JP2005247780A - Viral hepatitis-treating agent - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ウイルス性肝炎治療剤に係り、詳細には、嫌気性菌の一種であるビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）の培養物および／または菌体を有効成分とするＢ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎治療剤に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a therapeutic agent for viral hepatitis, and in particular, chronic hepatitis B containing as an active ingredient a culture and / or a cell of Bifidobacterium longum, which is a kind of anaerobic bacterium. Or it relates to a therapeutic agent for chronic hepatitis C.
嫌気性菌であるビフィズス菌（Bifidobacterium）は、母乳栄養児の腸内ではほとんど純粋培養に近い状態で存在しており、その一方、人工栄養児の腸内では、ビフィズス菌の菌数は少なく、大腸菌（Escherichia coli）、腸球菌（enterococcus）等が多く、腸内感染疾患が高くなることが知られている。 Bifidobacterium, an anaerobic bacterium, is almost in the state of pure culture in the intestines of breastfeeding infants, while the number of bifidobacteria in the intestines of artificially fed infants is small, There are many Escherichia coli, enterococcus, etc., and it is known that an intestinal infection disease becomes high.
母乳栄養児は、母体からの母乳の免疫力により細菌、ウイルスなどの感染に対する抵抗力が強いとされているが、そればかりでなく、ビフィズス菌が腸内において嫌気性条件下で、ほとんど純粋培養に近い状態で培養され、その培養液が豊富に存在するであろうことも無関係ではない。 Breastfeeding infants are said to be highly resistant to infection by bacteria, viruses, etc. due to the immunity of breast milk from the mother's body, but not only that, but bifidobacteria are almost purely cultured under anaerobic conditions in the intestine. It is not irrelevant that the culture medium will be abundant and the culture medium will be abundant.
また、成人においても、ビフィズス菌は腸内において健康時の優勢菌の一つとして存在しているが、不健康な状態ではそのビフィズス菌が減少または消滅していることが確認されている。したがって、ビフィズス菌を用いた各種の医薬品、醗酵乳酸飲料をはじめとする健康食品、清涼飲料水等が提案、市販されており、ビフィズス菌を経口摂取することにより、成人あるいは乳児の下痢防止や、健康維持のために利用されている。 Also in adults, bifidobacteria are present as one of the dominant bacteria in the intestine, but it has been confirmed that the bifidobacteria are reduced or eliminated in an unhealthy state. Therefore, various medicines using bifidobacteria, health foods including fermented lactic acid beverages, soft drinks, etc. are proposed and marketed, and by taking bifidobacteria orally, adult or infant diarrhea prevention, It is used for health maintenance.
ビフィズス菌は、経口摂取された場合、腸内で多量の乳酸、揮発酸を産生し、腸内ｐＨを低下させ、それにより大腸菌などの病原菌の発育を抑制し、腸ぜん運動を促進し、腸内菌叢異常による便秘、下痢などを改善するものであるといわれている。 When ingested, Bifidobacterium produces a large amount of lactic acid and volatile acid in the intestine, lowering the intestinal pH, thereby suppressing the growth of pathogenic bacteria such as Escherichia coli, promoting intestinal asthma movement, It is said to improve constipation and diarrhea due to abnormal internal flora.
このように、ビフィズス菌はヒトの健康維持に極めて効果的なものであり、多くの場合、ビフィズス菌の培養液を用い、それに各種添加剤を添加した醗酵製品として健康飲料に調製し、提供されている。また、ビフィズス菌の生菌菌体を集め乾燥した後、デンプン、乳糖、白糖などの適当な賦形剤と混合し、散剤、錠剤などに成形し、整腸剤として用いられている。 As described above, bifidobacteria are extremely effective for maintaining human health. In many cases, bifidobacteria are prepared and used as fermented products in which various additives are added to a culture solution of bifidobacteria. ing. In addition, after the living cells of bifidobacteria are collected and dried, they are mixed with an appropriate excipient such as starch, lactose, sucrose, etc., formed into powders, tablets, etc., and used as an intestinal agent.
ところで、ビフィズス菌のなかでもビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）については、これまであまり積極的に研究されてきていない。ごく最近になって、このビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物について、種々医薬品としての応用が提案されている。それらは、ビフィドバクテリウム・ロンガムの菌体を含む培養物を含有する、飲食物（特許文献１）、糖尿病合併症の予防・改善・治療剤（特許文献２）、コレステロール低下剤（特許文献３）等である。
このように、ビフィドバクテリウム・ロンガムには優れた薬理効果が期待されており、本発明者等は、このビフィドバクテリウム・ロンガムの培養液が有する薬理作用に注目し、種々検討を加えてきた。その結果、驚くべきことに、ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物および／または菌体には、Ｂ型慢性肝炎ならびにＣ型慢性肝炎等のウイスル性肝炎を有効に治療する効果があることを新規に見出し、本発明を完成させるに至った。
ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物および／または菌体に、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に起因する慢性肝炎に対する治療効果が存在することは、今まで全く知られていなかったものであり、その点で本発明は極めて特異的なものであるといえる。
Thus, Bifidobacterium longum is expected to have an excellent pharmacological effect, and the present inventors have paid attention to the pharmacological action of the culture medium of Bifidobacterium longum and added various studies. I came. As a result, it was surprisingly found that the Bifidobacterium longum culture and / or cells have an effect of effectively treating viral hepatitis such as chronic hepatitis B and chronic hepatitis C. The present invention has been completed.
It has been completely known that Bifidobacterium longum cultures and / or cells have a therapeutic effect on chronic hepatitis caused by hepatitis C virus (HCV) or hepatitis B virus (HBV). In that respect, it can be said that the present invention is extremely specific.
したがって本発明は、ビフィズス菌の培養物および／または菌体が、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に起因する慢性肝炎に対し優れた治療効果があることを明らかにし、かかる知見に基づいて、全く新しいウイルス性肝炎、特にＣ型慢性肝炎またはＢ型慢性肝炎の治療剤を提供することを課題とする。 Therefore, the present invention reveals that the culture and / or cell of Bifidobacterium has an excellent therapeutic effect on chronic hepatitis caused by hepatitis C virus (HCV) or hepatitis B virus (HBV), Based on such knowledge, it is an object to provide a therapeutic agent for completely new viral hepatitis, particularly chronic hepatitis C or chronic hepatitis B.
かかる課題を解決するための本発明は、その一つの基本的態様として、嫌気性菌であるビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）の培養物および／または菌体を有効成分とすることを特徴とするウイルス性肝炎治療剤である。そのなかでもより具体的には、上記のウイルス性肝炎が、Ｂ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎であるウイルス性肝炎治療剤である。 The present invention for solving such a problem is characterized in that, as one basic aspect thereof, a culture and / or a cell of an anaerobic bacterium, Bifidobacterium longum, is used as an active ingredient. It is a therapeutic agent for viral hepatitis. Among these, more specifically, the viral hepatitis is a therapeutic agent for viral hepatitis, which is chronic hepatitis B or chronic hepatitis C.
このビフィドバクテリウム・ロンガムはビフィドバクテリウム属の嫌気性菌であり、培養は通常酸素のない状態で行われるものであるが、本発明においては、かかる嫌気性状態を保つため、ゲル化剤を含有する培地を用いて培養した場合に、得られた培養物および／または菌体には、より効果的なウイルス性肝炎治療効果があることが判明した。したがって本発明は、具体的には、ビフィドバクテリウム・ロンガムを、ゲル化剤を含有する培地を用いて培養して得た培養物および／または菌体を有効成分とするウイルス性肝炎、特に、Ｂ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎治療剤である。 This Bifidobacterium longum is an anaerobic bacterium of the genus Bifidobacterium, and the culture is usually carried out in the absence of oxygen. In the present invention, in order to maintain such an anaerobic state, When cultured using a medium containing an agent, it was found that the obtained culture and / or microbial cells had a more effective treatment for viral hepatitis. Therefore, the present invention specifically relates to viral hepatitis containing, as an active ingredient, a culture obtained by culturing Bifidobacterium longum using a medium containing a gelling agent and / or cells. , A therapeutic agent for chronic hepatitis B or chronic hepatitis C.
より具体的には、本発明は、ゲル化剤を含有する培地としてのゲル化剤が、コーンスターチ、アルギン酸および寒天から選択される少なくとも１種であり、なかでもゲル化剤としてコーンスターチを含有する培地を用いて培養して得た培養物および／または菌体を有効成分とするウイルス性肝炎、特に、Ｂ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎治療剤である。 More specifically, in the present invention, the gelling agent as the medium containing the gelling agent is at least one selected from corn starch, alginic acid and agar, and among them, the medium containing corn starch as the gelling agent. It is a therapeutic agent for viral hepatitis, in particular, chronic hepatitis B or chronic hepatitis C, comprising as an active ingredient a culture obtained by cultivating and / or bacterial cells.
ビフィズス菌は嫌気性菌であり、一般的には、Bifidobacterium bifidiumが標準種である。このものは母乳あるいは人工授乳中の乳児および老人の糞便および消化管にみられ、ヒト、その他の動物に対する病原性は認められていない。また、乳酸桿菌属（Lactobacillus）のなかで、Lactobacillus bifidus susp. Pennsylvanicus（ペンシルバニア亜種ビフィズス菌）もビフィズス菌の１種として分類されている。本願発明は、これらの標準的なビフィズス菌ではなく、特に、ビフィズス菌としてビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物および／または菌体に、ウイルス性の慢性肝炎に対する治療効果があることことが判明した。 Bifidobacteria are anaerobic bacteria, and generally Bifidobacterium bifidium is the standard species. It is found in the feces and gastrointestinal tract of infants and the elderly who are breastfeeding or artificially feeding and has not been found to be pathogenic to humans or other animals. Among the Lactobacillus species, Lactobacillus bifidus susp. Pennsylvanicus (Pennsylvania subsp. Bifidobacteria) is also classified as a kind of bifidobacteria. The present invention has been found to have a therapeutic effect on viral chronic hepatitis, not in these standard bifidobacteria, but in particular, the bifidobacterium longum culture and / or microbial cells as bifidobacteria. .
したがって本発明は、最も具体的な態様としては、培養菌体としてビフィドバクテリウム・ロンガムをゲル化剤含有する培地を用いて培養して得た培養物および／または菌体を有効成分とする、Ｂ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎治療剤であり、また、ゲル化剤としてコーンスターチを用いて培養して得た培養物および／または菌体を有効成分とするＢ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎治療剤である。 Therefore, the most specific aspect of the present invention is that the culture and / or cells obtained by culturing using a medium containing Bifidobacterium longum as a cultured cell containing a gelling agent are used as active ingredients. Chronic hepatitis B or chronic hepatitis C, which is a therapeutic agent for chronic hepatitis B or C, and also contains a culture and / or cells obtained by culturing using corn starch as a gelling agent. It is a therapeutic agent for hepatitis.
本発明は、上記したように嫌気性菌であるビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）の培養物および／または菌体を有効成分とするウイルス性肝炎、特に、Ｂ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎であるウイルス性肝炎治療剤である。
これまで、ビフィズス菌の生菌体（乾燥菌体）そのもの、あるいはその培養液全体を有効成分とする医薬品あるいは健康飲料、清涼飲料等は知られており、その作用は、腸内で多量の乳酸等を産生して、腸内ｐＨを低下させることによる大腸菌などの病原菌の発育を抑制作用であったが、肝炎治療効果が認められたのは全く新規なものである。また、ビフィズス菌であるビフィドバクテリウム・ロンガムは、病原性が認められないものであることから、極めて安全であり、したがって本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に起因する慢性肝炎疾患の治療に極めて有効なものである。
As described above, the present invention relates to viral hepatitis comprising, in particular, an anaerobic bacterium Bifidobacterium longum culture and / or microbial cells, particularly chronic hepatitis B or chronic C. It is a therapeutic agent for viral hepatitis, which is hepatitis.
Until now, viable cells of Bifidobacteria (dry cells) itself, or pharmaceuticals, health drinks, soft drinks, etc. containing the whole culture solution as an active ingredient have been known. And the like, and the growth of pathogenic bacteria such as Escherichia coli by lowering the intestinal pH was suppressed, but the effect of treating hepatitis was completely new. In addition, Bifidobacterium longum, which is a bifidobacteria, is extremely safe because it does not show pathogenicity. Therefore, the present invention relates to hepatitis C virus (HCV) or hepatitis B virus (HBV). ) Is extremely effective for the treatment of chronic hepatitis diseases.
以下に本発明の特徴を詳細に説明することにより、本発明を説明していく。
本発明が提供する治療剤で有効成分として使用されるビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物および／または菌体としての培養物は、培養原液または培養上清液の単独またはこれらの混合物をいう。
Hereinafter, the present invention will be described by describing the features of the present invention in detail.
The culture of Bifidobacterium longum used as an active ingredient in the therapeutic agent provided by the present invention and / or the culture as a cell refers to a culture stock solution or a culture supernatant solution alone or a mixture thereof.
一般に、ビフィドバクテリウム・ロンガムの液体培養は、培養中の嫌気性条件を保持するため、培地にシステインまたはアスコルビン酸等の還元剤を添加して行っている。しかしながら、これらの還元剤は高価なものであり、工業的な培養には不向きである。その点を改良するべく、培養基礎培地をゲル状態とし、液体培地内への酸素の混入を抑えることにより嫌気性条件とした場合に、極めて良好にビフィドバクテリウム・ロンガムの培養が行い得ることが判明した。 In general, liquid culture of Bifidobacterium longum is performed by adding a reducing agent such as cysteine or ascorbic acid to the medium in order to maintain anaerobic conditions during the culture. However, these reducing agents are expensive and are not suitable for industrial culture. In order to improve this point, Bifidobacterium longum can be cultured very well when the culture medium is in a gel state and anaerobic conditions are established by suppressing the mixing of oxygen into the liquid medium. There was found.
用いられるビフィドバクテリウム・ロンガムの培養基礎培地としては、特に制限されるものではなく、通常のビフィズス菌の培養に用いられる液体培地を上げることができる。例えば、炭素源、窒素源、無機質その他の添加剤としてペプトン、肉エキス、酵母エキス、グルコース、リン酸水素カリウムおよび精製水などからなる液体培地（そのｐＨとしては、ほぼ中性ないし弱酸性）を用いるのがよい。本発明にあっては、その液体培地をゲル化状態とするために、ゲル化剤を添加する。そのようなゲル化剤としては、コーンスターチ、アルギン酸および寒天から選択される少なくとも１種を選択することができ、そのなかでもコーンスターチを添加して培地に粘性を高めることにより酸素の混入を防ぎ、嫌気性条件とすればよい。なお、ゲル化にあたっては、液体培地の均一なゲル化状態を保持するために、例えば、Tween 80の乳化剤（界面活性剤）を一緒に少量添加するのがよい。 The culture medium for bifidobacterium longum to be used is not particularly limited, and a liquid medium used for normal bifidobacteria culture can be raised. For example, a liquid medium consisting of carbon source, nitrogen source, inorganic and other additives such as peptone, meat extract, yeast extract, glucose, potassium hydrogen phosphate and purified water (its pH is almost neutral or slightly acidic) It is good to use. In the present invention, a gelling agent is added to bring the liquid medium into a gelled state. As such a gelling agent, at least one selected from corn starch, alginic acid and agar can be selected. Among them, corn starch is added to increase the viscosity of the medium, thereby preventing oxygen contamination and anaerobic. Sexual conditions may be used. For gelation, in order to maintain a uniform gelation state of the liquid medium, for example, a small amount of an emulsifier (surfactant) of Tween 80 is preferably added together.
本発明が提供するビフィドバクテリウム・ロンガム培養上清液を得るため行うビフィドバクテリウム・ロンガムの培養は、例えば、以下のようにして行うことができる。
上記した、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、グルコース、リン酸水素カリウムおよび精製水からなる液体培地（ｐＨ６．８）に、例えばコーンスターチの１０％水溶液を加え、さらに精製水を加えた後、Tween 80を少量添加し、約８０℃程度に加熱し、コーンスターチにより培地を糊化させる。次いで、冷却した後培地のｐＨ調整（中性ないし弱酸性）を行い、さらに精製水を加えてビフィドバクテリウム・ロンガムの培養液体培地とする。
なお、この液体培地の調製は、ビフィドバクテリウム・ロンガムが培養し得る液体培地である限り、種々の変形を行うことができることはいうまでもない。
The culture of Bifidobacterium longum performed to obtain the Bifidobacterium longum culture supernatant provided by the present invention can be performed, for example, as follows.
For example, a 10% aqueous solution of corn starch is added to the liquid medium (pH 6.8) composed of peptone, meat extract, yeast extract, glucose, potassium hydrogen phosphate and purified water, and further purified water is added thereto. Is added to a small amount, heated to about 80 ° C., and the medium is gelatinized with corn starch. Next, after cooling, the pH of the medium is adjusted (neutral or weakly acidic), and further purified water is added to obtain a culture liquid medium of Bifidobacterium longum.
Needless to say, the liquid medium can be variously modified as long as it is a liquid medium in which Bifidobacterium longum can be cultured.
上記で得られた液体培地を用いたビフィドバクテリウム・ロンガムの培養は、具体的には以下のようにして行うことができる。すなわち、上記で得た液体培地を高圧滅菌した後、例えば、培地１００ｍＬあたりビフィドバクテリウム・ロンガムの培養液を５ｍＬ程度接種し、通常の条件下で培養を行う。例えば、増殖度（液の白濁度）を目安に、３７℃にて約７２時間程度培養を行う。 The culture of Bifidobacterium longum using the liquid medium obtained above can be specifically performed as follows. That is, after the liquid medium obtained above is sterilized under high pressure, for example, about 5 mL of Bifidobacterium longum culture solution is inoculated per 100 mL of the medium, and cultured under normal conditions. For example, culturing is carried out at 37 ° C. for about 72 hours using the degree of growth (liquid turbidity) as a guide.
以上の基本的培養方法により、ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養が完了する。なお、上記の培養方法は、その一例として記載したものであり、種々の変形を行い得ることはいうまでもない。
本発明が提供する治療剤は、このようにして培養されたビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物および／または菌体であるが、培養物としては、その培養原液そのまま、または培養上清液を単独で、またはこれらの混合物として使用することができる。
The culture of Bifidobacterium longum is completed by the above basic culture method. The culture method described above is described as an example, and it goes without saying that various modifications can be made.
The therapeutic agent provided by the present invention is a culture and / or cell of Bifidobacterium longum thus cultured. As the culture, the culture stock solution is used as it is or a culture supernatant is used. It can be used alone or as a mixture thereof.
この場合の上清液を得る場合には、培養が完了した液体培地を遠心分離し、菌体を分離することにより行い得る。なお、培養液の遠心分離にあたって、培養終了後の培地の粘度が高い場合には、例えばデンプン分解酵素であるアミラーゼを添加し、デンプンの分解を行った後、遠心分離すればよい。 In order to obtain the supernatant liquid in this case, it can be performed by centrifuging the liquid medium that has been cultured and separating the cells. When the culture medium is centrifuged and the viscosity of the culture medium is high after completion of the culture, for example, amylase, which is a starch degrading enzyme, may be added to decompose starch and then centrifuged.
一方、培養上清液を採取した残りの培養菌体は、そのまま凍結乾燥等の手段により乾燥を行い、製剤学的に許容される担体と共に混和し、適宜、散剤として経口投与製剤とすることもできる。また得られた散剤を、適当な賦形剤、滑沢剤と練合し、顆粒剤、錠剤等とすることもできる。 On the other hand, the remaining cultured cells from which the culture supernatant is collected can be directly dried by means such as freeze-drying, mixed with a pharmaceutically acceptable carrier, and appropriately formulated as a powder for oral administration. it can. The obtained powder can be kneaded with an appropriate excipient and lubricant to form granules, tablets and the like.
また、培養原液、あるいは、培養上清液は、製剤学的に許容される適当な希釈剤を用い、そのまま適宜希釈して、液剤として調製することができる。さらに、培養原液または培養上清液を製剤学的に許容される担体とともに混和し、噴霧乾燥し、散剤としてあるいは得られた散剤を、適当な賦形剤と、滑沢剤と練合し、顆粒剤、錠剤とすることができる。
これらの製剤は、いずれも日本薬局方の「製剤総則」に記載の方法に準じ調製することができ、用いられる担体、賦形剤、滑沢剤、流動化剤、崩壊剤、結合剤、等張化剤、安定化剤等としては、製剤学的に汎用されている各種のものを適宜選択して、使用することができる。
In addition, the culture stock solution or the culture supernatant can be appropriately diluted as it is using a suitable pharmaceutically acceptable diluent and prepared as a solution. Furthermore, the culture stock solution or the culture supernatant is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier, spray-dried, and the powder or the obtained powder is kneaded with an appropriate excipient and a lubricant, Granules and tablets can be used.
All of these preparations can be prepared according to the method described in the “General Rules for Preparations” of the Japanese Pharmacopoeia. Carriers, excipients, lubricants, fluidizing agents, disintegrating agents, binders, etc. used As a tonicity agent, a stabilizer, etc., various kinds of pharmacologically widely used can be appropriately selected and used.
本発明が提供する治療剤における有効成分であるビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物、すなわち培養原液または培養上清液、および／または菌体の投与量は、一概に限定されない。一般的には、投与されるべき患者の性別、年齢、体重、その症状等により異なるが、要は、特に経口的投与により、ＨＣＶあるいはＨＢＶなどの肝炎ウイルス量の減少が得られる用量を投与すればよい。なお、ＨＣＶあるいはＨＢＶなどの肝炎ウイルスに起因するＣ型慢性肝炎あるいはＢ型慢性肝炎の治療においては、ある程度の長期にわたる薬剤投与治療でないと、そのウイルス量の減少は認められない。本発明が提供する治療剤にあっても、例えば経口的に投与したとしても、即座にそのウイルス量の減少が認められるものではなく、ある程度の期間の投与によりその効果が発現する点に注意すべきである。 The dose of the culture of Bifidobacterium longum, which is an active ingredient in the therapeutic agent provided by the present invention, that is, the culture stock solution or the culture supernatant, and / or the cells is not limited in general. In general, it varies depending on the sex, age, weight, symptoms, etc. of the patient to be administered. That's fine. In the treatment of chronic hepatitis C or hepatitis B caused by a hepatitis virus such as HCV or HBV, a reduction in the amount of the virus cannot be recognized unless the drug administration treatment is performed to some extent for a long time. Even in the case of the therapeutic agent provided by the present invention, for example, even if it is administered orally, the viral load is not immediately decreased, and it should be noted that the effect is manifested by administration for a certain period. Should.
以下に本発明を、実施例、具体的使用例等によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの記載に限定されるものではない。 The present invention will be described in more detail with reference to examples and specific usage examples below, but the present invention is not limited to these descriptions.
実施例１：ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養による培養原液、培養上清液および菌体の調製（その１：ゲル化条件下での培養）
基礎培地として、以下の組成からなる液体培地（ｐＨ６．８）を用いた。
ペプトン １０．０ｇ
肉エキス ５．０ｇ
酵母エキス ５．０ｇ
グルコース １０．０ｇ
リン酸水素カリウム ３．０ｇ
Tween 80 １．０ｍＬ
精製水 １０００ｍＬ
Example 1: Preparation of a culture stock solution, a culture supernatant and cells by culturing Bifidobacterium longum (Part 1: culture under gelling conditions)
As a basal medium, a liquid medium (pH 6.8) having the following composition was used.
Peptone 10.0g
Meat extract 5.0g
Yeast extract 5.0g
Glucose 10.0g
Potassium hydrogen phosphate 3.0g
Tween 80 1.0mL
Purified water 1000mL
上記の液体培地２５ｍＬに、１０％コーンスターチ水溶液１０ｍＬを加え、さらに精製水にて全量を４０ｍＬとした。この液体培地を７５〜８０℃に加熱して、コーンスターチを糊化させ、均質なゲル状溶液とし、冷却し、液体培地のｐＨを５．８に調製した。 10 mL of 10% corn starch aqueous solution was added to 25 mL of the above liquid medium, and the total volume was adjusted to 40 mL with purified water. The liquid medium was heated to 75 to 80 ° C. to gelatinize corn starch to obtain a homogeneous gel solution, cooled, and the pH of the liquid medium was adjusted to 5.8.
次いで、上記で得られた液体培地２０ｍＬを試験管にとり、１１５℃／２０分の高圧滅菌をした後、ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養液０．５ｍＬを接種し、３７℃にて７２時間培養を行った。培養が進むにつれて液体培地は白濁した。 Next, 20 mL of the liquid medium obtained above is put in a test tube and sterilized at 115 ° C./20 minutes, then inoculated with 0.5 mL of Bifidobacterium longum culture solution and cultured at 37 ° C. for 72 hours. Went. As the culture progressed, the liquid medium became cloudy.
培養終了後、培養液をｐＨ５．０〜６．０に調整し、適量のアミラーゼを添加し、約５０℃にて３０分間放置し、デンプンの分解を行った。冷却後、溶液を適宜精製水にて希釈することにより、培養原液を含有する液を得た。
一方、冷却後の溶液を３０００ｒｐｍ／２０分間の遠心分離を行い、培養上清液と、培養菌体とを得た。
After completion of the culture, the culture solution was adjusted to pH 5.0 to 6.0, an appropriate amount of amylase was added, and the mixture was allowed to stand at about 50 ° C. for 30 minutes to decompose starch. After cooling, the solution was appropriately diluted with purified water to obtain a solution containing a culture stock solution.
On the other hand, the cooled solution was centrifuged at 3000 rpm / 20 minutes to obtain a culture supernatant and cultured cells.
実施例２：ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養による培養原液、培養上清液および菌体の調製（その２：ゲル化条件でない培養）
基礎培地として実施例１に記載の組成中、Tween 80を除いた液体培地を用いた。
液体培地２０ｍＬを試験管にとり、１１５℃／２０分の高圧滅菌をした後、ビフィドバクテリウム・ロンガムの培養液０．５ｍＬを接種し、嫌気性条件下で３７℃にて７２時間培養を行った。培養が進むにつれて液体培地は白濁した。
培養終了後、実施例１と同様にして、培養原液、培養上清液および培養菌体を得た。
Example 2: Preparation of culture stock solution, culture supernatant and bacterial cells by culture of Bifidobacterium longum (part 2: culture without gelation conditions)
In the composition described in Example 1, a liquid medium excluding Tween 80 was used as the basal medium.
Take 20 mL of liquid medium in a test tube and sterilize by autoclaving at 115 ° C / 20 min, then inoculate 0.5 mL of Bifidobacterium longum culture solution and incubate at 37 ° C for 72 hours under anaerobic conditions It was. As the culture progressed, the liquid medium became cloudy.
After completion of the culture, a culture stock solution, a culture supernatant and cultured cells were obtained in the same manner as Example 1.
試験例１：培養原液によるＣ型慢性肝炎の治療効果
上記の実施例１で得られた培養原液を、Ｃ型肝炎患者１０名に経口的に投与し、ウイルス量の変化を検討した。なお、実際の投与に当てっては、患者全員にインフォームドコンセントによる説明を行い、その合意を得ている。
その結果、培養原液を毎日経口的に投与し、１ヶ月経過後のＰＣＲによるウイルス量を検討したところ、ＨＣＶウイルスの顕著な減少が認められ、ＣＴで精査した結果、癌の転移もしくは増殖は認められなかったものであった。
例えば、Ｃ型慢性肝炎で、本発明の培養原液の投与前におけるＰＣＲによるＨＣＶウイルス量が８５０以上を有していた男性患者（５６歳）において、１ヶ月経過後のＰＣＲによるＨＣＶウイルス量は４４０と低下していた。
また、Ｃ型慢性肝炎で、本発明の培養原液の投与前におけるＰＣＲによるＨＣＶウイルス量が２５０を有していた男性患者（４０歳）において、１ヶ月経過後のＰＣＲによるＨＣＶウイルス量は１５０と低下していた。
さらに、Ｃ型慢性肝炎で、本発明の培養原液の投与前におけるＰＣＲによるＨＣＶウイルス量が８３０を有していた女性患者（７０歳）において、１ヶ月経過後のＰＣＲによるＨＣＶウイルス量は２３０と顕著に低下していた。
これらの患者では、いずれもＣＴで精査した結果、癌の転移もしくは増殖は認められていなかった。
Test Example 1: Treatment effect of chronic hepatitis C by culture stock solution The culture stock solution obtained in Example 1 above was orally administered to 10 patients with hepatitis C, and changes in viral load were examined. In addition, for actual administration, explanations were given to all patients using informed consent, and agreement was obtained.
As a result, the culture stock solution was orally administered daily, and the viral load by PCR after 1 month was examined. As a result, a marked decrease in HCV virus was observed, and as a result of close examination by CT, metastasis or proliferation of cancer was observed. It was not possible.
For example, in a male patient (56 years old) who had chronic hepatitis C and the amount of HCV virus by PCR before administration of the culture stock solution of the present invention was 850 or more, the amount of HCV virus by PCR after one month passed was 440. It was falling.
In a male patient (40 years old) who had chronic hepatitis C and had a HCV viral load of 250 by PCR before administration of the culture stock solution of the present invention, the HCV viral load by PCR after one month passed was 150. It was falling.
Further, in a female patient (70 years old) who had chronic hepatitis C and had an HCV viral load of 830 by PCR before administration of the culture stock solution of the present invention, the viral load of HCV by PCR after one month passed was 230. Remarkably decreased.
None of these patients had cancer metastasis or proliferation as a result of close examination by CT.
製剤例１：液剤
上記実施例１で得た培養上清液を用いた、液剤を調製した。
処方：
実施例１で得た培養上清液 １０ｍＬ
エチルパラベン ０．１ｇ
香料 微量
精製水 残部
上記処方により、全量１００ｍＬの溶液を調製し、高圧滅菌後、汎用されている容器に充填し、液剤を得た。
Formulation Example 1: Solution A solution was prepared using the culture supernatant obtained in Example 1 above.
Formula:
10 mL of the culture supernatant obtained in Example 1
Ethylparaben 0.1g
Fragrance Trace amount Purified water remainder According to the above formulation, a solution of 100 mL in total was prepared, and after high-pressure sterilization, filled into a widely used container to obtain a liquid preparation.
製剤例２：顆粒剤
上記実施例１で得た培養上清液を用いた、顆粒剤を調製した。
処方：
実施例１で得た培養上清液 １００ｍＬ
乳糖 ２００ｇ
トウモロコシデンプン １５ｇ
ヒドロキシプロピルセルロース ３０ｇ
ステアリン酸マグネシウム ５ｇ
上記処方により、乳糖、トウモロコシデンプン、ヒドロキシプロピルセルロースを混合造粒機により造粒し、そこに実施例１で得た培養上清液を噴霧し、さらに練合、乾燥して顆粒剤を得た。
Formulation Example 2: Granule A granule was prepared using the culture supernatant obtained in Example 1 above.
Formula:
100 mL of the culture supernatant obtained in Example 1
Lactose 200g
Corn starch 15g
Hydroxypropylcellulose 30g
Magnesium stearate 5g
According to the above formulation, lactose, corn starch, and hydroxypropylcellulose were granulated with a mixing granulator, and the culture supernatant obtained in Example 1 was sprayed thereon, and further kneaded and dried to obtain granules. .
以上記載のように、本発明により、嫌気性菌であるビフィドバクテリウム・ロンガムの培養物および／または菌体を有効成分とするウイルス性肝炎であるＢ型慢性肝炎またはＣ型慢性肝炎治療剤である。この培養物および／または菌体は、効果的にＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）またはＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）を減少させるものであり、安全性が高く、したがってその医療上の価値は多大なものである。
As described above, according to the present invention, a therapeutic agent for chronic hepatitis B or chronic hepatitis C, which is viral hepatitis, comprising as an active ingredient a culture of Bifidobacterium longum that is an anaerobic bacterium and / or a fungus body. It is. This culture and / or fungus effectively reduces hepatitis C virus (HCV) or hepatitis B virus (HBV) and is highly safe and therefore has great medical value. It is.
Claims (16)
The therapeutic agent for chronic hepatitis B according to any one of claims 12 to 15, wherein the culture is a culture stock solution or a culture supernatant.
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Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008010943A (en) * | 2006-06-27 | 2008-01-17 | Canon Inc | Video image encoding device and method |
| WO2013109635A1 (en) * | 2012-01-16 | 2013-07-25 | Elizabeth Mckenna | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
| US20130259835A1 (en) * | 2011-12-16 | 2013-10-03 | Sahmyook University Industry-Academic Cooperation | Bifidobacterium adolescentis spm0212 having antiviral activity for hepatitis b virus, and pharmaceutical composition for preventing and treating hepatitis b comprising thereof |
| US9931398B2 (en) | 2012-01-16 | 2018-04-03 | Labyrinth Holdings, Llc | Naturally-occurring CpG oligonucleotide compositions and therapeutic applications thereof |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10500142A (en) * | 1994-09-16 | 1998-01-06 | ザ、ユニバーシティ、オブ、ニュー、サウス、ウェイルズ | Symbiotic composition |
| JP2712000B2 (en) * | 1994-12-22 | 1998-02-10 | ニチニチ製薬株式会社 | Hepatitis C treatment |
| JP2002051792A (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-19 | Toozen Sangyo Kk | Method for producing l-lactic acid |
| WO2002043753A1 (en) * | 2000-11-30 | 2002-06-06 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Remedies for chronic hepatitis b |
| JP2002332242A (en) * | 2001-03-09 | 2002-11-22 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | Therapeutic agent of chronic viral hepatitis type c |
| WO2003010297A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-02-06 | Alimentary Health Limited | Probiotic bifidobacterium strains |
-
2004
- 2004-03-05 JP JP2004062345A patent/JP2005247780A/en active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10500142A (en) * | 1994-09-16 | 1998-01-06 | ザ、ユニバーシティ、オブ、ニュー、サウス、ウェイルズ | Symbiotic composition |
| JP2712000B2 (en) * | 1994-12-22 | 1998-02-10 | ニチニチ製薬株式会社 | Hepatitis C treatment |
| JP2002051792A (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-19 | Toozen Sangyo Kk | Method for producing l-lactic acid |
| WO2002043753A1 (en) * | 2000-11-30 | 2002-06-06 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Remedies for chronic hepatitis b |
| JP2002332242A (en) * | 2001-03-09 | 2002-11-22 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | Therapeutic agent of chronic viral hepatitis type c |
| WO2003010297A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-02-06 | Alimentary Health Limited | Probiotic bifidobacterium strains |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008010943A (en) * | 2006-06-27 | 2008-01-17 | Canon Inc | Video image encoding device and method |
| US20130259835A1 (en) * | 2011-12-16 | 2013-10-03 | Sahmyook University Industry-Academic Cooperation | Bifidobacterium adolescentis spm0212 having antiviral activity for hepatitis b virus, and pharmaceutical composition for preventing and treating hepatitis b comprising thereof |
| WO2013109635A1 (en) * | 2012-01-16 | 2013-07-25 | Elizabeth Mckenna | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
| JP2015503628A (en) * | 2012-01-16 | 2015-02-02 | マッケンナ，エリザベス | Compositions and methods for treating liver disease and disorders |
| US9713630B2 (en) | 2012-01-16 | 2017-07-25 | Labyrinth Holdings, Llc | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
| US9931398B2 (en) | 2012-01-16 | 2018-04-03 | Labyrinth Holdings, Llc | Naturally-occurring CpG oligonucleotide compositions and therapeutic applications thereof |
| US10149869B2 (en) | 2012-01-16 | 2018-12-11 | Labyrinth Holdings, Llc | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
| US10688177B2 (en) | 2012-01-16 | 2020-06-23 | Labyrinth Holdings, Llc | Naturally-occurring CpG oligonucleotide compositions and therapeutic applications thereof |
| US11857577B2 (en) | 2012-01-16 | 2024-01-02 | Labyrinth Holdings, Llc | Compositions and methods for the treatment of hepatic diseases and disorders |
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