JP2005508891A

JP2005508891A - レグマインの不可逆性システインプロテアーゼ阻害剤

Info

Publication number: JP2005508891A
Application number: JP2003521257A
Authority: JP
Inventors: ニーストロイアンドレ; ハイザーウルリッヒ; ゲルハルツベルント; ホフマンマティアス; デームスハンス−ウルリッヒ
Original assignee: プロバイオドラッグアーゲー
Priority date: 2001-08-13
Filing date: 2002-07-23
Publication date: 2005-04-07
Also published as: US7279550B2; US20060178315A1; AU2002328946A1; WO2003016335A2; EP1417220A2; WO2003016335A3

Abstract

患者のレグマイン関連疾患の状態を調節するためのシステインプロテアーゼレグマインを阻害する一般式（Ｉ）および（ＩＩ）で表される化合物を提示する。
【化１】

Description

発明の分野
本発明は、システインプロテアーゼの阻害剤、特にシステインプロテアーゼレグマインの阻害剤に関する。本発明はさらに、レグマイン活性の１種以上の阻害剤を含有する医薬組成物に関する。本発明の１種以上のレグマイン阻害剤を含む医薬組成物は、免疫または自己免疫疾患のような患者または対象におけるレグマイン仲介疾患の治療に有用である。

発明の背景
レグマインは１９９３年に植物の中で発見され、この酵素はマメ類の中、および他の植物の種子中に存在する。その後、レグマインは様々な種（例えばマウス）からおよびブタの腎臓からクローンされ、単離され、そして特性決定された。ヒトのレグマインはネズミの細胞系での過剰発現後に特性決定された。

触媒２回対称軸はモチーフＨｉｓ−Ｇｌｙ―スペーサー―Ａｌａ−Ｃｙｓに見られ、ｓｉ配向変異誘発によって確認された。同じモチーフはカスパセス、クロストリパイン、ギンギパインおよびセパラーゼに存在するため、これらのプロテアーゼはＣｌａｎＣＤとして分類された。レグマインはヨードアセトアミド、マレイミドおよびオボシスタチンによって阻害されるが、Ｅ６４による影響はない。

哺乳動物のレグマインはアスパラギン開裂後に対して非常に特異的なリソソーム酵素である。開裂はＰ１−アスパラギン残基のグリコシル化によって阻害されることが示された。さらに、それはクラスＩＩＭＨＣ発現に対する抗原のプロセッシングにかかわる。

レグマインの様々なイソ形は植物（インゲンマメ、Phaseolus vulgaris）源および哺乳動物（ブタの腎臓、Sus scropha）から精製された。

自己免疫反応
時々、免疫システムが正しく働かなくなり、体の組織を異物と誤解し、それらを攻撃することがあり、その結果、自己免疫反応が生じる。自己免疫反応はいくつかの方法で誘発される：

通常は厳重に特定領域に収容されている（従って、免疫システムから隠されている）体内物質が全体的な循環に放たれる。例えば、眼球内の液体は眼球室内に通常収容されている。眼の強打でこの液体が血流に放たれると、免疫システムがこれに対して反応する。通常の身体物質は変化する。例えば、ウイルス、薬剤、日光、または放射線はたんぱく質の構造を変えて、それを異物に見えるようにしてしまう。免疫システムは、外観が自然の身体物質に似た異物に反応し、そして異物と同様に身体物質を思わず標的にする。あるものは抗体産生を調節する細胞内で正しく働かない。例えば、がんのＢリンパ球は赤血球を攻撃する異常抗体を産生しうる。自己免疫反応の結果は様々である。発熱は一般的である。血管、軟骨および皮膚のような各種組織が破壊されるかもしれない。腎臓、肺、心臓および脳を含めた実質的にどのような器官も免疫システムによって攻撃されうる。生じる炎症および組織損傷は腎不全、呼吸にかかわる問題、異常な心機能、痛み、変形、精神錯乱および死を招くことがある。

多くの疾患、例えば狼瘡（全身性エリテマトーデス）、重症筋無力症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、天疱瘡、慢性関節リウマチ、強皮症、シェーグレン症候群、悪性貧血、多発性硬化症およびＩ型糖尿病を含む多くの疾患は、ほぼ確実に自己免疫が原因となっている。
免疫疾患には、急性および遅延過敏症、移植拒絶反応並びに対宿主性移植片病のようなＴ細胞および／またはマクロファージがかかわる病気が含まれるが、それらに限定されるものではない。

参考文献リスト
Carpino, L.A.; Giza, C. A.; Carpino, B. A. O-Acylhydroxylamines. Ｉ．Synthesis of Ｏ−benzoylhydroxylamine. J. Am. Chem. Soc. 1959, 81, 955-957.
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Niedrich, H. Chem. Ber. 1969, 102, 1557-1569.
Shahak, I.; Almog. J. Synthesis 1969, 170-172.
Yasuma, T.; Oi, S.; Choh, N.; Nomura, T.; Furuyama, N.; Nishimura, A.; Fujisawa, Y.; Sohda, T. J. Med. Chem. 1998, 41, 4301-4308.

発明の概要
本発明は、以下の一般式ＩもしくはＩＩを有するシステインプロテアーゼの阻害剤に関する。

式中、
Ａｓは、アミノ酸またはその類似体を表し、Ｙは、好ましくは２〜１０個のアミノ酸を有する、ウレタンおよびペプチドを含むアシル残基、またはアルキル残基を表す。本発明で用いうるアミノ酸の例は、Ｌ−およびＤ−アミノ酸、Ｎ−メチル−アミノ酸；ＩｌｅおよびＴｈｒのアロおよびトレオ形、例えばα−、β−またはω−アミノ酸であり、α−アミノ酸が好ましい。

アミノ酸の例を次に示す：
アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アルギニン（Ａｒｇ）、リシン（Ｌｙｓ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、セリン（Ｓｅｒ）およびシステイン（Ｃｙｓ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、チロシン（Ｔｙｒ）、アラニン（Ａｌａ）、プロリン（Ｐｒｏ）、バリン（Ｖａｌ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、ヒドロキシプロリン（Ｈｙｐ）、β−アラニン（β−Ａｌａ）、２−アミノオクタン酸（Ａｏａ）、アゼチジン−（２）−カルボン酸（Ａｃｅ）、ピペコリン酸（Ｐｉｐ）、３−アミノプロピオン酸、４−アミノ酪酸等、α−アミノイソ酪酸（Ａｉｂ）、サルコシン（Ｓａｒ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、ホモアルギニン（Ｈａｒ）、ｔ−ブチルアラニン（ｔ−ブチル−Ａｌａ）、ｔ−ブチルグリシン、（ｔ−ブチル−Ｇｌｙ）、Ｎ−メチルイソロイシン（Ｎ−ＭｅＩｌｅ）、フェニルグリシン（Ｐｈｇ）、シクロヘキシルアラニン（Ｃｈａ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、システイン酸（Ｃｙａ）およびメチオニンスルホキシド（ＭＳＯ）、アセチル−Ｌｙｓ、修飾アミノ酸、例えばホスホリル−セリン（Ｓｅｒ（Ｐ））、ベンジル−セリン（Ｓｅｒ（Ｂｚｌ））およびホスホリル−チロシン（Ｔｙｒ（Ｐ））、２−アミノ酪酸（Ａｂｕ）、アミノエチルシステイン（ＡＥＣｙｓ）、カルボキシメチルシステイン（Ｃｍｃ）、デヒドロアラニン（Ｄｈａ）、デヒドロアミノ−２−酪酸（Ｄｈｂ）、カルボキシグルタミン酸（Ｇｌａ）、ホモセリン（Ｈｓｅ）、ヒドロキシリシン（Ｈｙｌ）、シス−ヒドロキシプロリン（ｃｉｓＨｙｐ）、トランス−ヒドロキシプロリン（ｔｒａｎｓＨｙｐ）、イソバリン（Ｉｖａ）、ピログルタミン酸（Ｐｙｒ）、ノルバリン（Ｎｖａ）、２−アミノ安息香酸（２−Ａｂｚ）、３−アミノ安息香酸（３−Ａｂｚ）、４−アミノ安息香酸（４−Ａｂｚ）、４−（アミノメチル）安息香酸（Ａｍｂ）、４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸（４−Ａｍｃ）、ペニシラミン（Ｐｅｎ）、２−アミノ−４−シアノ酪酸（Ｃｂａ）、シクロアルカン−カルボン酸。

ω−アミノ酸の例としては、５−Ａｒａ（アミノラレリック酸（aminoraleric acid））、６−Ａｈｘ（アミノへキサン酸）、８−Ａｏｃ（アミノオクタン酸）、９−Ａｎｃ（アミノバノイック酸(aminovanoic acid)）、１０−Ａｄｃ（アミノデカン酸）、１１−Ａｕｎ（アミノウンデカン酸）、１２−Ａｄｏ（アミノドデカン酸）がある。

別のアミノ酸は次の通りである：インダニルグリシン（Ｉｇｌ）、インドリン−２−カルボン酸（Ｉｄｃ）、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸（Ｏｉｃ）、ジアミノプロピオン酸（Ｄｐｒ）、ジアミノ酪酸（Ｄｂｕ）、ナフチルアラニン（１−Ｎａｌ）、（２−Ｎａｌ）、４−アミノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−ＮＨ₂））、４−ベンゾイルフェニルアラニン（Ｂｐａ）、ジフェニルアラニン（Ｄｉｐ）、４−ブロモフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｂｒ））、２−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（２−Ｃｌ））、３−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｃｌ））、４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｃｌ））、３，４−クロロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３，４−Ｃｌ₂））、３−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｆ））、４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｆ））、３，４−フルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３，４−Ｆ₂））、ペンタフルオロフェニルアラニン（Ｐｈｅ（Ｆ₅））、４−グアニジノフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−グアニジノ））、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅ）、３−ヨードフェニルアラニン（Ｐｈｅ（３−Ｊ））、４−ヨードフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｊ））、４−メチルフェニルアラニン（Ｐｈｅ（４−Ｍｅ））、４−ニトロフェニルアラニン（Ｐｈｅ−４−ＮＯ₂））、ビフェニルアラニン（Ｂｉｐ）、４−ホスホノメチルフェニルアラニン（Ｐｍｐ）、シクロヘキシグリシン（Ｇｈｇ）、３−ピリジニルアラニン（３−Ｐａｌ）、４−ピリジニルアラニン（４−Ｐａｌ）、３，４−デヒドロプロリン（Ａ−Ｐｒｏ）、４−ケトプロリン（Ｐｒｏ（４−ｋｅｔｏ））、チオプロリン（Ｔｈｚ）、イソニペコチン酸（Ｉｎｐ）、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸（Ｔｉｃ）、プロパルギルグリシン（Ｐｒａ）、６−ヒドロキシノルロイシン（ＮＵ（６−ＯＨ））、ホモチロシン（ｈＴｙｒ）、３−ヨードチロシン（Ｔｙｒ（３−Ｊ））、３，５−ジヨードチロシン（Ｔｙｒ（３，５−Ｊ₂））、ｄ−メチル−チロシン（Ｔｙｒ（Ｍｅ））、３−ＮＯ₂−チロシン（Ｔｙｒ（３−ＮＯ₂））、ホスホチロシン（Ｔｙｒ（ＰＯ₃Ｈ₂））、アルキルグリシン、１−アミノインダン−１−カルボン酸、２−アミノインダン−２−カルボン酸（Ａｉｃ）、４−アミノ−メチルピロール−２−カルボン酸（Ｐｙ）、４−アミノ−ピロリジン−２−カルボン酸（Ａｂｐｃ）、２−アミノテトラリン−２−カルボン酸（Ａｔｃ）、ジアミノ酢酸（Ｇｌｙ（ＮＨ₂））、ジアミノ酪酸（Ｄａｂ）、１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイノール−カルボン酸（Ｄｉｓｃ）、ホモシクロヘキシルアラニン（ｈＣｈａ）、ホモフェニルアラニン（ｈＰｈｅまたはＨｏｆ）、トランス−３−フェニル−アゼチジン−２−カルボン酸、４−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、５−フェニル−ピロリジン−２−カルボン酸、３−ピリジルアラニン（３−Ｐｙａ）、４−ピリジルアラニン（４−Ｐｙａ）、スチリルアラニン、テトラヒドロイソキノリン−１−カルボン酸（Ｔｉｑ）、１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸（Ｔｐｉ）、β−（２−チエニル）−アラニン（Ｔｈａ）。

Ａｓは、この一般的な記号で記号化されたアミノ酸以外の他のアミノ酸も表すことができる。

たんぱく質原性アミノ酸は天然たんぱく質誘導α−アミノ酸と定義される。非たんぱく質原性アミノ酸は全ての他のアミノ酸と定義され、これらは一般的な天然たんぱく質の構成単位ではない。

Ｚは、
−ＣＯ−ＣＨ₂−Ｗ、ここで、Ｗは、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、アリール、ヘテロアリール、複素環式、Ｎ₂、ハロゲン、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｏ−炭素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−複素環式、Ｏ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アルケニル、Ｓ−アルキニル、Ｓ−炭素環式、Ｓ−アリール、Ｓ−ヘテロアリール、Ｓ−複素環式、Ｓ−アシル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルケニル、Ｃ（Ｏ）−アルキニル、Ｃ（Ｏ）−炭素環式、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、またはＣ（Ｏ）−複素環式残基でありうる、
あるいは−Ｎ⁺（ＲＲ´Ｒ"）、ここで、Ｒ、Ｒ´およびＲ"は、互いに独立して、置換されていてもよいアシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、アリール、ヘテロアリール、または複素環式残基である、
あるいは−ＣＯ−ＮＨＯ−Ｑ、ここで、Ｑは、置換されていてもよいアシル、アルケニル、アルキニル、アロイル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アリール、またはアルキル残基である、
あるいは−ＣＲ¹＝ＣＲ²−ＥＷＧ、ここで、Ｒ¹およびＲ²は、互いに独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、またはアリール残基であり、互いに対してシスまたはトランス位置にあり；そしてここで、ＥＷＧは、ＯＲ⁴（Ｒ⁴は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式またはアリール残基でありうる）、またはＣ（Ｏ）Ｏ−Ｒ⁵（Ｒ⁵は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシル、アリール、またはそれらの置換された残基でありうる）、またはＣＨ₂Ｏ−Ｒ⁶（Ｒ⁶は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシル、もしくはアリール残基、またはＣＮでありうる）、またはＳＯ₂Ｒ⁷（Ｒ⁷は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシルまたはアリール残基でありうる）、またはＰＯ₂ＯＲ⁸（Ｒ⁸は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシルまたはアリール残基でありうる）を含む電子吸引基を表す。

明細書および請求の範囲を通して、「アシル」はＣ_1-20アシル残基、好ましくはＣ_1-8アシル残基、特に好ましくはＣ_1-4アシル残基を示し、「炭素環式」またはシクロアルキルはＣ_3-12炭素環式残基、好ましくはＣ₄、Ｃ₅またはＣ₆炭素環式残基を示す。「ヘテロアリール」は、１〜４個、好ましくは１、２または３個の環原子がＮ、ＳまたはＯのような複素原子に入れ代わっているアリール残基と定義される。「複素環式」は、１、２または３個の環原子がＮ、ＳまたはＯのような複素原子に入れ代わっているシクロアルキル残基と定義される。「アルキル」はＣ_1-50アルキル基、好ましくはＣ_6-30アルキル基、特にＣ_8-12アルキル基を示し；アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたはブチル基でもよい。「アリール」は芳香族残基、好ましくは置換されたまたは置換されていなくてもよいフェニル、ベンジル、ナフチル、ビフェニルまたはアントラセン基と定義され、好ましくは少なくとも８個のＣ環原子を有し；「アルケニル」はＣ_2-10アルケニル基、好ましくはＣ_2-6アルケニル基を示し、これは望ましい位置に二重結合（１つまたは複数）を有し、置換されていてもまたは置換されていなくてもよく；「アルキニル」はＣ_2-10アルキニル基、好ましくはＣ_2-6アルキニル基を示し、これは望ましい位置に三重結合（１つまたは複数）を有し、置換されていてもまたは置換されていなくてもよく；「アルコキシ」はＣ_1-50アルキル−酸素基を示し；「アルケニルオキシ」はＣ_2-10アルケニル−酸素基を示し；「アルキニルオキシ」はＣ_2-10アルキニル−酸素基を示し；「炭素環式オキシ」はＣ_3-12炭素環式−酸素基を示し；「ヘテロアリールオキシ」はアリール−酸素基を示し、ここで、１〜４個、好ましくは１、２または３個の環原子はＮ、ＳまたはＯのような複素原子に入れ代わっており；「複素環式オキシ」はシクロアルキル−酸素基を示し、ここで、１、２または３個の環原子はＮ、ＳまたはＯのような複素原子に入れ代わっており；「置換されている」は１つ以上の、好ましくは１または２個のアルキル、アルケニル、アルキニル、１価もしくは多価のアシル、アルコキシ、アルコキシアシル、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、炭素環式オキシ、ヘテロアリールオキシ、複素環式オキシ、アルコキシアルキル基、同じもしくは異なるアルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式残基を含むモノエーテルまたはポリエーテル、同じもしくは異なるアルキル、アリール、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式残基を含むモノチオエーテルまたはポリチオエーテルによる望ましい置換を示し；上記置換基は、側鎖として、１つ以上（好ましくはゼロ）のアルキル、アルケニル、アルキニル、１価もしくは多価のアシル、アルコキシアシルまたはアルコキシアルキル基（好ましくは、それら自体は置換されていない）を有していてもよい。８〜５０Ｃ原子、好ましくは１０〜２０Ｃ原子をそれぞれ有する有機アミン、アミド、アルコールまたは酸は、式（アルキル）₂Ｎ−またはアルキル−ＮＨ−、−ＣＯ−Ｎ（アルキル）₂または−ＣＯ−ＮＨ（アルキル）、−アルキル−ＯＨまたは−アルキル−ＣＯＯＨを有していてもよい。

「ウレタン」は式Ｒ'''ＮＨ−ＣＯ−ＯＲ""の化合物を示し、ここで、Ｒ'''およびＲ""は互いに独立して、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式またはアリール残基である。

ペプチド類似体それ自体は本技術分野における当業者に公知である。これらは、ペプチドに似た第２の構造および任意にさらなる構造特性を有する化合物と定義される；それらの作用形態は本来のペプチドの作用形態に非常に類似しているかまたは全く同じであり；しかしながら、それらの活性（例えば、アンタゴニストまたは阻害剤としての活性）は本来のペプチドと比較して、特にレセプターまたは酵素に対して、調節することができる。さらに、それらは本来のペプチド（アゴニスト）の効果に似せることができる。ペプチド類似体の例は骨格類似体、非ペプチド類似体、ペプトイド、ペプチド核酸、オリゴピロリノン、ビニログペプチドおよびオリゴカルバメートである。これらのペプチド類似体の定義については、Lexikon der Chemie, Spektrum Akademischer Verlag、ベルリン、ハイデルベルク、1999を参照されたい。

これら類似体構造を用いる目的は、活性を高め、選択性を高めて副作用を減じ、効果の延長のために酵素分解に対して化合物（薬剤）を保護することである。

別のペプチド類似体は、J. Gante, Angew. Chemie, 1994, 106, 1780-1802; V. Hruby et al., Biopolymers, 1997, 219-266; D. Noteberg et al., 2000, 43, 1705-1713に定義されている。

本発明の範囲には本発明の化合物のプロドラッグがさらに含まれる。一般に、そのようなプロドラッグは生体内で望ましい治療活性化合物に容易に変化される化合物の官能基誘導体である。従って、これらの場合、本発明の使用は、前記の各種疾患を、患者への投与後に生体内で上記特定化合物に変化する１種以上の特許請求化合物のプロドラッグ変形体で治療することを包含する。適したプロドラッグを選択および製造するための一般的な手順は、例えば、“Design of Prodrugs”, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985に記載されている。

本発明の化合物が少なくとも１つのキラル中心を有する場合、それらは従って光学的対掌体として存在しうる。化合物が２つ以上のキラル中心を有する場合、それらはさらにジアステレオマーとして存在しうる。そのような異性体及びそれらの混合物の全てが本発明の範囲に入ることは理解されるはずである。さらに、化合物の結晶形のいくつかは多形体として存在し得、それ故にそれらは本発明に含まれる。さらに、化合物のいくつかは水または一般的な有機溶媒と溶媒和物（水の場合は水和物）を形成し得、そのような溶媒和物も本発明の範囲に包含される。

これらの化合物はシステインプロテアーゼレグマインの阻害剤である。これらの阻害剤は医薬組成物中に用いうる。本発明の１種以上のレグマイン阻害剤を含む医薬組成物は、患者または対象におけるレグマイン仲介疾患の治療に有用である。

発明の詳細な説明
生物学的評価
化合物をレグマインの阻害剤として試験し、そしてさらに２つのシステインプロテアーゼ、すなわちパパインおよびカテプシンＢに対するそれらの交叉反応についてチェックした。式１〜３の選択された化合物についての活性を表１〜３に示す。
パパインおよびカテプシンＢの阻害は０．１ｍＭ未満の濃度では観察されなかった。スルホンおよびホスホネートのα，β−不飽和化合物はわずかな阻害を示した。

合成
阻害剤５−１３はスキーム１に記載のように製造した。トリペプチドはＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨ（Bachem社から入手）から出発し、Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＳｕ１を経た後、Ｈ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（Bachem社から入手）とカップリング反応させて製造した。本発明のトリペプチド誘導ミカエル受容体は概して次の手順に記載のように製造した。トリペプチドは、水素化リチウムアルミニウムでの相当するバインレープ（Weinreb）アミドの還元によってアルデヒドに変えた。粗製化合物は、相当するホスホランとのウィッチヒ反応（方法Ａ）またはナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドもしくは水素化ナトリウムとの相当するホスフェートエステルのホーナー−エモンス反応（方法Ｂ、Ｃ）によって望ましいミカエル受容体化合物に変えた。トリチル保護基はトリイソプロピルシランの存在下でＴＦＡによって除去して良好な収率で阻害剤を得た（方法Ｄ）。粗製化合物は調製用ＨＰＬＣにより精製して望ましい阻害剤（実施例１〜９、化合物５−１３）を得た。

阻害剤１８、２２および２４はスキーム２に記載のように製造した。化合物ｔ−ブチル２−（ヒドラジノ）酢酸は、ニードリッヒ（１９６９）の手順に従って８０％ヒドラジン水和物およびｔ−ブチルブロモアセテートから製造した。ヒドラジンはＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＳｕ１（実験の出発物質の項に記載のように製造した）とカップルさせて化合物１４を得た。ｔ−ブチルエステルのジクロロメタン中のＴＦＡでの処理で化合物１５を得、これをＨＡＴＵ、ＨＯＡｔおよびトリフェニルメチルアミンとのカップリング反応により化合物１６に変えた。塩化クロロアセチルまたは臭化ブロモアセチルでアシル化して相当するクロロアセチルおよびブロモアセチル誘導体１７および２１を得た。トリチル保護基はトリイソプロピルシランの存在下、ＴＦＡにより除去して阻害剤２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（クロロアセチル）ヒドラジノ］アセトアミド１８および２２を得た（方法Ｄ）。フッ化カリウムの存在下、安息香酸で２１を処理し、その後、トリフルオロ酢酸で処理し（方法Ｄ）、ベンゾイルオキシメチルケトン２４を得た。アスパラギン類似体は強力な阻害を生じるプロテアーゼによって認定した。クロロメチルケトン（１８）によるレグマインの不活性化に対する二次速度定数、１３９０８８Ｍ^-1ｓ^-1は、ミカエル受容体阻害剤のそれの２００倍以上であった（表３）。ブロモメチルケトン（２２）は別の強力な阻害剤であるが、ベンゾイルオキシメチルケトン（２４）は穏やかな阻害を示すだけである。パパインだけでなくカテプシンＢもこれらの阻害剤によって阻害されない。

さらに、Ｎ−ペプチジル−Ｏ−アシルヒドロキシルアミンＸａａ−ＣＯ−ＮＨＯ−ＣＯ−に基づく別の阻害剤２０の製造（スキーム３）について説明する。

実験
ＮＭＲスペクトル測定はVarian Unity 500、Varian Gemini 200およびBruker AM 400スペクトロメーターで行った。次の省略記号を用いる：ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｑ，四重線；ｂｒ，ブロード。融点はLeica Galen III融点測定装置で測定した。ＥＳＩ−ＭＳ：質量スペクトルはIonspray^TMインターフェースを備えたMDS Sciex API 365質量分析計（MDS Sciex；カナダ、オンタリオ州、ソーンヒル）で得た。装置の設定、データ取得および処理は、ウィンドウズＮＴ^TM対応のアプライド・バイオシステムズ（米国、カリフォルニア州、フォスターシティー）アナリスト^TMソフトウエアによって管理した。５０〜１００スキャンを陽イオン化Ｑ１スキャンモードにより行ってピークを集めた。試料溶液は０．５％ギ酸中の５０％メタノールで希釈して約１０μｇ／ｍｌの濃度にした。各試料溶液は注入ポンプ（ハバード・アパラタス２２；ハバード・インスツルメンツ；米国、マサチューセッツ州、ホリストン）により微量注射器（１ｍｌ）で直接導入し、２０μｌ／分の速度でシリカ毛管を溶かした。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）はマカリー・ナゲル・ポリグラム^RＳＩＬＧ／ＵＶ₂₄₅で行った。視覚化は２５４ｎｍの紫外線により、その後、過マンガン酸カリウムまたはニンヒドリンでの染色により行った。溶媒は使用前に蒸留した。沸騰範囲が３５〜６５℃の石油エーテルを用いた。ＴＨＦは使用直前にナトリウムジフェニルケチルから蒸留した。商業的に入手しうる試薬はいずれもそれ以上精製することなく使用した。空気に敏感な反応はアルゴン雰囲気下で行った。仕上げ処理で用いるｐＨ７バッファー溶液は、リン酸二水素カリウム（８５．０ｇ）および水酸化ナトリウム（１４．５ｇ）を水（１Ｌ）に溶解することによって製造した。阻害剤８の製造に用いた化合物ジメチルメチルスルフォノメタンホスホネートは、Shahak & Almog, 1969の手順に従って製造した。精製には、調製ＨＰＬＣ［アセトニトリル−水、勾配：５〜９５％、流量：６ｍｌ・分^-1、カラム：ヌクレオシル７μ Ｃ１８１００Ａ、２５０×２１．２ｍｍ（フェノメネックス）、ポンプ：Ｌ−６２５０メルク−日立］を使用した。
一般的な方法

方法Ａ（ウィッチヒ反応）：Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｈ（０．４ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の攪拌溶液に、１．１当量の相当するホスホラン（アルドリッチ社から入手）を加えた。溶液は４日間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して望ましい化合物を得た。

方法Ｂ（ホーナー−エモンス反応、塩基：ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド）：無水トルオール（５ｍｌ）中のナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド（１．８４ｍｌ、０．７５６ｍｍｏｌ、ヘキサメチルジシラザン（４２７μｌ、２．０５ｍｍｏｌ）およびナトリウムアミド（８０ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）から製造）を、相当するホスフェートエステル（１．２当量、０．７５６ｍｍｏｌ、アルドリッチ社から入手）の乾燥ＴＨＦ（４ｍｌ）中の溶液に０℃で加え、この温度で３０分間攪拌した。Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｈ（０．４ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中の溶液を加えた。室温に温めながら混合物を１．５時間攪拌した。氷浴で冷却した後、０．５ＮＨＣｌ（５ｍｌ）を加え、有機物質を酢酸エチルで５回抽出した。一緒にした有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧濃縮した。化合物はフラッシュクロマトグラフィーで精製した。

方法Ｃ（ホーナー−エモンス反応、塩基：水素化ナトリウム）：水素化ナトリウム（１８．０ｍｇ、０．７５６ｍｍｏｌ、９５％、アルドリッチ社から入手）のＴＨＦ（４ｍｌ）中の攪拌懸濁液に、相当するホスフェートエステル（１．２当量、０．７５６ｍｍｏｌ、アルドリッチ社から入手）を０℃で加えた。混合物をこの温度で３０分間攪拌し、Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｈ（０．４０ｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１ｍｌ）中の溶液を加えた。混合物を室温で２．５時間攪拌した後、氷浴で０℃に冷却し、０．５ＮＨＣｌ（５ｍｌ）でクエンチした。有機物質を酢酸エチルで５回抽出した。一緒にした有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧濃縮した。化合物はフラッシュクロマトグラフィーで精製した。

方法Ｄ（トリチル保護の脱保護）：トリチル保護基は次のように除去した。トリイソプロピルシラン（２７７μｌ、１．３５ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（７．５ｍｌ）を、保護化合物（０．２７ｍｍｏｌ）のＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）中の攪拌溶液に加えた。この溶液を室温で３０分間攪拌し、その後、トルオールで希釈した。溶媒を減圧下で除去し、得られた残留物をＥｔ₂Ｏ中で粉砕し、得られた白色固体を調製ＨＰＬＣで精製した。

方法Ｅ（鹸化）：単離した粗生成物（０．４１ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（３ｍｌ）に溶解し、１ＭＮａＯＨ（２．３当量、０．９４３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で３時間攪拌した後、混合物のｐＨを１ＮＨＣｌで２〜３に調整した。有機物質を酢酸エチルで５回抽出した。一緒にした有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧濃縮した。

方法Ｆ（エステル化）：単離した粗生成物（０．３６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５ｍｌ）に溶解し、使用直前に製造したジアゾメタンのエーテル溶液を、ガスの形成が終わるまで加えた。１０分後、０．１ＮＨＣｌ（５ｍｌ）を加え、溶媒を減圧下で除去した。。有機物質を酢酸エチルで５回抽出した。一緒にした有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧濃縮した。

出発物質
Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＳｕ（１）の合成
活性エステルＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＳｕ（１）はBodansky, M., Bodansky, A., The Practice of Peptide Synthesis, 2nd Edition, Springer-Verlagに記載の手順に従って製造した。Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨ（４．０ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、Bachem社から入手）の２５ｍｌ乾燥ＴＨＦ中の攪拌溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１．５６ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）を０℃で加え、混合物を１０分間攪拌した。ジシクロヘキシルカルボジイミド（２．８１ｇ、１３．６ｍｍｏｌ）の３ｍｌ乾燥ＴＨＦ中の溶液を加えた。室温に温めながら混合物を１４時間攪拌した。分離したＮ，Ｎ´−ジシクロヘキシル尿素をろ過で除去し、溶媒を真空蒸発させた。残留物をイソプロパノールから２回再結晶して、活性エステルを融点１４０℃の白色固体（４．４７ｇ、８４％）として得た。-TLC (MeOH/CHCl₃, 1:50): R_f= 0.5. - ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ= 1.20 (d, 3H, J=7.0Hz, CH₃), 1.44(d, 3H, J=7.4 Hz, CH₃), 2.79(s, 4H, 2×CH₂),4.04-4.10 (m, 1H, CH), 4.63-4.69 (m, 1H, CH), 4.96-5.04 (m, 2H, CH₂), 7.28-7.38 (m, 5H, aryl-H),7.45 (d, 1H, J=7.8 Hz, NH),8.58 (d, 1H, J=7.0 Hz, NH).-MS(El) m/z(%): 392 [M + H⁺], 414 [M + Na⁺],430 [M + K⁺].

Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２）の合成
トリペプチドＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（２）は次の手順に従って製造した：Ｈ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（４．９７ｇ、１３．２８ｍｍｏｌ、Bachem社から入手）の乾燥ＤＭＦ（２５ｍｌ）中の攪拌溶液に、Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＳｕ（５．２ｇ、１３．２８ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（２０ｍｌ）中の溶液を加え、室温で１４時間攪拌した。溶媒を油ポンプを用いて真空蒸発させた。得られた粗製化合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶解し、１ＮＨＣｌ（２×３０ｍｌ）および水（３０ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、減圧濃縮して、トリペプチドを融点１９６℃の白色固体（７．９５ｇ、９２％）として得た。ペプチドはそれ以上精製することなく用いた。-¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆):δ=1.18(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.22(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 2.62-2.88(m, 2H, CHCH₂), 4.06-4.12(m, 1H, CH), 4.31-4.37(m, 1H, CH),4.46-4.50(m, 1H, CH),4.98-5.04(m, 2H, CH₂O),7.15-7.35(m, 20H, aryl-H).-MS(El) m/z(%): 651[M+H⁺], 673[M+Na⁺], 689[M+K⁺].

Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｎ（ＯＣＨ₃）ＣＨ₃（３）の合成
バインレープアミドＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｎ（ＯＣＨ₃）ＣＨ₃（３）はYasuma, 1998の方法に従って製造した：Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−ＯＨ（０．５ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（７９ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（１１４μｌ、０．８２ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ（３ｍｌ）中の攪拌溶液に、ジイソプロピルカルボジイミド（１３１μｌ、０．８５ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１１５ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、室温に温めながら全体を１６時間攪拌した。混合物は減圧濃縮した。得られた粗製化合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（２５ｍｌ）に溶解し、水性クエン酸、水、水性ＮａＨＣＯ₃、ブライン（１つの洗浄工程当たり５ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、減圧濃縮して、バインレープアミドを白色固体（０．４９ｇ、９２％）として得た。バインレープアミドはそれ以上精製することなく用いた。-TLC (MeOH/CHCl₃, 1:30): R_f=0.49. -¹H NMR(400 MHz, CDCl₃):δ=1.26(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.29(d, 3H, J=7.0 Hz,CH₃), 2.64-2.76(m, 2H, CHCH₂), 2.86(s, 3H, NCH₃), 3.66(s, 3H, OCH₃), 3.76-3.83(m, 1H, CH), 4.07-4.13(m, 1H, CH), 4.33-4.40(m, 1H, CH), 5.02-5.09(m, 2H, CH₂O), 7.13-7.34(m, 20H, aryl-H).-MS(El) m/z(%): 694[M+H⁺], 716[M+Na⁺], 732[MK⁺].

Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｈ（４）の合成
アルデヒドＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｈ（４）はFehrentzおよびCastro, 2000の方法に従って製造した：Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）−Ｎ（ＯＣＨ₃）ＣＨ₃（１．５０ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の攪拌溶液に、水素化リチウムアルミニウム（１．０Ｍ、２．７ｍｌ、２．７ｍｍｏｌ）を０℃で滴加した。１５分後、混合物を水性クエン酸（１０ｍｌ）で加水分解し、そして室温にした後、溶媒を真空蒸発させた。混合物をｐＨ７バッファー溶液（１５ｍｌ）で希釈した。有機物質を酢酸エチル（５×３０ｍｌ）で抽出した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、減圧濃縮して、アルデヒドを白色固体（１．２５ｇ、９１％）として得、これをそれ以上精製することなく用いた。-TCL (MeOH/CHCl₃, 1:9): R_f=0.64. -¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ=1.33(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.37(d, 3H, J=7.2 Hz,CH₃), 2.56-2.72(m, 2H, CHCH₂), 4.08-4.13(m, 1H, CH), 4.28-4.34(m, 1H, CH), 4.54-4.63(m, 1H, CH), 5.04-5.09(m, 2H, CH₂O), 7.24-7.32(m, 20H, aryl-H), 9.49(s, 1H, aldehyde).-MS(El) m/z(%): 635[M+H⁺], 657[M+Na⁺], 732[M+K⁺].

ｔ−ブチル２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−ヒドラジノ］酢酸（１４）の合成
化合物１４は次のように製造した：Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＳｕ（７．９８ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の攪拌溶液に、ｔ−ブチル２−（ヒドラジノ）酢酸（２．９８ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の溶液を加え、室温で１４時間攪拌した。溶媒を真空蒸発させた。得られた粗製化合物を水中で粉砕し、ろ過した。得られた固体を少量の水で２回洗浄し、Ｐ₄Ｏ₁₀で乾燥し、それ以上精製することなく用いた（５．６ｇ、６５％）。-TCL (MeOH/CHCl₃, 1:9): R_f=0.53. -¹H NMR(400 MHz, CDCl₃): δ=1.35(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.36(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.44(s, 9H, t-Bu), 3.73(s, br., 2H, NHCH₂), 4.20-4.32(m, 1H, CH), 4.42-4.50(m, 1H, CH),5.06-5.13(m, 2H, CH₂O), 5.39(s, br., 1H, NH), 5.58(s, br., 1H, NH), 7.02(s, br., 1H, NH), 7.28-7.38(m, 5H, aryl-H).-MS(El) m/z(%): 423[M+H⁺], 445[M+Na⁺], 461[M+K⁺].

２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−ヒドラジノ］酢酸（１５）の合成
化合物１５は次のように製造した：ｔ−ブチル２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−ヒドラジノ］酢酸（２．５ｇ、５．９ｍｍｏｌ）を、トリフルオロ酢酸（４０ｍｌ）、ＣＨ₂Ｃｌ₂（４０ｍｌ）およびメチルフェニルスルフィド（２ｍｌ）の混合物に溶解した。この溶液を室温で２時間攪拌した後、トルオールで希釈した。溶媒を減圧下で除去し、得られた残留物をＥｔ₂Ｏ中で粉砕し、ろ過した。得られた固体をＥｔ₂Ｏで３回洗浄し、乾燥して、所望の化合物を白色固体（１．５７ｇ、７３％）として得た。これはそれ以上精製することなく用いた。-TLC (MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.15. -¹H NMR(200 MHz, DMSO-d₆): δ=1.15(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.17(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 3.40(s, 2H, NHCH₂), 3.97-4.11(m, 1H, CH), 4.17-4.27(m, 1H, CH), 4.94-5.07(m, 2H, CH₂O), 7.26-7.39(m, 5H, aryl-H), 7.92(d, 1H, J=7.3 Hz, NH), 9.35(s, br., 1H, NH). -MS(El) m/z(%): 367[M+H⁺], 389[M+Na⁺], 405[M+K⁺].

２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−ヒドラジノ］トリフェニルメチルアセトアミド（１６）の合成
化合物１６は次のように製造した：２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−ヒドラジノ］酢酸（０．３０ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（５ｍｌ）に溶解し、氷浴で０℃に冷却した。この攪拌溶液に、ＨＡＴＵ（０．３１ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（０．１１ｍｇ、０．８２ｍｍｏｌ）、トリフェニルメチルアミン（０．３２ｇ、０．８２ｍｍｏｌ）およびＮ−エチルジイソプロピルアミン（０．２８ｍｌ、１．６４ｍｍｏｌ）を加え、室温に温めながら、混合物全体を１６時間攪拌した。油ポンプを使用して溶媒を真空蒸発させた。得られた粗製化合物を酢酸エチル（２５ｍｌ）に溶解し、１ＮＨＣｌ、水、ＮａＨＣＯ₃水溶液、およびブライン（１つの洗浄工程当たり５ｍｌ）で洗浄した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、ろ過し、減圧濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の化合物を固体（４０ｍｇ、８％）として得た。-TLC (MeOH/CHCl₃, 1:9): R_f=0.15. -¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆): δ=1.15(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.16(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 3.42(s, 2H, NHCH₂), 4.02-4.08(m, 1H, CH), 4.19-4.25(m, 1H, CH), 4.96-5.03(m, 2H, CH₂O), 7.17-7.42(m, 20H, aryl-H), 7.96(d, 1H, J=7.3 Hz,NH), 9.68(s, br., 1H, NH), -MS(El) m/z(%): 608[M+H⁺], 630[M+Na⁺], 646[M+K⁺].

２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（クロロアセチル）ヒドラジノ］トリフェニルメチルアセトアミド（１７）の合成
化合物１７は次のように製造した：化合物１６（４０ｍｇ、６６μｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１．５ｍｌ）中の攪拌溶液に、トリエチルアミン（１４μｌ、１００μｍｏｌ）および塩化クロロアセチル（５．３μｌ、６６μｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を１５分間攪拌した後、溶媒を減圧除去した。得られた粗製化合物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、生成物を白色固体（３７ｍｇ、８２％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃, 1:9): R_f=0.26.-MS(El) m/z(%): 684[M+H⁺, ³⁵Cl], 686[M+H⁺, ³⁷Cl], 706[M+Na⁺, ³⁵Cl], 708[M+Na⁺, ³⁷Cl], 722[M+K⁺, ³⁵Cl], 724[M+K⁺, ³⁷Cl].

Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＯＨ（１９）の合成
トリペプチドＺ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＯＨ（１９）は方法Ｄの手順に従って製造し、フラッシュクロマトグラフィーで精製して、生成物を収率８８％で白色固体として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃, 1:9): R_f=0.10. -¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆): δ=1.18(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.20(d, 3H, J=7.2 Hz, CH₃), 2.45-2.52(m, 2H, CHCH₂), 4.02-4.09(m, 1H, CH), 4.26-4.31(m, 1H, CH), 4.47-4.51(m, 1H, CH), 4.97-5.04(m, 2H, CH₂O), 6.87(s, br., 1H, NH), 7.30-7.37(m, 5H, aryl-H), 7.92(d, 1H, J=7.3 Hz, NH), 7.98(d, 1H, J=7.9 Hz, NH). -MS(El) m/z(%): 409[M+H⁺], 431[M+Na⁺], 447[M+K⁺].

２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（ブロモアセチル）ヒドラジノ］トリフェニルメチルアセトアミド（２１）の合成
化合物２１は次のように製造した：１６（５７ｍｇ、９４μｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＴＨＦ（３ｍｌ）中の攪拌溶液に、トリエチルアミン（２０．０μｌ、１４０μｍｏｌ、１．５当量）および臭化ブロモアセチル（８．２μｌ、９４μｍｏｌ、１．０当量）を０℃で加えた。混合物を１５分間攪拌した後、溶媒を減圧除去した。得られた粗製化合物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、生成物を融点９３〜１００℃の白色固体（５５ｍｇ、８０％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃, 1:9): R_f=0.68. -¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ1.16(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.23(d, 3H, J=7.4 Hz, CH₃), 4.04-4.10(m, 1H, CH), 4.13-4.18(m, 1H, CH), 4.25[s, 2H, C(O)CH₂Br], 4.29(s, 2H, NHCH₂), 4.94-5.03(m, 2H, CH₂O), 7.15-7.34(m, 20H, aryl-H), 7.43(d, 1H, J=7.4 Hz, NH), 8.17(d, 1H, J=8.6 Hz, NH), 8.92(s, 1H, NH), 10.71(s, br., 1H, NH).-MS(El) m/z(%): 728[M+H⁺,⁷⁹Br], 730[M+H⁺,⁸¹Br], 750[M+Na⁺,⁷⁹Br], 752[M+Na⁺,⁸¹Br], 766[M+K⁺,⁷⁹Br], 768[M+K⁺,⁸¹Br].

２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（ベンゾイルオキシアセチル）ヒドラジノ］トリフェニルメチルアセトアミド（２３）の合成
化合物２３は次のように製造した：乾燥ＫＦ（１５ｍｇ、２５７μｍｏｌ、２．５当量）を、２１（７５ｍｇ、１０３μｍｏｌ、１．０当量）の乾燥ＤＭＦ（４ｍｌ）中の攪拌溶液に室温で加えた。混合物を３分間攪拌した後、安息香酸（１５ｍｇ、１２３μｍｏｌ、１．２当量）を加え、混合物全体を１６時間攪拌した。溶媒を油ポンプにより真空蒸発させた。得られた粗製化合物（８０ｍｇ、粗収率１００％）はそれ以上精製することなく用いた。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.44.-MS(El) m/z(%): 770[M+H⁺], 792[M+Na⁺], 808[M+K⁺].

医薬組成物
さらに、本発明には、そのような化合物の、患者におけるレグマイン活性の加減によって仲介される病気の治療用薬剤製造への使用が含まれる。本化合物は、限定されるものではないが、静脈内、経口、皮下、筋肉内、経皮および非経口を含めた一般的な投与ルートによって患者に投与される。

本発明はまた、１種以上の本発明の化合物を薬学的に活性な担体と共に含む医薬組成物を提供する。

本発明の医薬組成物の製造には、活性成分としての１種以上の本発明の活性化合物またはそれらの塩を、一般的な薬剤配合技術により薬剤担体と均質に混合する。これらの担体は投与（例えば、経口、または筋肉内のような非経口投与）に望ましい製剤の形により様々な形をとりうる。経口投与形の組成物を製造するとき、どのような通常の薬剤媒質も用いうる。従って、懸濁液、エリキシルおよび溶液のような液体経口製剤の場合、担体および添加剤は水、グリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤等が適している；粉末、カプセル、ゲルキャップおよび錠剤のような固体経口製剤の場合、担体および添加剤はデンプン、糖、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤等が適している。投与がし易いため、錠剤およびカプセルが最も有利な経口投与単位形であり、この場合固体薬剤担体が用いられるのは明らかである。望ましいならば、錠剤は標準技術により糖被覆または腸内分解性被覆がなされていてもよい。非経口投与の場合、担体は滅菌水を通常含み、例えば溶解性促進の目的または防腐のために、他の成分を通して含んでいてもよい。

注射可能な懸濁液も製造しうる。この場合、適切な液体担体、懸濁化剤等を用いうる。本医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉剤、注射、茶さじ１杯等のような投与単位当たり、上記のような有効投与量を放出するのに必要な量の活性成分を含む。本医薬組成物は、錠剤、カプセル、粉剤、注射、座薬、茶さじ１杯等のような投与単位当たり、約０．０３〜１００ｍｇ／ｋｇ（好ましくは０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ）の活性成分を含み、約０．１〜３００ｍｇ／ｋｇ／日（好ましくは１〜５０ｍｇ／ｋｇ／日）の投与量で投与される。しかしながら、投与量は患者の要件、治療する症状の重さおよび用いる化合物によって変わる。投与は毎日または周期的に行ってもよい。

好ましくは、これらの組成物は錠剤、ピル、カプセル、粉末、顆粒、滅菌非経口溶液もしくは懸濁液、計量エアーゾルもしくは液体スプレー、ドロップ、アンプル、自動注射器装置または座薬のような単位投与形である；経口、非経口、鼻内、舌下もしくは直腸投与の場合、または吸入もしくは注入による投与の場合。あるいは、組成物は週１回または月１回の投与に適した形でもよい；例えば、デカン酸塩のような活性化合物の不溶性塩を筋肉内注射のための貯蔵製剤にしてもよい。錠剤のような固体組成物を製造する場合、主要活性成分を薬剤担体、例えばコーンスターチ、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガムのような一般的な錠剤成分、および水のような他の薬剤希釈剤と混合して、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩の均質混合物を含有する固体予備配合組成物にする。これらの予備配合組成物を均質であるというとき、活性成分は組成物全体に均一に分散しており、その結果、組成物が錠剤、ピルおよびカプセルのような同等に有効な投与形に容易に小分けしうることを意味する。次に、この固体予備配合物を０．０１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する上記タイプの単位投与形に小分けする。

新規組成物の錠剤またはピルは被覆してまたは別の方法で配合して、作用が長く続く利点をもつ投与形にしてもよい。例えば、錠剤またはピルは内部投与および外部投与成分を含んでいてもよく、後者は前者を包む形になる。２つの成分は腸内分解性層によって分けることができ、この層は、胃での崩壊に耐えるように働き、内部成分が損なわれずに十二指腸に行くのをまたは遅延放出されるのを可能にする。様々な材料がそのような腸内分解性層または被覆に用いることができる。そのような材料には、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような材料を含む多くの高分子量酸が含まれる。

経口または注入投与のために本発明の新規組成物を混合しうる液体形には、水溶液、適当に香味をつけたシロップ、水性もしくは油性懸濁液、および綿実油、ごま油、ココナッツ油もしくはピーナッツ油のような食用油を含む香味をつけたエマルジョン、並びにエリキシルおよび類似の薬剤賦形剤が含まれる。水性懸濁液に適した分散剤または懸濁化剤には、合成および天然ガム、例えばトラガカント、アラビアゴム、アルギン酸塩、デキストラン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンが含まれる。

本発明の化合物の製造工程で立体異性体の混合物が生じる場合、これらの異性体は調製クロマトグラフィーのような一般的な技術によって分離しうる。化合物はラセミ形で製造してもよく、あるいは個々の光学的対掌体を光学的対掌特異的合成または分割のいずれかによって製造してもよい。化合物は、例えば、標準的な技術、例えば、（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸および／または（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸のような光学的に活性な酸での塩形成によるジアステレオマー対の形成、その後の分別結晶および遊離塩基の再生によって、光学的対掌体のそれらの成分に分割しうる。化合物はまた、ジアステレオマーエステルまたはアミドの形成、その後のクロマトグラフィーによる分離およびキラル補助体の除去によって分割することができる。あるいは、化合物はキラルＨＰＬＣカラムを用いて分割してもよい。

本発明の化合物の製造工程中、関係する分子上の敏感なまたは反応性の基を保護することが必要および／または望ましいかもしれない。これは、一般的な保護基、例えばProtective Groups in Organic Chemistry, J. F. W. McOmie著, Plenum Press, 1973；およびT. W. Greene & P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Suns, 1991に記載の保護基によって行いうる。保護基は本技術分野で公知の方法を用いて都合のよいその後の段階で除去しうる。

本発明に記載のレグマインによって変調する病気の治療法はまた、ここで定義される化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を用いて実施しうる。医薬組成物は約０．０１〜５００ｍｇ、好ましくは約５〜５０ｍｇの化合物を含んでいてよく、選択された投与方式に適した形に構成しうる。担体には必要かつ不活性な薬剤賦形剤、限定されるものではないが、例えば結合剤、懸濁化剤、潤滑剤、香味剤、甘味剤、防腐剤、染料、およびコーティングが含まれる。経口投与に適した組成物には固体形、例えばピル、錠剤、キャプレット、カプセル（それぞれ直後放出、時間限定放出および持続放出製剤を含む）、顆粒および粉剤、並びに液体形、例えば溶液、シロップ、エリキシル、エマルジョン、および懸濁液が含まれる。非経口投与に有用な形には、滅菌溶液、エマルジョンおよび懸濁液が含まれる。

有利なことに、本発明の化合物は１日に１回の投与の形で投与しても、あるいは１日の合計投与量を１日に２、３または４回に分割して投与してもよい。さらに、本発明の化合物は適した鼻内賦形剤の局所使用によって、または本技術分野における当業者に周知の経皮皮膚パッチによって、鼻内形で投与することができる。経皮放出システムの形で投与するには、投与量は、もちろん、投与期間の間、断続的ではなく連続的に投与される。

例えば、錠剤またはカプセルの形での経口投与の場合、活性薬剤成分は経口非毒性の薬学的に許容される不活性担体、例えばエタノール、グリセロール、水等と混合することができる。さらに、望ましいまたは必要なとき、適した結合剤、潤滑剤、崩壊剤および着色剤も混合物に混合することができる。適した結合剤には、限定されるものではないが、デンプン、ゼラチン、天然の糖、例えばグルコースまたはベータラクトース、トウモロコシ甘味剤、天然および合成ガム、例えばアラビアゴム、トラガカントまたはオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等が含まれる。崩壊剤には、限定されるものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等が含まれる。

液体は、適した香味懸濁化剤または分散剤、例えば合成および天然ガム、例えばトラガカント、アラビアゴム、メチルセルロース等中で形成する。非経口投与の場合、滅菌懸濁液および溶液が望ましい。適した防腐剤を一般に含有する等張性製剤は、静脈内投与が望ましいときに用いる。

本発明の化合物はまたリポソーム放出システムの形、例えば、小さな単ラメラ小胞、大きな単ラメラ小胞、および多重ラメラ小胞の形で投与することもできる。リポソームは各種リン脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンから形成することができる。

本発明の化合物はまた、モノクローナル抗体を化合物分子が結合した個々の担体として用いることによって放出してもよい。本発明の化合物はまた、標的とすることが可能な薬剤担体としての可溶性ポリマーと結合してもよい。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンが含まれる。さらに、本発明の化合物は、薬剤の調整放出に有用なある種の生分解性ポリマー、例えば、ポリアクチックアシッド(polyactic acid)、ポリエプシロン、カプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマーに結合させうる。

本発明の化合物は先行組成物中においてかつ本技術分野で確立された投与法に従って投与しうるが、論じている疾患の治療は必要である。

生成物の１日の投与量は、成人１日当たり０．０１〜１，０００ｍｇの広い範囲で変化させうる。経口投与の場合、組成物は、治療患者への投与量の症状による調整ごとに、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０および５００ｍｇの活性成分を含有する錠剤の形で提供されるのが好ましい。薬剤の有効量は約０．１〜約３００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量で通常供給される。範囲は約１〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／日であるのが好ましい。化合物は１日に１〜４回投与しうる。

最適な投与量は本技術分野における当業者によって容易に決定でき、具体的な使用化合物、投与方式、製剤濃度、投与方式、および病気の状態の進行で変わる。さらに、個々の治療患者に伴うファクター、例えば患者の年齢、体重、食餌および投与回数で投与量を調整する必要がある。

本発明の化合物または組成物は食前、食中または食後に飲む。
食前に飲むとき、本発明の化合物または組成物は食事の１時間前、好ましくは３０分前、または１５もしくは５分前に飲む。
食中に飲むとき、本発明の化合物または組成物は食事に混合しても、あるいは上記のような別の投与形で飲んでもよい。
食後に飲むとき、本発明の化合物または組成物は食事を終えて５、１５もしくは３０分後または１時間後に飲んでもよい。

実施例
実施例１
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−６−オキソ−２−ヘキサン酸メチル（５）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドおよびトリメチルホスホノアセテートと共にホーナー−エモンス反応を用い（方法Ｂ）、その後、トリチル保護基を脱保護して（方法Ｄ）製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点２４２℃の白色固体（４３％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.34. -¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆):δ=1.20(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.22(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 2.38(d, 2H, J=6.8 Hz, CHCH₂),3.64(s, 3H, OCH₃), 4.01-4.14(m, 1H, CH), 4.16-4.25(m, 1H, CH), 4.73-4.75(m, 1H, CH), 4.96-5.05(m, 2H, CH₂O), 5.80(d, 1H, J=15.8 Hz, COCH=CH), 6.82(dd, 1H, J=15.8 Hz, J=4.8 Hz, COCH=CH), 6.94(s, br., 1H, NH), 7.30-7.34(m, 5H, aryl-H), 7.46(d, 1H, J=7.2 Hz, NH), 8.01(d, 1H, J=7.4 Hz, NH), 8.08(d, 1H, J=8.0 Hz, NH). -¹³C NMR(100 MHz,DMSO-d₆): δ=17.89, 18.12(CH₃), 46.64, 48.26, 50.03(CH), 51.34(OCH₃), 65.37(CH₂C₆H₅), 119.70(COCH=CH), 127.79, 127.85, 128.41, 137.12(aryl-C), 148.45(COCH=CH), 155.91, 166.14, 171.31, 171.63, 172.46(C=O). -MS(El) m/z(%): 449[M+H⁺], 471[M+Na⁺], 487[M+K⁺].

実施例２
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−６−オキソ−２−ヘキサン酸エチル（６）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドおよびトリエチルホスホノアセテートと共にホーナー−エモンス反応を用い（方法Ｂ）、その後、トリチル保護基を脱保護して（方法Ｄ）製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点１９４〜１９６℃の白色固体（５６％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.38. -¹H NMR(400 MHz, CD₃OD): δ=1.25(t, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.35(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.38(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 2.55(d, 2H, J=6.7 Hz, CHCH₂), 4.08-4.14(m, 1H, CH), 4.16(q, 2H, J=7.1 Hz, CH₂CH₃), 4.30-4.36(m, 1H, CH), 4.86-4.88(m, 1H, CH), 5.06-5.12(m, 2H, CH₂O), 5.94(d, 1H, J=15.7 Hz, COCH=CH), 6.89(dd, 1H, J=15.7 Hz, J=5.1 Hz, COCH=CH), 7.27-7.37(m, 5H, aryl-H). -MS(El) m/z(%): 463[M+H⁺], 485[M+Na⁺], 501[M+K⁺].

実施例３
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−６−オキソ−２−ヘキサン酸アリル（７）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、アリル（トリフェニルホスホラニリデン）アセテートと共にウィッチヒ反応を用い（方法Ａ）、そしてトリチル保護基を脱保護して（方法Ｄ）製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点１８２〜１８４℃の白色固体（６２％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.41. -¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ=1.21(t, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.22(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 2.55(d, 2H, J=6.8 Hz, CHCH₂), 4.01-4.06(m, 1H, CH), 4.20-4.26(m, 1H, CH), 4.59(d, 2H, J=5.3 Hz, CH₂CH=CH₂), 4.73-4.76(m, 1H, CH), 4.98-5.05(m, 2H, CH₂O), 5.19-5.32(m, 2H, CH₂CH=CH₂), 5.82(d, 1H, J=15.7 Hz, COCH=CH), 5.88-5.97(m, 1H, CH₂CH=CH₂), 6.86(dd, 1H, J=15.7 Hz, J=4.7 Hz, COCH=CH), 6.95(s, br., 1H, NH), 7.30-7.42(m, 5H, aryl-H), 7.46(d, 1H, J=7.4 Hz, NH), 8.01(d, 1H, J=7.2 Hz, NH), 8.09(d, 1H, J=8.2 Hz, NH).-MS(El) m/z(%): 475[M+H⁺], 492[M+NH₄ ⁺], 497[M+Na⁺], 513[M+K⁺].

実施例４
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−６−オキソ−２−ヘキサン酸（８）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミドおよびトリエチルホスホノアセテートと共にホーナー−エモンス反応を用いて（方法Ｂ）製造した。鹸化は方法Ｅに記載のように行った。トリチル保護基をトリイソプロピルシランの存在下でＴＦＡにより除去した（方法Ｄ）。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点２０５〜２０８℃の白色固体（３７％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.19. -¹H NMR(400 MHz, CD₃OD): δ=1.34(t, 3H, J=6.8 Hz, CH₃), 1.37(d, 3H, J=6.8 Hz, CH₃), 2.55(d, 2H, J=6.8 Hz, CHCH₂), 4.10-4.14(m, 1H, CH), 4.31-4.36(m, 1H, CH), 4.84-4.88(m, 1H, CH), 5.04-5.11(m, 2H, CH₂O), 5.92(d, 1H, J=15.7 Hz, COCH=CH), 6.88(dd, 1H, J=15.7 Hz, J=5.1 Hz, COCH=CH), 7.28-7.35(m, 5H, aryl-H). -MS(El) m/z(%): 435[M+H⁺], 457[M+Na⁺], 473[M+K⁺].

実施例５
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−２−メチル−６−オキソ−２−ヘキサン酸メチル（９）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、（カルボエトキシエチリデン）トリフェニルホスホランと共にウィッチヒ反応を用いて（方法Ａ）製造した。鹸化は方法Ｅに記載のように行い、炭酸は方法Ｆに記載のようにエステル化した。トリチル保護基をトリイソプロピルシランの存在下でＴＦＡにより除去した（方法Ｄ）。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点１８８〜１９１℃の白色固体（６５％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.54. -¹H NMR(400 MHz, CD₃OD): δ=1.33(t, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.34(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.91(d, 3H, J=1.4 Hz, COCCH₃=CH) 2.43-2.57(m, 2H, CHCH₂), 4.06-4.10(m, 1H, CH), 4.27-4.29(m, 1H, CH), 5.01-5.06(m, 1H, CH), 5.07-5.15(m, 2H, CH₂O), 6.61(dd, 1H, J=9.0 Hz, J=1.4 Hz, COCCH₃=CH), 7.29-7.38(m, 5H, aryl-H). -MS(El) m/z(%): 463[M+H⁺], 485[M+Na⁺], 501[M+K⁺].

実施例６
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−２−メチル−６−オキソ−２−ヘキサン酸エチル（１０）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、（カルボエトキシエチリデン）トリフェニルホスホランと共にウィッチヒ反応を用いて（方法Ａ）製造した。単離した粗生成物はトリイソプロピルシランの存在下でＴＦＡにより脱保護した（方法Ｄ）。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点２００〜２０４℃の白色固体（６４％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.33. ¹H NMR(400 NHz, DMSO-d₆): δ=1.15-1.21(m, 9H, 3×CH₃), 1.80(d, 3H, J=1.2 Hz, COCCH₃=CH), 2.31-2.35(m, 2H, CHCH₂), 4.02-4.08(m, 1H, CH), 4.10(q, 2H, CH₂CH₃), 4.15-4.21(m, 1H, CH), 4.83-4.87(m, 1H, CH), 4.97-5.05(m, 2H, CH₂O), 6.46(dd, 1H, J=9.0 Hz, J=1.4 Hz, COCCH₃=CH), 6.86(s, 1H, NH), 7.30-7.35(m, 5H, aryl-H), 7.44(d, 1H, J=7.2 Hz, NH), 7.93(d, 1H, J=7.4 Hz, NH), 8.05(d, 1H, J=7.4 Hz, NH). -MS(El) m/z(%): 477[M+H⁺], 499[M+Na⁺], 515[M+K⁺].

実施例７
（Ｓ）−（Ｅ）−４−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−６−アミノ−２−メチル−６−オキソ−２−ヘキサン酸（１１）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、（カルボエトキシエチリデン）トリフェニルホスホランと共にウィッチヒ反応を用いて（方法Ａ）製造した。鹸化は方法Ｅに記載のように行った。トリチル保護基はトリイソプロピルシランの存在下でＴＦＡにより除去した（方法Ｄ）。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点１８５〜１８９℃の白色固体（３２％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.08. -¹H NMR(400 MHz, CD₃OD): δ=1.33(t, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.34(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.89(d, 3H, J=1.2 Hz, COCCH₃=CH), 2.42-2.58(m, 2H, CHCH₂), 4.07-4.10(m, 1H, CH), 4.28-4.31(m, 1H, CH), 5.00-5.06(m, 1H, CH), 5.12-5.16(m, 2H, CH₂O), 6.63(dd, 1H, J=9.0 Hz, J=1.2 Hz, COCCH₃=CH), 7.26-7.38(m, 5H, aryl-H). -MS(El) m/z(%): 449[M+H⁺], 471[M+Na⁺], 487[M+K⁺].

実施例８
［（Ｓ）−（Ｅ）−３−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−５−アミノ−５−オキソ−１−ペンテン］−スルホン酸メチル（１２）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、水素化ナトリウムおよびジメチルメチルスルホノメタンホスホネート¹⁴と共にホーナー−エモンス反応を用い（方法Ｃ）、その後、トリチル保護基を脱保護して（方法Ｄ）製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点１９３〜１９５℃の白色固体（７１％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.13. -¹H NMR(400 MHz, CD₃OD): δ=1.34(t, 3H, J=7.2 Hz, CH₃), 1.38(d, 3H, J=7.2 Hz, CH₃), 2.58-2.61(m, 2H, CHCH₂), 2.92(s, 3H, SO₂CH₃), 4.09-4.16(m, 1H, CH), 4.24-4.34(m, 1H, CH), 5.04-5.17(m, 3H, CH, CH₂O), 6.68(d, 1H, J=15.2 Hz, COCH=CH), 6.85(dd, 1H, J=15.2 Hz, J=4.3 Hz, COCH=CH), 7.27-7.35(m, 5H, aryl-H). -MS(El) m/z(%): 469[M+H⁺], 491[M+Na⁺], 507[M+K⁺].

実施例９
［（Ｓ）−（Ｅ）−３−［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ］アミノ−５−アミノ−５−オキソ−１−ペンテニル］ホスホン酸ジエチル（１３）の合成
この化合物は、アルデヒドから出発し、水素化ナトリウムおよびテトラエチルメチレンジホスホネートと共にホーナー−エモンス反応を用い（方法Ｃ）、その後、トリチル保護基を脱保護して（方法Ｄ）製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を融点９５〜９７℃の白色固体（６０％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.32. -¹H NMR(400 MHz, CD₃OD): δ=1.26-1.38(m, 12H, 2×CH₂CH₃, 2×CHCH₃), 2.51-2.61(m, 2H, CHCH₂), 3.98-4.15(m, 5H, CH, 2×CH₂CH₃), 4.28-4.34(m, 1H, CH), 5.04-5.15(m, 3H, CH,CH₂O), 5.91(dd, 1H, J=35.4 Hz, J=17.4 Hz, COCH=CH), 6.85(ddd, 1H, J=21.9 Hz, J=17.6 Hz, J=4.5 Hz, COCH=CH), 7.28-7.37(m, 5H, aryl-H). -MS(El) m/z(%): 527[M+H⁺], 549[M+Na⁺], 565[M+K⁺].

実施例１０
２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（クロロアセチル）ヒドラジノ］アセトアミド（１８）の合成
化合物１８は、化合物１７（０．０５４ｍｍｏｌ）から出発し、トリチル保護基を脱保護する（方法Ｄ）ことによって製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を白色固体（１４ｍｇ、５６％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.20. -¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆): δ1.18(d, 3H, J=6.8 Hz, CH₃), 1.23(d, 3H, J=6.8 Hz, CH₃), 4.02-4.08(m, 1H, CH), 4.15-4.23(m, 1H, CH), 4.40(s, br., 2H, NHCH₂), 4.96-5.03(m, 2H, CH₂O), 7.20(s, 1H, NH), 7.28-7.37(m, 5H, aryl-H), 7.47(d, 1H, J=7.3 Hz, NH), 8.22(s, br., 1H, NH), 10.58(s, br, 1H, NH). -MS(El) m/z(%): 442[M+H⁺, ³⁵Cl], 444[M+H⁺, ³⁷Cl], 464[M+Na⁺, ³⁵Cl], 466[M+Na⁺, ³⁷Cl], 480[M+K⁺, ³⁵Cl], 482[M+K⁺, ³⁷Cl].

実施例１１
［Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｓｎ］−Ｏ−ベンゾイルヒドロキサメート（２０）の合成
Ｏ−ベンゾイルヒドロキシルアミン塩酸塩（８５ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、Carpino等, 1959の方法に記載のように製造した）の水（５ｍｌ）中の溶液に、泡立ちが終止するまで炭酸水素ナトリウムの１Ｍ溶液を室温で加えた。有機物質をＣＨ₂Ｃｌ₂（抽出１回当たり１０ｍｌ）で３回抽出した。一緒にした有機層をＮａ₂ＳＯ₄で乾燥し、減圧濃縮してＯ−ベンゾイルヒドロキシルアミン（４９ｍｇ、７３％）を得た。第２のフラスコに、Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＯＨ（１９）（１３０ｍｇ、０．３１８ｍｍｏｌ）を乾燥ＴＨＦ（５ｍｌ）および乾燥ＤＭＦ（３ｍｌ）の混合物に溶解した。この攪拌溶液に、クロロギ酸イソブチル（４１μｌ、０．３１８mmol）およびＮＭＭ（３５μｌ、０．３１８mmol）を−１５℃で加えた。１５分間攪拌した後、乾燥ＴＨＦ（２ｍｌ）中のＯ−ベンゾイルヒドロキシルアミンを加え、室温に温めながら、混合物を１４時間攪拌した。溶媒を真空蒸発させ、得られた残留物を冷ＫＨＳＯ₄（水中５％、５ｍｌ）で洗浄した。沈殿を酢酸エチル（１０ｍｌ）に溶解し、水（３×５ｍｌ）で洗浄し、Ｎａ₂ＳＯ₄で乾燥した。ろ過した後、溶媒を減圧蒸発させた。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を油状物（７７ｍｇ、４６％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.31. -¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆): δ=1.19(d, 3H, J=6.9 Hz, CH₃), 1.21(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 2.78-2.96(m, 2H, CHCH₂), 4.04-4.08(m, 1H, CH), 4.25-4.34(m, 1H, CH), 4.48-4.55(m, 1H, CH), 4.97-5.04(m, 2H, CH₂O), 7.26-7.42(m, 10H, aryl-H), 7.93(d, 2H, 8.2 Hz, NH). -MS(El) m/z(%): 528[M+H⁺], 550[M+Na⁺], 566[M+K⁺].

実施例１２
２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（ブロモアセチル）ヒドラジノ］アセトアミド（２２）の合成
化合物２２は、２１（５５ｍｇ、７６μｍｏｌ）から出発し、トリチル保護基を開裂することによって製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を白色固体（２０ｍｇ、５４％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:50): R_f=0.22. -¹H NMR(500 MHz, DMSO-d₆): δ=1.18(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 1.24(d, 3H, J=7.0 Hz, CH₃), 4.00-4.10(m, 1H, CH), 4.08-4.12(m, 1H, CH), 4.26[s, br., 2H, C(O)CH₂Br], 4.38(s, br., 2H, NHCH₂), 4.96-5.03(m, 2H, CH₂O), 7.16(s, 1H, NH), 7.29-7.37(m, 5H, aryl-H), 7.43(d, 1H, J=7.3 Hz, NH), 8.18(d, J=7.3 Hz, 1H, NH), 10.59(s, br., 1H, NH). -MS(El) m/z(%): 486[M+H⁺, ⁷⁹Br], 488[M+H⁺, ⁸¹Br], 508[M+Na⁺, ⁷⁹Br], 510[M+Na⁺, ⁸¹Br], 524[M+K, ⁷⁹Br], 526[M+K⁺, ⁸¹Br].

実施例１３
２−［２−（Ｃｂｚ−Ｌ−Ａｌａ−Ｌ−Ａｌａ）−１−（ベンゾイルオキシアセチル）ヒドラジノ］アセトアミド（２４）の合成
化合物２４は、２３（８０ｍｇ、１０３μｍｏｌ）から出発し、トリチル保護基を開裂することによって製造した。粗製化合物は調製ＨＰＬＣにより精製して、生成物を白色固体（８．７ｍｇ、１６％）として得た。-TLC(MeOH/CHCl₃,1:9): R_f=0.24. -¹H NMR(400 MHz, DMSO-d₆): δ=1.20(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 1.27(d, 3H, J=7.1 Hz, CH₃), 4.04-4.10(m, 1H, CH), 4.21-4.26(m, 1H, CH), 4.38(s, br., 2H, NHCH₂), 4.78[s, br., 2H, C(O)CH₂O], 4.95-5.03(m, 2H, CH₂O), 7.18(s, 1H, NH), 7.28-7.36(m, 4H, aryl-H), 7.43(d, 1H, J=7.6Hz, NH), 7.50-7.56(m, 3H, aryl-H), 7.65-7.70(m, 1H, aryl-H), 7.97-7.99(m, 2H, aryl-H), 8.22(s, br., 1H, NH), 10.60(s, br., 1H, NH). -MS(El) m/z(%): 528[M+H⁺], 545[M+NH₄ ⁺], 550[M+Na⁺], 566[M+K⁺].

実施例１３
生物学的評価
蛍光分析：
レグマイン活性は、４つのセル交換装置を備え、ＩＢＭ互換性パーソナルコンピューターによって管理されたKontron分光蛍光計ＳＦＭ２５（励起３８０；発光４６０）により、基質Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＡＭＣを用い、蛍光連続量（fluorogenic continous rate）分析で測定した。得られたデータはソフトウェアＦＬＵＣＯＬ⁽³⁸⁾で分析した。分析は、１ｍＭジチオトレイトールおよび１ｍＭＥＤＴＡを含有するクエン酸ナトリウムバッファー（３９．５ｍＭクエン酸／１２１ｍＭＮａ₂ＨＰＯ₄）を用い、３７℃または３０℃で行った。さらに、０．１％（w/v）Chapsまたは０．０１５（w/v）Brij３５を加えた。
阻害進行曲線は、ｋ_obs値を計算する非線形曲線当て嵌めソフトウェアPrism Graph Padを用いて分析した。おおよその二次不活性化定数（ｋ_obs／［Ｉ］）は全ての化合物について計算した。

実施例１４
Ｋ_j値の測定
１００μｌ阻害剤ストック溶液を１００μｌバッファー（ＨＥＰＥＳｐＨ７．６）および５０μｌ基質Ｚ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｓｎ−ＡＭＣと混合し、３０℃で予備インキュベートした。反応は２０μｌ酵素溶液を加えることによって開始した。生成物ＡＭＣの形成はKontron分光蛍光計ＳＦＭ２５（励起３８０；発光４６０）で測定し、勾配を計算した。レグマイン活性は０．０５、０．１、０．２および０．４ｍＭの最終基質濃度およびさらにＩＣ₅₀濃度を含む７つの阻害剤濃度で測定した。計算はGra Fit ４．０．１３（Erithacus）ソフトウェアを用いて行った。

Claims

一般式ＩもしくはＩＩの化合物またはそれらの薬学的に許容される塩。

式中、
Ａｓは、アミノ酸またはその類似体を表し、Ｙは、ウレタンおよびペプチドを含むアシル残基、またはアルキル残基を表し、
Ｚは、
−ＣＯ−ＣＨ₂−Ｗ、ここで、Ｗは、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、アリール、ヘテロアリール、複素環式、Ｎ₂、ハロゲン、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルケニル、Ｏ−アルキニル、Ｏ−炭素環式、Ｏ−アリール、Ｏ−ヘテロアリール、Ｏ−複素環式、Ｏ−アシル、Ｓ−アルキル、Ｓ−アルケニル、Ｓ−アルキニル、Ｓ−炭素環式、Ｓ−アリール、Ｓ−ヘテロアリール、Ｓ−複素環式、Ｓ−アシル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）−アルケニル、Ｃ（Ｏ）−アルキニル、Ｃ（Ｏ）−炭素環式、Ｃ（Ｏ）−アリール、Ｃ（Ｏ）−ヘテロアリール、またはＣ（Ｏ）−複素環式残基でありうる、
あるいは−Ｎ⁺（ＲＲ´Ｒ"）、ここで、Ｒ、Ｒ´およびＲ"は、互いに独立して、置換されていてもよいアシル、アルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、アリール、ヘテロアリール、または複素環式残基である、
あるいは−ＣＯ−ＮＨＯ−Ｑ、ここで、Ｑは、置換されていてもよいアシル、アルケニル、アルキニル、アロイル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アリール、またはアルキル残基である、
あるいは−ＣＲ¹＝ＣＲ²−ＥＷＧ、ここで、Ｒ¹およびＲ²は、互いに独立して、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、またはアリール残基であり、互いに対してシスまたはトランス位置にあり；そしてここで、ＥＷＧは、ＯＲ⁴（Ｒ⁴は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式またはアリール残基でありうる）、またはＣ（Ｏ）Ｏ−Ｒ⁵（Ｒ⁵は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシル、またはアリール残基でありうる）、またはＣＨ₂Ｏ−Ｒ⁶（Ｒ⁶は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシル、もしくはアリール残基、またはＣＮでありうる）、またはＳＯ₂Ｒ⁷（Ｒ⁷は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシルまたはアリール残基でありうる）を含む電子吸引基を表し、
あるいはＰＯ₂ＯＲ⁸、ここで、Ｒ⁸は、Ｈ、置換されていてもよいアルキル、アルケニル、アルキニル、炭素環式、ヘテロアリール、複素環式、アシルまたはアリール残基でありうる
を表す。
ＹＡｓＡｓがベンジル−オキシ−カルボニル−Ａｌａ−Ａｌａである、請求項１に記載の化合物。
Ｚが−ＣＯ−ＮＨＯ−Ｑであり、Ｑがアシル基、好ましくはベンゾイル基である、前記請求項のいずれか１項に記載の化合物。
Ｚが−ＣＲ¹＝ＣＲ²−ＥＷＧであり、Ｒ¹およびＲ²が、それぞれＨであり、互いに対してトランス位置にあり、そして、ＥＷＧが、−ＣＯ₂ＣＨ₃、−ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨ₂、−ＣＯ₂Ｈ、−ＣＯ₂ＣＨ₃、−ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＣＯ₂Ｈ、−ＳＯ₂ＣＨ₃、および−Ｐ（Ｏ）（ＯＣ₂Ｈ₅）₂よりなる群から選択される、請求項１または２に記載の化合物。
Ｚが−ＣＯ−ＣＨ₂−Ｗであり、ＷがＣｌまたはＢｒである、請求項１または２に記載の化合物。
前記請求項のいずれか１項に記載の化合物のプロドラッグ。
請求項１〜６のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物またはプロドラッグおよび薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む医薬組成物。
請求項１〜６のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物またはプロドラッグおよび薬学的に許容される担体および／または希釈剤を含む医薬組成物の製造法。
請求項１〜７のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物、プロドラッグまたは組成物の、免疫および／または自己免疫疾患のようなレグマイン活性の加減によって仲介される病気の予防または治療用薬剤製造への使用。
請求項１〜７のいずれか１項に記載の少なくとも１種の化合物、プロドラッグまたは組成物の、免疫および／または自己免疫疾患の予防または治療用薬剤製造への使用。
自己免疫疾患が、狼瘡（全身性エリテマトーデス）、重症筋無力症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、天疱瘡、リウマチ性関節炎、強皮症、シェーグレン症候群、悪性貧血、多発性硬化症およびＩ型糖尿病から選択される、請求項９または１０に記載の使用。
免疫疾患が、急性および遅延過敏症、移植拒絶反応並びに対宿主性移植片病から選択される、請求項９または１０に記載の使用。