce 1998)が利用され、この構造はマウス・ヘアレスmRNA配列に基づいて2つの配列特異的アームが触媒性コアに付与されている。前記デオキシ−リボザイムは、カスタム合成された(Life Technologies)。市販のマウス脳ポリA-RNA(Ambion)を、インビトロ切断反応における鋳型として使用して前記デオキシ−リボザイムの効率を試験した。800ng RNA鋳型を20mM Mg2+およびRNAse Out RNAse 阻害剤(Life Technologies)の存在下pH 7.5で、2μgデオキシ−リボザイムと1時間インキュベートした。インキュベーション後、反応のアリクウォットをRT-PCRの鋳型として使用して標的とされた切断サイトを含んでいる領域を増幅した。RT-PCR産物をエチジウムブロマイド含有2%アガロース・ゲル上でUVライト下で視覚化し、そして前記産物の染色強度を上記に記載のように決定した(図3)。標的のマウス・ヘアレスmRNAを最大効率で切断することが可能なこれらのデオキシ−リボザイムを、インビボ実験に使用した(図3、レーン1、3)。
C57B1/6Jの新生児マウスを、デオキシ−リボザイム製剤で一日に2回治療した(配送後の最初の日に開始した)。マウスの毛髪が成長を開始した際に、毛幹(hair shafts )を電気クリッパー(electric clipper)を用いて規則的に短くして、皮膚表面を接触可能にし、そして治療製剤の浸透を増強した。各治療に対して、2μg デオキシ−リボザイム(85%EtOHおよび15%エチレン・グリコールのビヒクルに溶解させた)を背(back)の1平方センチメータの領域に適用した。適用している間およびその後15分間、マウスを一時的に拘束して製剤が除去されるのを防止した。コントロール動物を、同じ長さであるがランダムな配列のオリゴヌクレオチドを含有しているビヒクルで治療した。マウスを評価のために殺傷するまで、治療を継続した。
マウスを治療の28日、35日または8週後に人道的な手段で安楽死させた。治療領域全体(皮膚の同等サイズの隣接する非治療領域と共に)を、摘出し、ホルマリン溶液中で固定し、包埋し、そして標準手順を用いた病理検査のために処理した。
毛嚢で発現する遺伝子の選択的な切除のための、局所的に適用されるデオキシ−リボザイムの使用の可能性を評価するために、モデル系を使用してヘアレスマウス表現型を再現した。二次構造に基いたターゲット-サイト選択の後に、新規のインビトロ切断アッセイ(Cserhalmi-Friedman等、原稿準備中)を用いてオリゴヌクレオチドのターゲッティングに関して選択を狭めた。全長マウス・ヘアレスmRNAをインビトロで最も効率的に切ることが証明された3つのデオキシリボザイムが、インビボ実験のために使用された。
アンチセンス・オリゴデオキシヌクレオチドを、ヘアレスmRNA配列(配列番号1)に基づき、ヘアレス発現の阻害を目的に合成した。Cos-1細胞を、pEGFP全長ヘアレス構築物でトランスフェクトし、そして細胞をトランスフェクションの16時間後に収穫した。トータルの蛋白質ライセートを、10% SDS PAGEゲルで分析し、そしてニトロセルロースに転写した。ヘアレス蛋白質を、C-末端ペプチドに対して作成された抗ヘアレスポリクローナル抗体を用いて検出した。ネガティブコントロールにおいて、全長ヘアレス構築物でトランスフェクトされなかった細胞は、如何なるヘアレス発現も示さなかった。ヘアレス発現は、アンチセンス・オリゴデオキシヌクレオチドが添加されなかったポジティブコントロール実験において明瞭に観察された。抗ヘアレス・アンチセンス・オリゴヌクレオチド〔即ち、ODN1: 5' GCTGGGCATACTCTCCAT 3' (配列番号26)およびODN2: 5' CATCACTCTCCTGCCCTC 3' (配列番号27)〕が培地に40μMの濃度でトランスフェクション前に添加された実験は、ヘアレス発現の欠如を明瞭に示し、この結果はヘアレス遺伝子産物のアンチセンス・オリゴデオキシヌクレオチド阻害を実証している(図4を参照のこと)。
Claims (77)
- ヘアレス蛋白質mRNAを特異的に切断する触媒性デオキシリボ核酸分子であって:
(a)定義されたコンセンサス配列でmRNAを切断する触媒性ドメイン;
(b)前記触媒性ドメインの5’端に近接する結合ドメイン;および
(c)前記触媒性ドメインの3’端に近接する結合ドメイン;を含み、
前記結合ドメインが、切断が望まれる前記ヘアレス蛋白質mRNA内の定義されたコンセンサス配列に隣接している2つの領域と相補的である故に該領域とハイブリダイズし、且つ各結合ドメインが、少なくとも4残基の長さであり且つ両結合ドメインが少なくとも8残基の連結全体長を有する、
触媒性デオキシリボ核酸分子。 - 請求項1に記載の触媒性デオキシリボ核酸分子であって、前記触媒性ドメインが、配列 ggctagctacaacga(配列番号18)を有し且つmRNAをコンセンサス配列プリン:ピリミジンで切断する触媒性デオキシリボ核酸分子。
- 請求項2に記載の触媒性デオキシリボ核酸分子であって、前記分子が:
(a) cccatggggctagctacaacgagcagtcc (配列番号2);
(b) cggcccaggctagctacaacgaggtgcag (配列番号3);
(c) ctcaggaggctagctacaacgagcccctc (配列番号4);
(d) gggagcaggctagctacaacgagtccttg (配列番号5);
(e) ctccccaggctagctacaacgatctgggg (配列番号6);
(f) cagccagggctagctacaacgatgacctt (配列番号7);
(g) cagcggaggctagctacaacgagggtaag (配列番号8);
(h) cgcagaaggctagctacaacgagccagcg (配列番号9);
(i) tgcggggggctagctacaacgacaggggc (配列番号10);
(j) aggggtgggctagctacaacgaggggtca (配列番号11);
(k) cccggagggctagctacaacgaataccca (配列番号12);
(1) gcctaagggctagctacaacgatgaaggc (配列番号13);
(m) gcaaggaggctagctacaacgatctgctg (配列番号14);
(n) gttcccaggctagctacaacgacgcctgg (配列番号15);および
(o) cagctggggctagctacaacgaacccaag (配列番号16)、
からなる群から選択される配列を有する、
触媒性デオキシリボ核酸分子。 - ヘアレス蛋白質mRNAを特異的に切断する触媒性リボ核酸分子であって:
(a)定義されたコンセンサス配列でmRNAを切断する触媒性ドメイン;
(b)前記触媒性ドメインの5’端に近接する結合ドメイン;および
(c)前記触媒性ドメインの3’端に近接する結合ドメイン;を含み、
前記結合ドメインが、切断が望まれる前記ヘアレス蛋白質mRNA内の定義されたコンセンサス配列に隣接している2つの領域と相補的である故に該領域とハイブリダイズし、且つ各結合ドメインが、少なくとも4残基の長さであり且つ両結合ドメインが少なくとも8残基の連結全体長を有する、
触媒性リボ核酸分子。 - 請求項4に記載の触媒性リボ核酸分子であって、前記分子がハンマーヘッドリボザイムである触媒性リボ核酸分子。
- 請求項4に記載の触媒性リボ核酸分子であって、前記触媒性ドメインが、配列 ctgatgagtccgtgaggacgaaaca (配列番号19)を有し且つmRNAをコンセンサス配列 5'-NUH-3'で切断する触媒性リボ核酸分子。
- 請求項6に記載の触媒性リボ核酸分子であって、前記触媒性リボ核酸分子が:
(a) cggccggcgggcgagctgatgagtccgtgaggacgaaaca cgcgttctcccgctct (配列番号20);
(b) gagtctggggtgctcagctgatgagtccgtgaggacgaaa cacgcccctccaaaaagg (配列番号21);
(c) ttgctgcccagccagttctgatgagtccgtgaggacgaaa caccttcctctccccatt (配列番号22);
(d) gctctgggggcaggccactgatgagtccgtgaggacgaaa cacactaggtagggtggc (配列番号23);
(e) atgaacaaggcctggggctgatgagtccgtgaggacgaaa cacaagcgggccaggagg (配列番号24);および
(f) tcgcctggcccagcccactgatgagtccgtgaggacgaaa cacgttgccaagagtatg (配列番号25);からなる群から選択される配列を有する、
触媒性リボ核酸分子。 - 請求項4に記載の触媒性リボ核酸分子であって、前記分子がヘアピンリボザイムである触媒性リボ核酸分子。
- 請求項1または4に記載の触媒性核酸分子であって、前記ヘアレス蛋白質mRNA内の切断サイトが、前記mRNAの5’末端に続く最初の3000残基内に局在する触媒性核酸分子。
- 請求項9に記載の触媒性核酸分子であって、前記ヘアレス蛋白質mRNA内の切断サイトが、前記mRNAの5’末端に続く最初の1500残基内に局在する触媒性核酸分子。
- 請求項1または4に記載の触媒性核酸分子であって、前記ヘアレス蛋白質mRNAが、ヒト、サル、ラットおよびマウスからなる群から選択される被験者に由来する触媒性核酸分子。
- 請求項1または4に記載の触媒性核酸分子であって、前記ヘアレス蛋白質mRNAが、図1A〜1C(配列番号1)に示される配列を有する触媒性核酸分子。
- 請求項1または4に記載の触媒性核酸分子および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
- 請求項13に記載の薬学的組成物であって、前記担体がアルコールである薬学的組成物。
- 請求項14に記載の薬学的組成物であって、前記担体がエチレン・グリコールである薬学的組成物。
- 請求項13に記載の薬学的組成物であって、前記担体がリポソームである薬学的組成物。
- ヘアレス蛋白質mRNAを特異的に切断する方法であって、前記mRNAを請求項1または4に記載の触媒性核酸分子と、該分子が前記mRNAを切断することが可能な条件下で接触させることを含む方法。
- 細胞のヘアレス蛋白質mRNAを特異的に切断する方法であって、前記mRNAを含有している細胞を請求項1または4に記載の触媒性核酸分子と、前記細胞のヘアレス蛋白質mRNAを特異的に切断するように接触させることを含む方法。
- ヘアレス蛋白質を発現するであろう細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害する方法であって、前記細胞を請求項1または4に記載の触媒性核酸分子と、前記細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害するように接触させることを含む方法。
- 被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害する方法であって、前記被験者に前記被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害するために効果的な量の請求項1または4に記載の触媒性核酸分子を投与することを含む方法。
- 被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害する方法であって、前記被験者に前記被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害するために効果的な量の請求項13に記載の薬学的組成物を投与することを含む方法。
- 毛髪産生細胞による毛髪産生を阻害する方法であって、前記細胞を効果的な量の請求項1または4に記載の触媒性核酸と接触させることを含む方法。
- 被験者における毛髪成長を阻害する方法であって、前記被験者に効果的な量の請求項13に記載の薬学的組成物を投与することを含む方法。
- 発育相から休止相への毛嚢の移行を阻害する方法であって、前記嚢を効果的な量の請求項1または4に記載の触媒性核酸と接触させることを含む方法。
- 発育相から休止相への毛嚢の移行を阻害する方法であって、前記嚢を効果的な量の請求項13に記載の薬学的組成物と接触させることを含む方法。
- 請求項18に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項20に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項21に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項22に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項20に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項21に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項23に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項20に記載の方法であって、前記触媒性核酸分子が局所的に投与される方法。
- 請求項34に記載の方法であって、前記触媒性核酸分子が経皮的(dermally)に投与される方法。
- 請求項21に記載の方法であって、前記薬学的組成物が局所的に投与される方法。
- 請求項36に記載の方法であって、前記薬学的組成物が経皮的(dermally)に投与される方法。
- 請求項23に記載の方法であって、前記薬学的組成物が局所的に投与される方法。
- 請求項38に記載の方法であって、前記薬学的組成物が経皮的(dermally)に投与される方法。
- 請求項1または4に記載の触媒性核酸分子をコードしている配列を含むベクター。
- 請求項40に記載のベクターをその中に有している細胞を含む宿主ベクター系。
- 請求項1または4に記載の触媒性核酸分子を産生する方法であって、前記触媒性核酸分子をコードしている配列を含んでいるベクターをその中に有している細胞を、該細胞による前記触媒性核酸分子の発現を可能とする条件下で培養することを含む方法。
- ヘアレス蛋白質mRNAと、細胞内でその翻訳を阻害するように特異的にハイブリダイズする核酸分子。
- 請求項43に記載の核酸であって、前記核酸がリボ核酸である核酸。
- 請求項43に記載の核酸であって、前記核酸がデオキシリボ核酸である核酸。
- 請求項43に記載の核酸分子であって、該分子が前記ヘアレス蛋白質mRNA内の該mRNAの5’末端に続く最初の3000残基内に局在するサイトとハイブリダイズする核酸分子。
- 請求項46に記載の核酸分子であって、該分子が前記ヘアレス蛋白質mRNA内の該mRNAの5’末端に続く最初の1500残基内に局在するサイトとハイブリダイズする核酸分子。
- 請求項43に記載のリボ核酸分子であって、前記ヘアレス蛋白質mRNAが、ヒト、サル、ラットおよびマウスからなる群から選択される被験者に由来するリボ核酸分子。
- 請求項43に記載のリボ核酸分子であって、前記ヘアレス蛋白質mRNAが、図1A〜1C(配列番号1)に示される配列を有するリボ核酸分子。
- 請求項43に記載の核酸分子をコードしている配列を含むベクター。
- 請求項50に記載のベクターをその中に有している細胞を含む宿主ベクター系。
- (a)請求項43に記載の核酸分子または請求項50に記載のベクターおよび(b)薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
- 請求項52に記載の薬学的組成物であって、前記担体がアルコールである薬学的組成物。
- 請求項53に記載の薬学的組成物であって、前記担体がエチレン・グリコールである薬学的組成物。
- 請求項52に記載の薬学的組成物であって、前記担体がリポソームである薬学的組成物。
- ヘアレス蛋白質を発現するであろう細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害する方法であって、前記細胞を請求項43に記載の核酸分子と、前記細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害するように接触させることを含む方法。
- 被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害する方法であって、前記被験者に前記被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害するために効果的な量の請求項43に記載の核酸分子を投与することを含む方法。
- 被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害する方法であって、前記被験者に前記被験者細胞のヘアレス蛋白質の発現を特異的に阻害するために効果的な量の請求項52に記載の薬学的組成物を投与することを含む方法。
- 毛髪産生細胞による毛髪産生を阻害する方法であって、前記細胞を効果的な量の請求項43に記載の核酸分子と接触させることを含む方法。
- 被験者における毛髪成長を阻害する方法であって、前記被験者に効果的な量の請求項52に記載の薬学的組成物を投与することを含む方法。
- 発育相から休止相への毛嚢の移行を阻害する方法であって、前記嚢を効果的な量の請求項43に記載の核酸分子と接触させることを含む方法。
- 発育相から休止相への毛嚢の移行を阻害する方法であって、前記嚢を効果的な量の請求項52に記載の薬学的組成物と接触させることを含む方法。
- 請求項56に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項57に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項58に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項59に記載の方法であって、前記細胞がケラチノサイトである方法。
- 請求項57に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項58に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項60に記載の方法であって、前記被験者がヒトである方法。
- 請求項57に記載の方法であって、前記核酸分子が局所的に投与される方法。
- 請求項70に記載の方法であって、前記核酸が経皮的(dermally)に投与される方法。
- 請求項58に記載の方法であって、前記薬学的組成物が局所的に投与される方法。
- 請求項72に記載の方法であって、前記薬学的組成物が経皮的(dermally)に投与される方法。
- 請求項60に記載の方法であって、前記薬学的組成物が局所的に投与される方法。
- 請求項74に記載の方法であって、前記薬学的組成物が経皮的(dermally)に投与される方法。
- 請求項43に記載の核酸分子を産生する方法であって、前記核酸分子をコードしている配列を含んでいるベクターをその中に有している細胞を、該細胞による前記核酸分子の発現を可能とする条件下で培養することを含む方法。
- 非ヒト・トランスジェニック哺乳動物であって、該哺乳動物のゲノムは:
(a)プロモータと作動可能に連結したヒト・ヘアレス蛋白質をコードしているヌクレオチド配列が安定的に統合されており、このことにより前記ヌクレオチド配列が発現され;および
(b)発現可能な内在性のヘアレス蛋白質をコードしている核酸配列を欠如している、
非ヒト・トランスジェニック哺乳動物。
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